本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物及其合成方法。
背景技術(shù)：
硫化氫是相繼于CO和NO之后的一個新的生物活性氣體分子，是支持生命的重要角色，在生命活動中具有不可替代的生理調(diào)節(jié)作用，控制多種細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)過程并發(fā)揮積極的調(diào)節(jié)作用。目前關(guān)于硫化氫的潛在治療性應(yīng)用主要集中在神經(jīng)、心血管系統(tǒng)，如治療高血壓、治療心臟缺血性疾病，治療動脈粥樣硬化，與非甾體類抗炎藥聯(lián)用，用于降低代謝、防止低氧性損傷等。
硫化氫供體在生理條件下可以水解自發(fā)放出H2S或在半胱氨酸(GSH)作用下釋放H2S，GSH可以接受硫化物的S硫原子形成GSSH，然后通過3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶(3-MST)催化產(chǎn)生H2S。H2S的生物學(xué)效應(yīng)及信號通路機制的研究揭示了其作為信號分子涉及在心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等許多器官的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，對機體內(nèi)多個生理過程都有影響。
天然產(chǎn)物熊果酸在天然植物中較廣泛的存在，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、護肝、抗腫瘤等活性。Kim等研究了熊果酸對多種腫瘤細胞系的抑制增殖活性(Kim YK,Yoon SK,Ryu SY.Cytotoxic triterpenes from stem bark of Physocarpus intermedius.Planta Medica,2000,66,485.)，結(jié)果表明，熊果酸對所測試的腫瘤細胞有明顯的細胞毒作用,其對黑色素瘤B16-F0、卵巢癌SK–OV-3、結(jié)腸癌HCT-1 5、腦瘤XF498、非小細胞肺癌A549和黑色素瘤SK-MEL-2的ED50(μg/ml)分別為4.6、3.6、4.4、4.9、4.3和4.6。吳其年等探討了熊果酸對人乳腺癌細胞(MCF-7)增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用，以及凋亡發(fā)生與細胞內(nèi)Ca2+濃度變化的關(guān)系(Silva,M.,David,J.P.,Silva,L.C.R.C.,Santos,R.A.F.,David,J.M.,Lima,L.S.,Reis,P.S.,Fontana,R..Bioactive oleanane,lupane and ursane triterpene acid derivatives.Molecules,2012,17,12197-12205.)。結(jié)果顯示，熊果酸對MCF-7細胞的增殖具有抑制作用，且呈劑量依賴性，其IC50為36.18μM。此外，在20μM和30μM濃度下，熊果酸使細胞凋亡率顯著升高，并且，熊果酸處理組的Ca2+濃度明顯高于對照組，顯示其誘導(dǎo)凋亡作用可能依賴于細胞內(nèi)Ca2+水平的上調(diào)。
目前尚未見有將熊果酸與硫化氫供體試劑經(jīng)烷烴鏈連接的衍生物及其合成方法的相關(guān)報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一類結(jié)構(gòu)新穎的熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物及其合成方法。
本發(fā)明涉及具有下述通式(I)所示結(jié)構(gòu)的熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中，
n為2～8；
R為
本發(fā)明所述熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物的合成方法為：取熊果酸、α,ω-二溴烷烴和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，得到化合物1；取化合物1、硫化氫供體試劑和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，得到目標物粗品；其中，反應(yīng)在加熱或不加熱的條件下進行。
更為具體的合成方法，包括以下步驟：
1)取熊果酸、α,ω-二溴烷烴和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，所得反應(yīng)物除去溶劑，殘余物分散于乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚中，經(jīng)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾后，收集濾液，濾液濃縮后得到化合物1；
2)取化合物1、硫化氫供體試劑和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，所得反應(yīng)物除去溶劑，殘余物分散于乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚中，經(jīng)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾后，收集濾液，濾液濃縮后得到目標物粗品。
上述具體的合成方法的步驟1)和步驟2)中，所述的洗滌優(yōu)選是依次用鹽酸、水、飽和食鹽水進行洗滌，或者是依次用鹽酸、飽和食鹽水進行洗滌。
本發(fā)明所述合成方法中合成得到的化合物1的結(jié)構(gòu)式如下所示：
其中，n為2～8。
上述方法中合成得到的化合物1為化合物1的粗品，為了提高化合物1的純度同時減少后續(xù)反應(yīng)中產(chǎn)生更多的副產(chǎn)物，優(yōu)選是將所得化合物1的粗品經(jīng)硅膠薄層色譜或硅膠柱層析純化后再用于后續(xù)操作。在將其進行硅膠薄層色譜或上硅膠柱層析時，通常用由體積比為2～10：1的石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA)組成的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓蒸除溶劑，得到純化后的目標物。所述組成洗脫劑的石油醚和乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為2～5：1。
