本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及到苯并異硒唑酮喹啉衍生物，及其在治療、改善和/或預(yù)防抗阿爾茨海默癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)又稱(chēng)原發(fā)性老年癡呆癥(senile dementia)，是一種以記憶力減退、認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球約有超過(guò)3000萬(wàn)AD患者，每年有460萬(wàn)個(gè)新發(fā)病例，預(yù)計(jì)到2050年，這一數(shù)字將超過(guò)1億。目前，我國(guó)AD患者人數(shù)約600萬(wàn)左右，預(yù)測(cè)到2025年將增加至1000萬(wàn)，居世界第一位。隨著人類(lèi)壽命的不斷延長(zhǎng)，人口出現(xiàn)老齡化，AD同惡性腫瘤、心血管疾病等，成為威脅人類(lèi)健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前臨床使用的AChE抑制劑、NMDAR抑制劑治療藥物只能緩解AD早期癥狀，不能治愈疾病，而中、重度病人則面臨著無(wú)藥可治的境況。因此，開(kāi)發(fā)新型AD治療藥物是目前醫(yī)藥界的緊迫課題并引起世界各國(guó)醫(yī)藥界的高度重視。
AD是一種多影響因素、多發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性神經(jīng)系統(tǒng)疾病。自AD發(fā)現(xiàn)以來(lái)，研究者對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了廣泛深入的研究，提出了膽堿能學(xué)說(shuō)、β淀粉樣蛋白(Aβ)毒性學(xué)說(shuō)、自由基損傷學(xué)說(shuō)、生物金屬毒性學(xué)說(shuō)、炎癥學(xué)說(shuō)等等多種AD發(fā)病機(jī)理假說(shuō)。前期研究的藥物基本上是只針對(duì)單個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行研究，這對(duì)AD的治療具有很大的局限性。近二十年來(lái)，以抑制Aβ聚集或清除Aβ聚集形成的老年斑為目的，或針對(duì)其它單一靶點(diǎn)的抗AD藥物研發(fā)，一直是該領(lǐng)域的熱點(diǎn)，但到目前為止，還未取得突破性的進(jìn)展，沒(méi)有新藥成功上市。
鑒于老年癡呆的發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，病因機(jī)制還未完全闡明，因此，設(shè)計(jì)合成藥物分子同時(shí)作用于疾病網(wǎng)絡(luò)中的多個(gè)靶點(diǎn)，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，達(dá)到最佳的治療效果的多靶點(diǎn)藥物分子，是當(dāng)今藥物研究的重要趨勢(shì)之一?；诖耍覀冮_(kāi)發(fā)出一類(lèi)新型苯并異硒唑酮喹啉衍生物，通過(guò)對(duì)下述一種或多種特性進(jìn)行優(yōu)化，使其具有更好的治療阿爾茨海默病癥的活性：
1.抗氧化活性；
2.抑制Aβ聚集作用；
3.金屬離子螯合能力；
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是提供一類(lèi)具有抗氧化活性、抑制Aβ聚集作用和金屬離子螯合能力的新型苯并異硒唑酮喹啉衍生物。
本發(fā)明的目的之一是是提供所述的苯并異硒唑酮喹啉衍生物在制備治療、改善和/或預(yù)防阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供下式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物、晶型形式或非對(duì)映異構(gòu)體：：
式I中的R1、R2、R3、R4彼此獨(dú)立的為H、OH、NO2、CN、C1-C4的烷基、被一個(gè)或多個(gè)鹵原子或一個(gè)或多個(gè)羥基或C1-C4的烷氧基取代的C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、鹵素、NR5R6、COOR7、NHCOR8、NHSO2R9、NHCOOR10；其中R5、R6、R7、R8、R9、R10彼此獨(dú)立的為H、C1-C4的烷基、一個(gè)或多個(gè)鹵原子或一個(gè)或多個(gè)羥基或C1-C4的烷氧基取代的C1-C4的烷基；
式I中的X為H、鹵素；
本發(fā)明的苯并異硒唑酮喹啉衍生物可通過(guò)化學(xué)合成獲得。通常本發(fā)明的苯并異硒唑酮喹啉衍生物可通過(guò)以下反應(yīng)式所得。
