本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地涉及靶向于人組織因子的抗體、其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：：組織因子(Tissuefactor，TF)是一個47kDa的跨膜糖蛋白。正常生理狀態(tài)下TF表達主要屏蔽于血管內(nèi)皮下細胞層，一旦機體血管受到創(chuàng)傷，TF暴露于血流，通過結(jié)合并激活VII因子從而啟動外源性凝血反應。研究發(fā)現(xiàn)，TF在眾多腫瘤組織中異常激活表達，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要作用。特別是在癌癥晚期，病人大多伴隨自發(fā)性血栓，如深度靜脈血栓(Deep-veinthrombosis，DVT)、彌漫性血管內(nèi)凝血(Disseminatedintravascularcoagulation，DIC)和肺栓塞(Pulmonaryembolism，PE)等(Thrombosisresearch,2013,131:S59-S62；JournalofThrombosisandHaemostasis,2011,9(s1):306-315)；而TF在腫瘤細胞中的異常表達則是這些癥狀發(fā)生的主要誘因。對眾多腫瘤臨床樣本分析表明，TF的表達水平直接影響腫瘤的轉(zhuǎn)移、病人血栓的發(fā)生等惡化指標，如在乳腺癌中TF異常表達率為85.8％，在胰腺癌中為88.5％，在肺癌中為83.6％，食道癌中為91.3％等(Blood,2012,119:924-932)。TF除了起始外源性凝血途徑，TF/FVIIa復合物還能直接結(jié)合和誘導跨膜G蛋白偶聯(lián)受體Protease-activatedreceptor2(PAR2)的活化。PAR2是調(diào)控炎癥反應的重要信號通路，雖然對PAR2在腫瘤領(lǐng)域的研究目前還比較少，但可以想象，TF通過PAR2能影響細胞內(nèi)一系列腫瘤功能信號。概而言之，TF-PAR2通過MAPK/ERK磷酸化，誘導關(guān)鍵生長因子、免疫調(diào)節(jié)因子和趨化因子的基因表達(如VEGF、CSF1/2、IL8、CXCL1等)，促進新生血管的形成，為腫瘤的生長提供了充足的養(yǎng)分、能量和適宜的微環(huán)境。此外，TF還可以通過與Rac1、β1家族相關(guān)整合素的相互作用，以提高腫瘤細胞的遷移性和粘附性，從而在整體上增強腫瘤細胞的血行性轉(zhuǎn)移能力(JournalofThrombosisresearch,2012,130:S84-S87；JournalofThrombosisandHaemostasis,2013,11:285-293；InternationalJournalofCancer,2014,doi:10.1002/ijc.28959；Blood,2012,119:924-932)。同時，TF-誘導的高凝狀態(tài)又直接有助于腫瘤細胞的生存和血行性轉(zhuǎn)移(Blood,2008,111:190-9；CancerRes.,2015,75(1Suppl):AbstractnrB19)，即TF/FVIIa起始的凝血反應，導致凝血酶的生成、纖維蛋白的沉積，這不僅使腫瘤細胞逃逸免疫攻擊，還增加了腫瘤細胞與內(nèi)皮細胞的相互作用，幫助腫瘤細胞的擴散和滲透，利于血行性轉(zhuǎn)移的發(fā)生，這也正是當前癌癥難治療的重要原因。研究表明，TF在血栓類疾病中也起作用。除了在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，TF或MPTF(Microparticletissuefactor)起始的凝血作用也是引發(fā)靜脈血栓栓塞癥(Venousthromboembolism,VTE)的重要原因，其在血液中的含量更是與VTE的嚴重程度成正比，目前更是有很多研究表明TF可以作為VTE病人臨床診斷、評估病情的重要標志物和VTE治療的潛在靶點(Thrombosisresearch,2010,125:511-512；Lupus.,2010,19:370-378；Annualreviewofphysiology,2011,73:515-525)。同樣，TF在動脈血栓類疾病中的作用也不容忽視，眾多臨床數(shù)據(jù)表明TF在動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展過程中起重要作用，2009年，SteppichBA，BraunSL等對174位不穩(wěn)定型心絞痛病人(unstableAnginapectoris，uAP)和112位急性心肌梗塞(Acutemyocardialinfarction，AMI)進行研究，結(jié)果表明血漿中TF的活性直接影響心血管病病人的死亡率，而且TF可以作為心血管類疾病的診斷和預后判斷的標志物(Thrombosisresearch,2012,129:279-284；ThrombJ.,2009,7(11):1-9)；2014年，JiangP,XueD等通過光化學法致血栓模型和FeCl3致血栓模型研究表明，與內(nèi)源凝血途徑相比，TF起始的外源凝血途徑在動脈血栓類疾病的發(fā)生、發(fā)展中起更重要的作用，而且實驗結(jié)果更證明TF起始的外源凝血途徑可以作為動脈血栓類疾病治療的靶標(Thrombosisresearch,2014,133(4):657-666)。TF在炎癥及代謝疾病中也起作用。研究表明，炎癥性疾病的發(fā)生都伴隨有異常的血管生成和凝血。MariaIBokarewa等研究表明，多種炎癥刺激物都會促進TF在內(nèi)皮細胞和單核細胞表面的表達，而且他們的實驗結(jié)果顯示TF的過表達也是誘導和促進炎癥發(fā)生的一個主要因子(ArthritisRes2002,4:190-195)。同樣，研究表明TF在肥胖和糖尿病的治療中起顯著的調(diào)控作用，如LeyllaBadeanlou等研究表明，通過靶向TF的特異性抗體或敲除TF以阻斷TF-PAR2信號通路，可明顯的抑制飲食誘導的肥胖性疾病及脂肪組織炎癥的發(fā)生并可以顯著改善胰島素對糖尿病的治療效果(Naturemedicine,2011,17(11):1490-1497)。因此，鑒于TF在各類相關(guān)疾病中作用和功能，開發(fā)靶向TF的特異性治療抗體，對TF在癌癥、血栓、炎癥等各類疾病中引起的血管增生、異常凝血等所導致的病理特征的診斷、治療和預防是極其有益的。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的就是提供了一種TF抗體，它具有特異性靶向于人TF、具有抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移活性，并具有抗凝血和抑制FXa生成活性等特性。在本發(fā)明第一方面，提供了一種抗體的重鏈可變區(qū)，所述的重鏈可變區(qū)包括以下三個互補決定區(qū)CDR：SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2，和SEQIDNO:3所示的CDR3；其中，上述氨基酸序列中任意一種氨基酸序列還包括任選地經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的，并能夠保留TF結(jié)合親和力的衍生序列。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種抗體的重鏈，所述的重鏈具有第一方面的重鏈可變區(qū)。在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種抗體的輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包括以下三個互補決定區(qū)CDR：SEQIDNO:4所示的CDR1'，SEQIDNO:5所示的CDR2'，和SEQIDNO:6所示的CDR3'；上述氨基酸序列中任意一種氨基酸序列經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的衍生序列。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種抗體的輕鏈，所述的輕鏈具有第三方面的輕鏈可變區(qū)。在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。在本發(fā)明的第五方面，提供了一種抗體，所述抗體具有：(1)第一方面的重鏈可變區(qū)；和/或(2)第三方面的輕鏈可變區(qū)；或者，所述抗體具有：第二方面的重鏈；和/或第四方面的輕鏈。在另一優(yōu)選例中，所述抗體選自：動物源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述添加、缺失、修飾和/或取代的氨基酸數(shù)量，不超過初始氨基酸序列總氨基酸數(shù)量的40％。