專利名稱：一種巴戟天多糖的提取方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的提取物，更具體的說，涉及一種巴戟天多糖的提取方法， 屬于中藥技術領域。
背景技術：
巴戟天是一種雙子葉植物茜草科，主要分布于廣東、廣西、福建、海南等地區(qū)的熱帶和亞熱帶地區(qū)，是一種具有多種藥理活性的中藥材，且具有較高的藥用價值，被喻為我國著名的“四大南藥”之一。巴戟天作為一種中藥，尤其是其具有增加機體免疫功能、提高造血功能、抗衰老、抗抑郁、抗腫瘤、調節(jié)神經系統(tǒng)和內分泌系統(tǒng)等多種功效，也越來越多的受到科研工作者的研究。巴戟天中藥材中含有大量的巴戟天多糖，是巴戟天具有藥理活性的主要成分之一，尤其以巴戟天根莖中含有的巴戟天多糖最高，一般巴戟天根莖中巴戟天多糖的含量約占41%。多糖是由許多單糖分子，通過苷鍵連接而成的多于20個糖基的糖鏈。而巴戟天多糖是由不同的多糖組成的一種組合物，這些多糖主要由果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖等糖單元通過苷鍵形成的多糖?，F(xiàn)有技術中有通過對巴戟天根莖進行提取得到巴戟天多糖，但是由于對巴戟天多糖提取的方法研究較少，且提取出的巴戟天多糖的產率和純度也較差。如中國專利申請(公開號CN 101357949A)公開了一種巴戟天多糖的提取方法及在卷煙中的應用，其具體公開的巴戟天多糖的提取方法，包括以下步驟將巴戟天烘干，之后粉碎至10 100目；取巴戟天粉末加入水中，在50 100°C條件下，進行浸提；之后過濾、 濃縮濾液；將濃縮液加入乙醇中，保持乙醇體積分數(shù)為80%，靜置沉析、過濾后即得巴戟天粗多糖；將巴戟天粗多糖放入水中進行復溶，再加入體積為粗多糖溶液0. 1 1倍的sevag 試劑，振蕩、靜置，分層，去除下層稠狀和sevag和蛋白質的混合物；再用氨水將PH值調節(jié)至9 10，慢慢加入質量比為30%的雙氧水，直至溶液變成淡黃色；進行脫色、濃縮，再加入體積分數(shù)為95 100 %的乙醇溶液，保持乙醇體積分數(shù)為80% (V/V)，靜置，沉析M 48 小時，過濾得巴戟天多糖。該方法雖然能夠提取出巴戟天多糖，但是該方法工藝步驟比較復雜，提取得到的巴戟天多糖所含的雜質較多，去蛋白效果差，且得到的巴戟天多糖的產率和純度都較低，不利于實際生產應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有技術中存在的缺陷，提供一種工藝簡單，去蛋白效果佳，且產率和純度都較高的巴戟天多糖的提取方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案得以實現(xiàn)的，一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于該方法包括以下步驟A、預處理選取巴戟天根莖進行洗滌、剔除雜質、干燥處理后，粉碎，過40 80目篩，得到巴戟天粉未；
B、脫脂、脫色將上述得到的巴戟天粉未加入到氯仿/甲醇混合溶劑中，升溫至回流，進行脫脂、脫色處理，過濾，收集濾餅；C、提取將步驟B中得到的濾餅加入到醇溶劑中，升溫至回流，回流反應2 6小時，過濾，將得到的固體物再加入到水中，升溫至50°C 70°C，攪拌，提取0. 5 2. 0小時， 過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；D、濃縮、干燥將步驟C中得到的濾液升溫至60°C 80°C，進行減壓濃縮，得濃縮液，將所得的濃縮液與乙醇溶液混合，進行醇沉處理，過濾，用有機溶劑進行洗滌，得巴戟天粗多糖；E、分離、純化將巴戟天粗多糖加入到正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中進行脫蛋白處理后，用水進行溶解后加入到層析柱中，再用0. 05mol/L 0. 15mol/L的NaCl溶液進行洗脫，收集流出液，減壓濃縮、醇沉、過濾、干燥，得巴戟天多糖。本發(fā)明的上述一種巴戟天多糖的提取方法，步驟A中所述的巴戟天經過粉碎后， 過篩，更有利于后續(xù)的提取，使巴戟天根莖中巴戟天多糖更容易被提取出來，也能提高提取效果，也有利于后續(xù)的脫脂、脫蛋白等步驟中的去脂和去蛋白過程，從而也提高了提取的巴戟天多糖的純度和含量。作為優(yōu)選，上述步驟B中所述的氯仿/甲醇混合溶劑與巴戟天粉未的重量比為氯仿/甲醇混合溶劑巴戟天粉未為4 15 1 ；所述的氯仿/甲醇混合溶劑的氯仿與甲醇的體積比為氯仿甲醇=2 4 1。