具體實(shí)施上，本發(fā)明主要通過(guò)先制備苯環(huán)上不同取代基的硒氯，然后與制備的胺反應(yīng)得到所設(shè)計(jì)的目標(biāo)苯并異硒唑酮喹啉衍生物。
本發(fā)明實(shí)施列中也描述了原料的制備。或者可通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)的類(lèi)似方法獲得必須原料(ACS Chem.Neurosci.2014，5，952-962)。
本發(fā)明還提供上述苯并異硒唑酮喹啉衍生物在制備治療、改善和/或預(yù)防阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供一種用于治療、改善和/或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物組合物；該藥物組合物包含上述“本發(fā)明的試劑”，選擇性地還包含藥學(xué)上可接受的輔助劑，選擇性的還包含乙酰膽堿酯酶抑制劑、抗氧化劑、抗炎劑或者神經(jīng)保護(hù)劑。該藥物可以制成注射劑、片劑、膠囊劑、丸劑、懸浮劑或乳劑的形式使用。其給藥途徑可為口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉注射。
實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明中的苯并異硒唑酮喹啉衍生物具有優(yōu)異的模擬谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性、抑制Aβ聚集作用和金屬離子螯合能力，為多靶點(diǎn)抗阿爾茨海默病活性分子。
附圖說(shuō)明
圖1為化合物I-7與金屬離子作用的紫外曲線(xiàn)變化圖。
具體實(shí)施方式
以下為部分優(yōu)選化合物的具體實(shí)施方式，只說(shuō)明本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 5-硝基-7-氯-8-羥基喹啉
將5-硝基-8-羥基喹啉(4.8g，25.2mmol)和KOH溶液(1mol/L，25.2mL)加入到480mL去離子水中，室溫?cái)嚢柘戮徛渭覰aClO溶液(7％，34.2mL)。滴加過(guò)程中，原料全部溶解，隨后析出固體。滴加醋酸，將溶液調(diào)為pH＝6。抽濾，真空干燥得黃色固體4.0g。熔點(diǎn)，239℃。產(chǎn)率71％
實(shí)施例2 5-硝基-7-碘-8-羥基喹啉
將5-硝基-8-羥基喹啉(10.0g，52.6mmol)和KOH(9g，160.0mmol)加入到1000mL去離子水中，室溫?cái)嚢柘录尤刖鶆蚧旌系腎2(13.35g，52.6mmol)和KI(8.73g，52.6mmol)固體，室溫?cái)嚢?h后，滴加醋酸，將溶液調(diào)為pH＝6。抽濾，真空干燥得黃色固體10.8g。熔點(diǎn)，236℃。產(chǎn)率65％
實(shí)施例3 叔丁基-(5-硝基-8-羥基喹啉)碳酸酯
將5-硝基-8-羥基喹啉(10.0g，52.6mmol)和碳酸二叔丁酯(12.7g，57.8mmol)溶于正己烷/二氯甲烷(420mL，V/V＝1∶2)中，室溫?cái)嚢柘录尤?-N，N-二甲氨基吡啶(0.65g，5.26mmol)和二異丙基乙胺(11.2mL，63.12mmol)。攪拌14h后，抽濾，濃縮。使用柱層析純化得淡黃色固體14.0g。產(chǎn)率92％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.06(d，J＝8.9Hz，1H)，9.03(s，1H)，8.44(d，J＝8.4Hz，1H)，7.68(dd，J＝5.5，3.3Hz，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，1.60(s，19H).
實(shí)施例4 叔丁基-(5-硝基-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例3，采用5-硝基-7-氯-8-羥基喹啉為原料。產(chǎn)率：53％。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.05(d，J＝8.8Hz，2H)，8.50(s，1H)，7.62(dd，J＝8.7，4.1Hz，1H)，1.59(s，9H).
實(shí)施例5 叔丁基-(5-硝基-7-碘-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例3，采用5-硝基-7-碘-8-羥基喹啉為原料。產(chǎn)率：76％。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.04(dd，J＝8.7，1.3Hz，1H)，8.98(d，J＝2.5Hz，1H)，8.82(s，1H)，7.64(dd，J＝8.8，4.1Hz，1H)，1.66(s，9H).
