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細(xì)菌基因編輯方法與流程

文檔序號(hào):11061805閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述細(xì)菌基因編輯方法包括步驟:

提供一菌體;

將一pCas9質(zhì)粒和一pKD46質(zhì)粒送入所述菌體中;

將一pCRISPR::LacZ質(zhì)粒和一外源DNA共同送入含有所述pCas9及pKD46質(zhì)粒的所述菌體中,以得到一培養(yǎng)菌液;以及

將所述培養(yǎng)菌液涂布在一培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,將所述pCRISPR::LacZ質(zhì)粒和所述外源DNA共同送入含有所述pCas9及pKD46質(zhì)粒的所述菌體中的步驟后,還包括:

利用Cas9蛋白及可辨視LacZ基因的向?qū)NA在所述菌體中的一LacZ基因位置進(jìn)行專一性地切割;以及

將所述外源DNA插入所述菌體內(nèi)具有專一性切割位置的所述LacZ基因中,以得到所述培養(yǎng)菌液。

3.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述菌體為大腸桿菌。

4.如權(quán)利要求3所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述大腸桿菌為MG1655菌株。

5.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述pCRISPR::LacZ質(zhì)粒為一可辨視LacZ基因的向?qū)NA。

6.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,將所述pCas9質(zhì)粒和所述pKD46質(zhì)粒送入所述菌體的方法為電穿孔轉(zhuǎn)型法。

7.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,將所述pCRISPR::LacZ質(zhì)粒和所述外源DNA共同送入含有所述pCas9質(zhì)粒及所述pKD46質(zhì)粒的所述菌體中的方法為電穿孔轉(zhuǎn)型法。

8.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述培養(yǎng)基含有異丙基-β-D-硫代半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷、卡那霉素、以及四環(huán)霉素。

9.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述培養(yǎng)菌液的培養(yǎng)條件為,以37℃培養(yǎng)16至24小時(shí)。

10.一種種細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述細(xì)菌基因編輯方法包括步驟:

提供一菌體;

將一pHR_trc模板質(zhì)粒和一pCas9-NSI質(zhì)粒共同送入所述菌體中,以得到一培養(yǎng)菌液;以及

將所述培養(yǎng)菌液涂布在一培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

11.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述菌體為藍(lán)綠菌。

12.如權(quán)利要求11所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述藍(lán)綠菌為細(xì)長(zhǎng)聚球藻的S.elongatus PCC 7942菌株。

13.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述pHR_trc模板質(zhì)粒用以作為一同源互換的模板。

14.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述pHR_trc模板質(zhì)粒上含有:一抵抗抗生素觀霉素的基因SpecR、一熒光蛋白EGFP、以及同源互換區(qū)域NSIa和NSIb。

15.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述pCas9-NSI質(zhì)粒用以正確地結(jié)合到一預(yù)定位置并進(jìn)行基因重組作用。

16.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述預(yù)定位置為一雙股斷裂位置。

17.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,將所述pHR_trc模板質(zhì)粒和所述pCas9-NSI質(zhì)粒送入所述菌體的方法為細(xì)菌自然吞噬法。

18.如權(quán)利要求10所述的細(xì)菌基因編輯方法,其特征在于,所述培養(yǎng)基為含有觀霉素的BG-11培養(yǎng)基。

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