本發(fā)明涉及具有酪氨酸激酶選擇性抑制活性的一類取代的氨基吡啶類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的溶劑化合物、其制備方法及其在制備預(yù)防或治療與生物體內(nèi)和成纖維生長因子受體相關(guān)的細(xì)胞異常增殖、形態(tài)變化以及運動功能亢進等相關(guān)的疾病，以及與血管新生或癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的疾病的藥物，尤其是用于治療或預(yù)防腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
成纖維生長因子受體(fgfrs)是一種受體酪氨酸激酶，家族成員有fgfr1，fgfr2，fgfr3，fgfr4，其基本結(jié)構(gòu)包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)、酪氨酸激酶區(qū)，其中胞外區(qū)由3個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域組成，包括一個酸性結(jié)構(gòu)框架，一個膜域和一個分裂期細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶域。與其他酪氨酸激酶一樣，當(dāng)配體和fgfr結(jié)合時，受體發(fā)生二聚，形成的三元(fgf-fgfr-hpsg)復(fù)合物二聚化使得fgfr的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，引起細(xì)胞內(nèi)酪氨酸區(qū)域以及末端羧酸部位發(fā)生分子內(nèi)的磷酸化轉(zhuǎn)移，隨后連接fgfr受體底物(frs2α)和磷脂酶c(plcγ)激活一系列下游信號通路，如ras/絲裂原激活蛋白激酶(mapk)通路及磷酸肌醇激酶3(pi3k)/akt通路，進而激發(fā)細(xì)胞內(nèi)一些生理過程，如細(xì)胞增殖、生存、遷移和血管生成等。
fgfr活化與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及耐藥密切相關(guān)。fgfrs主要通過染色體易位、基因突變、基因擴增或過度表達(dá)這三種機制參與腫瘤的發(fā)生。fgfr1基因或其融合基因的染色體易位主要存在于多發(fā)性骨髓瘤中；fgfr2和fgfr3突變均在肺鱗狀細(xì)胞癌中有表達(dá)，跨膜區(qū)fgfr4y367c突變使得乳腺癌細(xì)胞持續(xù)活化；據(jù)文獻(xiàn)報道，fgfr擴增出現(xiàn)在各種不同癌癥中，fgfr1擴增出現(xiàn)在直腸癌、肺癌及腎癌病人中，此外，在約10％的乳腺癌尤其是雌激素受體陽性病人中，fgfr18p11-12位點出現(xiàn)擴增，胃癌和直腸癌患者也表現(xiàn)出fgfr2的擴增，fgfr3擴增在膀胱癌患者中最為常見。因此，靶向fgfr激酶抑制劑的研究在惡性腫瘤治療上具有非常重要的意義。
近年來以fgfrs為治療靶點的小分子酪氨酸激酶抑制劑(tki)研發(fā)已成為抗腫瘤藥物研究的熱點。一些fgfr抑制劑已進入臨床研究階段，根據(jù)其作用范圍不同可分為選擇性fgfr抑制劑和非選擇性fgfr抑制劑。這類抑制劑主要以fgfr胞內(nèi)激酶域atp結(jié)合位點為靶點抑制fgfr激活，可應(yīng)用于fgfrs過表達(dá)、fgfrs突變或表達(dá)fgfr-融合蛋白的腫瘤類型。azd4547、bgj398、ly2874455及al-3810都是目前已進入臨床，抗腫瘤活性強的選擇性fgfr抑制劑。據(jù)文獻(xiàn)報道，azd-4547、bgj-398、al-3810是fgfr1-3的強效抑制劑，而ly2874455是一個pan-fgfr抑制劑(作用于fgfr1-4)。
由于pdgfrs、vegfrs和fgfrs激酶域結(jié)構(gòu)高度相似，大多數(shù)fgfrtki同時具有抑制pdgfr、vegfr的活性，因而fgfr抑制劑具有較大毒副作用，fgfr的抑制劑研發(fā)仍面臨很大的挑戰(zhàn)。在結(jié)構(gòu)方面，fgfr抑制劑的結(jié)構(gòu)種類非常有限。
綜上所述，本領(lǐng)域還需要開發(fā)具有新型結(jié)構(gòu)的fgfr抑制劑。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎，且具有優(yōu)異活性的fgfr激酶抑制劑。
本發(fā)明的第一方面，提供了一種如下式所示的式i化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中：
x選自下組：ch或n；
環(huán)a可選自取代或未取代的6-10元芳基、取代或未取代的5-12元雜芳基，其中，所述的取代指基團上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c1-c8烷氨基、鹵素、鹵代c1-c8烷基；
r1選自-conhr3、-coor3；
r2選自下組：取代或未取代的c1-c8烷基、取代或未取代的c1-c8烷氧基、取代或未取代的4-10元雜環(huán)基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的c1-c8烷氨基，-nhcor3；其中，所述的取代指基團進一步被一個或多個選自下組的取代基取代：c1-c8烷基，羥基，羥基c1-c8烷基，-coor3，氨基取代的c3-c10環(huán)烷基，未取代或被一個或多個鹵素原子、羥基或c1-c8烷基取代的4-10元雜環(huán)烷基；
r3選自氫、c1-c8烷基，c2-c10烯基。
在另一優(yōu)選例中，在所述的式i化合物中，環(huán)a選自下組：取代或未取代的苯環(huán)、取代或未取代噻唑環(huán)、取代或未取代的噁唑環(huán)、取代或未取代的嘧啶環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，在所述的式i化合物中，r3選自氫、甲基、乙烯基。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物選自下組：化合物s1、s2、s3、s4、s5、s6、s7、s8、s9、s10、s11、s12、s13、s14、s15、s16、s17、s18、s19、s20、s21、s22、s23或s24。
本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物的制備方法，包括步驟：
在惰性溶劑中，用式a化合物與式b化合物反應(yīng)，得到式i化合物；
其中，q為離去基團，優(yōu)選地為鹵素；x、r1、r2的定義如本發(fā)明第一方面中所述。
在另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)在pd2(dba)3[三(二亞芐基丙酮)二鈀]、xantphos[4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽]、碳酸銫存在下進行。
