專利名稱：塔三烷的膦酰氧甲基醚衍生物的制作方法
本申請是我們1993年8月17日遞交的共同未決申請08/108，015的部分繼續(xù)申請，而后者是1992年12月24日遞交，現(xiàn)已放棄的美國專利申請U.S.S.N07/996，455的部分繼續(xù)申請。U.S.S.N08/108，015在這里全部加到本文中以作參考。
本發(fā)明涉及抗腫瘤化合物。更具體地說，本發(fā)明提供了新的塔三烷衍生物、其藥物組合物以及它們作為抗腫瘤劑的應(yīng)用。
Taxol
(紫杉酚)是一種從太平洋紫杉樹(Taxusbrevifolia)的樹皮中提取的天然產(chǎn)物。在體內(nèi)動物模型中它已顯示出良好的抗腫瘤活性，最近的研究已闡明了其獨(dú)特的作用模式，它包括微管蛋白的異常聚合和有絲分裂的破壞。最近，美國和法國正在對該產(chǎn)物的抗卵巢癌、乳腺癌和其它癌癥的作用進(jìn)行臨床試驗(yàn)，并且初步結(jié)果已證實(shí)它是最有希望的化學(xué)治療劑。Rowinsky和Donehower對紫杉酚臨床研究的結(jié)果進(jìn)行了綜述(見“The Clinical Pharmacology and Use of Anumicrotubule Agents in Cancer Chemotherapeutics”，Phermac，Ther.，52∶35-84，1991。
最近已發(fā)現(xiàn)稱作Taxotere
的紫杉酚的半合成類似物在動物模型中也具有良好的抗腫瘤活性。Taxotere
也已在歐洲和美國進(jìn)行臨床試驗(yàn)。紫杉酚和Taxotere
的結(jié)構(gòu)顯示如下，其中給出了紫杉酚分子的常規(guī)編號系統(tǒng)
TaxolR＝PH;R′＝乙?；?br> TaxotereR＝叔丁氧基;R′＝氫
紫杉酚的一個缺點(diǎn)是其水溶性極低，因此需要將它配制在非水溶性藥物載體中。一種常用的載體是Cremophor EL，該載體本身對人有不良副作用。為此，大量的研究小組已制備出紫杉酚的水溶性衍生物，這些衍生公開在如下文獻(xiàn)中
(a)Haugwitz等人，美國專利4，942，184;
(b)Kingston等人，美國專利5，059，699;
(c)Stella等人，美國專利4，960，790;
(d)1993年9月8日公開的歐洲專利申請0，558，959A1，
(e)Vyas等人，Bioorganic & Medicnal Chemcstry Letter，1993，3∶1357-1360;
(f)Nicolaou等人，Nature，1993，364464-466。
本發(fā)明的化合物是塔三烷的膦酰氧甲基醚衍生物及其可作藥物的鹽。該鹽的水溶性有助于制備藥物配方。
本發(fā)明涉及式(A)的塔三烷衍生物或其可作藥物的鹽
其中T為在C13碳原子上帶有取代3-氨基-2-羥基丙酰氧基的塔三烷;n為1、2或3;m為0或1-6的整數(shù)。
另一方面，本發(fā)明提供了具有式(B)的塔三烷衍生物
(B)
其中T′為其中非反應(yīng)性羥基被封阻的T，m和n的定義同式(A)。
本發(fā)明也提供了具有式(C)的中間產(chǎn)物
其中T′、m和n的定義同式(A)，且Ry為膦?；Ｗo(hù)基。
本發(fā)明也提供式(D)的化合物
其中m和n的定義同上;txn為塔三烷殘基;或其C13金屬醇鹽。
本發(fā)明還提供了一種在哺乳動物宿主中抑制腫瘤的方法，它包括給該哺乳動物服用抗腫瘤有效量的式(A)化合物。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它包括抗腫瘤有效量的式(A)化合物和可作藥物的載體。
除非特別說明，以下定義適用于整個申請文本。
“烷基”指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和碳鏈;其例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、異戊基和正己基?！版溝┗敝妇哂兄辽僖粋€碳-碳雙鍵且具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈碳鏈;其例子包括乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、戊烯基和己烯基?！叭不敝妇哂兄辽僖粋€碳-碳三鍵且具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈碳鏈;其例子包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和己炔基。
“芳基”指具有6-10個碳原子的芳香烴;其例子包括苯基和萘基?！叭〈蓟敝副贿x自C1-6烷酰氧基、羥基、鹵素、C1-6烷基、三氟甲基、C1-6烷氧基、芳基、C2-6鏈烯基、C1-6烷酰基、硝基、氨基和酰氨基的至少一個基團(tuán)取代的芳基?！胞u素”指氟、氯、溴和碘。
“膦?；敝富鶊F(tuán)-P(O)(OH)2，“膦酰氧甲氧基”或“膦酰氧甲基醚”一般指基團(tuán)-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2?！?甲硫基)硫代羰基”指基團(tuán)-C(S)SCH3?！凹琢蚧谆?也縮寫為MTM)一般指基團(tuán)-CH2SCH3。
“塔三烷部分”(也縮寫為txn)代表含有如下所示結(jié)構(gòu)式及絕對構(gòu)型的20個碳原子塔三烷核心骨架的部分
上面所示的編號系統(tǒng)是常規(guī)塔三烷命名中所使用的系統(tǒng)，在整個申請文本中均使用這一系統(tǒng)。例如，符號C1指標(biāo)記為“1”的碳原子;C5-C20氧環(huán)雜丁烷指通過標(biāo)記為4、5和20的碳原子與氧原子形成的氧雜環(huán)丁烷環(huán);C9氧指與標(biāo)記為“9”的碳原子相連的氧原子;所述氧原子可以是氧代基團(tuán)、α-或β-羥基，或α-或β-酰氧基。
“取代的3-氨基-2-羥基丙酰氧基”表示下式所示的殘基
(X為非氫基團(tuán)，X′為氫原子或非氫基團(tuán))。該殘基的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)與紫杉酚的側(cè)鏈相同。該基團(tuán)在本申請中有時被稱作“C13側(cè)鏈”。
“塔三烷衍生物”(縮寫為T)指帶有C13側(cè)鏈的塔三烷部分的化合物。
“雜芳基”指含有至少一個、至多四個選自氧、硫和氮的非碳原子的五元或六元芳香環(huán)。雜芳基的例子包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、四嗪基等。
“膦酰基保護(hù)基”指用以封阻或保護(hù)膦酰官能基團(tuán)的基團(tuán);優(yōu)選的這類保護(hù)基是能夠利用不顯著影響分子其余部分的方法除去的基團(tuán)。合適的膦酰基保護(hù)基是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的，其例子包括芐基和烯丙基。
“羥基保護(hù)基”包括，但不限于成醚類，如甲基、叔丁基、芐基、對-甲氧基芐基、對-硝基芐基、烯丙基、三苯甲基、甲氧甲基、甲氧乙基甲基、乙氧乙基、四氫吡喃基、四氫硫代吡喃基和三烷基甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基;成酯類，如苯甲?；⒁阴；⒈揭阴；?、甲?；?、二-和三鹵乙酰基(如氯代乙?；?、二氯乙?；?、三氯乙?；?、三氟乙酰基);成碳酸酯類，如甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、烯丙基、芐基和對-硝基苯基。