采用極性的甲醇溶劑和非極性的氯仿溶劑的混合溶劑主要是作為一種脫脂劑，能夠使巴戟天中結合態(tài)的脂類物質游離出來，同時還能與磷脂等極性較大的脂類物質的親和性增大，達到有效去除巴戟天中的脂類物質的目的，從而使脫脂更徹底，也有利于提高巴戟天多糖的純度?，F(xiàn)有技術中是先采用水進行提取，這樣子操作不僅將巴戟天多糖提取出來，同時也將大部分的脂類物質也提取出來，與巴戟天多糖混合在一起，在后繼處理過程中不易除去，影響最終產品的純度，而且色澤也不好。而本發(fā)明利用巴戟天多糖不溶于有機溶劑的原理，同時選用氯仿/甲醇混合溶劑進行提取，能夠有效的提取出巴戟天根莖中游離態(tài)的脂類物質，又不影響巴戟天根莖中巴戟天多糖的含量， 脫脂的效果好，而且采用本發(fā)明的氯仿/甲醇混合溶劑在脫脂過程中也能夠有效的脫去巴戟天根莖中的其它雜質和雜色素，從而也起到了脫色的作用，有利于提高巴戟天多糖的外觀和色澤。在該優(yōu)選范圍內，能更有效的脫除脂類物質，且脫色效果也較好，如果加入的混合溶劑過少，則脫脂不徹底，脫色也達不到要求；如果加入的過多，則增加了生產成本，不利于實際生產。作為優(yōu)選，上述步驟C中所述的醇溶劑為75% 85%乙醇水溶液，采用乙醇水溶液先進行回流處理，能有效的去除巴戟天中所含的小分子糖等一些溶于乙醇水溶液的雜質，進一步的保證提取出來的巴戟天多糖的含量和質量。上述步驟C中采用水對固體物進行提取，因為巴戟天多糖能溶于水，從而能較徹底的提取出巴戟天多糖，同時也能去除一些不溶于水的雜質，有利于提高了巴戟天多糖的產率。作為優(yōu)選，所述的水為蒸餾水，蒸餾水中雜質含量少，更有利于保證提取出來的巴戟天多糖的產品質量。上述步驟C中所述的剩余的殘渣可再進行提取，具體的過程為將剩余的殘渣加入到水中，升溫至50°C 70°C，攪拌，提取0. 5 2. 0小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；重復提取2 3次，合并收集的濾液。對剩余的殘渣進行多次提取，能夠提高巴戟天多糖的收率，使巴戟天根莖中的巴戟天多糖能較徹底的被提取出來，但是，提取的次數(shù)如果太多，則容易將其他的一些雜質提取出來，從而會影響到產品的質量；另外，提取的次數(shù)如果太多，也不利于實際經濟效益。作為優(yōu)選，上述步驟D中所述的醇沉處理的具體步驟為往所得的濃縮液中加入 90% 100%的乙醇溶液，所述的乙醇溶液與濃縮液的體積比為3 8 1 ；攪拌10 30 分鐘，低溫靜置他 1 后，過濾，得巴戟天粗多糖。本發(fā)明采用乙醇溶液進行醇沉處理， 能更進一步的去除一些溶于醇的殘留雜質。同時在醇沉過程中進行攪拌又減少了巴戟天多糖的損失和乙醇的消耗量，提高經濟效益。且本發(fā)明采用低溫靜置，有利于加快沉降的速度和沉淀物的析出，從而縮短了工藝時間，同時也防止了乙醇的揮發(fā)損耗，同樣提高了經濟效益。
作為優(yōu)選，上述步驟D中所述的醇沉處理的具體步驟中所述的低溫靜置的溫度為-10V 10°C。在本發(fā)明的溫度范圍內，醇沉的效果最好，所需的靜置時間較短，乙醇的揮發(fā)損耗低。同時，在本發(fā)明的溫度的范圍內，巴戟天的多糖能夠較穩(wěn)定的存在，不易分解， 有利于保證所提取的巴戟天多糖的質量。本發(fā)明的上述一種巴戟天多糖的提取方法，其中步驟E中所述的正丁醇/三氯乙酸混合溶劑，采用該混合溶劑，相當于組成一個酸性體系的條件，調節(jié)體系的PH值，有利于與蛋白質形成不溶性鹽沉淀，同時又能夠作為蛋白質變性劑使蛋白質構象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團，使之聚集沉淀，從而有效的去除巴戟天粗多糖中所含的蛋白質雜質。作為優(yōu)選，其中步驟E中所述的正丁醇/三氯乙酸混合溶劑與巴戟天粗多糖的重量比為0.5 1.5 1，在該范圍內，能有效的去除蛋白質，效果更好。作為更進一步的優(yōu)選，所述的正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為10 30 1。三氯乙酸加入的量如果過多，刺激性會比較大，不利于實際操作，且容易使提取的巴戟天多糖色澤不佳，影響產品的質量；如果加入的太少，則不利于使體系中的蛋白變性改變結構，從而也影響去蛋白的效果。作為優(yōu)選，在上述步驟E中所述的脫蛋白之后先采用透析法處理，再用水進行溶解加入到層析柱中。透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質，以達到分離、純化目的的一種方法。本發(fā)明脫蛋白之后，先采用透析法處理，能更進一步的除去巴戟天多糖中的小分子物質，而巴戟天多糖是一種大分子物質，不能經過半透膜，從而達到更有效去除雜質的目的，提高產品純度的同時又不影響巴戟天多糖的收率。