本發(fā)明屬于食品成分檢測領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種在待測樣品中檢測菠蘿成分的方法。

背景技術(shù)：

菠蘿(Ananas comosus)屬鳳梨科(Bromeliaceae)鳳梨屬(Ananas)，又被稱為鳳梨，是多年生常綠草本植物，是營養(yǎng)價值很高的水果。菠蘿主要產(chǎn)區(qū)在南北回歸線之間，集中在泰國、菲律賓、印尼、越南、巴西、南非和美國等，中國是菠蘿十大主產(chǎn)區(qū)之一，集中在廣東、海南、廣西、福建、云南等地。菠蘿傳統(tǒng)加工產(chǎn)品主要有罐頭和果汁兩類，菠蘿罐頭曾被譽為“罐頭之王”、菠蘿果汁也因其獨特的保健功能深受消費者喜愛，世界菠蘿汁貿(mào)易額迅速增長，近來新興的菠蘿果酒，采取果肉取汁，果膠量及甲醇都遠低于葡萄酒，安全性高且健康。然而在經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，一些不法商家在食品的加工過程中，常常以價格低廉的原料替代或摻入低價格的原料，甚至根本不添加標識的原料成分，以次充好。在加工食品的造假摻假過程中，經(jīng)常會使用有毒有害物質(zhì)，這不僅損害了消費者健康，同時會影響食品行業(yè)的健康發(fā)展。中國多部法律法規(guī)明令禁止食品的造假摻假行為，《中華人民共和國產(chǎn)品質(zhì)量法》、《中華人民共和國食品安全法》、《預(yù)包裝食品檢測標準》和《食品標識管理規(guī)定》(國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局令第102號)等法律法規(guī)規(guī)定正確標識食品標簽，禁止產(chǎn)品的造假摻假行為。目前還未見有水果及其加工產(chǎn)品中菠蘿成分的真實性鑒定檢測方法。

生物物種資源在生物品種改良、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方面有重要的作用。生物物種資源涉及范圍相當廣泛，不僅包括種苗、種畜禽、中藥材、野生動物，甚至還有人類及動物遺傳資源。中國是世界上生物資源種類最多的國家之一，但是因為物種資源保護不力，中國的物種資源正在大量的流失。生物物種資源帶有重要生物遺傳信息，是一種重要的遺傳資源，能夠轉(zhuǎn)化為巨大的商業(yè)價值，是一種重要的知識產(chǎn)權(quán)；遺傳資源已經(jīng)被確定是國家主權(quán)的一種。為保護生物物種資源，中國必須加強物種資源種類調(diào)查、加強出入境查驗體系、建立鑒別檢測方法。菠蘿等植物也是中國重要的物種資源之一。

為了更好地保護消費者的合法權(quán)益以及中國物種資源種類，建立快速、高效、準確的菠蘿成分的鑒別檢測方法尤為重要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種在待測樣品中檢測菠蘿成分的方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種特異性鑒定菠蘿成分的方法，所述方法包括：以待測樣品的DNA為模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物進行實時熒光PCR檢測。

在一個優(yōu)選例中，所述的實時熒光PCR檢測應(yīng)用SEQ ID NO:3所示的探針。

在另一優(yōu)選例中，所述的待測樣品是食品、飲料或遺傳物質(zhì)材料。

在另一優(yōu)選例中，所述方法的檢測靈敏度為0.01ng/μL菠蘿DNA。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種引物，所述引物是引物對，其序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種探針，述的探針序列如SEQ ID NO:3所示。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的引物和所述的探針的用途，用于從待測樣品中鑒定菠蘿成分。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種鑒定菠蘿成分的試劑盒，其中包括所述的引物。

在一個優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括：所述的探針；和/或含有菠蘿成分的檢測標準品。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括選自以下的試劑：DNA提取試劑，Taq酶，PCR緩沖液，DNA聚合酶，和/或說明鑒定菠蘿成分的方法的使用說明書。

