專利名稱：新型多肽以及由其制備的抗人類免疫缺陷病毒制劑的制作方法
1.本發(fā)明的領域本發(fā)明涉及一種或多種對類脂多糖類、尤其是對內(nèi)毒素具有很強親合性的新型多肽及其可藥用的鹽。該多肽可以作為抗病毒劑(例如抗HIV制劑)用于藥物組合物中。
2.本發(fā)明的背景從王蟹中已經(jīng)分離出兩族對內(nèi)毒素具有親合性的抗微生物多肽(參見，例如，shigenaga et al.，1990，J.Biol。Chem.26521350-21354；Kawano et al.，1990，J.Biol.Chem.26515365-15367； Muta et al.，1990，J. Biochem.108261-266；Japanese Laid-Open Patent Publication No.167230/1990；Japanese Laid-Open Patent Publication No.152987/1990；Japanese Laid-Open Patent Publication No.53799/1990；Published Searched Application 500194/1990； Miyata et al.，1989，J. Biochem.106663-668；Akaji et al.，1989，Chem.Pharm. Bull.372661-2664；Tokunaga and Iwanaga，1989，Taisha(Metabolism)26429-439；Shieh et al.，1989，F(xiàn)EBS Lett.252121-124；and Nakamura et al.，1988，J.Biol.Chem.26316709-16713).
其中一族，即鱟素(tachyplesin)族已經(jīng)從日本王蟹鱟中分離出，已鑒定出三種鱟素，即I、II和III。第二族，即大眼 鱟素(polyphemusin)族已經(jīng)從美洲王蟹、大眼 鱟中分離出，已鑒定出兩種大眼 鱟素，即I和II；其氨基酸順序如

圖1所示。
這兩族的多肽都是由17或18個氨基酸殘基構成的，其中包括4個共同的不變區(qū)和兩個二硫鍵(見圖1)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在低濃度時鱟素和大眼 鱟素均能抑制革蘭氏陰性和陽性細菌以及諸如白假絲酵母等真菌的生長，并與細菌類脂多糖類形成復合物(Shigenaga et al.，1990，J.Biol.Chem.26521350-21354 and Muta et al.，1990，J.Biochem.108261-266)。此外，鱟素族多肽還表現(xiàn)出對諸如流感病毒、泡疹性口炎病毒(Murakami et al.，1991，Chemotherapy，37，327-334)或人類免疫缺陷病毒(Morimoto，et al.，1991，Chemotherapy，37，206-211)等病毒的某種抑制活性。十分有趣的是具有上述特性的這種多肽可能是一種重要物質使得王蟹能夠適應其外界環(huán)境的變化，并且作為一種古老的生物由古至今保持其種屬。
另一方面，就高度進化的人類的生存而言，對于由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)具有預防或治療作用的藥物的研制極為迫切。
考慮到這些多肽與王蟹長期保持其種屬有關，本發(fā)明人和合作研究者對于組分中具有氨基酸改變或修飾的多肽已經(jīng)進行了分子結構與抗HIV活性之間關系的研究。結果我們在本發(fā)明之前就已經(jīng)發(fā)明了新的多肽，它與王蟹的這些已知多肽的一般結構完全不同。
令人驚奇的發(fā)現(xiàn)是那時發(fā)明的這些新的多肽具有極高的生物學活性，其抗HIV值要比王蟹已知的多肽高至少5倍以上。
參考了下列文獻，Nakashima et al.，1992，Antimicrob.Agents Chemother.，36，1249-1255；Masuda et al.，1992，Biochem.Biophys.Res.Commun.，189，845-850；Tamamura et al.，1993，Chem.Pharm.Bull.，41，978-980；Tamamura et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta，1163，209-216；Masuda et al.，1992，J.Pharmacobio.Dyn.，15，s-90；International Laid-Open Publication WO92/04374；JapaneseLaid-Open Patent Publication No.163298/1993。(在下文中，化合物T-22是指在所述新的多肽中代表化合物的具有最佳形式的化合物)正如T-22化合物所示，新的多肽由16至18個氨基酸組成，在研究了表現(xiàn)該多肽活性所必需的結構之后，本發(fā)明人和合作研究者得出了有關最低限度基本結構的一些創(chuàng)新的見解。
一般來講，當服用分子量相對較大的外源性肽進入人體時，人體的自身防御功能通常將其識別為一種異己物質。因此該外源性肽可能變?yōu)榭乖镔|。當用于醫(yī)療方面時以肽為基礎的生物活性物質可以是低分子量化合物，以便減小被識別為異己物質的可能性，這是很可取的。此外該物質也需要具有高效力。
已知T-22化合物是由18個氨基酸殘基組成的多肽。本研究的目的是在減少氨基酸殘基數(shù)量的同時保持與T-22化合物同等水平的抗HIV效力。結果我們成功地將殘基數(shù)量減少了4個。只要該化合物具有基本結構，即使是特定的區(qū)域發(fā)生改變，其活性也不會降低。此外，通過上述改變我們發(fā)現(xiàn)了具有這樣的基本結構的新型多肽，以致所述結構能提供多種物理化學特性，同時還能提供在治療方法中的廣泛的選擇，即親水性和親脂性(對脂類的親合性)的增加/降低、在特定的器官和/或細胞中選擇性蓄積和延長/縮短在人體內(nèi)的潴留時間，以及可能的各種不同的制劑。
3.本發(fā)明簡述本發(fā)明涉及一種或多種新型多肽，它是由根據(jù)已知的內(nèi)毒素高親和性王蟹多肽發(fā)明的具有高抗HIV活性的原新型多肽而衍生的，但兩者具有顯著的差別。原有的新型多肽由16-18個氨基酸、4個半胱氨酸或2個胱氨酸以及具有以β折回作為轉彎位置的β-反向平行片層結構組成。與原有的新型多肽一樣，本發(fā)明的多肽也具有β-反向平行片層結構，但其β折回可能位于第7位的X處。然而，在本發(fā)明的多肽中氨基酸殘基和半胱氨酸的數(shù)量分別減少了4個和2個。此外，即使是特定的區(qū)域有改變，其生物學活性也不會下降。本發(fā)明的多肽可以用作抗HIV劑和用作基因治療的DNA轉染系統(tǒng)的一種成份。正如下文中第6部分所詳述的那樣，本發(fā)明多肽的抗HIV值顯著高于由已知內(nèi)毒素高親合性王蟹多肽衍生出來的原新型多肽。
