本發(fā)明涉及一株高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株，以及利用該突變株進行半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)表面素的方法。
背景技術(shù)：
：生物表面活性劑是由微生物在一定條件下發(fā)酵產(chǎn)生的二次代謝產(chǎn)物，同時具有親水性和疏水性的兩性結(jié)構(gòu)。生物表面活性劑除了具有與化學(xué)合成表面活性劑相同或相近的物理及化學(xué)性質(zhì)，亦具有結(jié)構(gòu)復(fù)雜、專一性強、低毒性、可生物降解、環(huán)境友善及可利用廉價農(nóng)副產(chǎn)品進行發(fā)酵生產(chǎn)等特性。而某些生物表面活性劑具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤…等等藥理作用。大多數(shù)的脂肽類生物表面活性劑具有抗微生物作用，也被稱為抗生素，目前發(fā)現(xiàn)的微生物脂肽主要有：表面素(surfactin)、豐原素(fengycin)、伊枯草菌素(iturin)和桿菌霉素(bacillomycin)、抗霉枯草菌素(mycosubtilin)、制磷脂菌素(plipstatin)等。目前，生物表面活性劑已廣泛地應(yīng)用在化妝品、食品、石油及藥學(xué)等領(lǐng)域。1968年Arima等人發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌生產(chǎn)的一種脂肽類生物表面活性劑，其活性極強，并將其命名為表面素(surfactin)，Arima等人當時制造的表面素產(chǎn)量僅有0.04-0.05g/L。1981年Cooper等人采用含4％葡萄糖的基本無機鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌ATCC21332后，收集其泡沫并分離表面素，其產(chǎn)量為0.78g/L。1989年Mulligan等人發(fā)現(xiàn)一枯草芽孢桿菌紫外光突變株ATCC51338，其表面素產(chǎn)量為1.124g/L。1997年Kim等人使用一個改良的Cooper培養(yǎng)基，在限氧條件下培養(yǎng)枯草芽孢桿菌C9，其表面素產(chǎn)量為7.0g/L。2002年魏毓宏等人使用一種強化無機鹽培養(yǎng)基，以控制pH值方式，使得表面素的產(chǎn)量可以達到約3.5g/L。目前枯草芽孢桿菌生產(chǎn)表面素的方式主要是以液態(tài)發(fā)酵為主，由于液態(tài)發(fā)酵可以調(diào)控的發(fā)酵參數(shù)較多，但主要調(diào)控的參數(shù)為培養(yǎng)基成份的組成、發(fā)酵條件的探討與高產(chǎn)量菌株篩選。研究結(jié)果顯示培養(yǎng)基中，不同的碳源確實會影響表面素的產(chǎn)量(Lang,etal.,1999；Wei,etal.,2004；Wei,etal.,2005)；以葡萄糖做為碳源可有效被枯 草芽孢桿菌利用，但是培養(yǎng)基中，若含有過多的葡萄糖會造成pH值下降，而表面素產(chǎn)量也下降，因此得知表面素的生成與培養(yǎng)基中pH值有相當密切的關(guān)系(Yeh,etal.,2005)；于培養(yǎng)基中添加長鏈碳也有助于增加表面素的產(chǎn)量(GhribiandEllouze-Chaabouni,2011)。不同氮源會造成兩種影響：1.產(chǎn)量：調(diào)整Cooper在1981年提出的培養(yǎng)基配方，改變其氮源成分并培養(yǎng)于無氧的環(huán)境下，可提高表面素產(chǎn)量至7g/L(Kim,etal.,1997)；2.表面素結(jié)構(gòu)：在培養(yǎng)液中添加不同的疏水性胺基酸會改變表面素的結(jié)構(gòu)(Peypoux,etal.,1992)。當培養(yǎng)液中的二價及三價鐵離子的濃度由μg提升到mg，可有效增加枯草芽孢桿菌ATCC21332的表面素產(chǎn)量，然而鐵離子的添加亦會造成培養(yǎng)基中pH值的下降，當pH值小于5時，枯草芽孢桿菌將不分泌表面素，因此添加鐵離子需配合調(diào)整pH值以利表面素生成(WeiandChu,1998；WeiandChu,1998)；于培養(yǎng)基中添加錳離子可以顯著提高表面素的產(chǎn)量，亦不會影響到枯草芽孢桿菌的生長(WeiandChu,2002)；將枯草芽孢桿菌培養(yǎng)于無金屬離子鎂、鉀、錳、鐵的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)其細胞生長與表面素的產(chǎn)量皆明顯下降，因此證明此四種離子雖然為微量元素，但在培養(yǎng)過程中是不可或缺的(Wei,etal.,2007)。除了培養(yǎng)基中的成份會影響表面素的生成外，有學(xué)者指出在培養(yǎng)基中添加固體載體能有效增加表面素的產(chǎn)量，由于活性碳在發(fā)酵過程中不易分解，易與培養(yǎng)基分離，因此利用活性碳作為載體，能增加細胞量，延緩細胞進入停滯期，提高表面素的產(chǎn)量(Yeh,etal.,2005)。