相關(guān)申請本申請要求2014年12月23日提交的臨時(shí)申請62/096,491的權(quán)益，并且該臨時(shí)申請通過引用以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。序列表提供ascii文本格式的序列表作為紙質(zhì)副本的替代，該序列表是根據(jù)37c.f.r.§1.821提交的，名稱為“80291uspspseqlisting_st25.txt”，大小為39千字節(jié)，于2015年11月17日生成并經(jīng)efs-web提交。這個(gè)序列表通過引用以其披露內(nèi)容結(jié)合到本說明書中。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體上涉及由其攝食活動(dòng)而引起對(duì)作物植物損害的有害生物的控制，并且更具體地涉及通過包括干擾rna分子的組合物控制鞘翅目有害生物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包括干擾rna分子的組合物并且涉及使用此類組合物的方法。背景根螢葉甲屬中的昆蟲種類(玉米根蟲和黃瓜葉甲)被認(rèn)為是對(duì)作物植物最重要的有害生物中的一些。例如，玉米根蟲的種類，包括西方玉米根螢葉甲(diabroticavirgiferavirgifera)，西方玉米根蟲(wcr)；巴氏根螢葉甲(d.barberi)，北方玉米根蟲(ncr)，黃瓜十一星葉甲食根亞種(d.undecimpunctatahowardi)，南方玉米根蟲(scr)及墨西哥玉米根螢葉甲(d.virgiferazeae)，墨西哥玉米根蟲(mcr)，是北美最具破壞性的玉米有害生物，每年導(dǎo)致估計(jì)超過十億美元的損失。西方玉米根蟲也已經(jīng)入侵歐洲并且每年導(dǎo)致估計(jì)五億歐元損失。南美葉甲(除了別的之外，俗名包括葉甲、巴西小甲蟲、葫蘆甲蟲及菊花甲蟲)在南美是一種重要的玉米、大豆及花生有害生物。玉米損失的大部分由根蟲幼蟲攝食導(dǎo)致。剛孵出的根蟲幼蟲位于土壤中的玉米根部并且最初開始攝食細(xì)根毛并鉆入玉米植物的根尖中。隨著幼蟲長大，它們攝食初生根并挖隧道進(jìn)入其中。當(dāng)根蟲數(shù)量巨大時(shí)，幼蟲攝食和由根腐病病原體導(dǎo)致的受損根的劣變可以導(dǎo)致根減少至莖的基部。嚴(yán)重的根損傷干擾根將水和營養(yǎng)素運(yùn)輸進(jìn)植物的能力，減少植物生長，并且導(dǎo)致減少的谷物產(chǎn)量。嚴(yán)重的根損傷還可以導(dǎo)致玉米植物的倒伏，使得機(jī)械收獲更困難或不可能。玉米根蟲成蟲主要攝食玉米須、花粉以及暴露的穗尖上的籽粒。如果玉米根蟲成蟲在玉米生殖組織存在之前開始出現(xiàn)，則成蟲可以攝食葉組織，刮掉綠色的表面組織并且留下窗玻璃外觀。成蟲攝食穗絲可以導(dǎo)致穗尖處的穗絲減少，通常稱作穗絲修剪(silkclipping)。在大田玉米中，甲蟲種群在花粉散發(fā)過程中可以達(dá)到足以導(dǎo)致嚴(yán)重的穗絲修剪的程度，這可以干擾授粉并減少收率。因此，不像僅幼蟲期導(dǎo)致?lián)p失的玉米的鱗翅目有害生物，玉米根蟲的幼蟲期和成蟲期都能夠?qū)τ衩讓?dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失。根螢葉甲屬昆蟲有害生物主要是通過密集應(yīng)用化學(xué)殺有害生物劑來控制，這些化學(xué)殺有害生物劑通過抑制昆蟲生長、預(yù)防昆蟲攝食或繁殖或?qū)е滤劳龆梢杂行?duì)抗幼蟲期和成蟲期。由此可以達(dá)到良好的昆蟲控制，但這些化學(xué)品有時(shí)也會(huì)影響其他益蟲。另外的問題出現(xiàn)在使用高殺蟲劑的區(qū)域中，在這些區(qū)域中玉米根蟲甲蟲種群對(duì)某些殺蟲劑已經(jīng)變得有抗性。通過各種抗性管理實(shí)踐已部分地緩和了這種狀況，但對(duì)于可替代的害蟲控制劑存在著越來越多的需要。來自蘇云金芽孢桿菌的若干天然cry蛋白或工程化的cry蛋白已經(jīng)在轉(zhuǎn)基因作物植物中表達(dá)并且在商業(yè)上被開發(fā)以控制某些鱗翅目和鞘翅目昆蟲有害生物。例如，起始于2003年，通過表達(dá)cry3bb1、cry34ab1/cry35ab1、或修飾的cry3a(mcry3a)或cry3ab(ecry3.1ab)蛋白而控制玉米根蟲的轉(zhuǎn)基因玉米雜交種在美國已經(jīng)是可商購的。種子產(chǎn)業(yè)、大學(xué)研究員以及美國環(huán)境保護(hù)局已經(jīng)一起合作來制定管理計(jì)劃，以幫助緩解昆蟲對(duì)表達(dá)殺蟲蛋白的轉(zhuǎn)基因植物的抗性的發(fā)生。它們主要是基于高劑量以及避護(hù)所策略。針對(duì)玉米的高劑量策略是使用表達(dá)甚至足夠殺死部分抗性昆蟲的高水平的殺蟲蛋白(例如cry蛋白)的玉米雜交種?；A(chǔ)的假設(shè)是殺死部分抗性的昆蟲并且大力防止它們交配，從而延遲了抗性的產(chǎn)生。高劑量策略的成功部分取決于殺蟲蛋白對(duì)具體昆蟲種類的特異性活性以及多少該殺蟲蛋白可以被表達(dá)于轉(zhuǎn)基因玉米植物中。殺蟲蛋白對(duì)有害生物的特異性活性越高，需要表達(dá)于轉(zhuǎn)基因植物中以實(shí)現(xiàn)高劑量策略的殺蟲蛋白的量越少。例如，表達(dá)鱗翅目-有效cry蛋白(cry1ab)的玉米雜交種被認(rèn)為對(duì)抗主要靶標(biāo)有害生物歐洲玉米螟(玉米螟)是高劑量的。由于cry1ab以lc50<10ng/cm2對(duì)于歐洲玉米螟幼蟲很具毒性(即，高特異性活性)，在轉(zhuǎn)基因植物中可實(shí)現(xiàn)的cry1ab表達(dá)水平很容易將這樣的玉米雜交種置于一種高劑量范疇中。然而，不像鱗翅目-有效產(chǎn)品，當(dāng)前根蟲產(chǎn)品不被認(rèn)為是高劑量的。它們表達(dá)的蛋白不有效對(duì)抗成蟲并且對(duì)晚齡幼蟲具有有限活性。因此，當(dāng)前轉(zhuǎn)基因根蟲產(chǎn)品允許一些根蟲幼蟲存活并成為成蟲。因此，由玉米根蟲成蟲導(dǎo)致的穗絲修剪的經(jīng)濟(jì)水平仍可以甚至出現(xiàn)在種植為轉(zhuǎn)基因玉米根蟲雜交種的部分大田中。例如，西方玉米根蟲成蟲的密度可以在種植為轉(zhuǎn)基因玉米根蟲雜交種的部分大田中超過經(jīng)濟(jì)水平，這歸因于甲蟲的遷入以及成蟲從轉(zhuǎn)基因根系的直接羽化。已經(jīng)有許多報(bào)道確認(rèn)西方玉米根蟲成蟲羽化自某些玉米轉(zhuǎn)基因根蟲雜交種(crowder等人，2005.j.econ.entomol.[經(jīng)濟(jì)昆蟲學(xué)雜志]98:534-551)。另一個(gè)出版物表明，當(dāng)在大田中遇到一些轉(zhuǎn)基因玉米植物或非轉(zhuǎn)基因玉米植物時(shí)，西方玉米根蟲成蟲將展現(xiàn)出類似的攝食行為，并且表明轉(zhuǎn)基因植物中的某些殺蟲蛋白對(duì)可能影響抗性管理的成蟲將具有顯著效果是不太可能的。因此，鑒定具有新作用模式的替代昆蟲控制試劑將是有益的。特別有用的將可以是對(duì)靶標(biāo)昆蟲有害生物的多個(gè)生活期具有毒性的新昆蟲控制試劑。此類昆蟲控制試劑可以包括靶向遺傳因子(例如對(duì)于靶標(biāo)昆蟲有害生物的生長和存活必不可少的基因)的那些昆蟲控制試劑。將調(diào)控dna元件組裝成精確的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)于體內(nèi)dna復(fù)制和轉(zhuǎn)錄均是重要的(lee等人，1993.cell[細(xì)胞]72:73-84；felsenfeld(1992)nature[自然].355:209)。在真核細(xì)胞中，核dna作為染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的序位存在，從而導(dǎo)致核dna被壓縮約10,000倍(davie和hendzel.1994.j.cell.biochem.[細(xì)胞生物化學(xué)雜志]55:98)。染色質(zhì)的延長的10nm纖維狀的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元是核小體(vanholde.1988.chromatin[染色質(zhì)].newyork:springer-verlag[紐約：斯普林格出版社])。核小體由圍繞組蛋白h2a、h2b、h3和h4的蛋白質(zhì)核心(稱為核心組蛋白)纏繞的146bp的dna組成。這些組蛋白被布置成一個(gè)(h3-h4)2四聚體和位于該四聚體的每個(gè)面上的兩個(gè)h2a-h2b二聚體。連接核小體的dna被稱為連接區(qū)dna；它是與h1或接頭組蛋白連接的連接區(qū)dna。將該10nm纖維進(jìn)一步壓縮成30nm纖維。核心組蛋白的接頭組蛋白和氨基末端區(qū)域(“尾”)保持染色質(zhì)的高階折疊(garciaramirez等人.1992.j.biolchem[生物化學(xué)雜志]267:19587)。當(dāng)dna被轉(zhuǎn)錄或翻譯時(shí)，該染色質(zhì)結(jié)構(gòu)必須松解。因此，組蛋白對(duì)包括昆蟲在內(nèi)的許多生物體的dna的適當(dāng)加工至關(guān)重要。組蛋白功能性在蛋白質(zhì)水平上由許多機(jī)制進(jìn)行自然地調(diào)節(jié)，這些機(jī)制包括調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄阻遏的甲基化、以及通常增加基因轉(zhuǎn)錄的乙?；Ｈ欢?，很少有研究報(bào)道通過例如使用干擾rna(rnai)分子使編碼組蛋白蛋白質(zhì)的基因沉默來調(diào)節(jié)組蛋白在基因水平上的影響。boutros等人(2004；science[科學(xué)]303:832-835)將果蠅細(xì)胞暴露于雙鏈rna(dsrna)分子，以測試果蠅細(xì)胞基因組(包括一些組蛋白基因)中的幾乎全部基因的功能性。得分的表型是細(xì)胞死亡。這項(xiàng)研究的這些結(jié)果表明，dsrna靶向某些組蛋白基因，導(dǎo)致體外兩種果蠅細(xì)胞系中一些細(xì)胞的死亡。然而，靶向在那些果蠅細(xì)胞系中的某些組蛋白基因的作用并不如陽性對(duì)照dsrna靶向細(xì)胞凋亡(iap)基因抑制劑的作用那么大。由于由boutros等人提供的非常有限數(shù)量的研究和結(jié)果的變異性，在任何給定生物體(特別是某些昆蟲物種包括鞘翅目有害生物類(如根螢葉甲屬))中的所有組蛋白基因同樣易受rnai沉默的影響是不清楚的。在有害生物根螢葉甲屬種類中的組蛋白基因可以作為有害生物控制策略而被靶向也是未確定的。此外，使用干擾rna分子可以調(diào)節(jié)此類組蛋白蛋白質(zhì)的表達(dá)，并且如果此類蛋白表達(dá)可以被調(diào)節(jié)，這樣的調(diào)節(jié)是否將導(dǎo)致對(duì)靶標(biāo)根螢葉甲屬有害生物的毒性甚至是更未確定的。當(dāng)一種生物體識(shí)別雙鏈rna(dsrna)分子并水解它們時(shí)，rna干擾(rnai)發(fā)生。所產(chǎn)生的水解產(chǎn)物是約19-24個(gè)核苷酸長度的小rna片段，這些小rna片段稱作小干擾rna(sirna)。然后這些sirna擴(kuò)散或被攜帶至整個(gè)生物體，包括越過細(xì)胞膜，在那里它們與mrna(或其他的rna)雜交并且導(dǎo)致rna的水解。干擾rna由rna干擾沉默復(fù)合體(risc)識(shí)別，rna的效應(yīng)鏈(或“引導(dǎo)鏈”)位于該復(fù)合體中。此引導(dǎo)鏈充當(dāng)雙鏈體序列的識(shí)別和破壞模板。每次sirna與其互補(bǔ)rna靶標(biāo)雜交，該此過程都被重復(fù)，有效防止那些mrna被翻譯，并且因此“沉默”mrna自其中轉(zhuǎn)錄的特異性基因的表達(dá)。大部分植物微小rna(mirna)對(duì)其靶標(biāo)mrna顯示出廣泛的堿基配對(duì)，并引導(dǎo)其裂解(jones-rhoades等人(2006)annu.rev.plantbiol.[植物生物學(xué)年評(píng)]57,19-53；llave等人(2002)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]97,13401-13406)。在其他例子中，干擾rna可以結(jié)合至具有非完美互補(bǔ)性的靶標(biāo)rna分子，導(dǎo)致在沒有mrna降解的情況下的翻譯阻抑。到目前為止，多數(shù)研究的動(dòng)物mirna似乎以此方式發(fā)揮功能。對(duì)于使用這樣的具有殺蟲活性的組合物和方法，例如用于作物保護(hù)或昆蟲介導(dǎo)的疾病的控制存在不斷的需要。需要新穎的組合物來克服對(duì)現(xiàn)有殺蟲劑的抗性問題和/或幫助緩解對(duì)現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因植物方法的抗性的發(fā)展。理想地，此類組合物具有高毒性并且當(dāng)被靶標(biāo)有害生物口服攝取時(shí)是有效的并且對(duì)于使用對(duì)抗有害生物昆蟲的幼蟲期和成蟲期兩者而言具有適用性。因此，提供了其中這些特性中的任一種被增強(qiáng)的組合物的任何發(fā)明將代表本領(lǐng)域的進(jìn)步。發(fā)明概述以上所列出的需要是通過本發(fā)明來滿足的，在多個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了控制經(jīng)濟(jì)上重要的昆蟲有害生物的新方法。本發(fā)明部分地包括一種抑制一種或多種靶基因和蛋白在昆蟲有害生物(例如根螢葉甲屬的成員)中的表達(dá)的方法。具體而言，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)一種或多種組蛋白基因在根螢葉甲屬種類中的表達(dá)的方法，例如西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)、巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)、黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)、墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲)、南美葉甲(diabroticaspeciosa)(菊花甲蟲)以及相關(guān)種類，該方法導(dǎo)致攝食、生長、發(fā)育及繁殖的中止，并且最終導(dǎo)致昆蟲的死亡。該方法包括將包括雙鏈rna(dsrna)的干擾rna分子或其修飾形式(小干擾rna(sirna)序列)引入進(jìn)有害生物昆蟲體內(nèi)的細(xì)胞或進(jìn)入細(xì)胞外環(huán)境(例如中腸)中，其中該dsrna或sirna進(jìn)入這些細(xì)胞中，并且抑制至少一種或多種組蛋白基因的表達(dá)，并且其中該一種或多種組蛋白基因的抑制在該有害生物昆蟲上發(fā)揮有害作用。明確考慮的是，通過在該有害生物的食物中提供一種或多種包括含有dsrna或sirna分子的干擾rna分子的組合物，本發(fā)明的這些方法和組合物將在限制或消除任何植物中或其上的有害生物昆蟲侵染方面是有用的。本發(fā)明還提供了干擾rna分子，當(dāng)遞送至昆蟲有害生物時(shí)，該干擾rna分子通過毒性作用抑制該昆蟲有害生物存活、生長、攝食和/或繁殖的能力，或限制有害生物相關(guān)的損害或作物植物的損失。這樣的遞送可以是通過在轉(zhuǎn)基因植物(例如玉米)中產(chǎn)生干擾rna，或通過將包括干擾rna的組合物局部施用至植物或植物種子(如玉米植物或玉米種子)。該干擾rna分子包括一個(gè)核苷酸序列，該核苷酸序列與可從該有害生物昆蟲的組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna的核苷酸序列或可從該有害生物昆蟲的組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna的核苷酸序列的一部分互補(bǔ)并且因此抑制該組蛋白基因的表達(dá)，導(dǎo)致攝食、生長、發(fā)育、繁殖的中止，并且最終導(dǎo)致該有害生物昆蟲的死亡。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包括或編碼本發(fā)明的干擾rna分子的一條鏈的至少一個(gè)片段的核酸構(gòu)建體、核酸分子和重組載體。本發(fā)明還提供了嵌合核酸分子，這些嵌合核酸分子包括該干擾rna的dsrna的一條反義鏈，該反義鏈可操作地與植物微小rna前體分子相關(guān)。本發(fā)明還提供了人工植物微小rna前體，這些前體包括本發(fā)明的干擾rna的dsrna的一條反義鏈。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種干擾核糖核酸(rna)分子，其中該rna包括至少一個(gè)dsrna，其中該dsrna是含有退火的互補(bǔ)鏈的雙鏈rna的區(qū)域，其中的一條鏈包括一個(gè)至少21個(gè)連續(xù)核苷酸的序列，該序列與在根螢葉甲屬組蛋白靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列是至少部分互補(bǔ)的，并且其中該干擾rna分子(i)與seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體具有至少80％一致性、至少85％一致性、至少90％一致性、至少92％一致性、至少93％一致性、至少95％一致性、至少97％一致性、至少98％一致性、或至少99％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體；或(iii)包括編碼由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47編碼的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體，其中該干擾rna分子下調(diào)在靶標(biāo)根螢葉甲屬昆蟲中的組蛋白靶基因。在一些實(shí)施例中，該干擾分子可以包括至少兩個(gè)dsrna，其中每個(gè)dsrna包括核苷酸的一個(gè)序列，該序列與組蛋白靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列是至少部分互補(bǔ)的。在進(jìn)一步的實(shí)施例中，每個(gè)dsrna可以包括核苷酸的不同序列，該序列與組蛋白靶基因中的不同靶核苷酸序列是互補(bǔ)的。本發(fā)明進(jìn)一步提供了組合物，這些組合物包括本發(fā)明的一種或多種干擾rna分子，這些干擾rna分子包括兩種或更多種dsrna分子，其中這兩種或更多種rna分子各自包括一條不同的反義鏈，或包括兩種或更多種核酸構(gòu)建體或核酸分子或人工植物微小rna前體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于抑制根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因表達(dá)的殺昆蟲組合物，該組合物包括本發(fā)明的dsrna以及一種農(nóng)業(yè)上可接受的載體。根螢葉甲屬組蛋白基因表達(dá)的抑制引起攝食和生長的中止，并且最終導(dǎo)致該根螢葉甲屬昆蟲的死亡。本發(fā)明進(jìn)一步涉及轉(zhuǎn)基因植物，這些轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生一種或多種本發(fā)明的干擾rna分子，這些干擾rna分子自我保護(hù)免受昆蟲攝食損害，并且涉及單獨(dú)使用或與其他昆蟲控制策略組合使用這些植物以賦予最大昆蟲控制能力的方法。產(chǎn)生一種或多種本發(fā)明的干擾rna分子或用一種包括一種或多種本發(fā)明的干擾rna分子的組合物處理的植物和/或植物部分對(duì)昆蟲有害生物侵染是高度抗性的。例如，經(jīng)濟(jì)上重要的根螢葉甲屬鞘翅目有害生物可以通過一種產(chǎn)生本發(fā)明的干擾rna分子的植物或通過用一種包括本發(fā)明的干擾rna分子的組合物處理的植物或植物種子加以控制。本發(fā)明還提供了一種控制根螢葉甲屬昆蟲的方法，該方法包括使該根螢葉甲屬昆蟲與一種作為本發(fā)明的干擾rna或能夠產(chǎn)生本發(fā)明的干擾rna的核酸分子接觸，該干擾rna用于抑制組蛋白基因在該根螢葉甲屬昆蟲中的表達(dá)，從而控制該根螢葉甲屬昆蟲。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種減少轉(zhuǎn)基因植物上的成蟲根螢葉甲屬昆蟲種群的方法，該轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)cry蛋白、雜種cry蛋白或修飾的cry蛋白，該方法包括在該轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)一種作為本發(fā)明的干擾rna或能夠產(chǎn)生本發(fā)明的干擾rna的核酸分子，該干擾rna能夠抑制組蛋白基因在成蟲根螢葉甲屬昆蟲中的表達(dá)，從而減少該成蟲根螢葉甲屬昆蟲種群。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種減少對(duì)本發(fā)明的干擾rna的抗性在根螢葉甲屬昆蟲種群中的發(fā)展的方法，該方法包括在由該根螢葉甲屬昆蟲種群攝食的轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)一種本發(fā)明的干擾rna，該干擾rna能夠抑制組蛋白基因在幼蟲和成蟲根螢葉甲屬昆蟲中的表達(dá)，從而與暴露于僅能夠抑制組蛋白基因在根螢葉甲屬昆蟲的幼蟲期或成蟲期的表達(dá)的干擾rna的根螢葉甲屬昆蟲種群相比，減少抗性在該根螢葉甲屬昆蟲種群中的發(fā)展。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種降低可從組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)rna在根螢葉甲屬昆蟲中的水平的方法，該方法包括使該根螢葉甲屬昆蟲與一種包括本發(fā)明的干擾rna分子的組合物接觸，其中該干擾rna分子降低該靶標(biāo)rna在根螢葉甲屬昆蟲的細(xì)胞中的水平。在仍其他方面中，本發(fā)明提供了一種賦予植物或其部分對(duì)根螢葉甲屬昆蟲耐受性的方法，該方法包括向該植物或其部分中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子和/或組合物，從而賦予該植物或其部分對(duì)該根螢葉甲屬昆蟲的耐受性。在另外的方面中，本發(fā)明通過了一種減少被根螢葉甲屬昆蟲攝食的植物的根損害的方法，該方法包括向該植物的細(xì)胞中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子和/或組合物，從而減少被根螢葉甲屬昆蟲攝食的植物的根損害。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生對(duì)根螢葉甲屬昆蟲具有毒性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的方法，該方法包括向植物細(xì)胞中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子和/或組合物，從而產(chǎn)生與對(duì)照植物細(xì)胞相比，對(duì)該根螢葉甲屬昆蟲具有毒性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。在另外的方面中，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生對(duì)根螢葉甲屬昆蟲攝食損害具有增強(qiáng)的耐受性的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括向植物中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子和/或組合物，從而產(chǎn)生與對(duì)照植物相比，對(duì)根螢葉甲屬昆蟲攝食損害具有增強(qiáng)的耐受性的轉(zhuǎn)基因植物。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種增強(qiáng)根螢葉甲屬昆蟲種群的控制的方法，該方法包括提供一種本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因種子并且向該轉(zhuǎn)基因植物或該轉(zhuǎn)基因種子施用一種對(duì)根螢葉甲屬昆蟲而言具有殺蟲性的化學(xué)殺有害生物劑，從而增強(qiáng)該根螢葉甲屬昆蟲種群的控制。在其他方面中，本發(fā)明提供了一種為玉米種植者提供將玉米作物中的根螢葉甲屬昆蟲有害生物種群控制在低于一個(gè)經(jīng)濟(jì)閾值之下的手段的方法，該方法包括(a)向該種植者銷售或?yàn)槠涮峁┌ū景l(fā)明的dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子和/或組合物的轉(zhuǎn)基因玉米種子；并且(b)向該種植者做廣告宣傳該轉(zhuǎn)基因玉米種子產(chǎn)生能夠控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物種群的轉(zhuǎn)基因玉米植物。在下文本發(fā)明的描述中更詳細(xì)地闡述本發(fā)明的這些方面和其他方面。附圖簡要說明圖1是根螢葉甲屬組蛋白h2b編碼序列(cds)的比對(duì)。堿基(a、t、g、或c)下“*”指示與參比序列中的堿基相同。不同于參比序列的堿基由“.”指示。使用類似于edgar，2004(nucleicacidsres[核酸研究]32(5):1792-97)的方法產(chǎn)生比對(duì)。圖2是根螢葉甲屬組蛋白h4編碼序列(cds)的比對(duì)。堿基(a、t、g、或c)下“*”指示與參比序列中的堿基相同。不同于參比序列的堿基由“.”指示。使用類似于edgar，2004(nucleicacidsres[核酸研究]32(5):1792-97)的方法產(chǎn)生比對(duì)。在序列表中的序列的簡要說明seqidno:1是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的西方玉米根蟲組蛋白h4cdna(dvh4)的核苷酸序列。seqidno:2是包括在seqidno:1中的dvh4的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:3是可從dvh4基因轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:4是dvh4mrna的反義序列，指定為dvh4*。seqidno:5是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的西方玉米根蟲組蛋白h2bcdna(dvh2b)的核苷酸序列。seqidno:6是包括在seqidno:5中的dvh2b的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:7是可從dvh2b基因轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:8是dvh2bmrna的反義鏈，指定為dvh2b*。seqidno:9是由seqidno:2編碼的dvh4氨基酸序列。seqidno:10是由seqidno:6編碼的dvh2b氨基酸序列。seqidno:11-14是可由sirna靶向的dvh4mrna(seqidno:3)的291個(gè)19-mer子序列的實(shí)例。seqidno:15-18是可由sirna靶向的dvh2bmrna(seqidno:7)的351個(gè)19-mer子序列的實(shí)例。seqidno:19-22是dvh4*反義sirna19-mer序列的實(shí)例。seqidnos:23-26是dvh2b*反義sirna19-mer序列的實(shí)例。seqidno:27是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的南方玉米根蟲組蛋白h4cdna(duh4-1)的核苷酸序列的變體1。seqidno:28是包括在seqidno:27中的duh4-1的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:29是可從duh4基因(duh4-1mrna)轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:30是duh4-1mrna的反義序列，指定為duh4-1*。seqidno:31是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的南方玉米根蟲組蛋白h4cdna(duh4-2)的核苷酸序列的變體2。seqidno:32是包括在seqidno:31中的duh4-2的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:33是可從duh4基因(duh4-2mrna)轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:34是duh4mrna的反義鏈，指定為duh4-2*。seqidno:35是由seqidno:28和seqidno:32編碼的duh4氨基酸序列。seqidno:36是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的南方玉米根蟲組蛋白h2bcdna(duh2b)的核苷酸序列。