堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法提取硫酸軟骨素鈉的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種硫酸軟骨素鈉的提取方法。硫酸軟骨素鈉是自豬鼻骨等動(dòng)物軟骨中提取制得的一種黏多糖類(lèi)物質(zhì)。傳統(tǒng)的工藝方法采取堿解、酶解、鹽解及離子交換樹(shù)脂或其組合的方法進(jìn)行提取，提取液中仍含有大量蛋白質(zhì)和核酸等雜質(zhì)，給進(jìn)一步純化帶來(lái)一定的難題。本發(fā)明采用堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法去除硫酸軟骨素鈉提取液中殘留的雜質(zhì)，工藝設(shè)計(jì)合理，去除效率高，縮短了后續(xù)精制工時(shí)，提高了產(chǎn)品收率，藥品符合《中國(guó)藥典2010版》標(biāo)準(zhǔn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法提取硫酸軟骨素鈉
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明所屬領(lǐng)域?yàn)樯扑庮I(lǐng)域，涉及一種硫酸軟骨素鈉的提取方法，特別是一種硫酸軟骨素鈉生產(chǎn)工藝方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]硫酸軟骨素鈉是從動(dòng)物軟骨組織中提取制備的一種酸性粘多糖類(lèi)物質(zhì)，屬糖胺聚糖。臨床主要用于調(diào)血脂藥、關(guān)節(jié)炎、滴眼液等。硫酸軟骨素鈉是目前市場(chǎng)上較為重要的一種生化藥物，被收載在《中國(guó)藥典(2010版)》中。近年來(lái)，硫酸軟骨素鈉作為保健品消費(fèi)的趨勢(shì)逐漸升溫，使其應(yīng)用領(lǐng)域越來(lái)越廣泛。
[0003]傳統(tǒng)的提取工藝方法采取堿解、酶解、鹽解及離子交換樹(shù)脂或其組合的方法進(jìn)行提取，提取效率低，操作繁瑣，提取液中仍含有大量蛋白質(zhì)和核酸等雜質(zhì)，給進(jìn)一步純化帶來(lái)一定的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的提供一種提取硫酸軟骨素鈉的方法，即堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法，可有效去除提取液中殘存的雜質(zhì)，有效簡(jiǎn)化精制工序，節(jié)約沉淀步驟中乙醇用量，可在更短的時(shí)間里生產(chǎn)出雜質(zhì)含量低、收率好的硫酸軟骨素鈉產(chǎn)品。
[0005]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)達(dá)到，依次通過(guò)以下幾個(gè)步驟來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0006](I)軟骨浸泡:將豬鼻骨干骨加入到反應(yīng)罐中用水完全浸沒(méi)，浸泡3-5小時(shí)后，放干浸泡水；
[0007](2)堿解:加入堿液，干骨重量與堿液重量的比為1: 2-1: 3，攪拌提取3-5小時(shí)后，用100目尼龍網(wǎng)過(guò)濾；
[0008](3)酶解:調(diào)節(jié)pH8_9后，升溫至45°C，加入豬源胰酶和氯化鈉，45_50°C保溫3_5小時(shí)；
[0009](4)急升溫:升溫至80_85°C，靜置15_20min，用濾袋過(guò)濾；
[0010](5)按體積比20% -30%的比例向過(guò)濾液中加入95%乙醇；
[0011](6)絮凝沉降:控制溫度40-50°C，調(diào)節(jié)pHll-12，按0.3%-0.5% (質(zhì)量/體積)比例加入絮凝沉淀劑，靜置直至分層，虹吸上清，沉淀物離心后合并母液至上清液中，棄去離心渣；
[0012](7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，即得分離純化的硫酸軟骨素鈉。
[0013]本技術(shù)方案的有益效果是:經(jīng)堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法制得的硫酸軟骨素鈉，含量在90%以上，收率> 30%。
[0014](I)本技術(shù)方案中，酶解步驟(3)中加入氯化鈉，其重量與干骨的重量比為3% _5%?？稍鰪?qiáng)酶解效果，使硫酸軟骨素鈉與蛋白等雜質(zhì)有效分離。
