專利名稱：五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取方法，即五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法。
技術(shù)背景
在現(xiàn)有技術(shù)中，隨著制藥工業(yè)的進(jìn)步，中草藥有效成分提取工藝的發(fā)展，產(chǎn)生了很多中藥藥渣。中藥渣多被作為燃料焚燒或當(dāng)作垃圾廢棄，這不僅是對(duì)資源的極大浪費(fèi)，同時(shí)也對(duì)環(huán)境造成污染，特別是提取過(guò)程中多以乙醇作為溶劑，或者因?yàn)槿胨幮枨蟮脑?，僅提取了中藥的某一成分，剩余物中還有大量的活性成分沒(méi)有被充分提取出來(lái)，殘留在藥渣中， 其仍然具有藥用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。五味子藥渣就是其中的一種。五味子，俗稱山花椒，為木蘭科植物五味子(FructusSchisandraeChinensis)的果實(shí)。具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效。目前的研究發(fā)現(xiàn)北五味子多糖具有保肝、抗疲勞、免疫促進(jìn)、抗氧化及抗衰老和抗腫瘤的藥理作用。制藥企業(yè)在提取五味子有效成分的過(guò)程中大多采用乙醇回流的方式，將五味子中的脂溶性成分提取利用，而水溶性多糖大多殘留于藥渣中被廢棄。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以五味子藥渣為原料，工藝合理，提取率高的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，步驟如下
(1)原料處理將五味子藥渣常溫干燥或40 50°C烘干。
(2)多糖提取按每公斤五味子藥渣加水10 30公斤，在60 100°C的溫度下浸提2 6小時(shí)；沉淀再用同樣方法重復(fù)提取1 2次，合并提取液；
(3)醇沉將提取液于60°C濃縮至原體積的1/6 1/5，之后冷卻，加入3倍體積 95%的乙醇，4°C醇沉過(guò)夜，離心，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥。
(4)凍融將沉淀配成5%的糖液，過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，離心， 上清重復(fù)上述冷凍步驟2 5次；凍融可以除去多糖中的雜質(zhì)。
(5)乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，4°C沉淀2 3天，離心， 沉淀干燥；上清加乙醇至終濃度為60%，4°C沉淀2 3天，離心，沉淀干燥；
(6)除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶，比例為蛋白蛋白酶= 200 1，37°C酶解45 50小時(shí)脫蛋白，取出后濃縮至原體積，再用Sevag法(氯仿正丁醇=4 1)脫蛋白3 6次后得到多糖溶液；
(7)干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖。經(jīng)紅外光譜分析，其具有多糖的特征性吸收峰。
五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，步驟如下
(1)原料處理將五味子藥渣常溫干燥或45°C烘干；
(2)多糖提取按每公斤五味子藥渣加水30公斤，在100°C的溫度下浸提2小時(shí)； 沉淀再用同樣方法重復(fù)提取2次，合并提取液；3
(3)醇沉將提取液于60°C濃縮至原體積的1/6，之后冷卻，加入3倍體積95%的乙醇，4°C醇沉過(guò)夜，離心，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥；
(4)凍融將沉淀配成5%的糖液，過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，離心， 上清重復(fù)上述冷凍步驟4次；
(5)乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，4°C沉淀3天，離心，沉淀干燥；上清加乙醇至終濃度為60%，4°C沉淀2 3天，離心，沉淀干燥；
(6)除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶，比例為蛋白蛋白酶= 200 1，37°C酶解48小時(shí)脫蛋白，取出后濃縮至原體積，再用Sevag法脫蛋白5次后得到多糖溶液；
(7)干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖。
所述乙醇分級(jí)加入乙醇時(shí)將乙醇放入分液漏斗，盛糖液器皿放于磁力攪拌器上， 使乙醇逐滴加入。
五味子藥渣為護(hù)肝片生產(chǎn)后剩余五味子殘?jiān)?br> 所述的水為去離子水、蒸餾水、純水或含礦物離子水。
步驟(3)中離心轉(zhuǎn)速3000r/min，時(shí)間lOmin。
步驟中離心轉(zhuǎn)速7000r/min，溫度4°C，時(shí)間lOmin。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、工藝合理，注重合理利用原料，將制藥企業(yè)的廢料五味子藥渣充分利用，既避免了浪費(fèi)又有利于環(huán)境保護(hù)。2、本發(fā)明在提取的過(guò)程中，利用的最佳的提取工藝，大大的提高了提取率。3、本發(fā)明在乙醇分級(jí)過(guò)程中，采用邊攪拌邊滴加乙醇的方法， 比普通的醇沉效果好，提高多糖的得率。4、本發(fā)明利用了鏈蛋白法聯(lián)合脫蛋白， 脫除次數(shù)少，操作過(guò)程簡(jiǎn)化。
下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，步驟如下
1、原料處理五味子藥渣常溫干燥。
2、多糖提取五味子藥渣100克加水3000ml，在100°C的溫度下浸提2小時(shí)。將提取液于600C濃縮至500ml，后冷卻，加入1500ml 95 %的乙醇，4°C醇沉過(guò)夜，3000r/min離心 lOmin，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥。
3、凍融將沉淀配成5%的糖液，于冰箱中過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，7000r/min、4°C離心lOmin，上清重復(fù)上述冷凍步驟4次
4、乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，加入乙醇時(shí)將乙醇放入分液漏斗，盛糖液器皿放于磁力攪拌器上，使乙醇逐滴加入。后4°C沉淀2天，離心，沉淀用乙醇、乙醚洗滌2次，放入干燥器中干燥；上清加乙醇(方法同上)至終濃度為60%，4°C沉淀 2天，離心，沉淀干燥。
