本領(lǐng)域涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種新的2,5,6位取代嘧啶酮衍生物及其制備方法及其作為抗乙肝病毒藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染所導(dǎo)致的急、慢性疾病，已經(jīng)對全世界人民的健康造成了很大的影響。它廣泛流行于世界各國，據(jù)WHO統(tǒng)計，全球有約20億人曾感染過HBV，其中3.6億人為慢性乙肝，每年死于慢性乙型肝炎相關(guān)疾病的患者達(dá)100萬。調(diào)查結(jié)果顯示，我國有7～8億人感染過HBV，人群乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的攜帶率為10.34％，估計約有1.3億人為HBV攜帶者，且年新增乙肝感染者約200萬人。其中慢性乙肝患者約有2000～3000萬，每年死于慢性乙肝相關(guān)疾病的人數(shù)達(dá)30萬。據(jù)乙肝年報告的發(fā)病率數(shù)據(jù)仍顯示有顯著上升趨勢。乙型肝炎不僅嚴(yán)重影響現(xiàn)代人的身體健康，而且給社會、家庭帶來了沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，是全世界醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的重要課題。

目前，被批準(zhǔn)上市用于治療乙肝的藥物主要有兩類：免疫調(diào)節(jié)制劑和核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。其中，前者包括α-干擾素和長效干擾素；后者包括拉米夫定、替比夫定、恩替卡韋、阿德福韋酯、替諾夫韋、克來夫定與恩曲他濱。

IFN是機體感染病毒時，宿主細(xì)胞通過抗病毒應(yīng)答產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類似、功能相近的低分子糖蛋白，是抗病毒感染最重要的一種細(xì)胞因子。主要分為α、β和γ三型，其中IFN-α和β具有直接抗病毒作用。干擾素-α2b最早由美國的Schering-Plough公司研制成功并于1992年經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市用于治療病毒性肝炎，其主要作用是通過誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗病毒因子，提高T細(xì)胞活性，同時抑制負(fù)性調(diào)節(jié)因子的分泌，誘導(dǎo)B細(xì)胞成熟，增加I類白細(xì)胞組織兼容性抗原的表達(dá)，達(dá)到輔助淋巴細(xì)胞清除病毒感染的肝細(xì)胞的作用。近年來還發(fā)現(xiàn)，干擾素有抗肝細(xì)胞纖維化的作用。目前，干擾素在抗HBV治療存在的主要問題是適用人群有限，可抑制病毒復(fù)制但無法清除病毒，其毒副作用也是普遍存在的。最常見的是發(fā)熱及流感樣綜合征，患者體重減輕、脫發(fā)、情緒激動，骨髓抑制致血細(xì)胞、血小板減少，輕度貧血，偶可發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)損傷，影響內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，亦有產(chǎn)生干擾素抗體者。

核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是目前治療乙肝的主要藥物，其能夠通過和HBV病毒的天然底物 dNTP競爭HBV病毒的結(jié)合位點，從而達(dá)到抑制HBV活性而發(fā)揮抗病毒作用。雖然核苷類抗HBV藥物的療效顯著，但由于用藥周期長、毒副反應(yīng)大、易產(chǎn)生耐藥性等缺點限制了其在臨床上的應(yīng)用，因此，研發(fā)具有高效低毒，新型的HBV藥物是科學(xué)家面前的一個十分迫切和重要的課題。

目前被批準(zhǔn)用于抗HBV的7種核苷類藥物都具有抗HIV活性。其中拉米夫定、替諾福韋、恩曲他濱已被FDA批準(zhǔn)用于HIV治療，而阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定、克來夫定都有關(guān)于抗HIV活性的報導(dǎo)。HBV聚合酶與HIV逆轉(zhuǎn)錄酶具有同源性。因此人們會對一些具有良好抗HIV活性的藥物進行抗HBV活性篩選。Lee等人將非核苷類抗HIV-1試劑2,5-吡啶二羧酸類衍生物用于抗HBV的研究，并發(fā)現(xiàn)其具有良好活性。

S-DABO類化合物是抗HIV-1轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，其具有結(jié)構(gòu)多樣、高效低毒等特性。但是沒有人關(guān)注過他的HBV活性。因而我們設(shè)計合成了具有抗HBV活性的2,5,6位取代嘧啶酮衍生物，并探究其作用機制，對于發(fā)展新型非核苷類抗HBV藥物，特別是對抗臨床常用藥物耐藥的藥物，具有特別重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明人經(jīng)研究而制備了一系列2,5,6位取代嘧啶酮衍生物，這些化合物具有抗HBV活性。

本發(fā)明的目的是提供新的2,5,6位取代嘧啶酮衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述衍生物的制備方法。

本發(fā)明的第三個目的是提供上述衍生物的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個目的是提供含有上述衍生物的藥物組合物及其應(yīng)用。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案而實施：

一方面，本發(fā)明提供了新的2,5,6位取代嘧啶酮衍生物，即式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物：

其中，

R₁為3,4-二甲氧基苯基，苯并[d]三氮唑-1-基；

R₂為4-硝基溴芐，4-氰基溴芐，4-碘溴芐，4-三氟甲基溴芐，3,5-二甲氧基溴芐， 2-硝基溴芐，3-氯溴芐，2-(4-硝基苯氧基)乙基，2-(4-甲基苯氧基)乙基，2-(4-溴苯氧基)乙基，環(huán)庚基，環(huán)己-2-烯-1-基；