液態(tài)發(fā)酵的缺點，由于發(fā)酵過程中，需要添加除泡劑，進而導(dǎo)致后續(xù)純化的困難，故需改變發(fā)酵方式來增加表面素的生產(chǎn)。除了液態(tài)發(fā)酵方式之外，亦還有固態(tài)發(fā)酵方式，其基質(zhì)成本較低，在發(fā)酵工業(yè)上是一種重要的發(fā)酵方式。文獻指出枯草芽孢桿菌ATCC21332以馬鈴薯加工后廢棄物發(fā)酵，低固體含量的組別其表面素產(chǎn)量較高固體含量組別佳(Nitschke,etal.,2004)；枯草芽孢桿菌MI113以豆腐加工后所產(chǎn)生的副產(chǎn)品與廢棄物于37℃發(fā)酵48小時后，其表面素產(chǎn)量為2g/kg(Ohno,etal.,1995)；枯草芽孢桿菌(BacilluspolyfermenticusKJS-2)以黃豆發(fā)酵所生產(chǎn)的表面素，具有抗菌活性，其最小抑菌活性為0.05mg/mL(Kim,etal.,2009)。固態(tài)發(fā)酵的缺點，包括：1.水分低限制了物質(zhì)與能量的傳遞速率，發(fā)酵時產(chǎn)生的熱能不易消除，營養(yǎng)物質(zhì)會形成濃度梯度，導(dǎo)致發(fā)酵不平均；2.發(fā)酵參數(shù)不易偵測(如pH質(zhì)、生物量)，再現(xiàn)性差；3.基質(zhì)攪拌不易，容易導(dǎo)致微生物的生長環(huán)境被破壞；4.發(fā)酵時間較液態(tài)發(fā)酵長。表面素是目前所知表面活性最強的生物表面活性劑之一，自從被發(fā)現(xiàn)以來，受 到持續(xù)的關(guān)注，但是由于產(chǎn)量很低以及生產(chǎn)成本過高的問題，一直是脂肽類生物表面活性劑達不到商業(yè)化用途的原因，截至目前為止，仍無法實現(xiàn)表面素的工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，因此，許多發(fā)明者致力于提高表面素的產(chǎn)量。除此之外，由于生物發(fā)酵過程本身的不穩(wěn)定性，從實驗室技術(shù)向工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)轉(zhuǎn)化是一個很難的問題。如何降低生產(chǎn)成本是目前研發(fā)的主要目標，這需要選育優(yōu)良的高產(chǎn)量菌株、合適且廉價的培養(yǎng)基以降低發(fā)酵成本并提高單位產(chǎn)量。此外，發(fā)酵后的基質(zhì)的再利用與開發(fā)高附加值產(chǎn)品，這正是本發(fā)明要解決的技術(shù)問題。本發(fā)明旨在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種脂肽類生物表面活性劑的商業(yè)化制備方法。此方法基于改善固態(tài)發(fā)酵的部分缺點采用半固態(tài)發(fā)酵。因為半固態(tài)發(fā)酵含水量較固態(tài)發(fā)酵高，可以改善物質(zhì)與能量的傳遞速率，減少發(fā)酵時產(chǎn)生的熱能，加快發(fā)酵時間等問題，此外，藉由改變半固態(tài)發(fā)酵方式的含水量、發(fā)酵基質(zhì)等發(fā)酵基本條件，并額外添加油脂與胺基酸補充其碳氮源，以提高半固態(tài)發(fā)酵時表面素的產(chǎn)量。這種生產(chǎn)技術(shù)具有產(chǎn)量高、效率高、發(fā)酵周期短、制程簡易，使得生產(chǎn)成本大量降低，適合商業(yè)化用途及工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，有助于脂肽類生物表面活性劑的推廣及應(yīng)用。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的之一是提供一株高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株。本發(fā)明的目的之二是提供一種利用所述的高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株進行半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)表面素的方法。為了達到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：篩選高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株，該方法包括以下步驟：步驟一：將枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilisssp.)接種至營養(yǎng)液體培養(yǎng)基(Nutrientbroth)，得到一活化菌液；其中該營養(yǎng)液體培養(yǎng)基包括蛋白胨(peptoneA)5.0g/L、氯化鈉(NaCl)5.0g/L、牛肉萃取物(beefextract)1.5g/L、酵母萃取物(yeastextract)1.5g/L、pH值為7.4±0.2。