專利名稱：抗腫瘤新茯苓多糖水溶性衍生物的制作方法
茯苓中含有茯苓多糖，它的結(jié)構(gòu)是每50個β(1→3)結(jié)合的葡萄糖單位中有一個β(1→6)結(jié)合的葡萄糖基支鏈和1～2個β(1→6)結(jié)合的葡萄糖基間隔?？鼓[瘤實驗表明茯苓多糖無抗腫瘤活性，將茯苓多糖中β(1→6)結(jié)合的葡萄糖單位用Smith降解方法去掉，即得到有抗腫瘤活性的新茯苓多糖。新茯苓多糖不溶于水，無法制成注射液，口服無效，影響了進(jìn)一步的藥理研究及臨床應(yīng)用。曾有專利報道將新茯苓多糖制成羧甲基、羥乙基和脲素等水溶性衍生物，但已研究了二十余年，沒有進(jìn)入臨床應(yīng)用。本專利將新茯苓多糖中葡萄糖單位的-CH2OH氧化為COOH，再與堿成鹽，即制得能溶于水的具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能的氧化新茯苓多糖。以二甲基甲酰胺——三乙胺——氯磺酸為磺化劑將新茯苓多糖中葡萄糖單位的羥基磺化，再與堿成鹽，即制得能溶于水的部分磺?；萝蜍叨嗵恰Ｒ远谆鶃嗧俊拎ぁ宜狒麨橐阴；瘎⑿萝蜍叨嗵且阴；粗频媚苋苡谒牟糠忠阴；萝蜍叨嗵?。部分磺?；筒糠忠阴；萝蜍叨嗵且簿哂锌鼓[瘤、增強(qiáng)免疫功能作用。
日本有文獻(xiàn)報道Curdlan(也是β(1→3)結(jié)合的葡聚糖)的磺化和乙?；镉锌鼓[瘤活性，但新茯苓多糖與Curdlan是不同的多糖，新茯苓多糖分子量為3萬左右，而Curdlan分子量為9萬左右。
將茯苓多糖用磷酸溶解，磷酸濃度應(yīng)控制在20～70％，磷酸濃度過高，則多糖溶在其中粘度大，無法攪拌，過低不利于氧化反應(yīng)進(jìn)行。
茯苓多糖在二甲基甲酰胺中能均勻分散，利于磺?；鶆蜻M(jìn)行。
茯苓多糖易溶于DMSO，所以以DMSO為溶劑進(jìn)行乙酰化。
實施例1取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加入NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將新茯苓多糖溶于30％磷酸中，加入亞硝酸鈉10g，室溫攪拌4小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心去沉淀，將上清液離心，透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到氧化新茯苓多糖(12g)。用這種方法得到的氧化新茯苓多糖中葡萄糖醛酸含量為55％，具有抗腫瘤活性和增強(qiáng)免疫功能的作用。
實施例2取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將新茯苓多糖溶于60％磷酸中，加入亞硝酸鈉15g，室溫攪拌6小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心去沉淀，將上清液透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到氧化新茯苓多糖(13g)。用這種方法得到的氧化新茯苓多糖中葡萄糖醛酸的含量為90％，具有抗腫瘤活性和增強(qiáng)免疫功能的作用。
實施例3取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將。新茯苓多糖溶于二甲基甲酰胺中，加入10ml三乙胺，冰浴狀態(tài)下滴加氯磺酸8ml，攪拌2小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心得上清液，透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到磺酰化新茯苓多糖(10g)。用這種方法得到的磺?；萝蜍叨嗵堑幕酋；葹?.6，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能和抗愛滋病病毒作用。
實施例4取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將新茯苓多糖溶于二甲基甲酰胺中，加入20ml三乙胺，冰浴狀態(tài)下滴加氯磺酸20ml，攪拌2小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心得上清液，透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到磺?；萝蜍叨嗵?11g)。用這種方法得到的磺?；萝蜍叨嗵堑幕酋；葹?.1，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能和抗愛滋病病毒作用。
實施例5取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將新茯苓多糖溶于二甲基亞砜中，加入10ml吡啶和50ml乙酸酐，100℃回流3小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心得上清液，透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到乙?；萝蜍叨嗵?9g)。用這種方法得到的乙?；萝蜍叨嗵且阴；葹?.1，具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。
