本發(fā)明涉及一種用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

VP試驗(yàn)的反應(yīng)原理為：有些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,再進(jìn)一步將丙酮酸脫羥變?yōu)橐阴＜谆状?在堿性環(huán)境中被空氣中的氧氧化為二乙酰,二乙酰與培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中精氨酸所含的胍基發(fā)生反應(yīng)生成紅色的化合物。主要用于腸桿菌屬細(xì)菌的鑒別。沙雷氏菌、陰溝腸桿菌等VP反應(yīng)陽性，大腸埃希菌、沙門氏菌、志賀氏菌等VP反應(yīng)陰性。

現(xiàn)有的VP試驗(yàn)方法為：

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室使用量，配制300-500ml 1%普通葡萄糖蛋白胨水，取2ml分裝于12×150mm試管中，加蓋硅膠塞，115℃ 10磅15分鐘高壓滅菌。試劑冷卻后，裝塑料袋扎口，4℃冰箱保存。

反應(yīng)試劑：

甲液：6% α-萘酚酒精溶液；

乙液：40% 氫氧化鉀。

試驗(yàn)方法：挑取純培養(yǎng)物接種培養(yǎng)基。于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)18～24h。

結(jié)果觀察：培養(yǎng)后，加入Barritt VP試劑甲液和乙液各3滴，振搖后觀察結(jié)果，于數(shù)分鐘內(nèi)呈紅色時(shí)為陽性，如無紅色出現(xiàn)即為陰性。

質(zhì)控菌株：陽性菌株： ATCC700603 肺炎克雷伯菌；

陰性菌株： ATCC25922大腸埃希菌。

上述VP試驗(yàn)傳統(tǒng)方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，需用培養(yǎng)基18-24小時(shí)后，方能查看結(jié)果，耗時(shí)長(zhǎng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，能夠加速細(xì)菌生長(zhǎng)，從而減少VP試驗(yàn)所需時(shí)間。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分含量的各組分組成：1%普通葡萄糖蛋白胨水，1%的肌酐。質(zhì)量體積百分比的單位是g/ml。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基的制備方法，在1%普通葡萄糖蛋白胨水中加入1%的肌酐，高壓滅菌即得。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基在VP試驗(yàn)中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種VP試驗(yàn)方法，步驟如下：

（1）制備培養(yǎng)基：在1%普通葡萄糖蛋白胨水中加入1%的肌酐，高壓滅菌；

（2）配制反應(yīng)試劑：甲液：6% α-萘酚酒精溶液；

乙液：40% 氫氧化鉀；

（3）進(jìn)行試驗(yàn)：挑取待檢測(cè)的純培養(yǎng)物接種步驟（1）制備的培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)4～6h；

（4）結(jié)果觀察：培養(yǎng)后，加入甲液和乙液各3滴，振搖后觀察結(jié)果，于數(shù)分鐘內(nèi)呈紅色時(shí)為陽性，如無紅色出現(xiàn)即為陰性。

應(yīng)用本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行VP試驗(yàn)?zāi)軌蚣铀偌?xì)菌生長(zhǎng)，從而減少VP試驗(yàn)所需時(shí)間，使時(shí)間縮短至4-6個(gè)小時(shí)。

具體實(shí)施方式

以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為市售。如無特殊說明，本發(fā)明中“%”為質(zhì)量體積百分比。

實(shí)施例1

本發(fā)明提供一種用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，配方為：

1%普通葡萄糖蛋白胨水，1%的肌酐。

本發(fā)明的一種用來進(jìn)行VP試驗(yàn)的改良葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基的制備方法為：

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室使用量，配制1%普通葡萄糖蛋白胨水300～500ml，再加入1%的肌酐，為加速反應(yīng)、快速準(zhǔn)確鑒定，本申請(qǐng)人在普通1%葡萄糖蛋白胨水基礎(chǔ)培養(yǎng)基中另加1%肌酐。取0.5ml加入2ml西林瓶中，封口。115℃10磅15分鐘高壓滅菌。試劑冷卻后，室溫保存。

應(yīng)用本發(fā)明的改良培養(yǎng)基進(jìn)行VP試驗(yàn)的具體方法為：

反應(yīng)試劑：

甲液：6% α-萘酚酒精溶液；

乙液：40% 氫氧化鉀。

試驗(yàn)方法：挑取待檢測(cè)的純培養(yǎng)物接種本發(fā)明的改良培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)4～6h。

結(jié)果觀察：培養(yǎng)后，加入Barritt VP試劑甲液和乙液各3滴，振搖后觀察結(jié)果，于數(shù)分鐘內(nèi)呈紅色時(shí)為陽性，如無紅色出現(xiàn)即為陰性。

質(zhì)控菌株：陽性菌株： ATCC700603 肺炎克雷伯菌；

陰性菌株： ATCC25922大腸埃希菌。

分別應(yīng)用不同的培養(yǎng)基，相同的VP試驗(yàn)條件及方法，對(duì)不同待檢菌株進(jìn)行試驗(yàn)，培養(yǎng)時(shí)間如表1所示，檢測(cè)結(jié)果均相同。

表1

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。