本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。

附圖說明

圖1、菠蘿成分的實時熒光PCR特異性檢測。

1：中國菠蘿品種；

2：臺灣菠蘿(鳳梨)；

3：菲律賓都樂菠蘿；

4：菠蘿干；

5：其他動植物樣品、陰性對照。

圖2、不同DNA濃度菠蘿的實時熒光PCR檢測靈敏度。

擴增曲線從左到右分別為：100ng/μL菠蘿DNA、10ng/μL菠蘿DNA、1ng/μL菠蘿DNA、0.1ng/μL菠蘿DNA、0.01ng/μL菠蘿DNA。

圖3、不同含量菠蘿粉的實時熒光PCR檢測靈敏度。

擴增曲線從左到右分別為100％菠蘿粉、10％菠蘿粉、1％菠蘿粉、0.1％菠蘿粉。

圖4、不同基質(zhì)菠蘿粉的實時熒光PCR檢測。

1：陽性對照；

2：0.1％菠蘿-餅干粉；

3：0.1％菠蘿-香腸肉粉；

4：0.1％菠蘿-藍莓粉；

5：菠蘿-牛肉骨粉；

6：0.1％菠蘿-水溶液；

7，8：陰性對照。

具體實施方式

本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究和試驗，首次揭示一種可特異性鑒定菠蘿成分的引物，所述引物針對含有菠蘿成分的DNA可發(fā)生特異性擴增(獲得陽性結(jié)果)，而對沒有菠蘿成分的DNA不發(fā)生特異性擴增(獲得陰性結(jié)果)。為了簡化PCR擴增方法，本發(fā)明人還設(shè)計了配合所述引物的、用于進行實時熒光PCR的Taqman探針。采用所述的引物配合Taqman探針，可良好地應(yīng)用于鑒定菠蘿成分，并且具有良好的再現(xiàn)性、靈敏度。

如本文所用，所述的“菠蘿成分”是指特異性來自于菠蘿(Ananas comosus)的成分，可以是菠蘿本身或其加工產(chǎn)品，如菠蘿粉、菠蘿飲品。

目前開發(fā)有效的鑒定菠蘿成分的方法的難點在于各種菠蘿制品(如粉或飲料)通常在外觀上非常相近，導(dǎo)致人們難分真?zhèn)?。一些價格低廉的原料制成的產(chǎn)品通過調(diào)味可使得口味上與真品難分真?zhèn)?。即使采用一些基因或蛋白水平上的技術(shù)，也由于與多種植物在親緣關(guān)系上較近，難以找到符合標準的、檢測準確性高、實用性強的檢測靶標。并且，由于物種具有多樣性，且物種基因組中存在基因序列的數(shù)目是相當可觀的，各種基因的DNA排列各異。因此，獲得可特異性鑒定一種物種、不受其它類似物種干擾、準確性高的檢測試劑是存在很大技術(shù)難度的，大量的篩選在所難免。

為此，本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和大量的篩選，找到了合適的檢測靶標，設(shè)計了僅對菠蘿具有良好特異性的引物和探針，所述引物對沒有菠蘿成分的DNA不發(fā)生特異性擴增?；诖碎_發(fā)了實時熒光PCR檢測菠蘿成分的方法。聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)從基因水平分析食品原料和產(chǎn)品的特性及來源，具有方便、準確、快速的特點。

因此，本發(fā)明提供一種引物，所述的引物具SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

本發(fā)明的這些引物還可以用放射性同位素、生物素、酶、熒光素或其他化學(xué)發(fā)光物質(zhì)進行標記。

本發(fā)明還提供一種探針，所述的探針具SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；較佳地，所述的探針是Taqman探針，從而便于實時熒光檢測。

