本發(fā)明涉及Cd²⁺探針分子及其合成與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

Cd²⁺是一種非常有毒的金屬離子，是環(huán)境的主要金屬污染物，對農(nóng)作物及人體都有毒害作用。對作物來說，輕者使其體內(nèi)的代謝過程發(fā)生紊亂，使作物生長受到抑制，重則導(dǎo)致作物死亡；對人來說，長期接觸Cd²⁺會(huì)導(dǎo)致腎功能損害、心血管疾病、鈣代謝紊亂、嗜酸性粒細(xì)胞增多癥和某些癌癥等疾病。由于Cd²⁺廣泛應(yīng)用于電池中，空氣、水、土壤中Cd²⁺的污染較為嚴(yán)重，因此用于識(shí)別和檢測環(huán)境樣品以及活細(xì)胞內(nèi)Cd²⁺含量的探針就顯得尤其重要。

然而，正如在《化學(xué)評論》(Chem.Rev.)的2014年第114卷4564-4601頁中所提到的，目前已報(bào)道的Cd²⁺分子探針在檢測Cd²⁺時(shí)易受到結(jié)合性能相近的Zn²⁺的干擾，抗Zn²⁺干擾性較差。而由于Zn²⁺在人體內(nèi)普遍存在，這給人體內(nèi)Cd²⁺的檢測帶來諸多不便。為此，開發(fā)不受Zn²⁺干擾的Cd²⁺熒光探針仍然是目前研究的重點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的檢測Cd²⁺的分子探針易受Zn²⁺干擾、抗Zn²⁺干擾性較差的技術(shù)問題，從而提供一種氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子及其合成方法與應(yīng)用。

本發(fā)明的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子，其結(jié)構(gòu)式為：

其中，所述的R為C1～C4直鏈烷基。

上述氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的合成方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、將吡喃并[3,4,5-de]喹啉-2,4,6(1H)-三酮與烷基胺以摩爾比為1:(4.8～5.2)的比例加入至乙醇中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流4～6h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅰ；

二、將步驟一所得中間體Ⅰ與三氯氧磷以摩爾比為1:(9.5～10.5)的比例加入至二氧六環(huán)中，在75～85℃的條件下反應(yīng)2～3h；再用氨水將反應(yīng)液的pH值調(diào)至堿性；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅱ；

三、將步驟二所得中間體Ⅱ與2-氨基芐胺以摩爾比為1:(4.8～5.2)的比例加入至乙二醇甲醚中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流6～8h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅲ；

四、將步驟三所得中間體Ⅲ、吡啶溶于二氯甲烷中，滴加2-氯乙酰氯，其中吡啶的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.4～2.0倍，2-氯乙酰氯的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.1～1.3倍，室溫下反應(yīng)2～3h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅳ；

五、將步驟四所得中間體Ⅳ、二(2-吡啶甲基)胺、N,N-二異丙基乙基胺以摩爾比為1:(4.8～5.2):(6～10)的比例加入至乙腈中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流6～8h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子。

上述的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的應(yīng)用，是用氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子對溶液或細(xì)胞內(nèi)的Cd²⁺進(jìn)行熒光檢測。

本發(fā)明的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子可直接用于在水、甲醇、DMSO、DMF溶劑或它們的混合溶劑中Cd²⁺的熒光增強(qiáng)檢測，也可對生物組織、細(xì)胞微環(huán)境中Cd²⁺進(jìn)行熒光成像檢測，且不受Zn²⁺干擾，具有較高的選擇性和靈敏度。而且在熒光檢測時(shí)，該類探針分子的激發(fā)波長位于可見光區(qū)，避免了紫外光的應(yīng)用。該類探針分子可用于環(huán)境樣品、生物組織以及活細(xì)胞微環(huán)境中Cd²⁺的熒光檢測，具有廣泛的潛在應(yīng)用價(jià)值。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子在加入金屬離子前后的熒光光譜變化圖；

圖2為實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子在加入Cd²⁺和Zn²⁺前后的熒光衰減曲線；

圖3為實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子對不同濃度的Cd²⁺的熒光光譜變化圖；

圖4為實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子對不同濃度的Cd²⁺的熒光強(qiáng)度變化曲線；

