專利名稱：為環(huán)氧合酶-2選擇性抑制劑的取代的吡啶類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的背景本發(fā)明涉及治療環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病的方法以及用于治療的部分組合物。
非甾體抗炎藥物在其抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱活性方面發(fā)揮了最大作用并抑制激素誘導(dǎo)的子宮收縮以及通過(guò)抑制也稱為環(huán)氧合酶的前列腺素G/H合成酶而抑制某些癌癥的生長(zhǎng)。到最近為止，只鑒定一種形式的環(huán)氧合酶，即相當(dāng)于環(huán)氧合酶-1(COX-1)或組成酶，該酶最初由牛精囊中鑒定出來(lái)。最近，對(duì)鼠和人的二次誘導(dǎo)形式的環(huán)氧合酶，即環(huán)氧合酶-2(COX-2)的基因進(jìn)行了克隆、序列分析和鑒定。環(huán)氧合酶-2與環(huán)氧合酶-1不同，對(duì)羊、鼠和人來(lái)源的環(huán)氧合酶-1也進(jìn)行了克隆、序列分析和鑒定。第二種形式的環(huán)氧合酶，COX-2可以快速且容易地被多種介質(zhì)包括促細(xì)胞分裂劑、內(nèi)毒素、激素、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)。由于前列腺素具有生理和病理作用，因此我們認(rèn)為組成酶，即COX-1大部分負(fù)責(zé)內(nèi)源性前列腺素的基礎(chǔ)釋放，并因此在它們的生理功能如維持胃腸的完整性和腎血流中起重要的作用。相反，我們認(rèn)為誘導(dǎo)形式，即COX-2主要負(fù)責(zé)前列腺素的病理作用，該酶因受此類介質(zhì)如炎癥因子、激素、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的作用而發(fā)生快速誘導(dǎo)。因此，COX-2的選擇性抑制劑與傳統(tǒng)的非甾體抗炎藥物具有相似的抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛性能，此外可以抑制激素誘導(dǎo)的子宮收縮并具有潛在的抗癌作用，而且還具有降低誘導(dǎo)以某些機(jī)制為基礎(chǔ)的副作用的能力。具體地講，此類化合物具有降低胃腸毒性、降低腎副作用、減少出血時(shí)間的作用可能降低對(duì)阿斯匹林-過(guò)敏的患者誘導(dǎo)哮喘發(fā)作的能力。
而且，此類化合物也可以通過(guò)阻止收縮性的前列腺素類的合成而抑制前列腺素誘導(dǎo)的平滑肌收縮，并因此可以用于治療痛經(jīng)、早產(chǎn)、哮喘和以及嗜酸性細(xì)胞相關(guān)的疾病。它也可以用于治療Alzheimer氏病、減少特別是絕經(jīng)后婦女的骨丟失(即治療骨質(zhì)疏松)和治療青光眼。
環(huán)氧合酶-2的選擇性抑制劑的潛在的用途在下列文章中討論1．John Vane,“Towards a better aspirin”in Nature，第367卷，第215-216頁(yè)，1994。
2．Bruno Battistini,Regina Botting和Y.S.Bakhle,“COX-1 andCOX-2:Toward the Development of More Selective NSAIDs”in DrugNews and Perspectives，第7卷，第501-512頁(yè)，1994。
3．David B.Reitz and Karen Seibert,“Selective CyclooxygenaseInhibitors”in Annual Reports in Medicinal Chemistry,James A.Bristol,Editor，第30卷，第179-188頁(yè)，1995。
4．Don E.Griswold and Jerry L Adams,“ConstituativeCyclooxygenase(COX-1)and Inducible Cyclooxygenase(COX-2):Rationale for Selective Inhibition and Progress to Date”in MedicinalResearch Reviews，第16卷，第181-206頁(yè)，1996。
WO 96/10012(DuPont Merck,1996年4月)公開(kāi)由式A代表的化合物，該化合物通過(guò)對(duì)COX-2而不是對(duì)COX-1的選擇性抑制用于治療COX-2介導(dǎo)的疾病。我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)由A代表的化合物亞群(其中-J-K-L-為-NCHCH-,X為一個(gè)鍵，R1為芳香的，R3和R4不都為氫)對(duì)于COX-2抑制的選擇性出乎意料地超過(guò)對(duì)于COX-1的抑制和/或與96/10012公開(kāi)的最近的一類相比具有優(yōu)越的效力。該亞群化合物是本發(fā)明的主題并由式Ⅰ代表。
A BI在WO 96/10012公開(kāi)的175種特定的化合物中，僅僅有4種為吡啶類化合物，而在這4種無(wú)一種在吡啶環(huán)上含有取代基(在A上的R3或R4)。
WO 96/16934(Searle,1996年6月6日)公開(kāi)用于治療炎癥和相關(guān)疾病的結(jié)構(gòu)B代表的化合物。從化學(xué)上講，這些化合物不同于本發(fā)明的化合物，因?yàn)樗鼈兊娜齻€(gè)芳香環(huán)的中心是苯而不是吡啶。
本發(fā)明的概述本發(fā)明包括式Ⅰ的新化合物以及治療COX-2介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給予需要此治療的病人以非-毒性治療有效量的式(Ⅰ)化合物。
本發(fā)明也包括某些含有式(Ⅰ)化合物的治療COX-2介導(dǎo)的疾病的藥用組合物。
本發(fā)明的詳述本發(fā)明包括式Ⅰ的新化合物以及治療COX-2介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給予需要此治療的病人以非-毒性治療有效量的式(Ⅰ)化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，(c)NHC(O)CF3，(d)NHCH3；Ar為一、二或三取代苯基或吡啶基(或其N-氧化物)，其中所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-6烷氧基，(d)C1-6烷硫基，(e)CN，(f)C1-6烷基，(g)C1-6氟代烷基，(h)N3，(i)-CO2R3，
(j)羥基，(k)-C(R4)(R5)-OH，(l)-C1-6烷基CO2-R6，(m)C1-6氟代烷氧基；R2選自(a)鹵素，(b)C1-6烷氧基，(c)C1-6烷硫基，(d)CN，(e)C1-6烷基，(f)C1-6氟代烷基，(g)N3，(h)-CO2R7，(i)羥基，(j)-C(R8)(R9)-OH，(k)-C1-6烷基CO2-R10，(l)C1-6氟代烷氧基；(m)NO2，(n)NR11R12，(o)NHCOR13R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13各自獨(dú)立選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，或R4和R5、R8和R9或R11和R12與它們所連接的原子一起形成3、4、5、6或7元飽和的單環(huán)。
恰當(dāng)?shù)耐榛谆?、乙基、正丙基、異丙基和丁基、戊基以及己基。?yōu)選的烷基為甲基。一般而言，R4和R5、R8和R9以及R11和R12不是上述單環(huán)的殘基。當(dāng)‘烷基’為復(fù)合術(shù)語(yǔ)如烷氧基、烷硫基、氟代烷基、氟代烷氧基的一部分時(shí)，那么上述的烷基也指復(fù)合術(shù)語(yǔ)。
式Ⅰ優(yōu)選的亞類為其中Ar為一或二取代的吡啶基的化合物。在該亞類中，特別優(yōu)選所述3-吡啶基異構(gòu)體，例如式Ⅰc的那些化合物。
當(dāng)Ar為二取代的苯基時(shí)，其中一個(gè)或兩個(gè)所述取代基為氫特別恰當(dāng)。
優(yōu)選的另一亞類式Ⅰ化合物為其中Ar為一或二取代的苯基的化合物。
當(dāng)Ar為二取代的苯基時(shí)，其中一個(gè)所述取代基為氫或氟，第二個(gè)取代基為氫、氟、氯、甲基、甲氧基或三氟甲基特別恰當(dāng)。
優(yōu)選的另一亞類式Ⅰ化合物為其中R1為CH3或NH2的化合物。一般而言，對(duì)于COX-2的特異性而言優(yōu)選CH3，對(duì)于效力而言，優(yōu)選NH2。
優(yōu)選的另一亞類式Ⅰ化合物為其中R2為鹵素、CH3或CF3的化合物。
優(yōu)選的另一亞類式Ⅰ化合物為其中Ar上的取代基選自下列取代基的化合物(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-4烷氧基，(d)C1-4烷硫基，(e)C1-4烷基，(f)CF3，(g)CN。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及式Ⅰ化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，(c)NHC(O)CF3，(d)NHCH3；Ar為一、二或三取代的吡啶基(或其N-氧化物)，其中所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-6烷氧基，(d)C1-6烷硫基，(e)CN，(f)C1-6烷基，(g)C1-6氟代烷基，(h)N3，(i)-CO2R3，(j)羥基，(k)-C(R4)(R5)-OH，
(l)-C1-6烷基CO2-R6，(m)C1-6氟代烷氧基；R2選自(a)鹵素，(b)C1-6烷氧基，(c)C1-6烷硫基，(d)C1-6烷基，(e)N3，(f)-CO2H，(g)羥基，(h)C1-6氟代烷氧基；(i)NO2，(j)NR11R12，(k)NHCOR13R3、R4、R5、R6、R11、R12、R13各自獨(dú)立選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，或R4和R5或R11和R12與它們所連接的原子一起形成3、4、5、6或7元飽和的單環(huán)。
在該方面有一類式Ⅰc化合物
其中
R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2選自(a)氯，(b)甲基，且其中有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-4烷氧基，(d)C1-4烷硫基，(e)CN，(f)C1-4烷基，(g)CF3。
在式Ⅰc的這類化合物中有一亞類化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2為氯且其中有一個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自
(a)氫，(b)F或Cl，(c)甲基，(d)乙基。
在式Ⅰc的這類化合物中有一亞類化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2為氯且其中有一個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自(a)氫，(b)F或Cl，(c)甲基。
優(yōu)選的式Ⅰ和Ⅰc化合物包括其中R2為鹵素，特別是氯的化合物。
優(yōu)選的式Ⅰ和Ⅰc化合物包括其中Ar為3-吡啶基，X為氫或C1-3烷基，特別是氫、對(duì)位-甲基和對(duì)位-乙基的那些化合物。
本發(fā)明的示例性化合物為下列化合物3-(4-甲磺酰基)苯基-2-苯基-5-三氟甲基吡啶；2-(3-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶；
2-(4-氟代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶；3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)-5-三氟甲基吡啶；5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-苯基吡啶；2-(4-氯代苯基)-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶；5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶；5-氯代-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(4-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶基-5-羧酸甲酯；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶基-5-羧酸；5-氰基-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶鹽酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶鹽酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶；和5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽。
優(yōu)選的式Ⅰ和Ⅰc化合物包括其中R1為甲基或NH2，特別是甲基的化合物。
另一方面，本發(fā)明也包括治療對(duì)于非甾體抗炎藥治療敏感的炎癥性疾病的藥用組合物，該組合物包括非-毒性治療有效量的式Ⅰ化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
另一方面，本發(fā)明也包括治療環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病的藥用組合物，所述疾病用優(yōu)于抑制COX-1而選擇性抑制COX-2的活性物質(zhì)治療有利，所述組合物包括非-毒性治療有效量的式Ⅰ化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