作為優(yōu)選，本發(fā)明的上述一種巴戟天多糖的提取方法，其中步驟E中所述的層析柱為葡聚糖凝膠柱，采用葡聚糖凝膠柱，能更有效的分離出巴戟天多糖，還能有效的阻止未處理盡的蛋白分子，使得到的巴戟天多糖純度更高。作為更進一步的優(yōu)選，所述的葡聚糖凝膠柱為kphadex G-100葡聚糖凝膠柱、S印hadex G-75葡聚糖凝膠柱或kphadex G-150葡聚糖凝膠柱中的一種。采用kphadex G-100葡聚糖凝膠柱、S^hadex G-75葡聚糖凝膠柱和kphadex G-150葡聚糖凝膠柱進行洗脫的效果比采用其它葡聚糖凝膠柱效果都更好。作為優(yōu)選，上述步驟E中所述的洗脫的速度為0. 5mL/min 1. 5mL/min。由于巴戟天多糖中各組分的分子量有所不同，在凝膠柱上受到的阻滯作用不同，在洗脫過程中，洗脫出巴戟天多糖的速度也有所不同。而在本發(fā)明的上述范圍內，能有效的洗脫出巴戟天多糖， 且在洗脫過程中流出液的分離效果明顯，更有利于提高巴戟天多糖的純度。作為優(yōu)選，上述步驟E中所述的收集流出液采用苯酚一硫酸法跟蹤，對流出液進行檢測，收集多糖含量大于30%的流出液。步驟E中所述的醇沉可以按照步驟D所述的醇沉處理方法相類似。綜上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明一種巴戟天多糖的提取方法，具有去蛋白效果好，脫脂、脫色效果好，且得到的巴戟天多糖的純度高，藥用效果好，且提取的巴戟天多糖產率高。2、本發(fā)明一種巴戟天多糖的提取方法，所需的生產設備均為本領域普通的設備， 且工藝過程簡單，制造成本低，所需的生產周期短，具有較好的經濟價值。
具體實施例方式下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步的具體說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。實施例1選取巴戟天根莖先進行洗滌、剔除雜質后，在60°C的條件下烘干，然后采用粉碎機進行粉碎至60目，得到巴戟天粉末，稱取IOOg巴戟天粉未加入到400g氯仿/甲醇混合溶劑(氯仿甲醇的體積比為2 1)，升溫至在60°C的條件下，回流2小時，進行脫脂、脫色處理，回流結束后，過濾，除去濾液，收集濾餅，將收集的濾餅加入到體積分數(shù)為80%的乙醇水溶液中，升溫至80°C的條件下回流2小時，回流結束后，過濾，除去濾液，將得到的固體物再加入到IOOmL蒸餾水中，升溫至60°C，攪拌提取1小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提取；將收集的濾液升溫至60°C 70°C的條件下，控制真空度為0. 09MPa以上，進行減壓蒸餾濃縮，濃縮至約30mL濃縮液，再往濃縮液中加入150mL體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌，降溫至0°C，再攪拌30分鐘，然后，低溫靜置1 后，所述的低溫靜置的溫度為-5V 5°C，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天粗多糖濕品，放入真空干燥機中，控制溫度在 50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥5小時，得巴戟天粗多糖干品，產率為22. 2%。將上述巴戟天粗多糖干品加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中，所述的巴戟天粗多糖干品與正丁醇/三氯乙酸混合溶劑的重量比為1 1，所述的正丁醇/三氯乙酸混合劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為20 1，然后升溫至60°C條件下，回流2小時，進行脫蛋白處理后，再通過透析法去除其中的一些小分子雜質，然后將得到的巴戟天粗多糖加入到蒸餾水中使完全溶解后，再加入到kphadex G-100葡聚糖凝膠柱中，用0. lmol/L的NaCl溶液進行洗脫，洗脫速度為lmL/min，采用苯酚-硫酸法進行跟蹤，對流出液進行檢測，收集多糖含量大于30%的流出液，然后將得到的流出液加入到另外反應容器中，加熱，升溫至50°C ^°C，真空度在0. 