seqidno:37是包括在seqidno:36中的duh2b的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:38是可從duh2b基因轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:39是duh2bmrna的反義序列，指定為duh2b*。seqidno:40是由seqidno:37編碼的duh2b氨基酸序列。seqidno:41是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的北方玉米根蟲組蛋白h4cdna(dbh4)的核苷酸序列。seqidno:42是包括在seqidno:41中的dbh4的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:43是可從dbh4基因轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:44是dbh4mrna的反義序列，指定為dbh4*。seqidno:45是由seqidno:42編碼的dbh4氨基酸序列。seqidno:46是包括5’和3'非翻譯區(qū)(utr)的北方玉米根蟲組蛋白h4cdna(dbh2b)的核苷酸序列。seqidno:47是包括在seqidno:46中的dbh2b的編碼區(qū)的核苷酸序列。seqidno:48是可從dbh2b基因轉(zhuǎn)錄的mrna的正義鏈核苷酸序列。seqidno:49是dbh2bmrna的反義序列，指定為dbh2b*。seqidno:50是由seqidno:47編碼的dbh2b氨基酸序列。seqidno:51-58是對(duì)本發(fā)明有用的引物。seqidno:59是包括組成型啟動(dòng)子prubi1-18(christensen等人，1992，pmb18:675)、終止子tzmubi361-01(美國專利申請公開號(hào)us-2012-0198584)以及內(nèi)含子athbaf60-01的表達(dá)盒，并且能夠形成包括seqidno:6(dvh2b)和seqidno:7(dvh2b*)的dsrnawcrh2b分子。seqidno:60是包括組成型啟動(dòng)子prubi1-18、終止子tzmubi361-01以及內(nèi)含子athbaf60-01的表達(dá)盒，并且能夠形成包括seqidno:3(dvh4)和seqidno:4(dvh4*)的dsrnawcrh4分子。發(fā)明詳述下面提供了本發(fā)明的詳細(xì)說明，以協(xié)助本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員實(shí)踐本發(fā)明。本說明不旨在是一個(gè)本發(fā)明以其而實(shí)施的所有不同方式，或可以加入本發(fā)明中的所有特征的詳細(xì)目錄。例如，關(guān)于一個(gè)實(shí)施例所說明的特征可以結(jié)合入其他實(shí)施例中，并且關(guān)于一個(gè)具體實(shí)施例所說明的特征可以從那個(gè)實(shí)施例刪除。另外，鑒于本披露內(nèi)容，對(duì)本發(fā)明的不同實(shí)施例的眾多變體以及附加對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是明顯的，這不脫離本發(fā)明。因此，以下說明旨在闡明本發(fā)明的一些具體實(shí)施例，并不旨在完全列舉出其所有排列、組合以及變體。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將意識(shí)到，在本文描述的這些實(shí)施例中可以做出修飾和變化而不偏離本發(fā)明的精神或范圍。除非另外限定，否則本文所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。在此的本發(fā)明的說明中使用的術(shù)語是僅出于描述具體實(shí)施例的目的，且并不旨在限制本發(fā)明。在此提及的所有出版物、專利申請、專利以及其他參考文獻(xiàn)通過引用以其全文結(jié)合在此。為了清晰起見，定義了在本說明書中所使用的某些術(shù)語并且將其呈現(xiàn)如下：如在此使用的，“一種/一個(gè)(a/an)”或“該(the)”可以表示一種/一個(gè)或多于一種/一個(gè)。例如，“一個(gè)細(xì)胞”可以意指單個(gè)細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞。如在此使用，“和/或”是指并且涵蓋一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的列出項(xiàng)的任何及全部可能組合，連同當(dāng)以可替代性(“或”)解釋時(shí)組合的缺少。另外，當(dāng)指可計(jì)量值(例如化合物或試劑、劑量、時(shí)間、溫度等等的量)時(shí)，如在此使用的，術(shù)語“約(about)”意圖包括所指值的±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％、或甚至±0.1％的變化。如在此使用的，過渡短語“基本上由……組成”意指一項(xiàng)權(quán)利要求的范圍將被解釋為包括該權(quán)利要求中所提到的指定材料或步驟以及不實(shí)質(zhì)上影響要求保護(hù)的發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)基本特征和新特征的那些材料或步驟。因此，當(dāng)用于本發(fā)明的權(quán)利要求中時(shí)，術(shù)語“基本上由……組成”并不意在被解釋為等同于“包括(comprising)”。a.如在此使用的，“dsrna”或“rnai”是指由單個(gè)自身互補(bǔ)rna鏈或至少由兩條互補(bǔ)rna鏈形成的多核糖核苷酸結(jié)構(gòu)。互補(bǔ)程度(換言之，％一致性)不需要必須是100％。而是，它必須足夠允許在所采用的條件下形成雙鏈結(jié)構(gòu)。如在此所使用的，術(shù)語“完全地互補(bǔ)”意指dsrna的核苷酸序列的所有堿基都與靶核苷酸序列的堿基互補(bǔ)或‘匹配’。術(shù)語“至少部分地互補(bǔ)”意指dsrna的堿基與靶核苷酸序列的堿基之間存在小于100％的匹配。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解，為了介導(dǎo)靶基因表達(dá)的下調(diào)，dsrna僅需要與靶核苷酸序列至少部分地互補(bǔ)。本領(lǐng)域已知，相對(duì)于靶序列而具有插入、缺失以及錯(cuò)配的rna序列在rnai方面仍然可以有效。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地是，dsrna和靶基因的靶核苷酸序列共有至少80％或85％的序列一致性，優(yōu)選至少90％或95％序列一致性，或更優(yōu)選至少97％或98％序列一致性，并且再更優(yōu)選至少99％序列一致性?？商娲?，在24個(gè)部分互補(bǔ)的核苷酸的每個(gè)長度上，如與靶核苷酸序列相比，dsrna可以包括1、2、或3個(gè)錯(cuò)配。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將了解，dsrna與靶核苷酸序列之間共有的互補(bǔ)性程度可以取決于有待下調(diào)的靶基因或者取決于基因表達(dá)有待控制的昆蟲害蟲物種而改變。b.應(yīng)了解的是，dsrna可以包含一個(gè)雙鏈rna的區(qū)域，該雙鏈rna包括退火的互補(bǔ)鏈，其中一條鏈，即正義鏈，包括與靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列至少部分互補(bǔ)的核苷酸序列。c.靶核苷酸序列可以選自靶基因或其rna轉(zhuǎn)錄物的任何合適區(qū)域或核苷酸序列。舉例來說，靶核苷酸序列可以位于靶基因或rna轉(zhuǎn)錄物的5'utr或3'utr內(nèi)，或者基因的外顯子或內(nèi)含子區(qū)域內(nèi)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知在全長靶基因背景下鑒定最合適的靶核苷酸序列的方法。例如，可以合成和測試靶向靶基因的不同區(qū)域的多種dsrna?？商娲?，用如rnaseh等酶消化rna轉(zhuǎn)錄物可以被用來確定rna上構(gòu)象對(duì)基因沉默敏感的位點(diǎn)。靶位點(diǎn)也可以使用計(jì)算機(jī)模擬(insilico)方法，例如使用被設(shè)計(jì)成基于靶向全長基因內(nèi)的不同位點(diǎn)來預(yù)測基因沉默效力的計(jì)算機(jī)算法進(jìn)行鑒定。優(yōu)選地，通過gap(needleman和wunsch，1970)分析(gcg程序)，使用默認(rèn)設(shè)置確定多核糖核苷酸的％一致性，其中查詢序列是至少約21至約23個(gè)核苷酸長度，并且gap分析經(jīng)至少約21個(gè)核苷酸的區(qū)域比對(duì)這兩個(gè)序列。在另一個(gè)實(shí)施例中，查詢序列至少150個(gè)核苷酸長度，并且gap分析經(jīng)至少150個(gè)核苷酸的區(qū)域比對(duì)這兩個(gè)序列。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，查詢序列至少300個(gè)核苷酸長度并且gap分析經(jīng)至少300個(gè)核苷酸的區(qū)域比對(duì)這兩個(gè)序列。在又另一個(gè)實(shí)施例中，查詢序列對(duì)應(yīng)于全長靶標(biāo)rna(例如mrna)，并且gap分析經(jīng)全長靶標(biāo)rna比對(duì)這兩個(gè)序列。便利地，該dsrna可以在重組宿主細(xì)胞中產(chǎn)生自單個(gè)開放閱讀框，其中正義和反義序列的側(cè)翼是一個(gè)不相關(guān)序列，該不相關(guān)序列使得正義和反義序列可以雜交以與該不相關(guān)序列形成該dsrna分子，從而形成一個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)?？商娲?，正義鏈和反義鏈可以在不具有開放閱讀框的情況下產(chǎn)生，以保證在轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞中將不制造蛋白質(zhì)。這兩條鏈還可以被分別表達(dá)為兩種轉(zhuǎn)錄物，一種編碼正義鏈并且一種編碼反義鏈?？梢栽诩?xì)胞內(nèi)部或外部啟動(dòng)rna雙鏈體形成。該dsrna可以是部分或完全雙鏈的。rna可以在體外或在體內(nèi)酶促地或化學(xué)地合成。該dsrna相對(duì)于初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或完全加工的rna不需要是全長的。通常，可以使用較高的一致性來補(bǔ)償較短的序列的使用。此外，該dsrna還可以包括單鏈區(qū)域，例如該dsrna可以是部分或完全雙鏈的。該dsrna的雙鏈區(qū)域可以具有至少約18至約25個(gè)堿基對(duì)的長度，任選是約18至約50個(gè)堿基對(duì)的序列，任選是約50至約100個(gè)堿基對(duì)的序列，任選是約100至約200個(gè)堿基對(duì)的序列，任選是約200至約500個(gè)堿基對(duì)的序列，并且任選是約500至約1000個(gè)或更多個(gè)堿基對(duì)的序列，直到對(duì)于其全長是雙鏈的分子，大小對(duì)應(yīng)于全長靶標(biāo)rna分子。該dsrna可以包含已知的核苷酸類似物或修飾的主鏈殘基或連接物，其是合成的、天然發(fā)生的及非天然發(fā)生的。此類類似物的實(shí)例包括但不限于，硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基磷酸酯、手性甲基磷酸酯以及2-o-甲基核糖核苷酸。如在此使用的，術(shù)語“特異性減少靶標(biāo)rna的水平和/或由該rna編碼的靶蛋白的產(chǎn)生”及其變體是指該dsrna的一條鏈的一部分與該靶標(biāo)rna足夠相同，這樣使得在細(xì)胞中存在的該dsrna減少穩(wěn)態(tài)水平和/或所述rna的產(chǎn)生。在許多情況下，該靶標(biāo)rna將是mrna，并且在產(chǎn)生該mrna的細(xì)胞中存在該dsrna將導(dǎo)致所述蛋白的產(chǎn)生的減少。優(yōu)選地，當(dāng)與野生型細(xì)胞相比時(shí)，這一積累或產(chǎn)生被減少至少10％，更優(yōu)選至少50％，甚至更優(yōu)選至少75％，仍甚至更優(yōu)選至少95％并且最優(yōu)選100％。抑制的后果可以通過檢查該細(xì)胞或生物體的外表特性或通過生化技術(shù)加以確認(rèn)，這些生化技術(shù)是例如但不限于，northern雜交、逆轉(zhuǎn)錄、用微陣列監(jiān)測基因表達(dá)、抗體結(jié)合、酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)、蛋白質(zhì)印跡法、放射免疫測定(ria)以及其他免疫測定。a.本發(fā)明的干擾rna可以包括一種dsrna或多種dsrna，其中每種dsrna包含與在靶標(biāo)組蛋白基因中的靶核苷酸序列至少部分互補(bǔ)的核苷酸序列或由其組成，并且在被昆蟲有害生物攝入后起到下調(diào)所述靶標(biāo)組蛋白基因的表達(dá)的作用。通過引用結(jié)合在此的wo2006/046148中描述了這種類型的多聯(lián)體rna構(gòu)建體。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語‘多個(gè)’意指至少兩個(gè)，至少三個(gè)，至少四個(gè)等并且直到至少10、15、20個(gè)或至少30個(gè)。在一個(gè)實(shí)施例中，該干擾rna包括單個(gè)dsrna的多個(gè)拷貝，即結(jié)合至一個(gè)特定靶標(biāo)組蛋白基因內(nèi)的一個(gè)特定靶核苷酸序列的dsrna的重復(fù)。在另一個(gè)實(shí)施例中，干擾rna內(nèi)的dsrna包括與不同的靶核苷酸序列互補(bǔ)的不同核苷酸序列或由其組成。應(yīng)該清楚的是，與結(jié)合于不同靶核苷酸序列的dsrna組合的相同dsrna的多個(gè)拷貝的組合是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。b.這些dsrna可以安排為干擾rna的一個(gè)連續(xù)區(qū)域或者可以通過接頭序列的存在加以隔開。接頭序列可以包含不與任何靶核苷酸序列或靶基因互補(bǔ)的短的隨機(jī)核苷酸序列。在一個(gè)實(shí)施例中，該接頭是條件性自切割rna序列，優(yōu)選是ph敏感性接頭或疏水敏感性接頭。在一個(gè)實(shí)施例中，該接頭包含與內(nèi)含子序列等效的核苷酸序列。本發(fā)明的接頭序列的長度可以在從約1個(gè)堿基對(duì)到約10000個(gè)堿基對(duì)的范圍內(nèi)，其條件是該接頭不會(huì)削弱干擾rna下調(diào)一種或多種靶標(biāo)組蛋白基因的表達(dá)的能力。除了這樣的一種或多種dsrna和任何接頭序列，本發(fā)明的干擾rna可以包括至少一種另外的多核苷酸序列。在本發(fā)明的不同實(shí)施例中，該另外的序列選自(i)能夠保護(hù)干擾rna免于rna加工的序列，(ii)影響干擾rna的穩(wěn)定性的序列，(iii)允許蛋白質(zhì)結(jié)合以例如促進(jìn)干擾rna被昆蟲害蟲物種的細(xì)胞攝入的序列，(iv)促進(jìn)大規(guī)模產(chǎn)生干擾rna的序列，(v)作為結(jié)合于受體或結(jié)合于昆蟲害蟲細(xì)胞表面上的分子以促進(jìn)攝入的適體的序列，或(v)催化昆蟲害蟲細(xì)胞中干擾rna的加工并由此增強(qiáng)干擾rna的效力的序列。用于增強(qiáng)rna分子的穩(wěn)定性的結(jié)構(gòu)在本領(lǐng)域中是眾所周知的并且進(jìn)一步描述在wo2006/046148中，該案通過引用結(jié)合在此。該干擾rna可以包含dna堿基、非天然堿基或者糖-磷酸骨架的非天然骨架連接或修飾，例如以增強(qiáng)儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性或增強(qiáng)對(duì)核酸酶降解的抗性。此外，該干擾rna可以由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過手動(dòng)或自動(dòng)反應(yīng)化學(xué)地或酶促地產(chǎn)生?？商娲兀摳蓴_rna可以由編碼其的多核苷酸轉(zhuǎn)錄。因此，在此提供了編碼本發(fā)明的干擾rna中的任一個(gè)的一種分離的多核苷酸。微小rna(mirna)是不編碼蛋白質(zhì)的rna，通常在約18至約25個(gè)核苷酸長度之間(植物中常見地是約20-24個(gè)核苷酸長度)。這些mirna指導(dǎo)靶轉(zhuǎn)錄物的反式切割，負(fù)向調(diào)節(jié)參與各種調(diào)節(jié)及發(fā)育途徑的基因的表達(dá)(bartel，cell[細(xì)胞]，116:281-297(2004)；zhang等人，dev.biol.[發(fā)育生物學(xué)]289:3-16(2006))。照此，已經(jīng)顯示mirna參與植物生長和發(fā)育的不同方面以及參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)降解。此外，內(nèi)源性小mrna(包括mirna)也可以參與生物脅迫反應(yīng)，例如病原體攻擊。自第一個(gè)mirna在植物中發(fā)現(xiàn)以來(reinhart等人，genesdev[基因與發(fā)育]16:1616-1626(2002)，park等人，curr.biol[當(dāng)代生物學(xué)]12:1484-1495(2002))，已經(jīng)鑒定了數(shù)百種mirna。此外，已經(jīng)示出了許多植物mirna是跨非常趨異性分類群而高度保守的(floyd等人，nature[自然]428:485-486(2004)；zhang等人，plantj.[植物雜志]46:243-259(2006))。許多微小rna基因(mir基因)已經(jīng)被鑒定出并且是在數(shù)據(jù)庫中公眾可獲得的(mirbase；microrna.sanger.ac.uk/sequences)。mirna還在美國專利公開2005/0120415和2005/144669a1中被描述，其全部內(nèi)容通過引用被結(jié)合在此。編碼mirna的基因產(chǎn)生長度70bp至300bp的初級(jí)mirna(稱作“pri-mirna”)，其可以形成不完美的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。單個(gè)初級(jí)mirna可以含有從1個(gè)至若干個(gè)mirna前體。在動(dòng)物中，初級(jí)mirna在細(xì)胞核中由rna酶iiidrosha及其輔因子dgcr8/pasha加工成約65nt的更短發(fā)夾rna(前mirna)。這種前mirna隨后輸出至細(xì)胞質(zhì)，在那里，它由另一種rna酶iii-切丁酶(dicer)進(jìn)一步加工，釋放出大小約22nt的mirna/mirna*雙鏈體。與動(dòng)物相反，在植物中，初級(jí)mirna加工為成熟mirna完全在細(xì)胞核內(nèi)利用單一rna酶iii-dcl1(切丁酶樣1)進(jìn)行。(zhu，proc.natl.acad.sci[美國國家科學(xué)院院刊]105:9851-9852(2008))。關(guān)于微小rna生物起源和功能的許多綜述是可獲得的，例如，參見，bartel，cell[細(xì)胞]116:281-297(2004)；murchison等人，curr.opin.cellbiol[細(xì)胞生物學(xué)新見]16:223-229(2004)；dugas等人，curr.opin.plantbiol.[植物生物學(xué)新見]7:512-520(2004)和kim，naturerev.mol.cellbiol[自然綜述分子細(xì)胞生物學(xué)]6:376-385(2005)。如在此使用的，術(shù)語“植物微小rna前體分子”描述一種(約70nt-300nt)小非編碼性rna序列，它由植物酶加工以產(chǎn)生約19-24個(gè)核苷酸的產(chǎn)物，稱作成熟微小rna序列。這些成熟序列通過與信使rna(mrna)的互補(bǔ)性而具有調(diào)節(jié)作用。術(shù)語“人工植物微小rna前體分子”描述在加工之前的非編碼mirna前體序列，其中經(jīng)由以下方式使用該前體序列作為遞送sirna分子的主鏈序列，將這種mirna前體分子的內(nèi)源性天然mirna/mirna*雙鏈體置換為一種非天然異源性mirna的雙鏈體(amirna/amirna*；例如sirna/sirna*)，后一種雙鏈體然后與該sirna序列一起加工為成熟mirna序列。在本發(fā)明的背景下，用于描述本發(fā)明的dsrna的術(shù)語“有毒的”意指本發(fā)明的這些dsrna分子以及此類dsrna分子的組合作為對(duì)昆蟲具有負(fù)面作用的口服有效昆蟲控制試劑而起作用。當(dāng)本發(fā)明的一種組合物被遞送至昆蟲時(shí)，這種結(jié)果典型地是該昆蟲的死亡，或者該昆蟲不以使該組合物可供該昆蟲使用的來源為食。這樣一種組合物可以是一種表達(dá)本發(fā)明的dsrna的轉(zhuǎn)基因植物?！熬幋a序列”是轉(zhuǎn)錄成rna(如mrna、rrna、trna、snrna、正義rna或反義rna)的一個(gè)核酸序列。優(yōu)選地，該rna進(jìn)而在一個(gè)生物體中被翻譯以產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)。如在此使用的，“互補(bǔ)”多核苷酸是能夠根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)watson-crick互補(bǔ)性規(guī)則發(fā)生堿基配對(duì)的那些。具體而言，嘌呤將與嘧啶進(jìn)行堿基配對(duì)，以便形成鳥嘌呤與胞嘧啶配對(duì)(g:c)和在dna情況下腺嘌呤與胸腺嘧啶配對(duì)(a:t)或在rna情況下腺嘌呤與尿嘧啶配對(duì)(a:u)的組合。例如，序列“a-g-t”結(jié)合至互補(bǔ)序列“t-c-a”。應(yīng)當(dāng)理解兩種多核苷酸可以相互雜交，甚至它們彼此并不完全互補(bǔ)，其條件是每種多核苷酸具有至少一個(gè)與另一種多核苷酸基本上互補(bǔ)的區(qū)域。如本文使用的，術(shù)語“互補(bǔ)的(complementary)”或“互補(bǔ)性(complementarity)”是指多核苷酸在容許性鹽條件和溫度條件下通過堿基配對(duì)發(fā)生天然結(jié)合。兩單鏈分子之間的互補(bǔ)性可以是“部分的(partial)”，其中這些核苷酸中僅一些結(jié)合，或者當(dāng)這些單鏈分子之間存在完全互補(bǔ)性時(shí)，這種互補(bǔ)性可以是完全的。核酸鏈之間的互補(bǔ)性程度對(duì)于核酸鏈之間雜交的效率和強(qiáng)度具有顯著影響。如本文所用，術(shù)語“基本上互補(bǔ)”或“部分互補(bǔ)的”意指兩個(gè)核酸序列在其至少約50％、60％、70％、80％或90％的核苷酸處是互補(bǔ)的。在一些實(shí)施例中，這兩個(gè)核酸序列可以至少在其85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的核苷酸處是互補(bǔ)的。術(shù)語“基本上互補(bǔ)的”和“部分互補(bǔ)的”也可以意指兩個(gè)核酸序列可以在高嚴(yán)格性條件下雜交并且這類條件是本領(lǐng)域熟知的?！翱刂?control或controlling)”昆蟲意指通過一種毒性作用抑制一種或多種昆蟲有害生物存活、生長、攝食和/或繁殖的能力，或限制昆蟲相關(guān)的損害或作物植物損失?！翱刂啤崩ハx可以或可以不是意為殺死昆蟲，盡管它優(yōu)選意指殺死昆蟲?！斑f送(deliver或delivering)”一種組合物或dsrna意指該組合物或dsrna與一種昆蟲接觸，產(chǎn)生一種毒性作用和對(duì)昆蟲的控制。可以按照許多公認(rèn)方式，例如，通過昆蟲經(jīng)口攝取、經(jīng)由轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)、一種或多種配制的組合物、一種或多種可噴灑的組合物、一種餌基(baitmatrix)、或任何其他的領(lǐng)域公認(rèn)的毒物遞送系統(tǒng)來遞送該組合物或dsrna?！案炄~甲屬”是一種甲蟲屬，通常稱為“玉米根蟲”或“黃瓜甲蟲”。根螢葉甲屬昆蟲是作物植物的有害生物，這些昆蟲包括但不限于，巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲；ncr)、西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲；wcr)、黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲；scr)以及墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲；mcr)。在本發(fā)明的背景下，術(shù)語“玉米根蟲”或“黃瓜甲蟲”與術(shù)語“根螢葉甲屬”是可互換的?！案炄~甲屬生活期”或“玉米根蟲生活期”意指根螢葉甲屬物種的卵、幼蟲、蛹或成蟲發(fā)育形式?！坝行У睦ハx控制量”意指dsrna的濃度，它通過一種毒性作用抑制昆蟲存活、生長、攝食和/或繁殖的能力，或限制昆蟲相關(guān)的損害或作物植物損失。“有效的昆蟲控制量”可以或可以不意指殺死昆蟲的濃度，盡管優(yōu)選它意指殺死昆蟲。如在此使用的“表達(dá)盒”意指能夠在一個(gè)適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中指導(dǎo)特定的核酸序列的表達(dá)的一個(gè)核酸序列，包括一個(gè)啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子可操作地連接至感興趣的核酸序列上，該核酸序列可操作地連接至終止信號(hào)序列。它還典型地包含正確翻譯該核酸序列所需要的序列。包含該感興趣的核酸序列的表達(dá)盒可以是嵌合的，意味著至少一個(gè)它的組分相對(duì)于至少一個(gè)它的其他組分是異源的。該表達(dá)盒還可以是一種天然發(fā)生的表達(dá)盒，但已經(jīng)是以對(duì)于異源表達(dá)有用的重組形式而獲得的。然而，典型地，該表達(dá)盒相對(duì)于該宿主而言是異源的，即該表達(dá)盒的特定核酸序列不是天然存在于該宿主細(xì)胞中的，并且必須已經(jīng)通過一個(gè)轉(zhuǎn)化事件引入到該宿主細(xì)胞或該宿主細(xì)胞的祖先中。該核酸序列在該表達(dá)盒中的表達(dá)可以是在例如一個(gè)組成型啟動(dòng)子或一個(gè)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的控制之下，只有當(dāng)該宿主細(xì)胞暴露于某一特定的外部刺激時(shí)該啟動(dòng)子才引發(fā)轉(zhuǎn)錄。在多細(xì)胞生物(如一種植物)的情況下，該啟動(dòng)子還可能對(duì)于特定組織、或器官、或者發(fā)育階段是特異性的?！盎颉笔且粋€(gè)限定的區(qū)域，該區(qū)域位于一個(gè)基因組之內(nèi)，并且除了前述的編碼序列之外，它還包括其他負(fù)責(zé)該編碼部分的表達(dá)控制(也就是轉(zhuǎn)錄和翻譯)的主要調(diào)節(jié)核酸序列。一個(gè)基因還可以包含其他5'和3'未翻譯序列和終止序列。其他可能存在的元件是，例如，內(nèi)含子。如在此使用的，術(shù)語“種植者”意指從事農(nóng)業(yè)，養(yǎng)殖生物機(jī)體(如玉米植物，例如玉米)用于食物、飼料、或原料的個(gè)人或?qū)嶓w?！爱愒础焙怂嵝蛄惺且粋€(gè)天然地不與將該核酸序列引入其中的宿主細(xì)胞相關(guān)聯(lián)的核酸序列，包括天然發(fā)生的核酸序列的非天然發(fā)生的多拷貝。組蛋白是在真核細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的高堿性蛋白質(zhì)，其將dna包裹并且指令dna進(jìn)入稱為核小體的結(jié)構(gòu)單元中。組蛋白是染色質(zhì)的主要蛋白質(zhì)組分，并在基因調(diào)控中發(fā)揮作用。組蛋白h2a、h2b、h3和h4是核心組蛋白，并且形成核小體核心，核小體核心包括兩個(gè)h2a-h2b二聚體和一個(gè)h3-h4四聚體。四種核心組蛋白在結(jié)構(gòu)上相對(duì)相似，并且以主球狀結(jié)構(gòu)域和長n末端尾為特征。使這些核心組蛋白經(jīng)受共價(jià)修飾(包括乙酰化和甲基化)，共價(jià)修飾可以改變位于與其親本組蛋白八聚體相關(guān)的dna上的基因的表達(dá)?！巴础焙怂嵝蛄惺且粋€(gè)與將該核酸序列引入其中的一個(gè)宿主細(xì)胞天然地關(guān)聯(lián)的核酸序列?！皻⑾x”被定義為有毒的生物活性，它能夠控制蟲，優(yōu)選地通過殺死它們來控制。本發(fā)明的“分離的”核酸分子或核苷酸序列或核酸構(gòu)建體或dsrna分子或蛋白通常與其天然環(huán)境分離而存在并且因此不是自然的產(chǎn)物。分離的核酸分子或核苷酸序列或核酸構(gòu)建體或dsrna分子或蛋白能以純化形式存在，或能存在于非天然環(huán)境(例如像重組宿主或宿主細(xì)胞，如轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞)中。在本發(fā)明的背景下，后綴“mer”前的數(shù)字指示亞基的特定數(shù)目。