在另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)包括：將化合物a、化合物b(1.0-1.5eq)、pd2(dba)3[三(二亞芐基丙酮)二鈀](0.05-0.2eq)、xantphos[4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽](0.1-0.5eq)、碳酸銫(1-3eq)溶解于惰性溶劑中，氮氣保護下反應(yīng)。
在另一優(yōu)選例中，所述的惰性溶劑為1,4-二氧六環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)在100℃下進行。
在另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)時間為1-10h。
在另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣過柱得化合物。
本發(fā)明的第三方面，提供了一種藥物組合物，包括：治療有效量的如本發(fā)明第一方面中所述的化合物，或其藥用鹽、其前藥、其水合物或溶劑合物，和任選的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物是用于治療腫瘤的藥物組合物，或用于治療酪氨酸激酶(優(yōu)選為fgfr，更優(yōu)選為fgfr1)活性相關(guān)疾病的藥物組合物。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于治療fgf/fgfr信號通路異常表達(dá)相關(guān)疾病。
本發(fā)明的第四方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其光學(xué)異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、酯、前藥或水合物的用途，用于制備預(yù)防和/或治療與fgfr相關(guān)疾病的藥物。
在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤相關(guān)疾病選自下組：乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、骨髓瘤、肝癌、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、腎細(xì)胞癌、膠質(zhì)母細(xì)胞癌和睪丸癌；優(yōu)選為乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、肝癌、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、腎細(xì)胞癌、膠質(zhì)母細(xì)胞癌和睪丸癌；更優(yōu)選為非小細(xì)胞肺癌、胃癌、多發(fā)性骨髓瘤。
本發(fā)明的第五方面，提供了一種蛋白酪氨酸激酶酶活抑制劑，所述的抑制劑含有抑制有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥用鹽、其前藥、其水合物或溶劑合物。
本發(fā)明的第六方面，提供了一種用于治療癌癥或蛋白酪氨酸激酶活性相關(guān)疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥用鹽、其前藥、其水合物或溶劑合物作為活性組分。
本發(fā)明的第七方面，提供了一種治療或預(yù)防癌癥或蛋白酪氨酸激酶活性相關(guān)疾病的方法，其特征在于，包括：對治療或預(yù)防對象施用治療或預(yù)防有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥用鹽、其前藥、其水合物或溶劑合物，或如本發(fā)明所述的藥物組合物。
應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具體實施方式
本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，將文獻(xiàn)報道的fgfr抑制劑al-3810骨架中的喹啉換為氨基吡啶,可以得到一類結(jié)構(gòu)新穎的以氨基吡啶為母核的化合物。在此基礎(chǔ)上，通過引入不同水溶性基團取代的芳香環(huán)，可以獲得一類新的具有較好fgfr抑制活性及代謝性質(zhì)的氨基吡啶衍生物?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
術(shù)語
如本文所用，術(shù)語“雜環(huán)基”是具有1、2、3、4或5個選自下組的雜原子的環(huán)狀基團：o、n或s。
在本文中，所述的烷基優(yōu)選為脂肪族烷基，可以是直鏈烷基、支鏈烷基、螺環(huán)烷基、橋環(huán)烷基、烯烷基、炔烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、烷氧烷基、烷氧酰基烷基、環(huán)烷基烷基，非限制性地包括：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、烯丙基、炔丙基、環(huán)丁烯基、環(huán)己烯基；形如“c1-c8”的表述意在包括具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個或8個碳原子的相應(yīng)基團，例如，“c1-c8烷基”指具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個或8個碳原子的烷基，“c2-c10烯基”指具有2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個碳原子的烯基。
在本文中，所述烯基優(yōu)選為乙烯基、丙烯基、丁烯基、苯乙烯基、苯丙烯基，或類似基團。
在本文中，所述環(huán)烷基可以為飽和或者部分不飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)狀烴取代基，其中包括3至20個碳原子，優(yōu)選包括3至12個碳原子，更優(yōu)選環(huán)烷基包含3至10個碳原子。單環(huán)環(huán)烷基非限制實施例包含環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)辛基等；多環(huán)環(huán)烷基包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán)的環(huán)烷基。
所述雜環(huán)基指飽和或部分飽和單環(huán)或者多環(huán)的環(huán)狀取代基，其中包括4至10元雜環(huán)基，且所述的雜環(huán)基為其中含有一個或多個雜原子(氮、氧、硫)的飽和或者非飽和的單環(huán)、并環(huán)、螺環(huán)、稠環(huán)、橋環(huán)等。本文中所述的雜環(huán)基包括，但不局限于選自下組的基團：嗎啉環(huán)，哌啶環(huán)，哌嗪環(huán)，n-烷基或酰基取代的哌嗪環(huán)，高哌嗪環(huán)，n-烷基或?；〈母哌哙涵h(huán)，吡咯，四氫吡咯，7h-嘌呤等。
所述芳基指6至10元全碳單環(huán)或稠合多環(huán)(也就是共享毗鄰碳原子對的環(huán))基團，且所述的基團具有共軛的π電子體系，例如苯基和萘基。所述芳基環(huán)可以與雜環(huán)基、雜芳基或環(huán)烷基環(huán)稠合，非限制性實施例含苯并咪唑、苯并噻唑、苯并惡唑、苯并異惡唑、苯并吡唑、喹啉、苯并吲哚、苯并二氫呋喃。