另一方面，本發(fā)明也包括治療對(duì)非甾體抗炎藥治療敏感的炎癥性疾病的方法，該方法包括給予需要此治療的病人非-毒性治療有效量的式Ⅰ化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
另一方面，本發(fā)明也包括治療環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病的方法，所述疾病用優(yōu)于抑制COX-1而選擇性抑制COX-2的活性物質(zhì)治療有利，所述方法包括給予需要此治療的病人以非-毒性治療有效量的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明也包括式Ⅰ化合物或藥用組合物在生產(chǎn)治療對(duì)于非甾體抗炎藥治療敏感的炎癥性疾病的藥物中的用途。
用實(shí)施例1-56說(shuō)明本發(fā)明。
下列縮寫(xiě)具有指定的意義AA=花生四烯酸Ac=乙?；鵄IBN=2,2-偶氮雙異丁腈BHT=丁基化羥基甲苯Bn=芐基CSA=樟腦磺酸(外消旋物)dba=二亞芐基丙酮DMAP=4-(二甲氨基)吡啶DMF=N,N-二甲基甲酰胺DMSO=二甲基亞砜EDTA=乙二胺四乙酸ESA=乙磺酸Et3N=三乙胺HBSS=漢克氏平衡鹽液HEPES=N-[2-羥乙基]哌嗪-N1-[2-乙磺酸]HWB=人白細(xì)胞KHMDS=六甲基二硅氮烷鉀LDA=二異丙基氨化鋰LPS=脂多糖mCPBA=間-氯代過(guò)苯甲酸MMPP=一過(guò)氧鄰苯二甲酸鎂Ms=甲磺酰基MsO=甲磺酸酯NBS=N-溴代琥珀酰亞胺NCS=N-氯代琥珀酰亞胺NIS=N-碘代琥珀酰亞胺NMO=N-甲基嗎啉-N-氧化物NMP=N-甲基吡咯烷酮NSAID=非甾體抗炎藥oxone=2KHSO5·KHSO4·K2SO4PCC=氯代鉻酸吡啶鎓PDC=二鉻酸吡啶鎓PEG=聚乙二醇Ph=苯基pyr=吡啶基r.t.=室溫rac.=外消旋物Tf=三氟甲磺?；鵗fO=三氟甲磺酸酯THF=四氫呋喃TLC=薄層層析Ts=對(duì)-甲苯磺?；鵗sO=對(duì)-甲苯磺酸酯Tz=1H(或2H)-四唑-5-基SO2Me=甲基砜
SO2NH2=磺酰胺烷基縮寫(xiě)Me=甲基Et=乙基n-Pr=正丙基i-Pr=異丙基n-Bu=正丁基i-Bu=異丁基s-Bu=仲丁基t-Bu=叔丁基c-Pr=環(huán)丙基c-Bu=環(huán)丁基c-Pen=環(huán)戊基c-Hex=環(huán)己基劑量縮寫(xiě)bid=每日兩次qid=每日四次tid=每日三次在本說(shuō)明書(shū)中，烷基定義為包括具有指定碳原子數(shù)目的線性、支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)。烷基的實(shí)例為甲基、乙基、丙基、s-和t-丁基、丁基、戊基、己基、1,1-二甲基乙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)己基甲基等。同樣，烷氧基和烷硫基指具有指定碳原子數(shù)目的線性、支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在本說(shuō)明書(shū)中，氟代烷基指具有指定碳原子數(shù)目、其中一個(gè)或多個(gè)氫被氟取代的烷基。其實(shí)例為-CF3、-CH2CH2F、-CH2CF3、c-Pr-F5、c-Hex-F11等。同樣，氟代烷氧基指具有指定數(shù)目碳原子的線性、支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在本說(shuō)明書(shū)中，在一個(gè)術(shù)語(yǔ)出現(xiàn)兩次或多次的情況下，該術(shù)語(yǔ)在每種情況下的定義不依賴于在另一種情況下的定義。
在本說(shuō)明書(shū)中，鹵原子指F、Cl、Br或I。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于抑制COX-2和治療COX-2介導(dǎo)的在此公開(kāi)的疾病的藥用組合物，該組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和非毒性治療有效量的上述式Ⅰ化合物。
在再一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括抑制環(huán)氧合酶和治療環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病的方法，所述疾病用優(yōu)于抑制COX-1而選擇性抑制COX-2的在此公開(kāi)的活性物質(zhì)治療較有利，所述方法包括給予需要此治療的病人非毒性治療有效量的在此公開(kāi)的式Ⅰ化合物。
旋光異構(gòu)體-非對(duì)映體-幾何異構(gòu)體在此所述的部分化合物含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，因此產(chǎn)生了非對(duì)映體和旋光異構(gòu)體。本發(fā)明意在包括此類可能的非對(duì)映體以及它們的外消旋物和拆分物、對(duì)映體純形式和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
在此所述的部分化合物含有烯烴雙鍵，除特別指明外，意在包括E和Z型幾何異構(gòu)體。
鹽本發(fā)明的藥用組合物含有為活性成分的式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并且也可以包括藥學(xué)上可接受的載體以及任選的其它治療成分。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指由包括無(wú)機(jī)堿和有機(jī)堿的藥學(xué)上可接受的非毒性堿制備的鹽。由無(wú)機(jī)堿衍生的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。特別優(yōu)選的鹽為銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。由藥學(xué)上可接受的有機(jī)非毒性堿衍生的鹽包括伯胺鹽，仲胺鹽和叔胺鹽，取代的胺鹽包括天然存在的取代的胺、環(huán)胺以及堿性離子交換樹(shù)脂的鹽，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡堿、膽堿、N,N-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、N-甲基還原葡糖胺、還原葡糖胺、葡萄糖胺、組氨酸、哈胺青霉素G、N-(2-羥乙基)哌啶、N-(2-羥乙基)吡咯烷、異丙胺、賴氨酸、甲基還原葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、三甲醇氨基甲烷等的鹽。
當(dāng)本發(fā)明的化合物為堿時(shí)，可以由包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸的藥學(xué)上可接受的非毒性酸制備鹽。此類酸包括乙酸、脂肪酸、天冬氨酸、1,5-萘二磺酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、1,2-乙二磺酸、乙磺酸、乙二胺四乙酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、甘氨酸、氫碘酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、2-萘磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、新戊酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)-甲苯磺酸、十一-酸、十一碳烯酸等。特別優(yōu)選的酸為檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
可以理解在下面的治療方法的討論中，參考式Ⅰ化合物也包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
實(shí)用性式Ⅰ化合物可以用于緩解疼痛、發(fā)熱和各種炎癥性疾病，包括風(fēng)濕熱、與流感或其它的病毒性感染相關(guān)的癥狀、感冒、背下部和頸部疼痛、腹瀉、頭痛、牙痛、扭傷和勞損、肌炎、神經(jīng)痛、滑膜炎、關(guān)節(jié)炎包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退化性關(guān)節(jié)病(骨關(guān)節(jié)炎)、痛風(fēng)和僵直性脊椎炎、滑液囊炎、燒傷、損傷、外科和牙科術(shù)后。此外，此類化合物可以抑制細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)化和遷移瘤的生長(zhǎng)，因此可以用于治療癌癥?；衔?也可以用于治療和/或預(yù)防環(huán)氧合酶介導(dǎo)的增生性疾病，例如發(fā)生在糖尿病引起的視網(wǎng)膜病和腫瘤血管生成。
化合物Ⅰ也可以通過(guò)阻止收縮性前列腺素類的合成而抑制前列腺素類誘導(dǎo)的平滑肌收縮，因此可以用于治療痛經(jīng)、早產(chǎn)、哮喘和嗜酸性細(xì)胞相關(guān)的疾病。它也可以用于治療Alzheimer氏病、用于降低特別是絕經(jīng)后婦女的骨丟失(即治療骨質(zhì)疏松)和治療青光眼。
由于化合物Ⅰ對(duì)COX-2的高的抑制活性和/或其優(yōu)于COX-1而抑制COX-2的特異性，證明其作為傳統(tǒng)的NSAID’S的替代藥特別有效，特別是當(dāng)此類非甾體抗炎藥為禁忌時(shí)，例如具有下列疾病的病人消化性潰瘍、胃炎、局限性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、憩室炎或具有胃腸損害復(fù)發(fā)史；GI出血、凝血疾病包括貧血例如血凝血酶原過(guò)少、血友病或其它的出血障礙；腎臟疾??；外科手術(shù)前的病人或服用抗凝藥物的病人。
藥用組合物在治療這些環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病時(shí)，可以將化合物Ⅰ以含有常規(guī)非毒性藥學(xué)上可接受的載體、輔助劑和溶媒的單位制劑的形式經(jīng)口、局部、胃腸外、吸入噴霧或直腸給藥。在此所用術(shù)語(yǔ)胃腸外包括皮下注射、靜脈、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。除治療溫血?jiǎng)游锢缧∈蟆⒋笫?、馬、牛、綿羊、狗、貓等外，本發(fā)明的化合物在治療人時(shí)也是有效的。本發(fā)明的化合物特別適合馬的治療。
如上所述，治療上述定義的COX-2介導(dǎo)的疾病的藥用組合物可任選包括一種或多種上述列舉的成分。
含有所述活性成分的藥用組合物可以為任何適合口服使用的形式，例如片劑、錠劑、糖錠、水溶液或油懸浮液、分散粉劑或顆粒劑、乳液、硬或軟膠囊劑、糖漿或酏劑。根據(jù)藥用組合物生產(chǎn)領(lǐng)域所知的任何方法可以制備用于口服的組合物，此類組合物可以含有一種或多種選自下列的試劑甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑以提供藥學(xué)上優(yōu)雅適口的制劑。片劑含有所述活性成分以及適合片劑生產(chǎn)的非毒性藥學(xué)上可接受的賦形劑。這些賦形劑可以為例如惰性稀釋劑像碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；顆粒劑和崩解劑例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑例如淀粉、明膠或阿拉伯膠和潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。該類片劑可以是未包衣的或用已知的技術(shù)將其包衣以延緩在胃腸道的崩解和吸收，因此在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供延長(zhǎng)的作用。例如，可以使用延時(shí)物質(zhì)例如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以用U.S.專利4256108、4166452和4265874所述的技術(shù)對(duì)它們進(jìn)行包衣以形成控釋的滲透性的療效性片劑。
用于口服的制劑也可以以硬明膠膠囊劑的形式提供，其中將所述活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或以軟明膠膠囊劑的形式提供，其中將所述活性成分與水或可混溶的溶劑例如丙二醇、PEGs和醇或油性介質(zhì)例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
水溶性懸浮液含有與適合生產(chǎn)水溶性懸浮液的賦形劑混合的所述活性成分。此類賦形劑為懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤(rùn)濕劑可以為天然存在的磷脂例如卵磷脂或環(huán)氧烷烴和脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷和長(zhǎng)鏈脂肪醇如十七碳亞乙氧基鯨酯醇，或環(huán)氧乙烷和脂肪酸衍生的部分酯和己糖醇的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯，或環(huán)氧乙烷和脂肪酸衍生的部分酯和己糖醇酸酐的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯山梨醇一油酸酯。該水溶性懸浮液也可以含有一種或多種防腐劑，例如對(duì)-羥基苯甲酸乙酯或正丙酯、芐醇，一種或多種著色劑，一種或多種矯味劑，一種或多種甜味劑例如蔗糖、糖精或天冬甜素。
油懸浮液可以通過(guò)將所述活性成分懸浮于植物油，例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油或礦物油如液體石蠟中制備。所述油懸浮液可以含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或十六醇。甜味劑如上面所述的那些，可以加入矯味劑以提供適口的口服制劑?？梢酝ㄟ^(guò)加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。