在另一優(yōu)選例中，所述添加、缺失、修飾和/或取代的氨基酸數(shù)量為1-7個。在另一優(yōu)選例中，所述經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代的至少一個氨基酸序列為同源性為至少80％的氨基酸序列。在另一優(yōu)選例中，所述經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸具有抑制TF相關(guān)信號通路的活性、抗凝血活性、抗FXa生成活性中的任意一種或幾種。在本發(fā)明的第六方面，提供了一種本發(fā)明所述抗體的應用，所述抗體用于(a)制備診斷試劑；和/或(b)制備預防和/或治療TF相關(guān)的疾病的藥物。在另一優(yōu)選例中，所述TF相關(guān)的疾病選自下組：腫瘤的發(fā)生、生長和/或轉(zhuǎn)移；血栓類相關(guān)疾??；炎癥；代謝相關(guān)疾?。换蚱浣M合。在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為TF高表達的腫瘤。在另一優(yōu)選例中，所述的TF高表達指腫瘤組織中TF轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白的水平L1與正常組織中轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白的水平L0之比，L1/L0≥2，較佳地≥3。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤選自下組：三陰性乳腺癌、胰腺癌、肺癌和惡性膠質(zhì)瘤。在另一優(yōu)選例中，所述藥物為抗體藥物偶聯(lián)物。在本發(fā)明的第七方面，提供了一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有：(i)第一方面的重鏈可變區(qū)、第二方面的重鏈、第三方面的輕鏈可變區(qū)、第四方面的輕鏈、或第四方面的抗體；以及(ii)任選的協(xié)助表達和/或純化的標簽序列。在本發(fā)明的第八方面，提供了一種多核苷酸，它編碼選自下組的多肽：(1)第一方面的重鏈可變區(qū)、第二方面的重鏈、第三方面的輕鏈可變區(qū)、第四方面的輕鏈、或第四方面的抗體；或(2)第七方面的重組蛋白。在本發(fā)明的第九方面，提供了一種載體，它含有第八方面的多核苷酸。在本發(fā)明的第十方面，提供了一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有第九方面的載體或基因組中整合有第八方面的多核苷酸。在本發(fā)明的第十一方面，提供了一種抗體藥物偶聯(lián)物，該抗體藥物偶聯(lián)物含有：(a)抗體部分，所述抗體部分選自下組：第一方面的重鏈可變區(qū)、第二方面的重鏈、第三方面的輕鏈可變區(qū)、第四方面的輕鏈、第四方面的抗體、或其組合；和(b)與所述抗體部分偶聯(lián)的偶聯(lián)部分，所述偶聯(lián)部分選自下組：可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、酶、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述的抗體部分與所述的偶聯(lián)部分通過化學鍵或接頭進行偶聯(lián)。在本發(fā)明的第十二方面，提供了一種免疫細胞，所述免疫細胞表達或在細胞膜外暴露有本發(fā)明第五方面的抗體。在另一優(yōu)選例中，所述的免疫細胞包括NK細胞、T細胞。在另一優(yōu)選例中，所述的免疫細胞為人的。在另一優(yōu)選例中，所述的抗體為單鏈抗體。在本發(fā)明的第十三方面，提供了一種藥物組合物，它含有：(i)活性成分，所述活性成分選自下組：第一方面的重鏈可變區(qū)、第二方面的重鏈、第三方面的輕鏈可變區(qū)、第四方面的輕鏈、或第四方面的抗體、第七方面的重組蛋白、第十一方面的抗體藥物偶聯(lián)物、第十二方面的免疫細胞、或其組合；以及(ii)藥學上可接受的載體。在本發(fā)明的第十四方面，提供了一種活性成分的用途，所述活性成分選自下組：第一方面的重鏈可變區(qū)、第二方面的重鏈、第三方面的輕鏈可變區(qū)、第四方面的輕鏈、或第四方面的抗體、第七方面的重組蛋白、第十一方面的抗體藥物偶聯(lián)物、第十二方面的免疫細胞、或其組合，其中所述活性成分被用于制備藥劑、試劑、檢測板或試劑盒。在另一優(yōu)選例中，所述試劑、檢測板或試劑盒用于：(1)檢測樣品中TF蛋白；和/或(2)檢測腫瘤細胞中內(nèi)源性的TF蛋白；和/或(3)檢測表達TF蛋白的腫瘤細胞；而所述藥劑用于治療或預防表達TF蛋白的腫瘤、血栓類疾病、肥胖及糖尿病等疾病。在本發(fā)明的第十五方面，提供了一種體外檢測(包括診斷性或非診斷性)樣品中TF蛋白的方法，所述方法包括步驟：(1)在體外，將所述樣品與本發(fā)明抗體接觸；(2)檢測是否形成抗原-抗體復合物，其中形成復合物就表示樣品中存在TF蛋白。在本發(fā)明的第十六方面，提供了一種檢測板，所述的檢測板包括：基片(支撐板)和測試條，所述的測試條含有第五方面的抗體或第十一方面的免疫偶聯(lián)物。在本發(fā)明的第十七方面，提供了一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括：(1)第一容器，所述第一容器中含有本發(fā)明的抗體；和/或(2)第二容器，所述第二容器中含有抗本發(fā)明抗體的二抗；或者，所述試劑盒含有第十六方面的檢測板。在本發(fā)明的第十八方面，提供了一種重組多肽的制備方法，該方法包括：(a)在適合表達的條件下，培養(yǎng)第十方面的宿主細胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出重組多肽，所述的重組多肽是第五方面的抗體或第七方面的重組蛋白。在本發(fā)明的第十九方面，提供了一種治療腫瘤、血栓類疾病、炎癥性疾病和/或代謝類疾病的方法，包括：使用(如給需要的對象施用)第五方面的抗體、所述抗體的抗體-藥物偶聯(lián)物、或表達所述抗體的CAR-T細胞、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述的代謝類疾病包括：肥胖、或糖尿病。在本發(fā)明的第二十方面，提供了一種抗TF抗體，其中該抗體對人TF蛋白的親和力的EC50為0.005-0.10nM，較佳地為0.005-0.05nM，更佳地0.01-0.03nM或0.01-0.02nM。在另一優(yōu)選例中，所述抗體不結(jié)合于野生型的鼠TF蛋白。在另一優(yōu)選例中，所述抗體具有選自下組的一個或多個特性：(a)抑制腫瘤細胞遷移或轉(zhuǎn)移；(b)抑制腫瘤生長。在另一優(yōu)選例中，所述的抗體為TF-mAb-SC1、TF-mAb-Ch或TF-mAb-H29至TF-mAb-H48。在本發(fā)明的第二十一方面，提供了一種制備人源化或嵌合抗體的方法，包括步驟：將本發(fā)明的鼠源抗體可變區(qū)的核苷酸序列克隆入含有人抗體恒定區(qū)的表達載體后，通過轉(zhuǎn)染動物細胞表達人-鼠嵌合抗體。將本發(fā)明的含人源FR區(qū)的抗體可變區(qū)的核苷酸序列克隆入含有人抗體恒定區(qū)的表達載體后，通過轉(zhuǎn)染動物細胞表達人源化抗體。在另一優(yōu)選例中，所述的抗體是部分或全人源化的單克隆抗體。在本發(fā)明的第二十二方面，提供了一種抑制腫瘤細胞遷移的方法，其特征在于，包括步驟：給需要的對象施用本發(fā)明的抗體、所述抗體的抗體-藥物偶聯(lián)物、或表達所述抗體的CAR-T細胞。應理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖1為一系列原始抗人TF單克隆抗體(originalhybridoma)對人源TF-陽性(MDA-MB-231和BxPC-3)、鼠源TF-陽性(B16-F10)細胞的結(jié)合活性(Cellbindingactivity)檢測結(jié)果，在10μg/mL濃度條件下，TF-mAb-SC1顯示最佳結(jié)合活性。圖2為ELISA測定TF-mAb-SC1對TF胞外區(qū)蛋白的結(jié)合親和力(Bindingaffinity)。圖3為Westernblot測定一系列原始單克隆抗體對BxPC-3胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的抑制作用。圖4為人-鼠嵌合抗體(TF-mAb-Ch)表達質(zhì)粒的單酶切、雙酶切鑒定結(jié)果，其中，圖4A為表達重鏈質(zhì)粒的可變區(qū)單酶切、雙酶切鑒定結(jié)果，圖4B為表達輕鏈質(zhì)粒的可變區(qū)單酶切、雙酶切鑒定結(jié)果。圖5為TF-mAb-SC1對細胞表面TF的結(jié)合親和力(Bindingaffinity)檢測結(jié)果，其中，圖5A為對BxPC-3結(jié)合親和力，圖5B為對MDA-MB-231結(jié)合親和力，圖5C為對U87MG結(jié)合親和力，圖5D為對H1975的結(jié)合親和活性。