R₃為H，鹵素(如Cl、Br、I)，N(CH₃)₂，CH(CH₃)₂

第二方面，本發(fā)明還提供了上述2,5,6位取代嘧啶酮衍生物的制備方法，其包括如下步驟：

上述各化合物中的取代基R₁、R₂與R₃定義與本發(fā)明所提供的上述化合物中所定義的相同。

第三方面，本發(fā)明提供了上述2,5,6位取代嘧啶酮衍生物作為抗HBV藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的式(I)化合物對HBV DNA以及HBeAg具有明顯的抑制活性。

第四方面，本發(fā)明還提供了包含上述新的2,5,6位取代嘧啶酮衍生物的藥物組合物及其藥學(xué)上可接受的溶劑化物作為抗HBV藥物的應(yīng)用。在該藥物組合物中含有效成分(式(I)化合物)的適合范圍從1.0毫克到500毫克每單位(片、膠囊或注射液)；在這些藥物組合物里，通常有效成分的總質(zhì)量占所有成分總質(zhì)量的0.5％-95％。有效成分可以通過口服以固體劑型的形式，如膠囊，片劑，粉劑，或者以液體劑型形式，如糖漿，混懸液，也可以采用注射滅菌的液體劑型。

本發(fā)明提供以下藥物劑型：

片劑

大量的片劑可以通過傳統(tǒng)的制備方法制備，單位劑量如下：100mg本發(fā)明式(I)化合 物，0.2mg滑石粉，5mg硬脂酸鎂，275mg微晶纖維素，11mg淀粉，98.8mg乳糖。采用適當(dāng)?shù)陌绿岣呖煽谛曰蛘哌_(dá)到緩釋作用。

膠囊劑

大量的單位膠囊制備通過填充標(biāo)準(zhǔn)兩塊硬膠囊，每塊含有100mg粉末本發(fā)明式(I)的化合物，175mg乳糖，24mg滑石粉，6mg硬脂酸鎂。

注射劑

通過腸外給藥的藥物注射劑通過如下制備：攪拌1.5％(質(zhì)量)的本發(fā)明式(I)化合物和10％(體積)的丙二醇及水，得到的溶液加入氯化鈉配成等滲液并滅菌。

本發(fā)明的藥物組合物可單獨給藥也可與其它抗病毒藥物聯(lián)合用藥。被治療動物包括哺乳動物、爬行動物、甲殼動物、兩棲類、魚類、家禽類。主要范圍為哺乳動物特別是人。

另外需要指出，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、化合物的活性強度、服用時間、代謝速度、病癥的嚴(yán)重程度，具體劑量和使用方法由主治醫(yī)師根據(jù)患者的具體病情判斷。

具體實施方式

為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。如無特殊說明，下述實施例中“減壓旋干溶劑”一般指“水泵減壓條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑。

實施例1

化合物3a：3,4-二甲氧基苯乙酰乙酸乙酯

將8g處理過的Zn粉分散在干燥的25mLTHF中，滴加溴乙酸乙酯引發(fā)反應(yīng)，回流40min后將354mg(2.0mmol)3,5-二甲氧基苯乙腈固體加入反應(yīng)瓶中，0.5mL(4.4mmol)溴乙酸乙酯溶解在3mL THF中滴入反應(yīng)液中，繼續(xù)加熱回流1h。待反應(yīng)冷卻，加入10mL THF稀釋，用20mL 50％K₂CO₃猝滅反應(yīng)，常溫下繼續(xù)攪拌1h，抽濾掉Zn粉，所得濾液分層，水層用10mL×2次THF萃取，合并有機相，加入2N鹽酸溶液30mL，繼續(xù)室溫攪拌2h，減壓蒸去THF并用CH₂Cl₂萃取水層，用飽和NaHCO₃溶液洗3次，Na₂SO₄干燥除水，減壓蒸餾得化合物3a的粗品，直接用于下一步反應(yīng)。

實施例2

化合物3b：(苯并[d]三唑-1-基)乙酰乙酸乙酯

將0.5mol的丙二酸二乙酯的鉀鹽置于800mL無水乙睛中，依次加入0.595mol的無水MgCl₂，0.717mol Et₃N，室溫攪拌2個小時，得到反應(yīng)液A。將0.25mol的2-(苯并[d]三唑-1-基)乙酸和0.275mol的N,N-羰基二咪唑置于300mL乙睛中反應(yīng)15分鐘，得到反應(yīng)液B。將反應(yīng)液B倒入反應(yīng)液A中，室溫攪拌12h后回流2h，TLC跟蹤至反應(yīng)完全。冰浴條件下滴加13％HCl 150mL，滴完攪拌10min，分層將有機層溶劑蒸干，再加入150mL乙酸乙醋。有機相分別用飽和NaHCO₃與飽和NaCl溶液洗滌3次，無水MgSO₄干燥，減壓蒸餾得化合物3b的粗品，直接用于下一步反應(yīng)。

實施例3

化合物4a：6-(3，5-二甲氧基芐基)-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1H)-酮

將6.5g Na切成小塊加入到285mL乙醇溶液中，攪拌使其完全溶解，再加入14.72g硫脲，微熱攪拌20min，加入19.46g(0.07mol)3,4-二甲氧基苯乙酰乙酸乙酯(3a)，回流6h，溶液呈橙黃色，TLC檢測反應(yīng)完全，蒸干乙醇，用少量水再溶解，用2N鹽酸調(diào)pH至3左右，析出大量黃白色固體，用乙醇重結(jié)晶，得白色產(chǎn)物。

