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一種細(xì)胞免疫佐劑TSA?41的制備方法及應(yīng)用與流程

文檔序號:12457341閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種細(xì)胞免疫佐劑TSA-41的制備方法,其特征在于人工設(shè)計(jì)的一種能在大腸桿菌中表達(dá)出具有二聚體結(jié)構(gòu)的可溶性重組蛋白的基因序列SEQ ID NO.1,該基因序列通過下列步驟得到TSA-41細(xì)胞免疫佐劑:

(1) 通過基因工程技術(shù)將SEQ ID NO.1基因序列插入大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),獲得表達(dá)SEQ ID NO.1基因的重組大腸桿菌;

(2) 將步驟(1)所得重組大腸桿菌進(jìn)行37℃培養(yǎng),15-25℃誘導(dǎo)其表達(dá)重組蛋白TSA-41,獲得誘導(dǎo)后的重組大腸桿菌;

(3) 將步驟(2)所得誘導(dǎo)后的重組大腸桿菌進(jìn)行細(xì)胞破碎,通過離心獲得重組大腸桿菌破碎上清液;

(4) 將步驟(3)所得重組大腸桿菌破碎上清液通過鎳離子親和層析柱進(jìn)行分離純化,得到TSA-41重組蛋白初步純化液;

(5) 將步驟(4)所得TSA-41重組蛋白初步純化液通過凝膠排阻層析柱進(jìn)行分離純化,去除未形成聚體的蛋白,得到TSA-41重組蛋白純化液;

(6) 將步驟(5)所得TSA-41重組蛋白純化液置于透析袋中,用透析液進(jìn)行透析,獲得穩(wěn)定的TSA-41重組蛋白,該重組蛋白即為所需的TSA-41佐劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞免疫佐劑TSA-41的制備方法,其特征在于所述透析液配方為:甘氨酸1-3克,氯化鈉5-20克,甘油20-100克,加水溶解定容至1升,調(diào)節(jié)pH值至7.0-9.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞免疫佐劑TSA-41的制備方法,其特征在于SEQ ID NO.1基因表達(dá)的TSA-41重組蛋白能有效刺激淋巴細(xì)胞的體外增殖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞免疫佐劑TSA-41的制備方法,其特征在于SEQ ID NO.1基因表達(dá)的TSA-41重組蛋白能增強(qiáng)疫苗的細(xì)胞免疫效果。

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