由上述方法制得的是式(I)化合物的粗品，可采用現(xiàn)有常規(guī)的純化方法對其進行純化以提高式(I)化合物的純度。通常采用硅膠薄層色譜或硅膠柱層析來進行純化，在將制得的目標化合物粗品硅膠薄層色譜或上硅膠柱層析時，通常用由體積比為2～10：1的石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA)組成的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓蒸除溶劑，得到純化后的目標物。所述組成洗脫劑的石油醚和乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為2～5：1。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的α,ω-二溴烷烴可以是1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1,7-二溴庚烷或1,8-二溴辛烷。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的堿可以是碳酸鉀、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀或碳酸銫。當(dāng)堿的選擇為碳酸銫時，可以獲得更高的產(chǎn)率；從成本及產(chǎn)率綜合考慮，優(yōu)選堿為碳酸鉀。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的非質(zhì)子極性溶劑可以是N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、甲苯和吡啶中的一種或兩種以上的組合，當(dāng)非質(zhì)子極性溶劑的選擇是上述兩種以上的組合時，它們之間的配比可以為任意配比。所述非質(zhì)子極性溶劑的用量通常為能夠溶解參加反應(yīng)的原料即可。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的硫化氫供體試劑具體可以是5-對羥基苯基-1,2-二硫雜環(huán)戊烯-3-硫酮(ADT-OH)、(R)-硫辛酸(R-lipoic acid)或4-羥基硫代苯甲酰胺(TBZ)，它們的結(jié)構(gòu)式分別如下所示：
本發(fā)明所述的合成方法中，所述熊果酸、α,ω-二溴烷烴和堿的反應(yīng)優(yōu)選是在低于或等于40℃的條件下進行，申請人在實驗中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)反應(yīng)在20～40℃條件下進行時，可以在較短的時間內(nèi)獲得較高的產(chǎn)率，同時副反應(yīng)較少；所述化合物1、硫化氫供體試劑和堿的反應(yīng)在低于或等于65℃的條件下進行，更優(yōu)選是在35～65℃條件下進行，這樣可以在較短的時間內(nèi)獲得較高的產(chǎn)率，并盡量減少副產(chǎn)物的生成。在上述限定溫度條件下，反應(yīng)是否完全可以通過薄層層析跟蹤檢測。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述熊果酸、α,ω-二溴烷烴和堿的物質(zhì)的量之比為：1：1～5：0.5～3；所述化合物1、硫化氫供體試劑和堿的物質(zhì)的量之比為：1：1～3：1～5。
申請人發(fā)現(xiàn)，在化合物1、硫化氫供體試劑和堿的反應(yīng)中，加入催化劑碘化鉀(KI)可以進一步提高目標物的產(chǎn)率。所述碘化鉀的加入量為化合物1物質(zhì)的量的0.1～1倍。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一系列結(jié)構(gòu)新穎的熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物及其合成方法，同時，申請人還考察了這些衍生物對肝癌腫瘤細胞株及慢性骨髓性白血病細胞的抑制活性，結(jié)果表明，其中個別化合物對慢性骨髓性白血病細胞K562具有一定的抑制活性。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳述,以更好地理解本發(fā)明的內(nèi)容,但本發(fā)明并不限于以下實施例。
本發(fā)明所述的具有下述通式(I)所示結(jié)構(gòu)的熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物按下述合成路線進行合成：
其中：
α,ω-二溴烷烴可以是1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1,7-二溴庚烷或1,8-二溴辛烷；
非質(zhì)子極性溶劑可以是N,N-二甲基甲酰胺、甲苯或吡啶；
堿可以是碳酸鉀、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀或碳酸銫；
硫化氫供體試劑具體可以是5-對羥基苯基-1,2-二硫雜環(huán)戊烯-3-硫酮(ADT-OH)、(R)-硫辛酸(R-lipoic acid)或4-羥基硫代苯甲酰胺(TBZ)，它們的結(jié)構(gòu)式分別如下所示：
化合物1和化合物2中的n為2～8；
化合物2中的R為
實施例1：化合物1a的合成
將熊果酸(1.0g,2.19mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,6-二溴己烷(2.67mL,10.95mmol)、K2CO3(302.78mg,2.19mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50mL)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物1a(1.207g,89％,白色固體)。
Yield:1.207g,89％,white solid；Rf＝0.629(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 102-104℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.22(s,1H,12-H),3.98(m,2H,OCH2),3.40(m,2H,CH2-Br),3.20(dd,J＝11.0,4.9Hz,1H,3-H),2.20(s,1H,18-H),2.02-072(m,35H),1.07,0.98,0.94,0.91,0.85,0.77 and 0.74(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):177.7,138.3,125.6,79.2,64.1,55.3,53.0,48.2,47.7,42.2,39.7,39.2,39.0,38.9,38.8,37.1,36.9,33.8,33.2,32.8,30.8,28.6,28.3,28.1,27.9,27.3,25.4,24.4,23.7,23.4,21.3,18.5,17.2,15.6.HRMS(ESI)m/z:[M+Na]+calcd for C36H59BrO3Na 641.3545；found 641.3553.
