本發(fā)明涉及微生物采油技術領域，特別涉及一種用于乳化原油的熱堆肥芽孢桿菌菌株、培養(yǎng)方法及應用。

背景技術：

微生物提高石油采收率技術(Microbial Enhanced Oil Recovery，MEOR)是利用微生物在油藏中的生命活動及其代謝產物來提高原油產量和采收率的一種生物技術，由于其具有應用范圍廣、實施成本低、經濟效益顯著等特點，因此受到廣泛關注。不同的微生物菌種其代謝特性不同，產生的代謝產物不同，其驅油機理也不同，由此也形成了不同的微生物采油工藝。微生物驅油的機理主要包括：微生物生長和代謝過程中產生氣體增加地層壓力、降低原油粘度；產生有機酸改善油藏巖石的滲透率；產生生物表面活性劑和有機溶劑降低油水界面張力、提高洗油效率；產生生物聚合物控制流動度選擇性封堵；降解原油重質組分從而降低原油粘度、提高原油流動性等。其中，利用微生物乳化原油從而降低原油粘度的微生物采油技術能夠較為顯著的提高原油采收率。

利用微生物乳化原油從而降低原油粘度的微生物采油技術的關鍵在于菌株的選用。申請公布號CN 104371940 A和CN 102757994 A的專利申請分別公開了能夠代謝產生生物表面活性劑的假單胞菌和芽孢桿菌，但是這兩種菌株的生長溫度為37℃，適用溫度范圍窄。地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)是一種嗜熱芽孢桿菌，其培養(yǎng)溫度為25℃～40℃(參見生態(tài)學雜志2013，32(3):779-786；國外油田工程第25卷第7期16～18以及申請?zhí)枮?01380012425的中國專利申請)，適用溫度范圍仍然較窄。公布號CN 102399847 A的專利申請公開了一種高溫芽孢桿菌LEY11，其發(fā)酵溫度雖然達到了45℃～70℃，但是需要在地面發(fā)酵，操作較為復雜，不能滿足現(xiàn)場需要。

綜上，在實現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術至少存在以下問題:現(xiàn)有的能夠乳化原油的菌株不能同時滿足適用溫度范圍廣并且不需要現(xiàn)場發(fā)酵的 要求。

技術實現(xiàn)要素：

為了解決上述的技術問題，本發(fā)明提供一種適用溫度范圍廣并且不需要現(xiàn)場發(fā)酵的用于乳化原油的熱堆肥芽孢桿菌菌株、培養(yǎng)方法及應用。

具體而言，包括以下的技術方案：

一種用于乳化原油的熱堆肥芽孢桿菌(Bacillus thermocopriae)BLG69菌株，該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株已于2015年9月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，其分類命名為：熱堆肥芽孢桿菌(Bacillus thermocopriae)，保藏編號為CGMCC No.11441，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的16S rRNA基因序列如序列表中的SEQ ID No.1所示，其16S rRNA在GenBank的登錄號為KT807465。

該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的菌落形態(tài)學特征為:固體發(fā)酵培養(yǎng)基上培養(yǎng)2天的菌落直徑大小為2～4mm，菌落呈圓形，表面平滑，邊緣整齊，乳黃色；細胞形態(tài)學特征為：細胞形狀為桿狀，長為2～5um，寬為0.5～0.6um，屬革蘭氏陽性菌，可形成端生芽孢；兼性厭氧生長，過氧化氫酶和氧化酶陽性、不能利用葡萄糖。該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的生長環(huán)境為：溫度37℃～60℃，pH值6～9，氯化鈉濃度0～3％(w/v，質量體積濃度)；最適生長環(huán)境為：溫度45℃～50℃，pH值7.5，氯化鈉濃度1～2％(w/v，質量體積濃度)。

上述熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株采用以下培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到，所述培養(yǎng)方法包括以下步驟：

步驟a，將采集自華北油田45℃～60℃油藏的油水樣品置于經過滅菌的富集培養(yǎng)基中，在45℃～60℃、轉速120～200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)，經過分離純化得到以原油為唯一碳源的菌株；