羥基和膦?；Ｗo(hù)基的其它例子可從例如下列普通參考著作中找到Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2d，Ed.，1991，John Wiley & Sons，以及McOmie，Protctcie Groups in Organic Chemistry，1975，Plenum Press。從這類參考書中也可找到加入和除去保護(hù)基的方法。
“可作藥用的鹽”指酸性膦?；鶊F(tuán)的金屬鹽或胺鹽，其中陽離子對活化化合物的毒性或生物活性無顯著作用。合適的金屬鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽、鎂鹽、鋅鹽和鋁鹽。優(yōu)選的金屬鹽是鈉鹽和鉀鹽。合適胺鹽的例子有氨、三甲醇氨基甲(TRIS)、三乙胺、普魯卡因、苯乍生、二芐基胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、賴氨酸、精氨酸、乙醇胺等。優(yōu)選的胺鹽是賴氨酸鹽、精氨酸鹽和N-甲基葡糖胺鹽。
在本說明書及權(quán)利要求書中，術(shù)語-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2總包括游離酸及其可作藥物的鹽，除非明確提到指游離酸。
一方面，本發(fā)明提供了式(A)的塔三烷衍生物或其可作藥用的鹽
其中T為在C13碳原子上帶有取代的3-氨基-2-羥基丙酰氧基的塔三烷基團(tuán);n為1、2或3;m為0或1-6的整數(shù)。
在一實(shí)施方案中，塔三烷殘基至少含有以下官能基C1-羥基、C2-苯甲酰氧基、C4-乙酰氧基、C5-C20氧雜環(huán)丁烷、C9-氧和C11-C12雙鍵。
在一優(yōu)選實(shí)施方案中，塔三烷殘基得自下式殘基
其中R2e′為氫原子，且R2e為氫原子、羥基、OC(O)Rx或-OC(O)ORx;或R2e為氫原子，且R2e′為氟原子;R3e為氫原子、羥基、OC(O)Rx、C1-6烷氧基或-OC(O)ORx;R6e和R7e之一為氫原子，且另一個為羥基或-OC(O)Rx;或R6e和R7e共同形成氧代基團(tuán);Rx的定義同下。
在另一實(shí)施方案中，C13側(cè)鏈得自下式殘基
其中R1e為氫原子或-C(O)Rx、-C(O)ORx;R4和R5獨(dú)立地為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6鏈炔基或-Z-R6;Z為一直接鍵、C1-6烷基或C2-6鏈烯基;R6為芳基、取代芳基、C3-6環(huán)烷基或雜芳基;Rx為被1-6個相同或不同的鹵原子非限制性地取代的C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C2-6鏈烯基或下式殘基
其中D為一鍵或C1-6烷基;Ra、Rb和Rc獨(dú)立地為氫原子、氨基、C1-6烷氨基、二-C1-6烷氨基、鹵原子、C1-6烷基或C1-6烷氧基;P為0或1。
在一優(yōu)選實(shí)施方案中，R4為C1-6烷基且P為1，或R4為-Z-R6且P為0。更優(yōu)選的是R4(O)p為叔丁氧基、苯基、異丙氧基、正丙氧基或正丁氧基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R5為C2-6鏈烯基或-Z-R6，且Z和R6的定義同前。更優(yōu)選的是，R5為苯基、2-呋喃基、2-噻吩基、異丁烯基、2-丙烯基或C3-6環(huán)烷基。
在另一實(shí)施方案中，式(A)化合物可更具體地由下式或其可作藥物的鹽表示
其中R1為羥基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;R2′為氫原子，且R2為氫原子、羥基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2或-OC(O)ORx;或R2′為氟原子，且R2為氫原子;R3為氫原子、羥基、乙酰氧基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2或-OC(O)ORx;R6和R7之一為氫原子，且另一個為羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;或R6和R7共同形成氧代基;條件是R1、R2、R3、R6或R7中至少一個為-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;R4、R5、Rx、m和P的定義同前。
式(Ⅰ)化合物中，Rx的例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、氯代甲基、2，2，2-三氯乙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、乙烯基、2-丙烯基、苯基、芐基、溴代苯基、4-氨基苯基、4-甲氨基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基等。R4和R5的例子包括2-丙烯基、異丁烯基、3-呋喃基、3-噻吩基、苯基、萘基、4-羥基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-三氟甲基苯基、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、乙烯基、2-丙烯基、2-丙炔基、芐基、苯乙基、苯基乙烯基、3，4-二甲氧基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基、2-(2-呋喃基)乙烯基、2-甲基丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、環(huán)己基乙基等。
在一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了其中R5為C2-6鏈烯基或-Z-R6且Z和R6的定義同前的式(Ⅰ)化合物。更優(yōu)選的是，R5為苯基、3-呋喃基、3-噻吩基、2-丙烯基、異丁烯基、2-呋喃基、2-噻吩基或C3-6環(huán)烷基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，式(Ⅰ)化合物中的R4為C1-6烷基，在此情況下P為1;或R4為-Z-R6且Z和R6的定義同前，在此情況下P為0。更優(yōu)選的是R4(O)p-為叔丁氧基、苯基、異丙氧基、正丙氧基、正丁氧基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了其中R1為-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2的式(Ⅰ)化合物。在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2為羥基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2或-OC(O)Rx，且Rx優(yōu)選為C1-6烷基。