實(shí)施例6 叔丁基-(5-氨基-8-羥基喹啉)碳酸酯
室溫下將叔丁基-(5-硝基-8-羥基喹啉)碳酸酯(14.0g，66.8mmol)溶解在乙酸乙酯(200mL)中，SnCl2·2H2O(120g，535.1mmol)分批加入溶液中。室溫下攪拌3h，加入飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)pH＝8.0，抽濾，乙酸乙酯萃取(300mL×5)，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得淡黃色固體。產(chǎn)率72％，熔點(diǎn)172.4-173.3℃.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.20-8.05(m，1H)，7.38-7.29(m，2H)，6.72(dd，J＝7.9，3.4Hz，1H)，4.12(s，2H)，1.59(s，9H).LC/MS(ESI)：261.1[M+H]+.
實(shí)施例7 叔丁基-(5-氨基-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯
室溫下將叔丁基-(5-硝基-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯(2.0g，9mmol)溶解在乙醇(100mL)中，Na2S·9H2O(4.3g，17.8mmol)分批加入溶液中。室溫下攪拌3h，加入500mL水，二氯甲烷萃取(300mL×3)，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥的棕色固體。產(chǎn)率84％，1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.89(dd，J＝4.1，1.4Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，7.30(dd，J＝8.5，4.1Hz，2H)，6.81(s，1H)，1.50(s，9H).LC/MS(ESI)：251.1[M-CO2+H]+.
實(shí)施例8 叔丁基-(5-氨基-7-碘-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例7，采用叔丁基-(5-硝基-7-碘-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：86％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.86(dd，J＝4.0，1.5Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，7.34(dd，J＝8.5，4.1Hz，1H)，7.23(s，1H)，3.96(s，2H)，1.57(s，9H).LC/MS(ESI)：343.0[M-CO2+H]+.
實(shí)施例9 2，2’-二硒二苯甲酸
在100mL的圓底燒瓶中加入KBH4(0.89g，16.5mmol)、NaOH(3.2g，80mmol)和PEG600(0.2g)和水50mL。攪拌均勻后，加入硒粉(3.95g，50mmol)，升至75℃攪拌30min，冷卻后加40％NaOH38mL即制得Na2Se2溶液，待用。
另外，在100mL的圓底燒瓶中加入鄰氨基苯甲酸(6.85g，50mmol)和6NHCl20mL，加一定量水溶解完全后，放置冰水浴中，，將亞硝酸鈉(3.5g，50.7mmol)的水溶液緩慢滴加到上述溶液中，控制反應(yīng)溫度0-5℃，攪拌30min，即制得相應(yīng)的重氮鹽溶液，待用。
在0-5℃條件下，將制得的重氮鹽溶液緩慢滴加到Na2Se2溶液中，然后緩慢升至60℃反應(yīng)2.5h，冷卻后抽濾，濾液調(diào)酸，析出大量固體，抽濾，固體用飽和碳酸氫鈉溶液溶解，煮沸1h，抽濾，濾液再調(diào)酸，抽濾得到的固體，真空干燥后得灰褐色目標(biāo)化合物8.24g，產(chǎn)率：82％。
實(shí)施例10 2，2’-二硒二-4-氟苯甲酸
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例9，采用4-氟-2-氨基苯甲酸為原料。產(chǎn)率：86％。
實(shí)施例11 2，2’-二硒二-5-氟苯甲酸
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例9，采用5-氟-2-氨基苯甲酸為原料。產(chǎn)率：78％。
實(shí)施例12 2，2’-二硒二-6-氟苯甲酸
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例9，采用6-氟-2-氨基苯甲酸為原料。產(chǎn)率：85％。
實(shí)施例13 叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-8-羥基喹啉)碳酸酯
在50mL的圓底燒瓶中加入2，2’-二硒二苯甲酸(2.0g，5mmol)，加入二氯亞砜15mL，加熱回流2h，反應(yīng)完畢，減壓除去多余的二氯亞砜，即制得相應(yīng)的硒氯，待用，不需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在100mL的圓底燒瓶中加入叔丁基-(5-氨基-8-羥基喹啉)碳酸酯(0.95g，5mmol)，干燥的二氯甲烷20mL，干燥的三乙胺(6mL，40mmol)，將現(xiàn)制備的硒氯溶于干燥的二氯甲烷中，冰水浴下，滴加入到上述溶液中，攪拌反應(yīng)5h，反應(yīng)完畢，加水，分液，水相用二氯甲烷洗滌2次，合并，干燥，濃縮，柱層析純化得黃色固體，1.8g，產(chǎn)率：87％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.03-8.82(m，1H)，8.16(d，J＝7.8Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.6，1.3Hz，1H)，7.73-7.56(m，4H)，7.51(t，J＝7.4Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.6，4.1Hz，1H)，1.62(s，9H).LC/MS(ESI)：443.0[M+H]+.