利用本發(fā)明的引物及探針，只需進行PCR反應(yīng)和/或瓊脂糖凝膠電泳，并通過判斷相應(yīng)的PCR產(chǎn)物的有無，就可以準確、快速地判斷待測樣品是否含有菠蘿成分，而且所需的樣品量很少，對于微量的菠蘿成分也能檢出，靈敏度達到0.01ng/μL菠蘿DNA。

基于本發(fā)明所提供的適用于鑒定菠蘿成分的特異性引物及探針，本發(fā)明還提供了一種鑒定菠蘿成分的方法，所述方法包括：以待測樣品的DNA為模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物進行PCR擴增；若發(fā)生特異性擴增，則表明待測樣品中包含菠蘿成分。

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，其基本原理是體外酶促合成特異DNA片段的方法。本發(fā)明的方法可采用常規(guī)的PCR技術(shù)進行。

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，利用所述引物，采用Taqman實時熒光PCR方法來進行菠蘿成分的鑒定。TaqMan探針法是高度特異的定量PCR技術(shù)，其核心是利用Taq酶的3′→5′外切核酸酶活性，切斷探針，產(chǎn)生熒光信號。由于探針與模板是特異性結(jié)合，所以熒光信號的強弱就代表了模板的數(shù)量。

獲取待測樣品的DNA的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的技術(shù)，例如可采取傳統(tǒng)的酚/氯仿/異戊醇法，或者可采用一些商購的DNA提取試劑盒，這類試劑盒是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

本發(fā)明還涉及一種用于鑒定菠蘿成分的試劑盒，所述試劑盒中含有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物；更佳地，所述的試劑盒中還含有SEQ ID NO:3所示的探針。

此外，所述的試劑盒還可含有其它鑒定菠蘿成分的試劑，如(但不限于)：

(A)各種PCR反應(yīng)用試劑，例如但不限于：Taq酶，PCR緩沖液，dNTP，DNA聚合酶等；或

(B)各種提取DNA(即制備PCR反應(yīng)模板)所需的試劑，例如但不限于：酚、氯仿、異戊醇、NaCl等；或

(C)提取DNA的試劑盒。

此外，所述的試劑盒中還可含有鑒定菠蘿成分的使用說明書和/或標準操作程序。

本發(fā)明所述的試劑盒可實現(xiàn)快速檢測、批量檢測菠蘿成分的目的。

本發(fā)明的主要優(yōu)點在于：

(1)首次揭示一種可特異性鑒定菠蘿成分的引物，所述的引物特異性良好，對于菠蘿以外的其它物質(zhì)則不能特異性擴增。并且，所述引物具有良好的再現(xiàn)性、結(jié)果穩(wěn)定可靠。

(2)利用所述的引物或含有所述引物的檢測試劑盒，可快速、大批量地檢測菠蘿成分，從待測樣品中快速準確地區(qū)分真假菠蘿成分，并且所需樣品量少，操作簡單。

(3)本發(fā)明應(yīng)用Taqman實時熒光PCR技術(shù)，可快速實現(xiàn)食品中菠蘿源性成分的準確鑒定。

(4)首次建立食品、飲料、遺傳物質(zhì)材料、基因或核苷酸混合液中菠蘿的實時熒光PCR檢測方法。本發(fā)明為保障產(chǎn)品的質(zhì)量、保護消費者知情權(quán)和選擇權(quán)，遺傳物質(zhì)種類鑒定等提供了有效的技術(shù)支撐。

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如J.薩姆布魯克等編著，分子克隆實驗指南，第三版，科學(xué)出版社，2002中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