通過(guò)加入水適合制備水溶性懸浮液的分散粉劑和顆粒劑可以提供與分散劑或潤(rùn)濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的所述活性成分。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖?rùn)濕劑以及懸浮劑的實(shí)例如上述的那些。也可以存在另外的賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥用組合物也可以為油/水乳液的形式。該油相可以為植物油，例如橄欖油或花生油或礦物油，例如液體石蠟或它們的混合物。適當(dāng)?shù)娜榛瘎樘烊淮嬖诘牧字绱蠖?、卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的酯或部分酯，例如山梨醇一油酸酯以及所述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯。該乳液也可以含有甜味劑和矯味劑。
糖漿劑和酏劑可以用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖制備。此類制劑也可以含有緩和藥、防腐劑和矯味劑以及著色劑。該藥用組合物可以為無(wú)菌注射液或油懸浮液的形式?？梢愿鶕?jù)已知的技術(shù)用上述所提到的那些適當(dāng)?shù)姆稚┗驖?rùn)濕劑以及懸浮劑制備該懸浮液。該無(wú)菌注射制劑也可以為在非毒性胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液或懸浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在使用的可接受的溶媒和溶劑中有水、Ringer氏液和等滲氯化鈉溶液。也可以使用助溶劑例如乙醇、丙二醇或聚乙二醇。此外，無(wú)菌的脂肪油常規(guī)也用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此可以使用任何混合的不揮發(fā)油，包括合成的一或二甘油酯。此外，在注射劑制備中也可以使用脂肪酸例如油酸。
式Ⅰ化合物也可以以直腸給予所述藥物的栓劑形式給藥。通過(guò)將所述藥物與適當(dāng)非刺激性賦形劑混合制備，所述賦形劑在室溫為固體但是在直腸溫度為液體并因此在直腸融化從而釋放該藥物。此類物質(zhì)為可可油和聚乙二醇。
局部使用時(shí)，可以使用含有式Ⅰ化合物的霜?jiǎng)?、膏劑、凝膠、溶液或懸浮液等(在該申請(qǐng)中，局部使用包括漱口液和含漱液)。局部制劑一般含有藥用載體、助溶劑、乳化劑、滲透增強(qiáng)劑、防腐體系和軟化劑。
劑量范圍在治療上述疾病時(shí)約0.01mg-約140mg/kg體重/天的劑量水平或每個(gè)病人每日約0.5mg-約7g是有用的。例如，每日每公斤體重給予約0.01-50mg所述化合物或每個(gè)病人每日給予約0.5mg-約3.5g所述化合物可有效治療炎癥。
可以與所述載體物質(zhì)結(jié)合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量取決于治療的宿主和特定的給藥方式。例如，用于人口服給藥的制劑可以含有約0.5mg-5g與適當(dāng)?shù)暮瓦m宜量的載體物質(zhì)結(jié)合活性成分，所述載體物質(zhì)的量為總組合物的約5-約95％。單位劑型通常含有約1mg-約500mg活性成分，一般為25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg或1000mg。
然而，可以理解對(duì)于特定病人的特殊劑量水平取決于多種因素，包括年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排泄率、聯(lián)合藥物和正在治療的特定疾病的嚴(yán)重程度。
與其它藥物的聯(lián)合用藥同樣，式Ⅰ化合物可以在制劑中部分或完全替代常規(guī)NSAID’S，其中可以將它們與其它的藥物或成分共同給藥。因此，另一方面本發(fā)明包括治療上述定義的COX-2介導(dǎo)的疾病的藥用組合物，該組合物包括上述定義的非毒性治療有效量的式Ⅰ化合物和一種或多種成分，例如另一種疼痛緩解藥物包括乙酰氨基酚或非那西??；增強(qiáng)劑包括咖啡因；H2-拮抗劑，氫氧化鋁或氫氧化鎂、二甲基酮，減充血?jiǎng)┌摿u腎上腺素、苯異丙胺、pseudophedrine、羥甲唑啉、ephinephrine、萘唑啉、賽洛唑啉、六氫脫氧麻黃堿或Levo-desoxyephedrine；鎮(zhèn)咳劑包括可待因、氫可酮、卡臘米芬、咳必清或dextramethorphan；前列腺素類包括米索前列醇、恩前列素、noprostil、奧諾前列素(omoprostol)或羅沙前列醇；利尿劑；鎮(zhèn)靜劑或非鎮(zhèn)靜抗組胺劑。此外，本發(fā)明包括治療環(huán)氧合酶介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給予需要此治療的病人非毒性治療有效量的式Ⅰ化合物，任選與一種或多種上述的此類成分共同給藥。
合成方法根據(jù)流程1-2所示的合成途徑或根據(jù)下述的方法可以制備本發(fā)明的式Ⅰ化合物。
流程1用多個(gè)-步驟順序由必需的2-氨基吡啶Ⅱ可以制備式Ⅰa和Ⅰb吡啶。在乙酸中，用溴使Ⅱ溴化得到溴化物Ⅲ。在適當(dāng)?shù)膲A例如碳酸鈉存在下，使Ⅲ與4-(甲硫基)苯基-硼酸經(jīng)鈀催化偶合得到硫化物Ⅳ，用數(shù)種氧化劑例如MMPP、oxone或OsO4/NMO之一氧化Ⅳ得到相應(yīng)的砜Ⅴ。用數(shù)種方法中的一種可以將氨基吡啶Ⅴ轉(zhuǎn)化為鹵化物Ⅵ。例如，在HCl和溴存在下，用硝酸鈉處理Ⅴ得到溴化物Ⅵ(Ⅹ=Br)?；蛘撸孟跛徕c和HCl處理Ⅴ，接著與POCl3反應(yīng)得到相應(yīng)的氯化物Ⅵ(Ⅹ=Cl)。第二次鈀催化的Ⅵ與適當(dāng)取代的金屬化的芳烴例如芳基硼酸或芳基錫烷偶合得到式Ⅰa的吡啶。對(duì)Ⅰa的R2取代基進(jìn)行適當(dāng)?shù)男揎椀玫搅硗獾蘑馻。例如當(dāng)R2=Me時(shí)，用氧化劑例如高錳酸鉀氧化得到相應(yīng)的酸(ⅠaR2=CO2H)，然后用試劑例如重氮甲烷可以將其轉(zhuǎn)化為甲酯。或者，用氯代磺酰基異氰酸酯和DMF處理該酸得到腈(ⅠaR2=CN)。用文獻(xiàn)(Huang等，Tetrahedron Lett.1994,39,7201)所述方法可以將吡啶甲基砜Ⅰa轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的吡啶磺酰胺Ⅰb。
流程2也可以用多步驟方法由適當(dāng)?shù)?-羥基吡啶Ⅶ制備流程1的2-鹵代吡啶Ⅵ。首先，在乙酸中用溴處理Ⅶ得到溴化物Ⅷ。接著在堿例如碳酸銀存在下，使Ⅷ與芐基溴反應(yīng)得到二芐醚Ⅸ，然后進(jìn)行與流程1所述的將溴化物Ⅲ轉(zhuǎn)化為Ⅴ的相似的反應(yīng)將二芐醚Ⅸ轉(zhuǎn)化為砜Ⅹ。通過(guò)用酸例如三氟乙酸處理去除芐基保護(hù)基團(tuán)得到羥基吡啶Ⅹ。將Ⅹ與POBr3或POCl3一起加熱得到相應(yīng)的流程1的2-鹵代吡啶Ⅵ(Ⅹ=Br、Cl)。
代表性的化合物表1和2說(shuō)明式Ⅰa和Ⅰb化合物，它們?yōu)楸景l(fā)明的代表。
表1
Ex. R2Ar1CF3Ph2CF33-ClC6H43CF34-ClC6H44CF34-FC6H45CF32-(CMe2OHC6H46CF33-(CMe2OH)C6H47CF33-pyr8CF35-(2-Me)pyr9CF35-(3-Br)pyr10 CF35-(3-Cl)pyr11 CF35-(2-OMe)pyr12 CF32-(5-Br)pyr13 Me Ph14 Me 4-ClC6H415 Me 3-pyr16 Cl Ph17 Cl 4-ClC6H418 Cl 2-(CMe2OH)C6H419 Cl 3-(CMe2OH)C6H420 Cl 2-pyr21 Cl 3-pyr22 Cl 4-pyr23 Cl 5-(2-Me)pyr24 Cl 5-(3-Br)pyr25 Cl 5-(3-Cl)pyr
表1(續(xù))
Ex. R2Ar26Cl5-(2-OMe)pyr27Cl2-(5-Br)pyr28F Ph29F 3-pyr30F 5-(2-Me)pyr31BrPh32Br3-pyr33Br5-(2-Me)pyr34NO2Ph35NO23-pyr36NO25-(2-Me)Pyr37OMe Ph38OMe 3-pyr39OMe 5-(2-Me)pyr40NHCOMePh41NHCOMe3-pyr42NHCOMe5-(2-Me)pyr43CO2Me4-ClC6H444CO2H 4-ClC6H445CN4-ClC6H446Cl3-pyr·MeSO3H47Cl3-pyr·HCl57Cl3-pyr·CSA58Cl3-pyr·ESA59Cl5-(2-Me)pyr·HCl60Cl5-(2-CH2OH)pyr
表1(續(xù))
Ex. R2Ar61 Cl5-(2-CO2H)pyr62 Cl5-(2-Me)pyr-N-oxide63 Cl5-(3-Me)pyr64 Cl3-(4-Me)pyr65 Cl3-(2-Me)pyr66 Cl3-(2-Et)pyr67 Cl3-(2-c-Pr)pyr68 Me3-pyr·HCl69 CN3-pyr70 CN5-(2-Me)pyr71 Cl5-(2-Et)pyr72 Cl5-(2-Et)pyr-MeSO3H73 Cl5-(2-c-Pr)pyr74 Cl3-(2,6-Me2)pyr
表2
Ex.R2Ar48 CF3Ph49 CF34-ClC6H450 CF34-FC6H451 CF33-pyr52 Me Ph53 Me 4-ClC6H454 Cl 3-pyr55 Cl 5-(2-Me)pyr56 CN 4-ClC6H4
生物活性測(cè)定可以用下列測(cè)定方法測(cè)試式Ⅰ化合物以測(cè)定它們對(duì)COX-2的抑制活性。
環(huán)氧合酶活性的抑制在全細(xì)胞環(huán)氧合酶測(cè)定中測(cè)試作為環(huán)氧合酶活性抑制劑的化合物。在這兩個(gè)測(cè)定中，均用放射免疫檢測(cè)前列腺素E2合成對(duì)AA的應(yīng)答。用于這些測(cè)定的細(xì)胞為人骨肉瘤143細(xì)胞(特異性表達(dá)COX-2)和人U-937細(xì)胞(特異性表達(dá)COX-1)。在這些測(cè)定中，100％活性定義為在花生四烯酸鹽存在下和無(wú)花生四烯酸存在下前列腺素E2合成的差異。
全細(xì)胞測(cè)定在環(huán)氧合酶測(cè)定中，將骨肉瘤細(xì)胞在24-孔培養(yǎng)板(multidishes)(Nunclon)上于1ml介質(zhì)中培養(yǎng)至融合(1-2×105細(xì)胞/孔)。使U-937細(xì)胞于旋轉(zhuǎn)燒瓶中生長(zhǎng)并以1.5×105細(xì)胞/ml的終濃度再懸浮于24-孔培養(yǎng)板(Nunclon)上。洗滌并再懸浮骨肉瘤細(xì)胞后，加入在1ml HBSS中的U-937細(xì)胞、1μl受試化合物的DMSO溶液或DMSO溶媒，輕輕混合樣品。所有測(cè)定以三份進(jìn)行。然后在加入AA前，于37℃將樣品孵育5或15分鐘。將AA(不含過(guò)氧化物，Cayman Chemical)在乙醇中制備為10mM儲(chǔ)備液并用HBSS稀釋10倍。將每份10μl的該稀釋液加至所述細(xì)胞中，得到AA終濃度為10μM。用乙醇溶媒代替AA孵育對(duì)照樣品。將樣品輕輕混合并于37℃再孵育10分鐘。若為骨肉瘤細(xì)胞，則通過(guò)在混合下加入100μl 1N HCl并快速?gòu)募?xì)胞單層中去除該溶液終止反應(yīng)。對(duì)于U-937細(xì)胞，則通過(guò)在混合下加入100μl 1N HCl終止反應(yīng)。然后加入100μl 1N NaOH中和樣品，經(jīng)放射免疫測(cè)定PGE2水平。
用CHO轉(zhuǎn)染細(xì)胞系進(jìn)行COX-2和COX-1全細(xì)胞測(cè)定將用含有人COX-1或COX-2 cDNA的真核生物表達(dá)載體pCDNAⅢ穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系用于該測(cè)定中。這些細(xì)胞系分別指為CHO[hCOX-1]或CHO[hCOX-2]。在環(huán)氧合酶測(cè)定中，用下列方法制備懸浮培養(yǎng)液中的CHO[hCOX-1]細(xì)胞和CHO[hCOX-2]細(xì)胞離心(300gxg,10min)收獲胰蛋白酶消化的貼壁培養(yǎng)物(adherent cultures)，用含有15mM HEPES,pH 7.4的HBSS洗滌一次，以細(xì)胞濃度1.5×106細(xì)胞/ml懸浮于HBSS(15mM HEPES,pH7.4)中。將受試藥物以最高受試藥物濃度的66.7倍溶于DMSO中。一般用最高藥物濃度的DMSO的3倍系列稀釋液、雙份、8個(gè)濃度對(duì)化合物進(jìn)行測(cè)定。將細(xì)胞(200μl中含有0.3×106個(gè)細(xì)胞)與3μl受試藥物或DMSO溶媒一起預(yù)孵育15分鐘。用含有15mM HEPES,pH7.4的HBSS將濃AA的乙醇溶液稀釋10倍制備不含AA的使用液(CHO[hCOX-1]和CHO[hCOX-2]分別為5.5μM AA和110μM AA)。然后在藥物存在下和無(wú)藥物存在下，用AA/HBSS溶液攻擊細(xì)胞在為CHO[hCOX-1]測(cè)定時(shí)產(chǎn)生AA終濃度為0.5μM，在為CHO[hCOX-2]測(cè)定時(shí)產(chǎn)生AA終濃度為10μM。通過(guò)加入10μl 1N HCl然后用20μl 0.5N NaOH中和終止反應(yīng)。將所述樣品于4℃下離心300xg10分鐘，并將一份澄清的上清液適當(dāng)稀釋以用PGE2酶聯(lián)免疫測(cè)定(相關(guān)PGE2酶免疫測(cè)定試劑盒，Assay Designs Inc)測(cè)定PGE2水平。在無(wú)受試化合物存在下的環(huán)氧合酶活性由AA攻擊的細(xì)胞的PGE2水平和用乙醇溶媒模擬攻擊的細(xì)胞中PGE2水平的差異測(cè)定。受試化合物對(duì)PGE2合成的抑制根據(jù)在藥物存在下的活性與陽(yáng)性對(duì)照樣品活性的百分比計(jì)算。