圖5為實(shí)施例1中，酵母細(xì)胞放到混合液中培養(yǎng)后的明場照片；

圖6為實(shí)施例1中，酵母細(xì)胞放到混合液中培養(yǎng)后的熒光照片；

圖7為實(shí)施例1中，染色的酵母細(xì)胞放到含Cd²⁺的溶液中培養(yǎng)后的明場照片；

圖8為實(shí)施例1中，染色的酵母細(xì)胞放到含Cd²⁺的溶液中培養(yǎng)后的熒光照片。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子，其結(jié)構(gòu)式為：

其中，所述的R為C1～C4直鏈烷基。

具體實(shí)施方式二：具體實(shí)施方式一所述的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的合成方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、將吡喃并[3,4,5-de]喹啉-2,4,6(1H)-三酮與烷基胺以摩爾比為1:(4.8～5.2)的比例加入至乙醇中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流4～6h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅰ；

二、將步驟一所得中間體Ⅰ與三氯氧磷以摩爾比為1:(9.5～10.5)的比例加入至二氧六環(huán)中，在75～85℃的條件下反應(yīng)2～3h；再用氨水將反應(yīng)液的pH值調(diào)至堿性；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅱ；

三、將步驟二所得中間體Ⅱ與2-氨基芐胺以摩爾比為1:(4.8～5.2)的比例加入至乙二醇甲醚中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流6～8h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅲ；

四、將步驟三所得中間體Ⅲ、吡啶溶于二氯甲烷中，滴加2-氯乙酰氯，其中吡啶的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.4～2.0倍，2-氯乙酰氯的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.1～1.3倍，室溫下反應(yīng)2～3h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅳ；

五、將步驟四所得中間體Ⅳ、二(2-吡啶甲基)胺、N,N-二異丙基乙基胺以摩爾比為1:(4.8～5.2):(6～10)的比例加入至乙腈中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流6～8h；將反應(yīng)液旋干，再經(jīng)過硅膠柱色譜分離，得到氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子。

具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二不同的是：步驟一中吡喃并[3,4,5-de]喹啉-2,4,6(1H)-三酮、烷基胺以摩爾比為1:5。其它與具體實(shí)施方式二相同。

具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二或三不同的是：步驟一中在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流5h。其它與具體實(shí)施方式二或三相同。

具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二至四之一不同的是步驟二中中間體Ⅰ與三氯氧磷以摩爾比為1:10。其它與具體實(shí)施方式二至四之一相同。

具體實(shí)施方式六：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二至五之一不同的是步驟二中將反應(yīng)液的pH值調(diào)至7.5～8.5。其它與具體實(shí)施方式二至五之一相同。

具體實(shí)施方式七：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二至六之一不同的是步驟四中吡啶的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.4倍，2-氯乙酰氯的物質(zhì)的量為中間體Ⅲ的1.2倍。其它與具體實(shí)施方式二至六之一相同。

具體實(shí)施方式八：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二至七之一不同的是步驟五中中間體Ⅳ、二(2-吡啶甲基)胺、N,N-二異丙基乙基胺的摩爾比為1:5:10。其它與具體實(shí)施方式二至七之一相同。

具體實(shí)施方式九：本實(shí)施方式一所述的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的應(yīng)用，是用氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子對溶液或細(xì)胞內(nèi)的Cd²⁺進(jìn)行熒光增強(qiáng)檢測。