1、材料、試劑與儀器

菠蘿樣品：中國菠蘿，臺灣菠蘿(鳳梨)，菲律賓都樂菠蘿，菠蘿干。中國菠蘿和菠蘿干來自中國大陸、臺灣菠蘿(鳳梨)來自中國臺灣；菲律賓都樂菠蘿來自菲律賓。

57種常見的非菠蘿動植物樣品包括：火龍果、橙子、提子、獼猴桃、香蕉、牛油果、木瓜、黑布林、藍莓、釋迦、蓮霧、百香果、哈密瓜、青棗、菠蘿蜜、蘋果、人參果、橘子、梨、山竹、葡萄柚、檸檬、番石榴、櫻桃、蜜梨、石榴、柿子、杏、西柚、甜瓜、水蜜桃、芒果、紅毛丹、枇杷、洋蔥、白蘿卜、胡蘿卜、番茄、黃瓜、芹菜、馬鈴薯、紅薯、豌豆、黑豆、大豆、花生、大米、小米、玉米、小麥、大麥、牛肉、山羊肉、豬肉、雞肉、鴨肉、鵝肉，用于菠蘿成分的特異性檢測。

在上海超市、農(nóng)貿(mào)市場購買含菠蘿成分產(chǎn)品(菠蘿干、菠蘿粉、菠蘿果汁、菠蘿罐頭)共10份，購買其他不包含菠蘿成分的樣品(罐頭、果醬、餅干、面包、調(diào)味品、乳制品、肉制品、飲料等)共40份，用于檢測本發(fā)明的方法的實際應(yīng)用。

試劑DP323動物基因組提取試劑盒、DP305植物基因組提取試劑盒購自天根生化科技有限公司。

實時熒光PCR混合液Taqman Gene Expression Master Mix購自美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

儀器BioPhotometer plus核酸蛋白含量測定儀，德國Eppendorf公司；ABI 7500實時熒光PCR儀，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；低溫冷凍高速離心機，德國Eppendorf公司。

2、樣品的制備

使用冷凍研磨機將動植物樣品磨成粉狀，用于物種特異性檢測。

用小麥粉與菠蘿粉混合，將菠蘿粉配制成10％、1％、0.1％、0.01％、0.001％(W/W)的預(yù)混樣品，提取DNA。

用小麥粉、牛肉骨粉和果醬與菠蘿粉混合，分別將菠蘿粉樣品分別配制成菠蘿質(zhì)量分數(shù)為0.1％的混合樣品，提取DNA，進行質(zhì)量靈敏度測試。

3、DNA的提取

使用天根動物基因組提取試劑盒天根生化科技有限公司，目錄號：DP323提取動物樣品的DNA，提取方法詳見試劑盒操作說明書。

使用植物基因組提取試劑盒目錄號：DP305提取植物樣品的DNA，提取方法詳見試劑盒操作說明書。

使用BioPhotometer plus核酸蛋白含量測定儀Eppendorf測定核酸濃度。

清液DNA的提?。簩⒐瓨悠坊蛩芤荷舷骂嵉咕鶆颉Ｈ〖s30mL清液至一潔凈培養(yǎng)皿中，抽真空凍干；稱取0.2g冷凍干物質(zhì)至一潔凈50mL離心管中，然后加入5mL CTAB裂解液，65℃孵育1h，間期不斷混勻幾次；8000g離心15min，取1mL上清液至1只潔凈2.0mL離心管中。然后加入700μL氯仿，劇烈混勻30s，14500g離心10min，取650μL上清液至潔凈2.0mL離心管中，加入1300μL CTAB沉淀液，劇烈混勻30s，室溫靜置1h；14500g離心20min，棄上清液，加入350μL 1.2mol/L NaCl，劇烈振蕩30s，再加入350μL氯仿，劇烈混勻30s，14500g離心10min；分別取上清液320μL，加入0.8倍體積異丙醇，混勻后，-20℃1h，14500g離心20min，棄上清液，加入500μL 70％乙醇，混勻后，14500g離心20min，棄上清液，晾至風干，加入30μL ddH₂O溶解，-20℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