圖6為TF-mAb-SC1對FVIIa激活的BxPC-3細胞胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的影響檢測結(jié)果。圖7為TF-mAb-SC1抗凝血活性檢測結(jié)果，分別以BxPC-3(圖7A)和MDA-MB-231(圖7B)細胞表面TF作為TF來源。圖8為TF-mAb-SC1抗FXa生成活性檢測結(jié)果，分別以BxPC-3(圖8A)和MDA-MB-231(圖8B)細胞表面TF作為TF來源。圖9為TF-mAb-SC1抑制裸鼠皮下BxPC-3腫瘤生長的檢測結(jié)果(箭頭所指為開始給藥時間)。圖10為TF-mAb-SC1抑制裸鼠皮下U87MG腫瘤生長的檢測結(jié)果(箭頭所指為開始給藥時間)。圖11為TF-mAb-SC1抑制裸鼠皮下HCC1806腫瘤生長的檢測結(jié)果(箭頭所指為開始給藥時間)。圖12為TF-mAb-SC1抑制BxPC-3腫瘤基質(zhì)膠原的堆積的檢測結(jié)果及其Image-proplus進行統(tǒng)計分析的結(jié)果。圖13為TF-mAb-SC1減小BxPC-3腫瘤血管管腔面積及其統(tǒng)計結(jié)果。圖14為TF基因敲除情況下，MDA-MB-231(圖14A)和BxPC-3(圖14B)細胞的遷移水平的測定。圖15為TF-mAb-SC1抗腫瘤細胞遷移活性測定，其中圖15A為TF-mAb-SC1抑制MDA-MB-231細胞的遷移水平的測定；圖15B為TF-mAb-SC1抑制BxPC-3細胞的遷移水平的測定；圖16為TF基因敲除后，MDA-MB-231-luc細胞在小鼠體內(nèi)血行性遷移水平檢測及其熒光強度統(tǒng)計結(jié)果。圖17為TF-mAb-SC1抑制MDA-MB-231-luc細胞在小鼠體內(nèi)血行性遷移能力檢測及其熒光強度統(tǒng)計結(jié)果。圖18A為肺上的MDA-MB-231腫瘤轉(zhuǎn)移灶及其統(tǒng)計分析結(jié)果；圖18B為肺的重量比較結(jié)果。圖19為TF-mAb-SC1被細胞內(nèi)吞(Internalization)至溶酶體的激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果。圖20為ELISA測定嵌合型抗體TF-mAb-Ch對TF胞外區(qū)蛋白的結(jié)合親和力。圖21為TF-mAb-Ch對TF-陽性腫瘤細胞MDA-MB-231的結(jié)合親和力的測定。圖22為TF-mAb-Ch對BxPC-3胞內(nèi)信號通路TF-PAR2影響的檢測結(jié)果。圖23為TF-mAb-Ch被細胞內(nèi)吞(Internalization)至溶酶體的檢測。圖24為人源化抗體對BxPC-3胞內(nèi)信號通路TF-PAR2影響的檢測結(jié)果。圖25為人源化抗體抑制裸鼠皮下HCC1806腫瘤生長的檢測結(jié)果(箭頭所指為開始給藥時間)。圖26為TF蛋白在高侵襲、高轉(zhuǎn)移的Basal-type乳腺癌(尤其是三陰性乳腺癌)細胞株群中和Luminal-type乳腺癌細胞株群中的表達結(jié)果對比。圖27為根據(jù)CancerCellLineEncyclopedia(CCLE)數(shù)據(jù)庫分析TFmRNA在高侵襲、高轉(zhuǎn)移的Basal-type乳腺癌(尤其是三陰性乳腺癌)細胞株群中和Luminal-type乳腺癌細胞株群中的表達結(jié)果對比。圖28為TF蛋白在不同胰腺癌細胞株中的表達檢測結(jié)果。圖29為根據(jù)CCLE數(shù)據(jù)庫分析TFmRNA在不同胰腺癌細胞株中的表達水平。具體實施方式本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，經(jīng)過大量篩選，意外地獲得一種抗TF單克隆抗體TF-mAb-SC1，實驗結(jié)果表明，該針對TF蛋白的單克隆抗體為IgG2b型抗體。所述的抗體能夠高特異性地結(jié)合TF抗原，其具有很高的親和力(ELISA測定其EC50約為0.019nM)并且，所述的抗體具有顯著的抗腫瘤活性，而對于哺乳動物本身沒有可見的毒副作用。此外，基于該TF-mAb-SC1而獲得的嵌合抗體、人源化抗體以及相應的ADC也具有優(yōu)異的特性。在此基礎上完成了本發(fā)明?？贵w如本文所用，術(shù)語“抗體”或“免疫球蛋白”是有相同結(jié)構(gòu)特征的約150000道爾頓的異四聚糖蛋白，其由兩個相同的輕鏈(L)和兩個相同的重鏈(H)組成。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型的重鏈間的二硫鍵數(shù)目不同。每條重鏈和輕鏈也有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈的一端有可變區(qū)(VH)，其后是多個恒定區(qū)。每條輕鏈的一端有可變區(qū)(VL)，另一端有恒定區(qū)；輕鏈的恒定區(qū)與重鏈的第一個恒定區(qū)相對，輕鏈的可變區(qū)與重鏈的可變區(qū)相對。特殊的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈的可變區(qū)之間形成界面。如本文所用，術(shù)語“可變”表示抗體中可變區(qū)的某些部分在序列上有所不同，它形成了各種特定抗體對其特定抗原的結(jié)合和特異性。然而，可變性并不均勻地分布在整個抗體可變區(qū)中。它集中于輕鏈和重鏈可變區(qū)中稱為互補決定區(qū)(CDR)或超變區(qū)中的三個片段中。可變區(qū)中較保守的部分稱為構(gòu)架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區(qū)中各自包含四個FR區(qū)，它們大致上呈β-折疊構(gòu)型，由形成連接環(huán)的三個CDR相連，在某些情況下可形成部分β折疊結(jié)構(gòu)。每條鏈中的CDR通過FR區(qū)緊密地靠在一起并與另一鏈的CDR一起形成了抗體的抗原結(jié)合部位(參見Kabat等,NIHPubl.No.91-3242,卷I，647-669頁(1991))。恒定區(qū)不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但是它們表現(xiàn)出不同的效應功能，例如參與抗體的依賴于抗體的細胞毒性。脊椎動物抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”可根據(jù)其恒定區(qū)的氨基酸序列歸為明顯不同的兩類(稱為κ和λ)中的一類。根據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分為不同的種類。主要有5類免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些還可進一步分成亞類(同種型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。對應于不同類免疫球蛋白的重鏈恒定區(qū)分別稱為α、δ、ε、γ、和μ。不同類免疫球蛋白的亞單位結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是本領(lǐng)域人員所熟知的。一般，抗體的抗原結(jié)合特性可由位于重鏈和輕鏈可變區(qū)的3個特定的區(qū)域來描述，稱為可變區(qū)域(CDR)，將該段間隔成4個框架區(qū)域(FR)，4個FR的氨基酸序列相對比較保守，不直接參與結(jié)合反應。這些CDR形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，通過其間的FR形成的β折疊在空間結(jié)構(gòu)上相互靠近，重鏈上的CDR和相應輕鏈上的CDR構(gòu)成了抗體的抗原結(jié)合位點?？梢酝ㄟ^比較同類型的抗體的氨基酸序列來確定是哪些氨基酸構(gòu)成了FR或CDR區(qū)域。本發(fā)明不僅包括完整的抗體，還包括具有免疫活性的抗體的片段或抗體與其他序列形成的融合蛋白。因此，本發(fā)明還包括所述抗體的片段、衍生物和類似物。在本發(fā)明中，抗體包括用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知技術(shù)所制備的鼠的、嵌合的、人源化的或者全人的抗體。重組抗體，例如嵌合的和人源化的單克隆抗體，包括人的和非人的部分，可以通過標準的DNA重組技術(shù)獲得，它們都是有用的抗體。嵌合抗體是一個分子，其中不同的部分來自不同的動物種，例如具有來自鼠的單克隆抗體的可變區(qū)，和來自人免疫球蛋白的恒定區(qū)的嵌合抗體(見例如美國專利4,816,567和美國專利4,816,397,在此通過引用方式整體引入本文)。人源化的抗體是指來源于非人物種的抗體分子，具有一個或多個來源于非人物種的互補決定區(qū)(CDRs)和來源于人免疫球蛋白分子的框架區(qū)域(見美國專利5,585,089，在此通過引用方式整體引入本文)。