09MPa以上，減壓濃縮，濃縮至原流出液體積的1/5，得濃縮液，再往濃縮液中加入相當于濃縮液體積5倍量的體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌下，降溫至0°C， 控制溫度在0°C 5°C的條件下，攪拌30分鐘，然后靜置12h，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天多糖濕品，將得到的巴戟天多糖濕品放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥8小時，得巴戟天多糖成品，經測定分析，巴戟天多糖的純度為90%。實施例2選取巴戟天根莖先進行洗滌、剔除雜質后，在60°C的條件下烘干，然后采用粉碎機進行粉碎至40目，得到巴戟天粉末，稱取IOOg巴戟天粉未加入到1500g氯仿/甲醇混合溶劑(氯仿甲醇的體積比為4 1)，升溫至在60°C的條件下，回流2小時，進行脫脂、脫色處理，回流結束后，過濾，除去濾液，收集濾餅，將收集的濾餅加入到體積分數(shù)為85%的乙醇水溶液中，升溫至80°C的條件下回流2小時，回流結束后，過濾，除去濾液，將得到的固體物再加入到IOOmL蒸餾水中，升溫至50°C，攪拌提取2小時，過濾，收集濾液，將剩余的殘渣加入到水中，升溫至50°C，攪拌，提取2小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；重復提取2次，合并收集的濾液；將收集的濾液升溫至70°C 80°C的條件下，控制真空度為 0. 09MPa以上，進行減壓蒸餾濃縮，濃縮至約30mL濃縮液，再往濃縮液中加入MOmL體積分數(shù)為90%的乙醇水溶液，攪拌，降溫至0°C，再攪拌15分鐘，然后，低溫靜置他后，所述的低溫靜置的溫度為-10°C 0°C，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天粗多糖濕品，放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥5小時，得巴戟天粗多糖干品，產率為23. 2%。將上述巴戟天粗多糖干品加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中，所述的巴戟天粗多糖干品與正丁醇/三氯乙酸混合溶劑的重量比為1 0.5，所述的正丁醇/三氯乙酸混合劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為10 1，然后升溫至60°C條件下，回流2小時，進行脫蛋白處理后，再通過透析法去除其中的一些小分子雜質，然后將得到的巴戟天粗多糖加入到蒸餾水中使完全溶解后，再加入到kphadex G-75葡聚糖凝膠柱中，用0. 05mol/L的NaCl 溶液進行洗脫，洗脫速度為1. 5mL/min,采用苯酚-硫酸法進行跟蹤，對流出液進行檢測，收集多糖含量大于30%的流出液，然后將得到的流出液加入到另一反應容器中，加熱，升溫至50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，減壓濃縮，濃縮至原流出液體積的1/5，得濃縮液， 再往濃縮液中加入相當于濃縮液體積8倍量的體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌下，降溫至0°C，控制溫度在5°C 10°C的條件下，攪拌30分鐘，然后靜置15h，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天多糖濕品，將得到的巴戟天多糖濕品放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 550C，真空度在0. 09MPa以上，干燥8小時，得巴戟天多糖成品，經測定分析，巴戟天多糖的純度為85%。實施例3選取巴戟天根莖先進行洗滌、剔除雜質后，在60°C的條件下烘干，然后采用粉碎機進行粉碎至80目，得到巴戟天粉末，稱取IOOg巴戟天粉未加入到400g氯仿/甲醇混合溶劑(氯仿甲醇的體積比為3 1)，升溫至在60°C的條件下，回流2小時，進行脫脂、脫色處理，回流結束后，過濾，除去濾液，收集濾餅，將收集的濾餅加入到體積分數(shù)為75%的乙醇水溶液中，升溫至80°C的條件下回流2小時，回流結束后，過濾，除去濾液，將得到的固體物再加入到IOOmL蒸餾水中，升溫至70°C，攪拌提取0. 5小時，過濾，收集濾液，將剩余的殘渣加入到水中，升溫至70°C，攪拌，提取0. 5小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提取； 重復提取3次，合并收集的濾液；將收集的濾液升溫至60°C 70°C的條件下，控制真空度為0. 