實施例4

化合物4b：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1H)-酮

化合物4b的制備方法與化合物4a相同。

通式I化合物的制備

化合物5a2-5a13，5b1-5b8均按照合成化合物5a1的操作方法制備，化合物6a2-6a13，6b1-6b8均按照合成化合物6a的操作方法制備。

實施例5

化合物5a1：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-硝基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

將77mg(0.36mmol)對硝基溴芐，100mg(0.36mmol)，6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1H)-酮以及99mg(0.72mmol)K₂CO₃加入到2mL的DMF中，常溫攪拌10min后60V電壓加熱，3h后TLC檢測反應(yīng)完全，加入少量水，用2N鹽酸溶液調(diào)pH至酸性，用20mL乙酸乙酯萃取反應(yīng)液3次，合并有機相，飽和NaCl溶液洗滌3次，無水Na₂SO₄干燥除水，最后柱色譜分離，得到白色固體85mg。

Yield：63％.mp：203-204℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.779(s，2H，ArCH₂)，3831(s，3H，OCH₃)，3.884(s，3H，OCH₃)，4.414(s，2H，SCH₂)，6.024(s，1H，5-H)，6.730-6.822(m，3H，ArH)，7.392(m，2H，ArH)，8.052(m，2H，ArH)，13.315(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：33.514，43.455，55.960，108.620，111.359，112.693，121.589，123.634，129.954，144.572，147.191，148.205，149.140，159.371，165.728，168.296；MS(ESI)：m/z，412.42[M-H]^-.

實施例6

化合物5a2：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-氰基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：53％.mp：208-209℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)：3.702(s，3H，OCH₃)，3.727(s，2H，ArCH₂)，3.737(s，3H，OCH₃)，4.737(s，2H，SCH₂)，6.048(s，1H，5-H)，6.756-6.840(m，3H，ArH)，7.446-7.466(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.641-7.661(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，12.538(s，1H，NH)；¹³CNMR(100MHz，DMSO)δ：33.292，42.744，55.941，55.989，110.235，112.415，113.700，119.196，121.768，130.384，132.566，148.049，149.138；MS(ESI)：m/z，392.23[M-H]^-.

實施例7

化合物5a3：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-硝基苯氧基)乙硫基)-4(3H)-酮

Yield：46％.mp：206-208℃，¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.496-3.527(t，2H，SCH₂)，3.667(s，3H，OCH₃)，3691(s，2H，ArCH₂)，3.703(s，3H，OCH3)，4.261-4.293(t，2H，OCH₂)，5.988(s，1H，5-H)，6.780(m，2H，ArH)，6.882(s，1H，ArH)，7.106-7.128(d，2H，o-ArH，J＝8.8Hz)，8.171-8.194(d，2H，m-ArH，J＝9.2Hz)，12.573(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：28.879，42.749，55.860，67.289，112.229，113.554，115.467，121.598，126.312，30.611，141.461，147.972，149.060，163.819，170.789；MS(ESI)：m/z，392.23[M-H]^-.

實施例8

化合物5a4：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-碘芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：47％.mp：180-181℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.713(s，3H，OCH₃)，3.727(s，2H，ArCH₂)，3.750(s，3H，OCH₃)，4.293(s，2H，SCH₂)，6.003(s，1H，5-H)，6.719-6.969(m，3H，ArH)，7.049-7.070(d，2H，o-ArH，J＝8.4Hz)，7.537-7.558(d，2H，m-ArH，J＝8.4Hz)，12.544(s，1H，NH)； ¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.611，42.268，55.486，93.032，111.847，113.150，121.278，130.170，131.277，136.978，137.969，147.508，148.599；MS(ESI)：m/z，493.19[M-H]^-.

實施例9

化合物5a5：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-三氟甲基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：50％.mp：172-174℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.806(s，2H，ArCH₂)，3.847(s，3H，OCH₃)，3.886(s，3H，OCH₃)，4.419(s，2H，SCH₂)，6.034(s，1H，5-H)，6.761-6.813(m，3H，ArH)，7.363-7.382(d，2H，o-ArH，J＝7.6Hz)，7.475-7.494(d，2H，m-ArH，J＝7.6Hz)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：33.869，43.402，55.906，108.386，111.357，112.616，121.621，125.426，129.464，140.944，148.152，149.123，159.883，165.676，168.230；MS(ESI)：m/z，435.38[M-H]^-.

實施例10

化合物5a6：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3，5-二甲氧基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：48％.mp：162-163℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.762(s，6H，OCH₃)，3.791(s，2H，ArCH₂)，3.849(s，3H，OCH₃)，3.880(s，3H，OCH₃)，4.372(s，2H，SCH₂)，5.965(s，1H，5-H)，6.364(s，1H，p-ArH)，6.515(s，2H，ArH)，6.773-6.814(d，3H，ArH)，13.253(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz， CDCl₃)δ：34.936，43.634，55.324，55.829，55.939，99.626，107.158，108.252，108.290，111.351，112.522，121.598，129.365，138.493，148.027，149.036，160.378，160.845，168.512；MS(ESI)：m/z，427.41[M-H]^-.