這些嵌合和人源化的單克隆抗體可以采用本領(lǐng)域熟知的DNA重組技術(shù)制備。在本發(fā)明中，抗體可以是單特異性、雙特異性、三特異性、或者更多的多重特異性。在本發(fā)明中，本發(fā)明的抗體還包括其保守性變異體，指與本發(fā)明抗體的氨基酸序列相比，有至多10個，較佳地至多8個，更佳地至多5個，最佳地至多3個氨基酸被性質(zhì)相似或相近的氨基酸所替換而形成多肽。這些保守性變異多肽最好根據(jù)表A進行氨基酸替換而產(chǎn)生。表A最初的殘基代表性的取代優(yōu)選的取代Ala(A)Val；Leu；IleValArg(R)Lys；Gln；AsnLysAsn(N)Gln；His；Lys；ArgGlnAsp(D)GluGluCys(C)SerSerGln(Q)AsnAsnGlu(E)AspAspGly(G)Pro；AlaAlaHis(H)Asn；Gln；Lys；ArgArgIle(I)Leu；Val；Met；Ala；PheLeuLeu(L)Ile；Val；Met；Ala；PheIleLys(K)Arg；Gln；AsnArgMet(M)Leu；Phe；IleLeuPhe(F)Leu；Val；Ile；Ala；TyrLeuPro(P)AlaAlaSer(S)ThrThrThr(T)SerSerTrp(W)Tyr；PheTyrTyr(Y)Trp；Phe；Thr；SerPheVal(V)Ile；Leu；Met；Phe；AlaLeu抗TF的抗體本發(fā)明提供一種針對TF的高特異性和高親和力的抗體，其包括重鏈和輕鏈，所述重鏈含有重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列，所述輕鏈含有輕鏈可變區(qū)(VL)氨基酸序列。優(yōu)選地，重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列和輕鏈可變區(qū)(VL)氨基酸序列的各自CDR選自下組：a1)SEQIDNo.:1；a2)SEQIDNo.:2；a3)SEQIDNo.:3；a4)SEQIDNo.:4；a5)SEQIDNo.:5；a6)SEQIDNo.:6；a7)上述氨基酸序列中任意一種氨基酸序列經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的序列。在另一優(yōu)選例中，所述經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸序列所形成的序列優(yōu)選為同源性為至少80％，較佳地至少85％，更佳地至少為90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述的抗體具有抑制TF相關(guān)信號通路的活性；具有抗凝血活性；具有抗FXa生成活性、或其組合。本發(fā)明的抗體可以是雙鏈或單鏈抗體，并且可以是選自動物源抗體、嵌合抗體、人源化抗體，更優(yōu)選為人源化抗體、人-動物嵌合抗體，更優(yōu)選為全人源化抗體。本發(fā)明所述抗體衍生物可以是單鏈抗體、和/或抗體片段，如：Fab、Fab'、(Fab')2或該領(lǐng)域內(nèi)其他已知的抗體衍生物等，以及IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM抗體或其他亞型的抗體中的任意一種或幾種。其中，所述動物優(yōu)選為哺乳動物，如鼠。本發(fā)明抗體可以是靶向人TF的嵌合抗體、人源化抗體、CDR嫁接和/或修飾的抗體。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實施例中，上述SEQIDNo.:1-SEQIDNo.:3中任意一種或幾種序列、或它們經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的序列，位于重鏈可變區(qū)(VH)的CDR區(qū)。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實施例中，上述SEQIDNo.:4-SEQIDNo.:6中任意一種或幾種序列、或它們經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的序列，位于輕鏈可變區(qū)(VL)的CDR區(qū)。在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實施例中，VHCDR1、CDR2、CDR3分別獨立地選自SEQIDNo.:1-SEQIDNo.:3中任意一種或幾種序列、或它們經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的序列；VLCDR1、CDR2、CDR3分別獨立地選自SEQIDNo.:4-SEQIDNo.:6中任意一種或幾種序列、或它們經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的具有TF結(jié)合親和力的序列。本發(fā)明上述內(nèi)容中，所述添加、缺失、修飾和/或取代的氨基酸數(shù)量，優(yōu)選為不超過初始氨基酸序列總氨基酸數(shù)量的40％，更優(yōu)選為不超過35％，更優(yōu)選為1-33％，更優(yōu)選為5-30％，更優(yōu)選為10-25％，更優(yōu)選為15-20％。本發(fā)明上述內(nèi)容中，更優(yōu)選地，所述添加、缺失、修飾和/或取代的氨基酸數(shù)量，可以是1-7個，更優(yōu)選為1-5個，更優(yōu)選為1-3個，更優(yōu)選為1-2個。在另一優(yōu)選例中，所述靶向TF的抗體為TF-mAb-SC1(原名稱為TF-mAb)。在另一優(yōu)選例中，所述抗體TF-mAb-SC1的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列為如SEQIDNO.:7所示的氨基酸序列。在另一優(yōu)選例中，所述抗體TF-mAb-SC1的輕鏈可變區(qū)(V-Kappa)氨基酸序列為如SEQIDNO.:8所示的氨基酸序列。抗體的制備本發(fā)明抗體或其片段的DNA分子的序列可以用常規(guī)技術(shù)，比如利用PCR擴增或基因組文庫篩選等方法獲得。此外，還可將輕鏈和重鏈的編碼序列融合在一起，形成單鏈抗體。一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關(guān)序列。此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時。通常，通過先合成多個小片段，然后再進行連接可獲得序列很長的片段。目前，已經(jīng)可以完全通過化學合成來得到編碼所述的本發(fā)明的抗體(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中已知的各種現(xiàn)有的DNA分子(或如載體)和細胞中。此外，還可通過化學合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。本發(fā)明還涉及包含上述的適當DNA序列以及適當啟動子或者控制序列的載體。這些載體可以用于轉(zhuǎn)化適當?shù)乃拗骷毎允蛊淠軌虮磉_蛋白質(zhì)。宿主細胞可以是原核細胞，如細菌細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或是高等真核細胞，如哺乳動物細胞。優(yōu)選的動物細胞包括(但并不限于)：CHO-S、HEK-293細胞。通常，在適合本發(fā)明抗體表達的條件下，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化所得的宿主細胞。然后用常規(guī)的免疫球蛋白純化步驟，如蛋白A-Sepharose、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析、離子交換層析、疏水層析、分子篩層析或親和層析等本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)分離純化手段純化得到本發(fā)明的抗體。所得單克隆抗體可用常規(guī)手段來鑒定。比如，單克隆抗體的結(jié)合特異性可用免疫沉淀或體外結(jié)合試驗(如放射性免疫測定(RIA)或酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA))來測定。單克隆抗體的結(jié)合親和力例如可用Munson等,Anal.Biochem.,107:220(1980)的Scatchard分析來測定。本發(fā)明的抗體可在細胞內(nèi)、或在細胞膜上表達、或分泌到細胞外。如果需要，可利用其物理的、化學的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于：常規(guī)的復性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超聲處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合?？