步驟b，將步驟a所得以原油為唯一碳源的菌株接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度45℃～60℃、轉速120～200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)72小時，得到發(fā)酵液；檢測所述發(fā)酵液的表面張力，所述表面張力達到40mN/m以下的發(fā)酵液對應的菌株即為所述熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株；

其中，

步驟a中，所述富集培養(yǎng)基包括以下質量份數(shù)的組分：

清水，100份；原油，8～10份；氯化銨(NH₄Cl)，0.09～0.12份；硝酸鈉(NaNO₃)，0.18～0.21份；磷酸氫二鉀(K₂HPO₄)，0.04～0.06份；硫酸鈉(Na₂SO₄)，0.18～0.21份；硫酸鎂(MgSO₄)，0.02～0.03份；碳酸鈉(Na₂CO₃)，0.04～0.06份；醋酸鈉(NaAc)，0.02～0.03份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.09～0.10份；所述富集培養(yǎng)基的pH值為7.5～8.0；

步驟b中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下質量份數(shù)的組分：

油藏產出水，100份；氯化銨，0.08～0.11份；硝酸鈉，0.14～0.18份；磷酸氫二鉀，0.04～0.06份；硫酸鎂，0.01～0.02份；氯化鈉，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.1～0.12份；原油,5～8份；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為7.5～8.0。

優(yōu)選地，步驟a中，將采集自華北油田55℃油藏的油水樣品置于經過滅菌的富集培養(yǎng)基中。

優(yōu)選地，步驟b中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的裝液量為250ml三角瓶裝液量100ml或者50ml試管裝液量10ml。

利用上述的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株提高原油采收率中的方法為，向含有所述熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的油藏中注入激活劑，關井預設時間后進行原油開采；其中，所述激活劑包括以下質量份數(shù)的組分：油藏產出水，100份；氯化銨，0.08～0.11份；硝酸鈉，0.14～0.18份；磷酸氫二鉀，0.04～0.06份；硫酸鎂，0.01～0.02份；氯化鈉，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.1～0.12份；原油，5～8份。

優(yōu)選地，所述油藏的溫度為37℃～60℃。

本發(fā)明實施例提供的技術方案的有益效果是：

本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株能夠以原油作為唯一碳源，在37℃～60℃的溫度下代謝產生乳化劑，從而實現(xiàn)對原油進行乳化降低原油粘度，提高原油采收率。該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株在45℃下培養(yǎng)72小時后的發(fā)酵液的表面張力為29～32mN/m，乳化力90％以上，具有較強的乳化原油的能力。同時，該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株對油藏環(huán)境具有良好的適應能力，因此利用其進行驅油時，不需要在地面發(fā)酵，可以通過向油藏內注入能夠促進其生長代謝的激活劑來達到提高原油采收率的效果。綜上，本發(fā)明實施例提供 的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株適用溫度范圍廣并且不需要現(xiàn)場發(fā)酵，在中高溫油藏微生物采油技術領域具有良好的應用前景。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1為基于16S rRNA基因序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹；

圖2為實施例4中熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)后原油乳化情況圖；

圖3為實施例4中未接種菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基。

生物保藏信息：本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株已于2015年9月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，其分類命名為：熱堆肥芽孢桿菌(Bacillus thermocopriae)，保藏編號為CGMCC No.11441；保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

具體實施方式

為使本發(fā)明的技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面對本發(fā)明實施方式作進一步地詳細描述。

本發(fā)明實施例提供一種用于乳化原油的熱堆肥芽孢桿菌(Bacillus thermocopriae)BLG69菌株，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No.11441。

該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的16S rRNA基因序列如序列表中的SEQ ID No.1所示，含有1402bp，GenBank登錄號為KT807465，具體如下：

GCAGTCGAGCGGACCAATAGAAGCTTGCTTCTGTTGGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATTCATCCCCTCGCATGAGGGGGTGCTGAAAGTCGGTTCACGCTGACACTTACAGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGA GAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGCGATGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGGAGTAACTGCCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTCCTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTACGACCTCCCTAGAGATAGGGATTTCCCCTTCGGGGGACGGAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTCGAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACC。