3.1定義用下面的3個字母的縮寫來表示本文中定義的肽順序中的氨基酸殘基和替代氨基酸殘基Ala(丙氨酸)；Arg(精氨酸)；Leu(亮氨酸)；Lys(賴氨酸)；Orn(鳥氨酸)；Phe(苯丙氨酸)；Pro(脯氨酸)；Trp(色氨酸)；Tyr(酪氨酸)；Val(纈氨酸)；DArg(D-精氨酸)；DLys(D-賴氨酸)；DOrn(D-鳥氨酸)；Ac-Arg(N-α-乙酰基精氨酸)；FTC-Arg(N-α-熒光素硫代氨基甲?；彼?；Laur-Arg(N-α-月桂?；彼?；Mvr-Arg(N-α-肉豆蔻酰基精氨酸)；Nicot-Arg(N-α-煙?；彼?；Oct-Arg(N-α-辛?；彼?；Parm-Arg(N-α-軟脂酰基精氨酸)；Parm-Orn(N-α-軟脂?；B氨酸)；PTC-Arg(N-α-苯基硫代氨基甲?；彼?；ε-N-Ac-DLys(ε-N-ω-氨基乙?；?D-賴氨酸)和ε-N-But-DLys(ε-N-ω-氨基丁酰基-D-賴氨酸)。
本文所用的下列術語具有所示的含義HIV＝人類免疫缺陷病毒(包括所有變異株)MOI＝多重感染SI＝選擇性指數(shù)(CC50對EC50的比值)4.圖的簡介圖1表示鱟素I、鱟素II、鱟素III、大眼 鱟素I和大眼 鱟素II的氨基酸順序。保留氨基酸用方框標出。Cys-3或-4與Cys-16或-17之間和Cys-7或-8與Cys-12或-13之間的二硫鍵用實線表示。
圖2表示合成本發(fā)明多肽的合成方案。
5.本發(fā)明的詳細描述根據(jù)以上幾個方面完成了本發(fā)明，而且本發(fā)明涉及由下式表示的多肽或其鹽A1-Trp-Cys-A2-A3-A3-X-A2-A3-A3-Cys-A3-A4SEQ CD NO.1-4)………(I)其中A1是堿性氨基酸殘基或具有至少一個或兩個選自賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸的堿性氨基酸的肽殘基；在所述的堿性氨基酸殘基或肽殘基中，所述氨基酸殘基的氨基末端的N-α氫原子可以被酰基或取代的硫代氨基甲?；〈?，形成N-α酰基取代的堿性氨基酸殘基、N-α酰基取代的肽殘基、N-α取代的硫代氨基甲?；〈膲A性氨基酸殘基或N-α取代的硫代氨基甲?；〈碾臍埢籄2是酪氨酸或苯丙氨酸殘基；A3是賴氨酸或精氨酸殘基；A4是-OH(由羧基衍生的)或-NH2(來自酸性酰胺)；X是一種選自由D-鳥氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-鳥氨酸、D-賴氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-賴氨酸、D-精氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-精氨酸、甘氨酰-鳥氨酸、鳥氨酰-甘氨酸、甘氨酰-賴氨酸、賴氨酰-甘氨酸、甘氨酰-精氨酸和精氨酰-甘氨酸代表的肽的肽殘基，其中D-賴氨酸、L-賴氨酸、D-鳥氨酸和L-鳥氨酸的ω-氨基的氫原子可以被ω-氨酰基所取代，且所述的肽殘基在第6位和第8位上通過本身的肽鍵與氨基酸殘基相連；Trp是色氨酸殘基；Cys是半胱氨酸殘基；和在第3和第11位的半胱氨酸殘基可以通過二硫鍵相連。
由式(I)表示的本發(fā)明的多肽的具體實例見表1，其編號為(1)至(25)。
按照國際上承認的三字母表示法(見上文中3.0部分)，每個符號均表示相應的氨基酸殘基。
表11 2 3 4 5 6 7 89 10 11 12 13(I)A1-Trp-Cys-A2-A3-A3- X - A2- A3-A3-Cys- A3-A4(1)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(2)Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(3)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys- Lys-Gly-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(SEQ ID NO.5)(4)Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys- Lys-Gly-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(SEQ ID NO.6)(5)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-Pro-DLys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(6)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DOro-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(7)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-pro-DArg-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(8)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys- Gly-Lys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(SEQ ID NO.7)(9)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys- Arg-G1y-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(SEQ ID NO.8)(10)Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys- Gly-Arg-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(SEQ ID