在另一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3為羥基或乙酰氧基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了其中R2為-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;R1為羥基或-OC(O)ORx;R3為氫原子、羥基、乙酰氧基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2或-OC(O)ORx且Rx的定義同前的式(Ⅰ)化合物。在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1為羥基-OC(O)ORx，且Rx優(yōu)選為C1-6烷基;R3為羥基或乙酰氧基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了其中R3為-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;R1為羥基或-OC(O)ORx;R2′為氫原子，且R2為氫原子、羥基或-OC(O)ORx;或R2′為氟且R2為氫原子;且Rx的定義同前的式(Ⅰ)化合物。在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1為羥基或-OC(O)ORx，且Rx優(yōu)選為C1-6烷基。在另一更優(yōu)選實(shí)施方案中R2為羥基。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)膦酰氧甲氧基存在于塔三烷殘基的C7上時m為0或1。
優(yōu)選的式(A)化合物的可作藥物的鹽是堿金屬鹽，包括鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽;胺鹽，包括三乙胺鹽、三乙醇胺鹽、乙醇胺鹽、精氨酸鹽、賴氨酸鹽和N-甲基葡糖胺鹽。更優(yōu)選的鹽是精氨酸鹽、賴氨酸鹽和N-甲基葡糖胺鹽。
式(A)塔三烷衍生物的最優(yōu)選實(shí)施方案包括如下化合物(1)7-O-膦酰氧甲基紫杉酚;(2)2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚;(3)2′-O-膦酰氧甲基紫杉酚;(4)2′，7-雙-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚;(5)3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚;(6)3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚;(7)10-脫乙酰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚;(8)2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚;以及它們各自的可作藥物的鹽，尤其是鈉鹽、鉀鹽、精氨酸鹽、賴氨酸鹽、N-甲基葡糖胺鹽、乙醇胺鹽、三乙胺鹽和三乙醇胺鹽。
由塔三烷衍生物起始物T-[OH]n(其中T和n的定義同前)可制備出式(A)化合物。T-[OH]n的身分無特殊限制，只要它們在塔三烷殘基上或在C13側(cè)鏈上存在至少一個反應(yīng)性羥基。以便形成膦酰氧甲基醚連接鍵。應(yīng)當(dāng)理解的是，反應(yīng)性羥基可直接連接于C13丙酰氧主鏈上(如紫杉酚的2′-羥基)或連接于塔三烷核心骨架上(如紫杉酚的7-羥基);或者它存在于C13側(cè)鏈取代基或塔三烷核心上的取代基上。反應(yīng)流程Ⅰ所示的反應(yīng)秩序可用于制備式(A)化合物
反應(yīng)流程Ⅰ
反應(yīng)流程Ⅰ中T′為其中非反應(yīng)性羥基已被保護(hù)的塔三烷衍生物;Ry為膦?；Ｗo(hù)基;n和m的定義同前。這樣，被適當(dāng)保護(hù)的、帶有一個或多個反應(yīng)性羥基的T′首先被轉(zhuǎn)化為式(B)的相應(yīng)甲硫基甲基醚。以紫杉酚舉例，T′可以是紫杉酚本身(以影響2′，7-雙甲硫基甲基化)、7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚或2′-O-乙氧羰基紫杉酚。用二甲基亞砜/乙酸酐或用二甲硫和一種有機(jī)過氧化物處理T′-[OH]n可制備出其中m為0的式(B)化合物。這些反應(yīng)將在后繼部分更詳細(xì)地討論。帶有一個間隔亞甲氧基單元的MTM醚(即m＝1的式(B)化合物)可通過多種可能的途徑制得。一種途徑是將m＝0的式(B)化合物與碘代琥珀酰亞氨(NIS)和甲硫基甲醇反應(yīng)，致使該鏈延長一個亞甲氧基單元
甲硫基甲醇化合物及其制備方法在Syn.Comm.，1986，16(13)1607-1610中已有報道。
在另一替代方法中，是用正丁基鋰、二異丙基氨化鋰或六甲基二硅疊氮化鋰等堿處理式(Aa)化合物，得到T-醇鹽(Ad)，然后將Ad與氯甲基甲硫基甲基醚反應(yīng)，得到其中m＝1的式(B)化合物。
(Ad)(Ae)
化合物(Ae)是通過甲硫基甲醇鹽(由甲硫基甲醇與正丁基鋰、二異丙基氨化鋰或六甲基二硅疊氮化鋰反應(yīng)得到)與氯碘甲烷反應(yīng)制得。化合物(Ae)也可通過用化學(xué)計算量或更少量(如約0.8當(dāng)量)碘化鈉處理1，1′-二氯二甲基醚(ClCH2O CH2Cl)，然后再用硫代甲醇鈉處理而制得。1，1′-二氯二甲基醚在Ind.J.Chem.，1989，28B，pp.454-456中已有報道。
在另一方法中，是將式(Aa)化合物與雙(MTM)醚、CH3SCH2OCH2SCH3和NIS反應(yīng)，得到其中m＝1的式(B)化合物。
雙(MTM)醚是通過用碘化鈉及硫代甲醇鈉處理1，1′-二氯二甲基醚制得。
可將上述使用甲硫基甲醇和NIS的方法應(yīng)用于具有MTM基團(tuán)的任何試劑，使其鏈一次延長一個亞甲氧單元。例如，可將其中m＝1的式(B)化合物與甲硫基甲醇和NIS反應(yīng)，得到其中m＝2的式(B)化合物。重復(fù)該方法可得到其中m為3、4、5或6的式(B)化合物。
在反應(yīng)流程Ⅰ所示的第二步驟中，甲硫基甲基醚被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的被保護(hù)的膦酰氧甲基醚。它是通過用NIS和被保護(hù)的磷酸酯HOP(O)(ORy)2處理MTM醚而完成的。在第三步驟中，膦胺基保護(hù)基和所有羥基保護(hù)基均被除去，得到式(A)化合物。例如，合適的膦?；Ｗo(hù)基芐基可通過催化氫解除去，羥基保護(hù)基如三烷基甲硅烷基可用氟化物離子除去，三氯乙氧羰基可用鋅除去。除去保護(hù)基的方法可從下列教科書中查到Green和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，1991;和Mc Omie，Proteitive in Organic Chemistry，Plenum Press 11973。上述兩個步驟將在說明書的后繼部分詳細(xì)討論。
反應(yīng)流程Ⅱ是對反應(yīng)流程Ⅰ所示反應(yīng)次序的改動。
反應(yīng)流程Ⅱ