熱堆肥芽孢桿菌(Bacillus thermocopriae)是Han等于2013年基于16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析和其它特性建立的一個嗜熱芽孢桿菌新種(參見International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology.(2013),63,3024–3029)。目前報道了一個SgZ-7(JX113681)菌株，該SgZ-7菌株是從我國東莞堆肥樣品中分離獲得。該SgZ-7菌株可以發(fā)酵葡萄糖產酸，但是不能產生生物表面活性劑來乳化原油。

將本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的16S rRNA基因序列與GenBank中的序列進行比對，發(fā)現(xiàn)其與芽孢桿菌屬成員具有較高的序列相似性。用Neighbor2Joining方法構建的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖1)表明為芽孢桿菌屬的新成員，與上述熱堆肥芽孢桿菌Bacillus thermocopriae SgZ-7菌株具有99.86％同源性，為不同于熱堆肥芽孢桿菌模式菌SgZ-7的新菌株。

本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株在不含原油的TSA(大豆酪蛋白)固體發(fā)酵培養(yǎng)基上生長良好，菌落呈乳黃色圓形，大小不一，直徑2～4mm，表面光滑濕潤，邊緣平整有透明圈。其細胞為桿狀，長為2～5um，寬為0.5～0.6um，產芽孢，具有運動性，革蘭氏染色為陽性，兼性厭氧生長，過氧化氫酶和氧化酶陽性、不能利用葡萄糖。其生長環(huán)境為：溫度37℃～60℃，pH值6～9，氯化鈉濃度0～3％(w/v，質量體積濃度)；最適生長環(huán)境為：溫度45℃～50℃，pH值7.5，氯化鈉濃度1～2％(w/v，質量體積濃度)。

該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株能夠以原油作為唯一碳源，在37℃～60℃的溫度下代謝產生生物乳化劑乳化原油，降低原油粘度，并且對油藏環(huán)境具有良好的適應能力，在利用其進行驅油時，不要在地面發(fā)酵，可以通過向油藏內注入能夠促進其生長代謝的激活劑來達到提高原油采收率的效果。因此，該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株在中高溫油藏微生物采油技術領域具有良好的應用前景。

本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株是從華北油田45℃～60℃油藏的油水樣品中分離得到，具體培養(yǎng)篩選方法如下：

步驟1，將采集自華北油田45℃～60℃油藏的油水樣品置于經過滅菌的富集培養(yǎng)基中，在溫度45℃～60℃、轉速120～200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)，經過分離純化得到以原油為唯一碳源的菌株；由于在油水樣品中存在多種能夠以原油作為唯一碳源的菌株，因此需要對得到的能夠以原油為唯一碳源的菌株進行進一步篩選，得到乳化原油能力強的菌株。

步驟2，將步驟1所得以原油為唯一碳源的菌株分別接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度45℃～60℃、轉速120～200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)72小時，得到發(fā)酵液；檢測所得發(fā)酵液的表面張力，能夠使發(fā)酵液的表面張力達到40mN/m以下的菌株即為本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株；

其中，

步驟1中所用的富集培養(yǎng)基包括以下質量份數(shù)的組分：清水，100份；原油，8～10份；氯化銨，0.09～0.12份；硝酸鈉，0.18～0.21份；磷酸氫二鉀，0.04～0.06份；硫酸鈉，0.18～0.21份；硫酸鎂，0.02～0.03份；碳酸鈉，0.04～0.06份；醋酸鈉，0.02～0.03份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.09～0.10份；所述富集培養(yǎng)基的pH值為7.5～8.0；

步驟2中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下質量份數(shù)的組分：油藏產出水，100份；氯化銨，0.08～0.11份；硝酸鈉，0.14～0.18份；磷酸氫二鉀，0.04～0.06份；硫酸鎂，0.01～0.02份；氯化鈉，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.1～0.12份；原油,5～8份；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為7.5～8.0。

