一種親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用。所述的親和溫敏聚合物為PNIPAAm-co-AAm-Cu，所述的雙水相體系是PNIPAAm-co-AAm-Cu和葡聚糖4萬雙水相體系。本發(fā)明的雙水相體系純化BSA后，上相中得到的BSA蛋白的特征譜帶顏色加深，而其雜質(zhì)蛋白明顯變淡，而下相中幾乎不含有BSA分子的譜帶，表明該親和溫敏雙水相體系能有效的用于BSA的富集和分離。
【專利說明】一種親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及高分子聚合物領(lǐng)域，尤其涉及一種親和溫敏聚合物在雙水相體系中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 聚（N-異丙基丙烯酰胺）簡稱PNIPAAm，分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
【權(quán)利要求】
1. 一種親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：所述的親和溫敏聚合物 為PNIPAAm-c〇-AAm-Cu，所述的雙水相體系是PNIPAAm-c〇-AAm-Cu和葡聚糖4萬雙水相體 系。
2. 如權(quán)利要求1所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：所述的 親和溫敏聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu的制備方法如下： (1) 將N-異丙基丙烯酰胺和丙烯酸溶解在去離子水中，N-異丙基丙烯酰胺和丙烯酸的 重量體積比為l:50-150g/iil，N-異丙基丙烯酰胺和去離子水的重量體積比為l:20-30g/ ml，然后真空脫氣lOmin，再加入N，N，N'，N'_四甲基乙二胺和過硫酸銨溶液，N，N，N'，N'-四 甲基乙二胺與N-異丙基丙烯酰胺的體積重量比為40-80:1 yl/g，過硫酸銨溶液與N-異丙 基丙烯酰胺的體積重量比為〇. 1-1: lml/g，通氮?dú)夤呐?5min后密封，于50°C恒溫水浴中反 應(yīng)2h ; (2) 反應(yīng)結(jié)束后，將上層清液輕輕倒出，加入去離子水將沉淀溶解，待沉淀完全溶解后， 置于50°C恒溫水浴中30min，離心收集聚合物沉淀，重復(fù)上述步驟3次，以去除未反應(yīng)的單 體，得到 PNIPAAm-co-AAm聚合物，在真空干燥箱中將所得的聚合物在50°C干燥； ⑶然后將聚合物PNIPAAm-co-AAm加入到2. Og/L硫酸銅溶液中，PNIPAAm-co-AAm與 硫酸銅溶液的重量體積比為〇. 1-0. 5: 2g/ml，調(diào)節(jié)pH至4. 5,在室溫下進(jìn)行銅離子的吸附實(shí) 驗(yàn)lh，待吸附平衡后置于50°C的恒溫水浴中，保溫10min至金屬螯合溫敏聚合物受熱凝集 沉淀，8000rpm離心5min使之完全沉淀得到親和溫敏金屬螯合聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu。
3. 如權(quán)利要求2所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（1) 中，N-異丙基丙烯酰胺和丙烯酸的重量體積比為l:100g/iil ;N-異丙基丙烯酰胺和去離子 水的重量體積比為1:25g/ml ;N，N，N'，N' -四甲基乙二胺與N-異丙基丙烯酰胺的體積重量 比為60:1 ii 1/g ;過硫酸銨溶液與N-異丙基丙烯酰胺的體積重量比為0. 6: lml/g,過硫酸銨 溶液的濃度為10% w/v。
4. 如權(quán)利要求2所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（3) 中，PNIPAAm-co-AAm與硫酸銅溶液的重量體積比為0. 2:2g/ml。
5. 如權(quán)利要求1所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：所述的 雙水相體系對BSA的分離純化方法如下： (1) 將成相物質(zhì)親和溫敏聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu配制成濃度為5. 50% w/w的濃溶 液，葡聚糖4萬配制成濃度為20% w/w的濃溶液； (2) 將BSA配制成15. 0mg/ml的溶液； (3) 將步驟（1)配制的PNIPAAm-co-AAm-Cu溶液和葡聚糖4萬混合得到雙水相體系，使 雙水相體系中葡聚糖4萬的濃度為6. 0% w/w，親和溫敏聚合物的濃度為3. 5 % w/w，振蕩混 合均勻。 (4) 往雙水相體系中加入步驟（2)配制的BSA溶液，并用0. 05mpl/L Tris-HCl緩沖液 調(diào)節(jié)體系的pH值=6,然后加蒸餾水，在旋渦混合器上混合lmin，室溫下靜置30min，體系分 成兩相，使BSA在兩相中進(jìn)行分配，讀取上下兩相的體積，計(jì)算相體積比R(R = Vt/Vb); (5) 分別取一定量的上下兩相，分別測定兩相中BSA的濃度，親和溫敏聚合物相置于 40°C水浴中保溫10min，使親和溫敏聚合物受熱凝聚至完全沉淀，8000rpm離心5min棄上 清，將所得沉淀用pH 6. 0的0. 05mol/L Tris-HCl緩沖溶液洗滌數(shù)次，除去未吸附的蛋白 質(zhì)，最后用2ml，pH 4. 0的0. 05mol/L Tris-HCl緩沖溶液在4°C下將溫敏聚合物充分溶解， 在40°C水浴下保溫lOmin，使親和溫敏聚合物完全沉淀，8000rpm離心5min取上層清液，分 別測定洗脫前后溶液中蛋白質(zhì)的含量。
6. 如權(quán)利要求5所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（2) 中，BSA 溶液用 pH6. 0,0. 05mol/L Tris-HCl 緩沖液配制。
7. 如權(quán)利要求5所述的親和溫敏聚合物在雙水相體系中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（5) 中，Tris-HCl 緩沖溶液中含有 0? 20mol/L NaCl 和 0? 050mol/L EDTA。
【文檔編號】C08F220/06GK104474737SQ201410746578
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】李樹白, 馬迪, 張啟蒙, 薛敘明, 陸敏, 姚晨, 趙昊昱, 劉英莉, 聶華麗 申請人:常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院