步驟二：將活化菌液以物理或化學(xué)方法突變處理，得到一混合菌液；其中該物理方法是以紫外光(UV)波長254nm，3,500-4,500μW/cm2，處理1-50秒；該化學(xué)方法是以15-20μg/ml溴化乙錠(EtBr)于25-30℃處理20-28小時。步驟三：將該混合菌液接種于一營養(yǎng)固體培養(yǎng)基(Nutrientagar)，于25-30℃培養(yǎng)12-20小時，取得單一菌落；其中該營養(yǎng)固體培養(yǎng)基是包括0.5％蛋白胨(peptoneA)、 0.3％牛肉萃取物(beefextract)、0.3％酵母萃取物(yeastextract)、0.5％氯化鈉(NaCl)、1.5％瓊脂(agar)、pH值為6.8。步驟四：將該單一菌落接種于一無機鹽液體培養(yǎng)基(Mineralsaltmedium)，于25-30℃培養(yǎng)20-28小時后，由該單一菌落篩選出高產(chǎn)表面素的突變菌株；其中該突變菌株是sfp蛋白表達量較高者，當sfp蛋白表達量越高，其表面素生成量越多；該無機鹽液體培養(yǎng)基包括2-6％(v/v)葡萄糖、35-45mM磷酸氫鈉(Na2HPO4)、25-35mM磷酸二氫鉀(KH2PO4)、45-55mM硝酸銨(NH4NO3)、5-10mM氯化鈣(CaCl2)、2-6mM乙二胺四乙酸鈉(SodiumEDTA)、750-850mM含水硫化鎂(MgSO4.7H2O)、1-3mM含水硫化鐵(FeSO4.7H2O)。經(jīng)篩選得到一株高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)突變株，命名為B.S.surfactin1，分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，其菌種保藏編號為CGMCCNo.10270，保藏日期為2014年12月31日。進一步的，本發(fā)明還提出了一種利用所述的高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株進行半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)表面素的方法，該方法包括以下步驟：A、將該高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變菌株接種至含無機鹽液體培養(yǎng)基與黃豆的混合物，進行半固態(tài)發(fā)酵，得到一發(fā)酵物；B、將該發(fā)酵物進行粗產(chǎn)物萃取，得到一黃色沉淀物；C、將該黃色沉淀物純化，即得到純化的表面素。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，所述的無機鹽液體培養(yǎng)基包括2-6％(v/v)葡萄糖、35-45mM磷酸氫鈉(Na2HPO4)、25-35mM磷酸二氫鉀(KH2PO4)、45-55mM硝酸銨(NH4NO3)、5-10mM氯化鈣(CaCl2)、2-6mM乙二胺四乙酸鈉(SodiumEDTA)、750-850mM含水硫化鎂(MgSO4.7H2O)、1-3mM含水硫化鐵(FeSO4.7H2O)。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，所述的高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變菌株的接種體積與該混合物中黃豆體積的比例為5:100-10:100。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，所述的無機鹽液體培養(yǎng)基(Mineralsaltmedium)的體積與該混合物中黃豆體積的比例為25:100-35:100。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，步驟A的半固態(tài)發(fā)酵是于溫度30-40℃，濕度80-90％，發(fā)酵2-3天。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，步驟B的粗產(chǎn)物萃取，其步驟包括：A、將步驟A的一發(fā)酵物以純水清洗、進行固液分離；B、將該固液分離的液體以低溫離心，取其上清液后，再以低溫離心，收集沉淀物；C、將該沉淀物懸浮于二氯甲烷(dichloromethane)中，取其有機層，得到一黃色沉淀物。在本發(fā)明所述的方法中，該黃色沉淀物為一粗表面素。在本發(fā)明所述的方法中，優(yōu)選的，步驟C的純化是以磁吸攪拌式超過濾裝置(Amiconmagneticallystirredultrafiltrationcell)及中空纖維超濾濾芯(Hollowfiberultrafiltrationcartridges)進行純化。