U937細(xì)胞微粒體的COX-1活性測(cè)定將U937細(xì)胞于500xg離心5分鐘沉淀，用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌一次并再沉淀。將細(xì)胞懸浮于含有0.1M Tris-HCl、pH 7.4,10mMEDTA、2μg/ml亮肽素、2μg/ml大豆胰蛋白酶抑制劑、2μg/ml抑酶肽和1mM苯基甲基磺酰氟的勻漿緩沖液中。將該細(xì)胞懸浮液于4℃超聲處理10秒鐘，于4℃、10000xg離心10min。將上清液于4℃、100000xg離心1小時(shí)。將100000xg微粒體沉積物于0.1M Tris-HCl,pH 7.4、10mM EDTA中再懸浮至約7mg蛋白/ml并于-80℃儲(chǔ)存。
在用前立即將微粒體制備物融化，經(jīng)短暫超聲，然后在0.1ml含有10mM EDTA、0.5mM苯酚、1mM還原型谷胱甘肽和1μM高鐵血紅素的Tris-HCl緩沖液(pH7.4)中稀釋至蛋白濃度為125μg/ml。以終體積250μl、雙份進(jìn)行測(cè)定。最初將5μl DMSO溶媒或在DMSO中的藥物加至在96-深孔聚丙烯滴定板中的20μl含有10mM EDTA的0.1MTris-HCl緩沖液(pH7.4)中。然后加入200μl微粒體制備物，并于室溫下預(yù)孵育15分鐘，然后加入在0.1M Tris-HCl和10mM EDTA(pH7.4)中的25μl 1M花生四烯酸中。于室溫下，將樣品孵育40分鐘，加入25μl 1N HCl終止反應(yīng)。用25μl 1N NaOH中和，然后用放射免疫測(cè)定(Dupont-NEN或Amersham測(cè)定試劑盒)對(duì)PGE2的含量進(jìn)行定量。將環(huán)氧合酶活性定義為在花生四烯酸存在下和乙醇溶媒存在下孵育的樣品中PGE2水平的差異。
純化的人COX-2活性測(cè)定根據(jù)PGG2在被COX-2還原為PGH2過(guò)程中N,N,N’,N’-四甲基-對(duì)-苯基二胺(TMPD)的氧化，用產(chǎn)色測(cè)定法測(cè)定該酶的活性(Copeland等，(1994)Proc.Natl Acad.Sci.91,11202-11206)。
根據(jù)前述方法(Percival等(1994)Arch.Biochem.Biophy 15,111-118)由Sf9純化重組人COX-2。測(cè)定混合液(180μl)含有100mM磷酸鈉，pH6.5、2mM genapol X-100、1μM高鐵血紅素、1mg/ml明膠、80-100單位的純化酶(一個(gè)酶單位定義為在610nm處產(chǎn)生0.001/minO.D.變化所需的酶的量)和4μl在DMSO中的受試化合物。將該混合液于室溫(22℃)下預(yù)孵育15分鐘，然后通過(guò)加入20μl 1mM AA和1mMTMPD在測(cè)定緩沖液(不含酶或高鐵血紅素)中的超聲溶液開(kāi)始酶反應(yīng)。該酶的活性通過(guò)在最初36秒反應(yīng)階段TMPD氧化的速率估計(jì)測(cè)定。在酶不存在下觀察氧化的非特異性速率(0.007-0.01 O.D./min)，并在計(jì)算抑制％前從其中減去。由對(duì)數(shù)劑量對(duì)％抑制圖的4-參數(shù)最小平方非-線性回歸分析得出IC50值。
人全血測(cè)定原理人全血可以為抗炎化合物例如選擇性的COX-2抑制劑的生化效能研究提供適當(dāng)?shù)牡鞍缀透缓?xì)胞的環(huán)境。研究表明正常人血液不含COX-2酶。這與COX-2抑制劑對(duì)正常血液中PGE2不產(chǎn)生作用的觀察相符。這些抑制劑只有在將人全血與LPS(可以誘導(dǎo)COX-2)孵育后才有活性。該測(cè)定可以用于評(píng)價(jià)選擇性COX-2抑制劑對(duì)PGE2產(chǎn)生的抑制作用。同樣，全血中的血小板含有大量的COX-1酶。血液凝結(jié)后，立即通過(guò)凝血酶介導(dǎo)的機(jī)制激活血小板。該反應(yīng)通過(guò)COX-1的活化導(dǎo)致產(chǎn)生血栓烷B2(TxB2)。因此，在血液凝結(jié)后，可以測(cè)定受試化合物對(duì)TxB2水平的作用并用作COX-1活性指標(biāo)。所以，可以在相同測(cè)定中，通過(guò)對(duì)LPS誘導(dǎo)(COX-2)和血液凝結(jié)后的TxB2(COX-1)下的PGE2水平測(cè)定來(lái)確定所述受試化合物的選擇性程度。
方法步驟A:COX-2(LPS-誘導(dǎo)的PGE2產(chǎn)生)通過(guò)靜脈穿刺由男性和女性志愿者中收集新鮮血液于肝素化的試管中。所述受試者無(wú)明顯的炎癥性疾病，且在血液收集前至少7天未服用任何NSAIDs。立即由2ml血樣中獲得血漿用作對(duì)照(PGE2基礎(chǔ)水平)。于室溫下，將其余的血液與LPS(100μg/ml終濃度，Sigma Chem,#L-2630，得自大腸桿菌；用0.1％BSA(磷酸鹽緩沖鹽水)稀釋)一起孵育5分鐘。于37℃，將每份500μl的血液與2μl溶媒(DMSO)或2μl受試化合物(終濃度為10nM-30μM)一起孵育24小時(shí)。孵育結(jié)束后，于12000xg離心所述血液5分鐘獲得血漿。將每份100μl血漿與400μl甲醇混合以沉淀蛋白。得到上清液，根據(jù)生產(chǎn)廠商的方法將PGE2轉(zhuǎn)化為其甲基肟衍生物后，用放射免疫試劑盒(Amersham,RPA#530)測(cè)定PGE2。
步驟B:COX-1(凝結(jié)誘導(dǎo)的TxB2產(chǎn)生)將新鮮血液收集于不含抗凝劑的vacutainers中。將每份500μl立即轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入2μl DMSO或10nM-30μM終濃度的受試化合物的硅烷化的微量離心管中。將這些試管旋轉(zhuǎn)混勻，并于37℃孵育1小時(shí)以使血液凝結(jié)。孵育結(jié)束后，離心(12000xg,5min)獲得血清。將每份100μl血清與400μl甲醇混合沉淀蛋白。得到上清液，根據(jù)產(chǎn)生商的說(shuō)明用酶免疫試劑盒(Cayman,#519031)測(cè)定TxB2。
鼠爪水腫測(cè)定原理將雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200g)禁食過(guò)夜，經(jīng)口給予溶媒(1％methocel或5％Tween 80)或受試化合物。1小時(shí)后，用永久性記號(hào)在一只后爪的踝關(guān)節(jié)上方畫(huà)線以限定待監(jiān)測(cè)的鼠爪面積。用器官充滿度測(cè)量器(Ugo-Basile,Italy)，根據(jù)水排開(kāi)原理測(cè)定該爪體積(V0)。然后用胰島素注射器、25號(hào)針頭，經(jīng)足底下注射50μl 1％角叉菜膠的鹽水溶液(FMC Corp,Maine)于爪內(nèi)(即每爪500μg角叉菜膠)。3小時(shí)后，測(cè)定該爪體積(V3)，計(jì)算爪體積的增加(V3-V0)。通過(guò)CO2窒息處死所述動(dòng)物，給存在或不存在胃損害打分。比較溶媒對(duì)照值和計(jì)算的抑制百分比數(shù)據(jù)。對(duì)所有處理組標(biāo)號(hào)去除觀察者的偏差。
NSAID-誘導(dǎo)的大鼠胃病原理常規(guī)的NSAIDs的主要副作用為它們使人產(chǎn)生胃損害的能力。據(jù)認(rèn)為該作用是由胃腸道COX-1的抑制引起的。大鼠對(duì)于NSAIDs的作用特別敏感。事實(shí)上，在過(guò)去常常使用大鼠模型評(píng)價(jià)現(xiàn)有的常規(guī)NSAIDs的胃腸副作用。在本研究中，通過(guò)測(cè)定系統(tǒng)性注射51Cr-標(biāo)記的血紅細(xì)胞后糞便中51Cr的排泄觀察NSAID誘導(dǎo)的胃腸損害。糞便51Cr排泄是明確并敏感的檢測(cè)動(dòng)物和人胃腸完整性的技術(shù)。
方法將雄性Sprague Dawley大鼠(150-200g)口服給予受試化合物，每日一次(急性劑量)或每日二次連續(xù)5天(慢性劑量)。在最后劑量給予后，立即經(jīng)尾靜脈給大鼠注射0.5ml供者大鼠的51Cr-標(biāo)記的血紅細(xì)胞。將所述動(dòng)物單獨(dú)置于代謝籠中，隨意給予食物和水。收集48小時(shí)內(nèi)的糞便，以總注射劑量的百分比計(jì)算51Cr糞便排泄。用下列步驟制備51Cr-標(biāo)記的血紅細(xì)胞。通過(guò)大靜脈從供者大鼠收集10ml血液于肝素化的試管中。離心去除血漿，用等體積的HBSS補(bǔ)充。于37℃，將所述血紅細(xì)胞與400μCi的51鉻酸鈉一起孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用20mlHBSS洗滌血紅細(xì)胞去除游離的51鉻酸鈉。最后將血紅細(xì)胞溶于10mlHBSS中，并給每只大鼠注射0.5ml該溶液(約20μCi)。
松鼠猴(squirrel monkeys)蛋白丟失胃病原理蛋白丟失胃病(表現(xiàn)為在胃腸道出現(xiàn)循環(huán)細(xì)胞和血漿蛋白)是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)非甾體抗炎藥(NSAID)的顯著的和劑量-限制副反應(yīng)。這可以通過(guò)靜脈給予51CrCl3溶液定量評(píng)價(jià)。該同位素離子可以急切地與細(xì)胞和血清珠蛋白和細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合。因此在給予該同位素后24小時(shí)收集的糞便中出現(xiàn)的放射活性測(cè)定可以提供蛋白丟失胃病的敏感的和定量的指標(biāo)。
方法通過(guò)管飼法給予各組雄性松鼠猴(0.8-1.4kg)1％methocell或5％Tween 80的水溶媒(3mg/kg,b.i.d.)或受試化合物(1-100mg/kg,b.i.d.)連續(xù)處理5天。在最后一個(gè)藥物/溶媒劑量后1小時(shí)靜脈給予51Cr(5μCi/kg的1ml/kg磷酸鹽緩沖鹽水液(PBS))，在代謝籠中收集24小時(shí)糞便并用γ-計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)分泌的51Cr。在最后一個(gè)藥物劑量后1小時(shí)和8小時(shí)，取靜脈血樣，經(jīng)RP-HPLC測(cè)定藥物血漿濃度。
LPS-誘導(dǎo)的清醒大鼠的發(fā)熱反應(yīng)在使用前將雄性Spraque-Dawley大鼠(150-200g)禁食16-18小時(shí)。在約清晨9:30時(shí)，將所述動(dòng)物暫時(shí)置于有機(jī)玻璃限制器中，并用連于數(shù)字溫度計(jì)(Model 08502,Cole Parmer)的伸縮性溫度探針(YSI 400系列)記錄它們的基線直腸溫度。所有的動(dòng)物均用相同的探針和溫度計(jì)以減少試驗(yàn)誤差。溫度測(cè)定后，將所述動(dòng)物放回它們的籠中。在時(shí)間為0時(shí)，給所述大鼠腹膜內(nèi)注射鹽水或LPS(2mg/kg,Sigma Chem)，并在LPS注射后5、6和7小時(shí)再測(cè)定直腸溫度。在5小時(shí)測(cè)定后，當(dāng)溫度增加達(dá)到平臺(tái)時(shí)，口服給予注射LPS的大鼠溶媒(1％methocel)或受試化合物以測(cè)定該化合物是否逆轉(zhuǎn)發(fā)熱反應(yīng)。用在7小時(shí)時(shí)對(duì)照(溶媒-處理)組獲得的直腸溫度作為參考(0逆轉(zhuǎn))點(diǎn)，計(jì)算所述發(fā)熱反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)百分比。發(fā)熱完全反轉(zhuǎn)至LPS前基線值作為100％。
LPS-誘導(dǎo)的清醒松鼠猴的發(fā)熱反應(yīng)將溫度探針經(jīng)外科手術(shù)植入一組松鼠猴(Saimiri sciureus)(1.0-1.7kg)腹部皮膚內(nèi)。這樣可以用遙感勘測(cè)感應(yīng)系統(tǒng)(Data SciencesInternational, Munnesota)監(jiān)測(cè)清醒、無(wú)限制猴的體溫。在使用前，將所述動(dòng)物禁食并置于單獨(dú)的籠中使其適應(yīng)環(huán)境13-14小時(shí)。將電接受器安裝于所述籠的側(cè)面，它們可以接收植入的溫度探針發(fā)出的信號(hào)。在試驗(yàn)當(dāng)日約清晨9:00時(shí)，將所述猴暫時(shí)限制于訓(xùn)練椅子上，并快速靜脈注射LPS(6mg/kg，溶于無(wú)菌鹽水)。將所述動(dòng)物放回它們的籠中，連續(xù)每5分鐘記錄體溫。注射LPS后2小時(shí)，當(dāng)體溫增加1.5-2℃時(shí)，口服給予所述猴溶媒(1％methocel)或受試化合物(3mg/kg)。100分鐘后，測(cè)定體溫和基線值之間的差異。對(duì)照組計(jì)算的抑制百分比作為抑制％。
角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠急性炎癥痛覺(jué)過(guò)敏用雄性Sprague Dawley大鼠(90-110g)進(jìn)行試驗(yàn)。預(yù)先3小時(shí)通過(guò)足底下注射角叉菜膠(4.5mg，注入一只后爪內(nèi))誘導(dǎo)該后爪對(duì)機(jī)械壓迫的痛覺(jué)過(guò)敏。對(duì)照組動(dòng)物給予相同體積的鹽水(0.15ml，足底下)。在給予角叉菜膠2小時(shí)后，口服給予受試化合物(0.3-30mg/kg，懸浮于0.5％methocel蒸餾水中)。1小時(shí)后，用Ugo Basile痛覺(jué)計(jì)測(cè)定對(duì)所述后爪壓迫的發(fā)聲反應(yīng)。
用一因素ANOVA(BMDP Statistical Software Inc.)進(jìn)行角叉菜膠誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過(guò)從注射角叉菜膠的動(dòng)物中獲得的發(fā)聲閾值減去注射鹽水的大鼠中獲得的閾值測(cè)定痛覺(jué)過(guò)敏。藥物治療大鼠的痛覺(jué)過(guò)敏等級(jí)用該反應(yīng)的百分比表示。然后用GraFit(ErithacusSoftware)進(jìn)行平均數(shù)據(jù)的非線性最小平方回歸分析計(jì)算ID50值(產(chǎn)生50％最大觀察反應(yīng)的劑量)。