在上述的培養(yǎng)方法中，步驟1中，優(yōu)選對采集自華北油田55℃油藏的油水樣品進行分離純化來得到本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株。

在上述的培養(yǎng)方法中，步驟2中，發(fā)酵培養(yǎng)基的裝液量優(yōu)選為250ml三角瓶裝液量100ml或者50ml試管裝液量10ml。

在上述的培養(yǎng)方法中，步驟1中，在富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)的溫度可以為45℃、50℃、55℃、60℃等。

在上述的培養(yǎng)方法中，步驟2中，在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)的溫度可以為45℃、50℃、55℃、60℃等。

由于本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株本身就存在于油藏中，因此可以通過向油藏當中注入能夠促進其生長代謝的激活劑來加快其生長代謝的速度，促進其代謝產生生物乳化劑從而乳化原油、降低原油粘度，提高原油采收率?？梢栽谙蛴筒刂凶⑷爰せ顒┖箨P井一段時間，例如關井3天以上，再進行原油開采，使熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株能夠充分的生長代謝。所用激活劑可以采用以下的配方(質量份數(shù))：油藏產出水，100份；氯化銨，0.08～0.11份；硝酸鈉，0.14～0.18份；磷酸氫二鉀，0.04～0.06份；硫酸鎂，0.01～0.02份；氯化鈉，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米漿，0.1～0.12份；原油，5～8份。

本發(fā)明實施例提供的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株特別適用于溫度為37℃～60℃的油藏。

下面通過具體實驗數(shù)據(jù)對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的培養(yǎng)篩選方法及其乳化原油性能進行進一步詳細說明。

以下實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為本領域常規(guī)方法；以下實施例中所用的實驗材料，如無特殊說明，均為常規(guī)生化試劑。

以下實施例中所用原油均為來自華北油田55℃油藏的原油，所用油藏產出水均為來自華北油田55℃油藏的油藏產出水。

以下實施例中進行表面張力測定所用的儀器為：JYW-200型表界面張力儀，購自河北省承德市鼎盛試驗機公司。

實施例1

本實施例提供一種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的分離篩選方法，包括以下步驟：

步驟1，將富集培養(yǎng)基在121℃下高壓蒸汽滅菌30min，然后將采集自華北油田55℃油藏的油水樣品置于經過滅菌的富集培養(yǎng)基中，在溫度60℃、轉速200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)，富集以原油為唯一碳源的菌株。之后在不含原油的固體培養(yǎng)基上進行平板劃線分離純化，獲得純的以原油為唯一碳源的菌株；所用富集培養(yǎng)基的配方為：

清水，1000ml(即1000g)；氯化銨，1g；硝酸鈉，2g；磷酸氫二鉀，0.5g；硫酸鈉，2g；硫酸鎂，0.2g；碳酸鈉，0.5g；醋酸鈉，0.2g；酵母粉，0.5g；玉米漿，1g；原油，100g；該富集培養(yǎng)基的pH值為7.5。

步驟2，將步驟1所得以原油為唯一碳源的菌株分別接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的裝液量為250ml三角瓶裝液量100ml；在溫度45℃、轉速200rpm的搖床中振蕩培養(yǎng)72小時，得到發(fā)酵液；檢測所得發(fā)酵液的表面張力，其中，表面張力為32mN/m的發(fā)酵液對應的菌株即為熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株；所用發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：

油藏產出水，1000ml(即1000g)；氯化銨，1g；硝酸鈉，1.5g；磷酸氫二鉀，0.5g；硫酸鎂，0.1g；氯化鈉，10g；酵母粉，0.5g；玉米漿，1g；原油，50g；該發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為7.5。

實施例2

本實施例提供一種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的分離篩選方法，該方法與實施例1提供的方法的區(qū)別在于：

步驟2中培養(yǎng)基的裝液量為50ml試管裝液量10ml。

實施例3

本實施例提供一種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的分離篩選方法，該方法與實施例1提供的方法的區(qū)別在于：