反應(yīng)流程Ⅱ中，式(Aa)化合物與式(Ca)化合物和NIS反應(yīng)，得到式(C)化合物，然后經(jīng)脫保護(hù)得到式(A)化合物。其中m為0的式(Ca)化合物可通過首先用六甲基二硅疊氮化鈉、鋰或鉀等堿處理甲硫基甲醇，然后將所得到的甲硫基甲醇與被保護(hù)的氯代磷酸酯(如氯代磷酸二芐基酯)反應(yīng)而制得。其中m為1的式(Ca)化合物可通過用雙保護(hù)的磷酸酯鹽(如磷酸二芐基酯的鈉鹽、鉀鹽、四(正丁基)銨鹽)處理CH3SCH2OCH2Cl制得;或者通過首先用碘化鈉將CH3SCH2OCH2Cl轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的碘代化合物，然后與磷酸酯鹽反應(yīng)制得?；蛘?，其中m為1的式(Ca)化合物可通過用碘化鈉和硫代甲醇鈉處理ClCH2OCH2Cl;然后用NIS和雙保護(hù)的磷酸酯(如磷酸二芐基酯)處理CH3SCH2OCH2SCH3而制得。任何帶有MTM基團(tuán)的前述試劑可通過與甲硫基甲醇和NIS反應(yīng)而一次延長一個亞甲氧單元。
在另一個制備式(A)化合物的方法中，是將T-醇鹽(Ad)與碘代磷酸酯反應(yīng)，如反應(yīng)流程Ⅲ所示
反應(yīng)流程Ⅲ
反應(yīng)流程Ⅲ中，碘代磷酸酯化合物是通過將ClCH2(OCH2)mCl與雙保護(hù)的磷酸酯鹽反應(yīng)，然后將所產(chǎn)生的ClCH2(OCH2)mOP(O)(ORy)2與碘化鈉反應(yīng)而得到。
反應(yīng)流程Ⅳ顯示了另一種合用于制備一小類式(A)化合物的方法，其中至少一個膦酰氧甲氧基與塔三烷殘基相連。
反應(yīng)流程Ⅳ
反應(yīng)流程Ⅳ中，m和n的定義同前;X為非氫基團(tuán)，P為羥基保護(hù)基;txn為塔三烷殘基。式(D)化合物是具有13α-羥基和一個或多個直接或間接與塔三烷核心相連的甲硫基甲基醚的塔三烷;且也包括式(D)的C13金屬醇鹽。式(D)化合物的例子是7-O-甲硫基甲基漿果赤霉素Ⅲ
塔三烷(D)與氮雜環(huán)丁酮的偶聯(lián)反應(yīng)與反應(yīng)流程Ⅵ中所示的類似;因此其中所示的用以制備式(Ⅰd)化合物的方法也可應(yīng)用于制備式(Ba)化合物[即其中至少一個MTM基團(tuán)直接或間接與塔三烷殘基相連的式(B)化合物]，只要將式(D)化合物代替反應(yīng)流程Ⅵ中的式(Ⅱ)化合物。塔三烷(D)優(yōu)選首先被轉(zhuǎn)化為C13金屬醇鹽，如醇鈉、醇鉀或醇鋰;優(yōu)選醇鋰。氮雜環(huán)丁酮是用作C13側(cè)鏈的前體。與塔三烷偶聯(lián)后，除去羥基保護(hù)基P，并根據(jù)需要將側(cè)鏈上的游離羥基轉(zhuǎn)化為MTM醚，或如下面所述衍生為酯或碳酸酯。
氮雜環(huán)丁酮可用后面所述方法制備，該方法也是本領(lǐng)域普通方法。利用合適保護(hù)的塔三烷，通過上面所述的制備(B)的一般方法可制備出式(D)化合物。但更方便的是，通過用氫硼化物(如氫硼化鈉或氫硼化四丁銨)斷裂13-側(cè)鏈可由式(Ba)化合物得到式(D)化合物;例如，用氫硼化四丁銨處理7-O-MTM，可得到7-O-MTM漿果赤霉素Ⅲ。
反應(yīng)流程Ⅴ更具體地說明了反應(yīng)流程Ⅰ中制備式(A)化合物的一般方法，它說明的是式(Ⅰ′)化合物(即其中m為0的式(Ⅰ)化合物)的制備方法。這一合成次序中使用的方法可通用于未由式(Ⅰ)具體包括的其它塔三烷衍生物。而且，本領(lǐng)域技術(shù)人員可依照這里所公開的內(nèi)容對反應(yīng)流程(Ⅴ)的方法進(jìn)行改進(jìn)，以獲得其中m為1或2的式(A)塔三烷衍生物。
應(yīng)當(dāng)知道，反應(yīng)流程Ⅴ及說明書其它各處的術(shù)語“羥基保護(hù)基”可包括碳酸酯基(-OC(O)ORx);因此，當(dāng)利用碳酸酯基作為羥基保護(hù)基時，應(yīng)在后繼步驟中將其除去，以產(chǎn)生游離羥基，否則碳酸酯殘基將成為終產(chǎn)物的一部分。
反應(yīng)流數(shù)Ⅴ
反應(yīng)流程Ⅴ中，R1a為羥基、被保護(hù)羥基、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;R2′為氫原子，且R2a為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2a為氫原子;R3a為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基、乙酰氧基或-OC(O)ORx;R6a和R7a之一為氫原子，且另一個為羥基、被保護(hù)羥基或C1-6烷酰氧基;或R6a和R7a共同形成一氧代基團(tuán);條件是R1a、R2a或R3a、R6a或R7a中至少一個為羥基。R16為羥基、被保護(hù)羥基、-OCH2SCH3;-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;R2′為氫原子，且R2b為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基、-OCH2SCH3或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2b為氫原子;R
為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基、乙酰氧基、-OCH，SCH3或-OC(O)ORx;R6b和R7b之一為氫原子且另一個為羥基、被保護(hù)羥基、C1-6烷酰氧或-OCH2SCH3;或R6b和R7b共同形成一氧代基團(tuán);條件是R1b、R2b、R3b、R6b和R7b中至少一個為-OCH2SCH3。R1c為羥基、被保護(hù)羥基、-OCH2OP(O)(ORy)2、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;R2′為氫原子，R2c為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基、-OCH2OP(O)(ORy)2或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2c為氫原子;R3c為氫原子、羥基、被保護(hù)羥基、乙酰氧基、-OCH2OP(O)(ORy)2或-OC(O)ORx;R6c或R7c之一為氫原子且另一個為羥基、被保護(hù)羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2OP(O)(ORy)2;條件是R1c、R2c、R3c、R6c和R7c中至少一個為-OCH2OP(O)(ORy)2。R1′為羥基、-OCH2OP(O)(OH)2、-OC(O)ORx或-OC(O)ORx;R2′″為氫;且R2′為氫原子、羥基、-OCH2OP(O)(OH)2或-OC(O)ORx;或R2′″為氟，且R2′″為氫原子;R3′為氫原子、羥基、乙酰氧基、-OCH2OP(O)(OH)2或-OC(O)ORx;R6′和R7′之一為氫原子，另一個為羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2P(O)(OH)2;條件是R1′、R2′、R3′、R6′和R7′中至少一個為-OCH2OP(O)(OH)2、R4、R5和Rx的定義同前，且Ry為膦?；Ｗo(hù)基。
在第一步驟中，式(Ⅰa)化合物的游離羥基被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的甲硫基甲基醚(-OCH2SCH3)基團(tuán)。這一轉(zhuǎn)化可通過方法Ⅰa(二甲硫法)或方法Ⅰb(二甲亞砜法)完成。將醇轉(zhuǎn)化為甲硫基甲基醚的二甲硫法在Medina等人，Tet.Lett.，1988，pp 3773-3776中已有報道，其相應(yīng)部分并入本文以作參考。二甲亞砜法是廣泛熟悉的pummerer反應(yīng)。