[0015](2)本技術(shù)方案中，堿解步驟(2)中所用堿液的濃度為l-2mol/L，可降低堿液對(duì)硫酸軟骨素鈉的破壞，提高收率。[0016](3)本技術(shù)方案中，酶解步驟(3)中加入的豬源胰酶重量與干骨的重量比為1% _2%，保溫時(shí)間為3-5小時(shí)，可減少胰酶對(duì)硫酸軟骨素鈉的破壞，提高收率。
[0017](4)本技術(shù)方案中，絮凝沉降前向?yàn)V液中加入乙醇，該乙醇濃度為95%，且與濾夜的體積比為20% -30%。這樣可增加蛋白核酸等雜質(zhì)與絮凝沉淀劑的結(jié)合，增加顆粒度，有助于沉降。
[0018](5)本技術(shù)方案中，絮凝沉淀劑選自羥基磷灰石(HAP)和十二烷基磺酸鈉(SDBS)或其混合物，可有效結(jié)合蛋白核酸等雜質(zhì)并形成沉淀物，經(jīng)離心后去除。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下實(shí)例詳細(xì)說(shuō)明了本發(fā)明:
[0020](I)軟骨浸泡:將IOOKg豬鼻骨干骨加入到反應(yīng)罐中用水完全浸沒(méi)，浸泡4小時(shí)后，放干浸泡水；
[0021](2)堿解:加入lmol/L堿液250L，攪拌提取4小時(shí)后，用100目尼龍網(wǎng)過(guò)濾；
[0022](3)酶解:調(diào)節(jié)pH8.5后，升溫至45°C，加入胰酶lKg，加入氯化鈉3Kg，45_50°C條件下保溫4小時(shí)；
[0023](4)急升溫:升溫至80°C，靜置20min后，用濾袋過(guò)濾；
[0024](5)向過(guò)濾液中加入95%乙醇80L ；
[0025](6)絮凝沉降:控制溫度45°C，調(diào)節(jié)pH= 11，加入絮凝沉淀劑1.2Kg，靜置分層后虹吸上清，沉淀物離心，合并母液至上清液中，棄去離心渣；
[0026](7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，得分離純化的硫酸軟骨素鈉32.5Kg，含量為95%，收率為32.5%。
【權(quán)利要求】
1.堿解-酶解法結(jié)合絮凝沉淀法提取硫酸軟骨素鈉，其特征是: (1)軟骨浸泡:將豬鼻骨干骨加入到反應(yīng)罐中用水完全浸沒(méi)，浸泡3-5小時(shí)后，放干浸泡水； (2)堿解:加入堿液,干骨重量與堿液重量的比為1: 2-1: 3,攪拌提取3-5小時(shí)后，用100目尼龍網(wǎng)過(guò)濾； (3)酶解:調(diào)節(jié)pH8-9后，升溫至45°C，加入豬源胰酶和氯化鈉，45-50°C保溫3-5小時(shí)； (4)急升溫:升溫至80-85°C，靜置15-20min，用濾袋過(guò)濾； (5)按體積比20%-30%的比例向過(guò)濾液中加入95%乙醇； (6)絮凝沉降:控制溫度40-50°C，調(diào)節(jié)pHll-12，按0.3%-0.5%(質(zhì)量/體積)比例加入絮凝沉淀劑，靜置直至分層，虹吸上清，沉淀物離心后合并母液至上清液中，棄去離心渣； (7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，即得分離純化的硫酸軟骨素鈉。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征為:堿解步驟中所用堿液的濃度為l_2mol/L。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征為:酶解步驟(3)中加入的氯化鈉重量與干骨的重量比為3% -5%;加入的豬源胰酶重量與干骨的重量比為1% -2%;保溫時(shí)間為3-5小時(shí)。
4.按照權(quán)利要求1所 述的方法，其特征為:絮凝沉降步驟前須向?yàn)V液中加入乙醇，該乙醇濃度為95%，且與濾夜的體積比為20% -30%。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征為:絮凝沉淀劑選自羥基磷灰石(HAP)和十二烷基磺酸鈉(SDBS)或其混合物。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征為:按照本發(fā)明方法制備的硫酸軟骨素鈉滿足中國(guó)藥典(2010年版)要求。
【文檔編號(hào)】C08B37/08GK103601815SQ201310508887
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】劉乃山, 夏襯來(lái), 遲培升, 陸玉梅 申請(qǐng)人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司