當(dāng)應(yīng)用于rna或dna時(shí)，這指定了分子中堿基的數(shù)目。例如，具有序列acuggucgcguugcaugcu的mrna的19個(gè)核苷酸子序列是“19-mer”?！爸参铩笔窃诎l(fā)育的任何階段的任何植物，特別是種子植物。“植物細(xì)胞”是植物的結(jié)構(gòu)和生理單位，包括原生質(zhì)體和細(xì)胞壁。植物細(xì)胞可以處于一種分離的單細(xì)胞或一種培養(yǎng)細(xì)胞的形式，或者是作為較高級(jí)的組織單位(例如，植物組織、植物器官、或整株植物)的一部分?！爸参锛?xì)胞培養(yǎng)物”意指植物單元(例如像，原生質(zhì)體、細(xì)胞培養(yǎng)物細(xì)胞、植物組織中的細(xì)胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、接合子以及處于不同發(fā)育階段的胚)的培養(yǎng)物。“植物材料”是指葉、莖、根、花或花的部分、果實(shí)、花粉、卵細(xì)胞、接合子、種子、切條、細(xì)胞或組織培養(yǎng)物、或一種植物的任何其他部分或產(chǎn)物。“植物器官”是植物的一個(gè)獨(dú)特而明顯的已結(jié)構(gòu)化并且分化的部分，如根、莖、葉、花蕾或胚。如在此使用的“植物組織”意指組織化成結(jié)構(gòu)和功能單元的一組植物細(xì)胞。包括植物中或培養(yǎng)物中的任何植物組織。這個(gè)術(shù)語包括但不限于：全株植物、植物器官、植物種子、組織培養(yǎng)物以及被組織化成結(jié)構(gòu)和/或功能單元的任何植物細(xì)胞群組。這個(gè)術(shù)語與以上列出的或由該定義以其他方式涵蓋的任何具體類型的植物組織的聯(lián)合應(yīng)用或單獨(dú)應(yīng)用并不旨在排除任何其他類型的植物組織。玉米根蟲“轉(zhuǎn)錄組”是玉米根蟲細(xì)胞中的所有或幾乎所有的核糖核酸(rna)轉(zhuǎn)錄物的集合。“轉(zhuǎn)化”是一種用于將異源核酸引入到宿主細(xì)胞或生物的方法。具體地，“轉(zhuǎn)化”意為dna分子穩(wěn)定整合到一種感興趣生物的基因組中。“轉(zhuǎn)化的/轉(zhuǎn)基因的/重組的”是指一種宿主生物體，例如其中引入了一種異源核酸分子的一種細(xì)菌或一種植物。該核酸分子可以被穩(wěn)定地整合到宿主的基因組中，或者該核酸分子還可以作為一種染色體外分子存在。這樣的一種染色體外分子能夠自主復(fù)制。轉(zhuǎn)化的細(xì)胞、組織或植物應(yīng)當(dāng)理解為不僅包含轉(zhuǎn)化過程的終產(chǎn)物，而且包含其轉(zhuǎn)基因子代。一種“非轉(zhuǎn)化的”、“非轉(zhuǎn)基因的”、或“非重組的”宿主是指一種野生型生物，例如一種細(xì)菌或植物，它不包含該異源的核酸分子。在此使用的對(duì)于dna或rna堿基和氨基酸給出的命名法如在37c.f.r.§1.822中給出。本發(fā)明是基于以下出乎意料的發(fā)現(xiàn)，設(shè)計(jì)用于靶向可從根螢葉甲屬昆蟲的組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna的雙鏈rna(dsrna)或小干擾rna(sirna)，對(duì)根螢葉甲屬昆蟲有害生物具有毒性并且可以用于控制植物的根螢葉甲屬侵染并賦予轉(zhuǎn)基因植物對(duì)根螢葉甲屬侵染的耐受性。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了包括一條正義鏈和一條反義鏈的雙鏈rna(dsrna)分子，其中該反義鏈的核苷酸序列與可從根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna多核苷酸的一部分互補(bǔ)，其中該dsrna分子對(duì)根螢葉甲屬昆蟲是具有毒性的。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種包含dsrna的干擾rna分子，該dsrna包括一條正義鏈和一條反義鏈，其中該反義鏈的核苷酸序列與可從根螢葉甲屬組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna多核苷酸的一部分互補(bǔ)，該組蛋白基因包括以下組蛋白編碼序列，該編碼序列與seqidno:2(dvh4)或seqidno:6(dvh2b)具有至少90％一致性、或至少91％一致性、或至少92％一致性、或至少93％一致性、或至少94％一致性、或至少95％一致性、或至少96％一致性、或至少97％一致性、或至少98％一致性、或至少99％一致性，并且其中該dsrna分子對(duì)根螢葉甲屬昆蟲具有毒性。在一些實(shí)施例中，該干擾核糖核酸(rna)分子包括至少一個(gè)dsrna，其中該dsrna是包括退火的互補(bǔ)鏈的一個(gè)雙鏈rna的區(qū)域，其中一條鏈包括一個(gè)至少19個(gè)連續(xù)核苷酸的序列，該序列與在根螢葉甲屬組蛋白靶基因中的靶核苷酸序列是至少部分互補(bǔ)的，并且其中該干擾rna分子(i)與seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體具有至少85％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體；或(iii)包括編碼由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47編碼的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體，其中該干擾rna分子下調(diào)在靶標(biāo)根螢葉甲屬昆蟲中的組蛋白靶基因。在一些實(shí)施例中，該根螢葉甲屬組蛋白靶基因是來自選自下組的根螢葉甲屬昆蟲，該組由以下各項(xiàng)組成：巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)、西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)、黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)、黃瓜條根螢葉甲(d.balteata)(帶狀黃瓜甲蟲)、黃瓜十一星葉甲(d.undecimpunctataundecimpunctata)(西方斑點(diǎn)黃瓜甲蟲)、斯格尼根螢葉甲(d.significata)(3斑葉甲)、南美葉甲(菊花甲蟲)、墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲)、班尼根螢葉甲(d.beniensis)、克里斯塔根螢葉甲(d.cristata)、科威根螢葉甲(d.curvipustulata)、雙斑根螢葉甲(d.dissimilis)、華麗根螢葉甲(d.elegantula)、伊墨根螢葉甲(d.emorsitans)、禾本科根螢葉甲(d.graminea)、伊斯帕尼根螢葉甲(d.hispanolae)、萊米妮根螢葉甲(d.lemniscata)、赭腿根螢葉甲(d.linsleyi)、米勒根螢葉甲(d.milleri)、錢幣形根螢葉甲(d.nummularis)、扇葉根螢葉甲(d.occlusa)、普拉根螢葉甲(d.porracea)、蝸牛根螢葉甲(d.scutellata)、脛骨根螢葉甲(d.tibialis)、三線根螢葉甲(d.trifasciata)、以及微綠根螢葉甲(d.viridula)。在另外的實(shí)施例中，該根螢葉甲屬昆蟲是西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)、黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)、或巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)。在一些實(shí)施例中，該組蛋白基因選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：h1組蛋白、h2a組蛋白、h2b組蛋白、h3組蛋白以及h4組蛋白。在一些實(shí)施例中，該組蛋白是h4或h2b組蛋白。在一些實(shí)施例中，該組蛋白編碼序列包括選自下組的序列，該組由以下各項(xiàng)組成：seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、以及seqidno:47。在一些實(shí)施例中，該干擾rna分子包括至少兩種dsrna，其中每種dsrna包括核苷酸的一個(gè)序列，該序列與組蛋白靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列是至少部分互補(bǔ)的。在一些實(shí)施例中，每種dsrna包括不同的核苷酸序列，該核苷酸序列與組蛋白靶基因內(nèi)的不同靶核苷酸序列是互補(bǔ)的。在其他實(shí)施例中，每種dsrna包括不同的核苷酸序列，該核苷酸序列與兩個(gè)不同的組蛋白靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列是互補(bǔ)的。在一些實(shí)施例中，該干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna可以包括從至少18至約25個(gè)連續(xù)核苷酸(例如18、19、20、21、22、23、24或25)至至少約300個(gè)連續(xù)核苷酸，基本由其組成或由其組成。在一些實(shí)施例中，該dsrna分子可以包括約309、或約369個(gè)連續(xù)核苷酸，基本由其組成或由其組成。可以在3'末端、5'末端或3'和5'末端二者處添加另外的核苷酸，以促進(jìn)rna分子的操作但是不實(shí)質(zhì)地影響該dsrna分子在rna干擾(rnai)中的基本特征或功能。在一些實(shí)施例中，該干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna包括與包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的至少18個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列互補(bǔ)的一條反義鏈。在其他實(shí)施例中，dsrna的該部分包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的至少從19、20、或21個(gè)連續(xù)核苷酸至至少約300個(gè)連續(xù)核苷酸，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，dsrna的該部分包括seqidno:3的至少約309個(gè)核苷酸、seqidno:7的至少約369個(gè)連續(xù)核苷酸、seqidno:29的至少約309個(gè)核苷酸、seqidno:33的至少約309核苷酸、seqidno:38的至少約369連續(xù)核苷酸、seqidno:43的至少約309核苷酸、或seqidno:48的至少約369連續(xù)核苷酸，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:3(dvh4mrna)的任何19-mer子序列，基本由其組成或由其組成，其中n是seqidno:3的核苷酸1至291。換言之，被靶向的mrna的該部分包括291個(gè)seqidno:3的19個(gè)連續(xù)核苷酸的子序列(即19-mer)中任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-augacuggacguggaaagg-3')(seqidno:11)、堿基2-20(5'-ugacuggacguggaaaggg-3')(seqidno:12)、堿基3-21(5'-gacuggacguggaaagggu-3')(seqidno:13)依次類推直至堿基291-309(5'-uuuguacgguuuugguggu-3')(seqidno:14)，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，基本由其組成或由其組成，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351。換言之，被靶向的mrna的該部分包括351個(gè)seqidno:7的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即19-mer)中的任一個(gè)，例如堿基1-19(5'-augccuccuaagacgagug-3')(seqidno:15)、堿基2-20(5'-ugccuccuaagacgagugg-3’)(seqidno:16)、堿基3-21(5'-gccuccuaagacgaguggu-3’)(seqidno:17)依次類推直至堿基351-369(5'-uaaauacacaaguucuaag-3')(seqidno:18)。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna包括、基本上由或由以下各項(xiàng)組成：由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:29(duh4-1)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:29的核苷酸1至291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:33(duh4-2)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:33的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:38(duh2b)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:38的核苷酸1至351；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:43(dbh4)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:43的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:48(dbh2b)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:48的核苷酸1至351。在仍其他的實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna分子包括一種dsrna，該dsrna包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48，基本上由其組成或由其組成。在本發(fā)明的干擾rna分子的另外的實(shí)施例中，該dsrna的反義鏈的核苷酸序列可以包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:4(dvh4*)的任何19-mer子序列，基本上由其組成或由其組成，其中n是seqidno:4的核苷酸1至291。換言之，該反義鏈包括291個(gè)seqidno:4的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即19-mer)的任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-uacugaccugcaccuuucc-3')(seqidno:19)、堿基2-20(5'-acugaccugcaccuuuccc-3')(seqidno:20)、堿基3-21(5'-cugaccugcaccuuuccca-3')(seqidno:21)依次類推直至堿基291-309(5'-aaacaugccaaaaccacca-3')(seqidno:22)，基本上由其組成或由其組成。在本發(fā)明的干擾rna分子的其他實(shí)施例中，該dsrna的反義鏈的核苷酸序列可以包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列，基本上由其組成或由其組成，其中n是seqidno:8的核苷酸1至核苷酸351。換言之，該反義鏈基本由351個(gè)seqidno:8的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即19-mer)的任一個(gè)組成，例如，堿基1-19(5'-uacggaggauucugcucac-3')(seqidno:23)、堿基2-20(5'-acggaggauucugcucacc-3')(seqidno:24)、堿基3-21(5'-cggaggauucugcucacca-3')(seqidno:25)依次類推直至堿基351-369(5'-ugauuuauguguucaagau-3')(seqidno:26)。在本發(fā)明的干擾rna分子的其他實(shí)施例中，該dsrna的反義鏈的核苷酸序列可以包括、基本上由或由以下各項(xiàng)組成：由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:30(duh4-1*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:30的核苷酸1至291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:34(duh4-2*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:34的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:39(duh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:39的核苷酸1至351；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:44(dbh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:44的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:49(dbh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:49的核苷酸1至351。在仍其他實(shí)施例中，與可從根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna多核苷酸的一部分互補(bǔ)的本發(fā)明的dsrna的反義鏈核苷酸序列包括seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49，或基本由其組成或由其組成。應(yīng)理解的是，seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49的19-mer序列的任一個(gè)在3’或5’末端可以缺失一個(gè)核苷酸或在3’末端、5’末端或兩者處可以添加多達(dá)六個(gè)核苷酸(以任何組合)，以實(shí)現(xiàn)反義鏈基本由seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49的任何19-mer核苷酸序列組成，因?yàn)閷⒗斫獾氖?，缺失一個(gè)核苷酸或添加多達(dá)六個(gè)核苷酸不實(shí)質(zhì)地影響本發(fā)明的雙鏈rna分子的基本特征或功能。這類另外的核苷酸可以是沿靶序列延伸反義鏈互補(bǔ)性的核苷酸和/或這類核苷酸可以是促進(jìn)rna分子或編碼該rna分子的核酸分子的操作的核苷酸，如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將已知。例如，在3'末端可以存在一個(gè)tt突出端，使用該突出端來穩(wěn)定sirna雙鏈體并且不影響該sirna的特異性。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該干擾rna分子的雙鏈rna的反義鏈可以與該靶標(biāo)rna多核苷酸完全互補(bǔ)，或該反義鏈可以與靶標(biāo)rna多核苷酸基本上互補(bǔ)或部分互補(bǔ)。該干擾rna分子的dsrna可以包括一種dsrna，該dsrna是包括基本上互補(bǔ)的退火鏈的雙鏈rna的一個(gè)區(qū)域，或是包括完全互補(bǔ)的退火鏈的雙鏈rna的一個(gè)區(qū)域。基本上或部分互補(bǔ)意指反義鏈和靶標(biāo)rna多核苷酸可以按約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)核苷酸配對(duì)錯(cuò)配?？梢詫⑦@類錯(cuò)配引入反義鏈序列中，例如，靠近3'末端，以便增強(qiáng)雙鏈rna分子由切丁酶加工，以便在插入本發(fā)明的嵌合核酸分子或人工微小rna前體分子內(nèi)的sirna分子中重復(fù)錯(cuò)配樣式(參見實(shí)例部分)等，如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將已知。這類修飾將在雙鏈體的一個(gè)末端削弱堿基配對(duì)作用并且產(chǎn)生鏈非對(duì)稱性，因此增大反義鏈(而非正義鏈)受到加工和沉默預(yù)期基因的幾率(geng和ding，“double-mismatchedsirnasenhanceselectivegenesilencingofamutantals-causingallele1[雙錯(cuò)配sirna增強(qiáng)造成突變als的等位基因1的選擇性基因沉默]”actapharmacol.sin.[中國藥理學(xué)報(bào)]29:211-216(2008)；schwarz等人，“asymmetryintheassemblyofthernaienzymecomplex[rnai酶復(fù)合體的組合體中的非對(duì)稱性]”cell[細(xì)胞]115:199-208(2003))。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該干擾rna含有一種短發(fā)夾rna(shrna)分子的一種dsrna。shrna在細(xì)胞中的表達(dá)典型地通過將質(zhì)?；蛑亟M載體遞送例如進(jìn)入轉(zhuǎn)基因植物(如轉(zhuǎn)基因玉米)中而完成。本發(fā)明涵蓋一種包括本發(fā)明的干擾rna的核酸構(gòu)建體。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種核酸分子，該核酸分子編碼本發(fā)明的至少一種干擾分子。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種核酸構(gòu)建體，該核酸構(gòu)建體包括本發(fā)明的至少一種干擾分子，或包括編碼本發(fā)明的至少一種干擾分子的核酸分子。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種核酸構(gòu)建體，其中該核酸構(gòu)建體是一種表達(dá)載體。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種重組載體，該重組載體包括可操作地連接至編碼本發(fā)明的干擾rna分子的一個(gè)核苷酸序列的一種調(diào)節(jié)序列。調(diào)節(jié)序列可以意指一種啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)、隔離子、沉默子、或參與基因表達(dá)的任何其他dna元件。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種嵌合核酸分子，該嵌合核酸分子包括具有dsrna的反義鏈的干擾rna分子，該dsrna可操作地連接至植物微小rna前體分子。在一些實(shí)施例中，該嵌合核酸分子包括一條反義鏈，該反義鏈具有seqidno:4或seqidno:8的19-mer子序列的任一個(gè)的核苷酸序列，該反義鏈可操作地連接至植物微小rna前體分子。在一些實(shí)施例中，該植物微小rna前體分子是一種玉蜀黍微小rna前體。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種人工植物微小rna前體分子，該前體分子包括本發(fā)明的干擾rna分子的dsrna的一條反義鏈。在其他實(shí)施例中，該人工植物微小rna前體分子包括具有seqidno:4或seqidno:8的19-mer子序列的任一個(gè)的核苷酸序列的一條反義鏈。使用人工植物微小rna將感興趣的核苷酸序列(例如人工mirna；sirna/sirna*)遞送進(jìn)植物中在本領(lǐng)域是已知的(參見例如，schwab等人，2006，theplantcell[植物細(xì)胞]18:1121-1133和在此的實(shí)例部分)。在本發(fā)明中，這些人工微小rna是其中插入一個(gè)植物微小rna前體主鏈和一個(gè)昆蟲sirna序列的嵌合或雜交分子。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，典型地希望維持錯(cuò)配，這些錯(cuò)配正常情況下在植物微小rna前體序列中存在于被置換入該植物微小rna前體主鏈中的任何核苷酸序列中。在仍其他實(shí)施例中，該人工植物微小rna前體包括玉米微小rna前體分子的部分。任何玉米微小rna(mirna)前體都適于本發(fā)明的這些組合物和方法。非限制性實(shí)例包括mir156、mir159、mir160、mir162、mir164、mir166、mir167、mir168、mir169、mir171、mir172、mir319、mir390、mir393、mir394、mir395、mir396、mir397、mir398、mir399、mir408、mir482、mir528、mir529、mir827、mir1432以及現(xiàn)在已知或后來被鑒定出的任何其他植物mirna前體。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋干擾rna分子、核酸構(gòu)建體、核酸分子、或重組載體，其包括本發(fā)明的干擾rna分子的dsrna的至少一條鏈，或包括本發(fā)明的嵌合核酸分子，或包括本發(fā)明的人工植物微小rna。在一些實(shí)施例中，該核酸構(gòu)建體包括本發(fā)明的核酸分子。在其他實(shí)施例中，該核酸構(gòu)建體是一種重組表達(dá)載體。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋包括一種干擾rna分子的組合物，該干擾rna分子包含兩種或更多種dsrna，其中這兩種或更多種dsrna各自包括不同的反義鏈。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋包括至少兩種或更多種干擾rna分子的組合物，其中這兩種或更多種干擾rna分子各自包括含有不同的反義鏈的dsrna。這兩種或更多種干擾rna可以在相同的核酸構(gòu)建體上、在不同的核酸構(gòu)建體上、或其任何組合上存在。在其他實(shí)施例中，該組合物包括一種含有基本上由seqidno:4的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:8的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:30的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:34的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:39的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:44的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子，和/或一種含有基本上由seqidno:49的核苷酸序列組成的反義鏈的rna分子。在其他實(shí)施例中，該組合物可以包括兩種或更多種核酸分子，其中這兩種或更多種核酸分子各自編碼不同的干擾rna分子。在其他實(shí)施例中，該組合物可以包括兩種或更多種核酸構(gòu)建體，其中這兩種或更多種核酸構(gòu)建體各自包括編碼不同干擾rna的核酸分子。在其他實(shí)施例中，該組合物包括本發(fā)明的兩種或更多種核酸構(gòu)建體、兩種或更多種核酸分子、兩種或更多種嵌合核酸分子、兩種或更多種人工植物微小rna前體，其中這兩種或更多種核酸構(gòu)建體、兩種或更多種核酸分子、兩種或更多種嵌合核酸分子、或兩種或更多種人工植物微小rna前體各自包括一條不同的反義鏈。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種用于抑制根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因表達(dá)的殺昆蟲組合物，該組合物包括本發(fā)明的干擾rna和農(nóng)業(yè)上可接受的載體。在一些實(shí)施例中，該可接受的農(nóng)用載體是一種表達(dá)本發(fā)明的干擾rna的轉(zhuǎn)基因生物體。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因生物體可以是一種表達(dá)本發(fā)明的干擾rna的轉(zhuǎn)基因植物，當(dāng)被靶標(biāo)有害生物攝食時(shí)導(dǎo)致該靶標(biāo)有害生物停止攝食、生長、或繁殖，或?qū)е略摪袠?biāo)有害生物的死亡。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因植物是一種轉(zhuǎn)基因玉米植物并且該靶標(biāo)有害生物是一種根螢葉甲屬昆蟲有害生物。