專利名稱：氟化維生素d3衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇，它可用下式進一步表征 可用作為治療皮脂腺疾病，如痤瘡或皮脂溢性皮炎的藥劑。
另一方面，本發(fā)明涉及包含式Ⅰ化合物的藥物組合物和這種化合物對于制備治療上述疾病的藥物的應(yīng)用。
1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇可按下列反應(yīng)圖解制備

在以上反應(yīng)圖解中，式Ⅰ的化合物通過與式2的相應(yīng)化合物反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槭?的化合物 在-60℃-90℃，優(yōu)選-75℃下，在極性、非質(zhì)子傳遞溶劑如干醚或更優(yōu)選的干四氫呋喃中，在強堿如烷基鋰如丁基鋰存在下進行反應(yīng)。式2的化合物是已知的(J.Org.Chem.1990，55，243)或可按已知的方法制備。
式3化合物的保護基通過與氟鹽，如氟化四丁銨在極性有機溶劑如醚，或更優(yōu)選的是四氫呋喃中進行反應(yīng)除去，得到式Ⅰ的相應(yīng)化合物。
1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇可用作為治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎的藥劑。
可以給需要這種治療的患者局部擦用1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇來治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎。更具體地說，為了治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎，可以給人局部擦用1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇，劑量為每天每克局部制劑0.01-100μg。
可以給需要這種治療的患者口服1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇來治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎。更具體地說，為了治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎，每日口服大約0.01-10μg劑量的1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇。
1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇作為治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎的藥劑的有效活性可用本領(lǐng)域中已知的下列試驗程序來證實。
方法1.體外按J.InvestDermatol.96∶341-348(1991)中所述的方法從成人皮脂腺中分離皮脂細(xì)胞并在生長受到抑制的3T3小鼠成纖維細(xì)胞層上培養(yǎng)。
在含有10%胎牛血清和4μg/ml地塞米松的Iscove氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)這些細(xì)胞。
將細(xì)胞鋪敷在不含1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇的培養(yǎng)基上。初始平板培養(yǎng)后24-48小時，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到含有本發(fā)明化合物的新鮮培養(yǎng)基中。每隔48小時，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到含有本發(fā)明化合物的新鮮培養(yǎng)基中。在收獲的當(dāng)天，用0.03%EDTA的PBS漂洗培養(yǎng)物，只除去3T3成纖維細(xì)胞。將剩余的皮脂細(xì)胞集落在0.05%胰蛋白酶/0.03%EDTA中溫育以得到皮脂細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液。將細(xì)胞稀釋，強力混合以維持單細(xì)胞懸浮液，并用血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)。
用下列方法處理試驗化合物。制備儲備溶液，即10-2M脫氣100%乙醇溶液，將其儲存于-20℃的暗處。儲存1個月以上的溶液不再使用。在實驗期間，將溶液分成幾等份，融化一次，使用時直接稀釋到完全培養(yǎng)基中至適當(dāng)?shù)臐舛?10-6、10-7、10-8和10-9M)。試驗化合物為(1)1，25-二羥基膽鈣化甾醇;和(2)1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇。
結(jié)果用濃度如下的化合物進行抑制皮脂細(xì)胞增殖的體外試驗10-6、10-7、10-8和10-9M。1，25-二羥基膽鈣化甾醇是一種使雄性Syri-an倉鼠耳內(nèi)皮脂腺尺寸減小的藥劑。
