本發(fā)明屬于磷脂技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種磷脂酰乙醇胺的制備方法。

背景技術(shù)：

磷脂酰乙醇胺（PE）是一類重要的磷脂類化合物，亦稱腦磷脂，在生物界所存在的磷脂中，其含量僅次于磷脂酰膽堿（PC）, 由于其特殊的生理作用而備受關(guān)注，其早起應(yīng)用于食品工業(yè)領(lǐng)域，隨著研究的不斷深入，其功能及應(yīng)用范圍也隨之不斷擴(kuò)大，尤其是高純度的磷脂酰乙醇胺更是逐漸被應(yīng)用于藥物制劑領(lǐng)域，可用作藥物制劑的乳化劑和脂質(zhì)體制備的輔料，還可用于調(diào)節(jié)線粒體功能紊亂，治療抑郁癥和焦躁癥等功能?，F(xiàn)有報(bào)道的關(guān)于磷脂酰乙醇胺有動(dòng)植物提取結(jié)合柱層析法，化學(xué)合成法以及酶催化法。動(dòng)植物提取法如專利CN201410841454.1 、CN10038618C以及CN201510395419.6所公開的方法得到的天然磷脂酰乙醇胺含量較低，且有機(jī)溶劑用量大，工藝繁瑣，純化所需的填料量大，成本高昂，而人工合成磷脂酰乙醇胺如專利CN201210430649.8 及CN201010137564.1，其工藝在實(shí)際生產(chǎn)中因產(chǎn)率低而難以實(shí)現(xiàn)，且工藝中因使用三氯氧磷，三氯化磷及疊氮化鈉等有毒物質(zhì)而不宜考慮，此外酶法催化法具有條件溫和，工藝簡單易操作以及價(jià)格成本較低等優(yōu)勢，但研究尚不夠深入。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種磷脂酰乙醇胺的制備方法，該制備方法工藝簡潔，成本和能耗較低，安全，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種磷脂酰乙醇胺的制備方法，包括以下步驟：

（1）選取粗卵磷脂，加入乙醇溶液于70~80℃攪拌萃取5~10h后，減壓蒸干溶劑，得萃取濃縮物，在萃取濃縮物中加入水?dāng)嚢枞榛鶆?，得乳化液?/p>

（2）在乳化液中加入酶液，所述酶液為含有鹽酸乙醇胺的磷脂酶D溶液，調(diào)節(jié)pH值為6.5~7.5，混勻后調(diào)節(jié)溫度為30~40℃反應(yīng)20~30h，得反應(yīng)液；

（3）在反應(yīng)液中加入有機(jī)溶劑萃取分層，選取有機(jī)相用水洗滌后，真空濃縮有機(jī)相，得濃縮物，在濃縮物中加入無水乙醇加熱溶解后降溫重結(jié)晶，分離出無水乙醇不溶物，干燥即得到磷脂酰乙醇胺。

在上述磷脂酰乙醇胺的制備方法中：

步驟（1）中所述的粗卵磷脂優(yōu)選來源于大豆或者葵花籽。

步驟（1）中所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量優(yōu)選為90~100%，當(dāng)乙醇的體積百分含量為100%時(shí)，為無水乙醇，其與粗卵磷脂的體積比為1：4~8mL。

步驟（1）中所述水為純凈水，其與萃取濃縮物的用量關(guān)系優(yōu)選為1g：4~7.5 mL。

步驟（2）中酶液與步驟（1）中水的用量關(guān)系優(yōu)選為：1:1~2。

步驟（2）中所述酶液中鹽酸乙醇胺的用量優(yōu)選為粗卵磷脂總質(zhì)量的1~3倍，所述磷脂酶D溶液中磷脂酶D的酶活優(yōu)選為5-6U/mL。

步驟（3）中所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選為二氯甲烷或環(huán)己烷，其與反應(yīng)液的體積比優(yōu)選為1~3：1。

步驟（3）中濃縮物與無水乙醇的用量關(guān)系優(yōu)選為1g：7~10mL。

步驟（3）中加熱溶解溫度優(yōu)選為50~60℃，降溫重結(jié)晶時(shí)的溫度優(yōu)選為0~10℃，時(shí)間優(yōu)選為5~8h。

步驟（3）中所述磷脂酰乙醇胺的質(zhì)量百分含量大于60%。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

（1）本發(fā)明所用的原料為粗卵磷脂，因而價(jià)格低廉；

（2）本發(fā)明磷脂酰乙醇胺的制備方法整體工藝簡潔，條件溫和，整體成本較低，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化，制得的磷脂酰乙醇胺含量60%以上，純度較高；

（3）本發(fā)明磷脂酰乙醇胺的制備方法中原料先經(jīng)過簡單的預(yù)先純化，再進(jìn)行后續(xù)酶促反應(yīng)和純化，工藝簡潔，能耗較低，原料無毒，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，對我國磷脂工業(yè)，保健食品以及藥品工業(yè)都將具有重要意義。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

下面將結(jié)合具體的實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限與下列實(shí)施方式。