實施例11

化合物5a7：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-甲基苯氧基)乙硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：51％.mp：200℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：2.219(s，3H，PhCH₃)，3.440-3.472(t，2H，SCH₂)，3.673-3.692(d，8H，OCH3；ArCH₂)，4.062-4.094(t，2H，OCH₂)，5.963(s，1H，5-H)，6.769-6.820(m，4H，ArH)，6.889(s，1H，ArH)，7.062-7.082(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，12.620(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：20.522，29.255，55.835，66.213，112.164，113.481，114.708，121.613，129.912，130.316，147.935，149.000，156.408；MS(ESI)：m/z，303.23[M-H]^-.

實施例12

化合物5a8：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-溴苯氧基)乙硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：47％.mp：208-209℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.491-3.522(t，2H，SCH₂)，3.666(s，3H，OCH3)，3.688(s，2H，ArCH₂)，3.701(s，3H，OCH₃)，4.260-4.291(t，2H，OCH₂)，5.982(s，1H，5-H)，6.750-6800(m，2H，ArH)，6.882(s，1H，ArH)，7.112-7.132(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，8.174-8.194(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，12.717(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：28.859，42.655，55.866，67.299，112.207，113.530，115.473，121.587，126.324，130.623，132.299，141.446，147.947，149.040，163.824；MS(ESI)：m/z，477.51[M-H]^-.

實施例13

化合物5a9：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(環(huán)庚基硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：26％.mp：261-263℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：1.235-1.975(m，12H，SCHCH₁₂)，3.664(s，2H，SCH₂)，3.717(s，3H，OCH₃)，3.730(s，3H，OCH₃)，3.878(m，1H，SCH)，5.922(s，1H，5-H)，6.784-6.978(m，3H，ArH)，12.362(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：22.310，25.491，27.597，33.117，34.012，42.425，44.920，55.401，55.506，103.365，111.636，113.119，121.215，130.292，147.516，148.569，156.262，161.042；MS(ESI)：m/z，373.45[M-H]^-.

實施例14

化合物5a10：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(環(huán)己-2-烯-1-基硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：44％.mp：159-160℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.689-2.056(m，6H，CH₂)，3.743(s，2H，ArCH2)，3.865(s，3H，OCH₃)，3.875(s，3H，OCH₃)，4.624(s，1H，CH)，5.717-5.893(m，2H，CH)，5.983(s，1H，5-H)，6.778-6.810(m，3H，ArH)，13.068(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：19.592，24.796，28.994，41.658，43.654，55.833，55.978，107.886，111.345，112.643，121.587，125.411，129.672，131.897，147.978，148.975，160.783，165.690，168.443；MS(ESI)：m/z，357.38[M-H]^-.

實施例15

化合物5a11：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-硝基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：57％.mp：160-161℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.799(s，2H，ArCH₂)，3852(s，3H，OCH₃)，3.892(s，3H，OCH₃)，4.737(s，2H，SCH₂)，6.048(s，1H，5-H)，6.756-6.840(m，3H，ArH)，7.321-7.407(m，3H，ArH)，8.041-8.034(d，1H，ArH)，13.084(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：31.362，43.462，55.909，55.988，108.514，111.378，112.465，121.723，125.123，128.686，129.629，132.520，133.373，133.493，148.008，149.098，160.137，165.538，167.953；MS(ESI)：m/z，412.42[M-H]^-.

實施例16

化合物5a12：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3-氯芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：66％.mp：161-162℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.081(s，2H，ArCH₂)，3850(s，3H，OCH₃)，3.889(s，3H，OCH₃)，4.361(s，2H，SCH₂)，6.004(s，1H，5-H)，6.757-6.848(m，3H，ArH)，7.147-7239(m，3H，ArH)，7.358(s，1H，ArH)，13.021(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：33.933，43.539，55.859，55.956，108.415，111.376，112.501，121.638，127.287，127.759，129.329，129.748，134.203，138.735，148.058，149.067，159.082，165.551，168.350；MS(ESI)：m/z，401.34[M-H]^-.

實施例17

化合物5a13：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3-甲氧基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：54％.mp：181℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.784(s，3H，OCH₃)，3.797(s，2H，ArCH₂)，3848(s，3H，OCH₃)，3.887(s，3H，OCH₃)，4.399(s，2H，SCH₂)，5.962(s，1H，5-H)，6.773-6.899(m，6H，ArH)，7.155-7.194(m，1H，ArH)，13.049(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl3)δ：34.592，43.573，55.206，55.837，55.953，108.227，11.344，112.518，113.137，114.727，121.627，129.558，137.872，148.025，149.041，159.683，160.356，165.569，168.361；MS(ESI)：m/z，397.50[M-H]^-.

實施例18

化合物5b1：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-硝基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：45％.mp：223-224℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：4.178(s，2H，ArCH₂)，5.871(s，2H，SCH₂)，6.159(s，1H，5-H)，7.214-7.235(d，2H，o-ArH，J＝8.4Hz)，7.372-7.409(t，1H，ArH)，7.506-7.543(t，1H，ArH)，7.29-7.850(d，1H，ArH)，7.827-7.847(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，8.042-8.063(d，1H，ArH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.743，55.346，111.250，119.612.123.666，124.527，128.016，130.222，133.901，145.640，146.382，146.808；MS(ESI)：m/z，393.18[M-H]^-.

