本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種新型烏苯美司重結(jié)晶方法。

背景技術(shù)：

烏苯美司是從鏈霉菌屬(Streptomycesofivorecticuli)的培養(yǎng)液中分離所得的化合物，可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制氨肽酶B(aminopeptidaseN/CD13)及亮氨酸肽酶(Leucineamino-Peptidase)。烏苯美司能夠增強(qiáng)T細(xì)胞的功能，使NK細(xì)胞的殺傷活力增強(qiáng)，且可使集落刺激因子合成增加而刺激骨髓細(xì)胞的再生及分化。本品能干擾腫瘤細(xì)胞的代謝，抑制腫瘤細(xì)胞增生，使腫瘤細(xì)胞凋亡，并激活人體細(xì)胞免疫功能，刺激細(xì)胞因子的生成和分泌，促進(jìn)抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞的產(chǎn)生和增殖，用于抗癌化療、放療的輔助治療，老年性免疫功能缺陷等。可配合化療、放療及聯(lián)合應(yīng)用于白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合癥及造血干細(xì)胞移植后，以及其它實(shí)體瘤患者。

現(xiàn)有烏苯美司粗品重結(jié)晶工藝是將烏苯美司粗品溶于稀鹽酸(pH約等于0)中，再向?yàn)醣矫浪镜柠}酸鹽水溶液中滴加堿溶液調(diào)節(jié)pH，使烏苯美司析出。該方法使用單向滴加的結(jié)晶方式，在體系PH在2～4時(shí)，會(huì)生成分子間聚合物，會(huì)產(chǎn)生瞬間結(jié)塊的現(xiàn)象，如果濃度較大結(jié)塊會(huì)導(dǎo)致攪拌器無法運(yùn)轉(zhuǎn)，使生產(chǎn)無法繼續(xù)，同時(shí)也容易損壞攪拌器電機(jī)，此時(shí)需加入大量的純化水將結(jié)塊化開,才能繼續(xù)生產(chǎn)，這樣就會(huì)降低收率。

同時(shí)中國專利CN103360277A還公開了一種烏苯美司重結(jié)晶的方法，是將烏苯美司鹽酸鹽溶液和堿溶液同時(shí)滴加至重結(jié)晶容器中，控制滴加速度使體系的pH值保持在3-6之間，然后析晶過濾制得烏苯美司精制品，采用該方法雖然一定程度上提高了烏苯美司的純度，但依然存在部分結(jié)塊的問題，影響生產(chǎn)進(jìn)程，且其整體收率未達(dá)到生產(chǎn)要求，有待進(jìn)一步地深入研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題，提供一種新型烏苯美司重結(jié)晶方法，該方法使用原料酸溶液與堿夜雙向同時(shí)滴加的方式并精準(zhǔn)控制PH，避免了原雙向滴加方式中產(chǎn)生物料結(jié)塊的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種新型烏苯美司重結(jié)晶方法，包括以下步驟：

(1)在PH值為7的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液中，加入烏苯美司粗品，攪拌，加熱至溫度為55-65℃，滴加濃度為16-20％的鹽酸溶液至烏苯美司粗品完全溶解，過濾，得烏苯美司鹽酸溶液；

(2)在冰水浴控制體系溫度在4℃以下的純化水中，同時(shí)滴加烏苯美司鹽酸溶液和濃度為3-7％的氨水，控制兩種溶液的滴加速度，使反應(yīng)體系的PH值保持在5-7，烏苯美司鹽酸溶液滴加完畢后，攪拌析晶10-24h，過濾；

(3)采用純化水對(duì)過濾后的濾餅進(jìn)行洗滌，抽濾，于溫度35-45℃下減壓干燥至恒重，制得烏苯美司精品。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液的用量是烏苯美司粗品質(zhì)量的2-5倍。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中所述溫度為60℃。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中鹽酸溶液的濃度為18.5％。

進(jìn)一步地，所述步驟(2)中氨水的濃度為5％。

進(jìn)一步地，所述步驟(3)干燥溫度為40℃。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中還加入烏苯美司粗品質(zhì)量0.5-1.5％的蔗糖。