所述雜芳基指包含1至4個雜原子，5至14個環(huán)原子的雜芳族體系，其中雜原子包括氧、硫和氮。雜芳基優(yōu)選為是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述的雜芳基可以稠合于芳基、雜環(huán)基或者環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為雜芳基環(huán)。
除非特別說明，本發(fā)明所描述的結(jié)構(gòu)式意在包括所有的同分異構(gòu)形式(如對映異構(gòu)，非對映異構(gòu)和幾何異構(gòu)體(或構(gòu)象異構(gòu)體)：例如含有不對稱中心的r、s構(gòu)型，雙鍵的(z)、(e)異構(gòu)體和(z)、(e)的構(gòu)象異構(gòu)體。因此本發(fā)明的化合物的單個立體化學(xué)異構(gòu)體或其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體(或構(gòu)象異構(gòu)體)的混合物都屬于本發(fā)明的范圍。
術(shù)語“互變異構(gòu)體”表示具有不同能量的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體可以超過低能壘，從而互相轉(zhuǎn)化。比如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(即質(zhì)子移變)包括通過質(zhì)子遷移進行互變，如1h-吲唑與2h-吲唑、1h-苯并[d]咪唑與3h-苯并[d]咪唑，化合價互變異構(gòu)體包括通過一些成鍵電子重組而進行互變。
在本文中，所述的藥學(xué)上可接受的鹽沒有特別的限制，優(yōu)選包括：無機酸鹽、有機酸鹽、烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽；所述無機酸鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等；所述有機酸鹽包括甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、苯甲酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽等；所述烷基磺酸鹽包括甲基磺酸鹽、乙基磺酸鹽等；所述芳基磺酸鹽包括苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等。
在本文中，所述通式(i)表示的化合物的藥學(xué)上可接受的溶劑合物沒有特別的限制，優(yōu)選包括：通式(i)表示的化合物與水、乙醇、異丙醇、乙醚、丙酮等的溶劑合物。
式(i)化合物
本發(fā)明人通過對fgfr的晶體結(jié)構(gòu)和其它的酪氨酸激酶抑制劑構(gòu)效關(guān)系的研究，設(shè)計合成了一系列結(jié)構(gòu)新穎的化合物，通過分子、細(xì)胞以及動物模型對這些化合物進行篩選，發(fā)現(xiàn)這些化合物在分子水平能夠明顯抑制fgfr酶活性，細(xì)胞水平對fgfr誘導(dǎo)的各種癌細(xì)胞增殖也有明顯抑制作用，而且在動物體內(nèi)也可以顯著抑制腫瘤生長。
具體地，本發(fā)明提供了一種如下式所示的式i化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽：
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物中，x、環(huán)a、r1、r2、r3中任一個分別為實施例中所述具體化合物中所對應(yīng)的基團。
優(yōu)選的，本發(fā)明通式(i)所示的氨基吡啶類化合物選自下表1中的化合物：
表1
含有式(i)化合物的藥物組合物
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包含治療有效量的選自式(i)所示氨基吡啶類化合物、其藥用鹽、其前藥及其水合物和溶劑合物中的一種或多種以及任選地，藥學(xué)上可接受的載體，其可用于治療癌癥等相關(guān)的疾病。所述藥物組合物可以根據(jù)不同給藥途徑而制備成各種形式。
本發(fā)明所述的式(i)所示氨基吡啶類化合物、其藥用鹽、其前藥及其水合物和溶劑合物中的一種或多種，或者上述包含治療有效量的選自式(i)所示氨基吡啶類化合物、其藥用鹽、其前藥及其水合物和溶劑合物中的一種或多種的藥物組合物可以作為蛋白酪氨酸激酶抑制劑，尤其是作為fgfr抑制劑，用于治療癌癥。所述的fgfr優(yōu)選地包括fgfr1。
本發(fā)明化合物的藥用鹽的制備，可以采用化合物的游離堿與無機或有機酸直接成鹽反應(yīng)進行。無機或有機酸可選自鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫氟酸、氫溴酸、甲酸、乙酸、苦味酸、檸檬酸、馬來酸、甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、乙烷磺酸和對甲苯磺酸等。
由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的對fgfr激酶(kinase)例如fgfr1和fgfr2的抑制活性，因此本發(fā)明化合物及其各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機或有機鹽，水合物或溶劑合物，以及含有本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由與fgfr活性或表達(dá)量相關(guān)的疾病，例如預(yù)防和/或治療與fgf/fgfr信號通路異常表達(dá)相關(guān)疾病的。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明化合物可用于治療以下疾?。核龅陌┌Y包括乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤aml、肝癌、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、腎細(xì)胞癌、膠質(zhì)母細(xì)胞癌和睪丸癌。更特別的是，這些癌癥選自：乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、肝癌、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、腎細(xì)胞癌、膠質(zhì)母細(xì)胞癌和睪丸癌。最特別的是，該癌癥是非小細(xì)胞肺癌、胃癌或多發(fā)性骨髓瘤。
本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000mg本發(fā)明化合物/劑，更佳地，含有5-200mg本發(fā)明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個膠囊或藥片。
“藥學(xué)上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑(