輔助劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎對(duì)70只6.5-7.5周齡的雌性Lewis大鼠(體重約146-170g)進(jìn)行稱重、標(biāo)記耳部并分組(陰性對(duì)照組不誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎；溶媒對(duì)照組；陽(yáng)性對(duì)照組以1mg/kg每日的總劑量給予消炎痛，4個(gè)組以0.10-3.0mg/kg每目的總劑量給予受試化合物)，每組的體重相當(dāng)。將每組10只大鼠的6個(gè)組經(jīng)后爪注射0.5mg Mycobacterium Butyricum的0.1ml輕礦物油(輔助劑)，陰性對(duì)照組的10只大鼠不注射輔助劑。在使用前(1天)和輔助劑注射后21天，測(cè)定體重、對(duì)側(cè)爪體積(用汞置換體積描記法測(cè)定)和側(cè)面放射照片(在氯胺酮和賽拉嗪痛覺(jué)喪失下獲得)，在使用前(1天)和輔助劑注射后21天，測(cè)定初始爪體積。通過(guò)肌內(nèi)注射0.03-0.1ml氯胺酮(87mg/kg)和賽拉嗪(13mg/kg)的組合麻醉所述大鼠以獲得放射照片并注射輔助劑。用Faxitron(45kVp,30秒)和Kodak X-OMAT TL膠卷在第0天和第21天取得兩個(gè)后爪的放射照片，并在自動(dòng)處理器上顯影。經(jīng)對(duì)試驗(yàn)處理未知的研究者評(píng)價(jià)放射照片的軟組織和硬組織的變化。根據(jù)嚴(yán)重程度，用數(shù)字記錄下列放射照片變化的等級(jí)增加軟組織體積(0-4)，關(guān)節(jié)腔變窄或變寬(0-5)，軟骨下侵蝕(0-3)，骨膜反應(yīng)(0-4)，骨質(zhì)溶解(0-4)，不全脫位(0-3)和退性性關(guān)節(jié)變化(0-3)。用特定的標(biāo)準(zhǔn)確立每個(gè)放射照片變化的嚴(yán)重程度的數(shù)字等級(jí)。每足的最大可能的等級(jí)為26。在輔助劑注射后，以每日總劑量0.1、0.3、1和3mg/kg/天給予受試化合物，以每日總劑量1mg/kg/天給予(os b.i.d.)消炎痛或溶媒(0.5％methocel的無(wú)菌水溶液)，連續(xù)21天。每周制備所述化合物，置于冰箱暗處待用，并在給予前即刻旋轉(zhuǎn)混合。
對(duì)于體重變化％和足體積以及放射照片總分?jǐn)?shù)等級(jí)轉(zhuǎn)換使用重復(fù)測(cè)定-時(shí)間的兩因素(“處理”和“時(shí)間”)方差分析。進(jìn)行post hoc Dunnett氏檢驗(yàn)比較處理對(duì)溶媒的作用。對(duì)胸腺和脾臟重量使用一因素方差分析，然后用Dunnett氏檢驗(yàn)比較處理對(duì)溶媒的作用。用非線性最小平方回歸的4參數(shù)對(duì)數(shù)對(duì)第4、14和21天的足體積的劑量-反應(yīng)曲線抑制％進(jìn)行擬合。ID50定義為相應(yīng)于由溶媒對(duì)照降低50％的劑量，并由擬合的4-參數(shù)方程得出。
大鼠藥代動(dòng)力學(xué)大鼠每Os藥代動(dòng)力學(xué)根據(jù)the Guidelines oft he Canadian Council on Animal Care收藏、飼養(yǎng)和照顧所述動(dòng)物。
在每次PO血液水平研究前，將雄性Sprague Dawley大鼠(325-375g)禁食過(guò)夜。
將所述大鼠置于限制器中，每次一只，將該限制器堅(jiān)固固定。通過(guò)在尾端切一小口(1mm或更小)取零血樣。然后用堅(jiān)固但輕輕的從尾頂端到尾基端撫摸擠出血液。將約1ml血液收集于肝素化的vacutainer試管中。
根據(jù)需要以標(biāo)準(zhǔn)劑量體積為10mg/kg制備化合物，通過(guò)16計(jì)量器3”號(hào)針頭經(jīng)口注入胃內(nèi)。
隨后以與零血樣相同的方法取血樣，但是不需要再對(duì)尾進(jìn)行切口。用一塊紗布清洗尾部，并如上述擠出/撫摸于適當(dāng)標(biāo)記的試管中。
取樣后，將血液離心、分離、置于清楚標(biāo)記的管制瓶中，置于冰箱待分析。
在PO給藥后測(cè)定大鼠血液水平的一般的時(shí)間點(diǎn)為0、15分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)和6小時(shí)。
在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取血樣后，隨意給大鼠提供食物。在研究中一直供水。
溶媒在PO大鼠血液水平測(cè)定時(shí)使用下列溶媒FEG 200/300/400 限制在2ml/kgMethocel 0.5％-1.0％10ml/kgTween 8010ml/kg
PO血液化合物可以為懸浮液形式。為更好溶出，可以將溶液置于超聲儀中約5分鐘。
分析時(shí)，用等體積的乙腈稀釋，離心去除蛋白沉淀。將上清液直接上樣于UV檢測(cè)的C-18 HPLC柱上。相對(duì)于用已知量的藥物示蹤的純的血樣進(jìn)行定量。通過(guò)比較靜脈與口服曲線下的面積(AUC)評(píng)價(jià)生物利用度(F)F=AUCpoAUCiv×DOSEivDOSEpo×100%]]>用下列關(guān)系式計(jì)算清除率CL=DOSEiv(mg/cg)AUCiv]]>CL的單位為ml/h·kg(每小時(shí)千克毫升)大鼠靜脈藥代動(dòng)力學(xué)根據(jù)the Guidelines of the Canadian Council on Animal Care收藏、飼養(yǎng)和照顧所述動(dòng)物。
將雄性Sprague Dawley(325-375g)大鼠置于塑料導(dǎo)向(Shoe)盒籠中，并具有懸浮的地板、籠頂、水瓶和食物。
根據(jù)需要制備1ml/kg標(biāo)準(zhǔn)劑量體積的化合物。
使大鼠出血取零血樣，于CO2鎮(zhèn)靜下給藥。將大鼠(每次一只)置于充入CO2的室中并在它們失去正常的放松狀態(tài)后立即取出。然后將所述大鼠置于限制板上，在其鼻上放置具有CO2傳遞系統(tǒng)的鼻錐(nose cone)，用橡皮筋將該大鼠固定于所述板上。用鑷子和剪子暴露頸靜脈，取零血樣，接著取注射入頸靜脈的化合物的測(cè)定劑量。向注射部位施加輕微的指壓力，去除鼻錐。記錄時(shí)間。它為零時(shí)間點(diǎn)。
通過(guò)在尾部切下一段(1-2mm)取5分鐘血樣。然后用堅(jiān)固但輕輕的從尾頂端到尾基端撫摸擠出血液。將約1ml血液收集于肝素化的收集管制瓶中。隨后以相同的方法取血樣，但是不需要再對(duì)尾進(jìn)行切口。如上所述用一塊紗布清洗尾部，并放血于適當(dāng)標(biāo)記的試管中。
在Ⅳ給藥后測(cè)定大鼠血液水平的一般的時(shí)間點(diǎn)為0、5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、6小時(shí)或0、5分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)。
溶媒在Ⅳ大鼠血液水平測(cè)定時(shí)可以使用下列溶媒葡聚糖 1ml/kgMoleculosol 25％1ml/kgDMSO(二甲基亞砜)限制每只動(dòng)物體積劑量為0.1mlPEG 200 不超過(guò)與40％無(wú)菌水混合的60％-1ml/kg在為葡聚糖時(shí)，如果該溶液渾濁可以加入碳酸氫鈉或碳酸鈉。
分析時(shí)，用等體積的乙腈稀釋，離心去除蛋白沉淀。將上清液直接上樣于UV檢測(cè)的C-18 HPLC柱上。相對(duì)于用已知量的藥物示蹤的純的血樣進(jìn)行定量。通過(guò)比較i.v.與p.o.曲線下的面積(AUC)評(píng)價(jià)生物利用度(F)F=AUCpoAUCiv×DOSEivDOSEpo×100%]]>用下列關(guān)系式計(jì)算清除率CL=DOSEiv(mg/kg)AUCiv]]>CL的單位為mg/h·kg(每小時(shí)千克毫升)
代表性的生物學(xué)數(shù)據(jù)本發(fā)明的化合物為COX-2的抑制劑，因此可以治療上述所列舉的COX-2介導(dǎo)的疾病。這些化合物對(duì)環(huán)氧合酶的活性可以從下面的代表性的結(jié)果中看出。在該測(cè)定中，通過(guò)在AA、COX-1或COX-2和設(shè)想的抑制劑的存在下測(cè)定合成的前列腺素E2(PGE2)的量測(cè)定抑制。IC50值代表與未抑制的對(duì)照相比，使降低PGE2合成至50％時(shí)所需的設(shè)想抑制劑的濃度。
給出這些生物測(cè)定中的三個(gè)獲得的代表性化合物的數(shù)據(jù)和下列兩個(gè)得自世界專利申請(qǐng)96/10012號(hào)的化合物的比較數(shù)據(jù)
AaAbEx.410Ex.411表3實(shí)施例Cox-2全血Cox-1 U937 選擇性大鼠爪紅腫(IC50,μM) (IC50,μM) 比例 (ED50,mg/kg)Aa7.9 ＞10＞1.3＞10Ab4.9 2.2 0.45 -1 0.3 1.5 4.4 5.43 0.9 1.8 2-4 0.3 1 3.3 -7 1.8 5 2.8 1.7130.5 3 6-140.7 1.4 2-211.0 16 16 2.3231.1 ＞10＞9.10.6321.2 ＞10＞8.30.9452.2 ＞10＞4.53.046 3.347 2.459 0.8711.7 ＞10＞5.81.6731.8 7 3.8 2.0從這些數(shù)據(jù)中可以看出，本發(fā)明的化合物比Aa和Ab對(duì)COX-2顯示更強(qiáng)的選擇性和更大的效力。而且，這些實(shí)例中的吡啶環(huán)的堿性使它們可以形成酸加成鹽，從而提高水溶性，并提供在水溶性溶媒中胃腸外給藥的可能性。
通過(guò)下列非限定實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，除特別指明外(ⅰ)所有的操作均在室溫或環(huán)境溫度下進(jìn)行，即在18-25℃溫度范圍內(nèi)，并用硫酸鎂進(jìn)行有機(jī)物的干燥，(ⅱ)溶劑的蒸發(fā)在減壓(600-4000帕斯卡4.5-30mm.Hg)下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上、于浴溫60℃下進(jìn)行，(ⅲ)反應(yīng)后進(jìn)行薄層層析(TLC)，給出反應(yīng)時(shí)間僅僅為了說(shuō)明；(ⅳ)熔點(diǎn)未校正，‘d’代表分解；給出的熔點(diǎn)為由根據(jù)所述制備的物質(zhì)獲得；多晶現(xiàn)象導(dǎo)致在某些制備中分離到具有不同熔點(diǎn)的物質(zhì)；(ⅴ)用至少一種下列技術(shù)確證所有的終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和純度TLC、質(zhì)譜、核磁共振(NMR)光譜或微量分析數(shù)據(jù)；(ⅵ)給出產(chǎn)率僅僅為了說(shuō)明；(ⅶ)當(dāng)以δ形式給出主要診斷質(zhì)子的NMR數(shù)據(jù)時(shí)，以相對(duì)于四甲基硅烷(TMS)內(nèi)標(biāo)的百萬(wàn)分之一(ppm)份數(shù)給出，于300MHz或400MHz下，用指定的溶劑測(cè)定；信號(hào)的形狀使用常規(guī)的縮寫(xiě)s.單峰；d雙峰；t.三峰；m.多峰；br.寬峰等；此外“Ar”代表芳基信號(hào)；(ⅷ)化學(xué)符號(hào)具有它們通常的意義；也使用下列縮寫(xiě)v(體積)、w(重量)、b.p.(沸點(diǎn))、m.p.(熔點(diǎn))、L(升)、ml(毫升)、g(克)、mg(毫克)、mol(摩爾)、mmol(毫摩爾)、eq(當(dāng)量)、rt(室溫)。
實(shí)施例13-(4-甲磺酰基)苯基-2-苯基-5-三氟甲基吡啶步驟1:2-氨基-3-溴代-5-三氟甲基吡啶于室溫下，緩慢向2-氨基-5-三氟甲基吡啶(9g)的乙酸(75ml)溶液中加入溴(5.8ml)。1小時(shí)后，于0℃小心加入氫氧化鈉(10N)中和該酸。將產(chǎn)生的橙色沉淀溶于乙醚中，順序用飽和的碳酸鉀、飽和的亞硫酸鈉和鹽水洗滌，干燥并濃縮。將殘留的固體在己烷中劇烈攪拌1小時(shí)，過(guò)濾后，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(10.2g)。
步驟2:2-氨基-3-(4-甲硫基)苯基-5-三氟甲基吡啶于回流下，將步驟1的溴化物、4-甲硫基苯硼酸(Li等，J.Med.Chem.1995,38,4570)(8.5g)、2M碳酸鈉水溶液(60ml)和四(三苯膦)鈀(490mg)的乙醇/苯(100ml,1∶1)的混合物加熱15小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用水稀釋，用乙醚萃取。濃縮有機(jī)物，將殘留物在乙醚/己烷中劇烈攪拌1小時(shí)，過(guò)濾后得到為米色固體的目標(biāo)化合物(11.2g)。
步驟3:2-氨基-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶于室溫下，將2-氨基-3-(4-甲硫基)苯基-5-三氟甲基吡啶(9.7g)、OsO4(2ml 4％的水溶液)和NMO(13g)的丙酮/水(60ml∶5ml)混合物攪拌過(guò)夜。然后加入飽和的亞硫酸鈉水溶液，將產(chǎn)生的混合物攪拌30分鐘。蒸發(fā)丙酮，用乙醚和乙酸乙酯萃取產(chǎn)生的混合物。用亞硫酸鈉、水和鹽水洗滌合并的有機(jī)物，然后濃縮。將固體殘留物在己烷和乙醚中劇烈攪拌1小時(shí)，然后過(guò)濾得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(9.9g)。
步驟4:2-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶于0℃，向2-氨基-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶(1.2g)的水/濃HCl(9.5ml∶1ml)溶液中加入硝酸鈉(262mg)的5ml水溶液。將該混合物加熱至室溫并攪拌過(guò)夜。再加入30mg硝酸鈉，3小時(shí)后過(guò)濾該均一的混合物。于70℃，將部分固體(250mg)和POCl3(110μl)的DMF(2ml)混合物加熱60小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用水洗滌，用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機(jī)物，濃縮得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(270mg)，將其用于下一步反應(yīng)。