實施例2：化合物1b的合成
將熊果酸(1.0g,2.19mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,8-二溴辛烷(1.84mL,10.95mmol)、K2CO3(302.78mg,2.19mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50mL)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝4:1)，得化合物1b(1.162g,82％,白色固體)。
Yield:1.162g,82％,white solid；Rf＝0.500(Petroluem ether:EtOAc＝4:1).M.p 90-92℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.22(s,1H,12-H),3.97(m,2H,OCH2),3.39(m,2H,CH2-Br),3.20(dd,J＝10.9,4.7Hz,1H,3-H),2.21(d,J＝11.4Hz,1H,18-H),2.02-0.69(m,35H),1.07,0.98,0.93,0.91,0.85,0.77 and 0.74(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):177.7,138.3125.6,79.1,64.3,55.3,53.0,48.2,47.7,42.2,39.7,39.2,39.0,38.9,38.8,37.1,36.9,34.0,33.2,32.9,30.8,29.2,28.8,28.7,28.3,28.2,28.1,27.3,26.1,24.4,23.7,23.4,21.3,18.5,17.3,17.2,15.8,15.6.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C38H64BrO3 647.4039；found 647.4047.
實施例3：化合物2a的合成
將化合物1a(500mg,0.81mmol)溶于DMF(5mL)，加入ADT-OH(182.60mg,0.81mmol)、K2CO3(335.83mg,2.43mmol)、KI(13.28mg,0.08mmol)，65℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2a(226mg,37％,橙色固體)。
Yield:226mg,37％,orange solid；Rf＝0.579(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 83-85℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.60(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),7.39(s,1H),6.96(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),5.23(s,1H,12-H),4.02(m,4H,2×OCH2),3.21(dd,J＝11.1,4.4Hz,1H,3-H),2.22(d,J＝11.3Hz,1H,18-H),2.12-0.65(m,31H),1.08,0.98,0.94,0.90 and 0.85(5s,each 3H,5×CH3),0.76(d,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):215.1,177.7,173.2,162.6,138.3,134.6,128.7,125.6,124.1,115.5,79.0,68.3,64.1,55.3,53.0,48.2,47.6,42.2,39.6,39.2,39.0,38.8,38.7,37.0,36.8,33.2,30.8,29.1,28.6,28.2,28.1,27.3,25.9,25.7,24.3,23.6,23.4,21.3,18.4,17.2,17.1,15.7,15.5.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C45H65O4S3，765.4045；found 765.4009.
實施例4：化合物2b的合成
將化合物1b(500mg,0.77mmol)溶于DMF(5mL)，加入ADT-OH(174.97mg,0.77mmol)、K2CO3(319.24mg,2.31mmol)、KI(13.28mg,0.08mmol)，65℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2b(98mg,16％,橙色固體)。
Yield:98mg,16％,orange solid；Rf＝0.469(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 64-66℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.59(d,J＝8.7Hz,2H,Ar-H),7.38(s,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),5.22(s,1H,12-H),4.06-3.89(m,4H,2×OCH2),3.20(dd,J＝11.1,4.6Hz,1H,3-H),2.21(d,J＝11.3Hz,1H,18-H),2.11-0.66(m,35H),1.06,0.96,0.93,0.89,0.85,0.75 and 0.74(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):215.1,177.7,173.2,162.7,138.3,134.6,128.7,125.6,124.0,115.5,79.1,68.5,64.3,55.3,53.0,48.2,47.6,42.2,39.7,39.2,39.0,38.8,38.7,37.1,36.8,33.2,30.8,29.4,29.2,29.1,28.6,28.2,28.1,27.3,26.1,26.0,24.3,23.6,23.4,21.3,18.4,17.2,17.1,15.7,15.6.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C47H69O4S3,793.4358；found 793.4322.