本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)和局部給藥。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。
固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。
用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。
除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。
除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。
用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。
用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進劑一起混合。
本發(fā)明化合物可以單獨給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。
使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000mg，優(yōu)選5～500mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。
一、制備實施例
1h-nmr用varianmercuryamx300型儀測定；ms用vgzab-hs或vg-7070型儀測定，除注明外均為ei源(70ev)；所有溶劑在使用前均經(jīng)過重新蒸餾，所使用的無水溶劑均是按標(biāo)準(zhǔn)方法干燥處理獲得；除說明外，所有反應(yīng)均是在氮氣保護下進行并tlc跟蹤，后處理時均經(jīng)飽和氯化鈉水溶液洗滌和無水硫酸鈉干燥過程；產(chǎn)品的純化除說明外均使用硅膠(200～300目)柱色譜法；其中硅膠(200～300目)由青島海洋化工廠生產(chǎn)，gf254薄層硅膠板由煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司生產(chǎn)。
制備實施例1化合物s1的制備
化合物1-1的合成方法參照文獻(xiàn)方法wo2011140009。
化合物1-3的合成：
稱量化合物1-1、化合物1-2(1.5eq)于單口瓶中，加入乙腈溶解，然后加入dipea，70℃下反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，pe：ea＝5:1得化合物1-3。
化合物1-4的合成
將化合物1-3溶解于甲醇中，加入2eq的氫氧化鈉水溶液，60℃下加熱反應(yīng)4h。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，用2nhcl調(diào)ph至5～6，有大量固體析出，抽濾，得到化合物1-4。
化合物1-5的合成
將化合物1-5溶解于二氯甲烷中，冰浴下加入dmf[n,n-二甲基甲酰胺](10eq)，氯化亞砜(4eq)，加畢升至室溫反應(yīng)2h，反應(yīng)完全后將反應(yīng)液旋干，然后再用dcm溶解，將其加到冷卻至0℃的氨水二氯甲烷溶液中，室溫反應(yīng)5h。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝50:1得化合物1-5。
化合物1-6的合成參考文獻(xiàn)j.med.chem.2008,51,1649-1667。
化合物1-7的合成
稱量化合物1-6、甲胺鹽酸鹽(2.5eq)、edci[1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽](1.5eq)、hobt[1-羥基苯并三唑](1eq)于單口瓶中，用二氯甲烷溶解，然后加入dipea[二異丙基乙胺](2.5eq)，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，pe:ea(體積比)＝1:1得化合物1-7。
化合物s1的合成：
將化合物1-5、化合物1-7(1.2eq)、pd2(dba)3[三(二亞芐基丙酮)二鈀](0.1eq)、xantphos[4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽](0.2eq)、碳酸銫(2eq)溶解于1,4-二氧六環(huán)中，氮氣保護，100℃下反應(yīng)5h。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝50:1得化合物s1。s1的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.66(s,1h),8.39(d,j＝9.1hz,1h),8.12(d,j＝5.6hz,1h),8.01(s,1h),7.82(t,j＝8.8hz,3h),7.56(s,2h),7.45(t,j＝7.6hz,1h),7.33(d,j＝9.9hz,1h),6.92(d,j＝8.6hz,2h),6.66(d,j＝4.2hz,1h),6.22(d,j＝5.0hz,1h),5.28–5.18(m,0.5h),5.09–4.97(m,0.5h),4.03(t,j＝5.1hz,2h),3.85–3.72(m,2h),3.36–3.21(m,2h),3.07(d,j＝4.8hz,3h),2.92(t,j＝5.0hz,2h).
制備實施例2化合物s2的制備
化合物2-1的合成方法與化合物1-5相同。
化合物s2的合成方法與s1相同。s2的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.53(s,1h),8.36(d,j＝9.0hz,1h),8.10(d,j＝5.6hz,1h),7.98(s,1h),7.79(t,j＝7.7hz,3h),7.53(d,j＝7.1hz,2h),7.42(t,j＝7.6hz,1h),7.34–7.26(m,1h),6.88(d,j＝8.7hz,2h),6.62(d,j＝4.7hz,1h),6.01(s,1h),4.03(t,j＝5.0hz,2h),3.68(t,j＝12.0hz,4h),3.05(d,j＝4.9hz,3h),2.94(t,j＝4.9hz,2h)。
制備實施例3化合物s3的制備
化合物3-1的合成方法與化合物1-5相同。
化合物3-2的合成方法與s1相同。
化合物s3的合成：
將化合物3-2溶于甲醇中，加入2n的鹽酸甲醇(30eq)溶液，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，旋干反應(yīng)液，用飽和碳酸氫鈉溶液和dcm萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s3。s3的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.58(s,1h),8.41(d,j＝9.1hz,1h),8.15(d,j＝5.1hz,1h),8.02(s,1h),7.84(t,j＝7.7hz,3h),7.57(s,2h),7.51–7.42(m,1h),7.35(d,j＝9.7hz,1h),6.95(d,j＝8.2hz,2h),6.67(d,j＝5.7hz,1h),6.12(s,1h),3.88(s,2h),3.09(d,j＝4.0hz,3h),0.77(s,2h),0.65(s,2h).
