專利名稱：具有抗幽門螺桿菌活性的多羥基－氨基酸化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多羥基化合物，其制備方法和用途。更具體地說，本發(fā)明涉及用作藥物例如作為胃潰瘍和十二指腸潰瘍預(yù)防和治療藥的生物活性化合物，以及含有所述化合物的抗幽門螺桿菌(以下簡稱H.pylori或HP)劑。
背景技術(shù)：
作為胃腸道中有害菌族一員，幽門螺桿菌是屬于幽門螺桿菌屬的革蘭氏陰性微需氧菌；有人提出，它可能是胃炎、十二指腸潰瘍和胃潰瘍復(fù)發(fā)的主要因素。
對(duì)于治療與幽門螺桿菌感染有關(guān)的各種疾病來說，當(dāng)今采用化學(xué)療法，例如使用鉍劑和抗生素的雙藥結(jié)合療法或使用鉍劑、甲硝唑(美國專利2,944,061)和四環(huán)素(例如，美國專利2,712,517)或羥氨芐青霉素(美國專利3,192,198)的三藥結(jié)合療法。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，由胃質(zhì)子泵抑制劑、羥氨芐青霉素和甲紅霉素構(gòu)成的三元療法也是有效的(Gut，1995，37(附錄1)A365)(胃腸術(shù)，1996，110A171)。鉍劑、抗生素和甲硝唑之類的藥物全都通過口服給藥。
對(duì)于多羥基化合物，PCT國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO93/06838和ActaChemical Scandinavica B36，515-518(1982)分別公開了下式化合物作為合成中間體
和
以及Carbohyd.Res.，28(2)，263-280(1973)指出
能有效抑制革蘭氏陰性菌。
為了改善活性成分的效率表達(dá)和降低副反應(yīng)的危險(xiǎn)，曾試圖將羥氨芐青霉素配制成例如胃粘膜粘著組合物，以延長其胃內(nèi)保留時(shí)間和讓羥氨芐青霉素以控制速率釋放，由此改進(jìn)活性成分的利用率(WO94/00112)。業(yè)已證明，幽門螺桿菌清除率可通過使抗幽門螺桿菌物質(zhì)長時(shí)間停留在胃中以確保細(xì)菌長時(shí)間暴露在活性物質(zhì)中而得到改善。[Scand.J.Gastroenterol.，29，16-42(1994)]。
不過，為了在幽門螺桿菌的生境中維持足夠的生長抑制濃度，所述鉍劑、抗生素或甲硝唑必須以大劑量每日給藥，并且這種治療有多種問題，例如嘔吐和腹瀉等副反應(yīng)發(fā)作。在此情況下，本發(fā)明的目的是提供一種新藥，它具有很高的抗菌活性、特別是抗幽門螺桿菌和幽門螺桿菌屬的其它菌，并且產(chǎn)生臨床有益預(yù)防和治療響應(yīng)，同時(shí)降低負(fù)反應(yīng)的出現(xiàn)。
發(fā)明綜述在此情況下，本發(fā)明的目的是提供一種新藥，它具有很高的抗菌活性、特別是抗幽門螺桿菌和幽門螺桿菌屬的其它菌，并且產(chǎn)生臨床有益預(yù)防和治療響應(yīng)，同時(shí)降低負(fù)反應(yīng)的出現(xiàn)。
本發(fā)明的目的是提供一種藥物組合物，與其它胃粘膜粘著制劑相比，它具有增強(qiáng)的粘膜粘著活性，因此，活性成分的效率得到極大改進(jìn)，具體地說，提供一種抗幽門螺桿菌組合物和藥物制劑，用于預(yù)防、治療或防止十二指腸潰瘍復(fù)發(fā)；它在抗幽門螺桿菌效果、低的副作用的危險(xiǎn)、持續(xù)作用和安全性方面是非常滿意和有利的。
本發(fā)明人通過深入研究，結(jié)果合成出下式新的多元醇(多羥基化合物)
，其結(jié)構(gòu)的特殊之處在于下式定義的基團(tuán)
直接鍵聯(lián)到碳原子上，而且發(fā)現(xiàn)由于獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，上述化合物對(duì)有害于胃腸道的菌類顯示出顯著的抑制活性，特別是高度的抗幽門螺桿菌活性，同時(shí)具有臨床有利的藥理活性，例如低的副作用的危險(xiǎn)。本發(fā)明是基于上述發(fā)現(xiàn)完成的。
鑒于上述先有技術(shù)的狀況，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，活性成分的效率(例如抗幽門螺桿菌作用)可通過在含有活性成分(例如抗幽門螺桿菌物質(zhì))的目的胃粘膜粘著組合物中加入一種溶脹粘性劑的試劑(例如產(chǎn)堿桿菌多糖(curdlan)和/或低取代的羥丙基纖維素)而得到加強(qiáng)；還發(fā)現(xiàn)該組合物具有可靠的安全性，且對(duì)粘膜的粘著性得到加強(qiáng)。因此，本發(fā)明涉及1.式(I)化合物
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
2.按照上款1的化合物，其中R1是酰氨基或被可取代的烴基取代的氨基。
3.按照上款2的化合物，其中酰氨基是被氨基酸殘基取代的氨基。
4.按照上款3的化合物，其中氨基酸殘基是α-氨基酸殘基。
5.按照上款1的化合物，其中R1是氨基或下式基團(tuán)
其中R7是可被α-L-氨基酸殘基取代的α-L-氨基酸殘基取代的氨基，R8是可取代的烴基；R2代表羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表羥基；Q代表苯基。
6.按照上款5的化合物，它由下式(V)表示
其中R7和R8具有上款5的相同定義。
7.按照上款5的化合物，其中R8是C1-10烷基，C6-14芳基-C1-6烷基，C2-10鏈烯基或C2-10炔基，這些基團(tuán)可被取代。
8.按照上款7的化合物，其中R8是C1-6烷基或C2-6鏈烯基。
9.按照上款7的化合物，其中R7是可被纈氨?；?、纈氨酰纈氨酰基、纈氨酰異亮氨?；蚶i氨酰亮氨?；〈陌被?。
10.按照上款8的化合物，其中R8是異丁基或烯丙基。
11.按照上款1的化合物，其中R1是氨基。
12.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
13.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-異亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
14.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
15.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
16.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
17.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-4-戊烯酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
18.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基丁酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
19.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-異亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
20.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-甲硫氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
21.按照上款1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-2-(L-正纈氨酰)氨基-4-戊烯酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
22.含有按照上款1的化合物的藥物組合物。
23.按照上款22的組合物，它是抗幽門螺桿菌劑。
24.按照上款23的抗幽門螺桿菌劑，它是用于與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病的預(yù)防和治療藥。
25.按照上款24的抗幽門螺桿菌劑，其中與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病是胃潰瘍或十二指腸潰瘍，胃炎，胃癌或胃MALT淋巴瘤。
26.抗幽門螺桿菌劑，它包括按照上款1的化合物和至少一種其它抗菌劑或/和抗?jié)兯幗Y(jié)合用藥。
27.按照上款22的組合物，它是胃粘膜粘著藥物組合物。
28.按照上款27的組合物，它包括(a)按照上款1的化合物，(b)脂質(zhì)和/或多甘油脂肪酸酯和(c)能與水成粘性的粘性劑。
29.按照上款28的組合物，其中(c)粘性劑是丙烯酸系聚合物或其鹽。
30.按照上款28的組合物，它包括(d)一種能溶脹該粘性劑的物質(zhì)。
31.按照上款30的組合物，其中能溶脹該粘性劑的物質(zhì)是產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素。
32.一種制備按照上款1的化合物的方法，它包括使式(II)的羧酸
其中R1是可取代的氨基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基，或其鹽，或其活性衍生物；與式(III)化合物
其中R2代表可酯化或酰胺化的羧基；Q代表可取代的芳基，或其鹽進(jìn)行反應(yīng)。
33.一種制備按照上款1的化合物的方法，它包括使式(IV)化合物
其中R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5和R6分別代表可保護(hù)的羥基，Q代表可取代的芳基，或其鹽，或其活性衍生物；與下式化合物R9-X其中R9代表?；?，或可取代的烴基；X代表離去基團(tuán)，或其鹽，或其活性衍生物反應(yīng)。
34.一種制備按照上款5的化合物的方法，它包括在培養(yǎng)基中生長能夠產(chǎn)生按照上款5的化合物的芽孢桿菌屬(Bacillus)的微生物菌株，讓該菌株在發(fā)酵液中生長并積累該化合物，以及收集該化合物。
35.按照上款34的方法，其中微生物菌株是芽孢桿菌HC-70或異常芽孢桿菌HC-72(Bacillus insolitus HC-72)。
36.能夠產(chǎn)生按照上款5的化合物的芽孢桿菌HC-70或異常芽孢桿菌HC-72。
37.預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病的方法，它包括給需要的哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)化合物
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
38.式(I)化合物用于制備抗幽門螺桿菌劑的用途
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
附圖的簡單描述
圖1是實(shí)施例2中得到的HC-70I的13C-NMR光譜。
圖2是實(shí)施例1中得到的HC-70II的13C-NMR光譜。
圖3是實(shí)施例1中得到的HC-70III的13C-NMR光譜。
R1提到的“可取代的氨基”包括氨基，酰氨基，和被可取代的烴基取代的氨基。
R1提到的“酰氨基”中的“?；辈粌H包括任一種氨基酸殘基或兩個(gè)或多個(gè)“氨基酸殘基”的序列(以下稱作Ra，Rb或Rc的“氨基酸殘基”)，而且在其它酰基中還包括可取代的烷?；?，可取代的芳酰基，可取代的雜環(huán)羰基，可取代的氨基甲?；扇〈牧虼被柞；?，可取代的烷基磺?；?，可取代的芳基磺?；?，可取代的氨磺?；?，可取代的烷氧羰基，和可取代的芳氧基羰基。
其中特別優(yōu)選兩個(gè)或多個(gè)“氨基酸殘基”的序列。
所述“可取代的烷酰基”的“烷?；卑ǖ幌抻贑1-20烷酰基(例如，甲酰基，乙?；；惐；?，丁酰基，戊酰基，己?；；?，辛?；?，壬酰基，月桂酰基，十一烷?；舛罐Ⅴ；貦磅；仓；鹊?，和特別優(yōu)選C1-6烷?；?例如，甲酰基，乙酰基，丙酰基，異丙?；?，丁酰基，戊酰基，和己酰基)。
所述“可取代的芳?；钡摹胺减；卑ǖ幌抻贑7-16芳?；?例如，苯甲?；?，1-萘酰基，2-萘?；鹊?。
所述“可取代的雜環(huán)羰基”的“雜環(huán)羰基”包括除了碳作為環(huán)原子之外，還分別含有1-4個(gè)雜原子(例如，氮，氧和硫)的5-或6-元雜環(huán)羰基或稠合雜環(huán)羰基(例如，3-吡咯羰基，1-咪唑羰基，1-吡唑羰基，3-異噻唑羰基，3-異噁唑羰基，吡嗪羰基，2-嘧啶羰基，3-吡嗪羰基，2-中茚氮羰基，2-異吲哚羰基，1-吲哚羰基，2-呋喃甲酰基，2-噻吩甲酰，煙?；悷燉；?，嗎啉代羰基，哌啶子基羰基，哌嗪羰基等等)。
所述“可取代的烷基磺?；钡摹巴榛酋；卑ǖ幌抻贑1-20烷基磺?；?例如，甲基磺?；一酋；酋；?，異丙基磺?；鹊?。
“可取代的氨基甲?；辈粌H包括氨基甲酰基，而且還包括一-取代的氨基甲?；投?取代的氨基甲?；渲腥〈蛇x自例如C1-6烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基等等)，C6-14芳基(例如，苯基，1-萘基，2-萘基等等)，C7-16芳烷基(例如，芐基等等)，C1-6烷酰基(例如，乙?；?，丙?；惐；□；鹊?，C7-16芳?；?例如，苯甲?；?-萘?；?，2-萘?；鹊?，5-或6-元雜環(huán)羰基(例如，3-吡咯羰基，2-咪唑羰基，1-吡唑羰基，3-異噻唑羰基，3-異噁唑羰基，吡嗪羰基，2-嘧啶羰基，3-吡嗪羰基，2-中茚氮羰基，2-異吲哚羰基，1-吲哚羰基，2-呋喃甲酰基，2-噻吩甲酰基，煙?；?，異煙?；?，嗎啉代羰基，哌啶子基羰基，哌嗪羰基等等)。
“可取代的硫代氨基甲?；辈粌H包括硫代氨基甲?；?，還包括一-取代的硫代氨基甲?；投?取代的硫代氨基甲酰基，其中取代基可選自例如C1-6烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基等等)，C6-14芳基(例如，苯基，1-萘基，2-萘基等等)，C7-16芳烷基(例如，苯基-C1-5烷基，例如芐基等等)，C1-6烷酰基(例如，乙酰基，丙?；?，異丙酰基，丁酰基等等)，C7-16芳酰基(例如，苯甲?；?，1-萘?；?，2-萘?；鹊?，5-或6-元雜環(huán)羰基(例如，除了碳作為環(huán)原子之外，還分別含有1-4個(gè)雜原子(例如氮，氧和硫)的5-或6-元雜環(huán)羰基或稠合雜環(huán)羰基)，例如3-吡咯羰基，2-咪唑羰基，1-吡唑羰基，3-異噻唑羰基，3-異噁唑羰基，吡嗪羰基，2-嘧啶羰基，3-吡嗪羰基，2-中茚氮羰基，2-異吲哚羰基，1-吲哚羰基，2-呋喃甲?；?，2-噻吩甲酰基，煙酰基，異煙酰基，嗎啉代羰基，哌啶子基羰基，哌嗪羰基等等)。
所述“可取代的芳基磺酰基”的“芳基磺?；卑ǖ幌抻贑6-14芳基磺?；?例如，苯磺?；?，1-萘基磺?；?-萘基磺?；鹊?。
“可取代的氨磺?！辈坏ò被酋?，還包括一-取代的氨磺酰和二-取代的氨磺酰，其中取代基可選自例如C1-6烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基等等)，C6-14芳基(例如，苯基，1-萘基，2-萘基等等)和C7-16芳烷基(例如，苯基-C1-5烷基，例如芐基等等)。
所述“可取代的烷氧羰基”的“烷氧羰基”包括但不限于C1-20烷氧羰基(例如，甲氧基羰基，乙氧基羰基，丙氧基羰基，異丙氧基羰基，丁氧基羰基，異丁氧基羰基等等)。
所述“可取代的芳氧基羰基”的“芳氧基羰基”包括但不限于C6-14芳氧基羰基(例如，苯氧基羰基，1-萘氧基羰基，2-萘氧基羰基等等)。
所述“可取代的烴基”的“烴基”可以是例如脂肪烴基或環(huán)烴基。上述“脂肪烴基”包括但不限于C1-20脂肪烴基(例如，烷基，鏈烯基和炔基)?！碍h(huán)烴基”包括C3-20環(huán)烴基(例如，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳基等等)。
上述“烷基”是C1-10烷基，例如甲基，乙基，丙基，2-丙基，1-乙基丙基，丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，戊基，3-甲基丁基，2，2-二甲基丙基，己基等等。
“鏈烯基”是C2-10鏈烯基，例如乙烯基，2-丙烯基，1-甲基乙烯基，丁烯基，2-甲基-1-丙烯基，2-甲基-2-丙烯基，1-甲基-2-丙烯基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，2-己烯基，3-己烯基，5-己烯基等等。
“炔基”是C2-10炔基，例如乙炔基，2-丙炔基，2-丁炔-1-基，3-丁炔-2-基，1-戊炔-3-基，3-戊炔-1-基，4-戊炔-2-基，3-己炔-1-基等等。
“環(huán)烷基”是C3-10環(huán)烷基，例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基等等。
“環(huán)烯基”是C3-10環(huán)烯基，例如環(huán)丁烯基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，環(huán)己二烯基等等。
“芳基”是C6-14芳基，例如苯基，1-萘基，2-萘基等等。
對(duì)于R1的所述“可取代的烴基”的“烴基”和所述“酰氨基”的‘?；瘉碚f，對(duì)“烷?；减；s環(huán)羰基，烷磺?；?，芳磺?；?，烷氧羰基或芳氧羰基”上的可任意取代的取代基沒有特別限制，除非與本發(fā)明的目的不一致，所以它們包括氨基，一-或二-C1-6烷氨基(例如甲基氨基，乙基氨基，丙基氨基，異丙基氨基，二甲氨基，二乙氨基等等)，一-或二-C6-10芳基氨基(例如，苯氨基，二苯氨基等等)，一-或二-C7-11芳烷基氨基(例如，苯基-C1-5烷基氨基如芐基氨基，二(苯基C1-5烷基)氨基如二芐基氨基等等)，疊氮基，硝基，鹵素(例如，氟，氯，溴，碘)，羥基，C1-6烷氧基(例如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基等等)，C6-10芳氧基(苯氧基，1-萘氧基，2-萘氧基等等)，C7-11芳烷氧基(例如，苯基-C1-5烷氧基例如芐氧基等等)，甲酰氧基，C1-6烷基羰氧基(例如乙酰氧基，丙酰氧基等等)，C6-10芳基羰基氧基(例如，苯甲酰氧基等等)，C7-11芳烷基羰基氧基(例如，苯基-C1-5烷基羰基氧基如芐基羰基氧基等等)，磺酰氧基，C1-6烷基磺酰氧基(例如，甲基磺酰氧基等等)，巰基，C1-6烷硫基(例如，甲硫基，乙硫基，丙硫基，異丙硫基等等)，C6-10芳硫基(例如苯硫基，1-萘基硫基，2-萘基硫基等等)，C7-11芳烷硫基(例如，苯基-C1-5烷硫基如芐基硫基等等)，膦酰氧基，氰基，氨基甲?；?，一-或二-C1-6烷基氨基甲?；?例如，甲基氨基甲?；?，乙基氨基甲?；谆被柞；?，二乙基氨基甲?；鹊?，一-或二-C6-10芳基氨基甲?；?例如，苯基氨基甲?；?，二苯基氨基甲酰基等等)，一-或二-C7-11芳烷基氨基甲?；?例如(苯基-C1-5烷基)氨基甲?；缙S基氨基甲?；?，二(苯基-C1-5烷基)氨基甲?；缍S基氨基甲?；鹊?，羧基，C1-6烷氧羰基(例如，甲氧羰基，乙氧羰基等等)，C6-10芳氧羰基(例如，苯氧羰基，1-萘氧羰基，2-萘氧羰基等等)，C7-11芳烷氧基羰基(例如，苯基-C1-5烷氧羰基如芐氧羰基等等)，甲?；?，C1-6烷基羰基(例如乙?；?，丙?；惐；□；?，戊?；?，己?；鹊?，C6-10芳基羰基(例如，苯甲?；?-萘?；?-萘?；鹊?，C7-11芳烷基羰基(例如，苯基-C1-5烷基羰基例如芐基羰基等等)，磺基，C1-6烷基亞磺?；?例如，甲基亞磺酰基，乙基亞磺酰基等等)，C6-10芳基亞磺?；?例如，苯亞磺?；?，1-萘基亞磺?；?，2-萘基亞磺?；鹊?，C1-6烷基磺?；?例如，甲基磺?；?，乙基磺酰基等等)，C6-10芳基磺?；?例如苯磺?；?，1-萘基磺?；?，2-萘基磺?；鹊?，C1-6烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基等等)，C2-6鏈烯基(例如乙烯基，烯丙基，2-丁烯基等等)，C2-6炔基(例如，乙炔基，丙炔基等等)，C3-6環(huán)烷基(例如，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基等等)，C3-6環(huán)烯基(例如，環(huán)丁烯基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，環(huán)己二烯基等等)，C6-10芳基(例如，苯基，1-萘基，2-萘基等等)，一-至三-環(huán)雜環(huán)基(例如，由1-3個(gè)含有含1至4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的至少一個(gè)5-或6-元環(huán)的環(huán)構(gòu)成的雜環(huán)基團(tuán)吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，異吲哚基，吲唑基，噠嗪基，咪唑基，吡唑基，吡咯基，呋喃基，苯并呋喃基，噻吩基，苯并噻吩基，苯并咪唑基，喹唑啉基，吡咯烷基，吡咯啉基，咪唑烷基，咪唑啉基，吡唑烷基，吡唑啉基，哌啶基，哌嗪基，中茚氮基，異中茚氮基，嗎啉基等等)，和一-至三-環(huán)雜環(huán)硫基(例如，由硫基鍵合到上述雜環(huán)基團(tuán)形成的基團(tuán)，例如，4-哌啶硫基，2-嘧啶硫基，1，3，4-噻二唑-2-基硫基，5-四唑硫基，2-苯并噻唑硫基，8-喹啉硫基等等)。這些取代基在化學(xué)允許的范圍內(nèi)，可以存在于所述“烴基”和所述“烷?；减；?，雜環(huán)羰基，烷磺?；?，芳磺?；?，烷氧羰基，和芳氧羰基”上，而且在每種情況下，取代基的數(shù)目可以是1-5個(gè)，優(yōu)選1-3個(gè)。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)取代基的數(shù)目為2或以上時(shí)，取代基可相似或不相似。在化學(xué)允許的情況下，這些取代基也可取代有1-3個(gè)取代基，所述取代基選自氨基，一-或二-C1-6烷氨基，硝基，鹵素，羥基，C1-6烷氧基，C1-6烷基羰氧基，磺酰氧基，C1-6烷基磺酰基氧基，巰基，C1-6烷硫基，膦酰氧基，氰基，氨基甲酰基，一-或二-C1-6烷基氨基甲?；然?，C1-6烷氧羰基，甲酰基，C1-6烷基羰基，磺基，和C1-6烷基亞磺?；?br>
R1進(jìn)一步包括下式基團(tuán)Ra-Rb-Rc-NH-[Ra代表氫或可取代的氨基酸殘基；Rb和Rc可相同或不同，分別代表一個(gè)鍵，可取代的氨基酸殘基，或Y-Rd-(Rd代表由可取代的氨基酸殘基脫除亞氨基得到的基團(tuán)；Y代表-O-，-S-，或-NRe-(Re代表氫或低級(jí)烷基))]。
條件是Ra，Rb和/或Rc是氨基酸殘基，它們優(yōu)選通過酰胺鍵連接在一起。
Ra，Rb和Rc的“氨基酸殘基”和Rd的由“氨基酸殘基脫除亞氨基得到的基團(tuán)”以及R1的“氨基酸殘基取代的氨基”中的上述‘氨基酸’一般意指用氨基替代羧酸的核結(jié)構(gòu)中至少一個(gè)氫原子得到的基團(tuán)，包括具有2-20個(gè)碳原子的核結(jié)構(gòu)的α-，β-，γ-和δ-氨基酸。在這些氨基酸中，優(yōu)選α-氨基酸(特別是α-L-氨基酸)，例如丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，甘氨酸，組氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯基丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸等等，以及其它氨基酸，例如正纈氨酸，正亮氨酸，2-氨基己二酸，2-氨基丁酸，2-氨基異丁酸，2-氨基-4-戊烯酸，1-氨基環(huán)丙烷羧酸，1-氨基環(huán)戊烷羧酸，1-氨基環(huán)己烷羧酸，甲狀腺原氨酸，鳥氨酸，羥基脯氨酸，羥基賴氨酸，(2-萘基)丙氨酸，氮雜甘氨酸等等。
上述氨基酸包括環(huán)狀亞氨基酸?！碍h(huán)狀亞氨基酸”意指用亞氨基替代環(huán)烷羧酸或環(huán)烯羧酸的至少一個(gè)亞甲基得到的化合物，因此它們包括脯氨酸，羥基脯氨酸，3，4-脫氫脯氨酸，六氫哌啶羧酸
氮丙啶甲酸，和2-氮雜環(huán)丁烷甲酸
等等。優(yōu)選脯氨酸，羥基脯氨酸和六氫哌啶羧酸。
在說明書中使用的術(shù)語氨基酸可以是任何通常用于肽化學(xué)的氨基酸殘基，例如可以是前述任何氨基酸殘基。