09MPa以上，進行減壓蒸餾濃縮，濃縮至約30mL濃縮液，再往濃縮液中加入90mL體積分數(shù)為100%的乙醇水溶液，攪拌，降溫至0°C，再攪拌30分鐘，然后，低溫靜置IOh后，所述的低溫靜置的溫度為-5V 0°C，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天粗多糖濕品，放入真空干燥機中，控制溫度在500C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥5小時，得巴戟天粗多糖干品，產率為23. 6%。將上述巴戟天粗多糖干品加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中，所述的巴戟天粗多糖干品與正丁醇/三氯乙酸混合溶劑的重量比為1 1.5，所述的正丁醇/三氯乙酸混合劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為30 1，然后升溫至60°C條件下，回流2小時，進行脫蛋白處理后，再通過透析法去除其中的一些小分子雜質，然后將得到的巴戟天粗多糖加入到蒸餾水中使完全溶解后，再加入到kphadex G-150葡聚糖凝膠柱中，用0. 15mol/L的NaCl 溶液進行洗脫，洗脫速度為0. 5mL/min,采用苯酚-硫酸法進行跟蹤，對流出液進行檢測， 收集多糖含量大于30%的流出液，然后將得到的流出液加入到另外反應容器中，加熱，升溫至50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，減壓濃縮，濃縮至原流出液體積的1/5，得濃縮液， 再往濃縮液中加入相當于濃縮液體積3倍量的體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌下，降溫至0°C，控制溫度在_5°C 0°C的條件下，攪拌30分鐘，然后靜置10h，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天多糖濕品，將得到的巴戟天多糖濕品放入真空干燥機中，控制溫度在50°C ^°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥8小時，得巴戟天多糖成品，經測定分析，巴戟天多糖的純度為88%。實施例4選取巴戟天根莖先進行洗滌、剔除雜質后，在60°C的條件下烘干，然后采用粉碎機進行粉碎至50目，得到巴戟天粉末，稱取IOOg巴戟天粉未加入到800g氯仿/甲醇混合溶劑(氯仿甲醇的體積比為2 1)，升溫至在60°C的條件下，回流2小時，進行脫脂、脫色處理，回流結束后，過濾，除去濾液，收集濾餅，將收集的濾餅加入到體積分數(shù)為85%的乙醇水溶液中，升溫至80°C的條件下回流2小時，回流結束后，過濾，除去濾液，將得到的固體物再加入到IOOmL蒸餾水中，升溫至60°C，攪拌提取1小時，過濾，收集濾液，將剩余的殘渣加入到水中，升溫至70°C，攪拌，提取1小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提?。恢貜吞崛?次，合并收集的濾液；將收集的濾液升溫至65°C 70°C的條件下，控制真空度為 0. 09MPa以上，進行減壓蒸餾濃縮，濃縮至約30mL濃縮液，再往濃縮液中加入180mL體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌，降溫至0°C，再攪拌30分鐘，然后，低溫靜置Ilh后，所述的低溫靜置的溫度為-5V 5°C，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天粗多糖濕品，放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥5小時，得巴戟天粗多糖干品，產率為24. 1% ο將上述巴戟天粗多糖干品加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中，所述的巴戟天粗多糖干品與正丁醇/三氯乙酸混合溶劑的重量比為1 0.8，所述的正丁醇/三氯乙酸混合劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為25 1，然后升溫至60°C條件下，回流2小時，進行脫蛋白處理后，再通過透析法去除其中的一些小分子雜質，然后將得到的巴戟天粗多糖加入到蒸餾水中使完全溶解后，再加入到kphadex G-100葡聚糖凝膠柱中，用0. 