本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及阿奇霉素的新用途，具體涉及阿奇霉素的藥物組合物及其止咳的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：阿奇霉素為第二代大環(huán)內(nèi)酯藥物，主要用于治療呼吸道及生殖道感染?？芍委煻喾N病原體引起的兒童及成人的呼吸道感染，生殖道沙眼衣原體感染等，并被多個(gè)國家和地區(qū)的醫(yī)學(xué)指南推薦作為上述感染的一線治療藥物推薦(如美國，日本，中國，美國及中國CDC)。阿奇霉素適用于敏感細(xì)菌所引起的下列感染：支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染；皮膚和軟組織感染；急性中耳炎；鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染(青霉素是治療化膿性鏈球菌咽炎的常用藥，也是預(yù)防風(fēng)濕熱的常用藥物；阿奇霉素可有效清除口咽部鏈球菌，但目前尚無阿奇霉素治療和預(yù)防風(fēng)濕熱療效的資料)。阿奇霉素可用于男女性傳播疾病中由沙眼衣原體所致的單純性生殖器感染。阿奇霉素亦可用于由非多重耐藥淋球菌所致的單純性生殖器感染及由杜克嗜血桿菌引起的軟下疳(需排除梅毒螺旋體的合并感染)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種阿奇霉素的藥物組合物，該藥物組合物中含有阿奇霉素和一種從草本中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，阿奇霉素和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同抗炎止咳。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種阿奇霉素的藥物組合物，包括阿奇霉素、如上所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體。如上所述的化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將天南星的干燥塊莖粉碎，用65～75％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20％乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65％洗脫液，減壓濃縮得65％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中65％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58％的甲醇水溶液等度洗脫，收集11～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，步驟(a)用70％乙醇熱回流提取，合并提取液。進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。如上所述的化合物(Ⅰ)在制備抗炎止咳的藥物中的應(yīng)用。如上所述的阿奇霉素的藥物組合物在制備抗炎止咳的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的阿奇霉素的藥物組合物中含有阿奇霉素和一種從天南星的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，阿奇霉素和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有抗炎止咳作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，抗炎止咳效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成抗炎止咳的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證分離方法：(a)將天南星的干燥塊莖(2kg)粉碎，用70％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20％乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65％洗脫液，減壓濃縮得65％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中65％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1(9個(gè)柱體積)、35:1(10個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和7:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(6個(gè)柱體積)、7:1(7個(gè)柱體積)和1:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58％的甲醇水溶液等度洗脫，收集11～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(435mg，HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：白色粉末，HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z455.3488，結(jié)合核磁特征可得分子式為C30H46O3，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CDCl3，600MHz)：H-1(1.49，m)，H-1(2.91，ddd，J＝13.3，7.0，4.2Hz)，H-2(2.41，ddd，J＝15.4，6.8，4.2Hz)，H-2(2.65，ddd，J＝15.4，11.2，7.0Hz)，H-5(1.32，d，J＝11.2Hz)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)，H-7(1.68，m)，H-7(1.87，m)，H-9(1.54，d，J＝8.4Hz)，H-11(4.27，d，J＝8.8，3.3Hz)，H-