步驟5:3-(4-甲磺?；?苯基-2-苯基-5-三氟甲基吡啶于回流下，將2-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶(260mg)、苯硼酸(113mg)、2M碳酸鈉水溶液(2.1ml)和四(三苯膦)鈀(30mg)的乙醇/苯(8ml,1∶1)混合物加熱24小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。濃縮有機(jī)物，固體殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，4∶1 v/v洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.191-192℃(215mg)。
實(shí)施例22-(3-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶步驟1:2-溴代-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶于0℃，向?qū)嵤├?步驟3得到的2-氨基-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶(2g)的48％HBr(25ml)溶液中加入溴(3ml)，然后滴加亞硝酸鈉(1.1g)。2小時(shí)后，加入氫氧化鈉(10N)中和該溶液，然后用乙酸乙酯萃取。用飽和的亞硫酸鈉和鹽水洗滌有機(jī)物，干燥并濃縮。殘留物質(zhì)經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，7∶3-3∶7v/v洗脫)得到為白色固體的目標(biāo)化合物(435mg)。
步驟2:2-(3-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶于回流下，將2-溴代-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶(178mg)、3-氯代苯基硼酸(110mg)、磷酸鉀(225mg)和四(三苯膦)鈀(20mg)的二氧六環(huán)(10ml)混合物加熱24小時(shí)。冷卻至室溫后，用水稀釋該混合物，用乙醚萃取。干燥并濃縮有機(jī)物，殘留物質(zhì)經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，7∶3v/v洗脫)。將獲得的固體在己烷/乙醚中劇烈攪拌1小時(shí)，得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物，m.p.136-237℃(115mg)。
實(shí)施例32-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟5的方法，但是用4-氯代苯基硼酸代替苯硼酸，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.192-193℃(155mg)。
實(shí)施例42-(4-氟代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟5的方法，但是用4-氟代苯基硼酸代替苯硼酸，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.163-164℃(152mg)。
實(shí)施例73-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)-5-三氟甲基吡啶于回流下，將2-溴代-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶(600mg)(實(shí)施例2步驟2)、二乙基-3-吡啶基硼烷(255mg)、碳酸鈉(2M,2.2ml)和雙(三苯膦)鈀二溴化物(25mg)的苯/乙醇(1∶1,32ml)混合物加熱24小時(shí)。冷卻至室溫后，濃縮該混合物，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。濃縮有機(jī)物，殘留物質(zhì)溶于10％HCl/乙醚中。去除有機(jī)層，加入飽和的碳酸氫鈉將水相pH調(diào)至約10。用乙酸乙酯萃取該混合物，濃縮合并的有機(jī)物，經(jīng)快速層析(用乙酸乙酯洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.171-172℃(180mg)。
實(shí)施例135-甲基-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-苯基吡啶步驟1:2-氨基-3-溴代-5-甲基吡啶于室溫下，向2-氨基-5-甲基吡啶(5g)的乙酸(40ml)溶液中緩慢加入溴(2.6ml)。1小時(shí)后，于0℃小心加入2氫氧化鈉(10N)中和該酸。將產(chǎn)生的橙色沉淀溶于乙醚中，順序用飽和的碳酸鉀、飽和的硫代硫酸鈉和鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘留固體經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，3∶2v/v)得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(7.1g)。
步驟2:2-氨基-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟2和3的方法，但是用步驟1得到的2-氨基-3-溴代-5-甲基吡啶(7.1g)代替2-氨基-3-溴代-5-三氟甲基吡啶，得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(3.7g)。
步驟3:2-溴代-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例2步驟1的方法，但是用步驟2得到的2-氨基-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(3g)代替2-氨基-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(2.7g)。
步驟4:5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟5的方法，但是用步驟3得到的2-溴代-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(300mg)代替2-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶，得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(270mg)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ2.42(s,3H),3.03(s,3H),7.19-7.28(m,5H),7.35(d,2H),7.51(d,1H),7.81(d,2H),8.56(d,1H)。
實(shí)施例142-(4-氯代苯基)-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例3的方法，但是用實(shí)施例13步驟3得到的2-溴代-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(300mg)代替2-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.155-156℃(125mg)。
實(shí)施例155-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶步驟1三-正-丙氧基-3-吡啶基硼酸鋰于-90℃，以使內(nèi)部溫度不超過(guò)-78℃的速率，向3-溴代吡啶(39.5g)乙醚(800ml)溶液中加入正丁基鋰(100ml,2.5M)。于-78℃將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后加入三異丙氧基硼酸鹽(59ml)，將產(chǎn)生的化合物加熱至0℃。加入甲醇，將該混合物從甲醇中蒸發(fā)三次，然后從正丙醇中蒸發(fā)兩次。將殘留物在高真空下抽氣3天，將產(chǎn)生的泡沫狀物(76g的1∶1的目標(biāo)化合物正丙醇的混合物)用于下一步反應(yīng)。
步驟2:5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶根據(jù)實(shí)施例14所述的方法，但是用步驟1的三-正-丙氧基-3-吡啶基硼酸鋰代替4-氯代苯基硼酸，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.166-167℃(2.1g)。
實(shí)施例175-氯代-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶步驟1:2-氨基-3-溴代-5-氯代吡啶于室溫下，緩慢向2-氨基-5-氯代吡啶(10g)的乙酸(75ml)溶液中加入溴(2.6ml)。30分鐘后，于0℃小心加入氫氧化鈉(10N)中和該酸。將產(chǎn)生的橙色沉淀溶于乙酸乙酯中，順序用飽和的碳酸鉀、飽和的硫代硫酸鈉和鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘留的固體經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，3∶1v/v洗脫)，得到為淡黃色固體的目標(biāo)化合物(14.8g)。
步驟2:2-氨基-5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟2和3所述方法，但是用步驟1的2-氨基-3-溴代-5-氯代吡啶(5g)代替2-氨基-3-溴代-5-三氟甲基吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(5g)。
步驟3:2-溴代-5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶向步驟2的2-氨基-5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(5g)的水/濃HCl(50ml/10ml)冷(冰浴)溶液中加入硝酸鈉(1.5g)水(10ml)溶液。于室溫下，將產(chǎn)生的混合物攪拌15小時(shí)，過(guò)濾除去產(chǎn)生的沉淀，順序用水和四氯化碳洗滌?？諝飧稍锖?，于100℃將白色固體(4.8g)和POBr3(10.5g)的DMF(40ml)混合物攪拌2天。將產(chǎn)生的混合物傾至冰/水中，用乙酸乙酯萃取。用1N NaOH將水相調(diào)至堿性，用乙酸乙酯萃取。干燥并濃縮合并的有機(jī)物。殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯1∶1 v/v洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(2.7g)。
步驟4:5-氯代-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例3所述方法，但是用步驟3的2-溴代-5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶代替2-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶-5-三氟甲基吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.187-188℃(200mg)。
實(shí)施例205-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-吡啶基)吡啶步驟1:3-溴代-5-氯代-2-羥基吡啶于室溫下，將5-氯代-2-羥基吡啶(100g)和溴(40.1ml)的乙酸(400ml)混合物攪拌1小時(shí)。將該混合物傾至3L水中，攪拌30分鐘，然后過(guò)濾。用2L冷水洗滌殘留固體，空氣干燥，然后與甲苯共蒸發(fā)三次，用苯共蒸發(fā)兩次。將如此獲得的白色固體(81g)用于下一步反應(yīng)。
步驟2:2-芐氧基-3-溴代-5-氯代吡啶于70℃，將3-溴代-5-氯代-2-羥基吡啶(81g)、芐基溴(52ml)和碳酸銀(97g)的苯(1L)混合液加熱1小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濃縮濾液，使殘留的灰白色固體從己烷中重結(jié)晶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(102g)。
步驟3:2-芐氧基-5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶根據(jù)實(shí)施例1步驟2和3所述方法，用步驟2的2-芐氧基-3-溴代-5-氯代吡啶(81 g)代替2-氨基-3-溴代-5-三氟甲基吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(72g)。
步驟4:5-氯代-2-羥基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶于40℃，將2-芐氧基-5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(72g)的三氟乙酸(250ml)溶液攪拌1 5分鐘，然后傾至冰/水(約1L)中。攪拌10分鐘后，過(guò)濾白色固體，用1L水洗滌兩次，然后空氣干燥得到目標(biāo)化合物。
步驟5:2,5-二氯-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶于150℃，將步驟4的粗品5-氯代-2-羥基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶于密封瓶中與POCl3(400ml)一起加熱1 5小時(shí)。冷卻至室溫后，于真空蒸餾去除過(guò)量的POCl3。用乙酸乙酯和水稀釋殘留物，然后用氫氧化鈉(10N)中和至pH約為7。去除有機(jī)物，用鹽水洗滌并濃縮。使殘留的固體從乙醚中重結(jié)晶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(61g)。