實施例5：化合物2c的合成
將化合物1a(500mg,0.81mmol)溶于DMF，加入(R)-lipoic acid(182.60mg,0.81mmol)、K2CO3(335.85mg,2.43mmol)，50℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2c(567mg,94％,淡黃色固體)。
Yield:567mg,94％,yellow solid；Rf＝0.475(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 62-64℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):5.21(s,1H,12-H),4.10-3.91(m,4H,2×OCH2),3.55(dd,J＝8.0,6.5Hz,1H,3-H),3.23-3.04(m,3H),2.44(td,J＝12.3,6.1Hz,1H),2.29(t,J＝7.4Hz,2H),2.21(dd,J＝26.0,9.4Hz,1H,18-H),2.05-0.63(m,38H),1.06,0.97,0.84,0.76 and 0.73(5s,each 3H,CH3),0.95-0.89(m,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):177.6,173.6,138.3,125.6,79.0,64.3,64.1,56.4,55.3,52.9,48.1,47.6,42.1,40.3,39.6,39.1,38.9,38.8,38.7,38.5,37.0,36.8,34.6,34.1,33.1,30.7,28.8,28.6,28.5,28.2,28.0,27.3,25.8,25.7,24.7,24.3,23.6,23.3,21.2,18.4,17.2,17.1,15.7,15.5.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C44H73O5S2,745.4899；found 745.4876.
實施例6：化合物2d的合成
將化合物1b(500mg,0.77mmol)溶于DMF，加入(R)-lipoic acid(158.87mg,0.77mmol)、K2CO3(319.27mg,2.31mmol)，50℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2d(222mg,37％,淡黃色固體)。
Yield:222mg,37％,yellow solid；Rf＝0.583(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 49-51℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):5.23(s,1H,12-H),4.09-3.90(m,4H,2×OCH2),3.56(dd,J＝8.1,6.4Hz,1H,3-H),3.26-3.06(m,3H),2.46(dd,J＝12.4,6.0Hz,1H),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),2.23(d,J＝11.3Hz,1H,18-H),2.05-0.64(m,42H),1.08,0.99,0.94,0.91,0.85,0.78 and 0.75(7s,each 3H,7×CH3).13C N MR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):177.6,173.5,138.2,125.5,78.9,64.4,64.2,56.3,55.2,52.9,48.0,47.5,42.0,40.2,39.6,39.1,38.9,38.7,38.6,38.5,37.0,36.7,34.6,34.1,33.1,30.7,29.1,28.8,28.6,28.2,28.0,27.2,26.0,25.9,24.7,24.2,23.5,23.3,21.2,18.3,17.1,17.0,15.7,15.5.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C46H77O5S2,773.5212；found 773.5183.
實施例7：化合物2e的合成
將化合物1a(250mg,0.40mmol)溶于DMF(5mL)，加入TBZ(61.2mg,0.40mmol)、K2CO3(56mg,0.40mmol)，35℃反應(yīng)12h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2e(102mg,37％,淺黃色固體)。
Yield:102mg,37％,yellow solid；Rf＝0.224(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 79-81℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.87(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),7.49(s,1H,NH),6.83(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),5.20(s,1H,12-H),3.97(m,4H,2×OCH2),3.18(dd,J＝11.4,4.3Hz,1H,3-H),2.19(d,J＝11.2Hz,1H,18-H),2.04-0.64(m,30H),1.04,0.95,0.91,0.86,0.83,0.73 and 0.72(7s,each 3H,CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):201.2,177.8,162.5,138.3,131.1,129.3,125.6,114.0,79.1,68.2,64.2,60.5,55.2,52.9,48.1,47.6,42.1,39.6,39.1,38.9,38.8,38.7,37.0,36.8,33.1,30.7,29.3,28.5,28.2,28.0,27.2,25.9,25.7,24.3,23.6,23.3,21.2,18.4,17.2,17.1,15.8,15.5,14.2.HRMS(ESI)m/z:[M+Na]+calcd for C43H64NO4S,690.4556；found 690.4571.