實(shí)施例14 叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例13，采用叔丁基-(5-氨基-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：89％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.92(d，J＝2.6Hz，1H)，8.13(d，J＝7.7Hz，1H)，7.99(d，J＝8.5Hz，1H)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H)，7.69-7.63(m，2H)，7.50(t，J＝7.4Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.5，4.0Hz，1H)，1.57(s，9H).LC/MS(ESI)：433.0[M-CO2+H]+.
實(shí)施例15 叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-7-碘-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例13，采用叔丁基-(5-氨基-7-碘-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：75％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.92(dd，J＝4.1，1.7Hz，1H)，8.22-8.13(m，1H)，8.04(s，1H)，8.02(dd，J＝8.5，1.7Hz，1H)，7.74(dd，J＝1.5，1.0Hz，1H)，7.73(d，J＝1.0Hz，1H)，7.59-7.51(m，1H)，7.42(dd，J＝8.5，4.1Hz，1H)，1.67(s，9H).LC/MS(ESI)：524.9[M-CO2+H]+.
實(shí)施例16 叔丁基-(7-氯-5-(4-氟苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-7-碘)-8-羥基喹啉)碳酸酯
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例13，采用叔丁基-(5-氨基-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：79％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.95(dd，J＝4.1，1.6Hz，1H)，8.04(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.64(dd，J＝8.1，4.7Hz，1H)，7.49(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.5，4.1Hz，1H)，7.16(dd，J＝9.5，8.4Hz，1H)，1.59(s，9H).LC/MS(ESI)：451.0[M-CO2+H]+.
實(shí)施例17 2-(8-羥基喹啉-5)苯并硒唑[d][1，2]-3(2H)-酮(I-1)
室溫下300mg叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-8-羥基喹啉)碳酸酯溶于30mL二氯甲烷中，將制備的HCl氣體通入到溶液中，攪拌過(guò)夜。抽濾，真空干燥得黃固體，產(chǎn)率92％。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.91(d，J＝3.9Hz，1H)，8.13(d，J＝8.1Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.93-7.90(m，1H)，7.73(t，J＝7.6Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.4，4.1Hz，1H)，7.53(t，J＝8.1Hz，2H)，7.15(d，J＝8.1Hz，1H).13CNMR(101MHz，d6-DMSO)δ166.40，153.51，148.58，140.42，138.48，132.13，128.37，127.99，127.04，126.19，125.94，125.24，122.34，110.61.77Se NMR(d6-DMSO)：δ＝886ppm.HRMS(ESI)m/z[M+Cl]-for C16H10N2O2Se pred.376.9602，meas.376.9586；HPLC purity：99.45％.
實(shí)施例18 2-(7-氯-8-羥基喹啉-5)苯并硒唑[d][1，2]-3(2H)-酮(I-2)
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例17，采用叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：90％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.03(d，J＝3.3Hz，1H)，8.50(d，J＝8.0Hz，1H)，8.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝7.2Hz，1H)，7.80(dd，J＝8.5，4.6Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.65(t，J＝7.1Hz，1H)，7.47(t，J＝7.2Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ166.52，147.79，146.76，141.60，137.36，135.13，131.54，129.27，128.01，127.84，127.59，127.07，125.84，125.58，122.47， 117.96.[M+H]+for C16H9ClN2O2Se pred.376.9591，meas.376.9591；HPLC purity：98.31％
實(shí)施例19 2-(7-碘-8-羥基喹啉-5)苯并硒唑[d][1，2]-3(2H)-酮(I-3)
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例17，采用叔丁基-(5-苯并硒唑[d][1，2]-2(3H]-酮-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：89％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.94(dd，J＝4.3，1.4Hz，1H)，8.43(d，J＝8.0Hz，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，1H)，7.88(d，J＝7.7Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.69(dd，J＝8.6，4.4Hz，1H)，7.67-7.63(m，1H)，7.47(t，J＝7.4Hz，1H) 13C NMR(101MHz，DMSO)δ166.45，152.29，148.31，141.39，136.35，135.40，135.22，135.20，131.58，127.85，127.62，126.90，126.17.125.87，122.60，80.92.[M+H]+for C16H9IN2O2Se pred.468.8947，meas.468.8950；HPLC purity：96.73％.