應(yīng)當(dāng)注意，羥基的反應(yīng)性隨其在式(Ⅰa)塔三烷衍生物起始物中的位置不同而變化。雖然一般來說，2′-羥基在?；磻?yīng)中比7-羥基更易反應(yīng)，而7-羥基則比10-羥基更易反應(yīng)，但現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，7-羥基比2′-羥基更易于轉(zhuǎn)化為甲硫基甲基醚。C-1上的叔羥基一般反應(yīng)性最低。羥基反應(yīng)性上的差異可被用于控制甲硫基甲基化的位點(diǎn)和程度。
因此，利用其中R1a和R2a均為羥基的式(Ⅰa)化合物所獲得的主要甲硫基甲基化產(chǎn)物是相應(yīng)的7-O-甲硫基甲基醚。為了獲得其中R16為甲硫基甲氧基的式(Ⅰb)化合物，若7-羥基存在而又未轉(zhuǎn)化為甲硫基甲基醚，則可用常規(guī)的羥基保護(hù)基(如三乙基甲硅烷氧基)保護(hù)7-羥基。同樣，當(dāng)用相同或不同的羥基保護(hù)基保護(hù)可能存在的、又未被轉(zhuǎn)化的7-和/或2′-羥基時，可得到10-甲硫基甲基醚。盡管7-羥基是優(yōu)選的甲硫基甲基化位點(diǎn)，但如果所需產(chǎn)物是7-單甲硫基甲基醚，仍優(yōu)選保護(hù)2′-羥基。
而且，可對反應(yīng)條件進(jìn)行控制，以有利于雙-或三-甲硫基甲基醚塔三烷衍生物的形成。例如，在紫杉酚的情況下，提高反應(yīng)時間或使用較大過量的甲硫基甲基化試劑可導(dǎo)致產(chǎn)物混合物中2′，7-雙(甲硫基甲基)醚紫杉酚比率較高。
現(xiàn)在回到反應(yīng)流程Ⅴ。在方法(Ⅰa)中，用二甲硫和有機(jī)過氧化物(如過氧化苯甲酰)處理式(Ⅰa)化合物。反應(yīng)是在有利于產(chǎn)物形成的溫度下于惰性有機(jī)溶劑(如乙腈、二氯甲烷等)中進(jìn)行;通常是在-40℃至室溫的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。二甲硫和過氧化苯甲酰相應(yīng)于塔三烷衍生物起始物(Ⅰa)過量使用，且二甲硫相對于過氧化苯甲酰過量使用。
所用起始物的相對量取決于所要達(dá)到的甲硫基甲基化程度。因此，當(dāng)要將塔三烷衍生物起始物(Ⅰa)的一個游離羥基轉(zhuǎn)化為甲硫基甲基醚時，二甲硫和過氧化苯甲酰相對于塔三烷衍生物(Ⅰa)最高達(dá)10倍過量地使用;且優(yōu)選以2-3倍過量于過氧化苯甲酰的量使用二甲硫。在起始物(Ⅰa)具有2′-和7-羥基的情況下，所得2′，7-雙(甲硫基甲基)醚的量隨二甲硫和過氧化苯甲酰相對量的增加而增加。當(dāng)所需產(chǎn)物為2′，7-雙(甲硫基甲基)醚時，優(yōu)選使用15-20倍過量于塔三烷衍生物起始物的二甲硫;且使用約5-10倍過量于塔三烷衍生物起始物的過氧化苯甲酰。
也可通過將式(Ⅰa)化合物與二甲亞砜和乙酸酐反應(yīng)制備式(Ⅰb)化合物(方法1b)。該方法適用于將非-2′-羥基衍生為其甲硫基甲基醚。本方法(Ⅰb)中，式(Ⅰa)化合物被溶于二甲亞砜，并向溶液中加入乙酸酐。該反應(yīng)通常在室溫下進(jìn)行18-24小時，得到單甲硫基甲基醚。
在該反應(yīng)流程的第二步，甲硫基甲基醚被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的被保護(hù)膦酰氧甲基醚?？衫肰eenemen等人，Tetrahedren，1991，V47，pp 1547-1562中所述的一般方法完成由甲硫基甲基到被保護(hù)的膦酰氧基甲基的轉(zhuǎn)化，該文獻(xiàn)的有關(guān)部分并入本文以作參考。因此，用N-碘琥珀酰亞胺和被保護(hù)的磷酸(如磷酸二芐酯)處理帶有至少一個甲硫基甲基醚的式(Ⅰb)化合物。該反應(yīng)于惰性有機(jī)溶劑，如四氫呋喃或鹵代烴(如1，2-二氯乙烷或二氯乙烷)中進(jìn)行，且根據(jù)需要在脫水劑(如分子篩)存在下進(jìn)行。為加速反應(yīng)，也可加入催化劑，如三氟甲磺酸銀。反應(yīng)溫度為0℃至室溫，優(yōu)選室溫。N-碘琥珀酰亞胺和被保護(hù)磷酸是以約與甲硫基甲基醚(Ⅰb)相等的摩爾當(dāng)量使用，但優(yōu)選它們被輕微過量服用，例如約1.3-1.5當(dāng)量于式(Ⅰb)化合物。
在該反應(yīng)流程的第三步，可能存在的膦酰基保護(hù)基和羥基保護(hù)基被除去。去保護(hù)可利用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法完成，如酸-或堿-催化的水解、氫解、還原等。例如，可利用催化氫解除去芐基膦?；Ｗo(hù)基和芐氧羰基羥基保護(hù)基。去保護(hù)的方法可從Greene和Wutz或McOmie(出處同前)等教科書中查到。
式(Ⅰ)化合物的堿鹽可通過常規(guī)技術(shù)形成，它包括將式(Ⅰ)游離酸化合物與金屬堿或與胺接觸。合適的金屬堿包括鈉、鉀、鋰、鈣、鋇、鎂、鋅和鋁的氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽;合適的胺包括三乙胺、氨、賴氨酸、精氨酸、N-甲基葡糖胺、乙醇胺、普魯卡因、苯乍生、二芐基胺、三甲醇氨基甲、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、三乙醇胺等。通過層析后冷卻干燥或結(jié)晶可進(jìn)一步純化堿鹽。
以上所述的方法可應(yīng)用于任何式T-[OH]n的塔三烷衍生物，形成式(A)化合物。文獻(xiàn)中所報導(dǎo)的許多T-[OH]n可舉例如下(a)紫杉酚;(b)Taxotere
;(c)10-去乙?；仙挤?(d)PCT申請93/106079(1993年4月1日公開)中公開的具有下式的塔三烷衍生物
其中R1為-OR6、-SR7或-NR8R9;R2為氫原子、烷基、鏈烯基、炔基、芳基或雜芳基;R3和R4獨(dú)自為氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基或酰，但條件是R3和R4不都為?