用以下的實(shí)施例驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果：

實(shí)施例1：本實(shí)施例的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的合成方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、將吡喃并[3,4,5-de]喹啉-2,4,6(1H)-三酮(450mg,2.09mmol)、正丁胺(764mg,10.45mmol)加入至50mL乙醇中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流6h，停止反應(yīng)；將反應(yīng)液旋干，以二氯甲烷-乙酸乙酯混合液為洗脫液，硅膠柱色譜分離，得中間體Ⅰ，產(chǎn)量328mg，收率為58％，熔點(diǎn)：264.8～265.2℃。將得到的中間體Ⅰ進(jìn)行分析，結(jié)果如下：¹H NMR(CDCl₃,600MHz):δ8.18(d,J＝7.2Hz,1H),7.79(t,J＝8.1Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.70(s,1H),4.14(CH₂CH₂CH₂CH₃,t,J＝7.5Hz,2H),1.69(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),1.44(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),0.99(CH₃,t,J＝7.2Hz,3H)ppm.¹³C NMR(CDCl₃,150MHz):δ163.96,162.85,161.84,137.51,133.86,131.92,125.70,124.88,123.18,120.74,115.27,40.75,30.07,20.33,13.78ppm.HRMS m/z(TOF MS ES⁺):calcd for C₁₅H₁₅N₂O₃⁺(M+H⁺)271.1077,found 271.1076。從分析結(jié)果可知，中間體Ⅰ的結(jié)構(gòu)式為步驟一中利用吡喃并[3,4,5-de]喹啉-2,4,6(1H)-三酮合成了中間體Ⅰ，即

二、將300mg步驟一所得的中間體Ⅰ(1.11mmol)、1.68g三氯氧磷(11.10mmol)加入至30mL二氧六環(huán)中，在80℃下反應(yīng)3h，停止反應(yīng)；用氨水將反應(yīng)液調(diào)至pH值為8；將反應(yīng)液旋干，以二氯甲烷為洗脫液，硅膠柱色譜分離，得中間體Ⅱ，其產(chǎn)量297mg，收率為93％，熔點(diǎn)：136.2～136.4℃。將中間體Ⅱ進(jìn)行分析，結(jié)果如下：¹H NMR(CDCl₃,600MHz):δ8.58(d,J＝7.2Hz,1H),8.36(d,J＝8.4Hz,1H),8.27(s,1H),7.99(t,J＝7.8Hz,1H),4.16(CH₂CH₂CH₂CH₃,t,J＝7.8Hz,2H),1.69(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),1.43(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),0.97(CH₃,t,J＝7.5Hz,3H)ppm.¹³C NMR(CDCl₃,150MHz):δ162.53,161.94,152.54,146.90,133.94,132.27,131.55,131.03,124.20,122.97,121.55,40.65,30.10,20.30,13.78ppm.HRMS m/z(TOF MS ES⁺):calcd for C₁₅H₁₄ClN₂O₂⁺(M+H⁺)289.0738,found 289.0740。從分析結(jié)果可知中間體Ⅱ的結(jié)構(gòu)式為：

三、將280mg步驟二所得中間體Ⅱ(0.97mmol)與592mg 2-氨基芐胺(4.85mmol)加入至30mL乙二醇甲醚中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流8h，停止反應(yīng)；將反應(yīng)液旋干，以二氯甲烷-乙酸乙酯混合液為洗脫液，硅膠柱色譜分離，得中間體Ⅲ，其產(chǎn)量302mg，收率為83％，熔點(diǎn)：204.4～204.8℃。將中間體Ⅲ進(jìn)行分析，結(jié)果如下：¹H NMR(DMSO-d₆,600MHz):δ8.07(NHCH₂,t,J＝5.7Hz,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.90(d,J＝9.0Hz,1H),7.76(t,J＝7.8Hz,1H),7.69(s,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,1H),6.97(t,J＝8.4Hz,1H),6.65(d,J＝9.0Hz,1H),6.52(t,J＝7.8Hz,1H),5.17(NH₂,s,2H),4.54(NHCH₂,d,J＝5.4Hz,2H),3.99(CH₂CH₂CH₂CH₃,t,J＝7.5Hz,2H),1.58(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),1.34(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),0.92(CH₃,t,J＝7.2Hz,3H)ppm.¹³C NMR(DMSO-d₆,150MHz):δ163.57,163.20,157.98,147.22,146.98,130.97,130.75,130.30,129.56,128.30,124.07,122.71,122.53,117.93,116.46,116.32,115.29,41.51,40.52,30.04,20.25,14.18ppm.HRMSm/z(TOF MS ES⁺):calcd for C₂₂H₂₃N₄O₂⁺(M+H⁺)375.1816,found 375.1815。從分析結(jié)果可知，中間體Ⅲ的結(jié)構(gòu)式為：