本發(fā)明提供了一株高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株，以及利用該高產(chǎn)量枯草芽孢桿菌突變株進行半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)表面素的方法，其表面素生產(chǎn)量可以達到7.11g/kg。附圖說明圖1是比較半固態(tài)發(fā)酵與固態(tài)發(fā)酵方式的表面素生成量。圖2是粗表面素的HPLC圖譜。圖3是枯草芽孢桿菌生長曲線與表面素產(chǎn)量關(guān)系。圖4是篩選sfp基因表達量高者為sfp高量產(chǎn)表面素枯草芽孢桿菌突變株的標準。圖5是表面素的表面張力測定。圖6是表面素的乳化活性測定。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例和附圖來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。實施例一、篩選高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株將泰國海水蝦池所分離出的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilisssp.)以營養(yǎng)液體培養(yǎng)基(Nutrientbroth)活化后，以20μg/ml溴化乙錠，于30℃突變處理24小時，再將突變 處理后的菌液，以營養(yǎng)固態(tài)培養(yǎng)基(Nutrientagar)于30℃培養(yǎng)16小時，取單一菌落；將單一菌落以無機鹽液體培養(yǎng)基于30℃培養(yǎng)24小時，抽取其RNA，以引物(primers)(見表一)分析sfp基因與rpo基因的相對定量，與對照組(未經(jīng)溴化乙錠處理的菌株)做比較，篩選sfp基因表達量高者為高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株，所述的高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株命名為B.S.surfactin1，分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，其菌種保藏編號為CGMCCNo.10270，保藏日期為2014年12月31日。表一、引物序列引物序列堿基數(shù)SFP-P1(SEQIDNO1)5’-AAAACGGRAGAWAT-3’14SFP-P2(SEQIDNO2)5’-AARCGRAASCGATMAG-3’16rpoβ-F(SEQIDNO3)5’-GTGGTTTCTTGATGAGGGTC-3’20rpoβ-R(SEQIDNO4)5’-GGAATGACAGTTGCGGTA-3’18R＝A/G，W＝A/T，S＝C/G，M＝A/C。實施例二.半固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)表面素將有機黃豆(美國產(chǎn))浸泡16小時，以黃豆量的10％水量為添加量的比例于121℃蒸煮30分鐘，待冷卻至常溫后接種10％高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株(CGMCCNo.10270)的菌液，并分別添加30％滅菌水(半固態(tài)發(fā)酵)、30％無機鹽液體培養(yǎng)基(半固態(tài)發(fā)酵)與不添加任何水份(固態(tài)發(fā)酵)，混合均勻后放至鐵盤上并以紗布覆蓋，于30℃，濕度80％，培養(yǎng)48小時，每24小時取發(fā)酵黃豆進行分析。該無機鹽液體培養(yǎng)基包括2-6％(v/v)葡萄糖、35-45mM磷酸氫鈉(Na2HPO4)、25-35mM磷酸二氫鉀(KH2PO4)、45-55mM硝酸銨(NH4NO3)、5-10mM氯化鈣(CaCl2)、2-6mM乙二胺四乙酸鈉(SodiumEDTA)、750-850mM含水硫化鎂(MgSO4.7H2O)、1-3mM含水硫化鐵(FeSO4.7H2O)。試驗結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明以無機鹽液體培養(yǎng)基進行半固態(tài)發(fā)酵的方式相較于另外2組，可以于發(fā)酵第2天，得到最佳的表面素產(chǎn)量。實施例三.粗表面素的分析將實施例二得到的發(fā)酵物進行粗產(chǎn)物萃取，得一黃色沉淀物；其粗產(chǎn)物萃取步 驟包括：A、將發(fā)酵物以純水清洗、將清洗過后的發(fā)酵物裝入250網(wǎng)目濾袋，以脫漿機進行固液分離；B、將該固液分離的液體以5000rpm于4℃，離心15分鐘，取其上清液，以濃鹽酸調(diào)整pH值至4.0，再以10000rpm于4℃，離心30分鐘，收集沉淀物；C、將該沉淀物懸浮于二氯甲烷(dichloromethane)的分液漏斗中，均勻震蕩靜置使其分層，再取其有機層，以減壓濃縮機將有機溶劑揮發(fā)，即得一黃色沉淀物，為一粗表面素。D、將該黃色沉淀物溶于去離子水中，使用0.22μm濾膜過濾后，以逆相高效能液相層析儀(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)分析。