制備實施例4化合物s4的制備
化合物4-1的合成方法與1-5相同。
化合物s4的合成方法與s1相同。s4的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.87(s,1h),8.34(d,j＝9.2hz,1h),8.06(d,j＝5.6hz,1h),7.99(s,1h),7.79(t,j＝7.0hz,3h),7.55–7.46(m,2h),7.40(t,j＝7.6hz,1h),7.33–7.26(m,1h),6.91(d,j＝8.4hz,2h),6.62(d,j＝4.9hz,1h),6.51–6.42(m,1h),4.11(t,j＝5.8hz,2h),3.00(d,j＝4.7hz,3h),2.88(t,j＝5.7hz,2h),2.59(s,4h),2.35(s,1h),1.78(s,4h)。
制備實施例5化合物s5的制備
化合物5-3的合成
稱量原料5-1(1eq)和原料5-2(2eq)于單口瓶中，用dmso[二甲基亞砜]溶解，加入碳酸鉀(3eq)，110℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后將反應(yīng)液冷卻，倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，dcm[二氯甲烷]:meoh[甲醇](體積比)＝30:1得化合物5-3。
化合物5-4的合成
將化合物5-3溶解于甲醇中，加入2eq的氫氧化鈉水溶液，60℃下加熱反應(yīng)4h。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，用2nhcl調(diào)ph至5～6，有大量固體析出，抽濾，得到化合物5-4。
化合物5-5的合成
將化合物5-4溶解于二氯甲烷中，冰浴下加入dmf[n,n-二甲基甲酰胺](10eq)，氯化亞砜(4eq)，加畢升至室溫反應(yīng)2h，反應(yīng)完全后將反應(yīng)液旋干，然后再用dcm溶解，將其加到冷卻至0℃的氨水二氯甲烷溶液中，室溫反應(yīng)4h。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝15:1得化合物5-5。
化合物s5的合成方法與s1相同。s5的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.36(d,j＝9.2hz,1h),8.12(d,j＝5.7hz,1h),8.01(d,j＝1.8hz,1h),7.82(d,j＝8.2hz,1h),7.74(d,j＝8.8hz,2h),7.53(d,j＝7.2hz,2h),7.48–7.38(m,1h),7.32(dd,j＝9.2,2.3hz,1h),6.86(d,j＝8.9hz,2h),6.64(dd,j＝5.7,2.2hz,1h),6.34(s,1h),3.33(d,j＝4.5hz,4h),3.04(d,j＝4.8hz,3h),2.61–2.48(m,4h),2.33(s,3h).
制備實施例6化合物s6的制備
化合物6-1的合成參考文獻(xiàn)方法wo2001060846.
化合物6-2的合成方法同s1.
s6的合成方法與s3相同。s6的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.83(s,1h),8.31(d,j＝9.2hz,1h),8.10–7.93(m,2h),7.73(dd,j＝13.3,8.3hz,3h),7.46(d,j＝7.7hz,2h),7.40–7.33(m,1h),7.24(d,j＝9.9hz,2h),6.57(d,j＝5.1hz,1h),6.36(s,1h),3.20(d,j＝11.8hz,2h),2.97(d,j＝4.4hz,3h),2.69(dd,j＝25.0,13.5hz,2h),1.73(dd,j＝31.8,11.6hz,4h).
制備實施例7化合物s7的制備
化合物7-1的合成方法與5-5相同。
化合物s7的合成方法與s1相同。s7的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.03(d,j＝1.7hz,1h),7.82(dd,j＝17.4,8.4hz,3h),7.57(d,j＝5.6hz,2h),7.51–7.43(m,1h),7.35(dd,j＝9.1,2.3hz,1h),6.89(d,j＝8.8hz,2h),6.66(dd,j＝5.7,2.1hz,1h),6.13(s,1h),3.92–3.81(m,4h),3.36–3.23(m,4h),3.09(d,j＝4.9hz,3h).
制備實施例8化合物s8的制備
化合物8-1的合成方法與5-5相同。
化合物s8的合成方法與s1相同。s8的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.15(d,j＝5.7hz,1h),8.03(s,1h),7.81(dd,j＝21.6,8.4hz,1h),7.56(s,1h),7.47(t,j＝7.6hz,1h),7.35(d,j＝8.8hz,1h),7.26(s,1h),6.88(d,j＝8.6hz,1h),6.66(d,j＝4.8hz,1h),6.14(d,j＝4.4hz,1h),3.87–3.71(m,1h),3.59(d,j＝12.0hz,1h),3.09(d,j＝4.7hz,1h),2.51(t,j＝11.3hz,1h),1.27(d,j＝6.2hz,1h).
制備實施例9化合物s9的制備
化合物9-1的合成方法與5-5相同。
化合物9-2的合成方法與s1相同。
化合物s9的合成方法與s3相同。s9的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.54(s,1h),8.39(d,j＝8.9hz,1h),8.15(d,j＝5.7hz,1h),8.03(s,1h),7.84(d,j＝8.5hz,1h),7.76(d,j＝8.5hz,2h),7.56(s,2h),7.46(t,j＝7.6hz,1h),7.34(d,j＝9.0hz,1h),6.88(d,j＝8.7hz,2h),6.66(d,j＝5.9hz,1h),6.17(s,1h),3.67(d,j＝11.9hz,2h),3.18–3.01(m,5h),2.96(d,j＝13.2hz,2h),2.82(t,j＝11.4hz,1h),2.46(t,j＝11.3hz,1h),1.14(d,j＝6.2hz,3h)。
制備實施例10化合物s10的制備
化合物10-1的合成方法與5-5相同。
化合物10-2的合成方法與s1相同。
化合物s10的合成方法與s3相同。s10的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.15(d,j＝5.7hz,1h),8.03(s,1h),7.85(d,j＝8.1hz,1h),7.76(d,j＝8.6hz,2h),7.57(d,j＝5.9hz,2h),7.46(t,j＝7.6hz,1h),7.38–7.31(m,1h),6.89(d,j＝8.7hz,2h),6.70–6.62(m,1h),6.13(d,j＝3.6hz,1h),3.67(d,j＝11.1hz,2h),3.09(d,j＝4.7hz,3h),2.99(td,j＝9.1,4.4hz,2h),2.41(t,j＝11.2hz,2h),1.15(d,j＝6.2hz,6h)。
制備實施例11化合物s11的制備
化合物11-1的合成方法與5-5相同。
化合物s11的合成方法與s1相同。s11的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝9.2hz,1h),8.06(d,j＝5.7hz,1h),7.89(s,1h),7.79(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝8.6hz,2h),7.52(d,j＝6.8hz,2h),7.42(t,j＝7.5hz,1h),7.27(d,j＝5.5hz,2h),6.84(d,j＝8.8hz,2h),6.64(d,j＝5.7hz,1h),3.62(t,j＝5.3hz,2h),3.28(s,6h),2.61(s,5h),2.54(t,j＝5.4hz,2h)。
制備實施例12化合物s12的制備
化合物12-1的合成參考文獻(xiàn)方法wo2013170774。
化合物12-2的合成方法與5-5相同。
化合物s12的合成方法與s1相同。s12的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),8.43(d,j＝9.2hz,1h),8.15(d,j＝5.8hz,2h),8.03(d,j＝6.7hz,1h),8.00–7.92(m,2h),7.86(d,j＝8.1hz,1h),7.59(d,j＝6.7hz,2h),7.49(t,j＝7.6hz,1h),7.35(d,j＝9.1hz,1h),6.69(d,j＝5.3hz,1h),3.71(s,2h),3.11(d,j＝4.8hz,3h),2.54(s,8h),2.32(s,4h).