實施例8：化合物2f的合成
將化合物1b(250mg,0.38mmol)溶于DMF，加入TBZ(58.14mg,0.38mmol)、K2CO3(52mg,0.38mmol)，35℃反應(yīng)12h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得到化合物2f(69mg,24％,淺黃色固體)。
Yield:69mg,24％,yellow solid；Rf＝0.167(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 83-85℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.88(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),7.81(s,1H,NH),7.45(s,1H,NH),6.86-6.82(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),5.21(t,J＝3.4Hz,1H,12-H),4.10-3.82(m,4H,2×OCH2),3.20-3.03(m,1H,3-H),2.20(d,J＝11.2Hz,1H,18-H),2.04-0.65(m,34H),1.05,0.96,0.92,0.87,0.84,0.74 and 0.72(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):201.2,177.7,162.4,138.2,131.0,129.1,125.4,113.9,79.0,68.2,64.1,55.1,52.8,48.0,47.5,42.0,39.5,39.0,38.8,38.7,38.6,36.9,36.7,33.0,30.6,29.2,29.1,29.0,28.5,28.1,27.9,27.1,25.9,25.8,24.2,23.5,23.2,21.1,18.3,17.1,17.0,15.6,15.4.HRMS(ESI)m/z:[M+Na]+calcd for C45H68NO4S,718.4869；found 718.4881.
實施例9：化合物2a的合成
重復(fù)實施例3，不同的是：用甲苯替代DMF，用碳酸銫替代K2CO3，且不加入催化劑KI。
所得產(chǎn)物(189mg,31％,橙色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2a，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實施例10：化合物2b的合成
重復(fù)實施例4，不同的是：用吡啶替代DMF，用碳酸氫鉀替代K2CO3。
所得產(chǎn)物(49mg,8％,橙色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2b，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實施例11：化合物2c的合成
重復(fù)實施例5，不同的是：用吡啶和甲苯的組合物(由甲吡啶和甲苯按1：5的體積比組成)替代DMF，用三乙胺替代K2CO3，且將殘余物分散于乙醚中。
所得產(chǎn)物(512mg,85％,淡黃色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2c，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實施例12：化合物2e的合成
重復(fù)實施例7，不同的是：用甲苯和DMF的組合物(由甲苯和DMF按1：1的體積比組成)替代DMF，用碳酸鈉替代K2CO3，且將殘余物分散于二氯甲烷中。
所得產(chǎn)物(80mg,29％,淺黃色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2e，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
申請人對本發(fā)明所述化合物2a～2f對人肝癌腫瘤細胞株及慢性骨髓性白血病細胞的增殖抑制活性進行了實驗：
1、細胞株與細胞培養(yǎng)
本實驗選用人肝癌細胞BEL-7402、慢性骨髓性白血病細胞K562以及人正常肝細胞L-O2等3種人類細胞株。
所有細胞株均培養(yǎng)在含10wt％小牛血、100U/mL青霉素、100U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃含體積濃度5％CO2孵箱中培養(yǎng)。
2、待測化合物的配制
所用的受試藥物的純度≥95％，將其DMSO儲液用生理緩沖液稀釋后配制成200μmol/L的終溶液，其中助溶劑DMSO的終濃度≤1％，測試該濃度下化合物對各種腫瘤細胞生長的抑制程度。
3、細胞生長抑制實驗(MTT法)
(1)取對數(shù)生長期的腫瘤細胞，經(jīng)胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培養(yǎng)液配制成濃度為5000個/mL的細胞懸液，以每孔190μL接種于96孔培養(yǎng)板中，使待測細胞密度至1000～10000孔(邊緣孔用無菌PBS填充)；
(2)5％CO2，37℃孵育24h，至細胞單層鋪滿孔底，每孔加入一定濃度梯度的藥物10μL，每個濃度梯度設(shè)4個復(fù)孔；
(3)5％CO2，37℃孵育48小時，倒置顯微鏡下觀察；
(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL PBS，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h；
(5)終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓚沉淀，振蕩器混勻后，在酶標儀用波長為570nm，參比波長為450nm測定各孔的光密度值；
(6)同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、DMSO)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、DMSO)。
(7)根據(jù)測得的光密度值(OD值)，來判斷活細胞數(shù)量，OD值越大，細胞活性越強。利用公式：
計算化合物對各細胞株生長的抑制率，其結(jié)果如以下表1所示。
表1：各化合物對不同細胞株的IC50值(μM)
注：實驗數(shù)據(jù)為3次實驗的平均值，Nd表示受試化合物對此細胞檢測不到抑制活性。