四、將150mg步驟三所得中間體Ⅲ(0.40mmol)、44mg吡啶(0.56mmol)溶于10mL二氯甲烷中，滴加54mg 2-氯乙酰氯(0.48mmol)，室溫下反應(yīng)2h，停止反應(yīng)；將反應(yīng)液旋干，以二氯甲烷-乙酸乙酯混合液為洗脫液，硅膠柱色譜分離，得到中間體Ⅳ；其產(chǎn)量為110mg，收率為61％，熔點(diǎn)為213.6-214.1℃。將中間體Ⅳ進(jìn)行分析，結(jié)果如下：¹H NMR(DMSO-d₆,600MHz):δ9.96(CONH,s,1H),8.20(NHCH₂,t,J＝5.1Hz,1H),8.01(d,J＝7.2Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.40(d,J＝7.2Hz,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),4.68(NHCH₂,d,J＝5.4Hz,2H),3.35(COCH₂,s,2H),3.99(CH₂CH₂CH₂CH₃,t,J＝7.5Hz,2H),1.59(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),1.34(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),0.92(CH₃,t,J＝7.2Hz,3H)ppm.¹³C NMR(DMSO-d₆,150MHz):δ169.07,165.60,163.54,163.15,157.75,135.56,133.45,130.85,130.50,128.86,128.81,127.96,127.77,126.32,125.80,124.34,122.77,118.06,43.75,41.95,40.54,30.04,20.24,14.17.HRMS m/z(TOF MS ES⁺):calcd for C₂₄H₂₄ClN₄O₃⁺(M+H⁺)451.1531,found451.1532。從分析結(jié)果可知，中間體Ⅳ的結(jié)構(gòu)式為：

五、將50mg步驟四所得中間體Ⅳ(0.11mmol))、110mg二(2-吡啶甲基)胺(0.55mmol)、142mg N,N-二異丙基乙基胺(1.10mmol)加入至30mL乙腈中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至沸騰回流8h；將反應(yīng)液旋干，以二氯甲烷-甲醇混合液為洗脫液，硅膠柱色譜分離，得到氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子。其產(chǎn)量為55mg，收率為82％，熔點(diǎn)為165.8～166.1℃。將氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子進(jìn)行分析，結(jié)果如下：¹H NMR(DMSO-d₆,600MHz):δ10.14(CONH,s,1H),8.50(d,J＝4.2Hz,2H),8.22(NHCH₂,t,J＝5.4Hz,1H),8.00(d,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(m,3H),7.66(t,J＝8.1Hz,2H),7.40(m,3H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),7.20(t,J＝6.3Hz,2H),7.13(t,J＝7.5Hz,1H),4.78(NHCH₂,d,J＝5.4Hz,2H),3.98(CH₂CH₂CH₂CH₃,t,J＝7.5Hz,2H),3.84(N(CH₂Py)₂,s,4H),3.43(COCH₂,s,2H),1.58(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),1.33(CH₂CH₂CH₂CH₃,m,2H),0.92(CH₃,t,J＝7.2Hz,3H)ppm.¹³C NMR(DMSO-d₆,150MHz):δ169.66,163.54,163.19,158.43,157.91,149.51,147.23,137.23,137.03,136.40,131.31,131.21,130.73,130.27,128.87,127.78,125.16,124.30,123.87,123.61,122.80,122.72,118.07,60.04,58.12,41.36,40.55,30.05,20.24,14.18ppm.HRMS m/z(TOF MS ES⁺):calcd for C₃₆H₃₆N₇O₃⁺(M+H⁺)614.2874,found 614.2883。從分析結(jié)果可知，氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的結(jié)構(gòu)式為：