步驟6三-正-丙氧基-2-吡啶基硼酸鋰根據(jù)實(shí)施例15步驟1所述方法，但是用2-溴代吡啶(1.9ml)代替3-溴代吡啶，制備為灰白色固體的目標(biāo)化合物(4.1g)。
步驟7:5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-吡啶基)-吡啶于回流下，將2,5-二氯-3-(4-甲磺酰基)苯基-吡啶(1g)、三-正-丙氧基-2-吡啶基硼酸鋰(1.22g)、碳酸鈉(5ml,2M)和雙(三苯膦)鈀二溴化物(520mg)的甲苯(100ml)、異丙醇(10ml)和水(25ml)混合液加熱7小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用6N HCl萃取該濾液，用乙酸乙酯洗滌水溶液。用10N氫氧化鈉將水相堿化至pH約為10，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機(jī)物，干燥并濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，1∶1v/v洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.134-135℃(350mg)。
實(shí)施例215-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶根據(jù)實(shí)施例20步驟7所述方法，用實(shí)施例15步驟1的三-正-丙氧基-3-吡啶基硼酸鋰代替三-正-丙氧基-2-吡啶基硼酸鋰，得到為白色固體目標(biāo)化合物，m.p.168-169℃。
實(shí)施例225-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(4-吡啶基)吡啶步驟1三甲氧基-4-吡啶基硼酸鋰根據(jù)實(shí)施例15步驟1所述方法，用4-溴代吡啶代替3-溴代吡啶。在從正丙醇中蒸發(fā)前使用該粗品物質(zhì)。
步驟2:5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(4-吡啶基)吡啶根據(jù)實(shí)施例20步驟7所述方法，但是用步驟1的三甲氧基-4-吡啶基硼酸鋰代替三-正-丙氧基-2-吡啶基硼酸鋰，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.187-188℃。
實(shí)施例235-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶步驟1三氟甲磺酸2-甲基吡啶-5-基酯于0℃，向5-羥基-2-甲基吡啶(2g)和吡啶(1.9ml)的二氯甲烷(100ml)混合物中加入三氟甲磺酸酐(3.4ml)。在該溫度下將該混合物攪拌15分鐘，然后于室溫下攪拌45分鐘。加入乙酸銨(25％)，取出有機(jī)物，用1N HCl洗滌，干燥并濃縮。得到為米色液體的目標(biāo)化合物(4g)，將其直接使用。
步驟2:2-甲基-5-三甲基錫烷基吡啶于回流下，將三氟甲磺酸2-甲基-吡啶-5-基酯(2.1g)、六甲基二錫(2.85g)、氯化鋰(1.1g)和四(三苯膦)鈀(190mg)的混合物加熱180分鐘，然后冷卻至室溫。通過(guò)硅藻土過(guò)濾該混合物，用乙酸乙酯洗滌。用5％氟化鉀洗滌兩次，干燥并濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，6∶1v/v洗脫)，得到為淡黃色油狀物的目標(biāo)化合物(1.3g)。
步驟3:5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶于100℃下，將實(shí)施例20步驟5的2,5-二氯-3-(4-甲磺?；?苯基-吡啶(750mg)、2-甲基-5-三甲基-錫烷基吡啶(1.3g)和四(三苯膦)鈀(290mg)的NMP(10ml)混合物加熱15小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用水將該濾液洗滌兩次，用5％氟化鉀洗滌兩次，然后用1N HCl萃取。用10N氫氧化鈉中和水相，然后用乙酸乙酯萃取。濃縮有機(jī)物，殘留物經(jīng)快速層析(用乙酸乙酯洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.127-128℃。
實(shí)施例432-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶基-5-羧酸甲酯于90℃，用2小時(shí)分批向2-(4-氯代苯基)-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶(實(shí)施例14,1.9g)的叔丁醇/水(1∶2,60ml)溶液中加入固體高錳酸鉀(2.5g)。于90℃，將產(chǎn)生的混合物攪拌15小時(shí)，然后冷卻至室溫。通過(guò)硅藻土過(guò)濾該混合物，用6N HCl酸化濾液至pH約為2。過(guò)濾白色沉淀，然后將部分該物質(zhì)溶于THF/二氯甲烷中。向該溶液中加入重氮甲烷至加入后不再有氣泡。濃縮產(chǎn)生的混合物，并經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，1∶1 v/v洗脫)。得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.216-218℃。
實(shí)施例442-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基吡啶基-5-羧酸向2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶基-5-羧酸甲酯(140mg)的甲醇/水(1∶1,10ml)溶液中加入氫氧化鋰(0.35ml,3N)，于室溫下將產(chǎn)生的混合物攪拌45分鐘。加入飽和的碳酸氫鈉，用乙酸乙酯萃取水溶液。用3NHCl處理水層至pH約為2，然后用氯仿萃取。濃縮有機(jī)物得到為白色固體的目標(biāo)化合物，m.p.＞300℃(60mg)。
實(shí)施例455-氰基-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶于回流下，向2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶基-5-羧酸(300mg)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入氯代磺酰基異氰酸酯(0.4ml)。于回流下90分鐘后，將該混合物冷卻至室溫，然后緩慢加入DMF(1.5ml)。15分鐘，加入水，用乙酸乙酯萃取該混合物。用水和鹽水洗滌該有機(jī)物，干燥并濃縮?？焖賹游?用乙酸乙酯/己烷，2∶1v/v洗脫)。得到為白色固體的目標(biāo)化合物(100mg)。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 3.06(s,3H),7.21-7.28(m,4H),7.37(d,2H),7.90(d,2H),7.96(d,1H),8.94(d,1H).實(shí)施例46
5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽通過(guò)滴加甲磺酸(1ml)的乙酸乙酯(20ml)溶液處理5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶(5.31g，實(shí)施例21)的乙酸乙酯(100ml)溶液。過(guò)濾產(chǎn)生的沉淀，于真空干燥得到為白色固體的目標(biāo)化合物(64g)。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ 2.68(s,3H),3.1 5(s,3H),7.60(d,2H),7.96-8.00(m,3H),8.14(d,1H),8.47(dt,1H),8.80(d,1H),8.86(m,2H).
實(shí)施例475-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶鹽酸鹽通過(guò)滴加鹽酸(1.5ml,4M二氧六環(huán))處理5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶(2.05g，實(shí)施例21)的熱乙酸乙酯(75ml)溶液。過(guò)濾產(chǎn)生的沉淀，真空干燥得到為白色固體的目標(biāo)化合物(2.2g)。
1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ3.24(s,3H),7.59(d,2H),7.80(dd,1H),7.91(d,2H),8.15(d,1H),8.22(d,1H),8.69(d,1H),8.77(d,1H),8.90(d,1H).
實(shí)施例595-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶鹽酸鹽根據(jù)實(shí)施例47所述方法，但是用5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶(得自實(shí)施例23)代替5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶，得到為白色固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(300 MHz,DMSO-d6):δ2.68(s,3H),3.25(s,3H),7.61(d,2H),7.70(d,1H),7.92(d,2H),8.07(dd,1H),8.21(d,1H),8.54(d,1H),8.88(d,1H).實(shí)施例715-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶
步驟1三-正-丙氧基-2-乙基-5-吡啶基硼酸鋰根據(jù)實(shí)施例15步驟1所述方法，但是用2-乙基-5-溴代吡啶(Tilley和Zawoiski,J.Org.Chem.1988,53,386)(4.6g)代替3-溴代吡啶，得到為黃色固體的目標(biāo)化合物。
步驟2:5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶于回流下，將2,5-二氯-3-(4-甲磺?；?苯基-吡啶(實(shí)施例20步驟5)(5.6g)、三-正-丙氧基-2-乙基-5-吡啶基硼酸鋰(步驟1)(4.0g)、碳酸鈉(17ml,2M)和雙(三苯膦)鈀二溴化物(420mg)的甲苯(75ml)、乙醇(75ml)和水(15ml)混合物加熱7小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用6N HCl萃取濾液，用乙酸乙酯洗滌水溶液。用10N氫氧化鈉堿化水相至pH約為10。用鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，1∶1v/v洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(4.0g)。1H NMR(500 MHz,acetone-d6)δ1.21(t,3H),2.74(q,2H),3.14(s,3H),7.14,(d,1H),7.59(m,3H),7.93(d,2H),7.99(d,1H),8.44(d,1H),8.75(d,1H).
實(shí)施例71-另外的方法5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶
步驟1:5-溴代-2-乙基吡啶將280ml 5N的氫氧化鈉(1.4mol,2.09eq)加至158g 2,5-二溴代吡啶(0.67mol,1eq)的1.4L THF溶液中。向產(chǎn)生的溶液中加入700ml1N三乙基硼的THF(0.70mol,1.04eq)、195mg雙(乙腈)氯化鈀(Ⅱ)(0.75mmol,0.0011eq)和414mg 1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵(0.75mmol,0.0011eq)。將該反應(yīng)物緩慢加熱至剛剛回流3小時(shí)。然后冷卻至0℃，順序用140ml5N氫氧化鈉(0.70mol,1.04eq)和53ml 30％過(guò)氧化氫(0.70mol,1.05eq)處理，并使溫度不超過(guò)10℃。用乙醚萃取該混合物，用氫氧化鈉、水、鹽水洗滌醚萃取物，經(jīng)硫酸鎂干燥。然后濃縮醚溶液，真空蒸餾(40℃,1Torr)棕色殘留物，得到112g為澄清油狀物的目標(biāo)化合物，染有少量的原料和2,5-二乙基吡啶。產(chǎn)率約90％。1H NMR與J.W.Tilley和S.Zawoiski(J.Org.Chem,1988,53,386-390)報(bào)道的相符。該物質(zhì)適合不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。
步驟2三-正-丙氧基-2-乙基-5-吡啶基硼酸鋰根據(jù)實(shí)施例15步驟1所述方法，但是用步驟1的5-溴代-2-乙基吡啶代替3-溴代吡啶，制備為黃色固體的目標(biāo)化合物。
步驟3:5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶于回流下，將2,5-二氯-3-(4-甲磺?；?苯基-吡啶(實(shí)施例20步驟5)(5.6g)、三-正-丙氧基-2-乙基-5-吡啶基硼酸鋰(步驟2)(4.0g)、碳酸鈉(17ml,2M)和雙(三苯膦)鈀二溴化物(420mg)的甲苯(75ml)、乙醇(75ml)和水(15ml)混合物加熱7小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用6N HCl萃取濾液，用乙酸乙酯洗滌水溶液。用10N氫氧化鈉堿化水相至pH約為10，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘留物經(jīng)快速層析(用己烷/乙酸乙酯，1∶1v/v洗脫)，得到為白色固體的目標(biāo)化合物(4.0g)。1H NMR(500 MHz,acetone-d6)δ 1.21(t,3H),2.74(q,2H),3.14(s,3H),7.14,(d,1H),7.59(m,3H),7.93(d,2H),7.99(d,1H),8.44(d,1H),8.75(d,1H).