NO.9)(11)Lys-Arg-Trp-Cys-Tyr-Lys-Arg-DLys-Pro-Tyr-Lys-Arg-Cys-Arg-NH2(12)Lys-Lys-Trp-Cys-Phe-Arg-Lys-DLys-Pro-Phe-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(13)Arg-Lys-Trp-Cys-Tyr-Lys-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Arg-Cys-Lys-NH2(14) Ac -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(15) Oct -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(16) Lanr -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(17) Myr -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(18) Parm -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(19) FTC -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(20) PTC -Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2(21) Nicot-Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2
具有抗HIV高活性的上述多肽由16-18個氨基殘基組成。在最佳形式的化合物(在下文中縮寫為“n-18多肽”或T-22)中，認為對于表現(xiàn)出高活性的結構因子必需有4個半胱氨酸殘基。4或5個芳香族氨基酸殘基、8個堿性氨基酸殘基和一個甘氨酸殘基存在。此外，關于下面式(A)中所示的n-18多肽的位置關系方面，第2位至第17位的氨基酸殘基的特性是固定不變的。在n-18多肽的第1位上發(fā)現(xiàn)了構效關系，即隨著氨基酸殘基數(shù)量的增加，抗HIV活性的相對值也升高。
n-18多肽表示為下式(A)A1-A2-Cys-A2-A3-A3-Cys-A2-A3-Gly-A2-Cys-A2-A3-A3-Cys-A4-A5(SEQ ID NO.10-12)……(A)其中，A1不超過兩個氨基酸，選自賴氨酸和精氨酸；A2是酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸殘基；A3是精氨酸或賴氨酸殘基；A4是至少1個而且不超過2個氨基酸，選自賴氨酸和精氨酸；A6是-OH(來自羧基)，或-NH2(來自酰胺基)；Cys是半胱氨酸殘基；和Gly是甘氨酸殘基。
在一個具體實施例中，在第3和第16位的半胱氨酸殘基和/或在第7位和第12位的半胱氨酸殘基可以通過二硫鍵(-S-S-)相連。
在n-18多肽中，具有可能的β折回結構的轉彎位置位于第9和第10位，因此第3位至第8位的肽部分與第11位至第16位的肽部分是面對面的。
如n-18多肽一樣，由于分子內(nèi)氫鍵和半胱氨酸殘基間的二硫鍵(-S-S-)的存在，本發(fā)明的多肽也具有反向平行β-片層結構。但是在本發(fā)明的多肽中，具有可能的β折回結構的轉彎位置位于第7位的X，所以第3位至第6位的肽部分與第8位至第11位的肽部分是面對面的。
在本發(fā)明中，在本發(fā)明結構式的第一位上的氨基酸殘基的數(shù)量關系與n-18多肽是相同的。
已經(jīng)證實在上述位置上，N末端氨基酸殘基的α-氨基的氫原子被酰基或取代的硫代氨基甲?；〈?，對于由所述代表式所表示的新型多肽表現(xiàn)出抗HIV高活性是很重要的。通過選擇不同特性的?；蛉〈牧虼被柞；贡景l(fā)明新型多肽具有親水性、親脂性、明顯的熒光特性等，這已經(jīng)成為可能。例如，本發(fā)明多肽中熒光素取代的硫代氨基甲酰基的熒光特性可作為高敏感的顯示染料用于各種目的。參見，例如Brand and Witholt in“Methods in Enzymology”，Vol.11，page 776-856，ed.by Hits，Academic Press，New York，New York(1967)；Brand andGohlke，1972，Annu.Rev.Biochem.41843-868；Stryer，1978，Annu.Rev.Biochem.47819-846。
此外，本發(fā)明的熒光素取代的硫代氨基甲?；嚯哪軌虮憩F(xiàn)出更高的抗HIV活性，這一點很重要也很有用。具有熒光特性的上述本發(fā)明多肽在闡明本發(fā)明多肽抗HIV活性的表現(xiàn)機理方面可以作為重要的工具。例如，可以用熒光顯微鏡法檢測用藥后受HIV感染或未感染的機體、器官、組織或細胞內(nèi)該多肽的壽命、代謝或分布。采用該多肽的體內(nèi)熒光探針可以從分子水平上獲得有關該多肽細微的構型變化與細胞內(nèi)受體分子相互作用方面的信息。采用熒光探針也有可能分離和鑒定受體分子本身。
此外，通過酰基或取代的硫代氨基甲?；?，使新型多肽具有諸如糖鏈化合物、脂化合物、核酸化合物、其它種類的肽或蛋白質等化合物的生物活性，這已經(jīng)成為可能。在本發(fā)明的代表式的第4至第6位和第8至第10位上的氨基酸殘基的特性是相同的重復，這一點在本發(fā)明新型多肽的活性表現(xiàn)方面發(fā)揮重要的作用。至于本發(fā)明新型多肽立體結構的形成，肽的氨基酸順序很重要，它很容易在相反方式的同一平面結構中形成在第3至第7位和第7至11位上所表現(xiàn)出來的肽結構部分，而且容易形成由作為轉彎點的第7位上的X所代表的兩個氨基酸組成的肽殘基。當?shù)?位和第7位上的半胱氨酸以二硫鍵相連時，由本發(fā)明新型多肽的肽主干形成的下述的三維立體結構是本發(fā)明的重要特征。也就是說，在第7位上的肽殘基X的折返結構對于形成具有β-片層結構的同一平面結構是必需的要素，其中肽殘基X由一對甘氨酸和堿性氨基酸或者一對脯氨酸和D-構型的堿性氨基酸(原則上講可用具有相同作用的脯氨酸來替代羥脯氨酸)組成。連接第3位和第11位上半胱氨酸殘基的二硫側鏈和在第5位及第9位上的堿性氨基酸殘基的堿性側鏈位于主干平面的同一側，而第4位和第8位上的芳香族氨基酸殘基的芳香族側鏈和第6位及第10位上的堿性氨基酸殘基的堿性側鏈卻位于主干平面的對側。上述的這些立體結構的形成很重要。因此，發(fā)明了具有這樣的立體結構的上述代表式所表示的新型多肽，與n-18多肽相比減少了4個氨基酸殘基。