；?R5為-COR10、-COOR10、-COSR10、-CONR8R10、-SO2R11或-POR12R13;R6為氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基、羥基保護(hù)基或增加塔三烷衍生物水溶性的官能團(tuán);R7為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基或巰基保護(hù)基;R8為氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基;R9為氨基保護(hù)基;R10為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基;R11為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基、-OR10或-NR8R14;R12和R13獨(dú)自為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基、-OR10或-NR8R14;R14為氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜芳基;R15和R16獨(dú)自為氫原子、羥基、低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基、芳酰氧基或R15和R16共同形成一氧代基;R17和R18獨(dú)自為氫原子、羥基、低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基、芳酰氧基或R17和R18共同形成一氧代基;R19和R20獨(dú)自為氫或羥基或低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基;R21和R22獨(dú)自為氫或低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基，或R21和R22共同形成一氧代基;R24為氫、羥基、低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基;或R23和R24共同形成一氧代基或亞甲基，或R23和R24共同與它們所連接的碳原子一起形成環(huán)氧乙烷環(huán)，或R23和R22共同與它們所連接的碳原子一起形成氧雜環(huán)丁烷環(huán);R25為氫、羥基、或低級烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基;或R26為氫、羥基或低級鏈烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基;或R26和R25共同形成一氧代基;R27為氫、羥基或低級烷氧基、烷酰氧基、鏈烯酰氧基、鏈炔酰氧基或芳酰氧基;(e)美國專利5，227，400公開的塔三烷衍生物，紫杉酚的3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)或3′-(2-噻吩基)衍生物，Taxotere
;(f)EP534，709(1993年3月31日公開)中公開的塔三烷衍生物(其中側(cè)鏈苯基被萘基、苯乙烯基或取代苯基獨(dú)立取代的紫杉酚)。也見1992年6月11日公開的PCT 92/09589;(g)EP534，707(1993年3月31日公開)中公開的塔三烷衍生物(其中3′-N-苯甲?；灰已豸驶蚣籽豸驶〈淖仙挤友苌?;(h)1993年4月1日公開的PCT申請93/06093中所公開的紫杉酚和Taxotere
的10-去乙酸基衍生物;(i)1993年1月20日公開的EP524，093中所公開的10-、7-或10-雙-O-(N-取代基氨基甲?；檠苌?;(j)Klein，“Synthesis of 9-DihydrotaxolA NewBivactive Taxane”，Tetrahedron Letters，1993，34(13)2047-2050中所公開的紫杉酚的9-α-羥基類似物;(k)在205th ACS National Meetiny in Colirado，1993上公開由14β-羥基-10-去乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ制得的紫杉酚和Taxotere
的14-β-羥基類似物(Med.Chem.Division，Abstract No.28);和(l)其它塔三烷，如在我們1993年5月20日遞交的共同未決美國專利申請U.S.S.N.08/062，687中所公開的C7-氟塔三烷和各種C10-取代的塔三烷，該專利申請全部并入本文以作參考。
塔三烷衍生物中的游離羥基可利用常規(guī)方法轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酯或碳酸酯;例如，在式(Ⅰa)化合物中R1a、R2a和R3a之一為-OC(O)Rx或-OC(O)ORx，且Rx的定義同前。因此，可在叔胺等堿存在下將塔三烷衍生物T-OH與式L-C(O)ORx化合物(L為離去基團(tuán))(如氯甲酸酯)反應(yīng)，得到相應(yīng)的碳酸酯;例如，在二異丙基乙基胺存在下將紫杉酚與氯甲酸乙酯反應(yīng)，得到2′-O-乙氧羰基紫杉酚。也可將T-OH與羧酸RxCO2H或其酯化等價物(如酐、活性酯或?；u)反應(yīng)，得到相應(yīng)的酯。
或者，通過用適當(dāng)取代的3-氨基-2-羥基丙酸、其酰化等價物或其前體?；哂蠧13-羥基的塔三烷殘基來制備塔三烷衍生物T-[OH]n。取代的3-氨基-2-羥基-丙酸的適當(dāng)前體的例子如式(Ⅲ)的氮雜環(huán)丁酮。該酰化反應(yīng)的例子有偶聯(lián)羥基保護(hù)的漿果赤霉素Ⅲ或羥基保護(hù)的10-脫乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ與苯基異絲氨酸衍生物以得到紫杉酚衍生物(Denis等人，美國專利4，924，011和4，924，012)以及偶聯(lián)被保護(hù)漿果赤霉素Ⅲ與氮雜環(huán)丁酮以得到紫杉酚及其衍生物(1990年12月5日公開的歐洲專利申請400，971(現(xiàn)在的美國專利5，175，315)和美國專利5，229，526。
EP400，971中所公開的方法(Holton法)包括在N，N-二甲基氨基吡啶和吡啶存在下將1-苯甲?；?3-(1-乙氧基)乙氧基-4-苯基-2-氮雜環(huán)丁酮與7-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ反應(yīng)12小時;在除去各種羥基保護(hù)基后得到紫杉酚。Ojima等人在“New and Efficient Approaches to the Semisynthesis of Taxol and its C-13 Side Chain Analogs ty Means of β-Lactam Method”Tetrahedron，1992，48(34)∶6985-7012中報導(dǎo)了一種改進(jìn)的Holton方法。Ojima的方法包括首先利用氫化鈉產(chǎn)生7-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ的鈉鹽，然后將該鹽與手性1-苯甲酰基-3-(1-乙氧基)乙氧基-4-苯基-2-氮雜環(huán)丁酮反應(yīng)并除去羥基保護(hù)基，得到紫杉酚。在U.S.5，229，526中，Holton提到將偶聯(lián)漿果赤霉素Ⅲ或其衍生物的金屬醇鹽和2-氮雜環(huán)丁酮反應(yīng)，得到帶有C13側(cè)鏈的塔三烷。據(jù)說，該方法具有很高的非對映選擇性;因此可使用側(cè)鏈前體2-氮雜環(huán)丁酮的外消旋混合物。最近，Ojima等人在“A Highly Efficient Ronte to Taxotere by the β-Lactam Synthon Method”，Tetrahedren Lettecs，1993，34(26)4149-4152中報導(dǎo)，將7，10-雙-O-(三氯乙氧羰基)-10-去乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ的金屬醇鹽與手性1-(叔-丁氧羰基)-4-苯基-3-(被保護(hù)羥基)-2-氮雜環(huán)丁酮偶聯(lián)，并在去保護(hù)后得到Taxotere
。該文獻(xiàn)有關(guān)部分并入本文以作參考。