步驟2中，將步驟1得到的以原油為唯一碳源的菌株接種到含有原油的TSA培養(yǎng)基中。含有原油的TSA培養(yǎng)基的配方如下：

氯化鈉，5g；大豆蛋白胨，5g；酪蛋白胨，10g；油藏產出水1000ml；原油，50g；該TSA培養(yǎng)基的pH為7.5。

實施例4

本實施例對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株乳化原油的性能進行測試，具體步驟如下：

將熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株接種母液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1％，培養(yǎng)基的裝液量為50ml試管裝液量10ml；在60℃、200rpm條件下的搖床中振蕩培養(yǎng)3天；所用發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：

油藏產出水，1000ml；氯化銨，1g；硝酸鈉，1.5g；磷酸氫二鉀，0.5g；硫酸鎂，0.1g；氯化鈉，10g；酵母粉，0.5g；玉米漿，1g；原油，50g；pH為7.5。

將未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的空白發(fā)酵培養(yǎng)基也在60℃、200rpm條件下的搖床中放置3天作為對比。

如圖2和圖3所示，接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中原油明顯被乳化，粘度降低，流動性得到改善，而未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中的原油未見乳化。

實施例5

本實施例對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株乳化原油的性能進行測試，本實施例與實施例4的區(qū)別在于：培養(yǎng)溫度為55℃。

與實施例4結果相似，接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中原油明顯被乳化，粘度降低，流動性得到改善，而未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中的原油未見乳化。

實施例6

本實施例對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株乳化原油的性能進行測試，本實施例與實施例4的區(qū)別在于：培養(yǎng)溫度為50℃。

與實施例4結果相似，接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中原油明顯被乳化，粘度降低，流動性得到改善，而未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中的原油未見乳化。

實施例7

本實施例對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株乳化原油的性能進行測試，本實施例與實施例4的區(qū)別在于：培養(yǎng)溫度為45℃。

與實施例4結果相似，接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中原油明顯被乳化，粘度降低，流動性得到改善，而未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基中的原油未見乳化。

實施例8

本實施例對熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株乳化原油的性能進行測試，本實施例與實施例4的區(qū)別在于：所有培養(yǎng)基為含有原油的TSA培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為45℃，培養(yǎng)時間為2天。其中，含有原油的TSA培養(yǎng)基的配方為：

氯化鈉，5g；大豆蛋白胨，5g；酪蛋白胨，15g；油藏產出水，1000ml；原油，50g；pH為7.5。

與實施例4結果相似，接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的培養(yǎng)基中原油明顯被乳化，粘度降低，流動性得到改善，而未接種熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株的培養(yǎng)基中的原油未見乳化。

上述實施例4～8中的培養(yǎng)液表面張力為29mN/m～32mN/m。

從上述實施例4～8可以看出，熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株能夠以原油作為碳源進行生長代謝，在代謝過程中產生生物乳化劑，對原油進行乳化，降低原油粘度，從而有利于原油的開采，提高原油采收率。

實施例9

本實施例對實施例4～8所得培養(yǎng)液的乳化能力進行測定，具體步驟如下：

在25℃下，分別將實施例4～8中的培養(yǎng)液與液體石蠟混合加入到10ml離心管中，其中培養(yǎng)液用量為4ml，液體石蠟用量為1ml，劇烈振蕩1min后靜置24小時，觀察乳化層的分層情況。結果表明，乳化層略有分層，乳化力在90％以上。

綜上，本發(fā)明實施例提供了一種在37℃～60℃條件下能夠以原油作為碳源代謝產生生物乳化劑乳化原油從而提高原油采收率的熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株。該熱堆肥芽孢桿菌BLG69菌株適用溫度范圍廣，培養(yǎng)方法簡單，生長速度快，并且利用其進行驅油時不需要在地面發(fā)酵，在中高溫油藏微生物采油技術領域具有良好的應用前景。

以上所述僅是為了便于本領域的技術人員理解本發(fā)明的技術方案，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。