贵w-藥物偶聯(lián)物(ADC)本發(fā)明還提供了基于本發(fā)明抗體的抗體偶聯(lián)藥物(antibody-drugconjugate，ADC)。典型地，所述抗體偶聯(lián)藥物包括所述抗體、以及效應分子，所述抗體與所述效應分子偶聯(lián)，并優(yōu)選為化學偶聯(lián)。其中，所述效應分子優(yōu)選為具有治療活性的藥物。此外，所述效應分子可以是毒蛋白、化療藥物、小分子藥物或放射性核素中的一種或多種。本發(fā)明抗體與所述效應分子之間可以是通過偶聯(lián)劑進行偶聯(lián)。所述偶聯(lián)劑的例子可以是非選擇性偶聯(lián)劑、利用羧基的偶聯(lián)劑、肽鏈、利用二硫鍵的偶聯(lián)劑中的任意一種或幾種。所述非選擇性偶聯(lián)劑是指使效應分子和抗體形成共價鍵連接的化合物，如戊二醛等。所述利用羧基的偶聯(lián)劑可以是順烏頭酸酐類偶聯(lián)劑(如順烏頭酸酐)、?；觐惻悸?lián)劑(偶聯(lián)位點為酰基腙)中的任意一種或幾種?？贵w上某些殘基(如Cys或Lys等)用于與多種功能基團相連，其中包括成像試劑(例如發(fā)色基團和熒光基團)，診斷試劑(例如MRI對比劑和放射性同位素)，穩(wěn)定劑(例如乙二醇聚合物)和治療劑?？贵w可以被偶聯(lián)到功能劑以形成抗體-功能劑的偶聯(lián)物。功能劑(例如藥物，檢測試劑，穩(wěn)定劑)被偶聯(lián)(共價連接)至抗體上。功能劑可以直接地、或者是通過接頭間接地連接于抗體。抗體可以偶聯(lián)藥物從而形成抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)。典型地，ADC包含位于藥物和抗體之間的接頭。接頭可以是可降解的或者是不可降解的接頭?？山到獾慕宇^典型地在細胞內(nèi)環(huán)境下容易降解，例如在目標位點處接頭發(fā)生降解，從而使藥物從抗體上釋放出來。合適的可降解的接頭包括，例如酶降解的接頭，其中包括可以被細胞內(nèi)蛋白酶(例如溶酶體蛋白酶或者內(nèi)體蛋白酶)降解的含有肽基的接頭，或者糖接頭例如，可以被葡糖苷酸酶降解的含葡糖苷酸的接頭。肽基接頭可以包括，例如二肽，例如纈氨酸-瓜氨酸，苯丙氨酸-賴氨酸或者纈氨酸-丙氨酸。其它合適的可降解的接頭包括，例如，pH敏感接頭(例如pH小于5.5時水解的接頭，例如腙接頭)和在還原條件下會降解的接頭(例如二硫鍵接頭)。不可降解的接頭典型地在抗體被蛋白酶水解的條件下釋放藥物。連接到抗體之前，接頭具有能夠和某些氨基酸殘基反應的活性反應基團，連接通過活性反應基團實現(xiàn)。巰基特異性的活性反應基團是優(yōu)選的，并包括：例如馬來酰亞胺類化合物，鹵代酰胺(例如碘、溴或氯代的)；鹵代酯(例如碘、溴或氯代的)；鹵代甲基酮(例如碘、溴或氯代)，芐基鹵代物(例如碘、溴或氯代的)；乙烯基砜，吡啶基二硫化物；汞衍生物例如3,6-二-(汞甲基)二氧六環(huán)，而對離子是醋酸根、氯離子或者硝酸根；和聚亞甲基二甲基硫醚硫代磺酸鹽。接頭可以包括，例如，通過硫代丁二酰亞胺連接到抗體上的馬來酰亞胺。藥物可以是任何細胞毒性，抑制細胞生長或者免疫抑制的藥物。在實施方式中，接頭連接抗體和藥物，而藥物具有可以和接頭成鍵的功能性基團。例如，藥物可以具有可以和連接物成鍵的氨基，羧基，巰基，羥基，或者酮基。在藥物直接連接到接頭的情況下，藥物在連接到抗體之前，具有反應的活性基團。有用的藥物類別包括，例如，抗微管蛋白藥物、DNA小溝結(jié)合試劑、DNA復制抑制劑、烷化試劑、抗生素、葉酸拮抗物、抗代謝藥物、化療增敏劑、拓撲異構(gòu)酶抑制劑、長春花生物堿等。特別有用的細胞毒性藥物類的例子包括，例如，DNA小溝結(jié)合試劑、DNA烷基化試劑、和微管蛋白抑制劑、典型的細胞毒性藥物包括、例如奧瑞他汀(auristatins)、喜樹堿(camptothecins)、多卡霉素/倍癌霉素(duocarmycins)、依托泊甙(etoposides)、美登木素(maytansines)和美登素類化合物(maytansinoids)(例如DM1和DM4)、紫杉烷(taxanes)、苯二氮卓類(benzodiazepines)或者含有苯二氮卓的藥物(benzodiazepinecontainingdrugs)(例如吡咯并[1,4]苯二氮卓類(PBDs)，吲哚啉苯并二氮卓類(indolinobenzodiazepines)和噁唑烷并苯并二氮卓類(oxazolidinobenzodiazepines))和長春花生物堿(vincaalkaloids)。在本發(fā)明中，藥物-接頭可以用于在一個簡單步驟中形成ADC。在其它實施方式中，雙功能連接物化合物可以用于在兩步或多步方法中形成ADC。例如，半胱氨酸殘基在第一步驟中與接頭的反應活性部分反應，并且在隨后的步驟中，接頭上的功能性基團與藥物反應，從而形成ADC。通常，選擇接頭上功能性基團，以利于特異性地與藥物部分上的合適的反應活性基團進行反應。作為非限制性的例子，基于疊氮化合物的部分可以用于特異性地與藥物部分上的反應性炔基基團反應。藥物通過疊氮和炔基之間的1,3-偶極環(huán)加成，從而共價結(jié)合于接頭。其它的有用的功能性基團包括，例如酮類和醛類(適合與酰肼類和烷氧基胺反應)，膦(適合與疊氮反應)；異氰酸酯和異硫氰酸酯(適合與胺類和醇類反應)；和活化的酯類，例如N-羥基琥珀酰亞胺酯(適合與胺類和醇類反應)。這些和其它的連接策略，例如在《生物偶聯(lián)技術(shù)》，第二版(Elsevier)中所描述的，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，對于藥物部分和接頭的選擇性反應，當選擇了一個互補對的反應活性功能基團時，該互補對的每一個成員既可以用于接頭，也可以用于藥物。本發(fā)明還提供了制備ADC的方法，可進一步地包括：將抗體與藥物-接頭化合物，在足以形成抗體偶聯(lián)物(ADC)的條件下進行結(jié)合。在某些實施方式中，本發(fā)明方法包括：在足以形成抗體-接頭偶聯(lián)物的條件下，將抗體與雙功能接頭化合物進行結(jié)合。在這些實施方式中，本發(fā)明方法還進一步地包括：在足以將藥物部分通過接頭共價連接到抗體的條件下，將抗體接頭偶聯(lián)物與藥物部分進行結(jié)合。在一些實施方式中，抗體藥物偶聯(lián)物ADC如下分子式所示：其中：Ab是抗體，LU是接頭；D是藥物；而且下標p是選自1到8的值。檢測用途和試劑盒本發(fā)明的抗體或其ADC可用于檢測應用，例如用于檢測樣本，從而提供診斷信息。本發(fā)明中，所采用的樣本(樣品)包括細胞、組織樣本和活檢標本。本發(fā)明使用的術(shù)語“活檢”應包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的所有種類的活檢。因此本發(fā)明中使用的活檢可以包括例如腫瘤的切除樣本、通過內(nèi)窺鏡方法或器官的穿刺或針刺活檢制備的組織樣本。本發(fā)明中使用的樣本包括固定的或保存的細胞或組織樣本。本發(fā)明還提供了一種指含有本發(fā)明的抗體(或其片段)的試劑盒，在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括容器、使用說明書、緩沖劑等。在優(yōu)選例中，本發(fā)明的抗體可以固定于檢測板。應用本發(fā)明還提供了本發(fā)明抗體的用途，例如用于制備診斷制劑、或制備用于預防和/或治療TF相關(guān)的疾病的藥物。所述TF相關(guān)的疾病包括腫瘤發(fā)生、生長和/或轉(zhuǎn)移、血栓類相關(guān)疾病、炎癥、代謝相關(guān)疾病等。本發(fā)明抗體、ADC或CAR-T等的用途，包括(但并不限于)：(i)診斷、預防和/或治療腫瘤發(fā)生、生長和/或轉(zhuǎn)移，尤其是TF高表達的腫瘤。所述腫瘤包括(但并不限于)：乳腺癌(如三陰性乳腺癌)、胰腺癌、肺癌、惡性膠質(zhì)瘤、胃癌、肝癌、食道癌、腎癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、骨髓癌、血管肉瘤等；尤其是三陰性乳腺癌、胰腺癌、惡性膠質(zhì)瘤和肺癌，更優(yōu)選為三陰性乳腺癌和/或胰腺癌。(ii)診斷、預防和/或治療血栓類相關(guān)疾病。所述血栓類相關(guān)疾病包括(但并不限于)：動脈粥樣硬化、急性冠狀動脈綜合癥、急性心肌梗塞、中風、高血壓、深靜脈血栓、肺栓塞、腎栓塞及動脈手術(shù)、冠狀動脈旁路移植引起的血栓等。(iii)診斷、預防和/或治療炎癥。所述炎癥包括(但并不限于)：風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、痛風、萊特爾綜合征、牛皮癬性關(guān)節(jié)病、感染性關(guān)節(jié)炎、結(jié)核性關(guān)節(jié)炎、病毒性關(guān)節(jié)炎、真菌性關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎、全身性紅斑狼瘡、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、急性肺損傷、慢性阻塞性肺疾病、特發(fā)性肺纖維化。