在仍其他實(shí)施例中，該根螢葉甲屬昆蟲有害生物選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)，西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)，黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)，黃瓜條根螢葉甲(帶狀黃瓜甲蟲)，黃瓜十一星葉甲(西方斑點(diǎn)黃瓜甲蟲)，斯格尼根螢葉甲(3斑葉甲)，南美葉甲(菊花甲蟲)，墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲)。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因生物體選自(但不限于)下組，該組由以下各項(xiàng)組成：表達(dá)本發(fā)明的干擾rna分子的酵母、真菌、藻類、細(xì)菌、病毒、或節(jié)肢動(dòng)物。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因生物體是一種病毒，例如一種當(dāng)侵染昆蟲宿主時(shí)表達(dá)本發(fā)明的干擾rna分子的昆蟲桿狀病毒。這樣的一種桿狀病毒比野生型未轉(zhuǎn)化桿狀病毒針對(duì)靶標(biāo)昆蟲可能更具劇毒。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因生物體是一種施用至靶標(biāo)有害生物出現(xiàn)或已知已經(jīng)出現(xiàn)的環(huán)境的轉(zhuǎn)基因細(xì)菌。在一些實(shí)施例中，使用能夠在植物組織內(nèi)生活并復(fù)制的非致病共生細(xì)菌(所謂的內(nèi)寄生菌)，或能夠定居在葉際或根際的非致病共生細(xì)菌(所謂的附生菌)。此類細(xì)菌包括以下屬的細(xì)菌：農(nóng)桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、固氮螺菌屬、定氮菌屬、芽孢桿菌屬、棒形桿菌屬、腸桿菌屬、歐文菌屬、黃桿菌屬、克雷白菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、沙雷菌屬、鏈霉菌屬以及黃單胞菌屬。共生真菌(如木霉屬和膠枝霉屬)也是為了相同目的表達(dá)本發(fā)明的干擾rna分子的可能宿主。在一些實(shí)施例中，可接受的農(nóng)用載體是一種可用于將包括該干擾rna分子的組合物施用至植物或種子的配制品。在一些實(shí)施例中，這些干擾rna分子穩(wěn)定對(duì)抗降解，由于其雙鏈性質(zhì)和dna酶/rna酶抑制劑的引入。例如，可以通過包括胸苷或尿苷核苷酸3'突出端來穩(wěn)定dsrna或sirna。包含在本發(fā)明的組合物中的dsrna或sirna能大量地以工業(yè)規(guī)模化學(xué)地合成?？色@得的方法將是通過化學(xué)合成或通過使用生物劑。在其他實(shí)施例中，該配制品包括一種轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑是一種含脂質(zhì)化合物。在另外的實(shí)施例中，該含脂質(zhì)化合物選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：lipofectamine，cellfectin，dmrie-c，dotap以及l(fā)ipofectin。在另一個(gè)實(shí)施例中，該含脂質(zhì)化合物是一種tris陽離子脂質(zhì)。在一些實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包括一種核酸冷凝劑。該核酸冷凝劑可以是本領(lǐng)域已知的任何此類化合物。核酸冷凝劑的實(shí)例包括但不限于，亞精胺(n-[3-氨基丙基]-1,4-丁二胺)、魚精蛋白硫酸鹽、聚賴氨酸以及其他帶正電的肽。在一些實(shí)施例中，該核酸冷凝劑是亞精胺或魚精蛋白硫酸鹽。在仍另外的實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包括緩沖的蔗糖或磷酸鹽緩沖生理鹽水。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋轉(zhuǎn)基因植物或其部分，其包括本發(fā)明的干擾rna分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物，其中當(dāng)與對(duì)照植物相比時(shí)，該轉(zhuǎn)基因植物對(duì)根螢葉甲屬昆蟲具有增強(qiáng)的抗性。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因植物或其部分是轉(zhuǎn)基因玉米植物或其部分。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物的轉(zhuǎn)基因種子，其中該轉(zhuǎn)基因種子包括本發(fā)明的干擾rna分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因種子是轉(zhuǎn)基因玉米種子。表達(dá)本發(fā)明的干擾rna的轉(zhuǎn)基因植物對(duì)被靶標(biāo)昆蟲有害生物襲擊具有耐受性或抗性。當(dāng)該昆蟲開始攝食這樣一種轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，它也攝取所表達(dá)的dsrna或sirna。這可以妨礙昆蟲進(jìn)一步咬食植物組織或者甚至可以傷害或殺死昆蟲。編碼本發(fā)明的dsrna或sirna的核酸序列被插入到一種表達(dá)盒中，然后該表達(dá)盒被優(yōu)選穩(wěn)定地整合到該植物的基因組中。引入到植物基因組中的表達(dá)盒的這些核酸序列對(duì)于該植物而言是異源的，并且是天然發(fā)生的。跟據(jù)本發(fā)明所轉(zhuǎn)化的植物可以是單子葉植物或雙子葉植物，并且包括但不限于：玉米、小麥、大麥、黑麥、甘薯、豆、豌豆、菊苣、萵苣、卷心菜、花椰菜、西蘭花、蕪菁、蘿卜、菠菜、蘆筍、洋蔥、大蒜、胡椒(pepper)、芹菜、小南瓜(squash)、大南瓜(pumpkin)、大麻、西葫蘆、蘋果、梨、榅桲、甜瓜、李子(plum)、櫻桃、桃、油桃、杏、草莓、葡萄、覆盆子、黑莓、菠蘿、鱷梨、番木瓜、芒果、香蕉、大豆、番茄、高粱、甘蔗、甜菜、向日葵、油菜籽、三葉草、煙草、胡蘿卜、棉花、苜蓿、水稻、馬鈴薯、茄子、黃瓜、擬南芥屬，以及木本植物，如針葉樹以及落葉樹。在另外的實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因植物是一種轉(zhuǎn)基因玉米植物。在轉(zhuǎn)基因植物中該干擾rna分子的表達(dá)是由包括在植物中發(fā)揮作用的啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)序列所驅(qū)動(dòng)的。啟動(dòng)子的選擇將依賴于表達(dá)的時(shí)間和空間需要而變化，并且還依賴于昆蟲目標(biāo)種類而變化。因此，考慮了本發(fā)明的干擾rna在葉、柄(stalk)或莖(stem)、穗、花序(例如穗狀花序、圓錐花序、穗軸等)、根和/或幼苗中的表達(dá)。然而在許多情況下，尋求針對(duì)多于一種類型蟲害的保護(hù)，并且因此在多個(gè)組織中的表達(dá)是令人希望的。盡管已經(jīng)顯示來自雙子葉植物的很多啟動(dòng)子在單子葉植物中是可操作的并且反之亦然，但理想的是選擇雙子葉植物啟動(dòng)子用于在雙子葉植物中的表達(dá)，并且選擇單子葉植物啟動(dòng)子用于在單子葉植物中的表達(dá)。然而，對(duì)所選擇的啟動(dòng)子的起源并沒有限制；足夠的是它們在驅(qū)動(dòng)dsrna或sirna在所希望的細(xì)胞中的表達(dá)中是操作性的。適用于本發(fā)明的啟動(dòng)子包括但不限于組成性地驅(qū)動(dòng)核苷酸序列的表達(dá)的那些啟動(dòng)子、在誘導(dǎo)時(shí)驅(qū)動(dòng)表達(dá)的那些啟動(dòng)子、以及以組織或發(fā)育特異性方式驅(qū)動(dòng)表達(dá)的那些啟動(dòng)子。這些不同類型的啟動(dòng)子在本領(lǐng)域是已知的。組成型啟動(dòng)子的實(shí)例包括但不限于夜香樹病毒啟動(dòng)子(cmp)(美國專利號(hào)7,166,770)、稻肌動(dòng)蛋白1啟動(dòng)子(wang等人，(1992)mol.cell.biol.[分子細(xì)胞生物學(xué)]12:3399-3406；以及美國專利號(hào)5,641,876)、camv35s啟動(dòng)子(odell等人，(1985)nature[自然]313:810-812)、camv19s啟動(dòng)子(lawton等人，(1987)plantmol.biol.[植物分子生物學(xué)]9:315-324)、nos啟動(dòng)子(ebert等人，(1987)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]84:5745-5749)、adh啟動(dòng)子(walker等人，(1987)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]84:6624-6629)、蔗糖合酶啟動(dòng)子(yang和russell(1990)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]87:4144-4148)、玄參花葉病毒(fmv)啟動(dòng)子(govindarajulu等人2008.molplantmicrobeinteract[分子植物微生物相互作用]21:1027-35)以及泛素啟動(dòng)子。源于泛素的組成型啟動(dòng)子積累在很多細(xì)胞類型中。已經(jīng)從幾種植物物種中克隆出泛素啟動(dòng)子以用在轉(zhuǎn)基因植物中使用，例如，向日葵(binet等人，1991.plantscience[植物科學(xué)]79:87-94)、玉米(christensen等人，1989.plantmolec.biol.[植物分子生物學(xué)]12:619-632)和擬南芥(norris等人，1993.plantmolec.biol.[植物分子生物學(xué)]21，895-906)。玉蜀黍泛素啟動(dòng)子(ubip)已經(jīng)在轉(zhuǎn)基因單子葉植物系統(tǒng)中得以發(fā)展，并且它的序列以及構(gòu)建用于單子葉植物轉(zhuǎn)化的載體披露于quail等人(美國專利號(hào)6,020,190)中。在一些實(shí)施例中，可以使用組織特異性/組織優(yōu)選的啟動(dòng)子。組織特異性或組織優(yōu)選的表達(dá)模式包括但不限于綠色組織特異性或優(yōu)選的、根特異性或優(yōu)選的、莖特異性或優(yōu)選的、以及花特異性或優(yōu)選的。適用于在綠色組織中表達(dá)的啟動(dòng)子包括調(diào)節(jié)涉及光合作用的基因的許多啟動(dòng)子，并且這些中的許多已經(jīng)從單子葉植物和雙子葉植物兩者中得以克隆。在一個(gè)實(shí)施例中，可用于本發(fā)明的一種啟動(dòng)子是來自磷酸烯醇羧化酶基因的玉蜀黍pepc啟動(dòng)子(hudspeth和grula，plantmolec.biol.[植物分子生物學(xué)]12:579-589(1989))。組織特異性啟動(dòng)子的非限制性實(shí)例包括與編碼種子貯藏蛋白(如β-伴大豆球蛋白、十字花科蛋白、油菜籽蛋白以及菜豆素)、玉米蛋白或油體蛋白(如油質(zhì)蛋白)、或脂肪酸生物合成中涉及的蛋白質(zhì)(包括?；d體蛋白、硬脂酰-acp去飽和酶、以及脂肪酸去飽和酶(fad2-1))的基因關(guān)聯(lián)以及與胚發(fā)育過程中表達(dá)的其他核酸(如bce4，參見，例如kridl等人(1991)seedsci.res.[種子科學(xué)研究]1:209-219；連同歐洲專利號(hào)255378)關(guān)聯(lián)的那些啟動(dòng)子?？捎糜诒景l(fā)明的核苷酸序列在植物(特別是玉蜀黍)中表達(dá)的組織特異性或組織優(yōu)選的啟動(dòng)子包括但不限于直接在根或根中的特定細(xì)胞、髓、葉或花粉中表達(dá)的那些啟動(dòng)子。此類啟動(dòng)子披露于例如但不限于wo93/07278中，通過引用以其全文結(jié)合在此。適用于本發(fā)明的組織特異性或組織優(yōu)選的啟動(dòng)子的其他非限制性實(shí)例包括披露于美國專利6,040,504中的棉花二磷酸核酮糖羧化酶(rubisco)啟動(dòng)子；披露于美國專利5,604,121中的稻蔗糖合酶啟動(dòng)子；由deframond(febs290:103-106(1991)；授予ciba-geigy的ep0452269)描述的根特異性啟動(dòng)子；描述于美國專利5,625,136(授予ciba-geigy)并驅(qū)動(dòng)玉蜀黍trpa基因表達(dá)的莖特異性啟動(dòng)子；以及披露于wo01/73087中的夜香樹黃葉卷曲病毒啟動(dòng)子，所有專利文獻(xiàn)通過引用結(jié)合在此。植物組織特異性/組織優(yōu)選的啟動(dòng)子的其他實(shí)例包括但不限于根毛特異性順式-元件(rhe)(kim等人，theplantcell[植物細(xì)胞]18:2958-2970(2006))、根特異性啟動(dòng)子rcc3(jeong等人，plantphysiol.[植物生理學(xué)]153:185-197(2010))和rb7(美國專利號(hào)5459252)、凝集素啟動(dòng)子(lindstrom等人，(1990)der.genet.11:160-167；和vodkin(1983)prog.clin.biol.res.[臨床生物研究進(jìn)展]138:87-98)、玉米乙醇脫氫酶1啟動(dòng)子(dennis等人，(1984)nucleicacidsres.[核酸研究]12:3983-4000)、s-腺苷基-l-甲硫氨酸合成酶(sams)(vandermijnsbrugge等人，(1996)plantandcellphysiology[植物和細(xì)胞生理學(xué)]，37(8):1108-1115)、玉米集光復(fù)合體啟動(dòng)子(bansal等人，(1992)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]89:3654-3658)、玉米熱激蛋白啟動(dòng)子(o'dell等人，(1985)emboj.5:451-458；和rochester等人，(1986)emboj.5:451-458)、豌豆小亞基rubp羧化酶啟動(dòng)子(cashmore，“nucleargenesencodingthesmallsubunitofribulose-l,5-bisphosphatecarboxylase[編碼核酮糖-l,5-二磷酸羧化酶的小亞基的核基因]”第29-39頁于geneticengineeringofplants[植物基因工程]中(hollaender編，普萊南出版社(plenumpress)1983；和poulsen等人，(1986)分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué))205:193-200)、ti質(zhì)粒甘露氨酸合酶啟動(dòng)子(langridge等人，(1989)美國國家科學(xué)院院刊86:3219-3223)、ti質(zhì)粒胭脂堿合酶啟動(dòng)子(langridge等人，(1989)，同上)、矮牽牛查爾酮異構(gòu)酶啟動(dòng)子(vantunen等人，(1988)emboj.7:1257-1263)、菜豆富甘氨酸蛋白1啟動(dòng)子(keller等人，(1989)genesdev.[基因與發(fā)育]3:1639-1646)、截短camv35s啟動(dòng)子(o'dell等人，(1985)nature[自然]313:810-812)、馬鈴薯糖蛋白啟動(dòng)子(wenzler等人，(1989)植物分子生物學(xué)13:347-354)、根細(xì)胞啟動(dòng)子(yamamoto等人(1990)核酸研究18:7449)、玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子(kriz等人，(1987)分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué))207:90-98；langridge等人，(1983)cell[細(xì)胞]34:1015-1022；reina等人，(1990)核酸研究18:6425；reina等人，(1990)核酸研究18:7449；和wandelt等人，(1989)核酸研究17:2354)、球蛋白-1啟動(dòng)子(belanger等人，(1991)genetics[遺傳學(xué)]129:863-872)、α-微管蛋白cab啟動(dòng)子(sullivan等人，(1989)分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué))215:431-440)、pepcase啟動(dòng)子(hudspeth和grula(1989)植物分子生物學(xué)12:579-589)、r基因復(fù)合物相關(guān)啟動(dòng)子(chandler等人，(1989)植物細(xì)胞1:1175-1183)和查爾酮合酶啟動(dòng)子(franken等人，(1991)emboj.10:2605-2612)。在一些具體實(shí)施例中，本發(fā)明的核苷酸序列與一種根優(yōu)選的啟動(dòng)子可操作地關(guān)聯(lián)。尤其可用于種子特異性表達(dá)的是豌豆球蛋白啟動(dòng)子(czako等人，(1992)mol.gen.genet.[分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué)])235:3-40；以及披露在美國專利號(hào)5,625,136中的種子特異性啟動(dòng)子?？捎糜诔墒斓娜~中表達(dá)的啟動(dòng)子是當(dāng)衰老開始時(shí)開啟的那些啟動(dòng)子，如來自擬南芥屬(arabidopsis)的sag啟動(dòng)子(gan等人，(1995)science[科學(xué)]270:1986-1988)。另外，可以使用在質(zhì)體中起作用的啟動(dòng)子。此類啟動(dòng)子的非限制性實(shí)例包括噬菌體t3基因95'utr以及其他的披露于美國專利號(hào)7,579,516中的啟動(dòng)子?？捎糜诒景l(fā)明的其他啟動(dòng)子包括但不限于s-e9小亞基rubp羧化酶啟動(dòng)子和kunitz胰蛋白酶抑制劑基因啟動(dòng)子(kti3)。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，可以使用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。因此，例如，可以使用化學(xué)調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子以通過應(yīng)用外源化學(xué)調(diào)節(jié)物來調(diào)節(jié)本發(fā)明的核苷酸序列的表達(dá)。本發(fā)明的核苷酸序列的表達(dá)經(jīng)由化學(xué)調(diào)節(jié)過的啟動(dòng)子進(jìn)行的調(diào)節(jié)使得本發(fā)明的多肽僅當(dāng)用誘導(dǎo)的化學(xué)品處理作物植物時(shí)能被合成。取決于目的，在應(yīng)用化學(xué)品誘導(dǎo)本發(fā)明的核苷酸序列的表達(dá)時(shí)，該啟動(dòng)子可以是化學(xué)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，或者在應(yīng)用化學(xué)品抑制本發(fā)明的核苷酸序列表達(dá)時(shí)該啟動(dòng)子可以是化學(xué)阻抑型啟動(dòng)子。化學(xué)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子在本領(lǐng)域中是已知的，并且包括但不限于玉米in2-2啟動(dòng)子(它是由苯磺酰胺除草劑安全劑激活)、玉米gst啟動(dòng)子(它是由用作發(fā)芽前除草劑的疏水親電子化合物激活)、以及煙草pr-1a啟動(dòng)子(它是由水楊酸激活)(例如，pr1a系統(tǒng))、類固醇反應(yīng)性啟動(dòng)子(參見例如，schena等人，(1991)美國國家科學(xué)院院刊88,10421-10425和mcnellis等人，(1998)plantj.[植物學(xué)雜志]14,247-257中的糖皮質(zhì)激素-誘導(dǎo)型啟動(dòng)子)以及四環(huán)素-誘導(dǎo)型啟動(dòng)子和四環(huán)素-阻抑型啟動(dòng)子(參見例如，gatz等人，(1991)分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué)227、229-237和美國專利號(hào)5,814,618和5,789,156)、lac阻遏物系統(tǒng)啟動(dòng)子、銅-誘導(dǎo)型系統(tǒng)啟動(dòng)子、水楊酸誘導(dǎo)型系統(tǒng)啟動(dòng)子(例如，pr1a系統(tǒng))、糖皮質(zhì)激素-誘導(dǎo)型啟動(dòng)子(aoyama等人，(1997)植物學(xué)雜志11:605-612)和蛻皮激素-誘導(dǎo)型系統(tǒng)啟動(dòng)子。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的其他非限制性實(shí)例包括aba-和細(xì)胞膨脹-誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、植物生長素結(jié)合蛋白基因啟動(dòng)子(schwob等人，(1993)植物學(xué)雜志4:423-432)、udp葡萄糖類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶啟動(dòng)子(ralston等人，(1988)遺傳學(xué)119:185-197)、mpi蛋白酶抑制劑啟動(dòng)子(cordero等人，(1994)植物學(xué)雜志6:141-150)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動(dòng)子(kohler等人，(1995)植物分子生物學(xué)29:1293-1298；martinez等人，(1989)j.mol.biol.[分子生物學(xué)雜志]208:551-565；和quigley等人，(1989)j.mol.evol.[分子進(jìn)化雜志]29:412-421)。還包括苯磺酰胺誘導(dǎo)型(美國專利號(hào)5,364,780)和乙醇誘導(dǎo)型(國際專利申請公開號(hào)wo97/06269和wo97/06268)系統(tǒng)和谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶啟動(dòng)子。同樣地，可以使用描述于gatz(1996)currentopinionbiotechnol.[生物技術(shù)新見]7:168-172和gatz(1997)annu.rev.plantphysiol.plantmol.biol.[植物生理學(xué)與植物分子生物學(xué)年度綜述]48:89-108中的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子中的任一種。適用于指導(dǎo)本發(fā)明的核苷酸序列在植物中的表達(dá)的其他化學(xué)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子披露于美國專利5,614,395中，該專利通過引用以其全文結(jié)合在此?；虮磉_(dá)的化學(xué)誘導(dǎo)還詳述于公開申請ep0332104(授予ciba-geigy)和美國專利5,614,395中。在一些實(shí)施例中，一種用于化學(xué)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子可以是煙草pr-1a啟動(dòng)子。在另外的方面中，本發(fā)明的核苷酸序列可以與一種啟動(dòng)子可操作地關(guān)聯(lián)，該啟動(dòng)子是創(chuàng)傷誘導(dǎo)型或由有害生物或病原體侵染(例如，昆蟲或線蟲植物有害生物)進(jìn)行的誘導(dǎo)型。已經(jīng)描述了在創(chuàng)傷部位和/或在有害生物攻擊(例如，昆蟲/線蟲吞食)或植物病原菌侵染的部位處表達(dá)的數(shù)量眾多的啟動(dòng)子。理想地，這種啟動(dòng)子應(yīng)僅在攻擊部位處或鄰近該部位具有局部活性，并且以這種方式，本發(fā)明的核苷酸序列的表達(dá)將集中在所侵入或攝食的細(xì)胞中。此類啟動(dòng)子包括但不限于由以下各項(xiàng)描述的那些啟動(dòng)子：stanford等人，mol.gen.genet.[分子與普通遺傳學(xué)]215:200-208(1989)；xu等人，plantmolec.biol.[植物分子生物學(xué)]22:573-588(1993)；logemann等人，plantcell[植物細(xì)胞]1:151-158(1989)；rohrmeier和lehle，植物分子生物學(xué)22:783-792(1993)；firek等人，植物分子生物學(xué)22:129-142(1993)；warner等人，plantj.[植物雜志]3:191-201(1993)；美國專利號(hào)5,750,386；美國專利號(hào)5,955,646；美國專利號(hào)6,262,344；美國專利號(hào)6,395,963；美國專利號(hào)6,703,541；美國專利號(hào)7,078,589；美國專利號(hào)7,196,247；美國專利號(hào)7,223,901；以及美國專利申請公開2010043102。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，使用“最小啟動(dòng)子”或“基本啟動(dòng)子”。最小啟動(dòng)子能夠募集并結(jié)合rna聚合酶ii復(fù)合體及其輔助蛋白，以允許轉(zhuǎn)錄起始和延伸。在一些實(shí)施例中，最小啟動(dòng)子被構(gòu)建成僅包括來自轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和感興趣的核苷酸序列的轉(zhuǎn)錄所必需的一個(gè)選定啟動(dòng)子的核苷酸/核苷酸序列的一個(gè)啟動(dòng)子，這一感興趣的核苷酸序列可操作地與包括但不局限于tata盒序列的最小啟動(dòng)子相關(guān)聯(lián)。在其他實(shí)施例中，最小啟動(dòng)子缺少募集并結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的cis序列，這些轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)(例如，增強(qiáng)、抑制、賦予組織特異性，賦予誘導(dǎo)性或抑制性)轉(zhuǎn)錄。最小啟動(dòng)子通常被放置在待表達(dá)的核苷酸序列的上游(即，5’)。因此，可以選擇來自與本發(fā)明一起可用的任何啟動(dòng)子的核苷酸/核苷酸序列用作一個(gè)最小啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的重組核酸分子可以是一種“表達(dá)盒”。如在此使用的，“表達(dá)盒”意指一種包含感興趣的核苷酸序列(例如，本發(fā)明的核苷酸序列)的重組核酸分子，其中該核苷酸序列與至少一個(gè)控制序列(例如，啟動(dòng)子)可操作地關(guān)聯(lián)。因此，本發(fā)明的一些實(shí)施例提供了被設(shè)計(jì)成表達(dá)編碼本發(fā)明的dsrna或sirna的核苷酸序列的表達(dá)盒。以這種方式，例如，可操作地與本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列相關(guān)聯(lián)的一個(gè)或多個(gè)植物啟動(dòng)子可以提供于表達(dá)盒中，用于玉米植物、植物部分和/或植物細(xì)胞中的表達(dá)。包含感興趣的核苷酸序列的表達(dá)盒可以是嵌合的，意味著它的組分中的至少一種相對(duì)于它的其他組分中的至少一種是異源的。表達(dá)盒還可以是一種包括驅(qū)動(dòng)其天然基因的天然啟動(dòng)子，然而已經(jīng)以適用于異源表達(dá)的重組形式而獲得的。表達(dá)盒的這種用途使它如此在其被引入的細(xì)胞中不是天然發(fā)生的。表達(dá)盒還可以任選地包括在植物中具有功能性的一個(gè)轉(zhuǎn)錄和/或翻譯終止區(qū)(即，終止區(qū))。多種轉(zhuǎn)錄終止子是可供用于在表達(dá)盒中使用并且負(fù)責(zé)在超出感興趣的異源核苷酸序列時(shí)的轉(zhuǎn)錄終止以及正確的mrna聚腺苷酸化。該終止區(qū)對(duì)于該轉(zhuǎn)錄起始區(qū)可以是天然的，對(duì)于該可操作地連接的感興趣的核苷酸序列可以天然的，對(duì)于該植物宿主可以是天然的，或者可以是源自另一種來源(即，對(duì)于該啟動(dòng)子、該感興趣的核苷酸序列、該植物宿主、或其任意組合而言是外來的或異源的)。適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄終止子包括但不限于camv35s終止子、tml終止子、胭脂堿合酶終止子和/或豌豆rbcse9終止子。這些終止子可以在單子葉植物和雙子葉植物二者中使用。此外，可以使用編碼序列的天然轉(zhuǎn)錄終止子。本發(fā)明的表達(dá)盒還可以包括用于選擇性標(biāo)記的核苷酸序列，該選擇性標(biāo)記可以用于選擇轉(zhuǎn)化的植物、植物部分和/或植物細(xì)胞。