濁果汁DNA的提取：將果汁樣品上下顛倒均勻。取約30mL果汁至一潔凈離心管中，8000g離心10min，去上清，加入5mL CTAB裂解液，65℃孵育1h，間期不斷混勻幾次；8000g離心15min，取1mL上清液至1只潔凈2.0mL離心管中。然后加入700μL氯仿，劇烈混勻30s，14500g離心10min，取650μL上清液至潔凈2.0mL離心管中，加入1300μL CTAB沉淀液，劇烈混勻30s，室溫靜置1h；14500g離心20min，棄上清液，加入350μL 1.2mol/L NaCl，劇烈振蕩30s，再加入350μL氯仿，劇烈混勻30s，14500g離心10min；分別取上清液320μL，加入0.8倍體積異丙醇，混勻后，-20℃1h，14500g離心20min，棄上清液，加入500μL 70％乙醇，混勻后，14500g離心20min，棄上清液，晾至風干，加入30μL ddH₂O溶解，-20℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

用1×TE緩沖液將菠蘿DNA溶液分別稀釋成10、1、0.1、0.01、0.001ng/μL的DNA混合樣品，用于靈敏度測試。

4、引物和探針序列

菠蘿成分鑒別的靶序列設(shè)計引物及探針序列如下：

正向引物：5′-AGATTTCGGTAAGAGCAGGCAT-3′(SEQ ID NO:1)，

反向引物：5′-GCGAGATGACTTTGGGTTTTG-3′(SEQ ID NO:2)，

探針：5′-FAM-AAGCCACAGGTATAACAC(SEQ ID NO:3)-MGB-3′。

使用18S rRNA真核生物通用引物來鑒定所提取的動植物樣品的DNA提取質(zhì)量。18S rRNA引物序列為：

正向引物：5′-TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA-3′(SEQ ID NO:4)，

反向引物：5′-AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT-3′(SEQ ID NO:5)，

探針：5′-FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC(SEQ ID NO:6)-TAMRA-3′。

5、實時熒光PCR反應(yīng)

實時熒光PCR采用25μL反應(yīng)體系：

2×PCR反應(yīng)預(yù)混液12.5μL，

引物(5μmol/L)各1μL，

探針(5μmol/L)1μL，

模板DNA(10～100ng)1.0μL，

去離子水補足體系。

擴增條件為：

50℃2min；

95℃10min；

95℃15s，60℃60s，共40個循環(huán)。

使用實時熒光PCR儀進行定性檢測。

實施例1、真核生物特異引物18S rRNA引物的檢測結(jié)果

用真核生物18S rRNA通用引物(SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5)及探針(SEQ ID NO:6)，擴增本實驗提取的所有DNA溶液。

擴增結(jié)果顯示，所有樣品DNA溶液均出現(xiàn)擴增曲線。

因此，用于菠蘿成分特異性檢測和方法實際應(yīng)用的樣品DNA溶液均適合于PCR測試。

實施例2、菠蘿成分的實時熒光PCR特異性檢測

供試的動植物材料：火龍果、橙子、提子、獼猴桃、香蕉、牛油果、木瓜、黑布林、藍莓、釋迦、蓮霧、百香果、哈密瓜、青棗、菠蘿蜜、蘋果、人參果、橘子、梨、山竹、葡萄柚、檸檬、番石榴、櫻桃、蜜梨、石榴、柿子、杏、西柚、甜瓜、水蜜桃、芒果、紅毛丹、枇杷、洋蔥、白蘿卜、胡蘿卜、番茄、黃瓜、芹菜、馬鈴薯、紅薯、豌豆、黑豆、大豆、花生、大米、小米、玉米、小麥、大麥、牛肉、山羊肉、豬肉、雞肉、鴨肉、鵝肉；中國菠蘿，臺灣菠蘿(鳳梨)，菲律賓都樂菠蘿，菠蘿干。

使用菠蘿成分鑒別引物(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)和探針(SEQ ID NO:3)，對供試的動植物材料DNA樣品進行實時熒光定量PCR檢測，PCR方法如“5、實時熒光PCR反應(yīng)”。