此外，與n-18多肽一樣，本發(fā)明多肽表現(xiàn)出強堿特性。因為本發(fā)明多肽是堿性的，通過酸加成可以生成鹽。例如，本發(fā)明多肽可與無機酸或有機羧酸形成鹽。無機酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸等；有機羧酸包括醋酸、鹵代乙酸、如三氟乙酸、丙酸、馬來酸、琥珀酸、苯果酸、檸檬酸、酒石酸、水楊酸。本發(fā)明多肽還可與酸性糖、酸性多糖或有機磺酸形成鹽。酸性糖包括葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、抗壞血酸等；酸性多糖包括玻璃葡醛酸、軟骨素硫酸酯、藻酸等；有機磺酸包括甲磺酸、對-甲苯磺酸等，還包括諸如軟骨素硫酸酯這樣的磺酰糖酯。
下面是本發(fā)明新型多肽的更詳細介紹。
5.1多肽的制備本發(fā)明新型多肽可以用本技術領域內(nèi)所熟知的方法來制備，例如在“Solid-Phase Peptide Synthesis”，Stewart&Young，Pierce Chemical Company，Rockford，Illinois(1984)介紹的固相合成技術。也就是說，將第12位上N-保護的精氨酸的羧基與不溶性樹脂相連便可獲得具有上式(I)的本發(fā)明的直鏈多肽，其中不溶性樹脂含有直接相連的氨基，或者含有通過具有能與羧基相連的功能基團(例如，能將精氨酸的羧基轉變成對-羧甲基芐酯的功能基團)的隔離物相連的氨基。具有第12位精氨酸(Arg)的不溶性樹脂的氨基在N-保護基去保護之后按照固相法能夠依次地與由下式(I)表示的氨基酸順序中第11位至第1位的各自的被保護氨基酸相連接12 3 4 56 7 8 9 10 11 12 13A2-Trp-Cys-A2-A3-A3-X-A2-A3-A3-Cys-A3-A4(SEQ ID NO.1-4)………(I)其中A1、A2、A3、A4、Cys、Trp和X的定義同上述式(I)。
當A1選用N-α?；被釟埢騈-α?；臍埢?這時氨基末端氨基酸殘基的N-α位置上的氫原子被?；〈?時，所述的肽樹脂的N末端氨基通過使用縮合劑相應的酸酐或相應的酸使其酰基化形成N-?；臉渲Ｈ缓罅呀獠蝗苄詷渲桶被嵘系谋Ｗo基團，即可獲得具有上式(I)的本發(fā)明直鏈多肽。當上述式(I)中的A1選用N-α-取代的硫代氨基甲酰基氨基酸殘基或者N-α-取代的硫代氨基甲?；臍埢?這時氨基末端氨基酸的N-α位置上的氫原子被取代的硫代氨基甲?；〈?時，通過在弱堿條件下與取代的異硫氫酸酯化合物反應即可獲得本發(fā)明的N-末端N-α-取代的硫代氨基甲酰基多肽。
在本例中，第12位氨基酸殘基的羧基末端可以是游離的(A對應于-OH)或者是被轉變成酰胺(A4對應于-NH2)形式。此外，在獲得的多肽中，第3和第11位上兩個半胱氨酸可用通過其兩個巰基形成二硫鍵(-S-S-)。
例如，這些二硫鍵可以通過空氣氧化或者用Atherton，E.，etal.，1985，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1,2065的方法形成。
除非另外說明，在上述固相合成法中所用的單個氨基酸均是L-構型，用X表示的與第7位上的脯氨酸偶聯(lián)的堿性氨基酸僅限于D-構型。
任何含有氨基的不溶性樹脂均可用于本發(fā)明新型多肽的合成，只要它能夠通過本身的氨基與C-末端上N-保護的精氨酸或賴氨酸的羧基相連，或者在某些情況下與隔離物的羧基相連，并且在其后能夠被除去。這些不溶性樹脂的例子包括(但并不局限于)氨甲基樹脂(氨甲基化的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)、二苯基甲胺樹脂、甲基二苯基甲胺樹脂和氨甲基苯氧甲基樹脂及它們的衍生物。當采用二苯基甲胺樹脂、甲基二苯基甲胺樹脂、二甲氧基二苯基甲胺(DMBHA)樹脂或氨甲基苯氧甲基樹脂時，裂解后便可直接獲得酰胺，但是考慮到產(chǎn)量，氨甲基樹脂是優(yōu)選的。
作為含有能與羧基相連的功能基或含有羧基的隔離物，例如，一個實例是能將精氨酸的羧基轉變成對-羧甲基芐酯的隔離物，但是對于隔離物并沒有特別的限制。
保護的氨基酸是指其功能基可以采用本專業(yè)熟知的方法用保護基加以保護的氨基酸，或者在市場上也可以買到的各種保護的氨基酸。專業(yè)技術人員都知道在多肽合成方法中需要采用保護基來穩(wěn)定氨基酸的不穩(wěn)定側鏈，以防止側鏈在合成過程中發(fā)生化學改變。
用于氨基酸α氨基的保護基選自下列基團，它們包括(但不限于)Boc(特丁氧基羰基)或Fmoc(9-芴甲氧基羰基)。用于精氨酸(Arg)胍基的保護基選自下列基團，它們包括(但并不局限于)Tos(甲苯磺酰基)、NO2(硝基)、Mtr(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺?；?或Pmc(2，2，5，7，8-五甲基-色滿-6-磺?；?。用于半胱氨酸(Cys)巰基的保護基可以選自下列基團，它們包括(但并不局限于)Bzl(芐基)、MBzl(4-甲氧基芐基)、4-MeBzl(4-甲基芐基)、Acm(乙酰氨基甲基)、Trt(三苯甲基)、Npys(3-硝基-2-吡啶亞磺酰基)、t-Bu(特丁基)或t-Bus(特丁硫基)；其中MBzl、4-MeBzl、Trt、Acm和Npys是優(yōu)選的。用于酪氨酸(Tyr)羥基的保護基選自下述基團，它們包括(但并不局限于)Bzl、C12Bzl(2，6-二氯芐基)或t-Bu。該羥基也可以不保護。用于賴氨酸(Lys)ε-氨基的保護基選自下述基團，它們包括(但并不限于)Z(芐氧基羰基)、CIZ(2-氯-芐氧基羰基)、Boc或Npys。在第7位上含有X的D-或L-賴氨酸側鏈ε-氨基的氫原子的情況下，該氨基可以用上述的ZCIZ、Boc或Npys基團來保護。優(yōu)選的是從這些保護基中選擇一個已知適用于該合成條件的適宜保護基。
保護的氨基酸的偶聯(lián)可以按照本領域熟知的縮合方法進行，例如DCC(二環(huán)己基碳化二亞胺)法、DIPCDI(二異丙基碳化二亞胺)法[Tartar，A.et al.，1979，J.Org.Chem.445000]、活性酯法、混合或對稱酸酐法、羰基二咪唑法、DCC-HOBt(1-羥基苯并三唑)[knig W.et al.，1970，Chem.Ber.，103788，2024，2034]或二苯膦?；B氮化物法。優(yōu)選的是使用DCC法、DCC-HOBt法、DIPCDI-HOBt法或對稱酸酐法。縮合反應可以在諸如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或它們的混合溶劑等的有機溶劑中進行。采用諸如三氟乙酸/二氯甲烷、HCl/二噁烷、呱啶/二甲基甲酰胺(DMF)或NMP這些去保護劑除去α-氨基的保護基。采用E.Kaiser et al.，1970，Anal.Biochem.，34，595(水合茚滿三酮反應法)的方法來監(jiān)測合成中每一步驟的縮合反應進行程度。