Rd的“由氨基酸殘基脫除亞氨基(-NH-)得到的基團(tuán)”可以是從上述氨基酸殘基脫除亞氨基得到的基團(tuán)，因此包括由具有以下基團(tuán)的羧酸作為核結(jié)構(gòu)衍生的基團(tuán)直鏈或支鏈C1-10烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，異戊基，新戊基，叔戊基，1-乙基丙基，己基，異己基，庚基，辛基，癸基等等)，C2-10鏈烯基(例如，乙烯基，烯丙基，異丙烯基，1-丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-，2-或3-丁烯基，2-乙基-1-丁烯基，3-甲基-2-丁烯基，1-，2-，3-或4-戊烯基，4-甲基-3-戊烯基，1-，2-，3-，4-或5-己烯基，和分別在任意位置上有一個(gè)雙鍵的庚烯基、辛烯基和癸烯基)，C7-20芳烷基(例如，苯基-C1-5烷基如芐基，苯乙基，3-苯基丙基，萘基-C1-5烷基如1-萘甲基，2-萘甲基，9-芴基甲基等等)，C3-7環(huán)烷基(例如，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基等等)，C3-7環(huán)烯基(例如，2-環(huán)戊烯-1-基，3-環(huán)戊烯-1-基，2-環(huán)己烯-1-基，3-環(huán)己烯-1-基等等)，C6-15芳基(例如苯基，萘基，蒽基，菲基，苊基，芴基等等)，以及單環(huán)或稠合的多環(huán)C3-20雜環(huán)烷基(例如，4-咪唑甲基，3-吡啶甲基，4-噻唑甲基，3-吲哚甲基，3-喹啉甲基等等)。
上述氨基酸殘基和上述由氨基酸殘基脫除亞氨基得到的基團(tuán)在合適的位置可分別具有一個(gè)或多個(gè)取代基，優(yōu)選1-3個(gè)取代基，而且可存在的具體取代基包括但不限于氨基，?；〈陌被一?，酰基胍基，?；呋呋?，酰基，氨基甲?；?，N-一-或二-低級(jí)烷基氨基甲?；?，羧基，低級(jí)烷氧基羰氧基，羥基，?；u基，低級(jí)烷氧基，苯氧基，巰基，酰基巰基，低級(jí)烷硫基，苯硫基，硫代，氰基，疊氮基，硝基，亞硝基，和鹵素。
這里，所述“?；〈陌被?，酰基胍基，酰基脒基，?；u基，或?；鶐€基”的“?；卑ㄅc上述R1的“酰氨基”的“?；庇玫南嗤；?，特別是C1-20烷酰基(優(yōu)選C1-6烷?；?。
所述“低級(jí)烷基氨基甲?；钡摹图?jí)烷基’包括但不限于C1-6烷基，例如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，和異丁基。
“低級(jí)烷氧基羰基氧基”包括但不限于C1-6烷氧羰基氧基，例如甲氧基羰基氧基，乙氧基羰基氧基，丙氧基羰基氧基，異丙氧基羰基氧基，丁氧基羰基氧基，異丁基羰基氧基，等等。
“低級(jí)烷氧基”包括但不限于C1-6烷氧基，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基等等。
“低級(jí)烷硫基”包括但不限于C1-6烷硫基，例如甲硫基，乙硫基，丙硫基，異丙硫基等等。
Re的低級(jí)烷基包括但不限于C1-6烷基，例如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，戊基，己基等等。
R7的在“可被α-L-氨基酸殘基取代的α-L-氨基酸殘基取代的氨基”中的“α-L-氨基酸”包括與前述對(duì)于Ra，Rb和Rc的氨基酸殘基的“α-L-氨基酸”相同的“α-L-氨基酸”。
R8的“可取代的烴基”包括與上述R1的“可取代的氨基”的取代基例舉相同的‘可取代的烴基’。R8的例子是C1-10烷基，C6-14芳基-C1-6烷基，C2-10鏈烯基，C2-10炔基等等，這些基團(tuán)每個(gè)都可被取代。R8優(yōu)選的例子是C1-6烷基，C2-6鏈烯基和環(huán)丙基-C1-3烷基，特別是異丁基和烯丙基。
R2的可酯化的羧基包括羧基，(低級(jí)(C1-6)烷氧基)羰基(例如，甲氧基羰基，乙氧基羰基，丙氧基羰基，異丙氧基羰基，丁氧基羰基，異丁氧基羰基，叔丁氧基羰基，仲丁氧基羰基，戊氧基羰基，異戊氧基羰基，新戊氧基羰基，叔戊氧基羰基，己氧基羰基等等)，(C6-10芳基)氧基羰基(例如，苯氧羰基，1-萘氧基羰基等等)和(C7-10芳烷基)氧羰基(例如，(苯基-C1-4烷氧基)羰基，如芐氧羰基)，二苯基甲氧基羰基，新戊酰氧甲氧基羰基，1-(環(huán)己基氧基羰基氧基)乙氧羰基。其中，優(yōu)選羧基，甲氧羰基和乙氧羰基。
R2的可酰胺化的羧基包括氨基甲?；腿〈陌被柞；?。所述取代的氨基甲?；娜〈ǖ幌抻谖慈〈幕蛉〈牡图?jí)(C1-6)烷基(例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，異戊基，新戊基，己基，異己基等等)，未取代的或取代的C3-6環(huán)烷基(例如，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基等等)，未取代的或取代的C6-10芳基(例如，苯基，1-萘基，2-萘基等等)，未取代的或取代的C7-12芳烷基(例如，苯基-C1-4烷基例如芐基和苯乙基，萘基-C1-2烷基等等)，和未取代的或取代的C6-10芳基磺?；?例如，苯磺?；?，1-萘磺?；?-萘磺?；鹊??？纱嬖谝粋€(gè)或兩個(gè)類似或不類似的選自上述取代基的基團(tuán)。這類任意取代的低級(jí)(C1-6)烷基、任意取代的C3-6環(huán)烷基、任意取代的C6-10芳基、任意取代的C7-12芳烷基和任意取代的C6-10芳磺?；娜〈u素(例如，氟，氯，溴等等)，可被1-3個(gè)鹵素取代的烷氧基(例如，C1-4烷氧基如甲氧基，乙氧基，丙氧基等等)，可被1-3個(gè)鹵素取代的烷基(例如，C1-4烷基如甲基，乙基，丙基等等)，氨基，羧基和硝基，并且對(duì)這些取代基基團(tuán)來說，可存在1-5個(gè)。
可取代的氨基可以是這樣的取代基，即氮原子上的兩個(gè)取代基與該氮原子一起形成環(huán)氨基，且這樣的環(huán)氨基包括但不限于1-氮雜環(huán)丁烷，1-吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代，硫代嗎啉代，和1-哌嗪基。
R2優(yōu)選是羧基。
Q的“可取代的芳基”的“芳基”包括但不限于單環(huán)或稠合的多環(huán)C6-14芳烴基。上述芳烴基包括但不限于苯基，1-或2-萘基，1-，2-或9-蒽基，1-，2-，3-，4-，或9-菲基，和1-，2-，4-，5-或6-薁基。這種‘芳基’在合適部位可具有1-5個(gè)合適的取代基，優(yōu)選1-3個(gè)取代基，而這種取代基包括但不限于烷氧基(例如C1-3烷氧基如甲氧基，乙氧基和丙氧基)，鹵素(例如，氟，氯，溴，碘)，烷基(例如，C1-3烷基如甲基，乙基，和丙基)，氨基，硝基和氰基。
Q優(yōu)選是苯基。
R3，R4，R5和R6的“可保護(hù)的羥基”的保護(hù)基包括但不限于成醚保護(hù)基，例如甲氧基甲基，芐氧基甲基，叔丁氧基甲基，2-甲氧基乙氧基甲基，2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基，甲硫基甲基，2-四氫吡喃基，4-甲氧基-4-四氫吡喃基，2-四氫吡喃基，芐基，對(duì)甲氧基芐基，對(duì)硝基芐基，鄰硝基芐基，2，6-二氯芐基，三苯甲基等等；成甲硅烷基醚保護(hù)基，例如三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，三異丙基甲硅烷基，異丙基二甲基甲硅烷基，二乙基異丙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基，三芐基甲硅烷基，三苯基甲硅烷基，甲基二苯基甲硅烷基等等；和成酯保護(hù)基，例如甲?；?，乙?；?，氯乙酰基，二氯乙?；?，三氯乙酰基，新戊?；郊柞；?，芐氧羰基，2-溴芐氧羰基等等。除了上述保護(hù)基以外，保護(hù)基進(jìn)一步包括那些在R3，R4，R5和R6之中有兩個(gè)羥基的基團(tuán)，例如環(huán)縮醛如亞甲基縮醛，亞乙基縮醛，4-甲氧基苯基亞乙基縮醛，亞芐基縮醛，2，2，2-三氯亞乙基縮醛等等，環(huán)縮酮如亞異丙基縮酮，亞環(huán)戊基縮酮，亞環(huán)己基縮酮，亞環(huán)庚基縮酮，1-苯基亞乙基縮酮，2，4-二甲氧基亞芐基縮酮等等，和環(huán)原酸酯如甲氧基亞甲基縮醛，乙氧基亞甲基縮醛等等。
R3，R4，R5和R6的優(yōu)選的例子分別是羥基。
式(I)化合物的優(yōu)選結(jié)構(gòu)的例子是由式(V)表示的立體結(jié)構(gòu)。
以下說明生產(chǎn)本發(fā)明的上述化合物的方法。
本發(fā)明的化合物(I)或鹽典型地通過以下方法制備使式(II)的羧酸
或其鹽，或其反應(yīng)性衍生物，與式(III)化合物
或其鹽進(jìn)行反應(yīng)。
用于上述反應(yīng)的所述羧酸的反應(yīng)性衍生物可利用例如以下方法制備酰鹵化物法，疊氮化物法，混合酸酐法(可采用的‘配對(duì)酸’包括異丁氧基羰基氯，新戊酰氯等等)，對(duì)稱酸酐法，利用稠合劑的方法，稠合劑例如N，N’-碳化二咪唑，N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺，N，N’-二異丙基碳化二亞胺，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺，N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉，磷氰酸二乙酯，二苯基磷?；B氮化物，四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓，六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷鎓，六氟磷酸溴三吡咯烷基磷鎓，四氟硼酸2-(5-降冰片烯-2，3-二甲酰胺基)四甲基脲鎓或類似物，在4-二甲氨基吡啶，3-羥基-3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三唑，N-羥基琥珀酰亞胺，N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰胺，1-羥基苯并三唑或類似物存在下使用上述稠合劑的方法，或使用它們的活性酯方法。
上述反應(yīng)一般是在溶劑中使用相對(duì)于化合物(II)0.5-10摩爾當(dāng)量的化合物(III)進(jìn)行的。可使用的溶劑包括芳烴，例如苯，甲苯，二甲苯等等；鹵代烴，例如二氯甲烷，氯仿等等；飽和烴，例如己烷，庚烷，環(huán)己烷等等；醚，例如乙醚，四氫呋喃，二噁烷等等；腈，例如乙腈等等；亞砜，例如二甲亞砜；酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺等等；酯，例如乙酸乙酯等等，和水。這些溶劑可單獨(dú)使用或以兩種或多種混合使用，例如比例為1∶1-1∶10。反應(yīng)溫度通常約-80至100℃，優(yōu)選-50至50℃。反應(yīng)時(shí)間可以是約1至96小時(shí)，優(yōu)選約1至72小時(shí)。
式(II)化合物或其鹽典型地通過Acta Chemica Scandinavica B36,515-518(1982)中公開的方法合成。
式(III)化合物可以通過公知方法合成。也可以使用市售的產(chǎn)品。
本發(fā)明的化合物(I)或鹽可通過例如將取代基引入化合物(I)(其中R1＝NH2)的氨基中而合成。舉例來說，取代基可例如由羧酸或其鹽或其反應(yīng)性衍生物得到。
本發(fā)明的化合物(I)或其鹽例如可通過使式(IV)化合物[其中各符號(hào)定義如上]或其鹽或其反應(yīng)性衍生物與下式化合物R9-X[其中R9代表可取代的?；蜔N基而X代表離去基團(tuán)]或其鹽或其反應(yīng)性衍生物進(jìn)行反應(yīng)而制備。
R9的“酰基”包括與前述R1的酰胺基的‘?；嗤摹；?。R9的?；膬?yōu)選例子是前述可保護(hù)的任何一種α-L-氨基酸殘基或任一兩個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列，更優(yōu)選為可保護(hù)的L-纈氨酰-L-亮氨酰和可保護(hù)的(S)-2-氨基-4-戊烯酰。
R9的“烴基”包括與前述R1的可取代的烴基取代的氨基的“烴基”相同的“烴基”。
X的離去基團(tuán)的例子有羥基，鹵素原子(例如，氟，氯，溴，特別是氯)，疊氮基，C1-20酰氧基，C1-6烷氧基(例如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基等等)，C6-10芳氧基(例如，苯氧基，1-萘氧基，2-萘氧基等等)，C7-11芳烷氧基(例如，芐氧基等等)等等。
作為X的離去基團(tuán)的C1-20酰氧基例如包括C1-20烷酰氧基，優(yōu)選C1-6烷酰氧基(例如甲酰氧基，乙酰氧基，丙酰氧基，異丙酰氧基，丁酰氧基，戊酰氧基，己酰氧基，庚酰氧基，辛酰氧基，壬酰氧基等等)，C7-16芳酰氧基(例如苯甲酰氧基，1-萘酰氧基，2-萘酰氧基等等)，5-或6-元雜環(huán)基羰氧基或稠合雜環(huán)基羰氧基(例如，3-吡咯羰基氧基，1-咪唑羰基氧基，1-吡唑羰基氧基，3-異噻唑羰基氧基，3-異噁唑羰基氧基，吡嗪羰基氧基，2-嘧啶羰基氧基，3-吡嗪羰基氧基，2-中茚氮基羰基氧基，2-異吲哚羰基氧基，1-吲哚羰基氧基，2-呋喃甲?；趸?，2-噻吩甲?；趸瑹燉Ｑ趸?，異煙酰氧基，嗎啉代羰基氧基，哌啶子基羰基氧基，哌嗪基羰基氧基等等)，氨基甲?；趸?取代的氨基甲?；趸蚨?取代的氨基甲?；趸?其中取代基包括與上述作為R1的酰胺基的?；摹翱扇〈陌被柞；毕嗤娜〈?，硫代氨基甲酰基氧基，一-取代的硫代氨基甲?；趸蚨?取代的硫代氨基甲酰基氧基(其中取代基包括與上述作為R1的酰胺基的?；摹翱扇〈牧虼被柞；毕嗤娜〈?，C1-20烷基磺酰氧基，特別是C1-6烷基磺酰氧基(例如甲基磺酰氧基，乙基磺酰氧基，丙基磺酰氧基等等)，可被一個(gè)或多個(gè)C1-3烷基取代的C6-14芳基磺酰氧基(例如，苯磺酰氧基，1-萘基磺酰氧基，2-萘基磺酰氧基，甲苯磺酰氧基等等)，氨磺酰氧基，一-取代的氨磺酰氧基或二-取代的氨磺酰氧基(其中取代基包括與上述作為R1的酰胺基的?；摹翱扇〈陌被酋；毕嗤娜〈?，C1-20烷氧基羰基氧基，特別是C1-6烷氧基羰基氧基(例如，甲氧基羰基氧基，乙氧基羰基氧基，丙氧基羰基氧基等等)，C6-14芳氧基羰基氧基(例如，苯氧基羰基氧基，1-萘氧基羰基氧基，2-萘氧基羰基氧基等等)等等。
X的離去基團(tuán)的優(yōu)選例子是羥基，鹵素原子，疊氮基，C1-20酰氧基，更優(yōu)選羥基和鹵素原子。
此反應(yīng)的條件和合成所述羧酸衍生物的方法例如可與前述化合物(II)和化合物(III)之間的反應(yīng)相同。
不管在式Ra-Rb-Rc中的Ra，Rb，和Rc的各個(gè)單元之間的鍵是酰胺鍵還是酯鍵，Rd的羧基官能團(tuán)(它的其它官能團(tuán)可以預(yù)先適當(dāng)保護(hù))可經(jīng)活化并與匹配的胺或醇化合物(也可以預(yù)先適當(dāng)保護(hù))進(jìn)行縮合。需要的話，對(duì)這種縮合產(chǎn)物進(jìn)行部分純化和部分脫保護(hù)。然后，對(duì)產(chǎn)物進(jìn)一步進(jìn)行類似縮合反應(yīng)?；虍?dāng)縮合產(chǎn)物是被保護(hù)的最終產(chǎn)物時(shí)，脫除所有保護(hù)基，需要的話，提純產(chǎn)物，得到純化的最終產(chǎn)物。
以下保護(hù)基可用于保護(hù)用于上述系列的合成反應(yīng)的氨基，羧基，羥基，和羰基。
可使用的氨基保護(hù)基包括形成酰胺的保護(hù)基，例如甲?；?，乙酰基，氯乙?；?，二氯乙?；纫阴；?，三氟乙?；?，乙酰乙?；?，鄰硝基苯基乙?；鹊?；形成氨基甲酸酯的保護(hù)基，例如叔丁氧基羰基，芐氧羰基，對(duì)甲氧基芐氧基羰基，對(duì)硝基芐氧基羰基，2-氯芐氧羰基，2，4-二氯芐氧羰基，二苯甲氧基羰基，2，2，2-三氯乙氧基羰基，2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基，1-甲基-1-(4-二苯基)乙氧基羰基，9-芴基甲氧基羰基，9-蒽基甲氧基羰基，異煙酰氧基羰基，1-金剛烷基氧基羰基等等；三苯甲基，和鄰苯二甲?；?。
可使用的羥基保護(hù)基包括成醚保護(hù)基，例如甲氧基甲基，芐氧基甲基，叔丁氧基甲基，2-甲氧基乙氧基甲基，2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基，甲硫基甲基，2-四氫吡喃基，4-甲氧基-4-四氫吡喃基，2-四氫吡喃基，芐基，對(duì)甲氧基芐基，對(duì)硝基芐基，鄰硝基芐基，2，6-二氯芐基，三苯甲基等等；成甲硅烷基醚保護(hù)基，例如三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，三異丙基甲硅烷基，異丙基二甲基甲硅烷基，二乙基異丙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基，三芐基甲硅烷基，三苯基甲硅烷基，甲基二苯基甲硅烷基等等；和成酯保護(hù)基，例如甲酰基，乙酰基，氯乙?；?，二氯乙酰基，三氯乙?；?，新戊?；?，苯甲酰基，芐氧羰基，2-溴芐氧羰基等等。
可使用的羧基保護(hù)基包括成酯保護(hù)基，例如甲基，乙基，甲氧基甲基，甲氧基乙氧基甲基，芐氧基甲基，叔丁基，芐基，對(duì)甲氧基芐基，對(duì)硝基芐基，鄰硝基芐基，二苯甲基，三苯甲基，2，2，2-三氯乙基，2-三甲基甲硅烷基乙基，烯丙基，環(huán)己基，環(huán)戊基，苯甲酰甲基等等；成甲硅烷基酯保護(hù)基，例如三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，異丙基二甲基甲硅烷基，二甲基苯基甲硅烷基等等。
羰基保護(hù)基包括形成縮醛-、縮酮-、二硫縮醛-、或二硫縮酮的保護(hù)基，例如二甲基，二乙基，二芐基，二乙?；鹊?；形成任意選擇取代1，3-二噁烷或1，3-二氧戊環(huán)的保護(hù)基，形成1，3-二噻烷或1，3-二硫戊環(huán)的保護(hù)基，以及形成N，N-二甲基，2，4-二硝基苯基和其它取代的腙的保護(hù)基。
脫除這些氨基保護(hù)基、羥基保護(hù)基、羰基保護(hù)基和羧基保護(hù)基的技術(shù)包括使用酸的方法、使用堿的方法、還原法、紫外線法、肼法、苯肼法、N-甲基二硫代氨基甲酸鈉，四丁基氟化銨法、乙酸鈀法、氯化汞法和路易斯酸法。那些常規(guī)方法和/或其它已知方法也可經(jīng)選擇使用。
使用酸的方法是一種水解酰胺、酯、甲硅烷基酯或甲硅烷基醚的普通方法，適用于脫除相應(yīng)種類的保護(hù)基。例如，該方法一般用于用叔丁氧基羰基，對(duì)甲氧基芐氧羰基，二苯甲氧基羰基，9-蒽基甲氧基羰基，1-甲基-1-(4-二苯基)乙氧基羰基，金剛烷基氧基羰基，或三苯甲基保護(hù)的氨基脫保護(hù)，和用甲氧基甲基、叔丁氧基甲基、2-四氫吡喃基、4-甲氧基-4-四氫吡喃基、2-四氫呋喃基或三苯甲基保護(hù)的羥基脫保護(hù)。優(yōu)選的酸包括有機(jī)酸，例如甲酸，三氟乙酸，苯磺酸，對(duì)甲苯磺酸等等和無機(jī)酸，例如鹽酸，氫溴酸，硫酸等等。
象上述使用酸的方法一樣，使用堿的方法是一種水解酰胺、酯或類似鍵的普通方法，適用于脫除相應(yīng)種類的保護(hù)基。例如，用有機(jī)堿脫除用9-芴基甲氧基羰基保護(hù)的氨基比較有利。優(yōu)選的堿包括這樣的無機(jī)堿堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰，氫氧化鈉，氫氧化鉀等等；堿土金屬氫氧化物，例如氫氧化鎂，氫氧化鈣等等；堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉，碳酸鉀等等；堿土金屬碳酸鹽，例如碳酸鎂，碳酸鈣等等；堿金屬碳酸氫鹽，例如碳酸氫鈉，碳酸氫鉀等等；堿金屬乙酸鹽，例如乙酸鈉，乙酸鉀等等；堿土金屬磷酸鹽，例如磷酸鈣，磷酸鎂等等；堿金屬磷酸氫鹽，例如磷酸氫二鈉，磷酸氫二鉀等等；和氨水；以及這樣的有機(jī)堿三甲胺，三乙胺，二異丙基乙胺，吡啶，甲基吡啶，N-甲基吡咯烷，哌啶，N-甲基哌啶，N-甲基嗎啉，1，5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯，1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2.]辛烷，1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-7-十一碳烯等等。
一般用還原法脫除用三氯乙酰，三氟乙酰、鄰硝基苯基乙酰，2，2，2-三氯乙氧基羰基，芐氧羰基，對(duì)硝基芐氧羰基，2，4-二氯芐氧羰基，異煙酰氧基羰基，三苯甲基等等保護(hù)的氨基；脫除用芐基，對(duì)硝基芐基等等保護(hù)的羥基；和脫除用芐氧基甲基，芐基，對(duì)硝基芐基，苯甲酰甲基，2，2，2-三氯乙基，二苯甲基等等保護(hù)的羧基。還原的優(yōu)選方式包括用硼氫化鈉還原，用鋅/乙酸還原，和催化還原。
紫外線法一般用于脫除用鄰硝基芐基保護(hù)的羥基或羧基。
肼法一般用于脫除用鄰苯二甲酰保護(hù)的氨基(例如，鄰苯二甲酰亞胺)。
苯基肼法一般用于脫除用乙酰乙酰基保護(hù)的氨基。
N-甲基二硫代氨基甲酸鈉法一般用于脫除氯乙酰保護(hù)的氨基或羥基。
四丁基氟化銨法一般用于脫除2-三甲基甲硅烷基乙基氨基甲酸酯、甲硅烷基醚或甲硅烷基酯以便根據(jù)情況再生氨基、羥基或羧基。
乙酸鈀法一般用于脫除烯丙基酯以再生羧基。
氯化汞法一般用于脫除用甲硫基甲基保護(hù)的羥基。
路易斯酸法一般用于脫除用2-甲氧基乙氧基甲基保護(hù)的羥基。在其它化合物中，優(yōu)選的路易斯酸包括溴化鋅和四氯化鈦。
由上述反應(yīng)系列生產(chǎn)的中間體、反應(yīng)產(chǎn)物和目的產(chǎn)物可以根據(jù)需要，按照已知純化工序或與之類似的工序分離和提純，例如采用濃縮、減壓濃縮、溶劑萃取、結(jié)晶、重結(jié)晶、再分配和色譜提純。
作為另一種變通生產(chǎn)方法，本發(fā)明的化合物[例如，上款(12)，(13)，(14)，(15)和(16)的化合物]可通過微生物法生產(chǎn)。
可用于實(shí)施本發(fā)明的生產(chǎn)方法的微生物包括由日本NaraPrefecture土壤分離出的芽孢桿菌HC-70(以下有時(shí)稱作菌種HC-70)和由日本Aichi Prefecture土壤分離出的異常芽孢桿菌HC-72(以下有時(shí)稱作菌種HC-72)。
按照常規(guī)方法對(duì)菌種HC-70的分類調(diào)查揭示這種微生物是革蘭氏陽性移動(dòng)性兼性厭氧桿菌，其細(xì)胞尺寸為1.3-1.4微米×3.0-4.2微米。觀察到內(nèi)生孢子的形成。孢子是橢圓體的且孢子的位置是在細(xì)胞的中央；未觀察到溶脹的芽孢囊.作為該菌種的化學(xué)分類特性，其細(xì)胞壁二氨基庚二酸是內(nèi)消旋二氨基庚二酸(內(nèi)消旋-DAP)，主要的甲基萘醌類是甲基萘醌-7(MK-7)，且DNA的G+C含量是35.0摩爾％。主要的細(xì)胞脂肪酸是異-C150，C160反異-C170。按照在Bergey的“系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)指南”(Bergey’Manual of Systematic Bacteriology)第二卷中給定的分類標(biāo)準(zhǔn)，該菌種是芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)。該菌株顯示出肉湯瓊酯上充分生長并水解酪蛋白，明膠和淀粉。
以普通方式對(duì)菌種HC-72進(jìn)行的的分類調(diào)查揭示，這種菌種是革蘭氏陽性移動(dòng)性需氧桿菌，其細(xì)胞尺寸為1.3×3.0-4.2微米。內(nèi)生孢子是橢圓體的且孢子的位置是在細(xì)胞的中央；未觀察到溶脹的芽孢囊。作為該菌種的化學(xué)分類特性，未觀察到內(nèi)消旋二氨基庚二酸(內(nèi)消旋-DAP)作為其細(xì)胞壁成分，類異戊二烯醌是甲基萘醌-7(MK-7)，且DNA的G+C含量是36.8摩爾％。主要的細(xì)胞脂肪酸是異-C150，反異-C161，反異-C171。按照在Bergey的“系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)指南”(Bergey’Manual of Systematic Bacteriology)第二卷中給定的分類標(biāo)準(zhǔn)，該菌種是芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)。此外，沒有發(fā)現(xiàn)由糖生成酸、明膠水解和氯化鈉需求中的任何一種情況。所以，這種微生物被鑒定為異常芽孢桿菌。
上述芽孢桿菌HC-70已于1997年6月20日保藏在Institute forFermentation，Osaka(IFO)，登記號(hào)為IFO 16098。此外，該微生物已于1997年7月2日保藏在National Institute of Bioscience andHuman Technology(NIBH，1-3，Higashi 1-chome，Yatabe-cho，Tsukuba-shi，Ibaraki，日本)，登記號(hào)為FERM BP-6001。
上述異常芽孢桿菌HC-72已于1998年6月1日以登記號(hào)為IFO16179保藏。此外，該微生物以登記號(hào)FERM BP-6385于1998年7月8日保藏在NIBH。