如在此使用的“選擇性標(biāo)記(selectablemarker)”意指一種核苷酸序列，當(dāng)該核苷酸序列表達(dá)時(shí)向表達(dá)該標(biāo)記的植物、植物部分和/或植物細(xì)胞賦予一種不同的表型，并且因此允許此類轉(zhuǎn)化的植物、植物部分和/或植物細(xì)胞與不具有該標(biāo)記的那些區(qū)別開來。這樣一個(gè)核苷酸序列可以編碼一種可選擇的抑或可篩選的標(biāo)記，這取決于該標(biāo)記是否賦予可以通過化學(xué)手段而被選擇的性狀，如通過使用選擇劑(例如，抗生素、除草劑等)，或者取決于該標(biāo)記是否僅是一種人們可以通過觀察或測試而鑒別的性狀，如通過篩選(例如，r座位性狀)。當(dāng)然，適合的選擇性標(biāo)記的許多實(shí)例在本領(lǐng)域中是已知的并且可以用于在此描述的表達(dá)盒中。選擇性標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于一種編碼neo或nptii的核苷酸序列，它賦予對(duì)卡那霉素、g418等的抗性(potrykus等人(1985)mol.gen.genet.[分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué)]199:183-188)；一種編碼bar的核苷酸序列，它賦予對(duì)草丁膦的抗性；一種編碼改變的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(epsp)合酶的核苷酸序列，它賦予對(duì)草甘膦的抗性(hinchee等人(1988)biotech.[生物技術(shù)]6:915-922)；一種編碼腈水解酶(如來自臭鼻克雷白氏桿菌(klebsiellaozaenae)的bxn)的核苷酸序列，它賦予對(duì)溴草腈的抗性(stalker等人(1988)，science[科學(xué)]242:419-423)；-種編碼改變的乙酰乳酸合酶(als)的核苷酸序列，它賦予對(duì)咪唑啉酮、磺酰脲或其他als-抑制化學(xué)品的抗性(歐洲專利申請?zhí)?54204)；一種編碼甲氨蝶呤-抗性的二氫葉酸還原酶(dhfr)的核苷酸序列(thillet等人(1988)j.biol.chem.[生物化學(xué)雜志]263:12500-12508)；一種編碼茅草枯脫鹵素酶的核苷酸序列，它賦予對(duì)茅草枯的抗性；一種編碼甘露糖-6-磷酸異構(gòu)酶(也稱為磷酸甘露糖異構(gòu)酶(pmi))的核苷酸序列，它賦予代謝甘露糖的能力(美國專利號(hào)5,767,378和5,994,629)；一種編碼改變的鄰氨基苯甲酸鹽合酶的核苷酸序列，它賦予對(duì)5-甲基色氨酸的抗性；或一種編碼hph的核苷酸序列，它賦予對(duì)潮霉素的抗性。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇用于在本發(fā)明的表達(dá)盒中使用的適合的選擇性標(biāo)記。另外的選擇性標(biāo)記包括但不限于：編碼β-葡萄糖醛酸酶或uida(gus、編碼一種不同的顯色底物已知的酶的一種核苷酸序列；編碼一種調(diào)節(jié)花青素顏料(紅色)在植物組織中的產(chǎn)生的產(chǎn)物的一種r-基因座核苷酸序列(dellaporta等人，“molecularcloningofthemaizer-njallelebytransposon-taggingwithac[通過用ac進(jìn)行轉(zhuǎn)座子-標(biāo)記的玉蜀黍r-nj等位基因的分子克隆]”，第263-282頁，其中：chromosomestructureandfunction:impactofnewconcepts[染色體結(jié)構(gòu)和功能：新概念的影響]，18thstadlergeneticssymposium[第18次斯塔德勒遺傳學(xué)研討會(huì)](gustafson和appels編輯，普萊紐姆出版社(plenumpress)1988))；編碼β-內(nèi)酰胺酶(一種不同的顯色底物(例如，padac，一種顯色的頭孢菌素)已知的酶)的一種核苷酸序列(sutcliffe(1978)proc.natl.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]75:3737-3741)；編碼xyle、編碼一種鄰苯二酚雙加氧酶的一種核苷酸序列(zukowsky等人(1983)美國國家科學(xué)院院刊80:1101-1105)；編碼酪氨酸酶(一種能夠?qū)⒗野彼嵫趸蒬opa和多巴醌(它們又縮合形成黑色素)的酶)的一種核苷酸序列(katz等人(1983)j.gen.microbiol.[普通微生物學(xué)雜志]129:2703-2714)；編碼β-半乳糖苷酶(一種存在顯色底物的酶)的一種核苷酸序列；編碼允許生物體發(fā)光檢測的熒光素酶(lux)的一種核苷酸序列(ow等人(1986)science[科學(xué)]234:856-859)；編碼可以用于鈣敏感性的生物體發(fā)光檢測中的水母發(fā)光蛋白的一種核苷酸序列(prasher等人(1985)biochem.biophys.res.comm.[生物化學(xué)與生物物理研究通訊]126:1259-1268)；或者編碼綠色熒光蛋白的一種核苷酸序列(niedz等人(1995)plantcellreports[植物細(xì)胞報(bào)告]14:403-406)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇用于在本發(fā)明的表達(dá)盒中使用的適合的選擇性標(biāo)記。本發(fā)明的表達(dá)盒還可以包括對(duì)其他所希望的性狀進(jìn)行編碼的多核苷酸。此類所希望的性狀可以是賦予昆蟲抗性或賦予線蟲抗性的其他多核苷酸，或其他農(nóng)業(yè)上所希望的性狀。此類多核苷酸可以與核苷酸序列的任何組合疊加，以產(chǎn)生出具有所希望的表型的植物、植物部分或植物細(xì)胞。疊加的組合可以通過任何方法來產(chǎn)生，包括但不限于，通過任何常規(guī)的方法學(xué)的雜交育種植物或通過遺傳轉(zhuǎn)化。如果是通過遺傳轉(zhuǎn)化這些植物來進(jìn)行疊加，則編碼其他所希望的性狀的核苷酸序列可以在任何時(shí)間并且以任何次序進(jìn)行組合。例如，一個(gè)單個(gè)轉(zhuǎn)基因可以包括多個(gè)表達(dá)盒，以致于多個(gè)表達(dá)盒被引入在單個(gè)基因組位置處的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的基因組中?？商娲?，包括一種或多種所希望的性狀的轉(zhuǎn)基因植物可以用作通過后續(xù)轉(zhuǎn)化而引入另外的性狀的靶標(biāo)。另外的核苷酸序列可以在一個(gè)共轉(zhuǎn)化方案中與由表達(dá)盒的任何組合提供的本發(fā)明的核苷酸序列、核酸分子、核酸構(gòu)建體、和/或其他組合物同時(shí)引入。例如，如果將引入兩個(gè)核苷酸序列，則它們可以合并在分開的盒(反式)中或可以合并在相同的盒(順式)上。這些核苷酸序列的表達(dá)可以通過相同的啟動(dòng)子或通過不同的啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)。進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到的是，核苷酸序列可以在一個(gè)所希望的基因組位置處使用位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)進(jìn)行疊加。參見，例如，國際專利申請公開號(hào)wo99/25821；wo99/25854；wo99/25840；wo99/25855；以及wo99/25853。因此，表達(dá)盒可以包括用于農(nóng)藝性狀的一種或多種多肽的一個(gè)編碼序列，這些農(nóng)藝性狀的主要受益者是種子公司、種植者或谷粒加工者。感興趣的多肽可以是由感興趣的多核苷酸序列編碼的任何多肽。適合用于在植物中生產(chǎn)的感興趣的多肽的非限制性實(shí)例包括產(chǎn)生農(nóng)藝學(xué)重要性狀的那些多肽，這些性狀如除草劑抗性(有時(shí)也稱為“除草劑耐受性”)、病毒抗性、細(xì)菌病原體抗性、昆蟲抗性、線蟲抗性、和/或真菌抗性。參見，例如，美國專利號(hào)5,569,823；5,304,730；5,495,071；6,329,504；以及6,337,431。適合于植物轉(zhuǎn)化的載體說明于在本說明書的其他地方。對(duì)于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，二元載體或攜帶至少一個(gè)t-dna邊界序列的載體是適合的，而對(duì)于直接基因轉(zhuǎn)移，任何載體都是適合的，并且僅含有感興趣的構(gòu)建體的線性dna也許是優(yōu)選的。在直接基因轉(zhuǎn)移的情況下，可以使用以單個(gè)dna種類的轉(zhuǎn)化或共轉(zhuǎn)化(schocher等人，biotechnology[生物技術(shù)]4:1093-1096(1986))。對(duì)于直接基因轉(zhuǎn)移以及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化這二者，轉(zhuǎn)化通常(但不是必需的)用一種選擇性標(biāo)記進(jìn)行，這種選擇性標(biāo)記可以提供針對(duì)一種抗生素(卡那霉素、潮霉素、或甲氨蝶呤)或一種除草劑(basta)的抗性。本發(fā)明的植物轉(zhuǎn)化載體還可以包括其他選擇性標(biāo)記基因，例如，在美國專利5,767,378和5,994,629中所披露的，包含提供轉(zhuǎn)基因植物陽性選擇的基因(如磷酸甘露糖異構(gòu)酶(pmi))(通過引用將其合并在此)或提供對(duì)除草劑草銨膦(草丁膦)耐受性的草銨膦乙酰轉(zhuǎn)移酶(pat)。然而，選擇性標(biāo)記的選擇對(duì)于本發(fā)明并不是至關(guān)重要的。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的核酸序列被直接轉(zhuǎn)化進(jìn)入質(zhì)體基因組中。在美國專利號(hào)5,451,513、5,545,817和5,545,818中，在pct申請?zhí)杦o95/16783中，以及在麥克布萊德(mcbride)等人(1994)美國國家科學(xué)院院刊(proc.nati.acad.sci.usa)91，7301-7305中廣泛描述了質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù)?；镜娜~綠體轉(zhuǎn)化技術(shù)涉及將位于選擇性標(biāo)記側(cè)翼的克隆的質(zhì)體dna區(qū)連同感興趣的基因一起引入適合的靶組織中，這是(例如)使用生物射彈(biolistic)或原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(例如，氯化鈣或peg介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化)來進(jìn)行的。這些1至1.5kb的側(cè)翼區(qū)(被命名為靶向序列)促進(jìn)了與質(zhì)體基因組的同源重組，并且因而允許置換或修飾該原質(zhì)體(plastome)的特定區(qū)域。最初，將葉綠體16srrna和rps12基因的點(diǎn)突變(賦予對(duì)大觀霉素和/或鏈霉素抗性)用作用于轉(zhuǎn)化的選擇性標(biāo)記(svab,z.，hajdukiewicz，p.和maliga，p.(1990)proc.nati.acad.sci.usa[美國國家科學(xué)院院刊]87，8526-8530；staub，j.m.和maliga,p.，(1992)plantcell[植物細(xì)胞]4，39-45)。這以大約每100次靶葉轟擊大約1個(gè)的頻率產(chǎn)生穩(wěn)定的同質(zhì)轉(zhuǎn)化株。在這些標(biāo)記之間克隆位點(diǎn)的存在允許建立質(zhì)體靶向載體用于外來基因的引入(staub,j.m.和maliga,p.(1993)emboj.[歐洲分子生物學(xué)雜志]12，601-606)。轉(zhuǎn)化效率的實(shí)質(zhì)性增加通過用顯性的選擇性標(biāo)記(對(duì)大觀霉素解毒酶氨基糖苷-3'-腺苷轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行編碼的細(xì)菌aada基因)置換隱性的rrna或r蛋白抗生素抗性基因而獲得(svab,z.和maliga,p.(1993)proc.natl.acad.sci.[美國國家科學(xué)院院刊]，90，913-917)。先前，這種標(biāo)記已經(jīng)被成功地用于萊茵衣藻這種綠藻的質(zhì)體基因組的高頻率轉(zhuǎn)化(goldschmidt-clermont,m.(1991)nucl.acidsres.[核酸研究]19:4083-4089)。有用于質(zhì)體轉(zhuǎn)化的其他選擇性標(biāo)記在本領(lǐng)域是已知的，并且被包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。典型地，轉(zhuǎn)化之后需要大致15-20個(gè)細(xì)胞分裂循環(huán)以便達(dá)到一種同質(zhì)狀態(tài)。質(zhì)體表達(dá)(其中多種基因通過同源重組被插入到在每個(gè)植物細(xì)胞中存在的所有數(shù)千個(gè)環(huán)狀質(zhì)體基因組的拷貝中)利用了超過核表達(dá)的基因的龐大的拷貝數(shù)目的優(yōu)點(diǎn)，以便允許能夠很容易超過總的可溶性植物蛋白的10％的表達(dá)水平。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，將本發(fā)明的一種核酸序列插入至一種質(zhì)體靶向的載體中并且轉(zhuǎn)化至一種所希望的植物宿主的質(zhì)體基因組中。獲得了包含本發(fā)明的一種核酸序列的對(duì)于質(zhì)體基因組同型的植物，并且這些植物優(yōu)選地能夠高表達(dá)該核酸序列。包括本發(fā)明的干擾rna的轉(zhuǎn)基因植物或種子還可以用一種殺蟲劑或殺蟲種子包衣進(jìn)行處理，如描述于美國專利號(hào)5,849,320和5,876,739(通過引用結(jié)合在此)中。在本發(fā)明的殺蟲劑或殺蟲種子包衣以及轉(zhuǎn)基因植物或種子有效對(duì)抗同一靶標(biāo)昆蟲(例如根螢葉甲屬靶標(biāo)昆蟲)的情況下，該組合(i)在一種用于進(jìn)一步增強(qiáng)本發(fā)明的組合物對(duì)抗該靶標(biāo)昆蟲的活性的方法中以及(ii)在一種用于通過提供對(duì)抗該靶標(biāo)昆蟲的又另一種作用機(jī)制而防止對(duì)本發(fā)明的組合物產(chǎn)生抗性的方法中是有用的。因此，本發(fā)明提供了一種增強(qiáng)根螢葉甲屬昆蟲種群的控制的方法，該方法包括提供一種本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物或種子并且向該植物或該種子施用本發(fā)明的殺蟲劑或殺蟲種子包衣。此類殺蟲劑和/或殺蟲種子包衣的實(shí)例包括但不限于，氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯、有機(jī)磷酸酯、friprole、新煙堿、有機(jī)氯化物、沙蠶毒素或其組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，該殺蟲劑或殺蟲種子包衣選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：克百威，胺甲萘，滅多蟲，聯(lián)苯菊酯，七氟菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，λ-氯氟氰菊酯，氯氰菊酯，溴氰菊酯，毒死蜱，氯氧磷，樂果，滅線磷，馬拉硫磷，甲基對(duì)硫磷，甲拌磷，特丁磷，叔丁嘧啶磷(tebupirimiphos)，氟蟲腈，啶蟲脒，吡蟲啉，噻蟲啉，噻蟲嗪，硫丹，殺蟲磺，及其組合。包含此類殺蟲劑和殺蟲種子包衣的商業(yè)產(chǎn)品包括但不限于以及本發(fā)明的組合物還可以與其他生物控制劑組合，以增強(qiáng)根螢葉甲屬昆蟲種群的控制。因此，通過提供一種轉(zhuǎn)基因植物，本發(fā)明提供了一種增強(qiáng)根螢葉甲屬昆蟲種群的控制的方法，該轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生本發(fā)明的干擾rna，并且進(jìn)一步包括一種編碼殺有害生物劑(例如像馬鈴薯糖蛋白、蛋白酶、殺蟲蛋白、細(xì)菌派生出的殺蟲蛋白、蘇云金芽孢桿菌殺蟲蛋白、致病桿菌殺蟲蛋白或蛋白質(zhì)復(fù)合物、發(fā)光桿菌殺蟲蛋白或蛋白質(zhì)復(fù)合物、側(cè)孢芽孢桿菌殺蟲蛋白或蛋白質(zhì)復(fù)合物，以及球形芽孢桿菌殺蟲蛋白)的多核苷酸。在一些實(shí)施例中，該蘇云金芽孢桿菌殺蟲蛋白選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：cry1蛋白，cry3蛋白，cry7蛋白，cry8蛋白，cry23蛋白，cry36蛋白，cry37蛋白，cry34蛋白連同cry35蛋白，修飾的cry3a蛋白，以及由其產(chǎn)生的雜交蛋白。在其他實(shí)施例中，該蘇云金芽孢桿菌殺蟲蛋白選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：cry3bb1，cry34ab1連同cry35ab1，mcry3a以及ecry3.1ab。在另一個(gè)實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因種子是一種玉米植物或玉米種子。在另一個(gè)實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因玉米植物通過一種包含本發(fā)明的dsrna的第一轉(zhuǎn)基因玉米植物與一種包含選自下組的轉(zhuǎn)基因事件的轉(zhuǎn)基因玉米植物雜交而提供，該組由以下各項(xiàng)組成：mir604、事件5307、das51922-7、mon863以及mon88017。即使在該殺蟲劑或殺蟲種子包衣有效對(duì)抗一種不同的昆蟲的情況下，該殺蟲劑或殺蟲種子包衣對(duì)于擴(kuò)展昆蟲控制的范圍是有用的，例如通過將一種具有對(duì)抗鱗翅目昆蟲活性的殺蟲劑或殺蟲種子包衣加入本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物或種子(具有對(duì)抗鞘翅目昆蟲的活性)中，所處理的植物或包衣的轉(zhuǎn)基因種子控制鱗翅目和鞘翅目害蟲兩者。在另外的實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋來自本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物、種子或其部分的生物樣品，其中該樣品包括作為本發(fā)明的dsrna或編碼本發(fā)明的dsrna的至少一條鏈的核酸。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種衍生自本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物、種子或其部分的商品產(chǎn)品。在一些實(shí)施例中，該商品產(chǎn)品選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：整個(gè)或經(jīng)處理的種子、豆類、谷物、籽粒、殼、粉、粗碾去殼谷類、面粉、糖、糖、淀粉、蛋白質(zhì)濃縮物、蛋白質(zhì)分離物、蠟、油、提取物、汁、濃縮物、液體、糖漿、飼料、青貯飼料、纖維、紙或其他從植物生產(chǎn)的食物或產(chǎn)品。在其他實(shí)施例中，該生物樣品或商品產(chǎn)品對(duì)昆蟲具有毒性。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因植物是一種轉(zhuǎn)基因玉米植物。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種控制根螢葉甲屬昆蟲的方法，該方法包括使該根螢葉甲屬昆蟲與一種作為本發(fā)明的干擾rna分子或能夠產(chǎn)生本發(fā)明的干擾rna分子的核酸分子接觸，該干擾rna分子用于抑制組蛋白基因在根螢葉甲屬昆蟲中的表達(dá)，從而控制該根螢葉甲屬昆蟲。在一些實(shí)施例中，該組蛋白基因包括一個(gè)組蛋白編碼序列(i)與seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體具有至少80％一致性、至少85％一致性、至少90％一致性、至少95％一致性、至少96％一致性、至少97％一致性、至少98％一致性、或至少99％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體；或(iii)包括編碼由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47編碼的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體。在一些實(shí)施例中，該組蛋白編碼序列包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna分子與可從根螢葉甲屬組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mrna多核苷酸的一部分互補(bǔ)。在控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法的一些實(shí)施例中，該干擾rna分子包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的從18、19、20、或21個(gè)連續(xù)核苷酸至至少約300個(gè)連續(xù)核苷酸，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明的干擾rna包括以下各項(xiàng)，基本由或由以下各項(xiàng)組成：(a)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:3(dvh4mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:3的核苷酸1至291；(b)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351；(c)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:29(duh4-1mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:29的核苷酸1至291；(d)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:33(duh4-2mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:33的核苷酸1至核苷酸291；(e)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:38(duh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:38的核苷酸1至351；(f)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:43(dbh4mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:43的核苷酸1至核苷酸291；或(f)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:48(dbh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:48的核苷酸1至351。換言之，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，該干擾rna包括，例如，291個(gè)seqidno:3的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即，19-mer)中任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-augacuggacguggaaagg-3')(seqidno:11)、堿基2-20(5'-ugacuggacguggaaaggg-3')(seqidno:12)、堿基3-21(5'-gacuggacguggaaagggu-3')(seqidno:13)依次類推直至堿基291-309(5'-uuuguacgguuuugguggu-3')(seqidno:14)，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，該干擾rna包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，基本由其組成或由其組成，其中n是seqidno:4的核苷酸1至核苷酸351。換言之，被靶向的mrna的該部分包括351個(gè)seqidno:7的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即，19-mer)中任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-augccuccuaagacgagug-3')(seqidno:15)、堿基2-20(5'-ugccuccuaagacgagugg-3')(seqidno:16)、堿基3-21(5'-gccuccuaagacgaguggu-3')(seqidno:17)依次類推直至堿基351-369(5'-uaaauacacaaguucuaag-3')(seqidno:18)，基本由其組成或由其組成。在仍其他的實(shí)施例中，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，本發(fā)明的該干擾rna包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48，基本由其組成或由其組成。在控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法的一些實(shí)施例中，該干擾rna分子包括以下各項(xiàng)，基本由或由以下各項(xiàng)組成：(a)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:4(dvh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:4的核苷酸1至291；(b)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351；(c)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:30(duh4-1*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:30的核苷酸1至291；(d)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:34(duh4-2*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:34的核苷酸1至核苷酸291；(e)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:39(duh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:39的核苷酸1至351；(f)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:44(dbh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:44的核苷酸1至核苷酸291；或(f)由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:49(dbh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:49的核苷酸1至351。換言之，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，該干擾rna包括，例如，291個(gè)seqidno:4的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即，19-mer)中的任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-uacugaccugcaccuuucc-3')(seqidno:19)、堿基2-20(5'-acugaccugcaccuuuccc-3')(seqidno:20)、堿基3-21(5'-cugaccugcaccuuuccca-3')(seqidno:21)依次類推直至堿基291-309(5'-aaacaugccaaaaccacca-3')(seqidno:22)，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，該干擾rna包括由n至n+18個(gè)核苷酸組成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列的核苷酸序列，基本由其組成或由其組成，其中n是seqidno:8的核苷酸1至核苷酸351。