按照上述方法可以獲得具有所需氨基酸順序的保護的肽樹脂。當氨甲基樹脂衍生物用作不溶性樹脂時，可以采用例如在適當?shù)娜軇┲杏冒碧幚肀Ｗo的肽樹脂的方法將保護的多肽從樹脂上分離。然后將所得的保護的肽用氟化氫處理便獲得上式表示的多肽酰胺，并且使所有的保護基游離。當將二苯基甲胺樹脂、甲基二苯基甲胺樹脂、氨甲基苯氧甲基樹脂或DMBHA樹脂[Funakoshi，S.et al.，1988，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，382]用作不溶性樹脂時，可以將保護的肽樹脂用氟化氫、TFMSA(三氟甲磺酸)[Yajima，H.et al.；“The Peptides”Vol.5，page 65(1983)，published by Academic Press，edited by E.Gross；]，TMSOT f(三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸)[Fujii，N.et al.，1987，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，274]或TMSBr(三甲基甲硅烷基溴)[Fujii，N.et al.，1987，Chem，Pharm.Bull.，35，3880]等處理，使多肽從樹脂上分離，并可以同時從多肽上除去保護基團。
在優(yōu)選的實施例中，將所得的多肽用2-巰基乙醇、DTT(二硫代-蘇糖醇)等還原，以確保半胱氨酸的巰基處于還原形式。繼而可以將巰基氧化，獲得環(huán)狀多肽。
可以采用熟知的方法進行氧化處理，通常采用如空氣或氰鐵酸鹽(例如，氰鐵酸鉀)這樣的氧化劑。
本發(fā)明多肽還可以采用另一種方法生產(chǎn)，即重組DNA技術。因此，可以用本專業(yè)熟知的技術將本發(fā)明多肽的核苷酸編碼序列進行克隆和表達。參見，例如，Maniatis et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSprmg Harbor，NY，1991.
本發(fā)明多肽可以用多肽領域中熟知的方法來分離和純化，例如，萃取法、重結晶法、各種色譜法(凝膠過濾、離子交換、分配、吸咐、反相等色譜片)、電泳法、逆流分配法等，其中反相高效液相色譜最為有效。
5.2多肽的用途由式(I)表示的本發(fā)明多肽具有與內(nèi)毒素結合的能力，抗菌活性以及使內(nèi)毒素敏感血細胞溶血的活性。此外，本發(fā)明多肽還具有抗病毒活性。在一個具體的實施例中，本發(fā)明多肽具有抗HIV活性。在下文的第6部分中將會詳述，本發(fā)明多肽所表現(xiàn)出的抗HIV活性要顯著高于已知的內(nèi)毒素高親合性多肽(例如，鱟素I、II或III，或者大眼 鱟素I或II)。
能夠將DNA有效地導入靶細胞的轉運系統(tǒng)方面最新進展已經(jīng)使遺傳病、癌癥、AIDS病等的人類基因治療成為現(xiàn)實[Morganand Anderson，Annu.Rev.Biochem.，62,191-217(1993)]。
DNA轉染系統(tǒng)包括采用多聚陽離子、磷酸鈣、脂質體融合、逆轉錄病毒、顯微注射、電穿孔和原生質體融合。然而，所有這些方法均存在關于細胞毒性、增殖性差、不方便或DNA轉運效率低等方面的一個或多個問題[Flegner et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，7413-7417(1987)]。
近來已經(jīng)報道了使用陽離子脂類-DNA復合物或環(huán)狀兩歧性肽-DNA復合物的高效DNA轉染方法[Legendre and Szoka，Jr.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90，893-897(1993)]。能與DNA形成轉染復合物的肽包括蘇聯(lián)克殺汀S、短桿菌酪素、多粘菌素B、聚賴氨酸和蜂毒素，均具有陽離子特性。其中最為有效的陽離子肽是蘇聯(lián)克殺汀S，現(xiàn)已知它是具有β-片層構型的兩歧性環(huán)狀十肽抗生素，并且能穿透和分解細胞膜。帶正電荷的和具有兩歧特性的蘇聯(lián)克殺汀S對于高效轉染均認為是很重要的。考慮到這些結構特征，本發(fā)明多肽在用于具有高效轉染能力的DNA復合物時可以作為蘇聯(lián)克殺汀S的一種替代備選物，這是因為該多肽具有β-片層構型并表現(xiàn)出強陽離子性和兩歧特性。
實際上，鱟素I是本發(fā)明多肽的一種親本分子，它能夠像蘇聯(lián)克殺汀S一樣穿透細胞膜以及與DNA結合[Matsuzaki et al.，Biochem.Biophys.Acta，1070，259-264(1991)and Yonezawa etal.，Biochemistry，31，2998-3004(1992)]。此外，T-22(一種本發(fā)明多肽(1))的溶液結構已被證實具有兩歧性反向平行β-片層結構，與鱟素I結構十分相似[Tamamura et al.，Biochem.Biophys.Acta，1l63，209-216(1993)]。
因此，本發(fā)明多肽可以用作基因治療中DNA-轉染系統(tǒng)的一種成份。
因此本發(fā)明多肽可以用于藥物組合物中所述藥物組合物含有本發(fā)明多肽或其鹽和根據(jù)該藥物組合物的服用方法和服用形式而選擇的藥用載體。藥用載體可以是諸如Hank′s或Ringer′s液、生理鹽水、鹽水葡萄糖混合液和肝素化檸檬酸鈉-檸檬酸-右旋糖溶液這樣的生理性緩沖液。該藥物組合物根據(jù)治療目的可以是口服或非腸道給藥，根據(jù)服藥方法采用適當?shù)乃幱幂d體可以將其制備成諸如粉劑、粒劑、注射或口服用溶液、片劑、栓劑、陰道栓劑、軟膏、乳劑或霧劑等制劑。
當藥物組合物作為注射劑直接為病人給藥時，本發(fā)明多肽或其鹽可作為生理鹽水中的溶液連續(xù)或間歇地靜脈點滴給藥，其用量為每日每公斤體重10至5,000mg。
6.實施例用下列實施例進一步具體說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。
在本文的實施例中，介紹了多肽(1)的合成。此外，公布了本發(fā)明多肽和已知的高內(nèi)毒素親合性多肽的抗HIV活性檢測的結果。本發(fā)明多肽的抗HIV活性要顯著高于已知的高內(nèi)毒素親合性多肽。
用于下述實施例的儀器和試劑如下HPLC儀器Shimadzu Corporation，Model LC-6AD儀器的柱Asahipak ODP-90(Asahi ChemicalIndustry Co.，Ltd.