作為微生物所具有的一般特性，芽孢桿菌無論是自發(fā)的還是經(jīng)過誘變處理造成的，都還會(huì)發(fā)生突變。所以，例如通過用X-射線、γ-射線或紫外線照射得到的，或通過用不同誘變物質(zhì)處理后得到的，在含有不同誘變物質(zhì)的介質(zhì)上培養(yǎng)生長得到的，或其它方式得到的許多突變體以及自發(fā)的突變體都可用于本發(fā)明，除非它們完全不能合成與HC-70有關(guān)的物質(zhì)(例如，HC-70I，HC-70II，HC-70III，HC-70I-A，HC-70I-B等等)。
用于本發(fā)明的方法的培養(yǎng)基可以是液體或固體，只要它含有特定的菌種能使用的營養(yǎng)物，不過液體培養(yǎng)基優(yōu)選用于大量生產(chǎn)。該培養(yǎng)基中加入可同化的碳源、可消化的氮源、無機(jī)物和微量營養(yǎng)物。碳源包括但不限于葡糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、糊精、淀粉、甘油、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、油和脂肪(例如，豆油，橄欖油，米糠油，芝麻油，豬油，雞油等等)。氮源包括但不限于肉類提取物、酵母提取物、干燥的酵母、大豆粉、玉米漿、胨、棉籽粉、蔗糖廢蜜、脲、和銨鹽(例如，硫酸銨，氯化銨，硝酸銨，醋酸銨等等)。另外，鈉、鉀、鈣、鎂等等的鹽，其它金屬例如鐵、錳、鋅、鈷、鎳等等的鹽，磷酸、硼酸等等的鹽和有機(jī)酸例如乙酸、丙酸等等的鹽經(jīng)選擇可適量選用。此外，氨基酸(例如，谷氨酸，天冬氨酸，丙氨酸，賴氨酸，纈氨酸，蛋氨酸，脯氨酸等等)，維生素(例如維生素B1和B2、煙酸、維生素B12和C，等等)，以及核酸(例如，嘌呤核苷酸，嘧啶核苷酸及其衍生物)也可以加入。當(dāng)然，對(duì)于調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH來說，可加入無機(jī)酸或有機(jī)酸、堿、或/和緩沖劑。作為消泡劑，也可適量加入油或表面活性劑。
合適的培養(yǎng)法可選自固定培養(yǎng)、搖動(dòng)培養(yǎng)和通氣深層培養(yǎng)。當(dāng)然，對(duì)于大量處理來說，優(yōu)選所謂通氣深層培養(yǎng)。
當(dāng)然，培養(yǎng)條件取決于所用培養(yǎng)基的種類和組成、特定的菌種和所選的培養(yǎng)方法，但優(yōu)選溫育溫度一般是15-37℃，起始pH值約5-9。特別是，培養(yǎng)中期溫度優(yōu)選20-30℃且起始pH值優(yōu)選約6-8。溫育時(shí)間也取決于上述條件，但培養(yǎng)應(yīng)當(dāng)持續(xù)，直至目的化合物的積累達(dá)到最高水平為止。對(duì)于在液體培養(yǎng)基中搖動(dòng)或通氣培養(yǎng)來說，所需的溫育時(shí)間一般約為1-10天。
在上述培養(yǎng)條件下，生產(chǎn)和積累以下將要敘述的化合物HC-70I，II，和III，然后各個(gè)化合物按照它們特定的化學(xué)性質(zhì)被萃取和純化。目的HC-70I，II和III可通過合適的技術(shù)從培養(yǎng)液收集，所述技術(shù)選自一般用于從培養(yǎng)液收集微生物代謝物的方法。例如，由于HC-70I，II和III是水溶性兩性化合物并且多數(shù)情況下出現(xiàn)在培養(yǎng)物上清液中，所以先從肉湯中通過過濾或離心分離除去細(xì)胞。
由此分離的培養(yǎng)物上清液可通過公知的色譜法進(jìn)一步提純，以得到純的HC-70I，II和III。為此目的可采用的色譜固定相包括那些利用對(duì)底物化合物有不同吸附親合力的固定相，例如活化的炭[例如，用于色譜法用的活性炭，顆粒炭“Shirasagi”(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)，等等]，吸附劑樹脂[例如，DIAION HP-20，HP-20S或HP-20SS，SEPABEADS SP-207或SP-850(Mitsubishii化學(xué)工業(yè)有限公司)，Amberlite XAD-I或XAD-II(Rohm & Haas公司，美國)等等]，微晶纖維素[例如，Avicel(Asahi化學(xué)工業(yè)有限公司)，F(xiàn)unacel(Funakoshi有限公司)等等]，和硅膠[例如，Kieselguhr 60(Merck&.Co.，德國)等等]；那些利用特定的官能團(tuán)的固定相，例如陽離子交換樹脂[例如，Amberlite IR-120，IRC-50，或CG-50(Rohm & Haas公司，美國)，Dowex 50W(Dow化學(xué)公司，美國)，DIAION PK-216或UBK-510L(Mitsubishii化學(xué)工業(yè)有限公司)，和CNP-80(Bayer，德國)等等]，陰離子交換樹脂[例如，Amberlite IRA-402，IRA-67，或IRA-68(Rohm & Haas公司，美國)，Dowex 1(Dow化學(xué)公司，美國)，DIAION SA-21A，PA-406，PA-412或WA-30(Mitsubishii化學(xué)工業(yè)有限公司)等等]，離子交換纖維素[CM-纖維素(Pharmacia，瑞典)等等]，離子交換Sephadex[例如，QAE-Sephadex或CM-Sephadex(Pharmacia，瑞典)等等]；以及那些利用分子量差異的固定相，例如分子篩[例如，Sephadex G10或LH-20(Pharmacia，瑞典)等等]。
用作色譜流動(dòng)相的溶劑取決于固定相的種類和特性，例如可以是任何一種以下溶劑或合適的溶劑混合物，所述溶劑的例子是水，堿(例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉，氨水等等)的水溶液，酸(例如鹽酸，硫酸，乙酸，甲酸，磷酸等等)的水溶液，含鹽水溶液(例如，氯化鈉溶液，乙酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液等等)和水混溶性有機(jī)溶劑(例如，甲醇，乙醇，異丙醇，丙酮，乙腈等等)。
為了純化目的化合物，在本發(fā)明的實(shí)施中也可采用制備性高效液體色譜(HPLC)，這比較有利。當(dāng)采用這種方法時(shí)，固定相優(yōu)選是十八烷基硅烷(ODS)系列、聚合物系列或硅膠系列中的一種。作為ODS系列固定相，舉例來說，典型地可提到Y(jié)MC膠(YMC)或TSK膠(Tosoh)。作為聚合物系列固定相，舉例來說，可選擇ODP(Asahi化學(xué)工業(yè)有限公司)，它是十八烷基化聚合物；或NH2P(Asahi化學(xué)工業(yè)有限公司)，它是多胺改性的聚合物。至于流動(dòng)相，水、酸性水溶液、含鹽水溶液、甲醇、乙腈等等可單獨(dú)使用或作為合適的混合物使用。
對(duì)于純化本發(fā)明的目的化合物，結(jié)晶也是有用的技術(shù)。作為結(jié)晶溶劑，水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙腈等等可單獨(dú)使用或作為合適的混合物使用。
HC-70I-A和HC-70I-B也可按照上述同樣方法，由培養(yǎng)(發(fā)酵)液獲得和純化。
按照以下實(shí)施例1和2得到的HC-70I，II和III的物化特性如下。這些化合物有時(shí)分別定義為化合物1，化合物2和化合物3。
HC-70I(化合物1)1)外觀無色晶體2)旋光度-89°(c＝0.53，0.1N HCl，24℃)3)分子量FAB-MS m/z 654(M+H)+4)元素分析(％)(以含1摩爾水計(jì)算)實(shí)測(cè)值C，55.23；H，8.03；N，10.47分析值C，55.43；H，7.95；N，10.425)分子式C31H51N5O106)紫外光譜λ最大(ε)在水中，258納米(310)7)紅外光譜KBr主吸收峰(波數(shù)，厘米-1)
3300，2960，1640，1540，1400，1050，7008)13C-NMR譜DMSO-d6，化學(xué)位移(75MHz，δppm；圖1)172.8，172.6，172.4，172.3，170.7，142.6，128.0，126.5，126.5，71.0，70.9，67.2，60.5，59.1，57.2，51.1，50.9，49.0，41.1，40.5，30.9，30.7，24.0，23.0，21.3，19.3，19.1，18.1，16.89)氨基酸分析在6N鹽酸于110℃水解72小時(shí)后亮氨酸(1摩爾)，纈氨酸(2摩爾)10)顯色反應(yīng)陽性水合茚三酮，Greig-Lieback陰性Ehrlich(吲哚試驗(yàn)試劑)，Sakaguchi11)高效液體色譜(HPLC)柱YMC-Pack ODS-A，A-312，150×6.0毫米(YMC)流動(dòng)相15％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(pH4.5)流速1.0毫升/分鐘檢測(cè)紫外線吸收法，214納米保留時(shí)間16.8分鐘12)薄層色譜法(TLC)固定相硅膠60F254，0.25毫米(Merck，德國)展開劑正丁醇/乙酸/水(12∶3∶5)Rf0.45HC-70II(化合物2)1)外觀無色晶體2)旋光度-69°(c＝0.50，0.1N HCl，24℃)3)分子量FAB-MS m/z 555(M+H)+4)元素分析(％)(以含3摩爾水計(jì)算)實(shí)測(cè)值C，51.44；H，7.84；N，9.32分析值C，51.30；H，7.95；N，9.20
5)分子式C26H42N4O96)紫外光譜λ最大(ε)在水中，257納米(270)7)紅外光譜KBr主吸收峰(波數(shù)，厘米-1)3370，2970，2940，1680，1630，1520，1400，1050，6908)13C-NMR譜DMSO-d6/三氟乙酸(9∶1)，化學(xué)位移(75MHz，δppm；圖2)173.3，173.0，172.7，168.3，142.6，128.7，127.4，127.1，71.9，71.5，68.1，61.2，58.0，52.0，49.5，41.5，40.8，30.5，24.6，23.4，21.9，18.8，17.99)氨基酸分析在6N鹽酸于110℃水解24小時(shí)后亮氨酸(1摩爾)，纈氨酸(1摩爾)10)顯色反應(yīng)陽性水合茚三酮，Greig-Lieback陰性Ehrlich，Sakaguchi11)高效液體色譜(HPLC)柱YMC-Pack ODS-A，A-312，150×6.0毫米(YMC)流動(dòng)相15％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(pH4.5)流速1.0毫升/分鐘檢測(cè)紫外線吸收法，214納米保留時(shí)間8.1分鐘12)薄層色譜法(TLC)固定相硅膠60F254，0.25毫米(Merck，德國)展開劑正丁醇/乙酸/水(12∶3∶5)Rf0.41HC-70III(化合物3)1)外觀無色晶體2)旋光度-67°(c＝0.55，0.1N HCl，24℃)3)分子量FAB-MS m/z 456(M+H)+4)元素分析(％)(以含1摩爾水計(jì)算)實(shí)測(cè)值C，53.14；H，7.14；N，8.98分析值C，53.27；H，7.45；N，8.875)分子式C21H33N3O86)紫外光譜λ最大(ε)在水中，257納米(350)7)紅外光譜KBr主吸收峰(波數(shù)，厘米-1)3390，2970，2930，1660，1540，1400，1070，1050，7008)13C-NMR譜DMSO-d6，化學(xué)位移(75MHz，δppm；圖3)174.3，172.9，172.4，142.7，127.9，126.5，71.2，70.8，67.6，60.9，52.3，51.2，49.0，42.8，41.3，23.9，23.0，21.79)氨基酸分析在6N鹽酸于110℃水解24小時(shí)后亮氨酸(1摩爾)10)顯色反應(yīng)陽性水合茚三酮，Greig-Lieback陰性Ehrlich，Sakaguchi11)高效液體色譜(HPLC)柱YMC-Pack ODS-A，A-312，150×6.0毫米(YMC)流動(dòng)相15％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(pH4.5)流速1.0毫升/分鐘檢測(cè)紫外線吸收法，214納米保留時(shí)間6.0分鐘12)薄層色譜法(TLC)固定相硅膠60F254，0.25毫米(Merck，德國)
展開劑正丁醇/乙酸/水(12∶3∶5)Rf0.35HC-70I，II和III的化學(xué)式如下。
化合物號(hào)R1
化合物1是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70I，實(shí)施例2的化合物)。
化合物2是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70II，實(shí)施例1的化合物)。
化合物3是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70III，實(shí)施例1的化合物)。
其中R1＝NH2的化合物或其鹽可通過使酶作用于化合物1，2，或3或其鹽而制備。為此，可使用的酶包括但不限于外肽酶(例如亮氨酸氨基肽酶)和蛋白酶[例如，Actinase E(Kaken制藥有限公司)]。
此反應(yīng)一般是在水中進(jìn)行的，對(duì)于控制pH來說，可以加入無機(jī)酸或有機(jī)酸，堿或緩沖劑。反應(yīng)溫度不特別嚴(yán)格，除非酶的反應(yīng)受阻，但一般約10-50℃，優(yōu)選20-40℃。反應(yīng)時(shí)間取決于酶的種類和數(shù)量，反應(yīng)溫度，和溶液的pH，但一般為幾分鐘至幾小時(shí)。
其中R1＝NH2的所得化合物(化合物5)的化學(xué)式如下
化合物5是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(實(shí)施例4的化合物)。
由于化合物5在芽孢桿菌HC-70和異常芽孢桿菌HC-72的發(fā)酵液中生成和積累，所以也可以按照上述同樣方法從發(fā)酵液中獲得和提純。
通式(I)的化合物或其鹽下面有時(shí)稱作化合物(I)。
本發(fā)明的式(I)化合物的鹽包括藥用堿加成鹽和酸加成鹽。堿加成鹽包括但不限于堿金屬(例如鈉，鉀等等)的鹽和堿土金屬(例如，鈣，鎂等等)的鹽。酸加成鹽包括但不限于與無機(jī)酸(例如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，磷酸等等)的鹽和與有機(jī)酸(例如，乙酸，丙酸，乳酸，琥珀酸，馬來酸，酒石酸，檸檬酸，葡糖酸，抗壞血酸，苯甲酸，甲磺酸，對(duì)甲苯磺酸，肉桂酸，富馬酸，蘋果酸，草酸等等)的鹽。
通式(I)的化合物的水合物以及酸酐也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。水合物的例子是0.5水合物，1水合物，1.5水合物，2水合物，2.5水合物，3水合物，3.5水合物，4水合物等等。
本發(fā)明的化合物(I)可通過公知方法，例如溶劑萃取、pH變化、相轉(zhuǎn)移或再分配、結(jié)晶、重結(jié)晶和色譜提純分離和純化?；衔?I)的起始化合物或鹽也可通過類似方法分離和提純，但含有它的反應(yīng)混合物可直接提供到目的反應(yīng)。
在本發(fā)明的化合物(I)作為旋光異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、位置異構(gòu)體或旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體存在的情況下，這些異構(gòu)體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且每種這樣的異構(gòu)體可通過已知合成方法或分級(jí)技術(shù)作為單一物質(zhì)提供。例如，當(dāng)本發(fā)明的化合物作為旋光異構(gòu)體存在時(shí)，每種利用化合物的旋光拆分技術(shù)得到的異構(gòu)體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
旋光異構(gòu)體可通過公知方法生產(chǎn)。具體地說，通過使用旋光合成中間體或?qū)Ξa(chǎn)物外消旋混合物進(jìn)行旋光拆分可得到所需旋光異構(gòu)體。
上述旋光拆分可通過公知的技術(shù)，例如以下說明的分級(jí)重結(jié)晶法、手性柱法和非對(duì)映體法實(shí)現(xiàn)。
(1)分級(jí)重結(jié)晶法此法包括使外消旋化合物與旋光化合物成鹽，用分級(jí)結(jié)晶法分離，以及任意選擇地將它中和以提供游離的旋光異構(gòu)體。
(2)手性柱法此法包括往手性柱施用一種外消旋化合物或其鹽。在采用液體色譜法時(shí)，典型工序包括往手性柱施用旋光異構(gòu)體的混合物，例如ENANTIO-OVM(Tosoh公司)，和用水、緩沖劑(例如磷酸鹽緩沖劑)，有機(jī)溶劑(例如乙醇，甲醇，乙腈等等)或這類溶劑的混合物進(jìn)行洗脫，以回收所需旋光異構(gòu)體。在采用氣體色譜時(shí)，使用CP-ChirasilDeXCB(G.L.科學(xué))之類的手性柱可實(shí)現(xiàn)所需的分級(jí)分離。
(3)非對(duì)映體法此法包括使外消旋混合物與旋光試劑反應(yīng)以制備非對(duì)映體混合物，對(duì)混合物進(jìn)行常規(guī)的分級(jí)分離(例如分級(jí)重結(jié)晶法，色譜法等等)以提供單一物質(zhì)，以及對(duì)它進(jìn)一步進(jìn)行化學(xué)處理例如水解以裂解旋光試劑部分。例如當(dāng)本發(fā)明的化合物具有羥基或伯或仲氨基時(shí)，通過底物化合物與旋光有機(jī)酸(例如，MTPA[α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸]，(-)-甲氧基乙酸等等)進(jìn)行縮合反應(yīng)可獲得相應(yīng)的酯或酰胺非對(duì)映體。另一方面，如果本發(fā)明的化合物具有羧基，則酰胺或酯非對(duì)映體可通過使底物化合物與旋光胺或醇試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)而獲得。然后，通過酸水解或堿水解的方法，分離的非對(duì)映體可轉(zhuǎn)化成起始化合物的旋光異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物(I)低毒，具有值得稱道的藥理活性，例如對(duì)由幽門螺桿菌代表的幽門螺桿菌屬細(xì)菌具有很高的抗菌活性，所以能有效地預(yù)防或治療與幽門螺桿菌感染和/或由幽門螺桿菌產(chǎn)生的銨有關(guān)的疾病(例如十二指腸潰瘍，胃潰瘍，胃炎(包括慢性胃炎)，胃癌，胃MALT淋巴瘤，肝腦病變，糖尿病，蕁麻疹)。
所以，含有本發(fā)明的化合物(I)的藥物組合物可作為安全的抗菌劑或作為安全的抗?jié)兯巻为?dú)地或與藥用載體一起通過口服或腸胃外給人和其它哺乳動(dòng)物(例如，犬，貓科動(dòng)物，猴，大鼠，小鼠，馬，牛等等)施用。通常，優(yōu)選口服給藥。
用于口服給藥的劑型包括但不限于片劑(包括糖丸和包衣片劑)，藥丸，粒劑，細(xì)顆粒，粉劑，膠囊(包括軟膠囊)，糖漿，乳液，和懸浮液。腸胃外給藥的劑型包括但不限于注射，灌輸，滴注和栓劑。
舉例來說，本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物是一種含有(a)本發(fā)明的化合物(I)(作為具有例如抗幽門螺桿菌活性的活性成分)，(b)脂質(zhì)和/或多甘油脂肪酸酯和(c)粘性劑(一種與水接觸充分變粘粘著到胃粘膜上的物質(zhì))的組合物。該組合物至少要本身粘著到胃粘膜上和/或再則停留在胃中和以適當(dāng)?shù)乃俾梳尫牌渲兴幕钚猿煞掷缈褂拈T螺桿菌物質(zhì)，從而顯示強(qiáng)大的藥物效果(例如，抗幽門螺桿菌活性)。
上述胃粘膜粘著組合物的例子可以是含有(a)抗幽門螺桿菌物質(zhì)，(b)脂質(zhì)和/或多甘油脂肪酸酯和(c)一種與水接觸變粘的粘性劑的組合物，優(yōu)選組合物還含有(d)一種溶脹粘性劑的物質(zhì)(例如，產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素作為溶脹物質(zhì))。雖然對(duì)其劑型沒有特別限制，但組合物優(yōu)選是固體組合物，特別是含有基質(zhì)的組合物。舉例來說，基質(zhì)可以是包括(a)，(b)多甘油脂肪酸酯和(c)的胃粘膜粘著基質(zhì)，或含有(a)，(b)脂質(zhì)和(c)的胃粘膜粘著基質(zhì)。優(yōu)選的基質(zhì)是含(b)多甘油脂肪酸酯的胃粘膜粘著基質(zhì)。本發(fā)明的胃粘著組合物的優(yōu)選例子是進(jìn)一步包括(d)溶脹粘性劑的物質(zhì)的組合物。
包括所述四種組分(a)，(b)，(c)和/或(d)的胃粘膜粘著基質(zhì)優(yōu)選這樣一種基質(zhì)，即粘性劑分散在含多甘油脂肪酸酯或脂質(zhì)的該基質(zhì)中或一種包覆有粘性劑的基質(zhì)。舉例來說，胃粘膜粘著基質(zhì)的熔點(diǎn)可以是約30℃-約120℃，優(yōu)選約40℃-約120℃。
用于本發(fā)明的多甘油脂肪酸酯是多甘油與脂肪酸的酯，并可以是單-至多酯(二酯，三酯等等)。多甘油脂肪酸酯的特征在于它不發(fā)生多形態(tài)轉(zhuǎn)變或與活性成分進(jìn)行任何物質(zhì)反應(yīng)，能使那些共存成分保持非失活狀態(tài)和長時(shí)間穩(wěn)定。
多甘油定義為“一種每分子含n(環(huán)形)至(n+2)(直鏈形或支鏈形)個(gè)羥基和(n-1)(直鏈形或支鏈形)至n(環(huán)形)個(gè)醚鍵的多元醇”[多甘油酯，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司，1994年10月4日出版]，且在本發(fā)明中可以使用任何直鏈酯或支鏈酯。
例如，可使用下式化合物(I)
(其中n代表不低于2的整數(shù)的聚合度)。n值一般約2至約50，優(yōu)選約2至約20，更佳結(jié)果約2至約10。
多甘油包括但不限于二甘油，三甘油，四甘油，五甘油，六甘油，七甘油，八甘油，九甘油，十甘油，十五甘油，二十甘油，和三十甘油。其中，在多數(shù)情況下使用四甘油，六甘油或十甘油。
脂肪酸包括但不限于各含有約8至約40、優(yōu)選約12至約25、更優(yōu)選約15至約22個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪酸。優(yōu)選的脂肪酸是硬脂酸，油酸，月桂酸，亞油酸，亞麻酸，蓖麻油酸，辛酸，癸酸，或山萮酸。
多甘油脂肪酸酯包括但不限于山萮酸六(四)甘油酯，辛酸單(癸)甘油酯，辛酸二(三)甘油酯，癸酸二(三)甘油酯，月桂酸單(四)甘油酯，月桂酸單(六)甘油酯，月桂酸單(十)甘油酯，油酸單(四)甘油酯，油酸單(六)甘油酯，油酸單(十)甘油酯，油酸二(三)甘油酯，油酸二(四)甘油酯，油酸倍半(十)甘油酯，油酸五(四)甘油酯，油酸五(六)甘油酯，油酸十(十)甘油酯，亞油酸單(七)甘油酯，亞油酸二(三)甘油酯，亞油酸二(三)甘油酯，亞油酸二(四)甘油酯，亞油酸二(六)甘油酯，硬脂酸單(二)甘油酯，硬脂酸單(四)甘油酯，硬脂酸五(四)甘油酯，硬脂酸單(十)甘油酯，硬脂酸三(四)甘油酯，硬脂酸五(六)甘油酯，硬脂酸三(六)甘油酯，硬脂酸十(十)甘油酯，棕櫚酸單(四)甘油酯，棕櫚酸單(六)甘油酯，棕櫚酸單(十)甘油酯，棕櫚酸三(四)甘油酯，棕櫚酸三(六)甘油酯，棕櫚酸倍半(六)甘油酯，棕櫚酸五(四)甘油酯，棕櫚酸五(六)甘油酯，棕櫚酸十(十)甘油酯，以及多甘油聚蓖麻醇酸酯(例如，四甘油聚蓖麻醇酸酯)。
優(yōu)選的多甘油脂肪酸酯包括但不限于例如山萮酸六(四)甘油酯(例如，HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司；Poem J-46BTM，Riken Vitamin公司)，硬脂酸五(四)甘油酯(例如，PS-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)，硬脂酸單(四)甘油酯(例如，MS-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)，硬脂酸五(六)甘油酯(例如，PS-500TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)，硬脂酸單(十)甘油酯，多甘油聚蓖麻醇酸酯(例如，四甘油聚蓖麻醇酸酯等等)(例如CRS-75TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)以及這些甘油酯的混合物。
這些多甘油脂肪酸酯可單獨(dú)使用或作為兩種或多種、優(yōu)選約2或約3種的混合物使用。
多甘油脂肪酸酯的分子量一般約200至約5000，優(yōu)選約300至約3000，更優(yōu)選約2000至約3000。多甘油脂肪酸酯的親水-親油平衡(HLB)值一般約1至約22，優(yōu)選約1至約15，更優(yōu)選約1至約9，更佳結(jié)果約1至約4。彼此HLB值不同的兩種或多種多甘油脂肪酸酯可結(jié)合使用，以提供規(guī)定的HLB值?？筛鶕?jù)需要，通過合理調(diào)節(jié)多甘油脂肪酸酯的HLB而控制活性藥物物質(zhì)的釋放和分解動(dòng)力學(xué)特性。