制備實施例13化合物s13的制備
化合物13-1的合成方法與5-5相同。
化合物13-2的合成方法與s1相同。
化合物s13的合成方法與s3相同。s13的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ12.38(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.21–8.10(m,2h),8.05(s,1h),7.84(d,j＝8.2hz,1h),7.55(d,j＝6.4hz,2h),7.45(t,j＝7.6hz,1h),7.34(d,j＝11.1hz,1h),6.93(dd,j＝17.1,8.9hz,2h),6.64(d,j＝5.5hz,1h),6.23(s,1h),3.48(s,2h),3.12–3.03(m,5h),2.84(s,3h),2.53(t,j＝10.8hz,2h),1.14(d,j＝6.3hz,6h).
制備實施例14化合物s14的制備
化合物14-1的合成方法與5-5相同。
化合物14-2的合成方法與s1相同。
化合物s14的合成方法與s3相同。s14的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ10.28(s,1h),8.37(d,j＝9.2hz,1h),8.17(d,j＝5.7hz,1h),8.09(s,1h),7.98(d,j＝8.9hz,1h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.53(d,j＝6.9hz,2h),7.45(d,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝9.3hz,1h),6.63(d,j＝6.3hz,1h),6.53(d,j＝8.8hz,1h),6.36(s,1h),6.27(d,j＝4.6hz,1h),4.05(s,3h),3.64(d,j＝11.9hz,2h),3.05(d,j＝4.8hz,3h),2.98(d,j＝6.6hz,2h),2.42(t,j＝11.2hz,2h),1.15(d,j＝6.2hz,6h).
制備實施例15化合物s15的制備
化合物15-1的合成方法與5-5相同。
化合物15-2的合成方法與s1相同。
化合物s15的合成方法與s3相同。s15的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.12(d,j＝5.6hz,1h),7.91(d,j＝8.9hz,1h),7.79(d,j＝8.2hz,1h),7.50(d,j＝7.0hz,1h),7.491–7.43(m,2h),7.24(d,j＝2.3hz,1h),6.75(d,j＝7.7hz,2h),6.41(d,j＝8.8hz,1h),6.27(s,1h),6.13(s,1h),3.67(d,j＝10.9hz,2h),3.12–3.03(m,5h),2.45(t,j＝11.2hz,2h),2.25(s,3h),1.17(d,j＝6.8hz,6h)。
制備實施例16化合物s16的制備
化合物16-1的合成方法與5-5相同。
化合物16-2的合成方法與s1相同。
化合物s16的合成方法與s3相同。s16的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.77(s,2h),8.49–8.36(m,2h),8.15(d,j＝5.7hz,1h),7.97(s,1h),7.85(d,j＝8.3hz,1h),7.57(d,j＝6.8hz,2h),7.51–7.44(m,1h),7.34(d,j＝9.2hz,1h),6.67(d,j＝3.5hz,1h),6.11(d,j＝5.7hz,1h),4.77(d,j＝12.7hz,2h),3.10(d,j＝4.7hz,3h),2.94–2.81(m,2h),2.54(t,j＝11.7hz,2h),1.25(s,1h),1.16(d,j＝6.2hz,6h).
制備實施例17化合物s17的制備
化合物17-1的合成方法與5-5相同。
化合物s17的合成方法與s1相同。s17的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.61(s,1h),8.40(d,j＝9.0hz,1h),8.19(d,j＝5.6hz,1h),8.02(d,j＝1.8hz,1h),7.85(d,j＝8.3hz,1h),7.57(d,j＝6.7hz,2h),7.47(t,j＝7.5hz,1h),7.42(s,1h),7.36(d,j＝9.2hz,1h),6.71–6.64(m,1h),6.08(d,j＝4.5hz,1h),3.58–3.52(m,4h),3.10(d,j＝4.9hz,3h),2.56–2.49(m,4h),2.36(s,3h).
制備實施例18化合物s18的制備
化合物18-1的合成方法與5-5相同。
化合物s18的合成方法與s1相同。s18的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.26(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,1h),8.18(d,j＝5.6hz,1h),7.98(s,1h),7.85(d,j＝8.2hz,1h),7.76(s,1h),7.58(d,j＝7.1hz,2h),7.47(t,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝9.3hz,1h),6.67(d,j＝3.8hz,1h),6.05(d,j＝14.5hz,1h),3.56(s,4h),3.10(d,j＝4.8hz,3h),2.49(s,4h),2.34(s,3h).