換言之，該反義鏈包括351個(gè)seqidno:8的19個(gè)連續(xù)核苷酸子序列(即，19-mer)中的任一個(gè)，例如，堿基1-19(5'-uacggaggauucugcucac-3')(seqidno:23)、堿基2-20(5'-acggaggauucugcucacc-3')(seqidno:24)、堿基3-21(5'-cggaggauucugcucacca-3')(seqidno:25)依次類推直至堿基351-369(5'-ugauuuauguguucaagau-3')(seqidno:26)，基本由其組成或由其組成。在其他實(shí)施例中，控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法包括一種干擾rna，該干擾rna包括核苷酸序列seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49，基本由其組成或由其組成。在控制根螢葉甲屬昆蟲有害生物的方法的一些實(shí)施例中，該根螢葉甲屬昆蟲選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)，西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)，黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)，黃瓜條根螢葉甲(帶狀黃瓜甲蟲)，黃瓜十一星葉甲(西方斑點(diǎn)黃瓜甲蟲)，斯格尼根螢葉甲(3斑葉甲)，南美葉甲(菊花甲蟲)以及墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲)。在控制根螢葉甲屬昆蟲的方法的其他實(shí)施例中，該接觸包括(a)種植轉(zhuǎn)基因種子，該轉(zhuǎn)基因種子能夠產(chǎn)生一種表達(dá)該核酸分子的轉(zhuǎn)基因植物，其中該根螢葉甲屬昆蟲攝食該轉(zhuǎn)基因植物或其部分；或(b)將包括該核酸分子的組合物施用至種子或植物或其部分，其中該根螢葉甲屬昆蟲攝食該種子、該植物或其部分。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因種子和該轉(zhuǎn)基因植物是一種玉米種子或一種玉米植物。在其他施例中，該種子或植物是一種玉米種子或一種玉米植物。本發(fā)明還涵蓋一種減少轉(zhuǎn)基因植物上的成蟲根螢葉甲屬昆蟲種群的方法，該轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)cry蛋白、雜種cry蛋白、或修飾的cry蛋白，該方法包括在該轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)一種作為干擾rna或能夠產(chǎn)生干擾rna的核酸分子，從而減少該成蟲根螢葉甲屬昆蟲種群，該干擾rna能夠抑制組蛋白基因在成蟲根螢葉甲屬昆蟲中的表達(dá)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種降低可從組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)mrna在根螢葉甲屬昆蟲中的水平的方法，該方法包括使該根螢葉甲屬昆蟲與一種包括本發(fā)明的干擾rna分子的組合物接觸，其中該干擾rna分子降低該靶標(biāo)rna在根螢葉甲屬昆蟲的細(xì)胞中的水平。在一些實(shí)施例中，該方法的干擾rna包括至少一個(gè)dsrna，其中該dsrna是包括退火的互補(bǔ)鏈的一個(gè)雙鏈rna的區(qū)域，其中一條鏈包括一個(gè)至少19個(gè)連續(xù)核苷酸的序列，該序列與在根螢葉甲屬組蛋白靶基因內(nèi)的靶核苷酸序列是至少部分互補(bǔ)的，并且其中該干擾rna分子(i)與seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸片段，或其互補(bǔ)體具有至少85％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸片段，或其互補(bǔ)體；或(iii)包括編碼由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47編碼的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一個(gè)19個(gè)連續(xù)核苷酸的片段，或其互補(bǔ)體，其中該干擾rna分子下調(diào)在靶標(biāo)根螢葉甲屬昆蟲中的組蛋白靶基因。在另一個(gè)實(shí)施例中，通過根螢葉甲屬昆蟲攝食該組合物來實(shí)現(xiàn)接觸。在其他實(shí)施例中，由該靶標(biāo)mrna編碼的組蛋白蛋白質(zhì)的產(chǎn)生被減少。在其他實(shí)施例中，該組蛋白蛋白質(zhì)是h4組蛋白或h2b組蛋白。在其他實(shí)施例中，該組蛋白蛋白質(zhì)包括與seqidno:9、seqidno:10、seqidno:35、seqidno:40、seqidno:45、或seqidno:50具有至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、或至少約99％一致性的氨基酸。在其他實(shí)施例中，該組蛋白蛋白質(zhì)包括seqidno:9或seqidno:10。在其他實(shí)施例中，該干擾rna通過表達(dá)該干擾rna的轉(zhuǎn)基因生物體與根螢葉甲屬昆蟲接觸。在其他實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因生物體是一種轉(zhuǎn)基因植物、轉(zhuǎn)基因細(xì)菌或轉(zhuǎn)基因內(nèi)寄生菌。在其他實(shí)施例中，通過將可接受的農(nóng)用載體中的干擾rna局部地施用至根螢葉甲屬昆蟲攝食的植物或植物部分來使該干擾rna與該根螢葉甲屬昆蟲接觸。在一些實(shí)施例中，減少可從組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)mrna在根螢葉甲屬昆蟲中的水平的干擾rna對(duì)該根螢葉甲屬昆蟲而言是致死的。在一些實(shí)施例中，該根螢葉甲屬昆蟲選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲)，西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)，黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)，黃瓜條根螢葉甲(帶狀黃瓜甲蟲)，黃瓜十一星葉甲(西方斑點(diǎn)黃瓜甲蟲)，斯格尼根螢葉甲(3斑葉甲)，南美葉甲(菊花甲蟲)以及墨西哥玉米根螢葉甲(墨西哥玉米根蟲)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種賦予植物或其部分對(duì)根螢葉甲屬昆蟲耐受性的方法，該方法包括向該植物或其部分中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物，其中本發(fā)明的dsrna分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物對(duì)于該根螢葉甲屬昆蟲是有毒的，從而賦予該植物或其部分對(duì)該根螢葉甲屬昆蟲的耐受性。在其他實(shí)施例中，通過轉(zhuǎn)化一種植物細(xì)胞并且自該轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞產(chǎn)生該轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行該引入步驟。在仍其他實(shí)施例中，通過共同培育兩種植物來進(jìn)行該引入步驟。在其他實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種減少被根螢葉甲屬昆蟲攝食的植物的根損害的方法，該方法包括向該植物的細(xì)胞中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物，其中本發(fā)明的dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物對(duì)于根螢葉甲屬昆蟲是有毒的，從而減少對(duì)該植物的根損害。在其他實(shí)施例中，通過轉(zhuǎn)化一種植物細(xì)胞并且自該轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞產(chǎn)生該轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行該引入步驟。在仍其他實(shí)施例中，通過共同培育兩種植物來進(jìn)行該引入步驟。在仍其他的實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種產(chǎn)生對(duì)根螢葉甲屬昆蟲具有毒性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的方法，該方法包括向植物細(xì)胞中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物，從而產(chǎn)生與對(duì)照植物細(xì)胞相比，對(duì)該根螢葉甲屬昆蟲具有毒性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋多個(gè)由這一方法產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。在其他實(shí)施例中，使該多個(gè)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞在包括天然日光的條件下生長。在其他實(shí)施例中，通過轉(zhuǎn)化一種植物細(xì)胞并且自該轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞產(chǎn)生該轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行該引入步驟。在仍其他實(shí)施例中，通過共同培育兩種植物來進(jìn)行該引入步驟。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種產(chǎn)生對(duì)根螢葉甲屬昆蟲攝食損害具有增強(qiáng)的耐受性的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括向植物中引入一種本發(fā)明的干擾rna分子、dsrna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物，從而產(chǎn)生與對(duì)照植物相比，對(duì)根螢葉甲屬昆蟲攝食損害具有增強(qiáng)的耐受性的轉(zhuǎn)基因植物。在其他實(shí)施例中，通過轉(zhuǎn)化一種植物細(xì)胞并且自該轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞產(chǎn)生該轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行該引入步驟。在仍其他實(shí)施例中，通過共同培育兩種植物來進(jìn)行該引入步驟。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涵蓋一種為玉米種植者提供控制玉米作物中的根螢葉甲屬昆蟲有害生物種群的手段的方法，該方法包括(a)向該種植者銷售或?yàn)槠涮峁┌ㄒ环N本發(fā)明的干擾rna、核酸分子、核酸構(gòu)建體、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前體分子、和/或組合物的轉(zhuǎn)基因玉米種子；并且(b)向該種植者做廣告宣傳該轉(zhuǎn)基因玉米種子產(chǎn)生控制根螢葉甲屬昆蟲種群的轉(zhuǎn)基因玉米植物。實(shí)例通過參考以下具體的實(shí)例可以進(jìn)一步描述本發(fā)明。這些實(shí)例僅僅是出于說明性目的而提供的，并且并不旨在進(jìn)行限制，除非另外指明。實(shí)例1.鑒定西方玉米根螢葉甲中的組蛋白基因這一實(shí)例描述了來自根螢葉甲屬昆蟲的組蛋白基因和編碼序列的克隆和測序。西方玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲；wcr)和黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲；scr)rna分離購買可商購的wcr和scr卵(特點(diǎn)作物公司(cropcharacteristics,inc)，法明頓，明尼蘇達(dá)州)并且在大約30℃和周圍相對(duì)濕度下孵育。收集新羽化的新生scr(大約100-200只)并且基本根據(jù)制造商的說明，用picopuretmrna分離試劑盒(生命科技公司(lifetechnologies)，卡爾斯巴德，加利福尼亞)提取總rna。通過分光光度法測量rna濃度并且通過吸光度比值a260/280和a260/230評(píng)估純度。巴氏根螢葉甲(北方玉米根蟲；ncr)rna分離ncr卵獲得自u(píng)sdaarsncarl(布魯金斯(brookings)，南達(dá)科他州)處的昆蟲飼養(yǎng)工廠并且在約30℃和周圍相對(duì)濕度下進(jìn)行孵育。收集新羽化的新生蟲(共約20只)并且基本根據(jù)制造商的說明，用picopuretmrna分離試劑盒(生命科技公司，卡爾斯巴德，加利福尼亞)提取總rna。通過分光光度法測量rna濃度并且通過a260/280和a260/230比值評(píng)估純度。西方玉米根螢葉甲焦磷酸測序文庫制備和測序基本根據(jù)制造商的說明，在一個(gè)454平臺(tái)(454生命科學(xué)公司(454lifesciences)，布蘭福德，康涅狄格州)上通過焦磷酸測序?qū)θ硇律鷚cr轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序。將所得測定序列(read)(即，核酸序列的短片段)進(jìn)行修整并使用mira組裝器進(jìn)行組裝(參見例如，chevreux等人，2004，genomeres.[基因組研究]14:1147-1159，通過引用結(jié)合在此)。西方玉米根螢葉甲、黃瓜十一星葉甲食根亞種以及巴氏根螢葉甲illumina文庫制備和測序在illuminahi-seq2000上對(duì)全身新生轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序，并且基本根據(jù)制造商的說明書構(gòu)建100bp配對(duì)端文庫。將這些生成的2x100hi-seq測定序列進(jìn)行檢索并且分塊進(jìn)行。將這些測定序列在支持mpi的sge集群上使用abyss版本1.3.5進(jìn)行組裝。針對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行一種k-mer掃描以優(yōu)化介于r至r/2(其中r是讀數(shù)長度，約2用于步驟)之間的組裝。針對(duì)每個(gè)k-mer對(duì)來自abyss的unipaths進(jìn)行檢索，并且使用cd-hit-est版本4.6以98％百分比一致性進(jìn)行去冗余化(de-redundified)。使用cap3與所需要的100個(gè)堿基重疊處理經(jīng)去冗余化的unipath庫。使用cd-hit-est將這些生成的組裝品進(jìn)行去冗余化。然后使用abyss-scaffold程序(獨(dú)立于abyss工作流程，但利用其中的許多工具)將該數(shù)據(jù)支撐起來。通過彌補(bǔ)缺口(gapclosing)使用soapdenovogapcloser版本1.10完成組裝。使用bwa將測定序列比對(duì)至最終組裝，以保證測定序列的良好合并，并且觀察到覆蓋圖和配對(duì)結(jié)構(gòu)。鑒定來自根螢葉甲屬的h2b和h4基因a.通過blastx(針對(duì)一種蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索核苷酸翻譯)至uniprotsprot，uniprottrembl，以及基因庫nr數(shù)據(jù)庫，針對(duì)三種根螢葉甲屬種類中的每種對(duì)組裝的連續(xù)序列(在此稱為疊連群)進(jìn)行比較。與具有1e-10或更低的期望值的組蛋白基因匹配的疊連群被認(rèn)為是潛在的重要匹配。在三種種類的每一種中鑒定全長h2b和h4基因。該wcrh4和h2bcdna序列分別是seqidno:2和seqidno:6。通過桑格測序(使用標(biāo)準(zhǔn)方法)用正向和反向引物來確認(rèn)wcrh2b和wcrh4序列來擴(kuò)增每個(gè)基因的完整編碼序列(表1)。表1.用于擴(kuò)增wcrh2b和wcrh4的編碼區(qū)的引物引物名稱序列(5'→3')序列標(biāo)識(shí)符wcr_h2b_fp01atgcctcctaagacgagtggseqidno:51wcr_h2b_rp01cttagaacttgtgtatttagseqidno:52wcr_h4_fp02atgactggacgtggaaagggseqidno:53wcr_h4_rp02accaccaaaaccgtacaaagseqidno:54實(shí)例2.干擾rna分子的構(gòu)建這一實(shí)例描述了干擾rna分子的構(gòu)建，這些干擾rna分子被設(shè)計(jì)成可從根螢葉甲屬組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)mrna。構(gòu)建wcr組蛋白h2b和組蛋白h4dsrna將全長h2b和h4基因從cdna進(jìn)行擴(kuò)增，從分離自全身新羽化的新生蟲的mrna使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行該cdna的逆轉(zhuǎn)錄。使用含有t7啟動(dòng)子序列(表2)的引物來擴(kuò)增這些基因的全長編碼區(qū)，隨后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，使用標(biāo)準(zhǔn)方法以合成dsrna(還稱為干擾rna分子)。將該rna通過用相同體積的5m乙酸銨沉淀進(jìn)行純化，隨后用至少2體積的70％乙醇進(jìn)行洗滌，并且然后用重蒸餾的水將該干燥rna球粒進(jìn)行重懸浮。表2.用于擴(kuò)增wcrh2b和wcrh4的編碼區(qū)并且摻入t7啟動(dòng)子序列以促進(jìn)體外轉(zhuǎn)錄的引物實(shí)例3.dsrna對(duì)抗玉米根螢葉甲的活性這一實(shí)例描述了測試本發(fā)明的干擾rna分子對(duì)抗玉米根螢葉甲屬昆蟲的生物活性。在實(shí)驗(yàn)室生物測定中，針對(duì)對(duì)抗玉米根螢葉甲昆蟲的毒性測試上述含有dsrna的干擾rna分子。使用rna處理的人工食物法進(jìn)行生物測定。簡言之，將修改自marrone等人，1985，j.econ.entomol.[經(jīng)濟(jì)昆蟲學(xué)雜志]78:290-293的食物的熔化的人工食物傾倒進(jìn)24孔板的每個(gè)孔中并允許凝固。將干擾rna分子稀釋至適當(dāng)濃度，這樣使得將60μl的溶液添加至每個(gè)孔中的食物的表面，最終覆蓋濃度為100ngdsrna/cm2。向每個(gè)孔中加入一只根螢葉甲屬幼蟲并且將每個(gè)24孔板維持在大約28℃和16:8光照:黑暗光周期下。在侵染后第9天和第12天記錄死亡率。在所有生物測定中，將被設(shè)計(jì)成靶向綠色熒光蛋白(gfp)的含有dsrna的干擾rna分子用作陰性對(duì)照。將該生物測定重復(fù)兩次。對(duì)包括被設(shè)計(jì)為玉米根螢葉甲h2b和h4mrna的完整編碼序列的雙鏈rna的干擾rna分子進(jìn)行對(duì)抗西方玉米根蟲幼蟲的測試。示于表3中的這些結(jié)果表明被設(shè)計(jì)成可從根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)mrna的干擾rna分子對(duì)玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)具有高毒性。在這些生物測定中，12天后，wcr組蛋白2b/wcr組蛋白2b*(seqidno:7/seqidno:8)和wcr組蛋白4/wcr組蛋白4*(seqidno:3/seqidno:4)分別產(chǎn)生89％和98％死亡率。表3.處理后12天，dsrna對(duì)抗玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)的活性實(shí)例4.干擾rna分子對(duì)抗黃瓜十一星葉甲食根亞種的活性這一實(shí)例描述了測試本發(fā)明的干擾rna分子對(duì)抗黃瓜十一星葉甲食根亞種的生物活性。在實(shí)驗(yàn)室生物測定中，針對(duì)對(duì)抗黃瓜十一星葉甲食根亞種的毒性測試上述干擾rna分子。使用rna處理的人工食物法進(jìn)行生物測定。簡言之，將修改自marrone等人，1985，j.econ.entomol.[經(jīng)濟(jì)昆蟲學(xué)雜志]78:290-293的食物的熔化的人工食物傾倒進(jìn)48孔板的每個(gè)孔中并允許凝固。將dsrna分子稀釋至適當(dāng)濃度，這樣使得將20μl的溶液添加至每個(gè)孔中的食物的表面，具有在3x稀釋步驟中從0.5μg/孔低至0.00022μg/孔的8種濃度的濃度系列的最終覆蓋濃度。向每個(gè)孔中加入一只根螢葉甲屬幼蟲并且將每個(gè)48孔板維持在大約25℃和16:8光照:黑暗光周期下。在侵染后第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、和14天記錄死亡率。在所有生物測定中，將被設(shè)計(jì)成靶向綠色熒光蛋白(gfp)的dsrna用作陰性對(duì)照。對(duì)包括被設(shè)計(jì)成玉米根螢葉甲h2b和h4mrna的編碼序列的雙鏈rna的干擾rna分子進(jìn)行對(duì)抗南方玉米根蟲幼蟲的測試。示于表4中的這些結(jié)果表明包括被設(shè)計(jì)成可從根螢葉甲屬昆蟲組蛋白基因轉(zhuǎn)錄的靶標(biāo)mrna的dsrna的干擾rna分子對(duì)黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)具有高毒性。在這些生物測定中，14天后，wcr組蛋白2b/wcr組蛋白2b*(seqidno:7/seqidno:8)和wcr組蛋白4/wcr組蛋白4*(seqidno:3/seqidno:4)分別產(chǎn)生69.7％和84.8％的死亡率。該陽性對(duì)照被設(shè)計(jì)成靶向高度表達(dá)的來自南方玉米根蟲的基因。lt50是在處理時(shí)殺死半數(shù)測試的種群所需要的時(shí)間(天數(shù))。lc50是在第14天殺死半數(shù)測試的種群所需要的濃度(以μg/孔)。通過將曲線分析應(yīng)用于用abbott氏公式校正的數(shù)據(jù)獲得lt50和lc50的估計(jì)值。表4.處理后14天，dsrna對(duì)抗黃瓜十一星葉甲食根亞種(南方玉米根蟲)的活性干擾rna在第14天的死亡率％在0.5μg/孔的lt50在第14天的lc50gfp8.33nanascr陽性對(duì)照100.005.60.0209wcr組蛋白2b72.22120.0855wcr組蛋白486.1111.50.0444實(shí)例5.含有組蛋白dsrna的干擾rna分子在玉米植物中的表達(dá)該實(shí)例描述了將一種表達(dá)干擾rna分子的構(gòu)建體引入植物細(xì)胞。載體構(gòu)建被設(shè)計(jì)為發(fā)夾rna(hprna)的表達(dá)載體由含有啟動(dòng)子、正義鏈、用作環(huán)序列的內(nèi)含子、反義鏈、以及終止子的盒組成。將兩種盒設(shè)計(jì)為靶向wcrh2b或wcrh4基因；一種盒(seqidno:59)包含dvh2b(seqidno:7)和dvh2b*(seqidno:8)的正義鏈和反義鏈。另一種盒(seqidno:60)含有dvh4(seqidno:3)和dvh4*(seqidno:4)的正義鏈和反義鏈。正義鏈和反義鏈序列被限制性內(nèi)切核酸酶位點(diǎn)側(cè)接以促進(jìn)克隆。將生成的表達(dá)盒(seqidno:59和seqidno:60)分開地克隆進(jìn)適用于植物轉(zhuǎn)化的二元載體中。在植物轉(zhuǎn)化過程中，設(shè)計(jì)含有在左邊緣與右邊緣之間的第二盒的每個(gè)完整的二元載體以表達(dá)作為選擇性標(biāo)記的磷酸甘露糖異構(gòu)酶(pmi)。該質(zhì)粒還包含用于在細(xì)菌中進(jìn)行選擇的選擇性標(biāo)記。農(nóng)桿菌制備使用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)將含有發(fā)夾盒的每個(gè)生成的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)根癌土壤桿菌中。為了制備用于細(xì)胞轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌，將農(nóng)桿菌在28℃和220rpm下于液體ypc培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。將以上描述的載體轉(zhuǎn)化進(jìn)玉米中?；救缑枋鲇趎egrotto等人，2000，plantcellreports[植物細(xì)胞報(bào)告]19:798-803中的進(jìn)行未成熟的玉蜀黍胚的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。對(duì)于這個(gè)實(shí)例，所有的培養(yǎng)基組分基本上如在以上奈格圖等人所說明。然而，本領(lǐng)域內(nèi)已知的各種培養(yǎng)基成分可以被代替。轉(zhuǎn)化、選擇、和再生之后，測試植物的pmi基因和發(fā)夾dsrna干擾rna分子的存在。將來自pcr測定的陽性植物轉(zhuǎn)移至溫室中，并針對(duì)至少玉米根螢葉甲(西方玉米根蟲)的抗性進(jìn)行了測試。全植物測定將生長于4”盆中的玉米植物中的每株植物用約200只新生玉米根蟲幼蟲侵染。對(duì)于每個(gè)測定，將3株植物用作未侵染對(duì)照。這包括在生物測定中被侵染的試驗(yàn)植物、表達(dá)wcr蛋白性狀的純合植物(陽性對(duì)照),和陰性對(duì)照植物為代表的單拷貝事件。這些植物在測定過程中作為用于生長條件的對(duì)照。侵染后10-14天收集數(shù)據(jù)。評(píng)價(jià)主要是比較侵染的測試植物與未侵染的和侵染的那些對(duì)照植物的主觀量度。做出的一種關(guān)鍵視覺評(píng)價(jià)是植物是否顯示出倒伏跡象，倒伏是指示由攝食根系的大量玉米根蟲造成的嚴(yán)重?fù)p害的情況?！?”表明無明顯的根損害；“-”表明強(qiáng)壯的支柱根，攝食次生根的一些跡象；“–”表明缺乏強(qiáng)壯的支柱根或缺乏次生根生長，其可能是來自攝食損害；‘---’表明顯著更小的根質(zhì)量，具有可能的在至少2-3個(gè)支柱根上的根損害。表5.用西方玉米根蟲侵染的轉(zhuǎn)基因玉米的視覺評(píng)估植物#事件+------無dsrna20002組蛋白2bdsrna158340組蛋白4dsrna157530表5中的數(shù)據(jù)表明相比陰性對(duì)照植物，表達(dá)靶向編碼h2b或h4的基因的dsrna的轉(zhuǎn)基因玉米植物經(jīng)受更少的根損害。應(yīng)當(dāng)理解的是，在此描述的實(shí)例和實(shí)施例僅是出于說明性的目的，并且根據(jù)其說明書的不同修改或變化將提示本領(lǐng)域的技術(shù)人員并且將會(huì)包含在本申請以及隨附的權(quán)利要求書的范圍的精神和范圍之內(nèi)。在本說明書中提到的所有公開和專利申請對(duì)于本發(fā)明所涉及領(lǐng)域的技術(shù)人員的技術(shù)水平是指示性的。所有這些公開物和專利申請均通過引用結(jié)合在此，其程度如同每個(gè)單獨(dú)的公開物或?qū)＠暾埍淮_切地并單獨(dú)地指明通過引用而被結(jié)合。