實施例19

化合物5b2：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-氰基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：36％.mp：221-222℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：4.121(s，2H，ArCH₂)，5.868(s，2H，SCH₂)，6.148(s，1H，5-H)，7.146-7.186(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.383-7.421(t，1H，ArH)，7.514-7.559(m，3H，ArH)，7.834-7.855(d，1H，ArH)，8.068-8.-8.089(d，1H，ArH)，12.757(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：33.058，51.547，110.232，111.257，119.137，119.668，124.537，128.018，130.024，132.495，133.921，144.149，145.644；MS(ESI)：m/z，373.19[M-H]^-.

實施例20

化合物5b3：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-硝基苯氧基)乙硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：44％.mp：217-218℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.155(t，2H，ArCH₂)，3.805(t，2H，OCH₂)，5.863(s，2H，SCH₂)，6.101(s，1H，5-H)，6.962-6.984(d，2H，o-ArH，J＝8.8Hz)，7.375-7.413(t，1H，ArH)，7.536-7.575(t，1H，ArH)，7.877-7.898(d，1H，ArH)，8.035-8.056(d，1H，ArH)，8.203-8.225(d，2H，m-ArH，J＝8.8Hz)，12.851(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.020，51.381，66.740，111.384，115.386，119.618，124.495，126.335，128.002，134.073，141.462，145.518，163.657；MS(ESI)：m/z，423.23[M-H]^-.

實施例21

化合物5b4：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-碘芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：36％.mp：202-204℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.990(s，2H，ArCH₂)，5.867(s，2H，SCH₂)，6.124(s，1H，5-H)，6.747-6.766(d，2H，o-ArH，J＝7.6Hz)，7.436-7.549(m，4H，ArH)，7.859-7.880(d，1H，ArH)，8.077-8.-8.098(d，1H，ArH)，12.822(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.957，51.601，93.520，111.347，119.635，124.543，128.013，131.439，133.955，137.389，145.657，170.797；MS(ESI)：m/z，474.34[M-H]^-.

實施例22

化合物5b5：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-三氟芐基硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：43％.mp：178-180℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：4.133(s，2H，ArCH₂)，5.880(s，2H，SCH₂)，6.162(s，1H，5-H)，7.159-7.179(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.421-7.550(m，4H，ArH)， 7.850-7.871(d，1H，ArH)，8.056-8.078(d，1H，ArH)，12.817(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.835，51.590，111.296，119.621，124.521，125.402，125.437，127.994，133.936，145.669，170.786；MS(ESI)：m/z，416.27[M-H]^-.

實施例23

化合物5b6：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(3，5-二甲氧基芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：9％.mp：111-112℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.774(s，6H，OCH₃)，4.186(s，2H，ArCH₂)，5.682(s，2H，SCH₂)，5.742(s，1H，5-H)，6.368(s，1H，ArH)，6.428(s，2H，ArH)，7.325-7.363(t，1H，ArH)，7.488-7.524(t，1H，ArH)，7.810-7.831(d，1H，ArH)，7.990-8.011(d，1H，ArH)，13.113(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：35.136，51.930，55.366，99.722，107.136，107.431，109.423，120.256，124.198，127.878，137.591，146.079，160.914，161.499，162.266，164.671；MS(ESI)：m/z，408.30[M-H]^-.

實施例24

化合物5b7：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-甲基苯氧基)乙硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：37％.mp：176℃.¹H NMR(400 MHz，DMSO)δ：2.227(s，3H，PhCH₃)，3.106(t，2H，SCH₂)，3.608(t，2H，OCH₂)，5.847(s，2H，ArCH₂)，6.072(s，1H，5-H)，6.628-6.648(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.061-7.081(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，7.403-7.440(t，1H，ArH)，7.541-7.579(t，1H，ArH)，7.875-7.896(d，1H，ArH)，8.066-8.-8.086(d，1H，ArH)，12.795(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSOδ：20.515，29.718，51.429，111.414，114.635，119.612，124.482，127.612，129.914，130.261，134.107，145.579，156.310；MS(ESI)：m/z，392.23[M-H]^-.

實施例25

化合物5b8：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-溴苯氧基)乙硫基)嘧啶-4(3H)-酮

Yield：36％.mp：182-183℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.094-3.123(t，2H，ArCH₂)，3.617-3.645(t，2H，OCH₂)，5.854(s，2H，SCH₂)，6.079(s，1H，5-H)，6.718-6.740(d，2H，o-ArH，J＝8.8Hz)，7.437-7.578(m，4H，ArH)，7.875-7.896(d，1H，ArH)，8.061-8.082(d，1H，ArH)，12.840(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.360，51.399，111.415，112.657，117.071，119.622，124.051，128.000，132.598，134.077，145.543，157.691；MS(ESI)：m/z，458.20[M-H]^-.

實施例26

化合物6a1：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-硝基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

將70mg(0.169mmol)6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-碘芐硫基)嘧啶-4(3H)-酮(5a1)，42mg(0.186mmol)NIS加入到1mL的DMF中，冰浴攪拌過夜，加冰水使產(chǎn)物析出，抽濾，得白色固體52mg。

Yield：57％.mp：264-266℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3682(s，3H，OCH₃)，3.709(s，3H，OCH₃)，4.031(s，2H，ArCH₂)，4.410(s，2H，SCH₂)，6.707-6.727(d，1H，ArH)，6.826-6.846(d，1H，ArH)，6.938(s，1H，ArH)，7.420-7.441(d，2H，o-ArH，J＝8.4Hz)，7.984-8.005(d，2H，m-ArH，J＝8.4Hz)，12.964(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：33.076，46.167，55.871，112.232，113.565，121.286，123.712，130.181，130.749，146.690，146.828，148.103，149.029；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₂₀H₁₇N₃O₅SI[M-H]^-：537.9934，found537.9938.