反應(yīng)流程Ⅵ說明了用以制備式(Ⅰa)化合物的漿果赤霉素/氮雜環(huán)丁酮。同樣，未具體包括在式(Ⅰa)中的其它塔三烷衍生物也可通過該方法利用合適的起始物制得。
反應(yīng)流程Ⅵ
其中，R2′為氫，且R2d為氫、被保護(hù)羥基或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2d為氫;R3d為氫、乙酸基、被保護(hù)羥基或-OC(O)ORx;R6d和R7d之一為氫，且另一個為羥基、被保護(hù)羥基或C1-6鏈烷酰氧基;或R6d和R7d共同形成氧代基;P為羥基保護(hù)基;M為氫或IA族金屬，如鋰、鈉或鉀;且P、R4、R5和Rx的定義同前。反應(yīng)可按EP400，971中所述方法進(jìn)行，其中，M為氫的式(Ⅱ)漿果赤霉素Ⅲ衍生物在有機(jī)堿(如N，N-二甲基氨基吡啶)存在下與式(Ⅲ)氮雜環(huán)丁酮反應(yīng)。但優(yōu)選如美國專利5，229，526和Ojima的文章(出處同前)中所公開的那樣首先用強(qiáng)堿(如IA族金屬的氫化物、烷基氨化物和雙(三烷基甲硅烷基)氨化物)將漿果赤霉素Ⅲ衍生物轉(zhuǎn)化為13-醇鹽。更優(yōu)選的是，13-醇鹽為醇鋰。鋰鹽可通過將其中M為氫的式(Ⅱ)化合物與強(qiáng)金屬堿(如二異丙基氨化鋰、C1-6烷基鋰、雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰、苯基鋰、氫化鋰)反應(yīng)形成。
式(Ⅱ)塔三烷與式(Ⅲ)氮雜環(huán)丁酮的偶聯(lián)反應(yīng)是在惰性有機(jī)溶劑(如四氫呋喃)中于0℃至-78℃的降低溫度下進(jìn)行。式(Ⅲ)氮雜環(huán)丁酮可作為外消旋混合物去偶聯(lián)其中M為1A族金屬的塔三烷金屬醇鹽;在此情況下，氮雜環(huán)丁酮試劑優(yōu)選以至少2當(dāng)量于塔三烷試劑的量使用。更優(yōu)選約3-6當(dāng)量。也可使用手性氮雜環(huán)丁酮，在此情況下1當(dāng)量于塔三烷的氮雜環(huán)丁酮就足夠了，但優(yōu)選稍微過量地使用氮雜環(huán)丁酮，例如最高達(dá)1.5當(dāng)量。
羥基保護(hù)基可相同或可按以下方式進(jìn)行選擇能夠選擇性地除去一個或多個保護(hù)基而基本上不影響其它保護(hù)基;例如在式(Ⅰd)化合物中R2d和PO可均為三乙基甲硅烷氧基，且R3d可為芐氧羰基;在鈀-碳存在下催化氫解可除去芐氧羰基保護(hù)基，而不除去三乙基甲硅烷基。因此，可選擇性地除去式(Ⅰd)化合物中的羥基保護(hù)基，得到式(Ⅰa)化合物。
式(Ⅱ)化合物或者是文獻(xiàn)中已知的，如漿果赤霉素Ⅲ、10-脫乙酰基漿果赤霉素Ⅲ及其羥基被保護(hù)的衍生物，或者可通過常規(guī)方法制得，例如將羥基轉(zhuǎn)化為碳酸酯。其它式(Ⅱ)化合物可按照下面“起始物的制備”部分中所述的方法制備。
可按照EP400，971和Ojima等人，Tetrahedron，486985-7012，1992中所述的一般方法，由式(Ⅲa)化合物制備式(Ⅲ)化合物。
因此，首先用正丁基鋰或三乙胺等堿處理式(Ⅲa)化合物，然后再用式R4(O)PCO-L化合物(其中L為離去基團(tuán))處理，即得到式(Ⅲ)化合物。
式(Ⅲa)化合物可按照EP400，971中所公開的一般方法通過中間體化合物3-乙酸基-4-取代的-2-氮雜環(huán)丁酮(Ⅲb)制得，或者可按照US5，229，526公開的方法通過中間體化合物3-三乙基甲硅烷氧基-4-取代的-2-氮雜環(huán)丁酮制得。在一改進(jìn)方法中，可通過用聯(lián)亞胺縮合乙酰氧基乙酰氯，然后通過氫解或酸裂解除去N-亞胺基而得到化合物(Ⅲb);該方法示于下面的反應(yīng)流程中，其中R5′為非限制性取代的芳基或雜芳基，如呋喃基或噻吩基。該方法公開于1993年4月23日遞交的共同未決申請U.S.S.N08/052，434，該申請文獻(xiàn)并入本文以作參考。
由這些環(huán)化加成反應(yīng)得到的產(chǎn)物(Ⅲb)通常是兩種順式-氮雜環(huán)丁酮的外消旋混合物。該外消旋混合物可通過常規(guī)方法解析，例如通過轉(zhuǎn)化為非對映體、在填充了手性吸附劑的柱上的差異吸附或酶解。例如，可將式(Ⅲb)化合物的外消旋混合物與催化酯水解的酶(如酯酶或脂酶)接觸，以選擇性地除去一個對映體的3-?；挥绊懫渌鶊F(tuán)(見Brieva等人，J.Org.Chem.，1993，581068-1075;也是1993年7月14日遞交的共同未決申請U.S.S.N092，170，1993年7月29日公開的歐洲專利申請552041)?；蛘?，首先對外消旋混合物進(jìn)行堿催化水解以除去3-?；a(chǎn)生相應(yīng)3-羥基β-內(nèi)酰胺的外消旋混合物;然后將3-羥基β-內(nèi)酰胺的外消旋混合物與一種能夠催化羥基?；拿附佑|以選擇性地?；?對映體上的羥基而不影響其它基團(tuán)。或者用手性羧酸?；?-羥基β-內(nèi)酰胺的外消旋混合物，并利用已知方法分離所產(chǎn)生的非對映體混合物，最后除去手性輔助配合劑，得到所需對映體。
Ojima等人在J.Org.Chem.561681-1683，1991;Tet.Lett.，335737-5740，1992;和Tetrahedron，484985-7012，1992中報導(dǎo)了大量手性式(Ⅲa)氮雜環(huán)丁酮和/或相應(yīng)的N-(P-甲氧苯基)同族物的合成;其中P為羥基保護(hù)基三異丙基甲硅烷基;R5為4-甲氧苯基、3，4-二甲氧苯基、苯基、4-氟苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-苯乙烯基、2-(2-呋喃基)乙烯基、2-甲基丙基、環(huán)己基甲基、異丙基、苯乙基、2-環(huán)己基乙基或正丙基。以上文獻(xiàn)的相關(guān)部分均并入本文以作參考。屬于式(Ⅲ)定義內(nèi)但未在上述文獻(xiàn)中具體公開的其它氮雜環(huán)丁酮可由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員按已知方法制備。
生物學(xué)評估
本發(fā)明化合物為新的抗腫瘤劑;已在體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)和體內(nèi)動物腫瘤模型中對代表性的式(A)化合物進(jìn)行了評估。
體外細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)
本發(fā)明化合物顯示出抗結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116和HCT-116/VM46的體外細(xì)胞毒性活性。HCT-116/VM46細(xì)胞是已預(yù)先進(jìn)行了替尼泊甙抗性選擇并表達(dá)多藥物抗性表型(包括抗紫杉酚)的細(xì)胞。按照D.A.Scudiero等人在“Evaluation of soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in cultwre using humen and other tumor cell lines，”Cancer.Res.484827-4833，1988中所述的XTT(2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5-硫代苯基)-5-[(苯氨基)羰基]2H-氫氧化四唑鎓]檢測法，在HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞上進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測。將細(xì)胞按4000細(xì)胞/孔的量加到96孔微量滴定板上，24小時加入藥物并系列稀釋。于37℃培養(yǎng)72小時，此時加入四唑鎓染料XTT?；罴?xì)胞中的脫氫酶將XTT還原為在450nm處吸光的形式，它可通過分光光度計定量測定。吸收值越大，則活細(xì)胞的數(shù)目越大。結(jié)果以IC50表示，它為抑制細(xì)胞繁殖(EP450nm處吸收)至未處理對照細(xì)胞的50%所需的藥物濃度。表Ⅰ給出了該檢測中所評估化合物的IC50值。
