利用動物肺提取肝素鈉粗品的制備工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用豬牛肺提取肝素鈉粗品的制備工藝。步驟如下：將動物肺均化成漿液—漿液保溫酶解—酶解液過濾收集濾液—對濾液進行離子交換吸附處理—樹脂的洗滌與洗脫—澄清過濾—干燥，得肝素鈉粗品。本發(fā)明在提取方法上，采用酶解、樹脂提純，與傳統(tǒng)的鹽解法相比，產品效價能提高18％-23％，產率提高14％以上；原料上采用價格低廉且易得的豬、牛肺，可以使成本得以大大地降低，適合規(guī)模生產；而且與鹽解法相比，減少了環(huán)境污染。
【專利說明】利用動物肺提取肝素鈉粗品的制備工藝
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術領域】，具體地說涉及一種利用動物臟器提取肝素鈉的制備工藝。
【背景技術】
[0002]肝素鈉是一種具有抗凝血功效，防止腫瘤病轉移和擴散的貴重藥品。在臨床上用于治療腎臟病形成的尿毒以及配合治療暴發(fā)性流腦敗血癥，腎炎等。同時，肝素鈉在降血脂和免疫等方面也有較好的作用，而且隨著對其逐漸深入了解，其醫(yī)療用途日益擴大，市場供不應求。目前，我國通常利用豬小腸，提取新鮮腸黏膜液，運用傳統(tǒng)的鹽解工藝生產肝素鈉，這種制備方法由于原材料匱乏和技術上的局限，很難進行規(guī)模性生產；在生產過程中環(huán)境污染嚴重；而且生產成本高，產品產率低，效價低，成本低，不可能滿足市場的大量需求。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:一種利用動物肺提取肝素鈉粗品的制備工藝，其特征在于:動物肺均化成漿液-漿液保溫酶解-酶解液過濾、收集濾液-對濾液進行離子交換吸附處理-樹脂的洗滌與洗脫-澄清過濾-干燥得肝素鈉粗品。
[0004]所述的動物肺均化成漿液是指清洗好的動物肺絞碎磨成漿狀物，而后在充分攪拌下加入水混勻得漿液，水的加入量以漿狀物的1-1.3倍為最佳。
[0005]所述漿液保溫酶解是指調整漿液的PH值為9-11時，加入胃酶或胰酶酶解劑，攪拌，升溫至35°C -43°C，繼續(xù)攪拌，并保持漿液的PH值7.5_9，溫度37°C -40°C下酶解
3.0-5.0小時；然后升溫至45°C -52°C，保持漿液PH值7.5_9，補加少量酶解劑，繼續(xù)酶解
4.5-5.5小時得酶解液。在整個保溫酶解過程中，對漿液PH值得調整采用稀堿液如氫氧化鈉進行調整；酶解劑采用豬胰漿，其加入量按照漿液重量的1-1.5%為宜，補加量按照漿液重量的0.3-0.6%為宜。
[0006]所述的酶解液過濾收集濾液是指調整酶解液的PH值為5.0-5.5，升溫至750C -80°C，攪拌加入氯化鈉混勻，再升溫至80°C -95°C，保溫1_2小時，停止攪拌，趨熱過濾，收集濾液；待濾液冷卻至40°C -45°C，調整濾液的PH值的10-11，再次過濾，收集濾液并調整其PH值為8-8.5，待用。在本步驟中對酶解液與濾液的酸堿度的調整采用稀酸和稀堿如稀鹽酸和稀氫氧化鈉溶液；氯化鈉的加入量按照酶解液重量的4.5-5%加入為宜；趨熱過濾采用60目孔徑的尼龍網布；再次過濾采用80目孔徑的尼龍網布。
[0007]所述離子交換吸附處理是指冷卻上述濾液，去除油脂薄片層，然后升溫至450C -50°C，攪拌狀態(tài)下加入肝素吸附專用樹脂，用以吸附濾液中的有效成分，經攪拌吸附后，靜置過濾；新樹脂的用量一般為濾液3.5-4%，攪拌吸附處理7-8小時。
[0008]所述樹脂的洗滌與洗脫是指用水漂洗應經吸附有效肝素成分的肝素吸附專用樹月旨，濾干；再用樹脂體積0.8-0.85的倍鹽度為4.5-5玻美度氯化鈉溶液洗滌，濾干；繼續(xù)用樹脂體積0.5-0.6倍鹽度為23-24玻美度氯化鈉溶液，并加入氯化鈉，加入量與樹枝量比為0.8-1:7.5 ;然后對洗滌好的肝素吸附專用樹脂采用氯化鈉溶液作為洗脫液進行洗脫操作；洗脫結束后，濾干樹脂，將洗脫液予以合并，并用80目孔徑尼龍網布過濾，收集洗脫液。
[0009]所述洗脫操作是指洗脫液鹽度為18-20玻美度，溫度為30-35°C時，第一次用樹脂體積的0.8-0.85倍的洗脫液洗脫3-3.5小時，第二次用樹脂體積的0.5-0.6倍的洗脫液洗脫3-3.5小時。
[0010]所述的澄清過濾是指調整洗脫液的PH值為11-12，攪拌均勻后，靜置澄清，取出上層清液，對下部沉淀進行抽濾，合并清液與濾液，調節(jié)PH值為5-5.5，加入3-3.5倍的80-85%乙醇澄清劑，靜置至上層液澄清為止；抽吸出上層清液，收集沉淀物并抽濾至干。