參照具體活性成分(例如，抗幽門螺桿菌劑等等)，粘性劑，溶脹物質(zhì)(例如產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素等等)，其特定組合以及組合物的目的形式，可以選擇合適的多甘油脂肪酸酯。不過，優(yōu)選使用在大氣溫度(約15℃)下為固體的化合物。舉例來說，多甘油脂肪酸酯的熔點(diǎn)可以是約15℃至約80℃，優(yōu)選約30℃至75℃，更佳結(jié)果約45℃至約75℃。
按照所用的活性成分種類和所用的劑型選擇合適的多甘油脂肪酸酯。一般來說，優(yōu)選聚合度約2至約16的多甘油。特別優(yōu)選范圍約2至約10。優(yōu)選的酯應(yīng)該是脂肪酸與至少一個(gè)(聚合度為+2)的羥基形成了酯鍵，更優(yōu)選一種或多種脂肪酸與不低于總數(shù)的約60％、尤其是不低于約80％多甘油中的羥基形成了酯鍵。脂肪酸優(yōu)選是各含有約6至約22、更優(yōu)選約15至約25、更佳結(jié)果約18至約22個(gè)碳原子的飽和酸。形成酯鍵所涉及的脂肪酸可以是相同種類，也可以是不同種類。
在本發(fā)明生產(chǎn)使用兩種或多種不同多甘油脂肪酸酯混合物的固體組合物中，混合物中也可包括液體多甘油脂肪酸酯，只要最終的組合物在大氣溫度下為固體便可。
當(dāng)多甘油脂肪酸酯用作胃粘膜粘著基質(zhì)時(shí)，多甘油脂肪酸酯的數(shù)量，相對(duì)于組合物的總重，一般為約5至約98％(重量)，優(yōu)選約20至約95％(重量)，更優(yōu)選約40至約95％(重量)，而相對(duì)于組合物中的活性成分，可以是例如約0.01至約15000倍重量，優(yōu)選約0.1至約1000倍重量，更佳結(jié)果約0.1至約100倍重量。
用于本發(fā)明的脂質(zhì)是熔點(diǎn)約40℃至約120℃、優(yōu)選約40℃至約90℃的脂質(zhì)。
脂質(zhì)包括但不限于具有約14至約22個(gè)碳原子的飽和脂肪酸(例如，肉豆蔻酸，硬脂酸，棕櫚酸，山萮酸等等)或其鹽(鈉鹽，鉀鹽等等)；具有約16至約22個(gè)碳原子的高級(jí)醇(例如，鯨蠟醇，硬脂醇等等)；脂肪酸甘油酯，例如上述脂肪酸的一甘油酯、二甘油酯、三甘油酯等等(例如，1-單硬脂精，1-單棕櫚精等等)；油(例如，蓖麻油，棉籽油，牛脂等等，包括相應(yīng)的氫化油類)；蠟(例如，蜂蠟，巴西棕櫚蠟，鯨蠟等等)；烴(例如，石蠟，微晶蠟等等)；和磷脂(例如，氫化卵磷脂等等)。在這些脂質(zhì)中，優(yōu)選油類、蠟類、C14-22飽和脂肪酸，C16-22高級(jí)醇和烴類。更優(yōu)選氫化棉籽油，氫化蓖麻油，氫化豆油，巴西棕櫚蠟，硬脂酸，硬脂醇和微晶蠟。最優(yōu)選氫化蓖麻油或巴西棕櫚蠟。
當(dāng)脂質(zhì)用作胃粘膜粘著基質(zhì)時(shí)，脂質(zhì)的數(shù)量，相對(duì)于組合物的總重，一般為約5至約98％(重量)，優(yōu)選約20至約95％(重量)，更優(yōu)選約40至約95％(重量)，而相對(duì)于組合物中的活性成分，是約0.01至約15000倍重量，優(yōu)選約0.1至約1000倍重量，更佳結(jié)果約0.1至約100倍重量。
上述多甘油脂肪酸酯和脂質(zhì)可以混合物形式使用。例如，可提到多甘油脂肪酸酯與石蠟的組合或多甘油脂肪酸酯與氫化油的組合。具體地說，可提到的有選自山萮酸六(四)甘油酯、硬脂酸五(四)甘油酯、硬脂酸五(六)甘油酯、多甘油聚蓖麻醇酸酯(例如四甘油聚蓖麻醇酸酯等等)、巴西棕櫚蠟、氫化蓖麻油和微晶蠟中的兩個(gè)、三個(gè)或多個(gè)的混合物。
當(dāng)除了所述多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)之外還含有粘性劑的胃粘膜粘著基質(zhì)用于本發(fā)明的組合物時(shí)，多甘油脂肪酸酯和脂質(zhì)的總量，相對(duì)于組合物的總重，一般為約5至約98％(重量)，優(yōu)選約20至約95％(重量)，更優(yōu)選約40至約95％(重量)，而相對(duì)于組合物中的活性成分，為約0.01至約15000倍重量，優(yōu)選約0.1至約1000倍重量，更佳結(jié)果約0.1至約100倍重量。
脂質(zhì)可加入到含多甘油脂肪酸酯的基質(zhì)中。脂質(zhì)是藥理上可接受的不溶于水的物質(zhì)，能調(diào)節(jié)活性成分的分解動(dòng)力學(xué)特性。脂質(zhì)包括上述提到的那些物質(zhì)。
當(dāng)脂質(zhì)和多甘油脂肪酸酯組合使用時(shí)，脂質(zhì)和多甘油脂肪酸酯的數(shù)量只需在不損害對(duì)胃腸道粘膜粘著的范圍內(nèi)，并可以在所述總量的范圍內(nèi)選擇；相對(duì)于多甘油脂肪酸酯，脂質(zhì)的數(shù)量可以是約0.01至約1000倍重量，優(yōu)選約0.1至約200倍重量，更佳結(jié)果約0.1至約100倍重量。
用于本發(fā)明的溶脹物質(zhì)是一種溶脹粘性劑或加速由水造成的粘性劑溶脹的物質(zhì)。
在本發(fā)明中，任何種類的溶脹物質(zhì)都可使用，只要它具有上述特性和能藥用。例如，優(yōu)先選用產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素。
在本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物中，溶脹物質(zhì)的數(shù)量相對(duì)于組合物的總重，約0.5至約50％(重量)，優(yōu)選約1至約40％(重量)，更佳結(jié)果約1至約30％(重量)。
用于本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌多糖是線性不溶于水的多糖(β-1，3-葡聚糖)，由微生物(例如糞產(chǎn)堿菌粘亞種等等)生產(chǎn)，它包括這樣的種類，例如產(chǎn)堿桿菌多糖10C3K，13140，12607，12665，13127，13256，13259和13660[新食品工業(yè)，20，No.10，p.49(1978)]。在產(chǎn)堿桿菌多糖的這些和其它種類中，可以使用作為藥物基料或賦型劑可接受的那些。優(yōu)選的例子是產(chǎn)堿桿菌多糖N(一種食品添加劑)。
產(chǎn)堿桿菌多糖在本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物中的的數(shù)量，相對(duì)于組合物總重，約0.5至約50％(重量)，優(yōu)選約1至約40％(重量)，更優(yōu)選約1至約30％(重量)。
用于本發(fā)明的低取代的羥丙基纖維素是利用羥丙氧基替代纖維素的一些羥基得到的纖維素衍生物，其羥丙氧基含量為5.0至16.0％(按照日本藥典第12版中的規(guī)定)。上述低取代的羥丙基纖維素是有用的，特別優(yōu)選羥丙氧基含量為7.0至13.0％的物質(zhì)(例如，L-HPCTM，Shin-Etsu化學(xué)有限公司)。所以，它們中可以使用那些取代度在上述范圍內(nèi)且粒徑變化的衍生物，例如LH-11TM(Shin-Etsu化學(xué)有限公司，其羥丙氧基含量為10.0至12.9％，在150微米篩下粒徑分布≥98％和在180微米篩上粒徑分布≤0.5％)，LH-20TM(Shin-Etsu化學(xué)有限公司，羥基苯氧基含量為13.0-16.0％，在75微米篩下粒徑分布≥90％和在106微米篩上粒徑分布≤1.0％)，LH-21(Shin-Etsu化學(xué)有限公司，羥基苯氧基含量為10.0-12.9％，在75微米篩下粒徑分布≥90％和在106微米篩上粒徑分布≤1.0％)，LH-22(Shin-Etsu化學(xué)有限公司，羥基苯氧基含量為7.0-9.9％，在75微米篩下粒徑分布≥90％和在106微米篩上粒徑分布≤1.0％)，LH-31(Shin-Etsu化學(xué)有限公司，羥基丙氧基含量為10.0-12.9％，平均粒徑不大于30微米，在45微米篩下粒徑分布≥50％和在75微米篩上粒徑分布≤5.0％)。
優(yōu)選使用LH-22或LH-31。
低取代的羥丙基纖維素在本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物中的數(shù)量，相對(duì)于組合物總重，約0.5至約50％(重量)，優(yōu)選約1至約40％(重量)，更佳結(jié)果是約1至約30％(重量)。
在本發(fā)明中，任何粘性劑都可以使用，只要它與水接觸變得足夠粘，使其自身附著到胃粘膜上且能藥用即可。不過，優(yōu)選用水明顯溶脹并產(chǎn)生高度粘性的那些物質(zhì)。所以，粘性劑包括合成聚合物和天然粘性物質(zhì)。
優(yōu)選的合成聚合物是其2％水溶液的粘度于20℃為約3至約50000厘泊，優(yōu)選約10至約30000厘泊，更佳結(jié)果是約15至約30000厘泊的聚合物。不過，當(dāng)使用中和時(shí)增粘的堿性聚合物或酸性聚合物時(shí)，優(yōu)選的聚合物是于20℃中和之后其0.2％溶液的粘度為約100至約500000厘泊，優(yōu)選約100至約200000厘泊，更佳結(jié)果約1500至約100000厘泊。
粘度值是按照布氏粘度計(jì)于約20℃測(cè)定的。
上述聚合物優(yōu)選是酸性聚合物，包括但不限于含羧基或含硫基的聚合物以及含相應(yīng)的鹽的聚合物。特別優(yōu)選含羧基的聚合物和含羧酸酯鹽的聚合物。
含羧基(包括其鹽)的聚合物優(yōu)選是含丙烯酸或其鹽作為單體單元的丙烯酸系均聚物或共聚物。鹽包括一價(jià)金屬鹽，例如鈉鹽，鉀鹽等等和二價(jià)金屬鹽，例如鎂鹽，鈣鹽，銨鹽等等。
丙烯酸系聚合物，包括其鹽在內(nèi)，包括含羧基的聚合物，其比例約58至63％(重量)，分子量約20×104至約600×104，優(yōu)選約100×104至約600×104，更優(yōu)選約100×104至約500×104。優(yōu)選的丙烯酸系聚合物，包括其鹽在內(nèi)，包括丙烯酸均聚物及其鹽。這樣的聚合物列在日本藥物成分標(biāo)準(zhǔn)(1998年10月)中羧基乙烯基聚合物標(biāo)題下。
所述丙烯酸系聚合物的具體例子有carbomer[卡波泊爾CarbopolTM(以下稱作Carbopol)，The B.F.Goodrich公司]940，934，934P，941，1342，974P，971P(NF XVIII)，EX214等等，HIVISWAKOTM103，104，105，204(Wako Pure化學(xué)公司)，NOVEON AA1TM(The B.F.Goodrich公司)和polycarbophil鈣(USP XXIII))。
天然的粘性劑包括但不限于粘蛋白，瓊脂，明膠，果膠，角叉膠，藻酸鈉，槐豆膠，黃原膠，黃蓍膠，支鏈淀粉，脫乙酰殼多糖，蠟狀淀粉，硫糖鋁(sucralfate)，產(chǎn)堿桿菌多糖，和纖維素及其衍生物(硫酸纖維素，優(yōu)選羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素)。
最優(yōu)選的粘性劑是丙烯酸系聚合物或其鹽。
這些粘性劑可單獨(dú)使用或混合使用。
關(guān)于本發(fā)明的組合物用的粘性劑的數(shù)量，它在胃粘膜粘著基質(zhì)中的數(shù)量例如可以是約0.005至約99％(重量)，優(yōu)選約0.5至約45％(重量)，更優(yōu)選約1至約30％(重量)，特別是約1至約25％(重量)，且更佳結(jié)果約1至約20％(重量)。舉例來說，當(dāng)粘性劑分散在含多甘油脂肪酸酯和或脂質(zhì)的基質(zhì)中時(shí)，粘性劑的數(shù)量約0.005至約95％(重量)，優(yōu)選約0.5至約30％(重量)，更優(yōu)選約1至約25％(重量)，更佳結(jié)果約1至約20％(重量)，以總重量為基準(zhǔn)。當(dāng)基質(zhì)涂有粘性劑時(shí)，粘性劑的比例也是約0.005至約95％(重量)，優(yōu)選約0.5至約30％(重量)，更優(yōu)選約1至約25％(重量)，更佳結(jié)果約1至約20％(重量)，以總重量為基準(zhǔn)。
當(dāng)本發(fā)明的組合物含有產(chǎn)堿桿菌多糖作為溶脹物質(zhì)時(shí)，即使不加入所述的粘性劑，組合物本身能附著到胃腸粘膜上，因?yàn)楫a(chǎn)堿桿菌多糖本身起著粘性劑的作用。在此情況下，產(chǎn)堿桿菌多糖配制用量超過上述定義的范圍，以賦予所需的粘著作用。
包括分散在含多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)的基質(zhì)中的粘性劑的胃粘膜粘著組合物可以是多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)，粘性劑，產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素和活性成分的任意分散體。分散可按照類似于公知技術(shù)進(jìn)行。
本發(fā)明藥物組合物中的化合物(I)的數(shù)量一般為2至85％(重量)，優(yōu)選5至70％(重量)。
含有本發(fā)明化合物(I)的藥物組合物的生產(chǎn)方法包括普通用于制藥領(lǐng)域的那些已知方法。此外，組合物可使用適量的一般用于制藥工業(yè)的賦型劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、表面活性劑、懸浮劑、乳化劑等等生產(chǎn)。
為了生產(chǎn)含化合物(I)的片劑，例如使用所述賦型劑、粘合劑、崩解劑和潤滑劑。為了生產(chǎn)藥丸或粒劑，配有賦型劑、粘合劑和崩解劑。賦型劑還用于生產(chǎn)粉劑或膠囊，而在生產(chǎn)糖漿時(shí)加入甜味劑。在生產(chǎn)乳化液或懸浮液中，加入懸浮劑、表面活性劑和/或乳化劑。賦型劑包括但不限于乳糖，蔗糖，葡糖，淀粉，甘蔗糖，微晶纖維素，干草粉，甘露糖醇，碳酸氫鈉，磷酸鈣，和硫酸鈣。粘合劑包括但不限于5至10％(重量)淀粉溶液，10至20％(重量)阿拉伯膠溶液或明膠溶液，1至5％(重量)黃蓍膠溶液，羧甲基纖維素溶液，藻酸鈉溶液和甘油。崩解劑包括但不限于淀粉和碳酸鈣。潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂，硬脂酸，硬脂酸鈣，和純化的滑石。甜味劑包括但不限于葡糖，果糖，轉(zhuǎn)化糖，山梨糖醇，木糖醇，甘油和單糖漿。表面活性劑包括但不限于月桂酸基硫酸鈉，聚山梨酯-80，山梨糖脂肪酸單酯和聚氧硬脂酸酯-40。懸浮劑包括但不限于阿拉伯膠，藻酸鈉，羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素和斑脫土。乳化劑包括但不限于阿拉伯膠，黃蓍膠，明膠，和聚山梨酯-80。除此之外，在含化合物(I)的所述劑型的生產(chǎn)中也可以適量配入著色劑、防腐劑、香味劑、矯正藥、穩(wěn)定劑、增稠劑和用于藥物應(yīng)用的其它常用添加劑。
以下說明生產(chǎn)本發(fā)明胃粘膜病粘著組合物用的方法實(shí)例。
1.在大氣溫度下為固體的胃粘膜粘著組合物可以按照類似于公知技術(shù)的方式生產(chǎn)。典型方法包括在超過其熔點(diǎn)的溫度下熔融多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)，向熔體中一次或順序加入所述的粘性劑，抗芽孢桿菌劑，和產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素，以便將它們分散在熔體中，以及冷卻分散體。加熱溫度可以是例如約40℃至約150℃，優(yōu)選約50℃至約110℃，更優(yōu)選約50℃至約100℃。此法是用常用的造粒機(jī)進(jìn)行的，且組合物優(yōu)選通過噴霧冷卻例如噴霧冷凝模塑成實(shí)心球(例如，顆粒，細(xì)粒等等)。
噴霧冷凝法一般包括以恒定速率向高速旋轉(zhuǎn)盤(例如約10至約6000rpm，優(yōu)選約900至約6000rpm，更優(yōu)選約1000至約5000rpm)滴加粘性劑、產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素和活性成分在熔融多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)中的混合分散體。旋轉(zhuǎn)盤可以是例如平滑圓盤，典型地是由鋁制成且直徑測(cè)定為約5至約100厘米、優(yōu)選約10至約20厘米。所述熔融分散體的滴加速率根據(jù)所規(guī)定的粒徑加以選擇，一般約1至約1000克/分鐘，優(yōu)選約2至約200克/分鐘，更優(yōu)選約5至約100克/分鐘。由此得到的顆粒確實(shí)是球體，所以在其表面上可形成均勻薄膜，在以后包衣步驟有良好的效率。
一種變通的生產(chǎn)方法包括將粘性劑、產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素和活性成分捏合到多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)中以及將所得分散體造粒。用于此法的溶劑可以是普通類型溶劑(例如，甲醇，乙腈，氯仿等等)。
生產(chǎn)固體組合物的另一變通方法包括使用熔融造粒技術(shù)。典型熔融造粒法包括在接近其熔點(diǎn)溫度，例如由其熔點(diǎn)至低于該熔點(diǎn)約5℃的溫度加熱多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)，將所得熔體造粒，例如上述噴霧冷凝，以及將所得細(xì)顆粒與粘性劑、抗芽孢桿菌劑，和產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素一起在合適的溫度下加熱進(jìn)行懸浮，以提供粘性的基質(zhì)-藥系統(tǒng)。在此情況下，可以避免熱對(duì)于活性成分的干擾。
含有由多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)構(gòu)成并涂以粘性劑的基質(zhì)的組合物可以是單獨(dú)包衣有這種粘性劑或粘性劑與溶脹物質(zhì)(例如，產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素等等)的混合物制劑，優(yōu)選包衣材料只含有粘性劑或粘性劑加產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素。包衣材料可以是含有選自所述多甘油脂肪酸酯、所述脂質(zhì)和所述不溶于水的聚合物中至少一種成分的組合物。當(dāng)與所述組合物的組分不太相容或不相容的粘性劑用于涂層時(shí)，提供的固體組合物有一層其中分散了粘性劑的膜。包衣材料可進(jìn)一步含有前述添加劑。
不溶于水的(疏水)聚合物包括但不限于鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素(日本藥典第十二版)，乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素(ShinEtsuChemicals有限公司)，羧甲基乙基纖維素(Freund工業(yè)有限公司，CMEC，日本藥用成分標(biāo)準(zhǔn)，1986)，乙酸偏苯三酸纖維素(Eastman)，乙酸鄰苯二甲酸纖維素(日本藥典第十二版)，乙基纖維素(Asahi化學(xué)工業(yè)公司)，甲基丙烯酸氨烷基酯共聚物(Rhm-Pharma，EudragitTMRS-100，RL-100，RL-PO，RS-PO，RS-30D，RL-30D)，甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物(Rhm-Pharma，EudragitTML100-55，甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(Rhm-pharma，EudragitTML-100，S-100)，EudragitTML30D-55，EudragitTMNE-30D(Rhm-Pharma)和聚醋酸乙烯(Colorcon)。這些疏水聚合物可單獨(dú)使用或以兩種或多種不同聚合物的混合物使用。
粘性劑在包衣材料中的比例以全部包衣材料的固體級(jí)分為基準(zhǔn)，為約0.005至約100％(重量)，優(yōu)選約0.05至約95％(重量)，更優(yōu)選約0.05至約30％(重量)，更佳結(jié)果約1至約10％(重量)。
當(dāng)至少一種多甘油脂肪酸酯、脂質(zhì)和疏水聚合物與粘性劑結(jié)合用于包衣材料時(shí)，基于包衣材料的固體級(jí)分總重的粘性劑的比例約0.05至約95％(重量)，優(yōu)選約0.5至約95％(重量)，更優(yōu)選約0.5至30％(重量)，特別是5至約30％(重量)，更佳結(jié)果約5至約25％(重量)。
進(jìn)一步對(duì)包衣材料來說，可組合使用選自多甘油脂肪酸酯、脂質(zhì)和疏水聚合物中的兩種或多種成分。在此情況下，基于所有多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)的各重量份，剩余組分以約0.0001至約1000重量份、優(yōu)選約0.01至約100重量份、更優(yōu)選約0.01至約10重量份的比例使用。
可根據(jù)固體組合物的種類和對(duì)胃粘膜所需的粘著強(qiáng)度對(duì)包衣材料量加以選擇。例如，對(duì)于片劑來說，所述固體的包衣材料量可以是約0.1至約30％(重量)，優(yōu)選約0.5至約20％(重量)；而對(duì)于細(xì)顆粒來說，約0.1至約100％(重量)，優(yōu)選約1至約50％(重量)。
需要的話，包衣材料可補(bǔ)充普通添加劑，例如前述添加劑。例如，包衣材料和添加劑可一起或分別加入等等地應(yīng)用。相對(duì)于包衣材料的固體組分，添加劑的比例約0.1至約70％(重量)，優(yōu)選約1至約50(重量)，更優(yōu)選約20至約50％(重量)。
可采用的包衣技術(shù)包括多種公知方法，例如鍋包衣、流化床包衣、輥包衣等等。當(dāng)包衣材料是含有水或有機(jī)溶劑的溶液或分散液時(shí)，也可以利用噴涂法。對(duì)所述水或有機(jī)溶劑的種類沒有特別限制。例如，可以使用醇，例如甲醇、乙醇、異丙醇等等；酮，例如丙酮；和鹵化烴，例如氯仿、二氯甲烷、三氯甲烷等等。
當(dāng)多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)用于包衣時(shí)，通過在加熱下使多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)任選地與其它添加劑一起熔融、用水乳化該熔體、用所得乳液噴涂固體組合物的表面和干燥涂層而生產(chǎn)目的包衣材料組合物。一種變通工序包括向在包衣材料鍋或類似物中預(yù)熱的固體組合物中加入包衣材料，以及熔融展涂包衣材料。
固體組合物一般是在約25℃至約60℃、優(yōu)選約25℃至約40℃的溫度下包衣。
參照包衣方法、包衣材料特性和數(shù)量以及基材固體組合物的特性可合理地選擇包衣時(shí)間。
為確保對(duì)胃腸道粘膜充分粘著，需要的話，胃粘膜粘著固體組合物可進(jìn)一步包衣有常用的胃用包衣材料或水溶性包衣材料。
本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物一般是原樣口服，也可采用合適的制劑形式口服。固體口服劑型包括但不限于細(xì)顆粒、粒劑、藥丸、用制片機(jī)壓制所述細(xì)顆?；蛄┲瞥傻钠瑒┖拖蚝线m的膠囊殼內(nèi)填充所述細(xì)顆?；蛄┲瞥傻哪z囊。在這些制劑中，優(yōu)選細(xì)顆粒和粒劑。
舉例來說，所述細(xì)顆粒的粒徑分布可以是測(cè)得直徑約10至約500微米的顆粒不小于約75％(重量)，大于約500微米的顆粒不大于約5％(重量)，和小于約10微米的顆粒不大于約10％(重量)。優(yōu)選分布為約105至約500微米的約≥75％(重量)，約≥500微米的不大于約5％(重量)，和約≤74微米的不大于約10％(重量)。所述粒劑的粒徑分布可以是例如約500至約1410微米的不小于約90％(重量)，和約≤177微米的不大于約5％(重量)。
2.當(dāng)胃粘膜粘著組合物是作為液體組合物提供時(shí)，這種液體組合物可通過與公知技術(shù)類似的方式生產(chǎn)。典型方法包括使多甘油脂肪酸酯和/或脂質(zhì)(大氣溫度下為液體)、粘性劑、活性成分和溶脹物質(zhì)(例如，產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素等等)一次混合或依次混合，以提供分散體或溶液。
含有這種液體粘著粘膜藥物體系的劑型包括但不限于糖漿、乳液、懸浮液及其膠囊形式。
活性成分(例如，抗幽門螺桿菌劑等等)在本發(fā)明的組合物中的比例約0.005至約95％(重量)、優(yōu)選約1至約95％(重量)，更優(yōu)選約10至約95％(重量)、更佳結(jié)果約10至約50。