12(5.28，d，J＝3.3Hz)，H-16(2.21，d，J＝13.1Hz)，H-16(2.43，d，J＝13.1Hz)，H-18(2.46，d，J＝8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10，m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.85，d，J＝6.3Hz)，H-30(0.93，d，J＝6.1Hz)，11-OH(2.83，br，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CDCl3，125MHz)：39.2(CH2，1-C)，34.3(CH2，2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7(CH2，6-C)，38.9(CH2，7-C)，51.8(C，8-C)，56.1(CH，9-C)，31.2(C，10-C)，67.9(CH，11-C)，126.7(CH，12-C)，138.2(C，13-C)，66.6(C，14-C)，209.1(C，15-C)，52.5(CH2，16-C)，52.7(C，17-C)，59.3(CH，18-C)，39.9(CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8(CH2，21-C)，38.8(CH2，22-C)，26.6(CH3，23-C)，15.7(CH3，24-C)，13.7(CH3，25-C)，19.7(CH3，26-C)，14.3(CH3，27-C)，19.3(CH3，28-C)，17.2(CH3，29-C)，20.4(CH3，30-C)。紅外波譜表明該化合物含有羥基(3478cm-1)，羰基(1760cm-1)，雙鍵(1663cm-1)和偕二甲基(1380cm-1)基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有30個(gè)碳信號，包括八個(gè)甲基，七個(gè)亞甲基，七個(gè)次甲基(一個(gè)連氧碳和一個(gè)烯烴碳)，以及八個(gè)季碳(兩個(gè)羰基，一個(gè)烯屬季碳)，以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示的六個(gè)單峰甲基質(zhì)子信號δH1.02(3H，s)，0.82(3H，s)，1.19(3H，s)，1.22(3H，s)，1.36(3H，s)和0.87(3H，s)和兩個(gè)雙峰甲基質(zhì)子信號δH0.85(3H，d，J＝6.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.1Hz)以及1H-NMR數(shù)據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型三萜類化合物。從紅外譜中可知結(jié)構(gòu)中含有羥基，根據(jù)HMBC譜中11-OH與C-11的相關(guān)信號以及碳化學(xué)位移確認(rèn)-OH連在C-11位。通過HMBC譜中一個(gè)單烯烴質(zhì)子信號δH5.28(1H，d，J＝3.3Hz)與C-12的相關(guān)信號以及C-12與C-13的碳化學(xué)位移可以確認(rèn)C-12與C-13形成雙鍵結(jié)構(gòu)。此外，HMBC譜中Me-23和Me-24與C-3，H2-16和Me-27與C-15的相關(guān)性表明C-3和C-15位形成酮基。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：實(shí)施例2：藥理作用1、材料與方法1.1藥物和試劑阿奇霉素購自中國藥品生物制品檢定所。化合物(Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。冰醋酸，廣西南寧化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；二甲苯，中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司生產(chǎn)；伊文思蘭，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝廠生產(chǎn)。阿司匹林片(100mg/片)，拜爾制藥公司生產(chǎn)；桂龍咳喘寧膠囊，山西桂龍醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)；橘紅沖劑，南昌康正德制藥有限公司生產(chǎn)。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠90只，體質(zhì)量(20±2)g，雌雄各半；Wistar大鼠60只，體質(zhì)量(200±20)g，雌雄各半，均由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.3器材1.80-2型離心機(jī)，上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)；721型分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)；AEU-210型電子天平，日本島津生產(chǎn)。1.4抗炎實(shí)驗(yàn)1.4.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為：生理鹽水組，阿司匹林組(300mg/kg)，阿奇霉素組(80mg/kg)、化合物(Ⅰ)組(80mg/kg)、阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg/kg阿奇霉素+40mg/kg化合物(Ⅰ)】各組按相應(yīng)劑量給藥，生理鹽水組灌服等量生理鹽水。各組均灌胃給藥，每天1次，連續(xù)5d。末次給藥1h后，各組小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml/只，左耳不涂作自身空白對照。涂抹二甲苯30min后，將小鼠頸椎脫位處死，用內(nèi)徑6mm的打孔器打下左、右雙耳相同部位的圓片，分別稱質(zhì)量，以右耳質(zhì)量與左耳質(zhì)量差為腫脹度，比較各組的腫脹度。1.4.2對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用取小鼠50只，分組及給藥同1.4.1。