進(jìn)一步地，所述步驟(1)中還加入烏苯美司粗品質(zhì)量0.1-0.5％的氯化鈉或氯化鉀。在提純過程中加入NaCl或蔗糖能夠有效減少結(jié)塊現(xiàn)象的產(chǎn)生。

本發(fā)明的還提供了另一種采用有機(jī)溶劑對(duì)烏苯美司粗品重結(jié)晶方法，將烏苯美司粗品或上述采用雙向滴加重結(jié)晶后的烏苯美司精品加入甲醇和乙酸乙酯或甲苯的混合溶液中，加熱揮發(fā)甲醇，烏苯美司結(jié)晶析出，過濾，干燥，得高純度的烏苯美司精品。該方法可用在對(duì)上述第一種結(jié)晶的烏苯美司結(jié)晶做進(jìn)一步提純，也可以單獨(dú)對(duì)烏苯美司粗品進(jìn)行結(jié)晶提純。

進(jìn)一步地，所述烏苯美司粗品在混合溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為,15-30％，優(yōu)選的為 25％。所述甲醇或乙醇在混合溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40-60％，優(yōu)選的為50％。所述加熱揮發(fā)的溫度45-60℃；攪拌轉(zhuǎn)速為40-50rpm，時(shí)間為0.5-1小時(shí)。所述干燥采用真空鼓風(fēng)干燥，溫度為60-65℃，干燥時(shí)間為0.5-1小時(shí)。

進(jìn)一步地，所述烏苯美司粗品采用以下步驟制備：

在20L三口燒瓶中依次加入369g(2S,3R)-4-苯基-3-氨基-2-羥基-丁酸、569g 4，6-二甲基嘧啶基-2-硫代甲酸芐酯、1.79L四氫呋喃、7.09L水和288g三乙胺，攪拌下室溫反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢，減壓蒸干，水洗，用12L乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥、過濾。減壓蒸去部分溶劑，加入2L石油醚，攪拌低溫析晶，過濾。濾餅45℃減壓干燥，得產(chǎn)物535g(I)(2S,3R)-4-苯基-3-芐氧甲酰胺基-2-羥基-丁酸。

將530g化合物(I)、697g亮氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽、257g 1-羥基苯并三唑、395g二環(huán)己基碳二亞胺和5.3L四氫呋喃依次投入反應(yīng)容器，攪拌并冷卻至0℃，滴加178g三乙胺，滴加完畢后于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。反應(yīng)完畢，過濾，收集濾液，減壓蒸干。加入13.5L乙酸乙酯溶解殘留物，水洗，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去部分溶劑，加入2L石油醚攪拌析晶。過濾，濾餅45℃減壓干燥，得產(chǎn)物825g(II)N-[(2S,3R)-4-苯基-3-芐氧甲酰胺基-2-羥基-丁酰]-L-亮氨酸芐酯。

將上述產(chǎn)物(II)在Pa的作用下進(jìn)一步反應(yīng)生成N-[(2S,3R)-4-苯基-3-氨基-2-羥基丁酰]-L-亮氨酸，得烏苯美司粗品。

本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：

本發(fā)明方法使用烏苯美司酸溶液與堿夜雙向同時(shí)滴加的方式控制PH，使用PH緩沖液作為分散體系，使PH控制更加精準(zhǔn)，避免了現(xiàn)有技術(shù)中容易產(chǎn)生結(jié)塊的問題，生產(chǎn)過程更加容易控制，質(zhì)量更加穩(wěn)定；提高了產(chǎn)品純度，也增加了產(chǎn)率，減少氨水及鹽酸的使用量，在降低成本的同時(shí)也減少了三廢的產(chǎn)生，更加環(huán)保。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種新型烏苯美司重結(jié)晶方法。

下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā) 明，但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。

實(shí)施例1

(1)在三口燒瓶中加入1000mlPH值為7的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液，加入烏苯美司粗品350g，攪拌，加熱至溫度為60℃，滴加18.5％的鹽酸溶液102ml，粗品完全溶解，過濾，得烏苯美司鹽酸溶液；

