技術(shù)特征：

1.一種解淀粉芽孢桿菌亞硝酸鹽還原酶基因，其特征在于具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，并表達(dá)SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重組蛋白。

2.一種解淀粉芽孢桿菌亞硝酸鹽還原酶，其特征在于權(quán)利要求1所述基因編碼的蛋白質(zhì)。

3.含有權(quán)利要求1所述基因的基因工程菌。

4.含有權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌亞硝酸鹽還原酶基因的重組質(zhì)粒。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，優(yōu)選重組大腸桿菌E.coli BL21(DE3)為宿主進(jìn)行表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，該重組質(zhì)粒中含組氨酸標(biāo)簽。

7.權(quán)利要求5所述重組大腸桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，選取大腸桿菌冷誘導(dǎo)表達(dá)pColdⅡ,構(gòu)建重組表達(dá)載體，以大腸桿E.coli BL21(DE3)為宿主進(jìn)行表達(dá)。

8.權(quán)利要求5所述大腸桿菌生產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)以解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens H47亞硝酸鹽還原酶基因為模板，進(jìn)行上下引物的設(shè)計，設(shè)計的酶切位點(diǎn)為NdeI，BamH I；

(2)提取解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens H47的DNA，并以此為模板，通過PCR技術(shù)擴(kuò)增解淀粉芽孢桿菌H47亞硝酸鹽還原酶的基因片段；所述解淀粉芽孢桿菌H47的保藏編號為CCTCC M 2013283，保藏日期2013年6月24日。

(3)利用NdeI、BamHI工具酶將擴(kuò)增片段和質(zhì)粒pColdⅡ于37℃下分別進(jìn)行雙酶切，采用回收試劑盒回收雙酶切后的兩個片段，并用T4DNA連接酶連接，再轉(zhuǎn)入重組大腸桿菌中，利用抗生素氨芐青霉素進(jìn)行篩選獲得陽性克隆菌；

(4)利用IPTG對重組菌產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶酶進(jìn)行冷誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)表達(dá)后，超聲破碎菌體，利用Ni⁺柱親和層析法純化得到可溶性亞硝酸鹽還原酶，咪唑洗脫濃度為500mM；所述誘導(dǎo)條件為將含重組表達(dá)質(zhì)粒pColdⅡ-NiRBD的大腸桿菌BL21(DE3)在37℃、200rpm條件下培養(yǎng)至OD₆₀₀＝0.4，隨后轉(zhuǎn)入15℃培養(yǎng)至加入終濃度為0.5mM的IPTG，誘導(dǎo)表達(dá)24h，轉(zhuǎn)速200rpm；培養(yǎng)基成分為：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L，NaNO₂ 0.15g/L，pH 7.2。

9.權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述上有引物為5’-

GCCGCATATGATGGGAAAAAAACAGCTAGTC-3’，下游引物為5’-

GCCGGGATCCTCAATACAGGATGTATACATTCTC-3’。

10.權(quán)利要求8中所制備的亞硝酸鹽還原酶活性測定時，其特征在于需加入電子供體甲基紫精。