本發(fā)明包括化合物(I)或其鹽的藥物組合物(特別是胃粘膜粘著組合物)是穩(wěn)定的，沒有什么毒性，所以可以安全使用。日劑量根據(jù)患者的臨床狀況和體重、化合物的具體種類和給藥途徑而變化；對(duì)于成人患者(體重約60千克)，例如對(duì)與幽門螺桿菌感染有關(guān)的胃潰瘍來說，日劑量為1至500毫克，優(yōu)選約10至200毫克活性成分(化合物(I)或其鹽)。
在本發(fā)明的藥物組合物中，化合物(I)可以與一種或多種其它抗菌或/和抗?jié)儎┮黄鸾M合使用。
所以，可一起包含的其它抗菌劑包括但不限于硝基咪唑類(例如，替硝唑和甲硝唑)，四環(huán)素類(例如，四環(huán)素，多西霉素，和米諾環(huán)素)，青霉素類(例如，羥氨芐青霉素，氨芐青霉素和美洛西林)，頭孢菌素類(例如，頭孢克洛，頭孢羥氨芐，頭孢唑林，頭孢呋辛，頭孢呋辛酯，頭孢氨芐，頭孢泊肟酯，頭孢他啶和頭孢曲松)，卡巴培南類(carbapenems)(例如，亞胺培南和美羅匹寧)，氨基苷類(例如，巴龍霉素)，大環(huán)內(nèi)酯類(例如，紅霉素，克紅霉素和阿齊紅霉素)，林可酰胺類(例如克林霉素)，利福霉素類(例如，利福平)和硝基呋喃妥因。作為與化合物(I)組合使用的抗?jié)兯?，可提到胃質(zhì)子泵抑制劑(例如，蘭索拉唑和奧美拉唑，泮托拉唑，雷貝拉唑，來米拉唑)和H2受體拮抗劑(例如，雷尼替丁，西咪替丁和法莫替丁)。
上述其它的抗菌劑和/或抗?jié)兯幙梢詢煞N或多種組合使用。在這種組合藥物治療中，所述其它抗菌劑或藥物的日劑量(對(duì)成人)為1至500毫克，優(yōu)選5至200毫克，所述其它抗?jié)兯幍娜談┝?對(duì)成人)為0.5至1000毫克，優(yōu)選1至500毫克。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式以下實(shí)施例、試驗(yàn)例和配制例只用于更具體地說明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的范圍作出限制。在這些實(shí)施例中，百分?jǐn)?shù)(％)意指重量/體積百分?jǐn)?shù)，除非另外說明。溶劑的混合比是體積比，除非另外指出。核磁共振譜是使用Bruker AC-300光譜儀或Varian gemini 200光譜儀記錄的。
實(shí)施例1(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70II，化合物2)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70III，化合物3)在由葡萄糖0.1％、胰蛋白胨0.5％，酵母提取物0.25％，和瓊脂1.5％構(gòu)成的斜面培養(yǎng)基上充分生長的一菌環(huán)芽孢桿菌HC-70用于接種裝有500毫升種子培養(yǎng)基(pH＝7.0)的2升Sakaguchi燒瓶，所述培養(yǎng)基由葡萄糖2.0％，可溶淀粉3.0％，玉米漿0.3％，大豆面1.0％，聚蛋白胨0.5％，酵母提取物0.1％，麥片瓊脂0.2％，氯化鈉0.3％和沉淀碳酸鈣0.5％構(gòu)成，而且溫育是在往返式搖床上于24℃進(jìn)行2天。500毫升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到裝有120升生產(chǎn)培養(yǎng)基(pH＝6.5)的200升發(fā)酵器中，生產(chǎn)培養(yǎng)基由葡萄糖0.5％、糊精5.0％、大豆面3.5％、酵母提取物0.5％、沉淀碳酸鈣0.7％、ACTOCOLTM31-56(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)0.05％和硅油0.05％構(gòu)成，而且發(fā)酵是于溫度22℃和內(nèi)壓1.0千克/平方厘米，在120升/分鐘通氣下和120rpm攪拌下進(jìn)行42小時(shí)。
將所得培養(yǎng)液(120升)調(diào)節(jié)到pH＝7并用助濾劑(Radiolite 600，Showa化學(xué)工業(yè)公司)過濾。濾液(130升)調(diào)節(jié)到pH＝7并進(jìn)行HP-20(7升)柱色譜提純。水(21升)洗色譜柱后，用30％(體積/體積)異丙醇/水(28升)進(jìn)行洗脫。濃縮洗脫液，殘余物用水稀釋到30升體積并進(jìn)行CNP-80(H-型，15升)柱色譜提純。水(45升)洗色譜柱后，用2N-氨水(53升)洗脫。濃縮洗脫液并進(jìn)行PA-412(OH-形式，2升)柱色譜提純。依次用水(6升)和1M氯化鈉/水(2升)洗滌色譜柱并用1M氯化鈉/水(10升)和1N鹽酸(4升)依次洗脫。洗脫液調(diào)節(jié)到pH7，并進(jìn)行HP-20(1升)柱色譜提純。水(3升)洗色譜柱和用30％(體積/體積)異丙醇/水(3.4升)洗脫。濃縮洗脫液，調(diào)節(jié)到pH7，并進(jìn)行HP-20S(400毫升)柱色譜提純。水(1.2升)洗色譜柱后，用5％(體積/體積)異丙醇/水(1.2升)和10％(體積/體積)異丙醇/水(1.2升)依次洗脫。濃縮5％(體積/體積)異丙醇/水洗脫液并進(jìn)行HP-20SS(100毫升)柱色譜提純。用水(200毫升)洗滌該色譜柱并用水(100毫升)、2％(體積/體積)異丙醇/水(300毫升)和5％(體積/體積)異丙醇/水(300毫升)依次洗脫。濃縮洗脫液并讓它于7℃靜置，收集結(jié)晶，得到HC-70III(化合物3；1.3克)。濃縮來自HP-20S(400毫升)柱的10％(體積/體積)異丙醇/水洗脫液，加入甲醇之后，讓濃縮液于7℃靜置并通過過濾收集所得晶體(1.7克)。將這種晶體用水重結(jié)晶兩遍。以此方式，得到主要由HC-70II構(gòu)成的晶體(1.3克)。在這種晶體中，719毫克進(jìn)行HP-20S(70毫升)柱色譜提純。色譜柱用水(210毫升)、2％(體積/體積)異丙醇/水(210毫升)和5％(體積/體積)異丙醇/水(210毫升)洗滌，并用10％(體積/體積)異丙醇/水(420毫升)洗脫。濃縮HC-70II級(jí)分，并讓它于7℃靜置，所得晶體通過過濾回收，得到HC-70II(化合物2；479毫克)。
實(shí)施例2
(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70I，化合物1)在由葡萄糖0.1％、胰蛋白胨0.5％，酵母提取物0.25％，和瓊脂1.5％構(gòu)成的斜面培養(yǎng)基上充分生長的一菌環(huán)芽孢桿菌HC-70用于接種裝有500毫升種子培養(yǎng)基(pH＝7.0)的2升無菌Sakaguchi燒瓶，所述培養(yǎng)基由葡萄糖2.0％，可溶淀粉3.0％，玉米漿0.3％，大豆面1.0％，聚蛋白胨0.5％，酵母提取物0.1％，麥片瓊脂0.2％，氯化鈉0.3％和沉淀碳酸鈣0.5％構(gòu)成，而且溫育是在往返式搖床上于24℃進(jìn)行2天。500毫升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到裝有120升生產(chǎn)培養(yǎng)基(pH＝6.5)的200升發(fā)酵器中，生產(chǎn)培養(yǎng)基由葡萄糖0.5％、糊精5.0％、大豆面3.5％、酵母提取物0.5％、沉淀碳酸鈣0.7％、ACTOCOLTM31-56(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)0.05％和硅油0.05％構(gòu)成，而且發(fā)酵是于溫度22℃和內(nèi)壓1.0千克/平方厘米，在120升/分鐘通氣下和120rpm攪拌下進(jìn)行24小時(shí)。
兩批相當(dāng)量的所得發(fā)酵液(120升)用助濾劑(Radiolite 600)過濾。濾液(245升)調(diào)節(jié)到pH＝6并進(jìn)行HP-20(15升)柱色譜提純。水(45升)洗色譜柱后，用30％(體積/體積)異丙醇/水(60升)進(jìn)行洗脫。洗脫液進(jìn)行CNP-80(H-型，20升)柱色譜提純，水(60升)洗色譜柱后，用2N-氨水(80升)洗脫。濃縮洗脫液，調(diào)節(jié)到pH＝6，并進(jìn)行HP-20(2.4升)柱色譜提純。依次用水(7.2升)和5％(體積/體積)異丙醇/水(7.2升)洗滌色譜柱之后，用10％(體積/體積)異丙醇/水(7.2升)和20％(體積/體積)異丙醇/水(11.5升)洗脫。濃縮洗脫液，并依次通過IR-120(鈉-型，1.5升)，IRA-67(羥基-型，1.5升)和SP-850(2升)柱。水(8升)洗之后，進(jìn)一步用0.2N氨水(2升)，水(6升)和10％(體積/體積)異丙醇/水(2升)以上述順序洗滌SP-850(2升)色譜柱。然后，用10％(體積/體積)異丙醇/水(4升)洗脫。濃縮洗脫液并讓它于7℃靜置，并通過過濾收獲所得結(jié)晶(1.4克)。在這種晶體中，1.2克進(jìn)行HP-20(150毫升)柱色譜提純。色譜柱用水(450毫升)和2％(體積/體積)異丙醇/水(450毫升)依次洗滌之后，用5％(體積/體積)異丙醇/水(900毫升)，10％(體積/體積)異丙醇/水(900毫升)和15％(體積/體積)異丙醇/水(450毫升)依次洗脫。濃縮HC-70I級(jí)分，并讓它于7℃靜置，并回收所得晶體，得到HC-70I(化合物1；199毫克)。
實(shí)施例3(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸酯鹽酸鹽(HC-70II一鹽酸鹽，化合物4)向HC-70II(化合物2；200毫克)中加入0.1N鹽酸(3.4毫升)和水(60毫升)，并將混合物升溫制備溶液。將此溶液通過DISMIC-25CS(0.45微米，Toyo Roshi)過濾并凍干濾液，得到HC-70II一鹽酸鹽(化合物4；199毫克)。
元素分析(C26H42N4O9·HCl·2.5H2O)實(shí)測(cè)值C，48.93；H，7.18；N，8.86；Cl，5.64分析值C，49.09；H，7.61；N，8.81；Cl，5.57實(shí)施例4(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)在磷酸鹽緩沖液(40毫摩爾，pH8；47.5毫升)中溶解HC-70III(化合物3；190毫克)，然后加入氯化鈷(1摩爾，0.19毫升)和Actinase E(19毫克，Kaken藥品公司)的水溶液，并于37℃反應(yīng)2小時(shí)。此反應(yīng)混合物通過濾紙(2號(hào)，Toyo Roshi)過濾，并將濾液進(jìn)行HP-20(50毫升)柱色譜提純。水(50毫升)洗色譜柱，用水(100毫升)和20％(體積/體積)異丙醇/水(200毫升)依次洗脫。濃縮洗脫液和凍干，得到粗粉(149毫克)。
將上述粗粉進(jìn)行制備HPLC[柱YMC-Pack SH-363-15，ODS(YMC)，流動(dòng)相5％(體積/體積)乙腈/0.02摩爾磷酸鹽緩沖劑(pH4.5)，流速12毫升/分鐘]。將400-600毫升級(jí)分混合，pH調(diào)節(jié)到7并減壓濃縮到120毫升。濃縮物在HP-20(60毫升)柱上進(jìn)行色譜提純，且在用水(180毫升)洗滌后，用20％(體積/體積)異丙醇/水(240毫升)洗脫。洗脫液經(jīng)濃縮和凍干，得到化合物5，為白色粉末(103毫克)。
13C-NMR(DMSO-d6，δppm)174.9，172.3，143.4，127.9，126.3，126.2，71.4，70.8，66.6，60.9，53.3，49.7，43.1元素分析(C15H22N2O7·1.5H2O)實(shí)測(cè)值C，49.11；H，6.78；N，7.89分析值C，48.78；H，6.82；N，7.58實(shí)施例5(使用異常芽孢桿菌HC-72獲取HC-70III)在由葡萄糖0.1％、胰蛋白胨0.5％，酵母提取物0.25％，和瓊脂1.5％構(gòu)成的斜面培養(yǎng)基上充分生長的一菌環(huán)異常芽孢桿菌HC-72用于接種裝有500毫升種子培養(yǎng)基(pH＝7.0)的2升Sakaguchi燒瓶，所述培養(yǎng)基由葡萄糖2.0％，可溶淀粉3.0％，玉米漿0.3％，大豆面1.0％，聚蛋白胨0.5％，酵母提取物0.1％，氯化鈉0.3％和沉淀碳酸鈣0.5％構(gòu)成，而且溫育是在往返式搖床上于28℃進(jìn)行1天。500毫升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到裝有120升生產(chǎn)培養(yǎng)基(pH＝7.0)的200升發(fā)酵器中，生產(chǎn)培養(yǎng)基由葡萄糖2.0％、可溶淀粉3.0％、玉米漿0.3％，大豆面1.0％，聚蛋白胨0.5％，酵母提取物0.1％，氯化鈉0.3％，沉淀碳酸鈣0.5％，ACTOCOLTM31-56(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)0.05％和硅油0.05％構(gòu)成，而且溫育是于溫度24℃和內(nèi)壓1.0千克/平方厘米、120升/分鐘通氣和120rpm攪拌下進(jìn)行48小時(shí)。10升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到2000升裝有1200升生產(chǎn)培養(yǎng)基(pH7.0)的發(fā)酵器中，所述培養(yǎng)基由葡萄糖0.5％，肌醇1.0％，大豆面5.0％，玉米漿1.0％，ACTOCOLTM31-56(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)0.05％和硅油0.05％構(gòu)成，而且溫育是于溫度28℃和內(nèi)壓1.0千克/平方厘米、840升/分鐘通氣和30rpm攪拌下進(jìn)行114小時(shí)。
所得發(fā)酵液(1200升)調(diào)節(jié)到PH5，加入絮凝劑
進(jìn)行絮凝。然后，發(fā)酵液用助濾劑(Radiolite 600)過濾。濾液(1200升)調(diào)節(jié)到pH5并進(jìn)行活性炭(Granular Shirasagi，25升)和SP-850(100升)柱色譜提純，再用水(300升)洗滌。單個(gè)的SP-850柱依次用0.1N氫氧化鈉/水(300升)，水(300升)，0.1N硫酸(300升)和水(300升)洗滌，并用25％(體積/體積)異丙醇/水(400升)進(jìn)行洗脫。HC-70III級(jí)分調(diào)節(jié)到pH4.5，并進(jìn)行UBK-510L(鈉-型，150升)柱色譜提純。水(150升)洗色譜柱后，用0.01N-氨水(600升)進(jìn)行分級(jí)洗脫。HC-70III級(jí)分調(diào)節(jié)到pH8.0，并以所述順序柱式通過PK-216(鈉-型，25升)和IRA-67(CH3COO-型，25升)，然后用水(100升)洗滌。合并流出物和洗液，調(diào)節(jié)到pH5，濃縮，并于7℃靜置。通過過濾收獲結(jié)晶，得到HC-70III(化合物3；380克)。
實(shí)施例6(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-異亮氨酰)氨基己酰-L-亮氨酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70I-A，化合物1A)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(HC-70I-B，化合物1B)在由葡萄糖0.1％、胰蛋白胨0.5％，酵母提取物0.25％，和瓊脂1.5％構(gòu)成的斜面培養(yǎng)基上充分生長的一菌環(huán)芽孢桿菌HC-70用于接種裝有500毫升種子培養(yǎng)基(pH＝6.5)的2升Sakaguchi燒瓶，所述培養(yǎng)基由葡萄糖2.0％，可溶淀粉3.0％，玉米漿0.3％，大豆面1.0％，聚蛋白胨0.5％，酵母提取物0.1％，氯化鈉0.3％和沉淀碳酸鈣0.5％構(gòu)成，而且溫育是在往返式搖床上于24℃進(jìn)行2天。500毫升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到裝有120升生產(chǎn)培養(yǎng)基(pH＝6.5)的200升發(fā)酵器中，生產(chǎn)培養(yǎng)基由糊精5.0％、葡萄糖0.5％、大豆面3.5％、酵母提取物0.5％、沉淀碳酸鈣0.5％、ACTOCOLTM31-56(Takeda化學(xué)工業(yè)有限公司)0.05％和硅油0.05％構(gòu)成，而且發(fā)酵是于溫度22℃和內(nèi)壓1.0千克/平方厘米、120升/分鐘通氣和120rpm攪拌下進(jìn)行42小時(shí)。
兩批相當(dāng)量的所得發(fā)酵液(120升)用助濾劑(Radiolite 600)過濾。濾液(250升)調(diào)節(jié)到pH＝6并進(jìn)行HP-20(15升)柱色譜提純。水(45升)洗色譜柱后，用30％(體積/體積)異丙醇/水(60升)進(jìn)行洗脫。洗脫液進(jìn)行CNP-80(H-型，20升)柱色譜提純，且水(60升)洗色譜柱后，用2N-氨水(80升)洗脫。濃縮洗脫液，調(diào)節(jié)到pH6，并以所述順序柱式通過IR-120(NH4-型，1.5升)，IRA-67(OH-型，1.5升)和SP-850(2升)，然后用水(8升)洗滌。SP-850(2升)柱單獨(dú)依次用0.2N氨水(2升)，水(6升)，0.1N鹽酸(2升)，水(6升)，和5％(體積/體積)異丙醇/水(6升)以上述順序洗滌，并用20％(體積/體積)異丙醇/水(8升)和30％(體積/體積)異丙醇/水(6升)進(jìn)行分級(jí)洗脫。然后，將含有HC-70I-A和HC-70I-B的級(jí)分(11.5升)以所述順序直列通過IR-120(NH4-型，1.5升)和IRA-67(CH3COO-型，0.5升)。流出物經(jīng)濃縮并于7℃靜置，并通過過濾回收所得晶體(9.6克)。在這種晶體中，4.0克溶于N，N-二甲基甲酰胺并進(jìn)行制備HPLC[儀器LC-300G，柱100Φ×1000L(毫米)(KuritaWater Industries Ltd.)，固定相YMC.GEL KE-ODS-10S(YMC)，流動(dòng)相17％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(pH4.5)，流速30毫升/分鐘]，得到HC-70I-A級(jí)分(60-85分鐘)和HC-70I-B級(jí)分(87-100分鐘)。濃縮HC-70I-A級(jí)分并進(jìn)行HP-20(100毫升)柱色譜提純。用水(300毫升)洗滌色譜柱之后，用20％(體積/體積)異丙醇/水(600毫升)和0.1N氨水/20％(體積/體積)異丙醇/水(600毫升)進(jìn)行分級(jí)洗脫。濃縮HC-70I-A級(jí)分(600毫升)并讓它靜置在7℃且所得晶體通過過濾進(jìn)行收集，得到HC-70I-A(化合物1A，249毫克)。由制備HPLC柱洗脫出的HC-70I-B級(jí)分(0.4升)經(jīng)濃縮和讓它靜置在7℃，所得晶體通過過濾回收得到HC-70I-B(化合物1B；400毫克)。
HC-70I-A(化合物1A)旋光度-67°(c＝0.50，0.1N HCL，21℃)FAB-MSm/z 668(M+H)+元素分析(％)(以含有2摩爾水計(jì)算)實(shí)測(cè)值C，54.54；H，8.16；N，10.12
分析值C，54.61；H，8.16；N，9.95分子式C32H53N5O1013C-NMR光譜(DMSO-d6中，172.7，172.4，172.3，172.2，170.8，142.6，127.9，126.5，71.0，70.8，67.2，60.5，58.8，56.5，51.1，50.8，49.0，41.2，40.5，36.7，30.8，24.3，24.0，23.1，21.3，19.0，16.9，15.3，10.8氨基酸分析在6N鹽酸中于110℃水解72小時(shí)之后進(jìn)行分析。
亮氨酸(1摩爾)，異亮氨酸(1摩爾)，纈氨酸(1摩爾)高效液體色譜(HPLC)柱YMC-Pack ODS-A，A312，150×6.0毫米(YMC)流動(dòng)相15％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(PH4.5)流速1.0毫升/分鐘檢測(cè)紫外線吸收法，214納米保留時(shí)間27分鐘薄層色譜法(TLC)固定相硅膠60F254，0.25毫米(Merck，德國)展開劑正丁醇/乙酸/水(12∶3∶5)Rf0.51HC-70I-B(化合物1B)旋光度-75°(c＝0.50，0.1N HCL，21℃)FAB-MSm/z 668(M+H)+元素分析(％)(以含3.5摩爾水計(jì)算)實(shí)測(cè)值C，52.59；H，8.03；N，9.78分析值C，52.59；H，8.27；N，9.58分子式C32H53N5O1013C-NMR光譜(in DMSO-d6，δppm)172.8，172.5，172.3，171.9，142.6，128.0，126.4，71.0，70.8，67.2，60.5，59.0，51.0，50.7，49.1，41.2，40.9，40.4，30.8，24.1，23.1，22.9，21.6，21.3，19.0，16.9
氨基酸分析在6N鹽酸中于110℃水解72小時(shí)之后進(jìn)行分析亮氨酸(2摩爾)，纈氨酸(1摩爾)高效液體色譜(HPLC)柱YMC-Pack ODS-A，A312，150×6.0毫米(YMC)流動(dòng)相15％(體積/體積)乙腈/0.02M磷酸鹽緩沖液(pH 4.5)流速1.0毫升/分鐘檢測(cè)紫外線吸收法，214納米保留時(shí)間39分鐘薄層色譜法(TLC)固定相硅膠60F254，0.25毫米(Merck，德國)展開劑正丁醇/乙酸/水(12∶3∶5)Rf0.54實(shí)施例7(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-乙酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸一鈉鹽(化合物6)HC-70III(化合物3；50毫克)溶于碳酸氫鉀(50毫摩爾，20毫升)水溶液中，然后加入乙酸酐(22微升)，于室溫反應(yīng)1小時(shí)。此反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)到pH 6.5并進(jìn)行HP-20(5毫升)柱色譜提純。水(5毫升)洗色譜柱之后，用水(10毫升)和30％(體積/體積)異丙醇/水(30毫升)洗脫。濃縮洗脫液并凍干，得到標(biāo)題化合物(化合物6；49毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6，δppm)0.84(3H，d，J＝6.4Hz)，0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，1.44(2H，t，J＝7.2Hz)，1.57(1H，m)，1.83(3H，s)，2.53(2H，d，J＝6.8Hz)，3.45(2H，m)，3.48(1H，d，J＝9.8Hz)，3.76(1H，d，J＝9.8Hz)，3.95(1H，qlike)，4.12(1H，s)，4.30(1H，q like)，5.11(1H，q like)，7.16(1H，m)，7.23(2H，t like)，7.32(1H，d，J＝7.0Hz)，7.33(2H，t like)，8.05(1H，d，J＝8.3Hz)，8.75(1H，d，J＝7.7Hz).
FAB-MSm/z 536 (M+H)+
實(shí)施例8(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸甲酯一鹽酸鹽(化合物7)HC-70III(化合物3；50毫克)溶于甲醇(10毫升)，然后加入鹽酸-甲醇試劑10(10毫升，Tokyo Kasei Kogyo)，并于室溫反應(yīng)16小時(shí)。在氮?dú)庵?，將此反?yīng)混合物濃縮至干，用水(10毫升)稀釋，調(diào)節(jié)到pH 6.5，進(jìn)一步用水(40毫升)洗滌，并進(jìn)行HP-20(10毫升)柱色譜提純。色譜柱用水(30毫升)和30％(體積/體積)異丙醇/水(10毫升)洗滌，然后，用30％(體積/體積)異丙醇/水(20毫升)和50％(體積/體積)異丙醇/水(20毫升)洗脫。濃縮洗脫液并凍干，得到標(biāo)題化合物(化合物7；34毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6，δppm)0.86(3H，d，J＝6.6Hz)，0.89(3H，d，J＝6.7Hz)，1.24(1H，ddd，J＝4.8，9.2，13.5Hz)，1.46(1H，ddd，J＝4.4，9.0，13.5Hz)，1.75(1H，m)，2.84(1H，dd，J＝7.4，15.8Hz)，2.91(1H，dd，J＝6.8，15.8Hz)，3.40-3.48(3H，m)，3.51(3H，s)，3.76(1H，m)，3.97(1H，qlike)，4.11(1H，br d，J＝4.3Hz)，4.56(1H，d，J＝6.3Hz)，4.63(1H，br s)，4.90(1H，br d，J＝6.0Hz)，5.24(1H，brd，J＝7.0Hz)，5.27(1H，q like)，7.20-7.37(5H，m)，7.45(1H，br d，J＝7.8Hz)，8.12(1H，br d，J＝8.9Hz).