(2)另取三口燒瓶加入2000ml純化水，冰水浴控制體系溫度在4℃以下，同時(shí)滴加烏苯美司鹽酸溶液和5％的氨水，控制兩種溶液的滴加速度，使反應(yīng)體系的PH值保持在5-7，烏苯美司鹽酸溶液滴加完畢，氨水滴加量為74ml，攪拌析晶15h，過濾，得濾餅；

(3)濾餅采用少量純化水對(duì)過濾后的濾餅進(jìn)行洗滌，抽濾，于溫度40℃下減壓干燥至恒重。

實(shí)施例2

(1)在三口燒瓶中加入1000mlPH值為7的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液，加入烏苯美司粗品350g，并加入1.7g氯化鈉固體，攪拌，加熱至溫度為60℃，滴加18.5％的鹽酸溶液96ml，粗品完全溶解，過濾，得烏苯美司鹽酸溶液；

(2)另取三口燒瓶加入2000ml純化水，冰水浴控制體系溫度在4℃以下，同時(shí)滴加烏苯美司鹽酸溶液和5％的氨水，控制兩種溶液的滴加速度，使反應(yīng)體系的PH值保持在5-7，烏苯美司鹽酸溶液滴加完畢，氨水滴加量為77ml，攪拌析晶15h，過濾，得濾餅；

(3)濾餅采用少量純化水對(duì)過濾后的濾餅進(jìn)行洗滌，抽濾，于溫度40℃下減壓干燥至恒重。

實(shí)施例3

(1)在三口燒瓶中加入1000mlPH值為7的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液，加入烏苯美司粗品350g，并加入3.5g蔗糖，攪拌，加熱至溫度為60℃，滴加18.5％的鹽酸溶液80ml，粗品完全溶解，過濾，得烏苯美司鹽酸溶液；

(2)另取三口燒瓶加入2000ml純化水，冰水浴控制體系溫度在4℃以下，同時(shí)滴加烏苯美司鹽酸溶液和5％的氨水，控制兩種溶液的滴加速度，使反應(yīng)體系的PH值保持在5-7，烏苯美司鹽酸溶液滴加完畢，氨水滴加量為61ml，攪拌析晶15h，過濾，得濾餅；

(3)濾餅采用少量純化水對(duì)過濾后的濾餅進(jìn)行洗滌，抽濾，于溫度40℃下減壓干燥至恒重。

對(duì)比例 采用中國專利公開號(hào)為CN103360277A的方法，對(duì)烏苯美司粗品進(jìn)行重結(jié)晶，對(duì)比例1-3。

具體方法：在三口燒瓶中加入1000ml純化水，開啟攪拌，加入烏本美司粗品350g，加熱至60±2℃，滴加鹽酸(18.5％)至粗品溶解，過濾，得到烏苯美司鹽酸溶液。另取三口燒瓶加入2000ml純化水，開啟攪拌，冰水浴控制體系溫度在0℃左右，同時(shí)滴加烏苯美司鹽酸溶液和氨水(4％)，控制兩種溶液的滴加速度，使反應(yīng)體系的pH值保持在3-4左右。待酸液滴加完畢后，用氨水(1％)微調(diào)pH＝5-6，析晶24h后進(jìn)行過濾，得烏苯美司產(chǎn)品。

采用上述方法分別進(jìn)行三組對(duì)比例1-3，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果與實(shí)施例1-3對(duì)比分析以及檢測(cè)結(jié)果如下表：

總結(jié)：從上述對(duì)比例與本發(fā)明實(shí)施例的數(shù)據(jù)匯總表中可以看出，同樣是350g 粗品投料，新工藝的鹽酸及氨水用量大幅少于老工藝，總收率有大約10個(gè)百分點(diǎn)的提高，有關(guān)物質(zhì)及含量沒有明顯差異，都符合標(biāo)準(zhǔn)，且在提純過程中加入NaCl或蔗糖能夠有效減少結(jié)塊現(xiàn)象的產(chǎn)生，提高了總收率。

以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。