[0011]所述干燥是指將抽濾至干的肝素鈉沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器內，定時置換干燥劑如五氧化二磷不再吸水為止，搗碎成顆粒狀，即得肝素鈉粗品。
[0012]已知動物器臟中含的肝素是由己醛酸，艾杜糖醛酸，葡萄糖醛酸與含磺酸的己胺糖的基因交替組織成的多粘糖，可以認為是多聚體類似物和多聚體同系物的混合物，分子量通常在6000-20000，在一定條件下可通過酶解成負離子，再用陰離子樹脂提取，因此本發(fā)明在提取方法上，采用酶解、樹脂提純，實踐證明本發(fā)明生產的肝素鈉色澤較白，收率穩(wěn)定，平均每個豬牛肺可提取0.8-1.2g肝素鈉，產品質量也好，平均效價均在90-120之間，與傳統(tǒng)的鹽解法相比，產品效價能提高15% _20%，產率提高10%以上；本發(fā)明在原料上采用價格低廉且易得的豬、牛肺，可以使成本得以大大地降低，適合規(guī)模生產；本發(fā)明制備過程中，無有毒有害氣體產生，雖然少量廢渣及少量酸堿洗水產生，但廢渣經干燥后，可加工成飼料出售，酸堿廢水可以中和后再排放，與鹽解法相比，減少了環(huán)境污染。
具體實施例
[0013]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明:
[0014]實施例1:`
[0015]首先將1000g新鮮豬肺用清水仔細清洗，除去內外污物和外部皮質脂肪后，將其絞碎在磨成漿狀物，而后再充分攪拌下加入1000g水混勻得漿液。
[0016]漿液在充分攪拌下，用稀氫氧化鈉溶液精細調節(jié)其PH值為10時，加入豬胰漿20g，攪拌均勻后，緩慢升溫至40°C，繼續(xù)攪拌，并保持漿液的PH值8-8.5，溫度35 V _42°C下酶解4小時；然后升溫至47°C -50°C，保持漿液PH值8-8.5，補加IOg豬胰漿，繼續(xù)酶解5小時得酶解液。在整個保溫酶解過程中，如酶解液的PH值復查有所下降時，就應及時用稀氫氧化鈉仔細地調整。
[0017]上述保溫酶解過程完畢后，用稀鹽酸調整其PH值5-6.0，然后升溫至80°C，在充分攪拌下，加入100g氯化鈉，使之混合均勻后，再升溫到90°C，保溫I小時，停止攪拌，用60目孔徑的尼龍網布趨熱過濾，除去雜質，收集濾液；待濾液冷卻至40°C，用稀氫氧化鈉調整其PH值11，用80目孔徑的尼龍網布精細過濾除去殘渣收集濾液，用稀鹽酸將濾液回調其PH值8-8.5范圍內。
[0018]冷卻上述濾液，仔細撈除浮于液面的油脂薄片層，然后控制升溫到45°C，停止加熱，在攪拌狀態(tài)下加入80g肝素吸附專用樹脂，用以吸附濾液中的有效成分，經攪拌吸附處理8小時后，靜置過濾。
[0019]經離子交換吸附處理后的肝素吸附專用樹脂用水漂洗，濾干；再用70g4.5-5玻美度氯化鈉洗滌一次，濾干；繼續(xù)用240g23-24玻美度氯化鈉溶液,并加入14g氯化鈉；然后對洗滌好的肝素吸附專用樹脂采用氯化鈉濃溶液作為洗脫液進行洗脫操作，洗脫液鹽度為18-20玻美度，溫度為30-35°C，第一次用1500g洗脫液洗脫3.5小時，第二次用1200g洗脫液洗脫3小時；洗脫結束后，濾干樹脂，將濾液予以合并，并用80目孔徑尼龍網布過濾，收集洗脫液。
[0020]調整上述洗脫液的PH值為11-12，攪拌均勻后，靜置澄清，仔細抽吸出上層清液，對下部沉淀盡量抽濾至干，合并清澈與濾液，調節(jié)PH值為5-5.5，加入3600g80% -85%乙醇，靜置至上層液澄清為止；抽吸出上層清液，收集沉淀物并抽濾至干。
[0021]將抽濾至干的肝素鈉沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入五氧化二磷干燥器內，定時置換干燥劑至五氧化二磷不再吸水為止，搗碎成顆粒狀，即得肝素鈉粗品。
[0022]實施例2:
[0023]稱取豬肺lOOOg，水3000g，氫氧化鈉30g，豬胰漿17g，氯化鈉350g，鹽酸15g，肝素專用吸附樹脂93g，乙醇3000g，參照實施例1所述的步驟制備肝素鈉粗品2.0g,其效價每豪克90單位。
[0024]實施例3:
[0025]稱取牛肺lOOOg，水3000g，氫氧化鈉40g，豬胰漿30g，氯化鈉410g，鹽酸10g，肝素專用吸附樹脂80g，乙醇3600g，參照實施例1所述的步驟制備肝素鈉粗品2.4g，其效價每豪克107單位。
[0026]在上述實施例中，肝素專用吸附樹脂均采用杭州塘棲鎮(zhèn)爭光生物制品有限公司生產的爭光牌肝素吸附專用樹脂`。
【權利要求】