實(shí)施例 1

將100毫升（120克）粗大豆卵磷脂于400毫升92%（體積百分含量）的乙醇溶液70℃攪拌萃取5小時(shí)，減壓蒸干乙醇萃取液得到60克濃縮物，往60克萃取液濃縮物加入240毫升的純凈水?dāng)嚢枞榛鶆颍S后加入240毫升含磷脂酶D和鹽酸乙醇胺的酶液，其中酶液中鹽酸乙醇胺的質(zhì)量120克，酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調(diào)節(jié)pH為6.5。混合乳化物和酶液，于30℃反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)完畢后往反應(yīng)體系中加入480毫升環(huán)己烷萃取分層，環(huán)己烷層用適量水洗滌，真空濃縮有機(jī)相得環(huán)己烷濃縮物110克，加入無水乙醇770毫升于50℃加熱溶解，隨后體系于0℃保持5小時(shí)，分離出無水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺共12克，含量經(jīng)HPLC法測定為61%。

實(shí)施例 2

將100毫升（110克）粗葵花籽卵磷脂于400毫升體積95%（體積百分含量）乙醇溶液70℃攪拌萃取5小時(shí)，減壓蒸干乙醇萃取液得到65克濃縮物，往65克萃取液濃縮物加入260毫升的純凈水?dāng)嚢枞榛鶆颍S后加入130毫升含磷脂酶D和鹽酸乙醇胺的酶液，其中酶液中鹽酸乙醇胺的質(zhì)量120克， 酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調(diào)節(jié)pH為6.5?；旌先榛锖兔敢?，于30℃反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)完畢后往反應(yīng)體系中加入1040毫升環(huán)己烷萃取分層，環(huán)己烷層用適量水洗滌，真空濃縮有機(jī)相得環(huán)己烷濃縮物100克，加入無水乙醇700毫升于50℃加熱溶解，隨后體系于0℃保持5小時(shí)，分離出無水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺共10克，含量經(jīng)HPLC法測定為62%。

實(shí)施例3

將200毫升（240克）粗大豆卵磷脂于1600毫升90%乙醇溶液80℃攪拌萃取10小時(shí)，減壓蒸干乙醇萃取液得到120克，往萃取液濃縮物加入880毫升純凈水?dāng)嚢枞榛鶆?，隨后加入880毫升含磷脂酶D和鹽酸乙醇胺的酶液，其中酶液中鹽酸乙醇胺的質(zhì)量為原料質(zhì)量的為720克，酶液中磷脂酶D的酶活為6U/mL，調(diào)節(jié)pH為7.5。混合乳化物和酶液，于40℃反應(yīng)30小時(shí)。反應(yīng)完畢后往反應(yīng)體系中加入1760毫升二氯甲烷萃取分層，有機(jī)相用適量水洗滌，真空濃縮有機(jī)相得二氯甲烷濃縮物180克，加入1800毫升無水乙醇于60℃加熱溶解，隨后體系于0℃保持8小時(shí)，分離出無水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺16克，含量經(jīng)HPLC法測定為64%。

實(shí)施例4

將200毫升（220克）粗葵花籽卵磷脂于1600毫升90%乙醇溶液80℃攪拌萃取9小時(shí)，減壓蒸干乙醇萃取液得到125克，往萃取液濃縮物加入800毫升純凈水?dāng)嚢枞榛鶆?，隨后加入800毫升含磷脂酶D和鹽酸乙醇胺的酶液，其中酶液中鹽酸乙醇胺的質(zhì)量為原料質(zhì)量的為600克，酶液中磷脂酶D的酶活為6U/mL，調(diào)節(jié)pH為7.5。混合乳化物和酶液，于40℃反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)完畢后往反應(yīng)體系中加入1600毫升二氯甲烷萃取分層，有機(jī)相用適量水洗滌，真空濃縮有機(jī)相得二氯甲烷濃縮物175克，加入1600毫升無水乙醇于55℃加熱溶解，隨后體系于5℃保持7小時(shí)，分離出無水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺15克，含量經(jīng)HPLC法測定為63%。

實(shí)施例5

將100毫升（120克）粗大豆卵磷脂于600毫升體積100%乙醇溶液75℃攪拌萃取8小時(shí)，減壓蒸干乙醇溶液萃取液得到60克濃縮物，往60克萃取液濃縮物加入240毫升的純凈水?dāng)嚢枞榛鶆?，隨后加入240毫升含磷脂酶D和鹽酸乙醇胺的酶液，其中酶液中鹽酸乙醇胺的質(zhì)量120克， 酶液中磷脂酶D的酶活為5.5U/mL，調(diào)節(jié)pH為7.0?；旌先榛锖兔敢海?5℃反應(yīng)25小時(shí)。反應(yīng)完畢后往反應(yīng)體系中加入960毫升環(huán)己烷萃取分層，環(huán)己烷層用適量水洗滌，真空濃縮有機(jī)相得環(huán)己烷濃縮物100克，加入無水乙醇800毫升于55℃加熱溶解，隨后體系于10℃保持6小時(shí)，分離出無水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺共10克，含量經(jīng)HPLC法測定為65%。

上面列舉一部分具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，有必要在此指出的是上下具體實(shí)施例只用于對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，不代表對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。其他人根據(jù)本發(fā)明作出的一些非本質(zhì)的修改和調(diào)整仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。