Fmoc氨基酸和氨基樹脂由WatanabeChemical Industries，Ltd.生產(chǎn)縮合劑由日本Peptide Institute INC.andApplied Biosystems生產(chǎn)FAB-MS(FAB-質譜儀)VC CO.(USA)，Model ZAB-SE6.1.實施例1多肽(1)的合成在下文的6.1.1-6.1.7部分介紹具有下式的多肽(1)的合成。用相似的方法合成多肽(2-13，22，23)和多肽的前體肽(14-21，24，25)(見上文說明結構的表1)。 在上面的式(1)中，Arg、Trp、Cys、Tyr、Lys、DLys和Pro代表前述的氨基酸殘基，第3和第11上的Cys之間的實線代表二硫鍵。
6.1.1.將Fmoc-DMBHA-CH2CH2COOH導入氨甲基樹脂[(3-(α-Fmoc-氨基-4-甲氧芐基)-4-甲氧苯基)丙酸]將270mg(0.2mM)的氨甲基樹脂(0.74meq/g)和268.5mg(0.5mM，2.5eq)的Fmoc-DMBHA-CH2CH2COOH(MW537)裝入固相合成柱中，按照Guo L.et al.[Chem.Pharm.Bull.，36，4989(1988)]的方法采用DIPCDI-HOBt法在DMF中進行縮合反應2小時。
縮合反應完成后，采用乙酸酐進行偶聯(lián)(DMBHA樹脂)以保護的游離的氨基。
6.1.2.將第12位上的精氨酸引入DMBHA樹脂用20％的哌啶/DMF將Fmoc基從上述6.1.1.部分中制備的DMBHA樹脂上除去之后，加入2.5當量(eq)的Fmoc-Arg(Pmc)-OH(按DMBHA樹脂計算)，再按照DIPCDI-HOBt法在DMF中進行縮合反應。
按照Kaiser，E.et al.[Anal.Biochem.，34,595(1970)的水合茚三酮試驗通過測定來監(jiān)測縮合反應的進行程度。
6.1.3.第11位上半胱氨酸的導入用20％的哌啶/DMF將Fmoc基從上述6.1.2中制備的DMBHA樹脂上除去之后，加入2.5(eq)(按DMBHA樹脂計)的Fmoc-Cys(Trt)-OH，采用DIPCDI-HOBt法在DMF中進行縮合反應。與上述6.1.2相似，按照水合茚三酮試驗通過測定來監(jiān)測縮合反應的進行程度。
6.1.4.第10位至第1位的氨基酸的導入如上述，將Lys(Boc)、Arg(Pmc)、Tyr(tBu)、Pro、DLys(Boc)、Lys(Boc)、Arg(Pmc)、Tyr(tBu)、Cys(Trt)、Trp、Arg(Pmc)和Arg(Pmc)順序導入DMBHA樹脂獲得保護基-保護的肽(1)樹脂。
固相合成中的每一個氨基酸的縮合反應均按照表2的操作條件進行。表2
6.1.5.通過除去保護基、從樹脂上分離多肽(1)和部分純化來制備多肽(1)
保護基-保護的多肽(1)樹脂經(jīng)20％的哌啶/DMF處理除去Fmoc基，然后在每100mg該樹脂1M TMSOTf-苯硫基甲烷/TFA(三氟乙酸)系統(tǒng)[在間甲酚(100eq)和乙二硫醇(300eq)存在下，10ml三氟醋酸]中于25℃進行反應2小時。從反應混合液中濾去樹脂，用1ml三氟乙酸洗滌兩次。繼而向濾液和洗滌液的混合液中加入100ml冰冷卻的無水乙醚。將形成的沉淀離心，用傾析法將剩余物與上清液分離。所得剩余物用冷乙醚洗滌，并溶解于10ml的4N AcOH中，再加入830mg，(80eq)二硫代蘇糖醇。混合液在室溫下攪拌過夜。
將反應溶液離心，用Sephadex G-10(3.7×5cm)和用4N乙酸(AcOH)凝膠過濾處理上清液，收集流過Sephadex的組分作為流出液的主要部分，將其凍干獲得粉末狀物，即部分純化的非環(huán)化的多肽(1)。
6.1.6.用空氣氧化法制備多肽(1)用濃縮氨水將Sephadex凝膠過濾的半量流出組分調(diào)整至pH7.5，充氣進行空氣氧化完成環(huán)化反應?？諝庋趸瓿芍髮h(huán)化的多肽(1)吸咐到10g Diaion HP-20樹脂上，繼而用60％CH3CN(在1NAcOH中)洗脫。洗脫液在窒溫下減壓濃縮以除去CH3CN，然后凍干形成粉末。將粉末溶解于少量水中，并將溶液傾入Asahipak ODP-90柱中用高效液相色譜法(HPLC-Model LC-6AD，由Shimadzu Corp.制造)經(jīng)CH3CN進行梯度洗脫來純化，獲得產(chǎn)量為27％[按保護基-保護的多肽(1)樹脂計算]的單峰多肽(1)。
6.1.7.多肽的分析按照Liu et al.[J.Biol.Chem.，251，1936(1976)]的方法酸水解后的氨基酸成份和6.1.6.部分中純化的多肽經(jīng)亮氨酸氨基肽酶消化而得到的氨基酸成份與根據(jù)式(1)氨基酸順序計算的成份值的范圍十分符合。
此外，由FAB－MS得出的分子量數(shù)值為1996.3，而[M＋H]+的計算值為1996.1。
所得多肽的特異性旋轉[α]20D為-17.2°[C＝0.11，1N醋酸]。
6.2實施例3多肽(14)的合成[多肽(1)的氨基末端氨基酸殘基的N-α-?；痌在6.2.1-6.2.2部分中介紹下式(9)的多肽(14)的合成[式9] 在以上式(14)中，Ac-Arg、Arg、Trp、Cys、Tyr、Lys、DLys和Pro代表前述的氨基酸殘基，第3和第11位上Cys之間的實線代表二硫鍵。