5、除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶(蛋白酶=200 1)，滴加2 滴二甲苯防腐，密封，37°C酶解48小時(shí)脫蛋白(中途換生理鹽水)，取出后濃縮至原體積，按糖液1/4加入kvag試劑充分震蕩1. 5小時(shí)，離心取上清，重復(fù)3次，即得多糖溶液。4
6、干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖9. 73g。
實(shí)施例2
五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，步驟如下
1、原料處理五味子藥渣45°C烘干。
2、多糖提取五味子藥渣10克加水300ml，在80°C的溫度下浸提4小時(shí)。將提取液于60°C濃縮至60ml，后冷卻，加入180ml 95%的乙醇，4°C醇沉過(guò)夜，3000r/min離心lOmin，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥。
3、凍融將沉淀配成5%的糖液，于冰箱中過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，7000r/min、4°C離心lOmin，上清重復(fù)上述冷凍步驟3次
4、乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，加入乙醇時(shí)將乙醇放入分液漏斗，盛糖液器皿放于磁力攪拌器上，使乙醇逐滴加入。后4°C沉淀3天，離心，沉淀用乙醇、乙醚洗滌3次，放入干燥器中干燥；上清加乙醇(方法同上)至終濃度為60%，4°C沉淀 3天，離心，沉淀干燥。
5、除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶(蛋白酶=200 1)，滴加3 滴二甲苯防腐，密封，37°C酶解50小時(shí)脫蛋白(中途換生理鹽水)，取出后濃縮至原體積，按糖液1/4加入kvag試劑充分震蕩2小時(shí)，離心取上清，重復(fù)4次，即得多糖溶液。
6、干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖0. 760g。
權(quán)利要求
1.五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于步驟如下(1)原料處理將五味子藥渣常溫干燥或40 50°C烘干；(2)多糖提取按每公斤五味子藥渣加水10 30公斤，在60 100°C的溫度下浸提 2 6小時(shí)；沉淀再用同樣方法重復(fù)提取1 2次，合并提取液；(3)醇沉將提取液于50 60°C濃縮至原體積的1/6 1/5，之后冷卻，加入2 3倍體積95%的乙醇，4°C醇沉過(guò)夜，離心，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥；(4)凍融將沉淀配成5%的糖液，過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，離心，上清重復(fù)上述冷凍步驟2 5次；(5)乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，4°C沉淀2 3天，離心，沉淀干燥；上清加乙醇至終濃度為60%，4°C沉淀2 3天，離心，沉淀干燥；(6)除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶，比例為蛋白蛋白酶=200 1， 37°C酶解45 50小時(shí)脫蛋白，取出后濃縮至原體積，再用Sevag法脫蛋白3 6次后得到多糖溶液；(7)干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于乙醇分級(jí)加入乙醇時(shí)將乙醇放入分液漏斗，盛糖液器皿放于磁力攪拌器上，使乙醇逐滴加入。
3.如權(quán)利要求1所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于五味子藥渣為護(hù)肝片生產(chǎn)后剩余五味子殘?jiān)?br> 4.如權(quán)利要求1所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于所述的水為去離子水、蒸餾水、純水或含礦物離子水。
5.如權(quán)利要求1所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于步驟(3) 中離心轉(zhuǎn)速3000r/min，時(shí)間lOmin。
6.如權(quán)利要求1所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于步驟(4) 中離心轉(zhuǎn)速7000r/min，溫度4°C，時(shí)間lOmin。
7.如權(quán)利要求1-6任一所述的五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法，其特征在于(1)原料處理將五味子藥渣常溫干燥或45°C烘干；(2)多糖提取按每公斤五味子藥渣加水30公斤，在100°C的溫度下浸提2小時(shí)；沉淀再用同樣方法重復(fù)提取2次，合并提取液；(3)醇沉將提取液于60°C濃縮至原體積的1/6，之后冷卻，加入3倍體積95%的乙醇， 4°C醇沉過(guò)夜，離心，沉淀用無(wú)水乙醇和乙醚洗滌后干燥；(4)凍融將沉淀配成5%的糖液，過(guò)夜凍實(shí)，常溫融化，當(dāng)為冰水混合物時(shí)，離心，上清重復(fù)上述冷凍步驟4次；(5)乙醇分級(jí)在凍融后糖液內(nèi)加乙醇至終濃度為30%，4°C沉淀3天，離心，沉淀干燥； 上清加乙醇至終濃度為60%，4°C沉淀2 3天，離心，沉淀干燥；(6)除蛋白將沉淀配成5%的糖液，加入鏈蛋白酶，比例為蛋白蛋白酶=200 1， 37°C酶解48小時(shí)脫蛋白，取出后濃縮至原體積，再用Sevag法脫蛋白5次后得到多糖溶液；(7)干燥將多糖溶液冷凍干燥過(guò)夜，得到五味子藥渣多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥提取方法，即五味子藥渣中活性成分多糖的制備方法。它包括藥渣的干燥；熱水浸提得多糖提取液；多糖提取液濃縮、醇沉、離心得沉淀；沉淀用水溶解、凍融、離心取清液、乙醇分級(jí)、離心得沉淀；沉淀用水溶解，用鏈蛋白酶酶解、Sevag法脫蛋白得多糖液；冷凍干燥得產(chǎn)品。本發(fā)明提供了一條從五味子藥渣中提取活性成分多糖的方法，特別是開辟了一條利用五味子藥渣再利用的新途徑，節(jié)約資源，避免污染，為五味子藥渣的再利用提供技術(shù)支撐。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102492050SQ201110390820
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者何曉燕, 朱俊義, 秦佳梅, 郭志欣, 郭璟瑞, 顧地周, 魏書文 申請(qǐng)人:通化師范學(xué)院