制備實施例19化合物s19的制備
化合物19-1的合成方法參照文獻(xiàn)方法wo2012040137。
化合物19-2的合成：
將1eq的cdi[羰基二咪唑]溶于干燥的thf[四氫呋喃]中，向里加化合物19-1，40℃下反應(yīng)30分鐘，然后向里加氨水(20eq)的四氫呋喃溶液，30℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后直接投下一步反應(yīng)。
化合物s19的合成方法與s1相同。s19的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.62(s,1h),8.63–8.51(m,1h),8.43(s,1h),8.33(d,j＝9.3hz,1h),8.27(d,j＝5.7hz,1h),8.10(s,1h),8.02(dd,j＝6.9,2.0hz,1h),7.82(dd,j＝6.8,1.9hz,2h),7.59(d,j＝7.0hz,2h),7.45(dd,j＝9.2,2.5hz,1h),6.80(dd,j＝5.8,2.0hz,1h),4.94(t,j＝5.3hz,1h),4.14(t,j＝5.2hz,2h),3.72(q,j＝5.4hz,2h),2.86(d,j＝4.4hz,3h).
制備實施例20化合物s20的制備
化合物20-1的合成方法與1-7相同。
化合物20-2的合成方法與s1相同。
化合物s20的合成方法與s3相同。s20的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.19(s,1h),8.34(d,j＝5.3hz,1h),8.17(d,j＝9.2hz,1h),7.68(d,j＝8.1hz,1h),7.60(d,j＝8.3hz,2h),7.51(s,1h),7.41(dd,j＝11.5,5.6hz,2h),7.30(d,j＝7.8hz,1h),7.15(d,j＝9.0hz,1h),6.63(d,j＝8.5hz,2h),6.41(d,j＝5.6hz,1h),3.45(d,j＝12.3hz,2h),2.91–2.79(m,5h),2.48–2.32(m,2h),1.09(d,j＝6.2hz,6h)。
制備實施例21化合物s21的制備
化合物21-2的合成方法與s1相同。
化合物21-3的合成：
將化合物21-2溶于乙醇中，加入氯化銨(10eq)的水溶液，然后加入鐵粉(5eq)，80℃下反應(yīng)5h。反應(yīng)完全后，抽濾，濾液旋干，然后用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，dcm：meoh＝30:1得化合物21-3。
化合物s21的合成：
將化合物21-3溶于干燥的二氯甲烷中，氮氣保護，冰浴下加入丙烯酰氯(1.3eq)，然后加入dipea(2eq)，加畢升至室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，dcm：meoh＝30:1得化合物s21。化合物s21的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝8.9hz,1h),8.05(d,j＝5.7hz,2h),7.85(s,1h),7.76(d,j＝8.4hz,1h),7.65(s,1h),7.49(d,j＝7.4hz,3h),7.36(dt,j＝16.1,8.1hz,2h),7.25(d,j＝2.3hz,1h),6.64(d,j＝6.0hz,1h),6.37–6.15(m,2h),5.65(d,j＝9.9hz,1h),2.95(s,3h)。
制備實施例22化合物s22的制備
化合物22-1的合成方法與21-3相同。
化合物s22的合成方法與s21相同，化合物s22的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,dmso)δ10.76(s,1h),10.41(s,1h),8.53(d,j＝6.5hz,1h),8.39–8.28(m,2h),8.09–8.00(m,1h),7.97(d,j＝8.6hz,2h),7.88–7.80(m,2h),7.75(d,j＝8.8hz,2h),7.59(d,j＝7.0hz,2h),6.84(d,j＝5.5hz,1h),6.46(dd,j＝17.4,10.3hz,1h),6.29(d,j＝17.3hz,1h),5.80(d,j＝12.6hz,1h),2.86(d,j＝4.5hz,3h)。
制備實施例23化合物s23的制備
化合物23-1的合成方法參照文獻(xiàn)方法wo2013024130。
化合物s23的合成：
將化合物21-3溶于乙醇中，加入化合物23-1(2eq)，然后再加入dipea(2eq),75℃下反應(yīng)兩天。反應(yīng)完全后，旋干反應(yīng)液，然后用二氯甲烷和水萃取，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，dcm：meoh＝20:1得化合物s23?；衔飐23的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.67(s,1h),8.34(d,j＝9.2hz,1h),8.11(d,j＝5.8hz,1h),7.97(d,j＝2.3hz,1h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.56–7.49(m,2h),7.43(t,j＝7.6hz,1h),7.31(dd,j＝9.1,2.4hz,1h),6.65(dd,j＝5.8,2.3hz,1h),6.49(d,j＝8.4hz,2h),6.43(d,j＝5.3hz,1h),4.54(t,j＝5.9hz,1h),3.76–3.64(m,4h),3.06(dd,j＝10.8,5.2hz,5h),1.82(s,1h),1.73–1.54(m,4h)。
制備實施例24化合物s24的制備
化合物24-1的合成
將化合物1-6溶于甲醇中，冰浴下加入氯化亞砜(1.5eq)，加完升至60℃下反應(yīng)5h。反應(yīng)完全后，旋干反應(yīng)液，用dcm和飽和碳酸氫鈉溶液萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后直接投下一步反應(yīng)。
化合物24-2的合成方法與s1相同。