6.2.1部分保護基-保護的肽(1)樹脂的酰基化取1.301g(0.25mM)的上述實施例1的步驟(4)(6.1.4部分)中獲得的保護基-保護的肽(1)樹脂置于手工固相合成反應器中。除去Fmoc基后，按照Hudson法[J.OrgChem.，53，617(1988)]將N-末端氨基?；@得1.241g N-末端α-氨基酸-?；谋Ｗo基-保護的肽(1)樹脂(干重產(chǎn)量為100％)。該方法總結于下表3。
表3 *1BOP試劑六氟磷酸-笨并三唑-1-基-氧基-三-(二甲氨基)-鹽重復以上操作1至3進行酰基化，直至水合茚三酮反應不再顯陽性。
6.2.2通過除去N-末端氨基酸-?；谋Ｗo基-保護的肽(1)樹脂的保護基和樹脂部分純化和氧化來制備肽(14)用與上文中6.1.5和6.1.6介紹的相同的方法制備多肽(14)。多肽(14)的旋光度為[α]20D為-18.3°(C＝0.08，1N醋酸)。按照Liu et al.[J.Biol.Chem.，251,1936(1976)]的方法在含有0.2％色胺的4M甲磺酸中于115℃將多肽(14)酸水解24小時。氨基酸分析結果與計算值十分符合。
6.3實施例4多肽(19)的合成[N-α-熒光素硫代氨基甲酰基多肽(1)]通過多肽(1)的氨基末端氨基酸殘基的N-α-熒光素硫代氨基甲酰化來合成下式(10)的多肽(19)。[式10] 在以上式(19)中，F(xiàn)TC-Arg、Arg、Trp、Cys、Tyr、Lys、DLys和Pro代表上述的氨基酸殘基，第3和第11位上的Cys之間的實線代表二硫鍵。
將10mg(3.9μM)6.1.6中獲得的多肽(1)的乙酸鹽溶解于1ml PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖液，pH7.5)中。將溶解于1ml DMSO中的2.8mg(7.2μM)的熒光素異硫氰酸酯(FITC)異構體-I(Wako Pure Chemical Inc.，Ltd.)在冰冷卻條件下加入上述溶液中。在室溫下攪拌6至7小時后游離氨基被熒光素硫代氨基甲酰基化。
將反應混合液裝入Sephadex G-25(細)柱[用50mM PB(磷酸鹽緩沖液)，pH4.2預平衡]，預先除鹽和分餾肽組分吸咐于帶有ENV濾芯柱的Sep-Pak C18(Millipore Co.)上，用80％的乙腈/乙酸水溶液(pH4.2)洗脫，然后凍干，獲得3.93mg的多肽(19)的乙酸鹽(產(chǎn)量，35％)。
獲得的多肽(19)的乙酸鹽的旋光值為[α]20D-5.9°(C＝0.06，H2O)。
按照Liu的方法進行的該化合物酸水解物的氨基酸分析表明精氨酸殘基的觀察值低于多肽(1)的計算值。
該化合物在三氟乙酸中的部分酸水解物(室溫2小時)進行薄層色譜分析(正丁醇∶醋酸∶水＝4∶1∶1)，檢出一主斑點，它對應于FTH-Arg(熒光素精氨酸硫代海因)的斑點。
這些分析結果表明N-未端精氨酸殘基的α-氨基選擇性地被熒光素硫代氨基甲?；?。
6.4實施例2和對照實施例1和2對人類免疫缺陷病毒(HIV)的抗病毒活性按照下列方法測定和評價了實施例1中合成的多肽(1)對HIV的抗病毒活性。
經(jīng)感染后的HIV感染MT-4細胞(2.5x 104個細胞/孔，多重感染(MOI)0.001)與各種不同濃度的檢測物質一起立即加入96孔微量滴定板中。CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)5天后用MTT法[Pauwels et al.；J.Virol.Methods，20，309-321(1998)]測定存活細胞的數(shù)量?？共《净钚杂没衔锬芤种?0％由HIV感染造成的細胞死亡時的濃度(EC50；50％有效濃度)來表示。另一方面，為了解檢測物質對MT-4細胞的細胞毒性，將未經(jīng)病毒感染的細胞與各種不同濃度的檢測化合物一起按上法培養(yǎng)。細胞毒性表示為由檢測物質造成的50％細胞毒性的濃度(CC50)。此外，CC50對EC50的粗比值(CC50/EC50)作為有效比值(SI)。
下面的式8代表用于與多肽(1)進行比較的肽抗病毒劑式8(Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Tyr-Lys-Gly-Tyr-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2......T-22)表4給出了多肽(1)、上述肽(T-22)和抗-HIV劑AZT的EC50、CC50和SI值。表4
從上表明顯可見本發(fā)明多肽(1)具有與T-22相同的細胞毒性，該多肽(1)的抗HIV活性已經(jīng)闡明，但濃度僅為T-22的三分之一時卻呈現(xiàn)出與之相同的抗病毒活性。即使已從該肽中除去4個氨基酸殘基，使其分子量減小，但本發(fā)明多肽仍表現(xiàn)出更高的活性。
與疊氮基胸苷(AZT)相比較，多肽(1)的EC50值稍高些，但其細胞毒性極低。因此本發(fā)明多肽應該可以用作更安全的抗HIV劑。