1.一種利用動物肺提取肝素鈉粗品的制備工藝，其特征在于:動物肺均化成漿液-漿液保溫酶解-酶解液過濾、收集濾液-對濾液進行離子交換吸附處理-樹脂的洗滌與洗脫-澄清過濾-干燥得肝素鈉粗品。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述的動物肺均化成漿液，是指將清洗好的動物肺絞碎磨成漿狀物，爾后在充分攪拌下加入水混勻得漿液，水的加入量以漿狀物的1-1.5倍為最佳。
3.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述漿液保溫酶解，是指調整漿液的PH值為9-11時，加入胃酶或胰酶酶解劑，攪拌，升溫至35 V -43 V，繼續(xù)攪拌，并保持漿液的PH值為7.5-9，溫度為35°C _42°C下酶解30_5小時；然后升溫至45°C _52°C，保持漿液PH值7.5-9，補加少量酶解劑，繼續(xù)酶解4.5-5.5小時得酶解液；在整個保溫酶解過程中，對漿液PH值的調節(jié)采用稀堿液如氫氧化鈉進行調節(jié)；酶解劑采用豬胰漿，其加入量按照漿液重量的1-1.5%為宜，補加量按照漿液重量的0.3-0.6%為宜。
4.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述的酶解液過濾、收集濾液，是指調整酶解液的PH值為5.0-5.5，升溫至75°C -80°C,80°C _95°C攪拌加入氯化鈉混勻，再升溫至90°C -95°C，保溫1-2.5小時，停止攪拌，趨熱過濾，收集濾液并調整其PH值為7.5-8.5，待用。
5.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:在酶解液過濾收集濾液步驟中對酶解液與濾液的酸堿度的調整采用稀酸和稀堿如稀鹽酸和稀氫氧化鈉溶液；氯化鈉的加入量按照酶解液重量的4-5.5%加入為宜；趨熱過濾采用60目孔徑的尼龍網布；再次過濾采用80目孔徑的尼龍網布。
6.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述離子交換吸附處理是指冷卻上述濾液，去除油脂薄片層，然后升溫至40°C _55°C，攪拌狀態(tài)下加入肝素吸附專用樹脂，用以吸附濾液中的有效成分，經攪拌吸附后，靜置過濾；新樹脂的用量一般為濾液3.5-4%,攪拌吸附處理7-8小時。
7.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述樹脂的洗滌與洗脫是指用水漂洗應經吸附有效肝素成分的肝素吸附專用樹脂，濾干；繼續(xù)用樹脂體積0.5-0.6倍鹽度為22-24玻美度氯化鈉溶液，并加入氯化鈉，加入量與樹枝量比為0.8-1:8.0 ;然后對洗滌好的肝素吸附專用樹脂采用氯化鈉溶液作為洗脫液進行洗脫操作；洗脫結束后，濾干樹脂，將洗脫液予以合并，并用80目孔徑尼龍網布過濾，收集洗脫液。
8.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述洗脫操作是指洗脫液濃度為17-20玻美度，溫度為30°C -36°C時，第一次用樹脂體積的0.8-0.85倍的洗脫液洗脫3-3.5小時，第二次用樹脂體積的0.5-0.6倍的洗脫液洗脫3-3.5小時。
9.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述的澄清過濾是指調整洗脫液的PH值為10.5-12，攪拌均勻后，靜置澄清，取出上層清液，對下部沉淀進行抽濾，合并清液與濾液，調節(jié)PH值為5-6.5，加入3-3.5倍的80-88%乙醇澄清劑，靜置至上層液澄清為止；抽吸出上層清液，收集沉淀物并抽濾至干。
10.根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于:所述干燥是指將抽濾至干的肝素鈉沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器內，定時置換干燥劑如五氧化二磷不再吸水為止，搗碎成顆粒狀，即得肝素鈉粗品。
【文檔編號】C08B37/10GK103755836SQ201310632474
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月25日 優(yōu)先權日:2013年11月25日
【發(fā)明者】劉乃山, 尚明彩, 遲培升, 夏襯來 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司