(iv)診斷、預防和/或治代謝相關(guān)疾病。所述代謝相關(guān)疾病包括(但并不限于)：糖尿病、食源性肥胖和脂肪炎癥等。藥物組合物本發(fā)明還提供了一種組合物。在優(yōu)選例中，所述的組合物是藥物組合物，它含有上述的抗體或其活性片段或其融合蛋白或其ADC或相應的CAR-T細胞，以及藥學上可接受的載體。通常，可將這些物質(zhì)配制于無毒的、惰性的和藥學上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，其中包括(但并不限于)：瘤內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、或局部給藥。本發(fā)明所述抗體也可以是由核苷酸序列在細胞內(nèi)表達用于的細胞治療，比如，所述抗體用于嵌合抗原受體T細胞免疫療法(CAR-T)等。本發(fā)明的藥物組合物可直接用于結(jié)合TF蛋白分子，因而可用于預防和治療腫瘤等疾病。此外，還可同時使用其他治療劑。本發(fā)明的藥物組合物含有安全有效量(如0.001-99wt％,較佳地0.01-90wt％，更佳地0.1-80wt％)的本發(fā)明上述的單克隆抗體(或其偶聯(lián)物)以及藥學上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進行制備。藥物組合物如針劑、溶液宜在無菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的多肽還可與其他治療劑一起使用。使用藥物組合物時，是將安全有效量的免疫偶聯(lián)物施用于哺乳動物，其中該安全有效量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約50毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約20毫克/千克體重。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明的主要優(yōu)點包括：(a)本發(fā)明抗體具有優(yōu)異的生物活性和特異性，并具有很高的親和力(ELISA測定其EC50可高達為約0.01-0.03nM)。此外，對細胞表面TF具有良好的結(jié)合親合力，可用做靶向TF的抗體。(b)本發(fā)明的人源化抗體不僅具有與鼠源抗體相當?shù)幕钚?，而且具有更低的免疫原性?c)本發(fā)明抗體和ADC均具有顯著的抗腫瘤活性，而對于哺乳動物本身沒有可見的毒副作用。(d)本發(fā)明抗體和ADC不僅在多個腫瘤模型中有顯著的治療效應，而且還適用于其他與TF高表達有關(guān)的疾病，如血栓類疾病、代謝類疾病等。下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克?。簩嶒炇沂謨?NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。細胞株為常規(guī)的市售產(chǎn)品或購自ATCC，質(zhì)粒均為市售產(chǎn)品。實施例1靶向人TF單克隆抗體的發(fā)現(xiàn)和制備步驟①，雜交瘤細胞的制備：首先將人TF蛋白的胞外區(qū)部分(UniProtKB/Swiss-Prot:P13726.1，從第34位到第251位氨基酸)免疫Balb/c小鼠，TF胞外區(qū)蛋白的用量為100μg/只，以制備免疫脾細胞；適時的制備鼠骨髓瘤細胞(SP2/0)和飼養(yǎng)細胞以備融合之需。待上述三種細胞準備完畢，通過PEG介導融合免疫脾細胞和SP2/0細胞，去除PEG，用含有飼養(yǎng)細胞的HAT完全培養(yǎng)基重懸，接種到96孔板中培養(yǎng)，通過ELISA法進行陽性孔篩選。最后再對陽性孔的細胞通過有限稀釋法進行克隆化培養(yǎng)，通過ELSIA或免疫熒光法篩選效價高、形態(tài)好、呈單克隆生長的細胞繼續(xù)進行亞克隆篩選，直到連續(xù)三次篩選陽性克隆率全為100％，即可對該細胞株進行擴大培養(yǎng)和建庫。步驟②，靶向人TF鼠源單克隆抗體腹水的制備：將步驟①中篩選出來的雜交瘤細胞擴大培養(yǎng)，小鼠適應性培養(yǎng)后腹腔注射降植烷(0.5mL/只)以為雜交瘤細胞生長提供有利環(huán)境，7-10d后，每只腹腔注射10×106的雜交瘤細胞，自第7天起，每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生狀況和精神狀態(tài)，采取腹水，離心去除油脂-80℃凍存，以備純化。步驟③，靶向人TF鼠源單克隆抗體的純化：將步驟②中凍存的腹水于冰上融化，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，用PBS于4℃透析過夜，最后通過FPLC技術(shù)對該抗體進行純化并超濾濃縮至所需濃度，分裝、-80℃凍存?zhèn)溆谩２襟E④，靶向人TF鼠源單克隆抗體的生物活性和靶向特異性確定：經(jīng)過初步篩選，我們選定約30個雜交瘤細胞進行二次有限稀釋克隆篩選，然后在其中選定6個抗體，進行大量表達純化，并在10μg/mL的濃度下利用流式細胞儀測定各個抗體對人乳腺癌細胞MDA-MB-231，人胰腺癌細胞BxPC-3和鼠黑色素瘤細胞B16-F10的親和力。結(jié)果如圖1所示，測試的抗體可以特異性的靶向結(jié)合人源TF(MDA-MB-231和BxPC-3細胞)而不靶向結(jié)合鼠源TF(B16-F10細胞)，其中TF-mAb-SC1對人TF的親和力比其他5個抗體都要高。用包被液將抗原(TF胞外區(qū)蛋白)稀釋成0.5μg/mL，包被ELISA板，100μL/孔，4℃，過夜。洗去多余抗原，用2％BSA于室溫封閉2h，然后加入3倍梯度稀釋的各單克隆抗體，100μL/孔，室溫孵育2h；洗去未結(jié)合的抗體，加入合適濃度辣根過氧化物酶標記的抗鼠的二抗，100μL/孔，室溫孵育1h。洗去未結(jié)合的二抗，加入TMB顯色液，顯色至適當顏色深淺，加入2MH2SO4，50μL/孔，終止顯色反應，然后在450nm處測定其吸光度，并分析數(shù)據(jù)。如圖2所示，TF-mAb-SC1對TF胞外區(qū)蛋白有很強的親和性，EC50約為0.019nM。同時，鋪3×105個胰腺癌細胞BxPC-3于12孔板中，12小時之后，用無菌PBS洗滌細胞3次，然后加入無血清培養(yǎng)基于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱饑餓4h，隨后將各單克隆抗體按3倍梯度稀釋，并與BxPC-3于培養(yǎng)箱中孵育1h，隨后用25nMFVIIa激活BxPC-3胞內(nèi)PAR2信號通路，37℃作用15min后，用預冷的PBS洗滌細胞一次，并于冰上收集細胞蛋白并通過Westernblot鑒定TF-mAb-SC1對下游MAPK/ERK的磷酸化水平的影響，只做FVIIa刺激，未與單克隆抗體孵育的細胞作為陽性對照。通過Westernblot測定這6個抗體對BxPC-3胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的影響。結(jié)果如圖3所示，只有TF-mAb-SC1可以顯著抑制下游MAPK/ERK的磷酸化水平并呈一定的劑量依賴性。由于TF-mAb-SC1表現(xiàn)出非常高的特異性、非常高的親和力以及對MAPK/ERK的磷酸化水平的顯著抑制作用，故被選定用于測序以及后續(xù)研究。采用常規(guī)測序，并通過Kabat數(shù)據(jù)庫分析，得到以下序列信息：重鏈可變區(qū)的CDR氨基酸序列為：SEQIDNo.:1：SYWMN；SEQIDNo.:2：MIYPADSETRLNQKFKD；SEQIDNo.:3：EDYGSSDY。完整的VH氨基酸序列如SEQIDNO.:7所示。QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYSFISYWMNWVKQRPGQGLEWIGMIYPADSETRLNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCAREDYGSSDYWGQGTTLTVSS(SEQIDNO.:7)輕鏈可變區(qū)的CDR氨基酸序列為：SEQIDNo.:4：SASSSVSYMN；SEQIDNo.:5：GISNLAS；SEQIDNo.:6：QQKSSFPWT。完整的VL氨基酸序列如SEQIDNO.:8所示：EILLTQSPAIIAASPGEKVTITCSASSSVSYMNWYLQKPGSSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTSFSFTINSMETEDVATYYCQQKSSFPWTFGGGTKLEIK(SEQIDNO.:8)實施例2人-鼠嵌合抗體的制備在已獲得的活性高、特異性強的鼠源TF-mAb-SC1的基礎上，構(gòu)建人-鼠嵌合抗體。