序列表<110>syngentaparticipationsagdonohue,kevinliu,renshuichen,jengshong<120>鞘翅目有害生物的生物控制<130>80291-wo-reg-org-p-1<150>62/096491<151>2014-12-23<160>60<170>patentinversion3.5<210>1<211>399<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>1aattgagtaattccaggacaactgaactgattgtaccatgactggacgtggaaagggtgg60taaaggtttgggcaaaggtggcgctaaacgtcaccgtaaagtattacgtgacaacatcca120aggtattaccaagcctgctataagaagattagctcgtcgcggaggtgtaaaacgtatctc180tggtttaatctatgaggaaacgcgaggtgtattgaaagtatttttggaaaacgttattag240agatgccgttacctatactgagcacgccaaaaggaaaacagtaactgctatggatgttgt300atatgcacttaaacgacaaggtcgtactttgtacggttttggtggttaattgctattaat360ttccatccttaaaaaaaacggttcttttcagaaccacgt399<210>2<211>309<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>2atgactggacgtggaaagggtggtaaaggtttgggcaaaggtggcgctaaacgtcaccgt60aaagtattacgtgacaacatccaaggtattaccaagcctgctataagaagattagctcgt120cgcggaggtgtaaaacgtatctctggtttaatctatgaggaaacgcgaggtgtattgaaa180gtatttttggaaaacgttattagagatgccgttacctatactgagcacgccaaaaggaaa240acagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacgacaaggtcgtactttgtacggt300tttggtggt309<210>3<211>309<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>3augacuggacguggaaagggugguaaagguuugggcaaagguggcgcuaaacgucaccgu60aaaguauuacgugacaacauccaagguauuaccaagccugcuauaagaagauuagcucgu120cgcggagguguaaaacguaucucugguuuaaucuaugaggaaacgcgagguguauugaaa180guauuuuuggaaaacguuauuagagaugccguuaccuauacugagcacgccaaaaggaaa240acaguaacugcuauggauguuguauaugcacuuaaacgacaaggucguacuuuguacggu300uuugguggu309<210>4<211>309<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4mrna的反義鏈<400>4uacugaccugcaccuuucccaccauuuccaaacccguuuccaccgcgauuugcaguggca60uuucauaaugcacuguuguagguuccauaaugguucggacgauauucuucuaaucgagca120gcgccuccacauuuugcauagagaccaaauuagauacuccuuugcgcuccacauaacuuu180cauaaaaaccuuuugcaauaaucucuacggcaauggauaugacucgugcgguuuuccuuu240ugucauugacgauaccuacaacauauacgugaauuugcuguuccagcaugaaacaugcca300aaaccacca309<210>5<211>478<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>5tcggggkagktttcactttgattttcaaagagtaagcgtcattttgtttttgcgatgcct60cctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaagcagggaaagcccagaagaacatttcaaaa120accgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagytatgctatttacatttataaagta180ctcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagtaaggctatgagtatcatgaacagt240tttgtaaatgatatttttgaaagaatcgcagctgaagcttctcgtttagctcattataat300aaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaaccgcagtacgtttattacttcctgga360gaattagctaaacacgctgtcagtgaaggtaccaaagctgttactaaatacacaagttct420aagtaatcaagaabtttcatctattaattataacmaaacggttcttttcagaaccaac478<210>6<211>369<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>6atgcctcctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaagcagggaaagcccagaagaacatt60tcaaaaaccgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagytatgctatttacatttat120aaagtactcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagtaaggctatgagtatcatg180aacagttttgtaaatgatatttttgaaagaatcgcagctgaagcttctcgtttagctcat240tataataaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaaccgcagtacgtttattactt300cctggagaattagctaaacacgctgtcagtgaaggtaccaaagctgttactaaatacaca360agttctaag369<210>7<211>369<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>7augccuccuaagacgagugguaaagcugcuaaaaaagcagggaaagcccagaagaacauu60ucaaaaaccgauaagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagyuaugcuauuuacauuuau120aaaguacucaaacaagugcauccugauaccgguauuuccaguaaggcuaugaguaucaug180aacaguuuuguaaaugauauuuuugaaagaaucgcagcugaagcuucucguuuagcucau240uauaauaaacguucuacaauuacaagcagagaaauucaaaccgcaguacguuuauuacuu300ccuggagaauuagcuaaacacgcugucagugaagguaccaaagcuguuacuaaauacaca360aguucuaag369<210>8<211>369<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2bmrna的反義鏈<400>8uacggaggauucugcucaccauuucgacgauuuuuucgucccuuucgggucuucuuguaa60aguuuuuggcuauucuuuuucuucgcuuucuccuuccuuucrauacgauaaauguaaaua120uuucaugaguuuguucacguaggacuauggccauaaaggucauuccgauacucauaguac180uugucaaaacauuuacuauaaaaacuuucuuagcgucgacuucgaagagcaaaucgagua240auauuauuugcaagauguuaauguucgucucuuuaaguuuggcgucaugcaaauaaugaa300ggaccucuuaaucgauuugugcgacagucacuuccaugguuucgacaaugauuuaugugu360ucaagauuc369<210>9<211>103<212>prt<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>9metthrglyargglylysglyglylysglyleuglylysglyglyala151015lysarghisarglysvalleuargaspasnileglnglyilethrlys202530proalaileargargleualaargargglyglyvallysargileser354045glyleuiletyrglugluthrargglyvalleulysvalpheleuglu505560asnvalileargaspalavalthrtyrthrgluhisalalysarglys65707580thrvalthralametaspvalvaltyralaleulysargglnglyarg859095thrleutyrglypheglygly100<210>10<211>122<212>prt<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>10metproprolysthrserglylysalaalalyslysalaglylysala151015glnlysasnileserlysthrasplyslyslyslysarglysarglys202530glutyralailetyriletyrlysvalleulysglnvalhisproasp354045thrglyileserserlysalametserilemetasnserphevalasn505560aspilephegluargilealaalaglualaserargleualahistyr65707580asnlysargserthrilethrserarggluileglnthralavalarg859095leuleuleuproglygluleualalyshisalavalsergluglythr100105110lysalavalthrlystyrthrserserlys115120<210>11<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>11augacuggacguggaaagg19<210>12<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>12ugacuggacguggaaaggg19<210>13<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>13gacuggacguggaaagggu19<210>14<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>14uuuguacgguuuugguggu19<210>15<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>15augccuccuaagacgagug19<210>16<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>16ugccuccuaagacgagugg19<210>17<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>17gccuccuaagacgaguggu19<210>18<211>19<212>rna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>18uaaauacacaaguucuaag19<210>19<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4*-1-19mer<400>19uacugaccugcaccuuucc19<210>20<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4*-2-19mersirna<400>20acugaccugcaccuuuccc19<210>21<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4*-3-19mersirna<400>21cugaccugcaccuuuccca19<210>22<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4*-291-19mersirna<400>22aaacaugccaaaaccacca19<210>23<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2b8-1-19mersirna<400>23uacggaggauucugcucac19<210>24<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2b*-2-19mersirna<400>24acggaggauucugcucacc19<210>25<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2b*-3-19mersirna<400>25cggaggauucugcucacca19<210>26<211>19<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2b*-351-19mersirna<400>26auuuauguguucaagauuc19<210>27<211>363<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>27cgaaactaattttaccctaaaaatgactggacgtggaaaaggtggtaaaggtttgggaaa60aggtggcgctaaacgtcatcgtaaagtattacgtgataacatccaaggtattaccaagcc120tgctatcagaagactagctcgtcgcggaggagtaaaacgtatttctggtttaatctatga180ggaaacgagaggtgtattgaaagtatttttggagaacgtcattagagatgcagttaccta240tactgagcacgccaaaaggaaaacagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacg300gcaaggtcgtacgttatatggttttggtggttaattgctatgaatatgattcttaaaaca360acg363<210>28<211>309<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>28atgactggacgtggaaaaggtggtaaaggtttgggaaaaggtggcgctaaacgtcatcgt60aaagtattacgtgataacatccaaggtattaccaagcctgctatcagaagactagctcgt120cgcggaggagtaaaacgtatttctggtttaatctatgaggaaacgagaggtgtattgaaa180gtatttttggagaacgtcattagagatgcagttacctatactgagcacgccaaaaggaaa240acagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacggcaaggtcgtacgttatatggt300tttggtggt309<210>29<211>309<212>rna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>29augacuggacguggaaaaggugguaaagguuugggaaaagguggcgcuaaacgucaucgu60aaaguauuacgugauaacauccaagguauuaccaagccugcuaucagaagacuagcucgu120cgcggaggaguaaaacguauuucugguuuaaucuaugaggaaacgagagguguauugaaa180guauuuuuggagaacgucauuagagaugcaguuaccuauacugagcacgccaaaaggaaa240acaguaacugcuauggauguuguauaugcacuuaaacggcaaggucguacguuauauggu300uuugguggu309<210>30<211>309<212>rna<213>人工序列<220><223>duh4變體1mrna的反義鏈<400>30uacugaccugcaccuuuuccaccauuuccaaacccuuuuccaccgcgauuugcaguagca60uuucauaaugcacuauuguagguuccauaaugguucggacgauagucuucugaucgagca120gcgccuccucauuuugcauaaagaccaaauuagauacuccuuugcucuccacauaacuuu180cauaaaaaccucuugcaguaaucucuacgucaauggauaugacucgugcgguuuuccuuu240ugucauugacgauaccuacaacauauacgugaauuugccguuccagcaugcaauauacca300aaaccacca309<210>31<211>420<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>31caagtacgtcgacacttattttaccgtaaaaatgactggacgtggaaaaggtggtaaagg60tttgggaaaaggtggcgctaaacgtcatcgtaaagttttgcgtgataacatccaaggtat120taccaagcctgctatcagaagattggctcgtcgaggaggagtaaaacgtatttctggctt180aatctatgaggaaacgagaggtgtattgaaagtatttttggaaaacgttattagagatgc240tgttacctatactgaacacgccaagaggaaaacagtaactgctatggatgttgtgtatgc300acttaaacgccaaggtcgtactttgtacggttttggtggttaatttataataacaccatc360aacttatttaaacaaacggttcttttcagagccacaattaattgcttatgtatagaattc420<210>32<211>309<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>32atgactggacgtggaaaaggtggtaaaggtttgggaaaaggtggcgctaaacgtcatcgt60aaagttttgcgtgataacatccaaggtattaccaagcctgctatcagaagattggctcgt120cgaggaggagtaaaacgtatttctggcttaatctatgaggaaacgagaggtgtattgaaa180gtatttttggaaaacgttattagagatgctgttacctatactgaacacgccaagaggaaa240acagtaactgctatggatgttgtgtatgcacttaaacgccaaggtcgtactttgtacggt300tttggtggt309<210>33<211>309<212>rna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>33augacuggacguggaaaaggugguaaagguuugggaaaagguggcgcuaaacgucaucgu60aaaguuuugcgugauaacauccaagguauuaccaagccugcuaucagaagauuggcucgu120cgaggaggaguaaaacguauuucuggcuuaaucuaugaggaaacgagagguguauugaaa180guauuuuuggaaaacguuauuagagaugcuguuaccuauacugaacacgccaagaggaaa240acaguaacugcuauggauguuguguaugcacuuaaacgccaaggucguacuuuguacggu300uuugguggu309<210>34<211>309<212>rna<213>人工序列<220><223>duh4變體2mrna的反義鏈<400>34uacugaccugcaccuuuuccaccauuuccaaacccuuuuccaccgcgauuugcaguagca60uuucaaaacgcacuauuguagguuccauaaugguucggacgauagucuucuaaccgagca120gcuccuccucauuuugcauaaagaccgaauuagauacuccuuugcucuccacauaacuuu180cauaaaaaccuuuugcaauaaucucuacgacaauggauaugacuugugcgguucuccuuu240ugucauugacgauaccuacaacacauacgugaauuugcgguuccagcaugaaacaugcca300aaaccacca309<210>35<211>103<212>prt<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>35metthrglyargglylysglyglylysglyleuglylysglyglyala151015lysarghisarglysvalleuargaspasnileglnglyilethrlys202530proalaileargargleualaargargglyglyvallysargileser354045glyleuiletyrglugluthrargglyvalleulysvalpheleuglu505560asnvalileargaspalavalthrtyrthrgluhisalalysarglys65707580thrvalthralametaspvalvaltyralaleulysargglnglyarg859095thrleutyrglypheglygly100<210>36<211>690<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<220><221>尚未歸類的特征<222>(504)..(504)<223>n是a、c、g、或t<400>37ggggcttacgccgtattactcattttattataaaaaaaaactgaaagtcgcggaagctag60ttttcgtccgactttcaaagagtaaacgtcaatttattcgcaatgcctcctaagactagt120ggtaaagctgctaaaaaagcaggaaaagctcagaagaatatttccaagaccgataagaaa180aagaagcgtaagaggaaggaaagttatgccatttacatctataaagtattgaaacaagtg240catcctgatactggtatttccagtaaggctatgagtatcatgaacagttttgtaaatgat300atttttgaaagaattgctgctgaagcttctcgtttagctcattacaataaacggtcaaca360attacaagcagagaaattcaaaccgccgtacgtttattacttcctggagagttagctaaa420cacgccgttagtgaaggtaccaaagctgttactaaatatacaagttctaagtaattataa480tatttccttttataaatataacangaagcttctcgtttagctcattacaataaacggtca540acaattacaagcagagaaattcaaaccgccgtacgtctattacttcctggagagttagct600aaacacgccgtcagtgaaggtaccaaagctgttactaaatatacaagttctaagtaatcc660cactacttcatcttacaaatataaaaaacg690<210>37<211>369<212>dna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>37atgcctcctaagactagtggtaaagctgctaaaaaagcaggaaaagctcagaagaatatt60tccaagaccgataagaaaaagaagcgtaagaggaaggaaagttatgccatttacatctat120aaagtattgaaacaagtgcatcctgatactggtatttccagtaaggctatgagtatcatg180aacagttttgtaaatgatatttttgaaagaattgctgctgaagcttctcgtttagctcat240tacaataaacggtcaacaattacaagcagagaaattcaaaccgccgtacgtttattactt300cctggagagttagctaaacacgccgttagtgaaggtaccaaagctgttactaaatataca360agttctaag369<210>38<211>369<212>rna<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>38augccuccuaagacuagugguaaagcugcuaaaaaagcaggaaaagcucagaagaauauu60uccaagaccgauaagaaaaagaagcguaagaggaaggaaaguuaugccauuuacaucuau120aaaguauugaaacaagugcauccugauacugguauuuccaguaaggcuaugaguaucaug180aacaguuuuguaaaugauauuuuugaaagaauugcugcugaagcuucucguuuagcucau240uacaauaaacggucaacaauuacaagcagagaaauucaaaccgccguacguuuauuacuu300ccuggagaguuagcuaaacacgccguuagugaagguaccaaagcuguuacuaaauauaca360aguucuaag369<210>39<211>369<212>rna<213>人工序列<220><223>duh2bmrna的反義鏈<400>39uacggaggauucugaucaccauuucgacgauuuuuucguccuuuucgagucuucuuauaa60agguucuggcuauucuuuuucuucgcauucuccuuccuuucaauacgguaaauguagaua120uuucauaacuuuguucacguaggacuaugaccauaaaggucauuccgauacucauaguac180uugucaaaacauuuacuauaaaaacuuucuuaacgacgacuucgaagagcaaaucgagua240auguuauuugccaguuguuaauguucgucucuuuaaguuuggcggcaugcaaauaaugaa300ggaccucucaaucgauuugugcggcaaucacuuccaugguuucgacaaugauuuauaugu360ucaagauuc369<210>40<211>123<212>prt<213>黃瓜十一星葉甲（diabroticaundecimpunctata）<400>40metproprolysthrserglylysalaalalyslysalaglylysala151015glnlysasnileserlysthrasplyslyslyslysarglysarglys202530glusertyralailetyriletyrlysvalleulysglnvalhispro354045aspthrglyileserserlysalametserilemetasnserpheval505560asnaspilephegluargilealaalaglualaserargleualahis65707580tyrasnlysargserthrilethrserarggluileglnthralaval859095argleuleuleuproglygluleualalyshisalavalserglugly100105110thrlysalavalthrlystyrthrserserlys115120<210>41<211>495<212>dna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>41ggggtacatcttaatttggattggtcgtttttcgatttggaggtgtgtcaataattttaa60agtacggatatttaaaggtcgaaagacgaatgcaattcagtaattccaggacaactgaac120tgattgtatcatgactggacgtggaaagggtggtaaaggtttgggaaaaggtggcgctaa180acgtcaccgtaaagtgttacgtgacaacatccaaggtattaccaagcctgctataagaag240attagctcgtcgcggaggtgtaaaacgtatctctggtttaatctatgaggaaacgcgagg300tgtattgaaagtatttttggaaaacgttattagagatgccgttacctatactgagcacgc360caaaaggaaaacagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacgacaaggtcgtac420tttgtacggttttggaggttaattgctattaatttccatccttaaaaaaacggttctttt480cagaaccacaaaaaa495<210>42<211>309<212>dna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>42atgactggacgtggaaagggtggtaaaggtttgggaaaaggtggcgctaaacgtcaccgt60aaagtgttacgtgacaacatccaaggtattaccaagcctgctataagaagattagctcgt120cgcggaggtgtaaaacgtatctctggtttaatctatgaggaaacgcgaggtgtattgaaa180gtatttttggaaaacgttattagagatgccgttacctatactgagcacgccaaaaggaaa240acagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacgacaaggtcgtactttgtacggt300tttggaggt309<210>43<211>309<212>rna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>43augacuggacguggaaagggugguaaagguuugggaaaagguggcgcuaaacgucaccgu60aaaguguuacgugacaacauccaagguauuaccaagccugcuauaagaagauuagcucgu120cgcggagguguaaaacguaucucugguuuaaucuaugaggaaacgcgagguguauugaaa180guauuuuuggaaaacguuauuagagaugccguuaccuauacugagcacgccaaaaggaaa240acaguaacugcuauggauguuguauaugcacuuaaacgacaaggucguacuuuguacggu300uuuggaggu309<210>44<211>309<212>rna<213>人工序列<220><223>dbh4mrna的反義鏈<400>44uacugaccugcaccuuucccaccauuuccaaacccuuuuccaccgcgauuugcaguggca60uuucacaaugcacuguuguagguuccauaaugguucggacgauauucuucuaaucgagca120gcgccuccacauuuugcauagagaccaaauuagauacuccuuugcgcuccacauaacuuu180cauaaaaaccuuuugcaauaaucucuacggcaauggauaugacucgugcgguuuuccuuu240ugucauugacgauaccuacaacauauacgugaauuugcuguuccagcaugaaacaugcca300aaaccucca309<210>45<211>103<212>prt<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>45metthrglyargglylysglyglylysglyleuglylysglyglyala151015lysarghisarglysvalleuargaspasnileglnglyilethrlys202530proalaileargargleualaargargglyglyvallysargileser354045glyleuiletyrglugluthrargglyvalleulysvalpheleuglu505560asnvalileargaspalavalthrtyrthrgluhisalalysarglys65707580thrvalthralametaspvalvaltyralaleulysargglnglyarg859095thrleutyrglypheglygly100<210>46<211>448<212>dna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>46cgtcagtttgtttttgcgatgcctcctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaggcagga60aaagcccagaagaacatttcaaaaaccgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagc120tatgctatttacatttataaagtactcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagt180aaggctatgagtatcatgaacagttttgtaaatgatatttttgaaagaatcgctgccgaa240gcttcccgtttagctcattataataaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaacg300gccgtacgtttattacttcctggagaattagctaaacacgctgtcagtgaaggcaccaaa360gctgttactaaatacacaagttctaagtaatcagaacgcttcatctattaattataacaa420acggttcttttcagaaccacaaaaaaaa448<210>47<211>369<212>dna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>47atgcctcctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaggcaggaaaagcccagaagaacatt60tcaaaaaccgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagctatgctatttacatttat120aaagtactcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagtaaggctatgagtatcatg180aacagttttgtaaatgatatttttgaaagaatcgctgccgaagcttcccgtttagctcat240tataataaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaacggccgtacgtttattactt300cctggagaattagctaaacacgctgtcagtgaaggcaccaaagctgttactaaatacaca360agttctaag369<210>48<211>369<212>rna<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>48augccuccuaagacgagugguaaagcugcuaaaaaggcaggaaaagcccagaagaacauu60ucaaaaaccgauaagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagcuaugcuauuuacauuuau120aaaguacucaaacaagugcauccugauaccgguauuuccaguaaggcuaugaguaucaug180aacaguuuuguaaaugauauuuuugaaagaaucgcugccgaagcuucccguuuagcucau240uauaauaaacguucuacaauuacaagcagagaaauucaaacggccguacguuuauuacuu300ccuggagaauuagcuaaacacgcugucagugaaggcaccaaagcuguuacuaaauacaca360aguucuaag369<210>49<211>369<212>rna<213>人工序列<220><223>dbh2bmrna的反義鏈<400>49uacggaggauucugcucaccauuucgacgauuuuuccguccuuuucgggucuucuuguaa60aguuuuuggcuauucuuuuucuucgcuuucuccuuccuuucgauacgauaaauguaaaua120uuucaugaguuuguucacguaggacuauggccauaaaggucauuccgauacucauaguac180uugucaaaacauuuacuauaaaaacuuucuuagcgacggcuucgaagggcaaaucgagua240auauuauuugcaagauguuaauguucgucucuuuaaguuugccggcaugcaaauaaugaa300ggaccucuuaaucgauuugugcgacagucacuuccgugguuucgacaaugauuuaugugu360ucaagauuc369<210>50<211>123<212>prt<213>巴氏根螢葉甲（diabroticabarberi）<400>50metproprolysthrserglylysalaalalyslysalaglylysala151015glnlysasnileserlysthrasplyslyslyslysarglysarglys202530glusertyralailetyriletyrlysvalleulysglnvalhispro354045aspthrglyileserserlysalametserilemetasnserpheval505560asnaspilephegluargilealaalaglualaserargleualahis65707580tyrasnlysargserthrilethrserarggluileglnthralaval859095argleuleuleuproglygluleualalyshisalavalserglugly100105110thrlysalavalthrlystyrthrserserlys115120<210>51<211>20<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>51atgcctcctaagacgagtgg20<210>52<211>20<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>52cttagaacttgtgtatttag20<210>53<211>20<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>53atgactggacgtggaaaggg20<210>54<211>20<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>54accaccaaaaccgtacaaag20<210>55<211>40<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>55taatacgactcactatagggatgcctcctaagacgagtgg40<210>56<211>40<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>56taatacgactcactatagggcttagaacttgtgtatttag40<210>57<211>40<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>57taatacgactcactatagggatgactggacgtggaaaggg40<210>58<211>40<212>dna<213>玉米根螢葉甲（diabroticavirgifera）<400>58taatacgactcactatagggaccaccaaaaccgtacaaag40<210>59<211>4163<212>dna<213>人工序列<220><223>西方玉米根螢葉甲，玉蜀黍，擬南芥（diabroticavirgiferavirgifera,zeamays,arabidopsisthaliana）<400>59ctgcagtgcagcgtgacccggtcgtgcccctctctagagataatgagcattgcatgtcta60agttataaaaaattaccacatattttttttgtcacacttgtttgaagtgcagtttatcta120tctttatacatatatttaaactttactctacgaataatataatctatagtactacaataa180tatcagtgttttagagaatcatataaatgaacagttagacatggtctaaaggacaattga240gtattttgacaacaggactctacagttttatctttttagtgtgcatgtgttctccttttt300ttttgcaaatagcttcacctatataatacttcatccattttattagtacatccatttagg360gtttagggttaatggtttttatagactaatttttttagtacatctattttattctatttt420agcctctaaattaagaaaactaaaactctattttagtttttttatttaataatttagata480taaaatagaataaaataaagtgactaaaaattaaacaaataccctttaagaaattaaaaa540aactaaggaaacatttttcttgtttcgagtagataatgccagcctgttaaacgccgccga600cgagtctaacggacaccaaccagcgaaccagcagcgtcgcgtcgggccaagcgaagcaga660cggcacggcatctctgtcgctgcctctggacccctctcgagagttccgctccaccgttgg720acttgctccgctgtcggcatccagaaattgcgtggcggagcggcagacgtgagccggcac780ggcaggcggcctcctcctcctctcacggcaccggcagctacgggggattcctttcccacc840gctccttcgctttcccttcctcgcccgccgtaataaatagacaccccctccacaccctct900ttccccaacctcgtgttgttcggagcgcacacacacacaaccagatctcccccaaatcca960cccgtcggcacctccgcttcaaggtacgccgctcgtcctccccccccccccctctctacc1020ttctctagatcggcgttccggtccatagttagggcccggtagttctacttctgttcatgt1080ttgtgttagatccgtgtttgtgttagatccgtgctgttagcgttcgtacacggatgcgac1140ctgtacgtcagacacgttctgattgctaacttgccagtgtttctctttggggaatcctgg1200gatggctctagccgttccgcagacgggatcgatttcatgattttttttgtttcgttgcat1260agggtttggtttgcccttttcctttatttcaatatatgccgtgcacttgtttgtcgggtc1320atcttttcatgcttttttttgtcttggttgtgatgatgtggtctggttgggcggtcgttc1380tagatcggagtagaattctgtttcaaactacctggtggatttattaattttggatctgta1440tgtgtgtgccatacatattcatagttacgaattgaagatgatggatggaaatatcgatct1500aggataggtatacatgttgatgcgggttttactgatgcatatacagagatgctttttgtt1560cgcttggttgtgatgatgtggtgtggttgggcggtcgttcattcgttctagatcggagta1620gaatactgtttcaaactacctggtgtatttattaattttggaactgtatgtgtgtgtcat1680acatcttcatagttacgagtttaagatggatggaaatatcgatctaggataggtatacat1740gttgatgtgggttttactgatgcatatacatgatggcatatgcagcatctattcatatgc1800tctaaccttgagtacctatctattataataaacaagtatgttttataattattttgatct1860tgatatacttggatgatggcatatgcagcagctatatgtggatttttttagccctgcctt1920catacgctatttatttgcttggtactgtttcttttgtcgatgctcaccctgttgtttggt1980gttacttctgcagggatcctgcctcctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaagcaggg2040aaagcccagaagaacatttcaaaaaccgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagc2100tatgctatttacatttataaagtactcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagt2160aaggctatgagtatcatgaacagttttgtaaatgatatttttgaaagaatcgcagctgaa2220gcttctcgtttagctcattataataaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaacc2280gcagtacgtttattacttcctggagaattagctaaacacgctgtcagtgaagctaccaaa2340gctgttactaaatacacaagttctaagggtaccaagctgcgaatcttcgtttttttaagg2400aattctcgatctttatggtgtataggctctgggttttctgttttttgtatctcttaggat2460tttgtaaattccagatctttctatggccacttagtagtatatttcaaaaattctccaatc2520gagttcttcattcgcattttcagtcattttctcttcgacgttgtttttaagcctgggtat2580tactcctatttagttgaactctgcagcaatcttagaaaattagggttttgaggtttcgat2640ttctctaggtaaccgatctattgcattcatctgaatttctgcatatatgtcttagatttc2700tgataagcttacgatacgttaggtgtaattgaagtttatttttcaagagtgttatttttt2760gtttctgaatttttcagtcactccatggcttagaacttgtgtatttagtaacagctttgg2820tagcttcactgacagcgtgtttagctaattctccaggaagtaataaacgtactgcggttt2880gaatttctctgcttgtaattgtagaacgtttattataatgagctaaacgagaagcttcag2940ctgcgattctttcaaaaatatcatttacaaaactgttcatgatactcatagccttactgg3000aaataccggtatcaggatgcacttgtttgagtactttataaatgtaaatagcatagcttt3060ccttcctctttcgcttctttttcttatcggtttttgaaatgttcttctgggctttccctg3120cttttttagcagctttaccactcgtcttaggaggcagagctcgccatcagtcgttgaagc3180tgctgctgtatctgggttatctagtgtctctgccattgcccaaggatggtgctgtctttc3240aaagtatttgtatggtttgtgtcgtgagtcgtgactgagctggtttcatggaccagttgt3300gttctcgttacccaaaactatcgtgcgaccgcatatggcttaatcatgaataaatgttgt3360ttgaatttaaactattcgctgaatattgttgttttttgtcatgtcagttaatgttactaa3420attggttgccttctaatttttgtttactggtgtttgtcgcaccttatctttttactgtat3480gtttacttcaggttctggcagtctcattttttgtgactagttaaaacttacagctaaaaa3540aatgcagtttttcattttcatttgaagtttgattagagctattgatacccggaccatcag3600gttaggttagttgtgcatagaatcataaatattaatcatgttttctatgaattaagtcaa3660acttgaaagtctggctgaatatagtttctatgaatcatattgatatacatgtttgattat3720ttgttttgctattagctatttactttggtgaatctatataggcttatgcagaaccttttt3780ttttgttctatatatccatatcctagtactcagtagctctatgttttctggagactagtg3840gcttgctttttcgtatgtctaattttttgcttgaccattgcaaaacaaaaattacctagt3900gtaatctctttttataataatcttgtaatgcgtctacctataggtcaaagtaggttttgt3960ttggaacccttagagctaactgttagctagttgataaattattagctgagttaagctagc4020taatgaactagttttgatattagctgaggatgtttgaaacctaataattattttttatta4080gctaactatactaaattttagtagagagattccaaacaggagttaacatgggatcagatt4140ggctatgcgtttgcaatcccata4163<210>60<211>4043<212>dna<213>人工序列<220><223>西方玉米根螢葉甲，玉蜀黍，擬南芥（diabroticavirgiferavirgifera,zeamays,arabidopsisthaliana）<400>60ctgcagtgcagcgtgacccggtcgtgcccctctctagagataatgagcattgcatgtcta60agttataaaaaattaccacatattttttttgtcacacttgtttgaagtgcagtttatcta120tctttatacatatatttaaactttactctacgaataatataatctatagtactacaataa180tatcagtgttttagagaatcatataaatgaacagttagacatggtctaaaggacaattga240gtattttgacaacaggactctacagttttatctttttagtgtgcatgtgttctccttttt300ttttgcaaatagcttcacctatataatacttcatccattttattagtacatccatttagg360gtttagggttaatggtttttatagactaatttttttagtacatctattttattctatttt420agcctctaaattaagaaaactaaaactctattttagtttttttatttaataatttagata480taaaatagaataaaataaagtgactaaaaattaaacaaataccctttaagaaattaaaaa540aactaaggaaacatttttcttgtttcgagtagataatgccagcctgttaaacgccgccga600cgagtctaacggacaccaaccagcgaaccagcagcgtcgcgtcgggccaagcgaagcaga660cggcacggcatctctgtcgctgcctctggacccctctcgagagttccgctccaccgttgg720acttgctccgctgtcggcatccagaaattgcgtggcggagcggcagacgtgagccggcac780ggcaggcggcctcctcctcctctcacggcaccggcagctacgggggattcctttcccacc840gctccttcgctttcccttcctcgcccgccgtaataaatagacaccccctccacaccctct900ttccccaacctcgtgttgttcggagcgcacacacacacaaccagatctcccccaaatcca960cccgtcggcacctccgcttcaaggtacgccgctcgtcctccccccccccccctctctacc1020ttctctagatcggcgttccggtccatagttagggcccggtagttctacttctgttcatgt1080ttgtgttagatccgtgtttgtgttagatccgtgctgttagcgttcgtacacggatgcgac1140ctgtacgtcagacacgttctgattgctaacttgccagtgtttctctttggggaatcctgg1200gatggctctagccgttccgcagacgggatcgatttcatgattttttttgtttcgttgcat1260agggtttggtttgcccttttcctttatttcaatatatgccgtgcacttgtttgtcgggtc1320atcttttcatgcttttttttgtcttggttgtgatgatgtggtctggttgggcggtcgttc1380tagatcggagtagaattctgtttcaaactacctggtggatttattaattttggatctgta1440tgtgtgtgccatacatattcatagttacgaattgaagatgatggatggaaatatcgatct1500aggataggtatacatgttgatgcgggttttactgatgcatatacagagatgctttttgtt1560cgcttggttgtgatgatgtggtgtggttgggcggtcgttcattcgttctagatcggagta1620gaatactgtttcaaactacctggtgtatttattaattttggaactgtatgtgtgtgtcat1680acatcttcatagttacgagtttaagatggatggaaatatcgatctaggataggtatacat1740gttgatgtgggttttactgatgcatatacatgatggcatatgcagcatctattcatatgc1800tctaaccttgagtacctatctattataataaacaagtatgttttataattattttgatct1860tgatatacttggatgatggcatatgcagcagctatatgtggatttttttagccctgcctt1920catacgctatttatttgcttggtactgtttcttttgtcgatgctcaccctgttgtttggt1980gttacttctgcagggatcctgactggacgtggaaagggtggtaaaggtttgggcaaaggt2040ggcgctaaacgtcaccgtaaagtattacgtgacaacatccaaggtattaccaagcctgct2100ataagaagattagctcgtcgcggaggtgtaaaacgtatctctggtttaatctatgaggaa2160acgcgaggtgtattgaaagtatttttggaaaacgttattagagatgccgttacctatact2220gagcacgccaaaaggaaaacagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacgacaa2280ggtcgtactttgtacggttttggtggtggtaccaagctgcgaatcttcgtttttttaagg2340aattctcgatctttatggtgtataggctctgggttttctgttttttgtatctcttaggat2400tttgtaaattccagatctttctatggccacttagtagtatatttcaaaaattctccaatc2460gagttcttcattcgcattttcagtcattttctcttcgacgttgtttttaagcctgggtat2520tactcctatttagttgaactctgcagcaatcttagaaaattagggttttgaggtttcgat2580ttctctaggtaaccgatctattgcattcatctgaatttctgcatatatgtcttagatttc2640tgataagcttacgatacgttaggtgtaattgaagtttatttttcaagagtgttatttttt2700gtttctgaatttttcagtcactccatggaccaccaaaaccgtacaaagtacgaccttgtc2760gtttaagtgcatatacaacatccatagcagttactgttttccttttggcgtgctcagtat2820aggtaacggcatctctaataacgttttccaaaaatactttcaatacacctcgcgtttcct2880catagattaaaccagagatacgttttacacctccgcgacgagctaatcttcttatagcag2940gcttggtaataccttggatgttgtcacgtaatactttacggtgacgtttagcgccacctt3000tgcccaaacctttaccaccctttccacgtccagtcagagctcgccatcagtcgttgaagc3060tgctgctgtatctgggttatctagtgtctctgccattgcccaaggatggtgctgtctttc3120aaagtatttgtatggtttgtgtcgtgagtcgtgactgagctggtttcatggaccagttgt3180gttctcgttacccaaaactatcgtgcgaccgcatatggcttaatcatgaataaatgttgt3240ttgaatttaaactattcgctgaatattgttgttttttgtcatgtcagttaatgttactaa3300attggttgccttctaatttttgtttactggtgtttgtcgcaccttatctttttactgtat3360gtttacttcaggttctggcagtctcattttttgtgactagttaaaacttacagctaaaaa3420aatgcagtttttcattttcatttgaagtttgattagagctattgatacccggaccatcag3480gttaggttagttgtgcatagaatcataaatattaatcatgttttctatgaattaagtcaa3540acttgaaagtctggctgaatatagtttctatgaatcatattgatatacatgtttgattat3600ttgttttgctattagctatttactttggtgaatctatataggcttatgcagaaccttttt3660ttttgttctatatatccatatcctagtactcagtagctctatgttttctggagactagtg3720gcttgctttttcgtatgtctaattttttgcttgaccattgcaaaacaaaaattacctagt3780gtaatctctttttataataatcttgtaatgcgtctacctataggtcaaagtaggttttgt3840ttggaacccttagagctaactgttagctagttgataaattattagctgagttaagctagc3900taatgaactagttttgatattagctgaggatgtttgaaacctaataattattttttatta3960gctaactatactaaattttagtagagagattccaaacaggagttaacatgggatcagatt4020ggctatgcgtttgcaatcccata4043當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12