FAB-MSm/z 470(M+H)+參考例1(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酸(De-β_Phe-HC-70III)HC-70III(化合物3；910毫克)溶于0.5N氫氧化鈉/水(200毫升)中并將溶液于37℃攪拌24小時(shí)。此反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)到pH 5并進(jìn)行SP-207(100毫升)柱色譜提純。水(300毫升)洗滌色譜柱，合并流出物和洗液并進(jìn)行活性炭(Granular Shirasagi，70毫升)柱色譜提純。水(210毫升)洗滌色譜柱之后，用10％(體積/體積)異丙醇/水(210毫升)洗脫。濃縮洗脫液并柱式通過Sephadex G-10(600毫升)，用水(600毫升)分步洗脫。含有De-β-Phe-HC-70III的級(jí)分濃縮至干，殘余物用水(2毫升)和乙醇(4毫升)洗滌并于7℃靜置。所得結(jié)晶通過過濾收獲，得到標(biāo)題化合物(De-β-Phe-HC-70III；300毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6，δppm)0.86(3H，d，J＝7.1Hz)，0.89(3H，d，J＝7.3Hz)，1.36(1H，m)，1.49(1H，m)，1.67(1H，m)，3.30(1H，dd，J＝3.9，9.3Hz)，3.38(1H，dd，J＝6.3，9.8Hz)，3.43(1H，dd，J＝9.3，9.8Hz)，3.58(1H，t like)，3.70(1H，d，J＝9.3Hz)，3.85(1H，d，J＝3.9Hz)，4.05(1H，dlike)，7.90(1H，d，J＝8.6Hz).
FAB-MSm/z 309(M+H)+參考例2(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酸二苯基甲酯向(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酸(300毫克)的水(20毫升)和四氫呋喃(5毫升)溶液中加入氯甲酸芐基酯(0.167毫升)和碳酸氫鈉(245毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸除四氫呋喃之后，水層用1N鹽酸(3毫升)酸化并用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌并用無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮后，將殘余物溶于甲醇(10毫升)，然后加入二苯基重氮甲烷(400毫克)。整體于室溫?cái)嚢?4小時(shí)并減壓濃縮。對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-甲醇(10∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(495毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.86-0.90(6H，m)，1.49-1.76(3H，m)，3.62-3.69(2H，m)，3.83(1H，m)，3.99(1H，m)，4.16-4.27(2H，m)，4.35(1H，m)，4.56(1H，d，J＝1.8Hz)，5.05-5.08(2H，m)，6.91(1H，s)，7.24-7.38(15H，m).
參考例3(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酸二苯基甲酯向(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酸二苯基甲酯(200毫克)的吡啶(5毫升)溶液中加入乙酸酐(3毫升)和二甲基氨基吡啶(40毫克)且混合物于室溫?cái)嚢?6小時(shí)。減壓濃縮后，向濃縮物中加入1N鹽酸(10毫升)并將整體用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它通過硅膠柱進(jìn)行色譜提純，然后用乙酸乙酯-己烷(1∶2)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(256毫克)。
1H-NMR(CDCl3)δ0.91-0.95(6H，m)，1.46-1.69(3H，m)，1.81(3H，s)，1.98(3H，s)，2.07(3H，s)，2.17(3H，s)，3.86(1H，dd，J＝11.4Hz，6.6Hz)，3.99-4.17(2H，m)，4.47(1H，m)，5.01-5.09(2H，m)，5.22(1H，d，J＝1.8Hz)，5.40(1H，d，J＝9.6Hz)，5.52(1H，d，J＝9.6Hz)，6.37(1H，d，J＝8.8Hz)，6.76(1H，s)，7.26-7.34(16H，m).
參考例4(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酸(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酸二苯基甲酯(270毫克)溶于三氟乙酸(5毫升)，溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓濃縮后，將殘余物通過硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-甲醇(10∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(214毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92-0.96(6H，m)，1.50-1.67(3H，m)，1.96(3H，s)，2.04(3H，s)，2.06(3H，s)，2.11(3H，s)，3.83(1H，m)，4.11-4.23(3H，m)，4.52(1H，m)，4.95(1H，m)，5.07(1H，m)，5.36(1H，d，J＝10.0Hz)，5.46(1H，d，J＝10.0Hz)，7.28-7.32(5H，m).
實(shí)施例9(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(2.00克)的水(50毫升)溶液中加入1N鹽酸(4.83毫升)?；旌衔锿ㄟ^濾膜過濾，濾液減壓濃縮。用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(1.84克)。
1H-NMR(CD3OD)δ1.02(3H，d，J＝6.4Hz)，1.03(3H，d，J＝6.4Hz)，1.60-1.80(3H，m)，2.85(1H，dd，J＝16.0Hz，7.0Hz)，3.65-4.40(7H，m)，5.30-5.50(1H，m)，7.20-7.45(5H，m)，8.42(1H，d，J＝8.6Hz).
實(shí)施例10(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽(1.84克)的甲醇(40毫升)溶液中加入二苯基重氮甲烷(1.45克)的甲醇(20毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入乙酸(0.1毫升)之后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取。萃取液分別用碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，乙酸乙酯溶液用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它用硅膠柱色譜提純。用乙酸乙酯-甲醇(2∶1)洗脫得到標(biāo)題化合物(2.05克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93(3H，d，J＝5.0Hz)，0.96(3H，d，J＝4.8Hz)，1.10-1.90(3H，m)，3.02(1H，dd，J＝15.8Hz，7.6Hz)，3.13(1H，dd，J＝15.8Hz，5.8Hz)，3.35-4.35(7H，m)，5.35-5.50(1H，m)，6.73(1H，s)，7.10-7.40(15H，m).
實(shí)施例11(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽于室溫，向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(246毫克)的甲醇(1毫升)溶液中加入1N鹽酸(0.396毫升)。濃縮得到殘余物，用甲醇-乙醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(180毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ1.00(3H，d，J＝5.6Hz)，1.02(3H，d，J＝5.6Hz)，1.60-1.80(3H，m)，3.04(1H，dd，J＝16.0Hz，7.0Hz)，3.15(1H，dd，J＝16.0Hz，5.4Hz)，3.55-4.40(7H，m)，5.43(1H，dd，J＝7.6Hz，5.4Hz)，6.73(1H，s)，7.10-7.40(15H，m).
實(shí)施例12(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸乙酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(500毫克)中加入28％氯化氫的乙醇(200毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?0小時(shí)。濃縮后，殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜提純并用乙腈-水(5∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物溶于水(10毫升)并用碳酸氫鈉水溶液中和。溶液通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用氯仿-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(123毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.85-1.00(6H，m)，1.07(3H，t，J＝6.8Hz)，1.40-1.80(3H，m)，2.70-3.00(2H，m)，3.00-5.50(8H，m)，3.96(2H，q，J＝6.8Hz)，7.10-7.45(5H，m)，8.00-8.30(2H，m).
實(shí)施例13(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(2.28克)和0.2N氫氧化鈉水溶液(25毫升)的混合物中加入氯甲酸芐基酯(0.714毫升)和1N氫氧化鈉水溶液(0℃)。于室溫?cái)嚢?小時(shí)，混合物用乙醚洗滌和用1N鹽酸(20毫升)酸化。水溶液用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它用乙醚-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(1.51克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.86(3H，d，J＝6.0Hz)，0.87(3H，d，J＝6.0Hz)，1.30-1.80(3H，m)，2.60-3.00(2H，m)，3.20-5.40(8H，m)，5.04(2H，s)，7.10-7.60(11H，m)，8.16(1H，d，J＝8.8Hz).
實(shí)施例14(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯在冰冷下，向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽(4.35克)的甲醇(100毫升)溶液中加入二苯基重氮甲烷(3.40克)的甲醇(100毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它懸浮在水(200毫升)中。向懸浮液中加入碳酸氫鈉(2.20克)和氯甲酸芐基酯(18毫升)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，萃取液用飽和鹽水洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物用乙酸乙酯重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(5.95克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.91-0.97(6H，m)，1.55-1.78(3H，m)，3.03-3.10(2H，m)，3.63-3.73(3H，m)，3.91(1H，dd，J＝9.6Hz，1.4Hz)，4.16-4.23(1H，d，J＝1.4Hz)，5.10(2H，s)，5.44(1H，t，J＝6.2Hz)，7.13-7.36(20H，m).
實(shí)施例15(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸將(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(1.5克)的三氟乙酸(100毫升)溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)并減壓濃縮。殘余物通過硅膠柱，然后用乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。用乙酸乙酯重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(0.86克)，它具有與實(shí)施例13相同的1H-NMR。
實(shí)施例16(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸新戊酰氧基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(295毫克)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(0.082毫升)的二甲基甲酰胺(2毫升)溶液中加入新戊酰碘甲酯(139毫克)的二甲基甲酰胺(1毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加水之后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用10％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。有機(jī)溶液用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物通過硅膠柱，然后用乙酸乙酯∶甲醇(10∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。用氯仿重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(160毫克)1H-NMR(DMSO-d6)δ0.85(3H，d，J＝6.2Hz)，0.86(3H，d，J＝6.2Hz)，1.06(9H，s)，1.30-1.80(3H，m)，2.90-3.05(2H，m)，3.20-5.40(8H，m)，5.04(2H，s)，5.61(2H，s)，7.10-7.60(7H，m).
實(shí)施例17(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸新戊酰氧基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸新戊酰氧基甲酯(150毫克)的甲醇(5毫升)溶液中加入10％鈀/活性炭(30毫克)并將混合物在氫氣氣氛下于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。濾除催化劑之后，減壓濃縮濾液。用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(101毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.86(3H，d，J＝5.8Hz)，0.89(3H，d，J＝5.8Hz)，1.07(9H，s)，1.10-1.90(3H，m)，2.97(2H，d，J＝6.2Hz)，3.20-5.40(8H，m)，5.64(2H，s)，7.15-7.45(5H，m)，7.84(1H，d，J＝8.8Hz)，8.14(1H，d，J＝9.2Hz).
實(shí)施例18
(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酰胺將(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(295毫克)、N-羥基琥珀酰亞胺(58毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(103毫克)的乙腈(10毫升)溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)并濾除不溶的固體。脫除有機(jī)溶劑之后，得到的殘余物溶于二甲基甲酰胺(5毫升)，然后加入25％氨水溶液(1毫升)。混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)并減壓濃縮。殘余物用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。無水硫酸鈉干燥后，脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(97毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.75-0.90(6H，m)，0.95-1.80(3H，m)，2.45-2.75(2H，m)，3.25-5.65(8H，m)，7.15-7.60(10H，m).
實(shí)施例19(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酰胺向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酰胺(200毫克)的甲醇(10毫升)溶液中加入10％鈀/活性炭(50毫克)并將混合物在氫氣氣氛下于室溫?cái)嚢?0小時(shí)。濾除催化劑之后，減壓濃縮濾液。用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(140毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.87(3H，d，J＝6.0Hz)，0.89(3H，d，J＝6.0Hz)，1.10-2.20(3H，m)，2.40-2.80(2H，m)，3.10-5.40(8H，m)，7.15-7.50(5H，m)，7.79(1H，d，J＝7.8Hz)，8.34(1H，d，J＝8.4Hz).
實(shí)施例20(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(3.40克)的1N鹽酸(11毫升)溶液中加入甲醇(10毫升)并將混合物減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(100毫升)，然后加入二苯基重氮甲烷(3.88克)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?.5小時(shí)并減壓濃縮。殘余物用乙醚洗滌，得到標(biāo)題化合物(5.36克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.07(1H，d，J＝7.0Hz)，3.50-5.80(6H，m)，6.68(1H，s)，7.10-7.20(15H，m)，8.24(1H，d，J＝8.8Hz).
實(shí)施例21(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-鳥氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二鹽酸鹽向Nα-芐氧羰基-Nδ-叔丁氧羰基-L-鳥氨酸(550毫克)的二甲氧基乙烷(7.5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(173毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(309毫克)(于0℃)并將混合物于0℃保溫24小時(shí)。濾除形成的不溶物，濾液減壓濃縮。殘余物溶于二甲基甲酰胺(5毫升)，然后于室溫加入三乙胺(0.209毫升)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽(818毫克)并于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。向混合物中加入10％檸檬酸水溶液并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取液分別用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑之后，得到的殘余物進(jìn)行快速硅膠柱色譜提純，然后用甲醇-乙酸乙酯(1∶20)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。向殘余物中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮之后，殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(200毫克)一起攪拌4小時(shí)。過濾之后，向?yàn)V液中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙醚洗滌。減壓濃縮水層以得到殘余物。用甲醇-乙腈重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(376毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.50-2.30(4H，m)，2.76-6.00(12H，m)，7.10-7.50(5H，m)，8.10-8.50(2H，m).
實(shí)施例22(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(α-L-谷氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽按照上述實(shí)施例21敘述的同樣方法，用Nα-芐氧羰基-L-谷氨酸γ-叔丁酯替代Nα-芐氧羰基-Nδ-叔丁氧羰基-L-鳥氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.80-2.30(4H，m)，2.76-3.00(2H，m)，3.50-6.00(8H，m)，7.10-7.50(5H，m).
實(shí)施例23(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(O-甲基-L-絲氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸于0℃，向N-芐氧羰基-O-甲基-L-絲氨酸(380毫克)的二甲氧基乙烷(7.5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(173毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(309毫克)并將混合物于0℃保溫24小時(shí)。濾除形成的不溶物并減壓濃縮濾液。殘余物溶于二甲基甲酰胺(5毫升)，然后于室溫加入三乙胺(0.209毫升)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽(818毫克)并于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。向混合物中加入10％檸檬酸水溶液并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取液分別用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑之后，得到的殘余物進(jìn)行快速硅膠柱色譜提純，然后用甲醇-乙酸乙酯(1∶20-1∶3)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(200毫克)一起攪拌2小時(shí)。過濾之后，向?yàn)V液中加入水并將整體用乙醚洗滌。減壓濃縮水層以得到殘余物。用甲醇-乙醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(263毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.60-2.90(2H，m)，3.26(3H，s)，3.20-5.40(8H，m)，7.10-7.50(5H，m)，7.50-8.40(2H，m).
實(shí)施例24(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(O-芐基-L-絲氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向O-芐基-N-芐氧羰基-L-絲氨酸(329毫克)的乙腈(5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(115毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(206毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶物，濾液減壓濃縮。殘余物溶于二甲基甲酰胺(5毫升)，然后于室溫加入三乙胺(0.139毫升)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽(545毫克)并于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。向混合物中加入10％檸檬酸水溶液并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取液分別用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑之后，得到的殘余物進(jìn)行快速硅膠柱色譜提純，然后用甲醇-乙酸乙酯(1∶20)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛(3-4個(gè)大氣壓)下與氫氧化鈀/炭(100毫克)一起攪拌6小時(shí)。過濾之后減壓濃縮濾液，得到的殘余物通過DIAION CHP-20P柱(Mitsubishiikasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(97毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.55-2.90(2H，m)，3.20-5.40(10H，m)，4.50(2H，s)，7.10-7.50(10H，m)，7.84(1H，d，J＝8.8Hz)，8.29(1H，d，J＝11.4Hz).
實(shí)施例25(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(O-叔丁基-N-芴基甲氧基羰基-L-絲氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯于室溫，向O-叔丁基-N-芴基甲氧基羰基-L-絲氨酸(575毫克)的乙腈(7.5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(173毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(309毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液減壓濃縮。殘余物溶于二甲基甲酰胺(5毫升)，然后于室溫加入三乙胺(0.139毫升)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯鹽酸鹽(545毫克)并于室溫?cái)嚢?4小時(shí)。向混合物中加入10％檸檬酸水溶液并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取液分別用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物用乙醚-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(1.156克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.19(9H，s)，2.86-6.00(15H，m)，6.80(1H，s)，7.05-8.20(23H，m).
實(shí)施例26(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(O-叔丁基-L-絲氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(O-叔丁基-N-芴基甲氧羰基-L-絲氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(874毫克)中加入哌啶(5毫升)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑得到殘余物，將它用快速硅膠柱色譜提純，然后用甲醇-乙酸乙酯(1∶2)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用乙醚-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(539毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12(9H，s)，3.05(3H，d，J＝7.0Hz)，3.20-5.40(8H，m)，6.67(1H，s)，7.10-7.40(15H，m)，7.74(1H，d，J＝8.0Hz)，8.15(1H，d，J＝9.0Hz).
實(shí)施例27(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-絲氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(O-叔丁基-L-絲氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(300毫克)中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液并將混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物用水萃取。水層用乙醚洗滌并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(208毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.65-3.00(2H，m)，3.20-5.60(10H，m)，7.15-7.50(5H，m).
實(shí)施例28(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-異亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向N-芐氧羰基-L-異亮氨酸(1114毫克)的乙腈(20毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(506毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(867毫克)，并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(1369毫克)和三乙胺(0.558毫升)于二甲基甲酰胺(100毫升)中的混合物中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?6小時(shí)并減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(1.0克)一起攪拌24小時(shí)。加入1N鹽酸之后，將整體過濾，并減壓濃縮濾液。殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(199毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.70-0.95(6H，m)，1.20-1.90(3H，m)，2.50-3.00(2H，m)，3.10-4.20(7H，m)，5.10-5.30(1H，m)，7.10-7.40(5H，m)，7.90(1H，d，J＝8.0Hz)，8.30(1H，d，J＝8.0Hz).
實(shí)施例29(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(200毫克)的吡啶(5毫升)溶液中加入乙酸酐(3毫升)并將混合物于室溫?cái)嚢?天。減壓濃縮后，殘余物溶于乙酸乙酯(100毫升)并分別用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(85毫克)。
1H-NMR(CDCl3)δ0.93-0.95(6H，m)，1.51-1.78(3H，m)，1.87(3H，s)，1.99(3H，s)，2.07(3H，s)，2.16(3H，s)，2.81(1H，dd，J＝16.1Hz，5.6Hz)，3.12(1H，dd，J＝16.1Hz，4.4Hz)，3.85(1H，dd，J＝11.4Hz，6.6Hz)，4.05(1H，dd，J＝11.4Hz，6.6Hz)，4.49(1H，m)，5.02(1H，m)，5.10(2H，s)，5.23(1H，d，J＝1.8Hz)，
5.33(1H，dd，J＝10.0Hz，1.8Hz)，5.41(1H，m)，5.51(1H，m)，6.36(1H，m)，6.76(1H，s)，7.01-7.34(21H，m).
實(shí)施例30(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(L-丙氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向N-芐氧羰基-L-丙氨酸(234毫克)的乙腈(30毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(123毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(217毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶物，濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(342毫克)和三乙胺(0.139毫升)的二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中。混合物于室溫?cái)嚢?0小時(shí)并減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸并將整體用乙酸乙酯-乙腈萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(200毫克)一起攪拌18小時(shí)。過濾之后濾液減壓濃縮，得到的殘余物通過DIAIONHP-20ss柱(Mitsubishii kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(312毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.20(3H，d，J＝7.0Hz)，2.60-2.80(2H，m)，3.30-4.20(6H，m)，5.10-5.30(1H，m)，7.70-7.90(1H，m)，8.30-8.50(1H，m).
實(shí)施例31(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-芐氧羰基-L-纈氨酸(460毫克)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(500毫克)的二甲基甲酰胺(50毫升)溶液中加入氰基膦酸二乙酯(298毫克)和三乙胺(0.191毫升)并將整體于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。減壓濃縮后，殘余物中加入0.1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯(100毫升)萃取。有機(jī)層分別用碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(150毫克)一起攪拌1小時(shí)。過濾之后，濾液減壓濃縮，得到的殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishii kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(663毫克)。
1H-NMR(D2O)δ0.85-1.10(6H，m)，2.10(1H，m)，2.65(2H，d，J＝6.9Hz)，3.54-3.81(5H，m)，4.19-4.26(2H，m)，5.07(1H，t，J＝6.9Hz)，7.24(5H，br s).
實(shí)施例32(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基戊酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例31敘述的同樣方法，用(S)-2-(芐氧羰基氨基)戊酸替代N-芐氧羰基-L-纈氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ0.79(3H，t，J＝6.8Hz)，1.23(2H，m)，1.73(2H，m)，2.61(2H，d，J＝7.0Hz)，3.53-3.92(5H，m)，4.17-4.24(2H，m)，5.06(1H，t，J＝7.0Hz)，7.17-7.23(5H，m).
實(shí)施例33(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基丁酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽于室溫，向(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸(500毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(291毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(561毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶物，濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(722毫克)和三乙胺(0.558毫升)的二甲基甲酰胺(50毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?8小時(shí)并減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯-四氫呋喃(1∶1，50毫升×3)萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物溶于甲醇(50毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(200毫克)一起攪拌1小時(shí)。過濾之后，濾液減壓濃縮，得到的殘余物溶于0.1N鹽酸(0.1毫升)并通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishii kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(200毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ1.05(3H，t，J＝7.6Hz)，1.85-1.96(2H，m)，2.74(2H，d，J＝6.4Hz)，3.68-3.91(5H，m)，4.30-4.33(2H，m)，5.32(1H，t，J＝6.4Hz)，7.24-7.42(5H，m).
實(shí)施例34(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-苯基丙氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-苯基丙氨酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ2.59(2H，d，J＝6.4Hz)，2.94(1H，dd，J＝14.0Hz，9.0Hz)，3.18(1H，dd，J＝14.0Hz，5.4Hz)，3.44-3.76(4H，m)，4.09-4.21(3H，m)，5.08(1H，t，J＝6.4Hz)，7.17-7.25(10H，m).
實(shí)施例35(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-3-乙酰氨基-2-氨基丙酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-3-乙酰氨基-2-(芐氧羰基氨基)丙酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ1.87(3H，s)，2.58(2H，d，J＝7.0Hz)，3.36-3.79(6H，m)，4.04(1H，m)，4.16-4.24(2H，m)，5.08(1H，t，J＝7.0Hz)，7.23(5H，br s).
實(shí)施例36(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-脯氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-脯氨酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ1.85-1.98(3H，m)，2.34(1H，m)，2.58(2H，d，J＝7.0Hz)，3.16-3.32(2H，m)，3.48-3.77(4H，m)，4.18-4.30(3H，m)，5.06(1H，t，J＝7.0Hz)，7.21-7.26(5H，m).
實(shí)施例37(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-5，5，5-三氟戊酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-5，5，5-三氟戊酸替代(S)-2-(芐氧羰基)氨基丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ1.95-2.30(4H，m)，2.58(2H，d，J＝6.8Hz)，3.49-3.78(4H，m)，3.98(1H，t，J＝8.4Hz)，4.18-4.24(2H，m)，5.06(1H，t，J＝6.8Hz)，7.21-7.24(5H，m).
實(shí)施例38(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-4，4，4-三氟丁酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-4，4，4-三氟丁酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ2.74(2H，d，J＝6.8Hz)，2.87-2.99(2H，m)，3.64-3.98(4H，m)，4.34-4.41(3H，m)，5.21(1H，t，J＝6.8Hz)，7.30-7.60(5H，m).
實(shí)施例39(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-3-(甲磺酰氨基)丙酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-3-(甲磺酰氨基)丙酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ2.70(2H，d，J＝7.0Hz)，3.06(3H，s)，3.54-3.89(6H，m)，4.17(1H，t，J＝6.6Hz)，4.28-4.35(2H，m)，5.18(1H，t，J＝7.0Hz)，7.20-7.36(5H，m).
實(shí)施例40
(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-5-氟戊酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-5-氟戊酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ1.80-2.15(3H，m)，2.30-2.55(1H，m)，2.69(2H，d，J＝6.6Hz)，3.33-3.42(2H，m)，3.60-3.87(4H，m)，4.28-4.40(3H，m)，5.17(1H，t，J＝6.6Hz)，7.32-7.34(5H，m).
實(shí)施例41(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-3-(甲酰氨基)丙酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例33敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-3-(甲酰氨基)丙酸替代(S)-2-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ2.70(2H，d，J＝7.0Hz)，3.59-3.98(7H，m)，4.17-4.33(2H，m)，5.19(1H，t，J＝7.0Hz)，7.33-7.35(5H，m)，8.11(1H，s).
實(shí)施例42(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-叔丁氧羰基-O-(4-甲氧基芐基)-L-高絲氨?；?氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯用實(shí)施例25敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-O-(4-甲氧基芐基)-L-高絲氨酸替代O-叔丁基-N-芴基甲氧羰基-L-絲氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.37(9H，s)，1.60-2.10(2H，m)，3.05(2H，d，J＝6.6Hz)，3.20-5.40(12H，m)，3.73(3H，s)，6.67(1H，s)，6.80-7.40(19H，m).