按三羥甲基氨基甲烷的濃度為0.01mol/L、實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的濃度為1.0×10^-5mol/L依次將三羥甲基氨基甲烷、氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子加入到體積比為1:1的甲醇和水混合液中，用鹽酸將溶液pH調(diào)至7.20，分別加入各種常見的金屬離子Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cr³⁺、Fe³⁺、Co²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Ag⁺、Cd²⁺、Hg²⁺、Al³⁺，金屬離子的濃度為探針濃度的5倍，測定其熒光光譜，得到的熒光光譜圖如圖1所示，從圖1可以看出，空白探針分子在543nm處的熒光較弱，熒光量子產(chǎn)率為0.04。僅Cd²⁺導(dǎo)致探針分子在543nm處的熒光顯著增強(qiáng)，其熒光量子產(chǎn)率增加約3.3倍；而Zn²⁺導(dǎo)致探針分子在543nm處的熒光略有猝滅。由此可見本實(shí)施例的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子可高選擇性熒光增強(qiáng)識(shí)別Cd²⁺，并且可以應(yīng)用熒光增強(qiáng)信號(hào)區(qū)分Cd²⁺和Zn²⁺，從避免了Cd²⁺檢測過程中Zn²⁺的干擾。

按三羥甲基氨基甲烷的濃度為0.01mol/L、實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的濃度為1.0×10^-5mol/L依次將三羥甲基氨基甲烷、氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子加入到體積比為1:1的甲醇和水混合液中，用鹽酸將溶液pH調(diào)至7.20，分別加入Cd²⁺和Zn²⁺，金屬離子的濃度為探針濃度的5倍，測定發(fā)射波長在543nm處的熒光衰減曲線如圖2所示，從圖2計(jì)算可得，空白探針分子的熒光壽命為6.20ns，加入Cd²⁺后探針分子的熒光壽命增加至8.87ns，而加入Zn²⁺后探針分子的熒光壽命為7.18ns。由此可見本實(shí)施例的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子可以用熒光壽命區(qū)分Cd²⁺和Zn²⁺。

按三羥甲基氨基甲烷的濃度為0.01mol/L、實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的濃度為1.0×10^-5mol/L依次將三羥甲基氨基甲烷、氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子加入到體積比為1:1的甲醇和水混合液中，用鹽酸將溶液pH調(diào)至7.20，加入Cd²⁺，Cd²⁺的濃度為0～1.0×10^-5mol/L，研究不同Cd²⁺溶度對探針分子熒光光譜的影響，得到的熒光光譜如圖3所示，從圖3可以看出，隨著Cd²⁺的加入，探針分子在543nm處的熒光強(qiáng)度逐漸上升，當(dāng)Cd²⁺的濃度為1.0×10^-5mol/L時(shí)增強(qiáng)約3.5倍；而當(dāng)Cd²⁺濃度超過1.0×10^-5mol/L時(shí)，其熒光強(qiáng)度基本保持不變。探針分子熒光強(qiáng)度與Cd²⁺濃度的關(guān)系曲線如圖4所示，從圖4可以計(jì)算得出，探針分子對Cd²⁺的檢出限為1.08×10^-8mol/L，在Cd²⁺濃度1.08×10^-8-1.0×10^-5mol/L范圍內(nèi)，探針分子的熒光強(qiáng)度與Cd²⁺濃度呈良好的線性關(guān)系，由此可見本實(shí)施例制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子可以定量檢測Cd²⁺。

按三羥甲基氨基甲烷的濃度為0.01mol/L、實(shí)施例1制備的氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子的濃度為4.0×10^-5mol/L依次將三羥甲基氨基甲烷、氮雜萘酰亞胺類Cd²⁺探針分子加入到體積比為1:1的DMSO和水混合液中，用鹽酸將溶液pH調(diào)至7.20，得到混合液。酵母細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)染色0.5h后進(jìn)行明場和熒光成像，得到的明場照片如圖5所示，得到的熒光照片如圖6所示，由圖6可知，細(xì)胞發(fā)出微弱的黃綠色熒光。將染色后的酵母細(xì)胞加入至Cd²⁺濃度為4.0×10^-5mol/L的溶液中培養(yǎng)0.5h，進(jìn)行明場和熒光成像，得到的明場照片如圖7所示，得到的熒光照片如圖8所示，由圖8可知，染色后的酵母細(xì)胞在含Cd²⁺的溶液中培養(yǎng)后細(xì)胞發(fā)出較強(qiáng)的黃綠色熒光，表明在細(xì)胞內(nèi)探針分子對Cd²⁺具有較高的檢測性能。