結(jié)果列在表1中，以與對照相比抑制皮脂細(xì)胞增殖達50%所需的化合物量表示(ED50)。對照是只用稀釋劑處理的培養(yǎng)物。
表1在體外對人皮脂細(xì)胞增殖的抑制化合物ED50(μM)1,25-二羥基膽鈣化甾醇0.051α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-0.001膽鈣化甾醇結(jié)果表明本發(fā)明的化合物在體外抑制人皮脂細(xì)胞增殖。因此，本發(fā)明的化合物可用作治療痤瘡的藥劑。
2.體內(nèi)倉鼠耳模型a.局部研究在倉鼠耳皮脂腺模型中評價化合物的局部抗痤瘡活性。為了這些研究，將化合物溶于丙酮中。每天(每周五天)將50μl含藥溶液注入倉鼠右耳背面。對照倉鼠接受50ml丙酮。4周后將動物處死。取耳，進行組織學(xué)評價。將腹表面與耳的其余部分分開。距耳頂端5mm取-2mm的圓片，在溶于100%丙二醇的0.1%SudanBlackB中染色過夜。脫色后，通過用Donsato影像分析系統(tǒng)進行影像分析由模截面確定皮脂腺面積。對于每個劑量80-120個皮脂腺，其數(shù)據(jù)以根據(jù)對照動物的百分比變化表示。結(jié)果列于表2中。
表2
4周局部給藥對倉鼠皮脂腺尺寸的作用化合物劑量倉鼠耳皮脂腺尺寸(μg/動物)的變化(模截面分析)1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇0.001-3ns0.01-18ns0.1-28ns1.0-40ns＝根據(jù)對照在統(tǒng)計學(xué)上是不顯著的b.口服研究試驗?zāi)康氖窃u價口服本發(fā)明的化合物對倉鼠皮脂腺的作用。將200μl本發(fā)明的化合物溶于吐溫20/水/乙醇(50/40/100)，每天(一周5天)通過管飼法喂給雄性GoldenSyrian倉鼠。4周后處死動物，對耳進行組織學(xué)評價。一只耳用10%緩沖福爾馬林固定，進行石蠟包埋處理，制成切片，并用蘇木精和曙紅染色。通過用LeitzTASPlus系統(tǒng)對用組織學(xué)方法制備的耳的模截面進行影響像分析測量皮脂腺面積。由此項研究得到的數(shù)據(jù)如下所示。以每一劑量48個皮脂腺的平均面積表示。
表34周口服給藥對倉鼠皮脂腺尺寸的作用化合物劑量倉鼠耳皮脂腺尺寸(μg/kg)的變化%(模截面分析)1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇0.05-280.5-285.0-3450.0-35以上數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物可用作治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎的藥劑。
包含1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇的口服劑量形式可與藥物上可接受的載體材料一起制成膠囊、片劑等。
可摻加到膠囊等中的藥物上可接受的載體材料的實例如下粘合劑如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、或明膠;賦形劑如磷酸二鈣;崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸，等等;潤滑劑如硬脂酸鎂;甜味劑如蔗糖、乳糖、或糖精;調(diào)味劑如薄荷、冬清油或櫻桃油。作為包衣材料或用于修飾劑量單位的物理形式的各種不同的其它材料也可存在。例如，片劑可用紫膠、糖或兩者包衣。糖漿或酏劑可含有活性化合物，作為甜味劑的蔗糖，作為防腐劑的羥苯甲酸甲酯和羥苯甲酸丙酯，染料，和調(diào)味劑如櫻桃或橙味食用香料。
包含1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇的局部劑量形式包括軟膏和乳劑，包括具有油質(zhì)、可吸收、水溶性和乳液型基劑，如礦脂、羊毛脂、聚乙二醇等的制劑。
洗劑為液體制劑。從簡單的溶液到含有細(xì)碎物質(zhì)的含水制劑或氫化醇制劑。洗劑可含有懸浮劑或分散劑，，例如，纖維素衍生物如乙基纖維素、甲基纖維等等;明膠或樹膠，其使有效成分摻混到由水、醇、甘油等組成的媒介物中。
凝膠劑是通過使含有有效成分的溶液或懸浮液在載體媒介物中膠凝而制得的半固體制劑。媒介物可以是含水的或無水的，用膠凝劑，如羧基聚亞甲基使之膠凝，用堿，如氫氧化鈉和胺如聚乙烯可可胺中和至適當(dāng)?shù)哪z稠度。
本文中所用的玉語“局部”表示在發(fā)炎部位施用摻入適宜的藥用載體中的有效成分用于發(fā)揮局部作用。因此，局部組合物包括那些化合物直接與皮膚接觸外用的藥物形式。局部劑型包括凝膠劑、乳劑、洗劑、軟膏、粉劑、氣霧劑和將藥物涂到皮膚上的其它常規(guī)形式(通過使式Ⅰ的化合物與已知的藥用局部載體材料混合而制得)。除了用于皮膚之外，本發(fā)明的局部組合物還可用于治療適于局部用藥的粘膜的炎癥，例如，可將局部組合物涂到口內(nèi)或下結(jié)腸內(nèi)粘膜上。