實(shí)施例43(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(L-高絲氨酰基)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-叔丁氧羰基-O-(4-甲氧基芐基)-L-高絲氨酰基)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(200毫克)中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓濃縮后，殘余物溶于水中并用乙醚洗滌。水層通過DIAION CHP-20P柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(53毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.40-2.00(2H，m)，2.55-2.80(2H，m)，3.00-5.30(9H，m)，7.10-7.40(5H，m).
實(shí)施例44(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-3-氰基丙酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向(S)-2-芐氧羰基氨基-3-氰基丙酸(300毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(177毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(303毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，并于室溫向?yàn)V液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(503毫克)和三乙胺(0.410毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液。混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌并用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑之后，得到的殘余物溶于4N氯化氫于乙酸乙酯(20毫升)中的溶液，并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(75毫克)。
1H-NMR(D2O)δ2.60(2H，d，J＝6.4Hz)，3.48-3.79(4H，m)，4.13-4.26(3H，m)，5.18(1H，t，J＝6.4Hz)，7.15-7.35(5H，m).
實(shí)施例45(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-甲硫氨?；?氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向N-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸(260毫克)的乙腈(15毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(132毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(227毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，并于室溫向?yàn)V液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(356毫克)、三乙胺(0.217毫升)和二甲基甲酰胺(50毫升)溶液。混合物于室溫?cái)嚢?0小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫于乙酸乙酯(30毫升)中的溶液，并將整體于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(310毫克)。
1H-NMR(D2O)δ2.12(3H，s)，2.20(2H，m)，2.62(2H，t，J＝7.3Hz)，2.74(1H，d，J＝6.9Hz)，3.60-3.94(4H，m)，4.16(1H，t，J＝6.7Hz)，4.33-4.40(2H，m)，5.20(1H，t，J＝6.9Hz)，7.30-7.48(5H，m).
實(shí)施例46(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(S-甲基-L-半胱氨酰基)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例45敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-S-甲基-L-半胱氨酸替代N-叔丁氧基羰基-L-蛋氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.05(3H，s)，2.56-2.86(4H，m)，3.40-3.80(11H，m)，4.05(1H，m)，4.13(1H，s)，5.22(1H，m)，7.19-7.37(5H，m)，7.84(1H，d，J＝8.8Hz)，8.24(1H，d，J＝8.8Hz).
實(shí)施例47(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-4-戊烯酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于室溫，向(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-戊烯酸(220毫克)的乙腈(7.5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(118毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(210毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。濾除形成的不溶固體，并于室溫向?yàn)V液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(342毫克)、三乙胺(0.28毫升)和二甲基甲酰胺(40毫升)溶液?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?天，然后減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫于乙酸乙酯(20毫升)中的溶液，并將整體于室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS 柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮，然后凍干。殘余物通過Sephadex LH-20柱(Pharmacia，瑞典)，然后用水洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(57毫克)。
1H-NMR(D2O)δ2.64-2.76(4H，m)，3.62-3.82(2H，m)，3.89(1H，d，J＝9.8Hz)，4.12(1H，m)，4.35(2H，m)，5.20(1H，t，J＝6.8Hz)，5.25-5.35(2H，m)，5.77(1H，m)，7.30-7.46(5H，m).
實(shí)施例48(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(L-丙氨酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-芐氧羰基-L-丙氨酸(50毫克)的乙腈(2毫升)溶液中加入N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧基亞胺(47毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(51毫克)并將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，并于室溫向?yàn)V液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(100毫克)和三乙胺(0.031毫升)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?6小時(shí)并減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(0.956毫升)，并將整體用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物溶于甲醇(10毫升)并于室溫和氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(50毫克)一起攪拌1小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到的殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishikasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(75毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-1.00(6H，m)，1.55(3H，d，J＝7.4Hz)，1.60-1.80(3H，m)，2.68(2H，d，J＝6.6Hz)，3.65-3.72(3H，m)，3.86-3.93(2H，m)，4.15-4.36(3H，m)，5.31(1H，t，J＝6.6Hz)，7.22-7.41(5H，m).
實(shí)施例49(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(N-甲基甘氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例48敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-N-甲基甘氨酸替代N-芐氧羰基-L-丙氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94(3H，d，J＝5.8Hz)，0.98(3H，d，J＝3.2Hz)，1.60-1.80(3H，m)，2.63(2H，d，J＝6.2Hz)，2.72(3H，s)，3.66-3.76(3H，m)，3.83-3.85(3H，m)，4.14(1H，t，J＝6.2Hz)，4.27-4.35(2H，m)，5.32(1H，t，J＝6.2Hz)，7.20-7.40(5H，m).
實(shí)施例50(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-苯基丙氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例48敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-苯基丙氨酸替代N-芐氧羰基-L-丙氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94(3H，d，J＝6.4Hz)，0.97(3H，d，J＝7.8Hz)，1.60-1.80(3H，m)，2.72(2H，d，J＝6.6Hz)，3.05(1H，dd，J＝14.4Hz，8.0Hz)，3.30(1H，dd，J＝14.4Hz，4.2Hz)，3.66-3.78(3H，m)，3.91(1H，m)，4.02(1H，m)，4.22(1H，t，J＝6.6Hz)，4.30-4.36(2H，m)，5.33(1H，t，J＝6.6Hz)，7.20-7.39(10H，m).
實(shí)施例51(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-賴氨?；?L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二鹽酸鹽向Nα-芐氧羰基-Nε-叔丁氧基羰基-L-賴氨酸(126毫克)的乙腈(3毫升)溶液中加入N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧基亞胺(64毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(69毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.042毫升)的二甲基甲酰胺(14毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?6小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(1.3毫升)并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取物用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(100毫克)一起攪拌2小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到殘余物溶于4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(180毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.97(3H，d，J＝6.0Hz)，1.00(3H，d，J＝6.0Hz)，1.40-2.00(10H，m)，2.74(1H，m)，2.93-2.99(2H，m)，3.61-3.73(3H，m)，3.84-4.00(2H，m)，4.22-4.46(3H，m)，5.37(1H，m)，7.23-7.41(5H，m).
實(shí)施例52(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(α-L-谷氨?；?L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-芐氧羰基-L-谷氨酸γ叔丁酯(101毫克)的乙腈(3毫升)溶液中加入N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧基亞胺(64毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(69毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.042毫升)的二甲基甲酰胺(14毫升)溶液中。混合物于室溫?cái)嚢?6小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(1.3毫升)并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取物用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(100毫克)一起攪拌2小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到殘余物溶于三氟乙酸(20毫升)并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS 柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(124毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.70(3H，d，J＝6.2Hz)，0.74(3H，d，J＝8.0Hz)，1.38-1.60(3H，m)，1.70-2.05(2H，m)，2.21-2.35(2H，m)，2.40-2.64(2H，m)，3.44-3.47(3H，m)，3.63-3.68(2H，m)，3.97(1H，t，J＝7.6Hz)，4.09-4.15(2H，m)，5.12(1H，m)，6.98-7.17(5H，m).
實(shí)施例53(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-(4-氨基丁酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸向4-(芐氧羰基氨基)丁酸(78毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(41毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(71毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.115毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?天，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(70毫克)一起攪拌1小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(130毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92(3H，d，J＝5.8Hz)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz)，1.61-1.80(3H，m)，1.91-2.01(2H，m)，2.32(1H，m)，2.46(1H，q，J＝5.8Hz)，2.65(2H，d，J＝7.0Hz)，2.92-3.04(2H，m)，3.66-3.78(3H，m)，3,89(2H，d，J＝9.6Hz)，4.15(1H，t，J＝6.2Hz)，4.29(2H，m)，5.32(1H，t，J＝7.0Hz)，7.20-7.40(5H，m).
實(shí)施例54(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-鳥氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用Nα，Nδ-二芐氧羰基-L-鳥氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92-0.98(6H，m)，1.63-1.72(7H，m)，2.65(2H，d，J＝6.6Hz)，2.90-2.92(2H，m)，3.44(1H，m)，3.65-3.75(3H，m)，3.88(1H，dd，J＝9.8Hz，1.8Hz)，4.19(1H，dt，J＝6.2Hz，1.8Hz)，4.31(1H，d，J＝1.2Hz)，4.45(1H，t，J＝7.4Hz)，5.32(1H，t，J＝6.6Hz)，7.20-7.41(5H，m).
實(shí)施例55(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(L-天冬酰胺酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-天冬酰胺替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92-0.99(6H，m)，1.60-1.80(3H，m)，2.69(2H，d，J＝7.0Hz)，2.80(1H，dd，J＝16.8Hz，7.4Hz)，2.95(1H，dd，J＝16.8Hz，5.2Hz)，3.67-3.75(3H，m)，3.88(1H，m)，4.07-4.22(2H，m)，4.30-4.40(2H，m)，5.53(1H，t，J＝7.0Hz)，7.20-7.41(5H，m).
實(shí)施例56(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(L-谷氨酰胺酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-谷氨酰胺替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-1.02(6H，m)，1.60-1.80(3H，m)，2.10-2.20(2H，m)，2.48-2.60(2H，m)，2.91-2.98(2H，m)，3.68-4.55(8H，m)，5.42(1H，m)，7.29-7.37(5H，m).
實(shí)施例57
(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-3-乙酰氨基-2-氨基丙酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用(S)-3-乙酰氨基-2-(芐氧羰基氨基)丙酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-1.00(6H，m)，1.64-1.70(3H，m)，1.98(3H，s)，2.70(2H，d，J＝6.8Hz)，3.51-3.98(7H，m)，4.21-4.41(3H，m)，5.33(1H，t，J＝6.8Hz)，7.20-7.43(5H，m).
實(shí)施例58(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2，3-二氨基丙酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用(S)-2，3-(二芐氧羰基氨基)丙酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ0.74-0.81(6H，m)，1.40-1.65(3H，m)，2.59(2H，d，J＝7.0Hz)，2.98(1H，dd，J＝15.2Hz，7.6Hz)，3.15(1H，dd，J＝15.2Hz，5.8Hz)，3.46-3.78(5H，m)，4.09-4.30(3H，m)，5.06(1H，t，J＝7.0Hz)，7.18-7.27(5H，m).
實(shí)施例59(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((O-甲基-L-蘇氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-O-甲基-L-蘇氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94-1.01(6H，m)，1.15(3H，d，J＝6.6Hz)，1.62-1.73(3H，m)，2.75-3.00(2H，m)，3.43(3H，s)，3.60-3.74(4H，m)，3.88-3.94(2H，m)，4.12-4.22(2H，m)，4.33(1H，s)，5.37(1H，t，J＝6.2Hz)，7.32-7.38(5H，m).
實(shí)施例60(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2-氨基-3-環(huán)己基丙酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用(S)-2-芐氧羰基氨基-3-環(huán)己基丙酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ0.77-1.13(11H，m)，1.50(11H，m)，2.58(2H，d，J＝5.8Hz)，3.54-4.22(8H，m)，5.05(1H，t，J＝5.8Hz)，7.23(5H，br s).
實(shí)施例61(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2-氨基-5，5，5-三氟戊酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用(S)-2-二芐氧羰基氨基-5，5，5-三氟戊酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(D2O)δ0.75-0.81(6H，m)，1.42-1.60(3H，m)，1.98-2.22(4H，m)，2.59(2H，d，J＝6.6Hz)，3.43-3.59(3H，m)，3.73-3.95(2H，m)，4.08-4.36(3H，m)，5.06(1H，t，J＝6.6Hz)，7.15-7.35(5H，m).
實(shí)施例62(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-亮氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.80-1.00(12H，m)，1.00-1.90(6H，m)，2.60-2.80(2H，m)，3.20-5.30(9H，m)，7.10-7.60(5H，m).
實(shí)施例63(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-異亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-異亮氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.70-1.80(18H，m)，2.60-2.90(2H，m)，3.00-5.30(9H，m)，7.10-7.50(5H，m).
實(shí)施例64(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((O-甲基-L-絲氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-O-甲基-L-絲氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.85(3H，d，J＝6.0Hz)，0.88(3H，d，J＝6.0Hz)，1.40-1.70(3H，m)，2.70-2.80(2H，m)，3.25(3H，s)，3.10-5.30(10H，m)，7.10-7.60(5H，m)，8.00-8.40(2H，m).
實(shí)施例65(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(N-(2-苯基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-2-苯基甘氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.70-1.00(6H，m)，1.50-1.70(3H，m)，2.60-2.80(2H，m)，3.40-5.50(9H，m)，7.10-7.60(10H，m).
實(shí)施例66(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((N-甲基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例53敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-N-甲基-L-纈氨酸替代4-(芐氧羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.70-1.00(12H，m)，1.40-1.90(4H，m)，2.19(3H，s)，2.50-5.30(11H，m)，7.10-7.50(6H，m)，8.03(1H，d，J＝9.2Hz)，8.20(1H，d，J＝8.8Hz).
實(shí)施例67(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2-氨基丁酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽向(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(70毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(41毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(71毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.115毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?天，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(108毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94-1.09(9H，m)，1.6 2-1.72(3H，m)，1.84-1.98(2H，m)，2.69(2H，d，J＝6.4Hz)，3.68-3.83(3H，m)，4.19-4.43(5H，m)，5.32(1H，t，J＝6.4Hz)，7.22-7.43(5H，m).
實(shí)施例68(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-正纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽按照實(shí)施例67敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-L-正纈氨酸替代(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-1.02(9H，m)，1.44-1.52(2H，m)，1.62-1.74(3H，m)，1.81-1.90(2H，m)，2.69(2H，d，J＝6.2Hz)，3.68-3.83(3H，m)，4.18-4.47(5H，m)，5.32(1H，t，J＝6.2Hz)，7.19-7.43(5H，m).
實(shí)施例69(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-正亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽按照實(shí)施例67敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-L-正亮氨酸替代(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.91-1.00(9H，m)，1.37-1.50(6H，m)，1.63-1.77(3H，m)，1.87-1.94(2H，m)，2.82-2.86(2H，m)，
3.64-3.72(2H，m)，3.85-3.95(2H，m)，4.09-4.23(2H，m)，4.30-4.41(2H，m)，5.37(1H，t，J＝6.6Hz)，7.23-7.42(5H，m).
實(shí)施例70(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(D-丙氨酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸鹽酸鹽按照實(shí)施例67敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-D-丙氨酸替代(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92-1.01(6H，m)，1.51(3H，d，J＝7.0Hz)，1.58-1.73(3H，m)，2.66-2.71(2H，m)，3.60-3.74(2H，m)，3.91-4.02(2H，m)，4.09-4.36(4H，m)，5.33(1H，m)，7.25-7.40(5H，m).
實(shí)施例71(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((β-氰基-L-丙氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例67敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-β-氰基-L-丙氨酸替代(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-0.99(6H，m)，1.61-1.82(3H，m)，2.74-2.95(4H，m)，3.62-3.92(5H，m)，4.17-4.46(3H，m)，5.37(1H，t，J＝6.6Hz)，7.26-7.38(5H，m).
實(shí)施例72N-[(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酰]-L-丙氨酸向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(200毫克)、對(duì)甲苯磺酸L-丙氨酸芐基酯(238毫克)和N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧基亞胺(183毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(140毫克)和三乙胺(0.094毫升)，混合物于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液減壓濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯中并用飽和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于甲醇(10毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(60毫克)一起攪拌3小時(shí)。過濾之后，濾液減壓濃縮得到殘余物，將它通過DIAIONHP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(58毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.99-1.01(6H，m)，1.26(3H，d，J＝7.4Hz)，1.70-1.73(3H，m)，2.74-2.79(2H，m)，3.67-3.82(3H，m)，3.87-3.95(2H，m)，4.12-4.32(2H，m)，4.35(1H，d，J＝1.2Hz)，5.39(1H，dd，J＝7.0Hz，5.4Hz)，7.20-7.39(5H，m).
實(shí)施例73N-[(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酰]-L-亮氨酸按照實(shí)施例72敘述的同樣方法，用對(duì)甲苯磺酸L-亮氨酸芐基酯替代對(duì)甲苯磺酸L-丙氨酸芐基酯，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.79-1.00(12H，m)，1.30-1.96(6H，m)，2.78-2.81(2H，m)，3.66-3.81(3H，m)，3.85-3.92(2H，m)，4.20-4.39(3H，m)，5.38(1H，t，J＝6.0Hz)，7.20-7.34(5H，m).
實(shí)施例74(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((Oβ-甲基-α-L-天冬氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸β-甲酯(194毫克)的乙腈(5毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(56毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(95毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(200毫克)和三乙胺(0.10毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?7小時(shí)，并減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸(50毫升)并將整體用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌和無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于三氟乙酸(20毫升)并于室溫?cái)嚢?，減壓濃縮得到殘余物，將它通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(92毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93-1.00(6H，m)，1.63-1.76(3H，m)，2.74(2H，d，J＝6.3Hz)，2.87(1H，dd，J＝17.4Hz，7.8Hz)，3.04(1H，dd，J＝17.4Hz，5.4Hz)，3.65-3.69(3H，m)，3.73(3H，s)，3.86(1H，dd，J＝9.6Hz，1.4Hz)，4.07(1H，m)，4.21(1H，m)，4.33-4.39(2H，m)，5.34(1H，t，J＝6.3Hz)，7.20-7.43(5H，m).
實(shí)施例75(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯于0℃，向N-芐氧羰基甘氨酸(2.09克)的二甲氧基乙烷(50毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(1.15克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(2.06克)，混合物于4℃保溫62小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液減壓濃縮，得到的殘余物用二氯甲烷-己烷重結(jié)晶，得到N-芐氧羰基甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(3.00克)。
將N-芐氧羰基甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(148毫克)溶于二甲基甲酰胺(6毫升)并于室溫向該溶液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(300毫克)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?.5小時(shí)，然后加入10％檸檬酸水溶液。將整體用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物用乙酸乙酯-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(275毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.92(3H，d，J＝5.8Hz)，0.95(3H，d，J＝5.8Hz)，1.20-1.80(3H，m)，2.99(1H，dd，J＝15.8Hz，7.4Hz)，3.10(1H，dd，J＝15.8Hz，6.2Hz)，3.50-4.60(9H，m)，5.08(2H，s)，5.43(1H，dd，J＝7.4Hz，6.2Hz)，6.95(1H，s)，7.10-7.40(20H，m).
實(shí)施例76(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(甘氨酰-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(273毫升)溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(50毫克)一起攪拌1.5小時(shí)。用甲醇稀釋后，混合物進(jìn)行過濾，濾液減壓濃縮。得到的殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(154毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，0.99(3H，d，J＝6.2Hz)，1.10-1.85(3H，m)，2.66(1H，d，J＝7.6Hz)，3.50-4.40(9H，m)，5.33(1H，t，J＝7.6Hz)，7.10-7.45(5H，m).
實(shí)施例77(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-脯氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯按照實(shí)施例75敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-脯氨酸替代N-芐氧羰基甘氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.60-2.30(13H，m)，3.00-5.40(14H，m)，6.68(1H，s)，7.05-7.45(20H，m).
實(shí)施例78(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-脯氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例76敘述的同樣方法，用(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-脯氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯替代(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.80-1.00(6H，m)，1.40-2.20(7H，m)，2.60-5.30(13H，m)，7.15-7.45(5H，m)，7.59(1H，d，J＝8.8Hz)，8.15-8.30(2H，m).
實(shí)施例79(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((O-芐基-N-芐氧羰基-L-絲氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯按照實(shí)施例75敘述的同樣方法，用O-芐基-N-芐氧羰基-L-絲氨酸替代N-芐氧羰基甘氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.85-0.95(6H，m)，1.50-1.70(3H，m)，2.97(1H，dd，J＝14.6Hz，7.0Hz)，3.09(1H，dd，J＝14.6Hz，6.6Hz)，3.60-4.50(10H，m)，4.47(1H，d，J＝11.6Hz)，4.56(1H，d，J＝11.6Hz)，5.05(1H，d，J＝12.0Hz)，5.13(1H，d，J＝12.0Hz)，5.43(1H，dd，J＝7.0Hz，6.6Hz)，6.72(1H，s)，7.10-7.40(20H，m).
實(shí)施例80(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((O-芐基-L-絲氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例76敘述的同樣方法，用(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((O-芐基-N-芐氧羰基-L-絲氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯替代(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.93(3H，d，J＝6.6Hz)，0.96(3H，d，J＝6.6Hz)，1.05-1.80(3H，m)，2.76(2H，d，J＝6.6Hz)，3.50-4.50(10H，m)，4.62(2H，s)，5.30-5.50(1H，m)，7.15-7.50(10H，m).
實(shí)施例81(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-絲氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向O-芐基-N-芐氧羰基-L-絲氨酸(228毫克)的乙腈(20毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(83毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(143毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，并于室溫向?yàn)V液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(300毫克)和三乙胺(0.092毫升)的二甲基甲酰胺(60毫升)溶液。混合物于室溫?cái)嚢?1小時(shí)并減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸，并將整體用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物溶于甲醇(20毫升)并于室溫和氫氣氣氛(3大氣壓)下與氫氧化鈀/炭(200毫克)一起攪拌10小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到的殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(60毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94(3H，d，J＝5.8Hz)，0.98(3H，d，J＝5.8Hz)，1.60-1.85(3H，m)，2.67(2H，d，J＝6.6Hz)，3.50-4.50(10H，m)，5.33(1H，t，J＝6.6Hz)，7.15-7.50(5H，m).
實(shí)施例82(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯按照實(shí)施例75敘述的同樣方法，用N-芐氧羰基-L-纈氨酸替代N-芐氧羰基甘氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.75-0.95(12H，m)，1.40-2.10(4H，m)，3.04(1H，d，J＝6.8Hz)，3.40-5.40(9H，m)，5.04(2H，s)，6.68(1H，s)，7.10-7.50(20H，m)，7.98(1H，d，J＝7.6Hz)，8.16(1H，d，J＝9.2Hz).
實(shí)施例83(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-6-乙酰氧基-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4-三羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(200毫克)的吡啶(1毫升)溶液中加入乙酸酐(0.0243毫升)，混合物于室溫?cái)嚢?4小時(shí)。減壓濃縮后，殘余物通過硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-甲醇(20∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮得到殘余物。將它用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(103毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.80-1.05(12H，m)，1.45-2.20(4H，m)，2.02(3H，s)，3.03(1H，dd，J＝13.4Hz，8.4Hz)，3.21(1H，dd，J＝13.4Hz，9.6Hz)，3.60-4.60(8H，m)，5.08(2H，s)，5.40-5.50(1H，m)，6.73(1H，s)，7.10-7.40(20H，m).
實(shí)施例84(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-6-乙酰氧基-2，3，4-三羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例76敘述的同樣方法，用(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-6-乙酰氧基-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4-三羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯替代(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.90-1.15(12H，m)，1.50-2.30(4H，m)，2.03(3H，s)，2.80(2H，d，J＝6.6Hz)，5.32(1H，t，J＝6.6Hz)，7.10-7.50(5H，m).
實(shí)施例85(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3-二羥基-4，6-(O-亞異丙基)二氧基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(200毫克)的四氫呋喃(5毫升)溶液中加入2，2-二甲氧基丙烷(0.288毫升)和對(duì)甲苯磺酸一水合物(4毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉水溶液之后，將整體用乙酸乙酯萃取，萃取液用飽和鹽水洗滌，之后用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(183毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.80-1.10(12H，m)，1.10-2.10(4H，m)，1.34(3H，s)，1.44(3H，s)，2.80-3.10(2H，m)，3.30-4.40(8H，m)，5.05(1H，d，J＝12.4Hz)，5.13(1H，d，J＝12.4Hz)，6.81(1H，s)，7.10-7.40(20H，m).
實(shí)施例86(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3-二羥基-4，6-(O-亞異丙基)二氧基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例76敘述的同樣方法，用(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3-二羥基-4，6-(O-亞異丙基)二氧基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯替代(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((N-芐氧羰基甘氨酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3OD)δ0.79(3H，d，J＝6.8Hz)，0.80-0.95(9H，m)，1.33(3H，s)，1.40(3H，s)，1.30-2.10(4H，m)，2.55-2.90(3H，m)，3.00-5.50(11H，m)，7.10-7.40(5H，m)，8.00-8.45(3H，m).
實(shí)施例87(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-色氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-芐氧羰基-L-色氨酸(355毫克)的乙腈(30毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(127毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(217毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(456毫克)和三乙胺(0.139毫升)的二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?9小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入1N鹽酸并將整體用乙酸乙酯-乙腈萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌和用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(200毫克)一起攪拌24小時(shí)。過濾后，減壓濃縮濾液，得到殘余物通過快速硅膠柱色譜提純，然后用乙腈-水(4∶1)洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮，得到的殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(323毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.91(3H，d，J＝6.2Hz)，0.95(3H，d，J＝6.2Hz)，1.50-1.80(3H，m)，2.69(2H，d，J＝6.2Hz)，3.20-4.50(10H，m)，5.33(1H，t，J＝6.2Hz)，6.95-7.50(9H，m)，7.73(1H，d，J＝7.4Hz).