實施例27

化合物6a2：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-氰基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：47％.mp：241-242℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.688(s，3H，OCH₃)，3.723(s，3H，OCH₃)，4.028(s，2H，ArCH₂)，4.381(s，2H，SCH₂)，6.709-6.729(d，1H，ArH)，6.842-6.863(d.1H，ArH)，6.937-6.941(d，1H，ArH)，7.367-7.388(d，2H，o-ArH，J＝8.4Hz)，7.604-7.624(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，13.024(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：33.429，55.913，55.980，110.277，112.402，113.627，119.167，121.338，130.114，130.256，132.550，144.295，148.141，149.067；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₂₁H₁₇N₃O₃SI[M-H]^-：518.0035，found518.0034.

實施例28

化合物6a3：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-硝基苯氧基)乙硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：40％.mp：210-212℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.457-3.489(t，2H，SCH₂)，3.649(s，3H，OCH₃)，3.697(s，3H，OCH₃)，3.998(s，2H，ArCH₂)，4.176-4.208(t，2H，OCH₂)，6.746-6.793(m，2H，ArH)，6.903-6.931(m，2H，ArH)，7.050-7.073(d，2H，o-ArH，J＝9.2Hz)，8.151-8.174(d，2H，m-ArH，J＝9.2Hz)，13.053(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.985，46.148，55.632，67.083，112.180，113.364，115.407，121.181，126.293，130.120，141.459，148.048，148.975，163.755，179.849；MS(ESI)：m/z，568.26[M-H]^-.

實施例29

化合物6a4：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-碘芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：42％.mp：207-208℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.702(s，3H，OCH₃)，3.743(s，3H，OCH₃)，4.046(s，2H，ArCH₂)，4.271(s，2H，SCH₂)，6.736-6.761(m，1H，ArH)，6.865-6.885(d，1H，ArH)，6.955-7.006(m，3H，ArH)，7.511-7.531(d，2H，ArH，J＝8Hz)，13.008(s，1H，NH)；¹³CNMR(100MHz，DMSO)δ：33.300，56.019，93.593，112.416，113.598，121.352，130.120，131.659，137.481，138.139，148.136，149.063；MS(ESI)：m/z，619.28[M-H]^-.

實施例30

化合物6a5：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(4-三氟甲基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：43％.mp：233-234℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.683(s，3H，OCH₃)，3.704(s，3H，OCH₃)，4.055(s，2H，ArCH₂)，4.389(s，2H，SCH₂)，6.741-6.962(m，3H，ArH)，7.376-7.396(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.492-7.512(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，13.057(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)；δ：33.135，46.202，55.834，112.270，113.540，121.319，125.473，125.510，130.215，143.361，148.112，149.044；MS(ESI)：m/z,561.38[M-H]^-.

實施例31

化合物6a6：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3，5-二甲氧基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：43％.mp：163-164℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.686-3.718(m，12H，OCH₃)，4.032-4.057(d，2H，ArCH₂)，4.316-4.474(s，2H，SCH₂)，6.396(s，1H，ArH)，6.499-6.534(m，2H，ArH)，6.826-6.993(d，3H，ArH)，13.021(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：34.371，55.587，55.966，82.252，99.552，107.379，112.379，113.429，121.231，129.931，139.800，148.148，149.035，159.441，160.920，161.073；MS(ESI)：m/z，553.61[M-H]^-.

實施例32

化合物6a7：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-甲基苯氧基)乙硫基)-5碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：57％.mp：187-188℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：2.215(s，3H，PhCH₃)，3.414-3.446(t，2H，SCH₂)，3.663(s，3H，OCH₃)，3.692(s，3H，OCH₃)，3.993(t，4H，OCH₂；ArCH₂)，6.745-6.786(m，4H，ArH)，7.066-7.086(d，1H，ArH)，7.046-7.066(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，13.054(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：20.026，29.150，55.350，55.542，111.692，112.833，114.185，120.764，129.451，129.808，147.570，148.451，155.877；MS(ESI)：m/z，537.61[M-H]^-.

實施例33

化合物6a8：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-(4-溴苯氧基)乙硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：66％.mp：210-212℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.457-3.489(t，2H，SCH2)，3.647(s，3H，OCH₃)，3.697(s，3H，OCH₃)，3.996(s，2H，ArCH₂)，4.176-4.208(t，2H，OCH₂)，6.764(s，2H，ArH)，6.929(s，1H，ArH)，7.044-7.063(d，2H，o-ArH，J＝7.6Hz)，8.147-8.167(d，2H，m-ArH，J＝8Hz)，13.050(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.230，46.182，55.834，67.073，112.165，113.355，115.390，121.181，126.280，130.105，141.452，148.049，148.975，163.746；MS(ESI)：m/z，603.41[M-H]^-.

實施例34

化合物6a9：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(環(huán)庚基硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：32％.mp：223-224℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.274-1.855(m，12H，SCHCH₁₂)，3.700(m，1H，SCH)，3.841(s，3H，OCH₃)，3.873(s，3H，OCH₃)，4.326(s，2H，SCH₂)，6.764-7.256(m，3H，ArH)，11.752(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDC13)δ：25.774，28.099，34.598，46.808，51.629，55.992，56.132，89.652，113.311，118.737，123.176，133.625，148.325，149.223，160.633，161.785，167.893；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₂₀H₂₄N₂O₃SI[M-H]^-：499.0552，found499.0564.