結(jié)果如圖1，4種不同來源的菠蘿樣品均出現(xiàn)明顯的擴增曲線，而其他各種非菠蘿供試樣品均無擴增檢測結(jié)果。

上述結(jié)果表明，本發(fā)明設(shè)計的菠蘿鑒別引物及探針具有菠蘿這一物種的特異性。

實施例3、菠蘿成分的實時熒光PCR檢測靈敏度

1、菠蘿DNA樣品

用雙蒸水將100ng/μL中國菠蘿DNA溶液10倍系列稀釋，配成100ng/μL、10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL、0.001ng/μL菠蘿DNA溶液。使用菠蘿成分鑒別引物(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)和探針(SEQ ID NO:3)，對100ng/μL、10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL、0.001ng/μL菠蘿DNA溶液進行檢測。

結(jié)果如圖2，可見100ng/μL、10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL菠蘿DNA出現(xiàn)擴增，0.001ng/μL菠蘿DNA未出現(xiàn)擴增。

上述結(jié)果表明，對于菠蘿DNA，應(yīng)用本發(fā)明的方法檢測的靈敏度為0.01ng/μL菠蘿DNA。

2、菠蘿粉樣品

用小麥粉10倍系列混合配制不同含量的菠蘿粉樣品。使用菠蘿成分鑒別引物(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)和探針(SEQ ID NO:3)，對100％、10％、1％、0.1％、0.01％、0.001％(W/W)菠蘿粉含量的樣品DNA進行檢測。

結(jié)果如3，100％、10％、1％、0.1％菠蘿粉出現(xiàn)擴增，0.01％、0.001％菠蘿粉未出現(xiàn)擴增。

上述結(jié)果表明，對于菠蘿粉樣品，應(yīng)用本發(fā)明的方法檢測的靈敏度為0.1％菠蘿粉(W/W)。

實施例4、實際樣品的檢測

1、不同基質(zhì)的菠蘿粉成分檢測

用餅干粉、香腸肉粉、藍莓醬、牛肉骨粉、水將菠蘿粉樣品配成0.1％菠蘿粉混合樣品。使用菠蘿成分鑒別引物(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)和探針(SEQ ID NO:3)對提取的菠蘿粉混合樣品DNA進行檢測。

結(jié)果如圖4，0.1％菠蘿-餅干粉、0.1％菠蘿-香腸肉粉、0.1％菠蘿-藍莓粉、0.1％菠蘿-牛肉骨粉、0.1％菠蘿-水溶液DNA均出現(xiàn)擴增。

實驗表明，本發(fā)明的菠蘿成分檢測方法適用于動植物加工產(chǎn)品及水溶液樣品，且檢測靈敏度能達到0.1％菠蘿粉(W/W)?？梢?，本發(fā)明的方法對于復(fù)雜樣品仍然保留較好的檢測靈敏度。

2、實際樣品的檢測

收集市售的50種樣品，包括：2個新鮮菠蘿、2個菠蘿干、2個菠蘿罐頭、2個菠蘿汁、2個菠蘿酸奶樣品、5種罐頭、5種果醬、5種餅干、5種面包、5種調(diào)味品、5種乳制品、5種肉制品、5種飲料。

將收集的市售樣品提取DNA，進行檢測。

抽樣結(jié)果顯示，在菠蘿和菠蘿干中能檢出菠蘿成分。在菠蘿罐頭、菠蘿汁、菠蘿酸奶樣品中也檢出菠蘿成分。

在40份未含菠蘿成分的樣品中，均未檢出菠蘿成分?？梢?，本發(fā)明設(shè)計的檢測試劑特異性良好，完全適用于食品檢驗。

結(jié)論

本發(fā)明提供的食品中菠蘿成分實時熒光PCR檢測方法，與對照組樣品無交叉反應(yīng)，檢測靈敏度為菠蘿粉0.1％(W/W)。該方法特異性強、靈敏度高，能準確檢測出食品、飲料、飼料、DNA溶液和未知樣品中的菠蘿成分。

在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。