實施例1(1α，3β，5Z，7E)-1-氟-3[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-9，10-開環(huán)膽甾-5，7，10，(19)，16-四烯-23-炔在-75℃下，向217mg(0.461mmol)[3s-(1Z，3α，5β]-(2-[3-氟-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-2-亞甲基環(huán)亞己基]乙基]二苯膦氧化物于6ml干四氫呋喃的溶液中滴加0.27ml(0.43mmol)1.6M正丁基鋰的己烷溶液。攪拌混合物6分鐘后，滴加120mg(0.346mmol)[1(R＊)，3αR＊，3αβ，7αα)]-3，3α-5，6，7，7α-六氫-1-(1，5-二甲基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-3-己炔)-7α-甲基-4H-茚-4-酮于5ml于四氫呋喃的溶液。在-75℃下攪拌混合物1.5小時并加入1M酒石酸鈉鉀水溶液和2M碳酸氫鉀水溶液的1∶1混合物使混合物驟冷，用乙酸乙酯萃取該混合物，有機相用鹽水洗，干燥(Na2SO4)，過濾，并蒸發(fā)至干。通過在硅膠上用乙酸乙酯-己烷(1∶15)進行柱層析純化殘余物，得到136mg(66%)玻璃狀(1α，3β，5Z，7E)-1-氟-3[[(1，1-二甲基-乙基)-二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-9，10-開環(huán)膽甾-5，6，10(19)，16-四烯-23-炔IR(CHCl3)2230，840cm-1;
1H NMR(CDCl3)δ0.08(s，6H)，0.17(s，9H)，0.72(s，3H)，0.88(s，9H)，1.13(d，J＝8Hz，3H)，1.44(s，6H)，2.51(m，1H)，282(m，1H)，4.17(brs，1H)，5.11(s，1H)，5.12(dm，J＝48Hz，1H)，5.37(s，2H)，6.10(d，J＝12Hz，1H)，6.34(d，J＝12Hz，1H)質(zhì)譜，m/e578(M+-HF)。
實施例21α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇向132mg(0.220mmol)(1α，3β，5Z，7E)-1-氟-3[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-9，10-開環(huán)膽甾-5，7，10(19)，16-四烯-23-炔于8ml干四氫呋喃的溶液中加入1.38ml(1.38mmol)1M氟化四丁銨的四氨呋喃溶液。將混合物在室溫下攪拌16小時。用水稀釋后，用乙酸乙酯萃取混合物。有機相用水、鹽水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)至干。通過在硅膠上用乙酸乙酯-己烷(1∶13)作為洗脫劑進行柱層析鈍化殘余物，得到81mg(89%)玻璃狀1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇
質(zhì)譜，m/e392(M+-HF)。
實施例3口服劑型軟明膠膠囊A和BAmg/膠囊1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇0.00001-0.010丁基化羥基甲苯(BHT)0.016丁基化羥基茴香醚(BHA)0.016MyglyolR-812或聚乙二醇 160400(適量)Bmg/膠囊1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇0.00001-0.010α-生育酚0.016MyglyolR-812或聚乙二醇 160400(適量)
權(quán)利要求
1.化合物，1a-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇。
2.權(quán)利要求1的化合物，用作治療活性化合物，特別是用于治療皮脂腺疾病，尤其是痤瘡或皮脂溢性皮炎。
3.權(quán)利要求1的化合物的制備方法，該方法包括從具有保護甲硅烷基的羥基的相應(yīng)化合物中除去甲硅烷基保護基。
4.一種藥物組合物，特別是用于治療皮脂腺疾病如痤瘡或皮脂溢性皮炎，其包括有效量的1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-膽鈣化甾醇和載體材料。
5.權(quán)利要求1的化合物的用途，其用于制備治療皮脂腺疾病，尤其是痤瘡或皮脂溢性皮炎的藥物組合物。
6.上述的化合物、組合物、用途和方法具體參見實施例。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用下式表征的1α-氟-25-羥基-16烯-23-炔-膽鈣化甾醇，它可用作治療皮脂腺疾病如痤瘡和皮脂溢性皮炎的藥劑。它可通過從具有保護甲硅烷基的羥基的相應(yīng)化合物中除去甲硅烷基保護基而制得。
文檔編號C07C401/00GK1112918SQ9510226
公開日1995年12月6日 申請日期1995年3月8日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月11日
發(fā)明者T·I·多蘭, S-J·希維, M·R·烏思寇克斯 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司