實施例6取茯苓粉20g，用1M NaOH室溫攪拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反復(fù)離心、水洗和透析，將NaIO46g加入茯苓多糖的混懸液中，調(diào)PH至5，室溫避光攪拌3天后，加甘油5ml，攪拌4小時，透析，透析內(nèi)液調(diào)PH至7左右，加NaBH42g，室溫攪拌4小時，再加硫酸至PH為2，100℃攪拌水解2小時，離心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。將新茯苓多糖溶于二甲基亞砜中，加入30ml吡啶和70ml乙酸酐，100℃回流3小時，用NaOH調(diào)PH至7左右，離心得上清液，透析，將透析內(nèi)液干燥，即得到乙?；萝蜍叨嗵?12g)。用這種方法得到的乙?；萝蜍叨嗵且阴；葹?.5，具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。
權(quán)利要求
1.用堿提取酸沉淀法從茯苓粉中提取茯苓多糖，再以茯苓多糖為原料利用Smith降解方法氧化去掉茯苓多糖中β(1→6)結(jié)合的葡萄糖單位，即制得了β(1→3)結(jié)合的葡聚糖(新茯苓多糖)。以磷酸—亞硝酸鈉為氧化劑，將新茯苓多糖中葡萄糖單位的-CH2OH氧化為COOH，再與堿成鹽，即制得能溶于水的具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能的氧化新茯苓多糖。以二甲基甲酰胺——三乙胺——氯磺酸為磺化劑將新茯苓多糖中葡萄糖單位的羥基磺化，再與堿成鹽，即制得能溶于水的部分磺酰化新茯苓多糖。以二甲基亞砜——吡啶——乙酸酐為乙酰化劑將新茯苓多糖乙?；?，即制得能溶于水的部分乙?；萝蜍叨嗵?。部分磺?；筒糠忠阴；萝蜍叨嗵且簿哂锌鼓[瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。它們的結(jié)構(gòu)如下 氧化新茯苓多糖n＝40～1000的整數(shù)，R1＝CH2OH或COOH，R2＝R3＝H葡萄糖醛酸含量為10％～90％磺酰化新茯苓多糖n＝40～400的整數(shù)，R1＝CH2OH或CH2OSO3H，R2＝H或SO3H，R3＝H或SO3H磺?；葹?.2～2.5(新茯苓多糖中所有羥基被磺酰化則磺?；葹?)乙?；萝蜍叨嗵莕＝40～400的整數(shù)，R1＝CH2OH或CH2OAcR2＝H或Ac，R3＝H或Ac乙?；葹?.2～1.5(新茯苓多糖中所有羥基被乙?；瘎t乙酰化度為3)
2.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于以20～70％的磷酸為溶劑溶解茯苓多糖，以亞硝酸鈉為氧化劑，室溫攪拌制備氧化新茯苓多糖。
3.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于將新茯苓多糖中10～90％的葡萄糖單位氧化為葡萄糖醛酸單位后所得的產(chǎn)物均具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用，并且可溶于水。
4.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于以二甲基甲酰胺為溶劑，以三乙胺為催化劑，在低溫條件下，以氯磺酸為磺化劑將新茯苓多糖磺化。
5.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于最終產(chǎn)物磺?；萝蜍叨嗟幕酋；葹?.2～2.5，具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。
6.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于以二甲基亞砜為溶劑，以吡啶為催化劑，在100℃回流條件下，以乙酸酐為乙?；瘎⑿萝蜍叨嗵且阴；?。
7.根據(jù)權(quán)力要求1所述的工藝，其特征在于部分乙?；萝蜍叨嗵堑囊阴；葹?.2～1.5，并且所得產(chǎn)物均能溶于水、具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類抗腫瘤葡聚糖水溶性衍生物的制備方法。用Smith降解法去掉茯苓多糖中葡萄糖基支鏈后得到的新茯苓多糖具有抗腫瘤活性，新茯苓多糖為純粹的β(1→3)結(jié)合的葡聚糖，不溶于水，無法制成注射液，口服無效。本發(fā)明采用氧化、磺?；鸵阴；椒ǚ謩e將新茯苓多糖衍生為水溶性的氧化新茯苓多糖、磺?；萝蜍叨嗵呛鸵阴；萝蜍叨嗵?。這些新的水溶性新茯苓多糖衍生物經(jīng)動物實驗證明具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能作用。
文檔編號C07H1/00GK1124249SQ94112670
公開日1996年6月12日 申請日期1994年12月9日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月9日
發(fā)明者趙吉福, 姚新生, 陳英杰, 徐綏緒 申請人:沈陽藥科大學(xué)