08mol/L的NaCl 溶液進行洗脫，洗脫速度為lmL/min，采用苯酚-硫酸法進行跟蹤，對流出液進行檢測，收集多糖含量大于30%的流出液，然后將得到的流出液加入到另外反應容器中，加熱，升溫至50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，減壓濃縮，濃縮至原流出液體積的1/5，得濃縮液， 再往濃縮液中加入相當于濃縮液體積5倍量的體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌下，降溫至0°C，控制溫度在-10°C _5°C的條件下，攪拌30分鐘，然后靜置9h，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天多糖濕品，將得到的巴戟天多糖濕品放入真空干燥機中，控制溫度在50°C ^°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥8小時，得巴戟天多糖成品，經測定分析，巴戟天多糖的純度為87%。實施例5選取巴戟天根莖先進行洗滌、剔除雜質后，在60°C的條件下烘干，然后采用粉碎機進行粉碎至60目，得到巴戟天粉末，稱取IOOg巴戟天粉未加入到500g氯仿/甲醇混合溶劑(氯仿甲醇的體積比為2 1)，升溫至在60°C的條件下，回流2小時，進行脫脂、脫色處理，回流結束后，過濾，除去濾液，收集濾餅，將收集的濾餅加入到體積分數(shù)為80%的乙醇水溶液中，升溫至80°C的條件下回流2小時，回流結束后，過濾，除去濾液，將得到的固體物再加入到IOOmL蒸餾水中，升溫至60°C，攪拌提取1小時，過濾，收集濾液，將剩余的殘渣加入到水中，升溫至60°C，攪拌，提取1小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；重復提取2次，合并收集的濾液；將收集的濾液升溫至60°C 70°C的條件下，控制真空度為 0. 09MPa以上，進行減壓蒸餾濃縮，濃縮至約30mL濃縮液，再往濃縮液中加入150mL體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌，降溫至0°C，再攪拌30分鐘，然后，低溫靜置1 后，所述的低溫靜置的溫度為-5V 5°C，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天粗多糖濕品，放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥5小時，得巴戟天粗多糖干品，產率為25. 2%。將上述巴戟天粗多糖干品加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中，所述的巴戟天粗多糖干品與正丁醇/三氯乙酸混合溶劑的重量比為1 1，所述的正丁醇/三氯乙酸混合劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為20 1，然后升溫至60°C條件下，回流2小時，進行脫蛋白處理后，再通過透析法去除其中的一些小分子雜質，然后將得到的巴戟天粗多糖加入到蒸餾水中使完全溶解后，再加入到kphadex G-100葡聚糖凝膠柱中，用0. lmol/L的NaCl溶液進行洗脫，洗脫速度為lmL/min，采用苯酚-硫酸法進行跟蹤，對流出液進行檢測，收集多糖含量大于30%的流出液，然后將得到的流出液加入到另外反應容器中，加熱，升溫至50°C ^°C，真空度在0. 09MPa以上，減壓濃縮，濃縮至原流出液體積的1/5，得濃縮液，再往濃縮液中加入相當于濃縮液體積5倍量的體積分數(shù)為95%的乙醇水溶液，攪拌下，降溫至0°C， 控制溫度在_3°C ;TC的條件下，攪拌30分鐘，然后靜置12h，靜置結束后，采用離心機進行離心，轉速為2000rpm/min，離心，再依次用無水乙醇、丙酮進行洗滌，離心甩干后，得巴戟天多糖濕品，將得到的巴戟天多糖濕品放入真空干燥機中，控制溫度在50°C 55°C，真空度在0. 09MPa以上，干燥8小時，得巴戟天多糖成品，經測定分析，巴戟天多糖的純度為90%。本發(fā)明中所描述的具體實施例僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術領域的技術人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權利要求書所定義的范圍。
盡管對本發(fā)明已作出了詳細的說明并引證了一些具體實施例，但是對本領域熟練技術人員來說，只要不離開本發(fā)明的精神和范圍可作各種變化或修正是顯然的。
權利要求