6.5實施5多肽的特性及其抗HIV活性表5列出了用實施例1、3和4的方法制備的本發(fā)明多肽的結構式和特性。表5還列出了按照實施例2的方法檢測和評價的多肽的抗HIV活性。
表5 *(SEQ ID N0.5)
除非特別說明，上表中所表示的實施例化合物中第3和第11位上Cys是以二硫鍵相連的。此外，在上表中“AZT”代表疊氮基胸苷(通常稱為Zidovudine)，T-22代表式8表示的多肽。本發(fā)明提供了對人類免疫缺陷病毒(HIV)具有抗病毒活性的新多肽，它具有親水性、親脂性及更高的活性，并且可用于闡明抗HIV活性的表現(xiàn)機理。
權利要求
1.由下式表示的多肽及其鹽12 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13A1-Trp-Cys-A2-A3-A3-X-A2-A3-A3-Cys-A3-A4(SEQ ID NO.1-4)其中A1是堿性氨基酸殘基或具有至少一個或兩個選自賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸的堿性氨基酸的肽殘基；在所述的堿性氨基酸殘基或肽殘基中，所述氨基酸殘基的氨基末端的N-α氫原子可以被酰基或取代的硫代氨基甲?；〈纬蒒-α?；〈膲A性氨基酸殘基、N-α酰基取代的肽殘基、N-α取代的硫代氨基甲?；〈膲A性氨基酸殘基或N-α取代的硫代氨基甲?；〈碾臍埢?；A2是酪氨酸或苯丙氨酸殘基；A3是賴氨酸或精氨酸殘基；A4是-OH(由羧基衍生的)或-NH2(來自酸性酰胺)；X是一種選自由D-鳥氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-鳥氨酸、D-賴氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-賴氨酸、D-精氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-精氨酸、甘氨酰-鳥氨酸、鳥氨酰-甘氨酸、甘氨酰-賴氨酸、賴氨酰-甘氨酸、甘氨酰-精氨酸和精氨酰-甘氨酸代表的肽的肽殘基，其中D-賴氨酸、L-賴氨酸、D-鳥氨酸和L-鳥氨酸的ω-氨基的氫原子可以被ω-氨?；〈?，且所述的肽殘基在第6位和第8位上通過本身的肽鍵與氨基酸殘基相連；Trp是色氨酸殘基；和Cys是半胱氨酸殘基。
2.權利要求1的多肽及其鹽，其中A1是至少一個堿性氨基酸，它選自賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。
3.權利要求1的多肽及其鹽類，其中A1是兩個堿性氨基酸的肽殘基，其中所述的氨基酸選自賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。
4.權利要求1的多肽及其鹽，其中A1是至少一個或兩個被?；蛉〈牧虼被柞；鵑-α取代的堿性氨基酸殘基，其中該氨基酸氨基末端的N-α氫原子被?；蛉〈牧虼奔谆；〈?。
5.權利要求1的多肽及其鹽，其中第3和第11位上的半胱氨酸殘基是通過二硫鍵相連。
6.A1是堿性氨基酸殘基或具有至少一個或兩個選自賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸的堿性氨基酸的肽殘基；在所述的堿性氨基酸殘基或肽殘基中，所述氨基酸殘基的氨基末端的N-α氫原子可以被?；蛉〈牧虼被柞；〈?，形成N-α酰基取代的堿性氨基酸殘基、N-α酰基取代的肽殘基、N-α取代的硫代氨基甲?；〈膲A性氨基酸殘基或N-α取代的硫代氨基甲酰基取代的肽殘基；A2是酪氨酸或苯丙氨酸殘基；A3是賴氨酸或精氨酸殘基；A4是-OH(由羥基衍生的)或-NH2(來自酸性酰胺)；X是一種選自由D-鳥氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-鳥氨酸、D-賴氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-賴氨酸、D-精氨酰-脯氨酸、脯氨酰-D-精氨酸、甘氨酰-鳥氨酸、鳥氨酰-甘氨酸、甘氨酰-賴氨酸、賴氨酰-甘氨酸、甘氨酰-精氨酸和精氨酰-甘氨酸代表的肽的肽殘基，其中D-賴氨酸、L-賴氨酸、D-鳥氨酸和L-鳥氨酸的ω-氨基的氫原子可以被ω-氨?；〈宜龅碾臍埢诘?位和第8位上通過本身的肽鍵與氨基酸殘基相連；Trp是色氨酸殘基；Cys是半胱氨酸殘基；和第3和第11位上的半胱氨酸殘基通過二硫鍵相連。
7.一種用于抑制病人體內(nèi)HIV活性的藥物組合物，其中含有有效量的權利要求1的多肽或其鹽和藥用載體。
8.一種用于抑制病人體內(nèi)HIV活性的藥物組合物，其中含有有效量的權利要求6的多肽或其鹽和藥用載體。
全文摘要
由下式表示的多肽。其中A上述多肽可用于藥物組合物中作為抗微生物或抗病毒劑，尤其可作為抗HIV劑和作為基團治療中DNA傳染系統(tǒng)的一種成分。
文檔編號C07K7/08GK1116427SQ94190947
公開日1996年2月7日 申請日期1994年10月12日 優(yōu)先權日1993年10月14日
發(fā)明者松本章義, 脅道典 申請人:生化學工業(yè)株式會社