實施例35

化合物6a10：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(環(huán)己-2-烯-1-基硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：38％.mp：194-195℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.671-2.067(m，6H，CH₂)，3.875(s，6H，OCH₃)，4.062-4.117(m，2H，ArCH₂)，4.522(s，1H，CH)，5.712-5.902(m，2H，CH)，6.801-6.951(m，3H，ArH)，11.965(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：19.597，24.794，28.989，42.397，46.662，55.936，84.792，111.150，112.661，121.534，125.076，129.703，132.379，147.996，148.799，160.241，162.075，168.874；MS(ESI)：m/z，483.13[M-H]^-.

實施例36

化合物6a11：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(2-硝基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：34％.mp：194-195℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.716(s，3H，OCH₃)，3.726(s，3H， OCH₃)，4.073(s，2H，ArCH₂)，4.609(s，2H，SCH₂)，6.813-6.988(m，3H，ArH)，7.222-7.240(d，1H，ArH)，7.435-7.527(m，2H，ArH)，8.023-8.043(d，1H，ArH)，13.039(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：30.654，45.709，55.415，55.512，111.926，113.049，120.962，124.944，129.020，129.765，132.123，133.125，147.661，147.740，148.638；MS(ESI)：m/z，538.17[M-H]^-.

實施例37

化合物6a12：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3-氯芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：67％.mp：175-176℃.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ：3.841(s，3H，OCH₃)，3.869(s，3H，OCH₃)，4.148(s，2H，ArCH₂)，4.318(s，2H，SCH₂)，6.797-6.927(m，3H，ArH)，7.079-7283(m，4H，ArH)，12.563(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：34.172，46.681，55.899，55.963，85.585，111.280，112.537，121.415，127.138，127.853，129.068，129.807，134.302，138.540，148.063，148.887，159.415，162.374，168.914；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₂₀H₁₇N₂O₃SClI[M-H]^-：526.9693，found526.9697.

實施例38

化合物6a13：6-(3，4-二甲氧基芐基)-2-(3-甲氧基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：53％.mp：169-170℃.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：3.777(s，3H，OCH₃)，3.836(s，3H，OCH₃)，3.869(s，3H，OCH₃)，4.148(s，2H，SCH₂)，4.371(s，2H，ArCH₂)，6.789-6.956(m，6H，ArH)，7.169(t，1H，ArH)，12.347(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：35.022，46.656，55.222，55.833，55.894，85.309，111.229，112.522，113.143，114.682，121.345，121.430，129.650，137.622，148.039，148.867，159.753，159.952，162.283，168.894；MS(ESI)：m/z，523.43[M-H]^-.

實施例39

化合物6b1：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-硝基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：49％.mp：238-239℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.763(s，2H，ArCH₂)，6.014(s，2H，SCH₂)，6.927-6.947(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.302-7.339(t，1H，ArH)，7.471-7.509(t，1H，ArH)，7.791-7.182(d，1H，ArH)，7.872-7.897(d，2H，ArH)，7.954-7.975(d，1H，ArH)，13.276(s，1H，ArH)； ¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.395，55.430，111.365，119.506，123.634，124.316，127.915，129.816，134.399，145.498，145.605，146.817；MS(ESI)：m/z，519.24[M-H]^-.

實施例40

化合物6b2：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-氰基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：33％.mp：186-187℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.686(s，2H，ArCH₂)，6.008(s，2H，SCH₂)，6.858-6.878(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.322-7.360(t，1H，ArH)，7.496-7.515(m，3H，ArH)，7.794-7.815(d，1H，ArH)，7.976-8.-7.997(d，1H，ArH)，13.247(s，1H，NH)，¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.697，55.405，110.269，111.376，119.099，119.534，124.341，127.929，129.614，132.481，134.341，143.446，145.501；MS(ESI)：m/z，499.14[M-H]^-.

實施例41

化合物6b3：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-硝基苯氧基)乙硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：38％.mp：236-237℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：2.670(t，2H，ArCH₂)，3.617-3.645(t，2H，OCH₂)，5.959(s，2H，SCH₂)，6.870-6.892(d，2H，o-ArH，J＝8.8Hz)，7.383(t，1H，ArH)，7.551(t，1H，ArH)，7.842-7.863(d，1H，ArH)，8.029-8.050(d，1H，ArH)，8.192-8.214(d，2H，m-ArH，J＝8.8Hz)，13.219(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.097，55.303，111.526，115.306，119.565，124.332，126.298，127.890，134.573，141.041，145.443，163.628；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₁₉H₁₄N₆O₄SI[M-H]^-：548.9842，found548.9845.

實施例42

化合物6b4：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-碘芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：37％.mp：205-206℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.523(s，2H，ArCH₂)，6.020(s，2H，SCH₂)，6.468-6.488(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.398-7.547(m，4H，ArH)，7.282-7.849(d，1H，ArH)，8.011-8.032(d，1H，ArH)，13.210(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.171，54.939，93.157，110.999，119.042，123.877，127.430，130.576，133.996，136.879，145.038，160.905；MS(ESI)：m/z，600.27[M-H]^-.