1.一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于該方法包括以下步驟A、預處理選取巴戟天根莖進行洗滌、剔除雜質、干燥處理后，粉碎，過40 80目篩，得到巴戟天粉未；B、脫脂、脫色將上述得到的巴戟天粉未加入到氯仿/甲醇混合溶劑中，升溫至回流， 進行脫脂、脫色處理，過濾，收集濾餅；C、提取將步驟B中得到的濾餅加入到醇溶劑中，升溫至回流，回流反應2 6小時，過濾，將得到的固體物再加入到水中，升溫至50°C 70°C，攪拌，提取0. 5 2. 0小時，過濾， 收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；D、濃縮、干燥將步驟C中得到的濾液升溫至60°C 80°C，進行減壓濃縮，得濃縮液，將所得的濃縮液與乙醇溶液混合，進行醇沉處理，過濾，用有機溶劑進行洗滌，得巴戟天粗多糖；E、分離、純化將巴戟天粗多糖加入到正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中進行脫蛋白處理后，用水進行溶解后加入到層析柱中，再用0. 05mol/L 0. 15mol/L的NaCl溶液進行洗脫， 收集流出液，減壓濃縮、醇沉、過濾、干燥，得巴戟天多糖。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于步驟B中所述的氯仿/甲醇混合溶劑與巴戟天粉未的重量比為氯仿/甲醇混合溶劑巴戟天粉未為4 15 1 ；所述的氯仿/甲醇混合溶劑的氯仿與甲醇的體積比為氯仿甲醇=2 4 1。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于步驟C中所述的醇溶劑為75% 85%乙醇水溶液。
4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于步驟 C中所述的剩余的殘渣可再進行提取，具體的過程為將剩余的殘渣加入到水中，升溫至 50°C 70°C，攪拌，提取0. 5 2. 0小時，過濾，收集濾液，剩余的殘渣可再進行提??；重復提取2 3次，合并收集的濾液。
5.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于上述步驟D中所述的醇沉處理的具體步驟為往所得的濃縮液中加入90% 100%的乙醇溶液，所述的乙醇溶液與濃縮液的體積比為3 8 1 ；攪拌10 30分鐘，低溫靜置他 1 后， 過濾，得巴戟天粗多糖。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于所述的低溫靜置的溫度為-10°C 10°C。
7.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于其中步驟E中所述的正丁醇/三氯乙酸混合溶劑與巴戟天粗多糖的重量比為0.5 1.5 1;所述的正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中正丁醇與三氯乙酸的體積比為正丁醇三氯乙酸=10 30 1。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于步驟E中所述的層析柱為葡聚糖凝膠柱。
9.根據(jù)權利要求8所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于所述的葡聚糖凝膠柱為kphadex G-100葡聚糖凝膠柱、S印hadex G-75葡聚糖凝膠柱或kphadex G-150葡聚糖凝膠柱中的一種。
10.根據(jù)權利要求1或2或3或8所述的一種巴戟天多糖的提取方法，其特征在于步驟E中所述的洗脫的速度為0. 5mL/min 1. 5mL/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種巴戟天多糖的提取方法，屬于中藥技術領域。它解決了現(xiàn)有巴戟天多糖的提取方法中存在工藝步驟復雜、去蛋白效果差、得到的巴戟天多糖的產率和純度低的問題。本發(fā)明巴戟天多糖的提取方法包括以下步驟將巴戟天根莖干燥粉碎至40～80目；取巴戟天粉未加氯仿/甲醇混合溶劑回流提?。贿^濾所得的濾餅先用醇提，再加水浸提；之后過濾濃縮濾液，濃縮液進行醇沉處理，過濾得巴戟天粗多糖；將巴戟天粗多糖加入正丁醇/三氯乙酸混合溶劑中處理，之后水溶入層析柱洗脫，流出液經濃縮、醇沉、過濾、干燥后得巴戟天多糖。本發(fā)明巴戟天多糖的提取方法工藝簡單，去蛋白效果佳，所提取的巴戟天多糖所含雜質少，產率和純度高。
文檔編號C08B37/00GK102351956SQ20111022707
公開日2012年2月15日 申請日期2011年8月9日 優(yōu)先權日2011年8月9日
發(fā)明者朱孟勇, 王彩嬌 申請人:朱孟勇