通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫分析，確定重鏈可變區(qū)的CDR氨基酸序列為：SEQIDNo.:18：MIYPXDSETRLNXKFKD(X選自A、D、E、Q、Y中的任意一種)SEQIDNo.:19：GYSFXSYWMN(X選自A、I、Y、Q、W中的任意一種)SEQIDNo.:20：AREDYGXSDY(X選自S、P、G、D、M、N中的任意一種)。通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫分析，確定輕鏈可變區(qū)的CDR氨基酸序列為：SEQIDNo.:21：QQXSSFXWT(X選自S、P、K、G、H中的任意一種)；SEQIDNo.:22：SASSXVSYMN(X選自A、P、D、S中的任意一種)；SEQIDNo.:23：GXSNLAS(X選自P、D、I、S中的任意一種)。設計引物在重鏈可變區(qū)引入EcoRI和NheI，在輕鏈可變區(qū)引入AgeI和BsiWI限制性內(nèi)切酶酶切位點，然后將上述所獲得抗體重鏈和輕鏈的可變區(qū)序列分別克隆入含有人IgG1重鏈恒定區(qū)和Kappa鏈恒定區(qū)的載體，經(jīng)鑒定無誤后(圖4A為重鏈酶切鑒定結(jié)果，圖4B為輕鏈酶切鑒定結(jié)果，其中樣品1為對應的重鏈/輕鏈空白載體，樣品2為克隆入重鏈/輕鏈可變區(qū)的載體，3和4為單酶切后的樣品，5為雙酶切后的樣品)，利用轉(zhuǎn)染技術(shù)和哺乳動物表達系統(tǒng)(CHO-S或HEK-293細胞)將構(gòu)建的嵌合型抗體表達、純化，所獲得的人-鼠嵌合型抗體，命名為TF-mAb-Ch。實施例3TF-mAb-SC1對TF-陽性腫瘤細胞的結(jié)合親和力(Cellbindingaffinity)的測定本實驗以細胞表面TF高表達的三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231、胰腺癌細胞BxPC-3、惡性膠質(zhì)瘤細胞U87MG和非小細胞肺癌細胞H1975作為靶細胞，將100μL按照3倍梯度從333.33nM稀釋到0.15nM的TF-mAb-SC1作為一抗，分別與懸浮于100μLRPMI-1640無血清培養(yǎng)基中的3×105個MDA-MB-231或BxPC-3混勻，或?qū)?00μL按照3倍梯度從66.67nM稀釋到0.03nM的TF-mAb-SC1作為一抗與懸浮于100μLMEM無血清培養(yǎng)基中的3×105個U87MG混勻，或?qū)?00μL的33.33nM和3.33nM的TF-mAb-SC1作為一抗與懸浮于100μLRPMI-1640無血清培養(yǎng)基中的3×105個H1975混勻，然后在4℃孵育1h，PBS洗滌細胞兩次以去除未結(jié)合的一抗，再將靶細胞與200μL，2μg/mL，PE標記的二抗4℃孵育30min，PBS洗滌細胞兩次以去除未結(jié)合的二抗，最后將細胞重懸在400μLPBS中，通過流式細胞儀測定TF-mAb-SC1對相應細胞表面TF的結(jié)合親和力(Bindingaffinity)。如圖5所示，TF-mAb-SC1對BxPC-3、MDA-MB-231和U87MG均有較好的結(jié)合親和力，EC50分別為2.6nM(圖5A)、2.5nM(圖5B)和1.6nM(圖5C)，圖5D顯示TF-mAb-SC1對H1975也有較好的結(jié)合親和力。這說明，本實施例單克隆抗體能夠以人源TF為作用靶點。實施例4TF-mAb-SC1對胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的影響鋪3×105個胰腺癌細胞BxPC-3于12孔板中，12小時之后，用無菌PBS洗滌細胞3次，然后加入無血清培養(yǎng)基于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱饑餓4h，隨后將TF-mAb-SC1按3倍梯度從100nM稀釋到1.2nM，并與BxPC-3于培養(yǎng)箱中孵育1h，隨后用25nMFVIIa激活BxPC-3胞內(nèi)PAR2信號通路，37℃作用15min后，用預冷的PBS洗滌細胞一次，并于冰上收集細胞蛋白并通過Westernblot鑒定TF-mAb-SC1對下游MAPK/ERK的磷酸化水平的影響，只做FVIIa刺激，未與TF-mAb-SC1孵育的細胞作為陽性對照。檢測結(jié)果如圖6所示，TF-mAb-SC1顯著抑制下游MAPK/ERK的磷酸化水平并呈一定的劑量依賴性。實施例5TF-mAb-SC1抗凝血活性測定將100nM的TF-mAb-SC1倍比稀釋到1.5625nM(終體積50μL)并分別與懸浮于50μL含有5mMCaCl2的Hanks平衡鹽溶液(HanksBalancedSaltSolution,HBSS)中的3×104個MDA-MB-231和BxPC-3，室溫孵育15min，然后加入50μL檸檬酸鹽人血漿，迅速混勻，并在接下來2h內(nèi)每隔15sec于405nm處測定吸光值，以計算對細胞表面TF起始凝血的抗凝作用。圖7中縱坐標代表凝血速率的時間，橫坐標代表TF-mAb-SC1的濃度，以BxPC-3(圖7A)和MDA-MB-231(圖7B)細胞表面TF作為TF來源。實驗結(jié)果均顯示TF-mAb-SC1濃度≥12.5nM時便具有顯著抗凝血活性。實施例6TF-mAb-SC1抗FXa生成活性的測定將100nM的TF-mAb-SC1倍比稀釋到1.5625nM(終體積50μL)并分別與懸浮于50μLHBSS(含有3nMFVIIa)中的1.5×104個BxPC-3和MDA-MB-231細胞于室溫振蕩孵育20min，然后加入50μLFX(終濃度50nM)來起始反應，5min后加入25μL1M的EDTA終止反應；隨后加入25μL3mM的S2765，迅速混勻并在接下來60min內(nèi)每隔15s測定其動力學反應曲線，從而計算抗FXa的生成活性。如圖8所示，TF-mAb-SC1顯示出較好的抗FXa生成活性，IC50分別為9.0nM(圖8A)和6.4nM(圖8B)。實施例7TF-mAb-SC1對體內(nèi)腫瘤生長抑制活性的評定隨機將裸鼠分為兩組，每組10只，首先將腫瘤細胞(1×107的BxPC-3或5×106的U87MG或2.5×106的HCC1806)與20mg/kg劑量的TF-mAb-SC1混合，室溫孵育30min后，共同接種到免疫缺陷型小鼠(Balb/c裸鼠)背部或乳墊，觀察對BxPC-3皮下瘤生長的抑制作用，另一組小鼠使用正常小鼠IgG(簡稱鼠IgG)作為對照。定期測量裸鼠體重及腫瘤大小，繪制腫瘤生長曲線，評定活性。如圖9所示，相比于鼠lgG，TF-mAb-SC1對BxPC-3皮下瘤生長抑制效果更為顯著，抑制率最高可達80％。如圖10所示，相比于鼠lgG，TF-mAb-SC1對U87MG皮下瘤生長抑制效果更為顯著，抑制率最高可達60％。如圖11所示，相比于鼠lgG，TF-mAb-SC1可以顯著抑制HCC1806皮下瘤生長，抑制率最高可達>90％。實施例8TF-mAb-SC1顯著抑制腫瘤基質(zhì)膠原堆積收集來自實施例7的BxPC-3移植瘤，4％中性甲醛固定后，石蠟包埋切片，常規(guī)脫蠟至水并進行Masson染色。對經(jīng)染色的每個樣本在100×的放大倍數(shù)下(圖例為100μm)，采集5到10個視野并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果如圖12所示，TF-mAb-SC1可以顯著抑制腫瘤基質(zhì)膠原的堆積(藍色區(qū)域)，從而導致腫瘤的生長抑制，右圖為利用Image-proplus進行統(tǒng)計分析的結(jié)果。實施例9TF-mAb-SC1顯著減小腫瘤血管管腔面積收集來自實施例7中的BxPC-3移植瘤，4％中性甲醛固定后，石蠟包埋切片，常規(guī)脫蠟至水并進行CD31免疫組化染色。對經(jīng)免疫組化染色的每個樣本在200×的放大倍數(shù)下(圖例為50μm)，采集5到10個視野并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果如圖13所示，TF-mAb-SC1可以顯著減小腫瘤血管官腔面積，右圖為血管管腔面積的統(tǒng)計結(jié)果。實施例10TF-mAb-SC1抗腫瘤細胞遷移活性測定利用transwell小室系統(tǒng)在體外評價TF-mAb對腫瘤細胞遷移水平的影響：將1×105個MDA-MB-231或8×104個BxPC-3細胞分別與一定濃度的TF-mAb-SC1(100nM，33.3nM和11.1nM)或MouseIgG(簡稱IgG)混合于200μL的無血清培養(yǎng)基中，加到上層小室中，小室下層加入600μL含10％FBS的完全培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，8h后，用濕棉簽擦去小室膜上表面細胞，膜下表面細胞用95％乙醇固定30min后，于0.2％的結(jié)晶紫中染色30min，蒸餾水洗去多余的結(jié)晶紫，室溫晾干后，在顯微鏡下，隨機選取5個代表性的視野，分析統(tǒng)計遷移到小室膜下表面的細胞數(shù)。本實驗同時以TF基因敲除的細胞(sh-TF)和相應載體對照細胞(sh-NT)進一步確認TF-mAb-SC1的抗腫瘤細胞遷移活性。如圖14所示，敲除TF基因，顯著抑制MDA-MB-231(圖14A)和BxPC-3(圖14B)細胞的遷移。如圖15所示，TF-mAb-SC1可以顯著的抑制MDA-MB-231(圖15A)和BxPC-3(圖15B)細胞的遷移水平，并呈濃度依賴性。上述結(jié)果提示，通過抑制TF，可以有效抑制腫瘤細胞的遷移。實施例11TF-mAb-SC1顯著抑制腫瘤細胞的體內(nèi)血行轉(zhuǎn)移利用實驗性血行轉(zhuǎn)移模型在體內(nèi)評價TF-mAb-SC1對腫瘤細胞遷移水平的影響：將2×106熒光素酶標記的MDA-MB-231細胞(MDA-MB-231-luc)與0.1mg的TF-mAb-SC1或IgG混合于200μLPBS中，冰上孵育20min后，通過尾靜脈緩慢注射到6到8周齡的雌性裸鼠體內(nèi)；4h后，麻醉裸鼠，將熒光素鉀鹽PBS溶液，按照150mg/kg的劑量，腹腔注射到裸鼠體內(nèi)，6min后于小動物活體成像儀中(IVISSPECTRUM)曝光1min，測定熒光強度，統(tǒng)計分析，每組5只裸鼠。如圖16所示，敲除TF基因可以顯著抑制MDA-MB-231-luc的血行性遷移能力。同樣，如圖17所示，TF-mAb-SC1也可以顯著的抑制MDA-MB-231-luc細胞的血行性遷移能力，右圖為遷移到肺細胞熒光強度的統(tǒng)計結(jié)果。將3×106的MDA-MB-231細胞與0.1mg的TF-mAb-SC1或IgG混合于200μLPBS中，冰上孵育20min后，通過尾靜脈緩慢注射到6周齡的雌性SCIDBeige小鼠體內(nèi)，6周后，處死小鼠，取出肺經(jīng)Bouin's液固定后，拍照并稱重，并記錄每個肺上轉(zhuǎn)移灶的個數(shù)。結(jié)果如圖18所示，TF-mAb-SC1顯著抑制小鼠肺上腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成。實施例12TF-mAb-SC1可以迅速高效的被細胞內(nèi)吞(Internalization)至溶酶體鋪50％密度MDA-MB-231細胞于激光共聚焦專用培養(yǎng)皿中，約16h后，加入10μg/mL的TF-mAb-SC1分別于37℃或4℃孵育1h，用預熱的PBS洗滌三次去除未與細胞結(jié)合的抗體，之后用4％的多聚甲醛于室溫固定30min。PBS洗滌三次后，37℃孵育Lamp-2(兔抗人)抗體1h，以標記細胞溶酶體的位置，PBS洗去未結(jié)合的抗體，37℃孵育AlexaFluor594標記的驢抗鼠和AlexaFluor488標記的驢抗兔二抗30min。洗去未結(jié)合抗體，用DAPI染色以標記細胞核位置，之后用激光共聚焦顯微鏡觀察抗體的細胞內(nèi)吞情況。如圖19所示，TF-mAb-SC1可以被細胞內(nèi)吞至溶酶體。實施例13TF-mAb-Ch的生物活性測定：實驗方法參照實施例1，步驟④。結(jié)果如圖20所示，TF-mAb-Ch對TF胞外區(qū)蛋白有很強的親和性，EC50約為0.011nM。實施例14TF-mAb-Ch對TF-陽性腫瘤細胞的結(jié)合親和力(Cellbindingaffinity)的測定參照實施例3中的實驗方法。結(jié)果表明，TF-mAb-Ch對MDA-MB-231細胞有較好的結(jié)合親和力，EC50為2.3nM(圖21)。實施例15TF-mAb-Ch對胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的影響實驗方法參照實施例4。結(jié)果如圖22所示，TF-mAb-Ch濃度依賴性的抑制FVIIa誘導的MAPK/ERK的磷酸化水平。實施例16TF-mAb-Ch可以迅速高效的被細胞內(nèi)吞(Internalization)至溶酶體實驗方法參照實施例12。結(jié)果如圖23所示，TF-mAb-Ch可以被細胞內(nèi)吞至溶酶體。上述實驗提示，由于本發(fā)明TF-mAb抗體易于被內(nèi)吞，因此適合被開發(fā)成抗體偶聯(lián)藥物(Antibody–drugconjugate，ADC)并應用于TF高表達的相關(guān)腫瘤的治療。實施例17TF-mAb-SC1的人源化及活性測定參照TF-mAb-SC1的抗體重鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:7)和輕鏈可變區(qū)序列(SEQIDNO:8)，在Germline數(shù)據(jù)庫中選取與其非CDR區(qū)匹配最好的人源化模板。然后將鼠源抗體TF-mAb-SC1的CDR區(qū)移植到所選擇的人源化模板上，替換人源模板的CDR區(qū)，再與IgG1恒定區(qū)重組，同時以鼠源抗體的三維結(jié)構(gòu)為基礎，對包埋殘基、與CDR區(qū)有直接相互作用的殘基，以及對VL和VH的構(gòu)象有重要影響的殘基進行回復突變，得到5個人源化重鏈的可變區(qū)(SEQIDNO:9，SEQIDNO:10，SEQIDNO:11，SEQIDNO:12，SEQIDNO:13)及4個人源化輕鏈的可變區(qū)(SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:17)。表B基于所述改造的VH和VL，分別組合表達這些人源化的重鏈及輕鏈，最終共得到的20個人源化抗體，即TF-mAb-H29至TF-mAb-H48。各抗體相應的重鏈和輕鏈組合如下表所示：表C序列編號SEQIDNO:9SEQIDNO:10SEQIDNO:11SEQIDNO:12SEQIDNO:13SEQIDNO:14TF-mAb-H29TF-mAb-H30TF-mAb-H31TF-mAb-H32TF-mAb-H33SEQIDNO:15TF-mAb-H34TF-mAb-H35TF-mAb-H36TF-mAb-H37TF-mAb-H38SEQIDNO:16TF-mAb-H39TF-mAb-H40TF-mAb-H41TF-mAb-H42TF-mAb-H43SEQIDNO:17TF-mAb-H44TF-mAb-H45TF-mAb-H46TF-mAb-H47TF-mAb-H48首先通過ELISA結(jié)合實驗測定這20個人源化抗體對TF胞外區(qū)蛋白的親和活性(實驗方法參照實施例1，步驟④)，結(jié)果如表1所示。表1人源化抗體對TF胞外區(qū)蛋白的結(jié)合親和力通過流式細胞儀測定這20個人源化抗體分別在10μg/mL和1μg/mL濃度下，對MDA-MB-231細胞的結(jié)合親和力，實驗方法參照實施例3，結(jié)果如表2所示。表2人源化抗體對MDA-MB-231的結(jié)合親和力；還測定了9個人源化抗體對胞內(nèi)信號通路TF-PAR2的影響，實驗方法參照實施例4。實驗結(jié)果如圖24所示，各人源化抗體不同程度的抑制FVIIa誘導的MAPK/ERK的磷酸化水平，并呈濃度依賴性。此外，還測定6個人源化抗體在10mg/kg劑量下對HCC1806皮下移植瘤的生長抑制作用，實驗方法參照實施例7。實驗結(jié)果如圖25所示，所有人源化抗體均表現(xiàn)出顯著抑制腫瘤生長活性，其中TF-mAb-35、TF-mAb-39、TF-mAb-40、TF-mAb-44和TF-mAb-45表現(xiàn)出優(yōu)異的抑制腫瘤生長活性。實施例18，TF在三陰性乳腺中高度異常激活首先針對多種不同組織來源的腫瘤細胞株，制備細胞總蛋白，精確定量后，通過Westernblot檢測TF蛋白的表達水平。結(jié)果顯示，TF蛋白在一些高侵襲、高轉(zhuǎn)移的三陰性乳腺癌(如圖26)細胞株呈高度異常激活表達，而在相對惡性程度較低的非三陰性乳腺癌細胞株中僅少數(shù)高表達。然后，對CancerCellLineEncyclopedia(CCLE)數(shù)據(jù)庫中乳腺癌細胞株的TFmRNA表達水平進行分析。結(jié)果表明，高侵襲、高轉(zhuǎn)移的Basal-type乳腺癌(尤其是三陰性乳腺癌)細胞株群中TFmRNA的表達水平普遍高于Luminal-type乳腺癌細胞株群且具有統(tǒng)計學意義(圖27)。因此，本發(fā)明以TF為靶點的抗體，在診斷、預防和治療三陰性乳腺癌的應用中具有更為顯著的效果。實施例19TF在胰腺癌中高度異常激活首先針對多種不同組織來源的腫瘤細胞株，制備細胞總蛋白，精確定量后，通過Westernblot檢測TF蛋白的表達水平。結(jié)果顯示，TF蛋白在高侵襲、高轉(zhuǎn)移的胰腺癌(如圖28)細胞株普遍呈高度異常激活表達。然后，對CCLE數(shù)據(jù)庫中胰腺癌細胞株的TFmRNA表達水平進行分析，結(jié)果表明，TFmRNA在胰腺癌細胞株中普遍呈較高水平的表達(圖29)。因此，本發(fā)明以TF為靶點的抗體，在診斷、預防和治療胰腺癌的應用中具有更為顯著的效果。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3