實施例43

化合物6b5：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(4-三氟芐基硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：42％.mp：231-233℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.689(s，2H，ArCH₂)，6.031(s，2H，SCH₂)，6.872-6.892(d，2H，o-ArH，J＝8Hz)，7.383-7.524(m，4H，ArH)，7.824-7.845(d，1H，ArH)，7.981-8.002(d，1H，ArH)，13.289(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：32.001，53.935，110.941，119.009，123.843，124.903，124.940，127.414，128.970，133.963，142.011，145.027；MS(ESI)：m/z，542.20[M-H]^-.

實施例44

化合物6b6：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(3，5-二甲氧基芐硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：48％.mp：243-244℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：3.394(s，2H，ArCH₂)，3.684(s，6H，OCH₃)，5.999(s，2H，SCH₂)，6.090(s，2H，ArH)，6.323(s，1H，ArH)，7.325-7.363(t，1H，ArH)，7.488-7.524(t，1H，ArH)，7.810-7.831(d，1H，ArH)，7.990-8.011(d，1H，ArH)，13.113(s，1H，NH)； ¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：34.073，51.586，55.622，99.672，107.223，111.360，119.667，124.494，127.954，133.955，145.626，160.861；HRMS(ESI)：m/z，calcd.for C₂₀H₁₇N₅O₃SI[M-H]^-：534.0097.found534.0099.

實施例45

化合物6b7：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-甲基苯氧基)乙硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：40％.mp：199-200℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：2.226(s，3H，PhCH₃)，2.605(t，2H，SCH₂)，3.121(t，2H，OCH₂)，5.984(s，2H，ArCH₂)，6.518-6.537(d，2H，o-ArH，J＝7.6Hz)，7.050-7.069(d，2H，m-ArH，J＝7.6Hz)，7.403-7.439(t，H，ArH)，7.545-7.582(t，1H，ArH)，7.857-7.877(d，1H，ArH)，8.069-8.089(d，1H，ArH)，13.091(s，1H，NH)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：20.519，29.928，55.214，111.533，114.531，119.569，124.353，127.916，130.218，134.660，145.507，156.232；MS(ESI)：m/z，518.30[M-H]^-.

實施例46

化合物6b8：6-(苯并[d]三氮唑-1-基)甲基-2-(2-(4-溴苯氧基)乙硫基)-5-碘代嘧啶-4(3H)-酮

Yield：33％.mp：308℃.¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：2.619(t，2H，ArCH2)，3.151(t，2H，OCH2)，5.989(s，2H，SCH₂)，6.602-6.623(d，2H，o-ArH，J＝8.4Hz)，7.395-7.450(m，3H，ArH)，7.545-7.583(t，1H，ArH)，7.851-7.872(d，1H，ArH)，8.059-8.080(s，1H，ArH)，13.201(s，1H，NH)； ¹³C NMR(100MHz，DMSO)δ：29.598，55.192，111.493，112.671，116.999，119.591，124.369，127945，132.553，134.628，145.487，157.623；MS(ESI)：m/z，584.17[M-H]^-.

實施例47

體外抗HBV活性測定實驗

一、實驗材料

1.1HepAD38細(xì)胞

HepAD38細(xì)胞系是人肝細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，其HBV DNA產(chǎn)量比Hep2.2.15細(xì)胞高11倍，所需培養(yǎng)時間只有Hep2.2.15細(xì)胞的一半，適用于抗HBV藥物篩選。

1.2試劑

DMEM培養(yǎng)液，胎牛血清，胰蛋白酶，二甲基亞砜(DMSO).

1.3主要儀器

二氧化碳培養(yǎng)箱，細(xì)胞培養(yǎng)瓶，24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，倒置顯微鏡，低溫高速離心，電子分析天平，生物安全柜，酶聯(lián)儀

二、實驗方法

細(xì)胞上清中HBV DNA含量實驗

化合物用含DMSO的培養(yǎng)液配制成各濃度藥液，分別加入24孔培養(yǎng)板中，每孔0.5mL，每濃度3孔。24小時后換入含藥培養(yǎng)基，2天后換入相同的含藥培養(yǎng)基，24h后收集細(xì)胞上清。收集到的細(xì)胞上清在100℃下煮沸10min，12000rpm離心10min。最后用熒光定量PCR檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBV DNA的表達(dá)量，通過GraphPad Prism分析得抑制率以及EC₅₀。

細(xì)胞毒性實驗

將細(xì)胞鋪至96孔板，24h后藥物樣品母液，用HepAD38細(xì)胞培養(yǎng)基配置成200μM、100μM、50μM共3個濃度，加入到96孔板細(xì)胞培養(yǎng)板，每濃度6孔，用含有0.4％DMSO的培養(yǎng)基作為對照組。每2天換同濃度藥液并設(shè)無藥細(xì)胞對照組，共培養(yǎng)7天。用MTT法 檢測細(xì)胞存活率。

三、實驗結(jié)果

^a10μM濃度下的抑制率；^b數(shù)據(jù)是至少兩次實驗的平均值

表一化合物對HepAD38細(xì)胞培養(yǎng)上清DNA的抑制率

^a半最大效應(yīng)濃度；^b引起50％細(xì)胞死亡的濃度；^c治療指數(shù)，CC₅₀/EC₅₀.

表二化合物EC₅₀與CC₅₀值

四、結(jié)果分析

分析實驗結(jié)果，可以看出2，5，6位取代嘧啶酮衍生物具有良好的抗乙肝病毒活性，且其毒性較低，具有較高的治療指數(shù)，是一類新的非核苷類乙肝病毒抑制劑。