各組給予藥物每天1次，連續(xù)3d。末次給藥1h后，小鼠尾靜脈注射0.5％伊文思蘭的生理鹽水0.1ml/10g后，立即于小鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后，斷頭放血處死小鼠，用5ml生理鹽水沖洗腹腔3次，收集洗滌液，離心(1000rpm)5min，在721型分光光度計(jì)590nm處測定吸收度(OD值)。1.5止咳實(shí)驗(yàn)1.5.1對SO2致咳小鼠的影響取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即生理鹽水組、阿奇霉素組(80mg/kg)、化合物(Ⅰ)組(80mg/kg)、阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg/kg阿奇霉素+40mg/kg化合物(Ⅰ)】、桂龍咳喘寧組(5g/kg)。各組按相應(yīng)劑量給藥，生理鹽水組灌服等量生理鹽水，每天1次，共7d。末次給藥后1h，將小鼠放入500ml的廣口瓶中，通入SO26ml引咳，以小鼠出現(xiàn)明顯的張口喘息為咳嗽指標(biāo)，觀察并記錄小鼠放入瓶中到咳嗽發(fā)生的潛伏期和3min內(nèi)咳嗽次數(shù)。1.5.2對大鼠排痰量的影響取Wistar大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即生理鹽水組、阿奇霉素組(80mg/kg)、化合物(Ⅰ)組(80mg/kg)、阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg/kg阿奇霉素+40mg/kg化合物(Ⅰ)】、橘紅沖劑組(5g/kg)。各組按相應(yīng)劑量給藥，生理鹽水組灌服等量生理鹽水，每天1次，共7d。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，末次給藥30min后，用戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，仰臥位固定，剪開頸正中皮膚，分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨環(huán)之中，用注射針頭扎一小孔，然后插入直徑0.5ml的已知質(zhì)量(G1)的毛細(xì)管一根，長10cm。使毛細(xì)玻管剛好接觸氣管部表面，以吸取氣管中的痰液，若一支玻管吸滿，馬上換一支玻管，收集大鼠60min的排痰量，然后用電子稱稱量收集有痰液的玻管的重量(G2)，G2-G1即為大鼠60min的排痰量，計(jì)算60min/100g的引流mg數(shù)作為祛痰指標(biāo)。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS11.5軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹及對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管滲透性增加的作用的影響與生理鹽水組比較，阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組和阿司匹林組的腫脹度和OD值均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，阿奇霉素組、化合物(Ⅰ)組也可顯著降低腫脹度和OD值(P<0.05)，說明阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物的消炎作用較明顯，且能顯著降低OD值，較明顯抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管滲透性增加。結(jié)果見表1。表1抗炎試驗(yàn)結(jié)果(x±s，n＝10)組別腫脹度吸收度(OD值)生理鹽水組1.91±0.350.556±0.172陽性對照組1.41±0.230.401±0.079阿奇霉素組1.60±0.310.422±0.045化合物(Ⅰ)組1.59±0.420.428±0.102阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組1.37±0.360.404±0.0682.3對小鼠SO2致咳的止咳作用與生理鹽水組比較，阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組和桂龍咳喘寧組均能減少小鼠SO2致咳的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，阿奇霉素組、化合物(Ⅰ)組也能減少咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期(P<0.05)。結(jié)果見表2。表2對小鼠SO2致咳的止咳作用(x±s，n＝10)組別咳嗽次數(shù)(次)潛伏期(s)生理鹽水組59.7±6.341.97±11.76陽性對照組38.8±5.969.66±18.67阿奇霉素組46.3±4.551.57±10.25化合物(Ⅰ)組44.2±7.552.92±24.13阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組32.2±2.470.34±10.422.4對大鼠排痰量的影響阿奇霉素組、化合物(Ⅰ)組和橘紅沖劑組60min/100g引流的mg數(shù)為3.21±0.57、3.25±0.37和3.28±0.42均高于生理鹽水組(2.24±0.43)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，阿奇霉素與化合物(Ⅰ)組合物組為3.54±0.68，顯著高于生理鹽水組(P<0.01)。上述試驗(yàn)表明，阿奇霉素和化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，具有抗炎止咳作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，抗炎止咳效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成抗炎止咳的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3