實(shí)施例20 2-(7-氯-8-羥基喹啉-5)-4-氟苯并硒唑[d][1，2]-3(2H)-酮(I-4)
具體實(shí)施步驟同實(shí)施例17，采用叔丁基-(5-(4-氟苯并硒唑[d][1，2]-2(3H)-酮)-7-氯-8-羥基喹啉)碳酸酯為原料。產(chǎn)率：95％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.13(dd，J＝5.2，1.2Hz，1H)，8.75(dd，J＝8.6，1.0Hz，1H)，8.41(d，J＝8.1Hz，1H)，8.04(dd，J＝8.6，5.2Hz，1H)，7.76(d，J＝8.3Hz，1H)，7.63(td，J＝8.1，5.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.3Hz，1H)，7.24(dd，J＝10.6，8.2Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ163.72(d，JC-F＝3.1Hz)，161.84(d，JC-F＝259.8Hz)，147.58(s)，144.53(s)，144.21(s)，143.13(s)，131.88(d，JC-F＝8.3Hz)，130.58(s)，128.94(s)，127.21(d，J C-F＝8.7Hz)，123.41(d，JC-F＝3.3Hz)，122.58(s)，116.13(d，JC-F＝10.8Hz)，115.59(s)，112.47(d，JC-F＝19.8Hz).[M+H]+for C16H8ClFN2O2Se pred.394.9496，meas.394.9498；HPLC purity：97.39％.
實(shí)施例21：苯并異硒唑酮喹啉衍生物模擬谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性測(cè)試
本發(fā)明苯并異硒唑酮喹啉衍生物模擬谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性測(cè)試主要參考Ray J.Butcher文獻(xiàn)報(bào)道的方法來(lái)評(píng)估(Eur.J.Org.Chem.2011，5485-5497)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，結(jié)果表明苯并異硒唑酮喹啉衍生物均表現(xiàn)出較好的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶模擬活性。
實(shí)施例30：苯并異硒唑酮喹啉衍生物對(duì)β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)聚集的抑制活性測(cè)試
本發(fā)明采用硫磺素T結(jié)合實(shí)驗(yàn)考察衍生物對(duì)Aβ1-42聚集的抑制活性。具體操作步驟見(jiàn)參考文獻(xiàn)Curr.Med.Chem.2000，3，303-339。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，結(jié)果表明苯并異硒唑酮喹啉衍生物對(duì)Aβ1-42聚集有一定的抑制作用。
結(jié)果：
表1 活性測(cè)試結(jié)果
實(shí)施例34苯并異硒唑酮喹啉衍生物對(duì)金屬離子的鰲合作用
本發(fā)明選取苯并異硒唑酮喹啉衍生物式I代表化合物I-7(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)附圖1)，考查它對(duì)銅離子、鐵離子和鋅離子的鰲合作用。金屬離子螯合實(shí)驗(yàn)使用紫外-可見(jiàn)光譜儀(Shimadzu，Japan)，測(cè)試溫度為298K，測(cè)試范圍為200-650nm，波長(zhǎng)間隔為1nm，掃描速率為200nm/min。以化合物與銅離子測(cè)試為例：在2ml離心管中分別配制濃度為50uM化合物和五水硫酸銅水溶液(最終濃度為50uM)?；靹蚝蟮谷胧⒚鬁y(cè)其在200-650nm的紫外吸收，每個(gè)測(cè)三次，取平均值。使用orgin7.5繪制波長(zhǎng)對(duì)時(shí)間的吸收?qǐng)D。通過(guò)觀(guān)察吸收強(qiáng)度變化和吸收峰的位移，判斷化合物與金屬離子有無(wú)螯合作用產(chǎn)生。