利用Techsphere5mmODSC18逆相管柱(reversecolumn)，將管柱溫度控制在30℃，移動相為3.8mM，三氟乙酸：乙腈＝1：4(trifluroaceticacid:acetonitrile)，流速為1ml/min，波長為210nm，樣品量為20μl(Weietal.,2003)。試驗結(jié)果如圖2所示：標準品為枯草芽孢桿菌ATCC21332市售標準品(Sigma)。樣本為高產(chǎn)量突變株所生產(chǎn)的表面素。由先前研究指出，以MALDI-TOF分析其17分鐘的尖峰(peak)分子量最為接近表面素分子量1022kD，因此采用此時間點作為定量、定性分析。實施例四.表面素的純化將實施三中的該黃色沉淀物溶于去離子水中，使用0.22μm濾膜過濾后，以裝有不同分子量大小(molecularweightcut-offs，MWCO)的纖維素膜(cellulosemembrane)的磁吸攪拌式超過濾裝置(Amiconmagneticallystirredultrafiltrationcell)在3kg/cm2的壓力下進行濃縮，再通過44.5mm中空纖維超濾濾芯(Hollowfiberultrafiltrationcartridges)于1.7x105帕(Pa)壓力下收集其過濾物，即得一純表面素。實施例五.枯草芽孢桿菌生長曲線與表面素產(chǎn)量的關(guān)系于高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株生長期間，每12小時取其菌液并以分光亮度計600nm測其吸光值，若吸光值大于0.7，則先稀釋后再測定；此外，于每12小時取10ml菌液，以逆相高效能液相層析儀分析其表面素產(chǎn)量。試驗結(jié)果如圖3所示：sfp枯草芽孢桿菌突變株在培養(yǎng)0到48小時為對數(shù)期(logarithmicphase)，48小時后進入平穩(wěn)期(stationaryphase)，而表面素的產(chǎn)量于 培養(yǎng)后24小時開始增加，于培養(yǎng)后60小時達到穩(wěn)定產(chǎn)量。實施例六.sfp基因表達量與表面素產(chǎn)量的關(guān)系取經(jīng)過突變處理的單一菌落，以無機鹽液體培養(yǎng)基于30℃培養(yǎng)24小時，抽取其RNA，分析sfp基因與rpo基因的相對定量。試驗結(jié)果如圖4所示：sfp/rpo的基因相對表達量較高者，其所能生成的表面素量亦較多。實施例七.表面素的表面張力測定以DST30SeriesSurfaceTensionMeter進行表面張力測定，純水做為控制組，其表面張力約為72mN/m，將表面素依序稀釋濃度為5×10-4M、1×10-4M、5×10-5M、1×10-5M、5×10-6M、1×10-6M、5×10-7M、1×10-7M、5×10-8M、1×10-8M，可得其臨界微胞濃度(criticalmicelleconcentration,CMC)，試驗結(jié)果如圖5所示。實施例八.表面素的乳化特性測定參考Cooper等人所使用的方法，將表面素溶于純水中并配制成不同濃度，取出2ml稀釋后的表面素溶液并添加3ml煤油于試管中，以vortex震蕩2分鐘后，于室溫下靜置24小時，測量乳化層高度與溶液總高度的比值乘上100％即為該待測樣品的乳化指數(shù)。油品乳化能力的大小以乳化指數(shù)(emulsificationindex,E24)表示的，試驗結(jié)果如圖6所示。實施例九.表面素的抑菌試驗分別將大腸桿菌(EscherichiacoliDH5α)、哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)、溶澡弧菌(Vibrioalginolyticus)、鰻弧菌(Vibrioanguillarum)、鮭弧菌(Vibriosalmonicida)、產(chǎn)氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)培養(yǎng)于LBA(E.coli□DH5α)或TSA(+1.5％NaCl)上，于37℃培養(yǎng)16小時后，刮下菌落并溶于指定培養(yǎng)液；使OD540為1時(濃度約為1×109/c.c.菌數(shù))，取500μl菌液加入500μ的LB或TSB(+1.5％NaCl)，使菌液濃度1×104.5/c.c.菌數(shù)；使用96孔培養(yǎng)皿在每個凹槽加入130μl的菌液，菌液濃度為1×104.5/c.c.菌數(shù)，再加入20μl不同濃度的化學(xué)合成抗菌勝肽。于37℃培養(yǎng)16小時后，觀察呈現(xiàn)澄清的菌液(沒有生長)的最低抗菌勝肽濃度，即為最小抑菌濃度。試驗結(jié)果如表二所示：與枯草芽孢桿菌ATCC21332所生產(chǎn)的表面素比較，由高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株，所生產(chǎn)的表面素其最小抑菌濃度為96.5μΜ。表二、枯草芽孢桿菌ATCC21332與高產(chǎn)表面素的枯草芽孢桿菌突變株所生產(chǎn)的表面素的最小抑菌濃度(μΜ)比較。當前第1頁1 2 3