化合物s24的合成方法與s3相同。s24的分析數(shù)據(jù)：1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),8.45(d,j＝9.2hz,1h),8.21(d,j＝5.7hz,1h),8.09(s,1h),7.92(d,j＝8.1hz,1h),7.81(d,j＝8.6hz,2h),7.63(d,j＝5.9hz,2h),7.51(t,j＝7.6hz,1h),7.47–7.40(m,1h),6.95(d,j＝8.7hz,2h),6.85–6.78(m,1h),6.13(d,j＝3.6hz,1h),3.91(s,3h),3.65(d,j＝11.1hz,2h),2.94(td,j＝9.1,4.4hz,2h),2.39(t,j＝11.2hz,2h),1.14(d,j＝6.2hz,6h)。
二、試驗實施例
1、化合物對受體酪氨酸激酶fgfr1酶活抑制初步評價實驗
試驗方法：
1、酶反應(yīng)底物poly(glu,tyr)4:1用無鉀離子的pbs(10mm磷酸鈉緩沖液，150mmnacl，ph7.2-7.4)稀釋成20μg/ml，125μl/孔包被酶標(biāo)板，置37℃反應(yīng)12-16小時。棄去孔中液體。洗板，用t-pbs(含0.1％tween-20的無鉀離子的pbs，200μl/孔)洗板三次，每次5分鐘。于37℃烘箱中干燥酶標(biāo)板1-2小時。
2、每孔加入以反應(yīng)緩沖液(50mmhepesph7.4,50mmmgcl2,0.5mmmncl2,0.2mmna3vo4,1mmdtt)稀釋的atp溶液49μl，每孔中加入1μl待測試化合物，再加入50μl以反應(yīng)緩沖液稀釋的fgfr1激酶域重組蛋白啟動反應(yīng)，每次實驗需設(shè)無atp對照孔兩孔。置37℃搖床(100rpm)反應(yīng)1小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。
3、加入抗體py99稀釋液(抗體用含bsa5mg/ml的t-pbs1:500稀釋)，100μl/孔，37℃搖床反應(yīng)0.5小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。
4、加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗稀釋液(抗體用含bsa5mg/ml的t-pbs1:2000稀釋)，100μl/孔，37℃搖床反應(yīng)0.5小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。
5、加入2mg/ml的opd顯色液100μl/孔【用含有0.03％h2o2的0.1m檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ph＝5.4)稀釋】，25℃避光反應(yīng)1-10分鐘。
6、加入2mh2so450μl/孔中止反應(yīng)，用可調(diào)波長式微孔板酶標(biāo)儀versamax讀數(shù)，波長為490nm。
7、結(jié)果分析
ic50值采用酶標(biāo)儀隨機附帶軟件以四參數(shù)法回歸求得。
化合物對受體酪氨酸激酶fgfr酶活抑制水平見下表：
2、化合物對受體酪氨酸激酶fgfr細(xì)胞水平活性評價
試驗方法：
化合物對snu16細(xì)胞的增殖抑制作用以cck-8細(xì)胞計數(shù)試劑盒(dojindo)檢測。具體步驟如下：處于對數(shù)生長期的snu16細(xì)胞按合適密度接種至96孔培養(yǎng)板中，每孔90μl，培養(yǎng)過夜后，加入不同濃度的化合物作用72hr，并設(shè)定溶劑對照組(陰性對照)。待化合物作用細(xì)胞72h后，化合物對細(xì)胞增殖的影響采用cck-8細(xì)胞計數(shù)試劑盒(dojindo)檢測，每孔加入10μlcck-8試劑，置于37℃培養(yǎng)箱中放置2-4小時后，用全波長式微孔板酶標(biāo)儀spectramax190讀數(shù)，測定波長為450nm。
采用以下列公式計算化合物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率(％)：
抑制率(％)＝(od對照孔-od給藥孔)/od對照孔×100％
ic50值采用酶標(biāo)儀隨機附帶軟件以四參數(shù)法回歸求得。
化合物對snu16細(xì)胞的增殖抑制率見下表：
3、酪氨酸激酶活性抑制體外篩選試驗
篩選方法：酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)
酪氨酸激酶：酶譜
作用時間：1h
表1.化合物對酪氨酸激酶活性的抑制率(％)
表2.化合物對酪氨酸激酶活性的抑制率(％)
4、部分化合物大鼠藥動學(xué)研究試驗
1)給藥方案
sd大鼠7只，雄性，體重200-220g，隨機分成2組，每組4或3只，灌胃或靜脈給予化合物s10具體安排見下表：
試驗前禁食12h，自由飲水。給藥后2h統(tǒng)一進食。
采血時間點及樣品處理：
灌胃給藥：給藥后0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；
靜脈給藥：給藥后5min，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；
在以上設(shè)定時間點經(jīng)大鼠眼球后靜脈叢取靜脈血0.3ml，置肝素化試管中，11000rpm離心5min，分離血漿，于-20℃冰箱中冷凍。
2)樣品測試和數(shù)據(jù)分析
采用lc/ms/ms法測定大鼠血漿中s10。
采用winnonlin6.3軟件(美國pharsight公司)的非房室模型計算給藥后的藥代動力學(xué)參數(shù)。
達(dá)峰濃度cmax和達(dá)峰時間tmax為實測值；
藥時曲線下面積auc0-t值：采用梯形法計算；auc0-∞＝auc0-t+ct/ke，ct為最后一個可測得時間點的血藥濃度；
ke為消除速率常數(shù)；
消除半衰期t1/2＝0.693/ke；
清除率cl＝d/auc0-∞；
穩(wěn)態(tài)分布容積vss＝cl×mrt；
絕對生物利用度f＝(auc灌胃×d靜脈)/(auc靜脈×d灌胃)×100％。
3)試驗結(jié)果
由此可見，新設(shè)計的化合物對fgfr具有優(yōu)異的酶抑制活性，對依賴的細(xì)胞增殖也具有明顯的抑制活性，且其中的代表性化合物s10還具有良好的藥代性質(zhì)。因此，這類化合物作為新型fgfr抑制劑具有良好的研發(fā)前景。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。