實(shí)施例88(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(N-(2-氨基異丁酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向2-(芐氧羰基氨基)異丁基酸(81毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(41毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(71毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.061毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?2小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(30毫升)并于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(70毫克)一起攪拌1天。過濾后，減壓濃縮濾液，得到殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-二異丙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(114毫克)。
1H-NMR(D2O)δ0.89(3H，d，J＝5.4Hz)，0.94(3H，d，J＝5.8Hz)，1.62(3H，s)，1.64(3H，s)，1.60-1.85(3H，m)，2.74(2H，d，J＝7.0Hz)，3.60-3.80(3H，m)，3.90(1H，d，J＝9.9Hz)，4.22-4.48(3H，m)，5.21(1H，t，J＝7.0Hz)，7.32-7.48(5H，m).
實(shí)施例89(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-(1-氨基環(huán)己基)羰基)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例88敘述的同樣方法，用1-(芐氧羰基氨基)環(huán)己烷甲酸替代2-(芐氧羰基氨基)異丁酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.90(6H，m)，1.10-1.84(13H，m)，2.69-2.75(2H，m)，3.15-4.09(10H，m)，4.13(1H，s)，4.38(1H，m)，5.20-5.28(2H，m)，5.76(1H，m)，7.21-7.40(5H，m)，7.49(1H，m)，8.10-8.28(2H，m).
實(shí)施例90(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-蛋氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸N-叔丁氧基羰基-L-甲硫氨酸(86毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(41毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(71毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.061毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?8.5小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(5毫升)溶液并將整體于室溫?cái)嚢?小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑，得到的殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(60毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.91(6H，m)，1.45-1.99(5H，m)，2.03(3H，s)，2.47-2.56(2H，m)，2.69-2.75(2H，m)，3.40-4.00(6H，m)，4.13(1H，s)，4.37(1H，m)，5.21(1H，m)，7.21-7.38(5H，m)，7.49(1H，br d，J＝8.8Hz)，8.18(1H，m)，8.29(1H，br d，J＝7.0Hz).
實(shí)施例91
(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-甲基-L-半胱氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例90敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-S-甲基-L-半胱氨酸替代N-叔丁氧基羰基-L-甲硫氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.91(6H，m)，1.46-1.73(3H，m)，1.91(2H，m)，2.05(3H，s)，2.55-2.88(4H，m)，3.40-4.09(6H，m)，4.13(1H，s)，4.38(1H，m)，5.22(1H，m)，7.21-7.38(5H，m)，7.50(1H，br d，J＝8.4Hz)，8.14-8.25(2H，m).
實(shí)施例92(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2-氨基-4-戊酰)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例90敘述的同樣方法，用(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-戊烯酸替代N-叔丁氧基羰基-L-甲硫氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.90(6H，m)，1.43-1.64(3H，m)，2.12-2.48(2H，m)，2.69-2.75(2H，m)，3.40-4.09(6H，m)，4.13(1H，s)，4.38(1H，m)，5.00-5.28(3H，m)，5.76(1H，m)，7.21-7.40(5H，m)，7.49(1H，br d，J＝8.6Hz)，8.13(1H，brd，J＝7.6Hz)，8.28(1H，br d，J＝10.8Hz).
實(shí)施例93(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(N-((S)-2-吡咯烷酮-5-羰基)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向L-焦谷氨酸(44毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(41毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(71毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物3)(150毫克)和三乙胺(0.061毫升)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?2小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物通過Sephadex LH-20柱(Pharmacia，瑞典)，然后用水洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(24毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，0.97(3H，d，J＝6.6Hz)，1.62-1.78(3H，m)，2.11-2.48(4H，m)，2.89(2H，t，J＝6.4Hz)，3.65-3.72(3H，m)，3.91(1H，d，J＝9.8Hz)，4.19-4.26(2H，m)，4.32(1H，d，J＝1.4Hz)，4.50(1H，m)，5.38(1H，t，J＝6.4Hz)，7.23-7.42(5H，m).
實(shí)施例94(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((N，N-二甲基-L-纈氨酰)-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯向N，N-二甲基-L-纈氨酸(58毫克)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(250毫克)的二甲基甲酰胺(4毫升)溶液中加入氰基膦酸二乙酯(82毫克)和三乙胺(0.14毫升)，混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。加水之后，將整體用乙酸乙酯萃取，萃取液用飽和鹽水洗滌然后用無水硫酸鈉干燥。脫除有機(jī)溶劑得到的殘余物用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(282毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.70-0.95(12H，m)，1.00-2.00(4H，m)，2.17(6H，s)，3.04(2H，d，J＝7.0Hz)，3.30-5.40(12H，m)，6.67(1H，s)，7.10-7.40(16H，m)，8.01(1H，d，J＝8.8Hz)，8.15(1H，d，J＝8.8Hz).
實(shí)施例95(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-(N-甲基-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰)-N-甲基-L-亮氨酸(240毫克)的乙腈(20毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(88毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(151毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體并將濾液加入到(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸(化合物5)(239毫克)和三乙胺(0.097毫升)的二甲基甲酰胺(70毫升)溶液中。混合物于室溫?cái)嚢?6小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(20毫升)溶液并將整體于室溫?cái)嚢?小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(123毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.70-1.00(12H，m)，1.00-2.20(4H，m)，2.50-2.80(2H，m)，2.86(3/2H，s)，2.89(3/2H，s)，3.00-5.30(9H，m)，7.10-7.40(5H，m).
實(shí)施例96(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-(N-((S)-2-氨基-3-甲基丁基)-L-亮氨酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸于0℃，向N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酸(240毫克)和(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸二苯基甲酯(278毫克)的甲醇(10毫升)溶液中加入氰基硼氫化鈉(63毫克)，混合物于0℃攪拌2小時(shí)，于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。減壓濃縮后，殘余物進(jìn)行快速硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-甲醇(20∶1)洗脫。合并有效級(jí)分，并減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液并將整體于室溫?cái)嚢?小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(25毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6+3％TFA)δ0.85-1.10(6H，m)，1.40-2.60(4H，m)，2.70-2.90(2H，m)，2.90-5.40(9H，m)，7.20-7.45(5H，m)，8.00-8.40(2H，m).
實(shí)施例97(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-2-(L-正纈氨酰)氨基-4-戊烯酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸向N-叔丁氧基羰基-L-正纈氨酸(54毫克)的乙腈(1毫升)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(29毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(52毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液減壓濃縮。殘余物溶于二甲基甲酰胺(8毫升)。溶液中加入(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-4-戊烯酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]-3-苯基丙酸(110毫克)和三乙胺(0.035毫升)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?0小時(shí)，然后減壓濃縮。殘余物中加入4N氯化氫的乙酸乙酯(10毫升)溶液并將整體于室溫?cái)嚢?小時(shí)。脫除有機(jī)溶劑，得到殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(56毫克)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.86(3H，t，J＝7.0Hz)，1.20-1.80(4H，m)，2.20-2.90(4H，m)，3.30-5.90(12H，m)，7.10-7.45(5H，m)，7.54(1H，d，J＝7.8Hz)，8.28(1H，d，J＝12.8Hz).
實(shí)施例98(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-2-(L-異亮氨酰)氨基-4-戊烯酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例97敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-L-異亮氨酸替代N-叔丁氧基羰基-L-正纈氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.75-0.95(6H，m)，0.95-1.80(3H，m)，2.10-2.90(4H，m)，3.10-4.50(8H，m)，4.95-5.90(4H，m)，7.15-7.20(5H，m).
實(shí)施例99(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-2-(L-甲硫氨酰)氨基-4-戊烯酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸按照實(shí)施例97敘述的同樣方法，用N-叔丁氧基羰基-L-甲硫氨酸替代N-叔丁氧基羰基-L-正纈氨酸，制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.50-2.10(2H，m)，2.10-3.00(6H，m)，2.03(3H，s)，3.20-5.90(9H，m)，7.15-7.40(5H，m).
實(shí)施例100(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-(4-甲基苯基)丙酸乙酯向[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酸(250毫克)的乙腈(10毫升)溶液中加入N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧基酰亞胺(110毫克)和N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(110毫克)，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入(S)-3-氨基-3-(4-甲基苯基)丙酸乙酯(150毫克)和三乙胺(0.13毫升)的乙腈(10毫升)溶液之后，將整體于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。濾除形成的不溶固體，濾液減壓濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯(100毫升)并用飽和鹽水(50毫升×2)洗滌，之后用無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮后，殘余物通過硅膠柱色譜提純，然后用乙酸乙酯-己烷(2∶1)洗脫。合并有效級(jí)分，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(184毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.89-0.96(6H，m)，1.15(3H，q，J＝7.2Hz)，1.45-1.73(3H，m)，1.96(3H，s)，2.01(3H，s)，2.04(3H，s)，2.08(3H，s)，2.28(3H，s)，2.76(1H，dd，J＝15.8Hz，7.4Hz)，2.88(1H，dd，J＝15.8Hz，7.4Hz)，3.80(1H，dd，J＝11.0Hz，7.2Hz)，3.99-4.21(7H，m)，4.51(1H，t，J＝7.4Hz)，5.07(2H，s)，5.22(1H，t，J＝7.4Hz)，5.37(2H，s)，7.10(2H，d，J＝8.0Hz)，7.18(2H，d，J＝8.0Hz)，7.30-7.36(5H，m).
實(shí)施例101(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-(4-甲基苯基)丙酸將(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四乙酰氧基-5-(N-芐氧羰基-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-(4-甲基苯基)丙酸乙酯(184毫克)的甲醇(10毫升)溶液于室溫及氫氣氣氛下與10％鈀/活性炭(100毫克)一起攪拌2小時(shí)。過濾后，濾液減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(10毫升)，并在冰冷卻下，向溶液中加入1N氫氧化鈉水溶液(2.2毫升)?；旌衔镌诒鋮s下攪拌1小時(shí)，然后加入1N鹽酸(2.2毫升)。減壓濃縮后，殘余物通過DIAION HP-20SS柱(Mitsubishi kasei公司)，然后用水-乙腈洗脫。合并有效級(jí)分并減壓濃縮。殘余物用甲醇-乙酸乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(50毫克)。
1H-NMR(CD3OD)δ0.98-1.02(6H，m)，1.60-1.85(3H，m)，
2.27(3H，s)，2.67(2H，d，J＝6.4Hz)，3.65-3.74(3H，m)，3.85-3.90(2H，m)，4.24-4.31(2H，m)，5.27(1H，t，J＝6.4Hz)，7.09(2H，d，J＝8.0Hz)，7.26(2H，d，J＝8.0Hz).
參考例和實(shí)施例中得到的化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示。縮寫‘Ac’意指乙?；?。
試驗(yàn)例1體外抗菌試驗(yàn)體外對(duì)幽門螺桿菌的抗菌活性使用幽門螺桿菌(NCTC 11637)作為試驗(yàn)菌株，通過以下瓊脂稀釋法測(cè)定HC-70I(化合物1)和HC-70II(化合物2)的抗菌活性。將HC-70I和HC-70II分別溶于二甲亞砜中，且使用無菌蒸餾水，制備用作樣品的兩倍稀釋系列。使用7％馬血補(bǔ)充的布魯氏桿菌瓊脂作為培養(yǎng)基，通過將2毫升每個(gè)樣品與18毫升7％馬血-布魯氏桿菌瓊脂混合來制備平板。為了制備接種物，使用一個(gè)裝有CampyPakTM[BBL BecktonDickinson Microbiology Systems]的充氣(a gas pak)容器，將幽門螺桿菌在2.5％胎牛血清-布魯氏桿菌肉湯中于37℃振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。用5微升已用2.5％胎牛血清-布魯氏桿菌肉湯調(diào)節(jié)到106CFU/毫升的各細(xì)胞懸液接種測(cè)定平板，并在裝有CampyPakTM和水浸漬的衛(wèi)生棉的充氣容器中，于37℃保溫4天。培養(yǎng)后，粗略評(píng)價(jià)細(xì)菌生長度并將觀測(cè)不到生長的最低濃度記錄為MIC(最低抑制濃度)。對(duì)于HC-70I和HC-70II，MIC值為0.025(微克/毫升)。
試驗(yàn)例2體內(nèi)抗菌試驗(yàn)將小鼠(CrjICR，雄性，5周齡)絕食20小時(shí)并給每只小鼠的胃里接種劑量為107.79CFU的幽門螺桿菌TN2F4。感染后開始11天，懸浮于0.5％甲基纖維素/水中的50毫克/千克試驗(yàn)化合物連續(xù)兩天每日早晚口服給藥兩次。在最后一次給藥后那天，將胃從感染的小鼠分離出并均化，在活性炭改性的Skirrow培養(yǎng)基上接種勻漿的10倍稀釋系列。于37℃，微量通氧條件下培養(yǎng)4天，根據(jù)細(xì)菌的生長情況確定清除率。
結(jié)果示于表1。細(xì)菌數(shù)以平均±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，并且按照Dunnett法，通過與對(duì)照組比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
表1
ND未發(fā)現(xiàn)從表1可見，在50毫克/千克劑量水平，HC-70II鹽酸鹽(化合物4)和HC-70III(化合物3)實(shí)現(xiàn)了100％清除率。所以，顯然本發(fā)明的藥物組合物能有效地預(yù)防和治療與幽門螺桿菌有關(guān)的胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍和胃癌。
試驗(yàn)例35周齡的MON/Jms/Gbs蒙古沙鼠胃內(nèi)接種107.58CFU的幽門螺桿菌TN2GF4。感染4周后，懸浮于0.5％甲基纖維素中的實(shí)施例47的化合物以30毫克/千克劑量每日口服給藥兩次，連續(xù)兩天。在最后處理之后那天，殺死動(dòng)物。
取出胃并用3毫升布魯氏桿菌肉湯勻漿，并通過連續(xù)稀釋和在改性的Skirrow平板上滴定測(cè)定勻漿中的細(xì)菌數(shù)目。在計(jì)數(shù)之前，將平板在微量通氧條件下于37℃保溫4天。把最終處理后那天胃內(nèi)未見幽門螺桿菌定義為完全清除。
劑量為30毫克/千克的實(shí)施例47的化合物，兩天每日兩次給藥降低了感染有機(jī)體的數(shù)目；4個(gè)沙鼠中有2個(gè)達(dá)到了完全清除。
表2 實(shí)施例47的化合物重復(fù)給藥對(duì)MON/Jms/Gbs蒙古沙鼠中幽門螺桿菌TN2GF4造成的胃感染的抑制作用
**按照Dunnett試驗(yàn)，對(duì)于載體對(duì)照p∠0.01試驗(yàn)例4胃粘膜粘著制劑體內(nèi)抗幽門螺桿菌作用用幽門螺桿菌感染的蒙古沙鼠(MON/Jms/Gbs)分別以3毫克/千克，10毫克/千克HC-70-II每日兩次連續(xù)7天口服配制例3中獲得的含HC-70-II的胃粘膜粘著制劑(表3中的HC-70-II AdMMS-1)，和含HC-70-II的0.5％甲基纖維素懸浮液(表3中的HC-70-II懸浮液)。最終給藥之后16小時(shí)，取出胃，胃壁勻漿，并在幽門螺桿菌選擇性培養(yǎng)基上將連續(xù)稀釋液鋪平板。在微量通氧條件下，將接種的培養(yǎng)基在37℃保溫4天并計(jì)數(shù)活細(xì)胞的數(shù)目。結(jié)果示于表3.
表3
與HC-70-II懸浮液相比，含有HC-70-II的胃粘膜粘著制劑具有與HC-70-II懸浮液(其是HC-70-II懸浮液1/3劑量)同樣水平的抗幽門螺桿菌活性。
配制例1作為幽門螺桿菌感染的治療劑，本發(fā)明的化合物或鹽一般按以下劑型給藥。
1.膠囊(1)HC-70I 100毫克(2)乳糖 90毫克(3)微晶纖維素 70毫克(4)硬脂酸鎂 10毫克270毫克/膠囊將(1)，(2)，和(3)的全量和(4)的半量混合和造粒。造粒中加入余下的(4)，并將整個(gè)組合物填充到明膠膠囊壁內(nèi)。
2.片劑(1)HC-70I100毫克(2)乳糖 35毫克(3)玉米淀粉 150毫克(4)微晶纖維素30毫克(5)硬脂酸鎂 5毫克每個(gè)片劑重320毫克將(1)，(2)，和(3)的全量，(4)的2/3量和(5)的半量混合和造粒。造粒中加入余下的(4)和(5)，并將整個(gè)組合物壓片。
配制例2氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(40克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(39克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入1克化合物2(HC-70-II)、10克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，Wako Pure化學(xué)工業(yè)有限公司)和10克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以2700rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例3氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(20克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(59克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入1克化合物2(HC-70-II)、10克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，Wako Pure化學(xué)工業(yè)有限公司)和10克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以2700rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例4山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(69克)的混合物于80℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入1克化合物2(HC-70-II)、10克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，Wako Pure化學(xué)工業(yè)有限公司)和20克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于80℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以2400rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例5氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(30克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(49克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入1克化合物2(HC-70-II)、10克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，Wako Pure化學(xué)工業(yè)有限公司)和10克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以2700rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例6氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(20克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(59克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入1克化合物2(HC-70-II)、10.0克丙烯酸系聚合物(FX-214TM，BF GoodrichIndustries，Ltd.)和10克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以2700rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
實(shí)施例7山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(60克)的混合物于80℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入30克化合物2(HC-70-II)、6克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，Wako Pure化學(xué)工業(yè)有限公司)和4克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于80℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以3960rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例8氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(10克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(50克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入30克化合物2(HC-70-II)、6克丙烯酸系聚合物(HIVISWAKO 104TM，WakoPure化學(xué)工業(yè)有限公司)和4克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以3960rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
試驗(yàn)例9山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(60克)的混合物于80℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入30克化合物2(HC-70-II)、6克丙烯酸系聚合物(EX-214TM，BFGoodrich Industries，Ltd.)和4克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-Etsu Chemicals)，混合物于80℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以3960rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42目的球形細(xì)顆粒。
配制例10氫化蓖麻油(Lubri蠟101TM，F(xiàn)reund工業(yè)有限公司)(10克)和山萮酸六(四)甘油酯(HB-310TM，Sakamoto Yakuhin Kogyo有限公司)(50克)的混合物于85℃進(jìn)行熔化。向該熔體中順序加入30克化合物2(HC-70-II)、6克丙烯酸系聚合物(EX-214TM，BF GoodrichIndustries，Ltd.)和4克低取代的羥丙基纖維素(L-HPCTM，Shin-EtsuChemicals)，混合物于85℃恒溫?cái)嚢璺稚?小時(shí)。將此熔融混合物以50克/分鐘的流速滴入15厘米(直徑)以3960rpm旋轉(zhuǎn)的鋁盤，從而得到通過42/119目的球形細(xì)顆粒。
工業(yè)應(yīng)用性本發(fā)明的化合物(I)對(duì)以幽門螺桿菌表示的幽門螺桿菌類細(xì)菌具有特出的和很高的抗菌活性。所以，與控制幽門螺桿菌類細(xì)菌(特別是幽門螺桿菌)使用的常規(guī)抗菌劑相比，此化合物(I)能以顯著低的劑量實(shí)現(xiàn)所需的抗幽門螺桿菌效果。
化合物(I)能有效地預(yù)防和治療與幽門螺桿菌有關(guān)的各種疾病，例如十二指腸潰瘍、胃潰瘍、慢性胃炎和胃癌。此外，由于幽門螺桿菌是潰瘍復(fù)發(fā)的主要因素，化合物(I)也能有效地預(yù)防潰瘍的復(fù)發(fā)。
此外，化合物(I)對(duì)一些革蘭氏陽性菌例如普通葡萄球菌和芽孢桿菌和一些革蘭氏陰性菌例如普通埃希氏菌、假單胞菌、變形菌、克雷伯氏菌、沙雷氏菌、沙門氏菌、檸檬酸桿菌、堿桿菌等等沒有活性。所以，化合物(I)能選擇性地預(yù)防或治療與幽門螺桿菌有關(guān)的疾病，而對(duì)于其它細(xì)菌和真菌作用微弱，因此可作為安全藥物使用。
本發(fā)明的胃粘膜粘著組合物可以將活性成分的數(shù)量降到其懸浮液劑量的一半至二十分之一。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，其中R1是酰氨基或被可取代的烴基取代的氨基。
3.按照權(quán)利要求2的化合物，其中酰氨基是被氨基酸殘基取代的氨基。
4.按照權(quán)利要求3的化合物，其中氨基酸殘基是α-氨基酸殘基。
5.按照權(quán)利要求1的化合物，其中R1是氨基或下式基團(tuán)
其中R7是可被α-L-氨基酸殘基取代的α-L-氨基酸殘基取代的氨基，R8是可取代的烴基；R2代表羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表羥基；Q代表苯基。
6.按照權(quán)利要求5的化合物，它由下式(V)表示
其中R7和R8具有權(quán)利要求5的相同定義。
7.按照權(quán)利要求5的化合物，其中R8是C1-10烷基，C6-14芳基-C1-6烷基，C2-10鏈烯基或C2-10炔基，這些基團(tuán)可被取代。
8.按照權(quán)利要求7的化合物，其中R8是C1-6烷基或C2-6鏈烯基。
9.按照權(quán)利要求7的化合物，其中R7是可被纈氨酰基、纈氨酰纈氨酰基、纈氨酰異亮氨?；蚶i氨酰亮氨?；〈陌被?。
10.按照權(quán)利要求8的化合物，其中R8是異丁基或烯丙基。
11.按照權(quán)利要求1的化合物，其中R1是氨基。
12.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
13.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-異亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
14.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
15.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-纈氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
16.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
17.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基-4-戊烯酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
18.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-5-((S)-2-氨基丁酰)氨基-2，3，4，6-四羥基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
19.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-異亮氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
20.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-(L-甲硫氨酰-L-亮氨酰)氨基己酰]氨基-3-苯基丙酸。
21.按照權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-3-[(2S，3R，4R，5S)-2，3，4，6-四羥基-5-((S)-2-(L-正纈氨酰)氨基-4-戊烯酰]氨基-3-苯基丙酸。
22.含有按照權(quán)利要求1的化合物的藥物組合物。
23.按照權(quán)利要求22的組合物，它是抗幽門螺桿菌劑。
24.按照權(quán)利要求23的抗幽門螺桿菌劑，它是用于與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病的預(yù)防和治療藥。
25.按照權(quán)利要求24的抗幽門螺桿菌劑，其中與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病是胃潰瘍或十二指腸潰瘍，胃炎，胃癌或胃MALT淋巴瘤。
26.抗幽門螺桿菌劑，它包括按照權(quán)利要求1的化合物和至少一種其它抗菌劑或/和抗?jié)兯帯?br>
27.按照權(quán)利要求22的組合物，它是胃粘膜粘著藥物組合物。
28.按照權(quán)利要求27的組合物，它包括(a)按照權(quán)利要求1的化合物，(b)脂質(zhì)和/或多甘油脂肪酸酯和(c)能與水成粘性的粘性劑。
29.按照權(quán)利要求28的組合物，其中(c)粘性劑是丙烯酸系聚合物或其鹽。
30.按照權(quán)利要求28的組合物，它包括(d)一種能溶脹該粘性劑的物質(zhì)。
31.按照權(quán)利要求30的組合物，其中能溶脹該粘性劑的物質(zhì)是產(chǎn)堿桿菌多糖和/或低取代的羥丙基纖維素。
32.一種制備按照權(quán)利要求1的化合物的方法，它包括使式(II)的羧酸
其中R1是可取代的氨基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基，或其鹽，或其活性衍生物；與式(III)化合物
其中R2代表可酯化或酰胺化的羧基；Q代表可取代的芳基，或其鹽進(jìn)行反應(yīng)。
33.一種制備按照權(quán)利要求1的化合物的方法，它包括使式(IV)化合物
其中R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5和R6分別代表可保護(hù)的羥基，Q代表可取代的芳基，或其鹽，或其活性衍生物；與下式化合物R9-X其中R9代表?；?，或可取代的烴基；X代表離去基團(tuán)，或其鹽，或其活性衍生物反應(yīng)。
34.一種制備按照權(quán)利要求5的化合物的方法，它包括在培養(yǎng)基中生長能夠產(chǎn)生按照權(quán)利要求5的化合物的芽孢桿菌屬(Bacillus)的微生物菌株，讓該菌株在發(fā)酵液中生長并積累該化合物以及收集化合物。
35.按照權(quán)利要求34的方法，其中微生物菌株是芽孢桿菌HC-70或異常芽孢桿菌HC-72(Bacillus insolitus HC-72)。
36.能夠產(chǎn)生按照權(quán)利要求5的化合物的芽孢桿菌HC-70或異常芽孢桿菌HC-72。
37.預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中與幽門螺桿菌感染有關(guān)的疾病的方法，它包括給需要的哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)化合物
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
38.式(I)化合物用于制備抗幽門螺桿菌劑的用途
其中R1代表可取代的氨基；R2代表可酯化或酰胺化的羧基；R3，R4，R5，和R6分別代表可保護(hù)的羥基；Q代表可取代的芳基；或其鹽。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物,其中R
文檔編號(hào)C07C237/20GK1261894SQ98806743
公開日2000年8月2日 申請(qǐng)日期1998年7月8日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月9日
發(fā)明者宮川權(quán)一郎, 坪谷重利, 中尾雅文, 中埜芳孝, 神山圭司, 伊澤干夫, 秋山洋子, 錦見裕司 申請(qǐng)人:武田藥品工業(yè)株式會(huì)社