實(shí)施例725-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽
通過(guò)滴加甲磺酸(873mg)的乙醚(20ml)溶液處理5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶(3.4g，實(shí)施例71)的乙酸乙酯(40ml)和乙醚(100ml)溶液。將產(chǎn)生的沉淀冷卻至-20℃，過(guò)濾并真空干燥得到為白色固體的目標(biāo)化合物(4.3g)。
1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ1.40(t,3H),2.68(s,3H),3.07(q,2H),3.15(s,3H),7.60(d,2H),7.86(d,1H),7.99(d,2H),8.11(d,1H),8.34(m,1H),8.69(d,1H),8.83(d,1H).
實(shí)施例735-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-環(huán)丙基-5-吡啶基)吡啶1H NMR(acetone-d6)δ 0.9(m,4H),2.0(m,1H),3.14(s,3H),7.15(d,1H),7.50(dd,1H),7.59(m,2H),7.95(m,3H),8.36(d,1H),8.72(d,1H).
實(shí)施例745-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2,6-二甲基-3-吡啶基)吡啶分析CH N計(jì)算值61.204.607.51實(shí)測(cè)值61.524.527.8權(quán)利要求
1．式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，(c)NHC(O)CF3，(d)NHCH3；Ar為一、二或三取代苯基或吡啶基(或其N-氧化物)，其中所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-6烷氧基，(d)C1-6烷硫基，(e)CN，(f)C1-6烷基，(g)C1-6氟代烷基，(h)N3，(i)-CO2R3，(j)羥基，(k)-C(R4)(R5)-OH，(l)-C1-6烷基CO2-R6，(m)C1-6氟代烷氧基；R2選自(a)鹵素，(b)C1-6烷氧基，(c)C1-6烷硫基，(d)CN，(e)C1-6烷基，(f)C1-6氟代烷基，(g)N3，(h)-CO2R7，(i)羥基，(j)-C(R8)(R9)-OH，(k)-C1-6烷基CO2-R10，(l)C1-6氟代烷氧基；(m)NO2，(n)NR11R12，(o)NHCOR13R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13各自獨(dú)立選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，或R4和R5、R8和R9或R11和R12與它們所連接的原子一起形成3、4、5、6或7元飽和的單環(huán)。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為一、二或三取代的2-吡啶基。
3．權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為一、二或三取代的3-吡啶基。
4．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為CH3或NH2。
5．權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為一、二或三取代的2-吡啶基或3-吡啶基，且所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-3烷氧基，(d)C1-3烷硫基，(e)C1-3烷基，(f)CF3，和(g)CN。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為CH3或NH2；且Ar為一、二或三取代的2-吡啶基或3-吡啶基，且所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-3烷氧基，(d)C1-3烷硫基，(e)C1-3烷基，(f)CF3，和(g)CN。
7．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為(a)鹵素，(b)C1-4烷氧基，(c)CN，(d)C1-3烷基，(e)C1-3氟代烷基，(f)-CO2H，(g)-C1-3烷基-CO2H，(h)C1-3氟代烷氧基；或(i)NO2。
8．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為鹵素、CH3或CF3。
9．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為CH3或NH2；R2為鹵素、CH3或CF3；和Ar為一、二或三取代的2-吡啶基或3-吡啶基，且所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-3烷氧基，(d)C1-3烷硫基，(e)C1-3烷基，(f)CF3，和(g)CN。
10．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為CH3或NH2；R2為鹵素、CH3或CF3；和Ar為一或二取代的3-吡啶基，且所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-3烷氧基，(d)C1-3烷硫基，(e)C1-3烷基，(f)CF3，和(g)CN。
11．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為CH3或NH2；R2為鹵素、CH3或CF3；和Ar為一或二取代的苯基，且所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-3烷氧基，(d)C1-3烷硫基，(e)C1-3烷基，(f)CF3，和(g)CN。
12．式Ⅰa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R2Ar(1)CF3Ph(2)CF33-ClC6H4(3)CF34-ClC6H4(4)CF34-FC6H4(5)CF32-(CMe2OH)C6H4(6)CF33-(CMe2OH)C6H4(7)CF33-pyr(8)CF35-(2-Me)pyr(9)CF35-(3-Br)pyr(1O) CF35-(3-Cl)pyr(11) CF35-(2-OMe)pyr(12) CF32-(5-Br)pyr(13) Me Ph(14) Me 4-ClC6H4(15) Me 3-pyr(16)Cl Ph(17)Cl 4-ClC6H4(18)Cl 2-(CMe2OH)C6H4(19)Cl 3-(CMe2OH)C6H4(20)Cl 2-pyr(21)Cl 3-pyr(22)Cl 4-Pyr(23)Cl 5-(2-Me)pyr(24)Cl 5-(3-Br)pyr(25)Cl 5-(3-Cl)pyr(26)Cl 5-(2-OMe)pyr(27)Cl 2-(5-Br)pyr(28)FPh(29)F3-Pyr(30)F5-(2-Me)pyr(31)Br Ph(32)Br 3-pyr(33)Br 5-(2-Me)pyr(34)NO2Ph(35)NO23-pyr(36)NO25-(2-Me)pyr(37)OMe Ph(38)OMe 3-pyr(39)OMe 5-(2-Me)pyr(4O)NHCOMe Ph(41)NHCOMe 3-pyr(42)NHCOMe 5-(2-Me)pyr(43)CO2Me 4-ClC6H4(44)CO2H4-ClC6H4(45)CN 4-ClC6H4
13．權(quán)利要求12的化合物，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽為檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或酒石酸鹽。
14．權(quán)利要求13的化合物，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽為鹽酸鹽或甲磺酸鹽。
15．式Ⅰb的化合物
R2Ar(48) CF3Ph(49) CF34-ClC6H4(50) CF34-FC6H4(51) CF33-pyr(52) Me Ph(53) Me 4-ClC6H4(54) Cl 3-pyr(55) Cl 5-(2-Me)pyr(56) CN 4-ClC6H4(71) Cl 5-(2-ethyl)Pyr(72) Cl 5-(2-Et)pyr-MeSO3H(73) Cl 5-(2-c-Pr)pyr(74) Cl 3-(2,6-Me2)pyr
16．權(quán)利要求15的化合物，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽為檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或酒石酸鹽。
17．權(quán)利要求16的化合物，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽為鹽酸鹽或甲磺酸鹽。
18．治療對(duì)非甾體抗炎藥治療敏感的炎癥性疾病的藥用組合物，它包括非-毒性治療有效量的權(quán)利要求1的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
19．治療環(huán)加氧酶介導(dǎo)的疾病的藥用組合物，所述疾病用優(yōu)于抑制COX-1而選擇性抑制COX-2的活性物質(zhì)治療有利，所述組合物包括非-毒性治療有效量的權(quán)利要求1的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
20．治療對(duì)非甾體抗炎藥治療敏感的炎癥性疾病的方法，該方法包括給予需要此治療的病人以非-毒性治療有效量的權(quán)利要求1的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
21．治療環(huán)加氧酶介導(dǎo)的疾病的方法，所述疾病用優(yōu)于抑制COX-1而選擇性抑制COX-2的活性物質(zhì)治療有利，所述方法包括給予需要此治療的病人以非-毒性治療有效量的權(quán)利要求1的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
22．式Ⅰ的權(quán)利要求1的化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，(c)NHC(O)CF3，(d)NHCH3，Ar為一、二或三取代的吡啶基(或其N-氧化物)，其中所述取代基選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-6烷氧基，(d)C1-6烷硫基，(e)CN，(f)C1-6烷基，(g)C1-6氟代烷基，(h)N3，(i)-CO2R3，(j)羥基，(k)-C(R4)(R5)-OH，(l)-C1-6烷基-CO2-R6，(m)C1-6氟代烷氧基；R2選自(a)鹵素，(b)C1-6烷氧基，(c)C1-6烷硫基，(d)C1-6烷基，(e)N3，(f)-CO2H，(g)羥基，(h)C1-6氟代烷氧基；(i)NO2，(j)NR11R12，和(k)NHCOR13，R3、R4、R5、R6、R11、R12、R13各自獨(dú)立選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，或R4和R5或R11和R12與它們所連接的原子一起形成3、4、5、6或7元飽和的單環(huán)。
23式Ⅰc的權(quán)利要求22的化合物
其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2選自(a)氯，(b)甲基，其中可以有一、二或三個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自(a)氫，(b)鹵素，(c)C1-4烷氧基，(d)C1-4烷硫基，(e)CN，(f)C1-4烷基，(g)CF3。
24權(quán)利要求23的化合物，其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2為氯，其中可以有一個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自(a)氫，(b)F或Cl，(c)甲基，(d)乙基。
25．權(quán)利要求24的化合物，其中R1選自(a)CH3，(b)NH2，R2為氯，其中可以有一個(gè)基團(tuán)X獨(dú)立選自(a)氫，(b)F或Cl，(c)甲基。
26．權(quán)利要求25的化合物，其中R1為甲基。
27．式Ⅰc的化合物
其中R1為CH3或NH2；R2為(a)鹵素，(b)C1-6烷氧基，(c)C1-6烷硫基，(d)C1-6烷基，(e)N3，(f)-CO2H，(g)羥基，(h)C1-6氟代烷氧基；(i)NO2，(j)NR11R12，(k)NHCOR13，和X為氫。
28．權(quán)利要求1的化合物為5-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶或其藥學(xué)上可接受的鹽。
29．權(quán)利要求1的化合物為5-氯-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽。
30．權(quán)利要求1的化合物為5-氯-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)吡啶鹽酸鹽。
31．權(quán)利要求1的化合物為5-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶或其藥學(xué)上可接受的鹽。
32．權(quán)利要求1的化合物為5-氯-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽。
33．式Ⅰc的化合物
其中R1為CH3或NH2；R2為(a)鹵素，(b)C1-3烷氧基，(c)C1-3烷硫基，(d)C1-3烷基，(e)N3，(f)-CO2H，(g)羥基，(h)C1-3氟代烷氧基；(i)NO2，(j)NR11R12，(k)NHCOR13，和X為甲基、乙基、正丙基、異丙基或環(huán)丙基。
34．權(quán)利要求33的化合物，其中X為甲基。
35．權(quán)利要求33的化合物為5-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶或其藥學(xué)上可接受的鹽。
36．權(quán)利要求33的化合物為5-氯-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶鹽酸鹽。
37．選自下列的化合物3-(4-甲磺?；?苯基-2-苯基-5-三氟甲基吡啶；2-(3-氯代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基-5-三氟甲基吡啶；2-(4-氟代苯基)-3-(4-甲磺酰基)苯基-5-三氟甲基吡啶；3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)-5-三氟甲基吡啶；5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-苯基吡啶；2-(4-氯代苯基)-5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶；5-甲基-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶；5-氯代-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(3-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(4-吡啶基)吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶基-5-羧酸甲酯；2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶基-5-羧酸；5-氰基-2-(4-氯代苯基)-3-(4-甲磺?；?苯基吡啶；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(3-吡啶基)吡啶鹽酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶鹽酸鹽；5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶；和5-氯代-3-(4-甲磺?；?苯基-2-(2-乙基-5-吡啶基)吡啶氫甲磺酸鹽。
38．權(quán)利要求1、28、29、30、31、32、35、36或37的化合物在生產(chǎn)治療炎癥性疾病的藥物中的用途。
39．治療環(huán)加氧酶-2介導(dǎo)的疾病的藥用組合物，所述組合物包括權(quán)利要求1、28、29、30、31、32、35、36或37的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
40．藥用組合物，它包括權(quán)利要求1-16和22-37中任何一項(xiàng)的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
41．抗炎藥用組合物，它包括可接受的、抗炎量的如權(quán)利要求1-11、22-26或29-32中任何一項(xiàng)所定義的式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。
42．用作COX-2選擇性抑制劑的權(quán)利要求1-17或22-37中任何一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明包括式(Ⅰ)的新化合物以及治療COX－2介導(dǎo)的疾病的方法,該方法包括給予需要此治療的病人以非—毒性治療有效量的式(Ⅰ)化合物。本發(fā)明也包括部分含有式(Ⅰ)化合物的治療COX－2介導(dǎo)的疾病的藥用組合物。
文檔編號(hào)C07D213/89GK1225085SQ97196377
公開(kāi)日1999年8月4日 申請(qǐng)日期1997年7月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月18日
發(fā)明者D·杜貝, R·福廷, R·弗里森, 王召印, J·Y·戈捷 申請(qǐng)人:麥克弗羅斯特(加拿大)有限公司