表Ⅰ 抗人結(jié)腸癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)
括號中的數(shù)字是與HCT-116細(xì)胞相比的抗性倍數(shù)。
也對化合物7-O-甲硫基甲基紫杉酚(實(shí)例1(a))的細(xì)胞毒性進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果是它的抗HCT-116IC50為0.003μM，抗HCT-116/VM46的IC50為0.025μM。
體內(nèi)抗腫瘤活性
在Balb/C×DBA2F1(CDF1)雜交小鼠皮下(SC)植入0.1ml 2%(W/V)M109肺癌漿液(如W.Rose“Evaluation of Madison 109 Lung Carcimoma as a Model fos Screening Antitumoz Drugs，”Cancer Treatment Reports，65，No.3-4 pp.299-312(1981))。通過靜脈給各組小鼠服用試驗(yàn)化合物和對照藥物紫杉酚;每組小鼠接受不同劑量水平的化合物，對每一化合物評估三或四種不同劑量水平。每天觀察小鼠的存活情況，直到首先出現(xiàn)死亡或植入腫瘤后75天為止。每次實(shí)驗(yàn)中保留一組小鼠不處理，作為對照。每周一次或兩次測定腫瘤，并按照公開的方法(出處同前)利用mm表示的大小來估計腫瘤的重量。
將化合物處理(T)小鼠的中間存活時間與對照(O)小鼠的中間存活時間進(jìn)行比較。將化合物處理的每組小鼠的兩值之比乘以100，并以百分?jǐn)?shù)(即%T/C)表示于表Ⅱ中。另外，表Ⅱ也以T-C值(天)表示了處理值和對照組腫瘤長至1g的中間時間差。T-C值越大，初級腫瘤生長的推遲越大。顯示出%T/C≥125%和/或T-C≥4.0(天)的化合物被認(rèn)為在M109SC模型中具有活性。
表Ⅱ
a化合物在植入腫瘤后第4、5、6、7和8天通過靜脈服用，每日一次。
b化合物在植入腫瘤后第5、6、7、8和9天通過靜脈服用，每日一次。
c較高劑量達(dá)到壽命的最大增加;
較低劑量與引起腫瘤生長的最大推遲有關(guān)。
作為陽性對照，在鼠和人異種移植腫瘤模型(M109，A2780/CDDP-抗順氯氨鉑人卵巢癌和HCT-116-人結(jié)腸癌)中對實(shí)施例3化合物(三乙醇胺鹽形式)的抗紫杉酚活性進(jìn)一步進(jìn)行了評估。A2780/CDDP模型公開于Rose和Basler，ln Vivo，1990，4391-396;HCT-116模型公開于Rose和Basler，ln Vivo，1989，3249-254。M109每兩周在Balb/c小鼠在皮下傳代，并皮入植入CDF1小鼠以進(jìn)行抗腫瘤評估。將A2780/CDDP和HCT-116在無胸腺小鼠中培養(yǎng)，以便傳代(每兩至三周)和治療實(shí)驗(yàn)。實(shí)例3化合物可溶于水中通過靜脈服用，或溶于帶有幾滴Tween 80的水中口服，而紫杉酚既可懸浮于加Tween 80的水中，也可溶于Cremophore/乙醇(50%/50%)并用鹽水稀釋。SCM109腫瘤試驗(yàn)的治療方案是自腫瘤植入后的第4天開始每日一次，連續(xù)進(jìn)行5天。對于人腫瘤異種移植試驗(yàn)，是自腫瘤達(dá)到50-100mg開始每隔一天服用一次化合物，共服用5次。
在一個M109實(shí)驗(yàn)中，靜脈注射實(shí)施例3化合物時，在36mg/Kg/inj時達(dá)到最大%T/C值155(T-C為19天)(參見36或18mg/Kg/inj時紫杉酚的最大%T/C值132(T-C為13天)。在同一實(shí)驗(yàn)中，以160mg/kg/adm的劑量口服實(shí)施例3化合物時達(dá)到的最大%T/C值是158(T-C為22.8天)，而懸浮于水和Tween 80中的同樣劑量(最高試驗(yàn)劑量)的紫杉酚不顯示活性。在另一M109實(shí)驗(yàn)中，以48mg/kg/inj的劑量靜脈注射實(shí)例3化合物時產(chǎn)生的最大%T/C為170(T-C為17天)(比較48或36mg/kg/inj劑量時紫杉酚的最大%T-C167(T-C14天))。在同一實(shí)驗(yàn)中以200mg/kg/adm的劑量口服實(shí)例3化合物所產(chǎn)生的最大%T/C為172(T-C為17天)，而溶于Cremophore/乙醇/鹽水的紫杉酚在60mg/kg/inj劑量時未顯示出活性。在這一實(shí)驗(yàn)中，由于溶解性和毒性限制，溶于Cremophore/乙醇/鹽水的紫杉酚不可能以大于60mg/kg/inj的劑量服用。
在A2780/CDDP實(shí)驗(yàn)中，以36mg/kg/inj的劑量靜脈注射實(shí)例3化合物所產(chǎn)生的最大T-C值為29.8天(參見36/mg/kg/inj劑量時紫杉酚的最大T-C值26.3)。以160mg/kg/adm的劑量口服實(shí)例3化合物所產(chǎn)生的最大T-C值為20天。在HCT-116實(shí)驗(yàn)中，用24或36mg/kg/inj劑量的紫杉酚進(jìn)行靜脈注射治療時7個處理小鼠中的6個或8個處理小鼠中的6個得到治愈，而以160或240mg/kg/adm的劑量口服實(shí)例3化合物時分別使8個處理小鼠中的6個或7個得到治愈。治愈指植入腫瘤后80天腫瘤消失。
本發(fā)明化合物是塔三烷衍生物的膦酰氧甲基醚。其可作藥物的鹽與紫杉酚相比顯示出更好的水溶性，從而更便于藥物配制。不受理論束縛，據(jù)信本發(fā)明膦酰氧甲基醚是紫杉酚或其衍生物的前藥;膦酰氧甲基殘基是在體內(nèi)與磷酸酶接觸時被除去，產(chǎn)生母本化合物。如上所示，本發(fā)明化合物是有效的腫瘤抑制劑。因此，本發(fā)明涉及的另一個方面是一種抑制哺乳動物腫瘤的方法。它包括給攜帶腫瘤的宿主服用抗腫瘤有效量的式(A)化合物。
本發(fā)明化合物可按與紫杉酚類似的方式使用;因此，熟悉癌癥治療的腫瘤專家不經(jīng)過度實(shí)驗(yàn)就能夠確定服用本發(fā)明化合物的合適治療方案。本發(fā)明化合物的劑量、給藥途徑和程序等無特別限制，且隨所使用的具體化合物而變。因此，本發(fā)明化合物可通過任何適當(dāng)?shù)慕o藥途徑服用，優(yōu)選非腸道途徑;劑量為，例如1-100mg/kg體重，或20-50mg/m2。式(A)化合物也可口服;口服劑量為5-500mg/kg體重。所用實(shí)際劑量可根據(jù)所配制的具體組合物、給藥途徑和具體部位、所要治療的宿主和腫瘤類型而改變。在決定劑量時要考慮到影響藥物作用的許多因素，其中包括患者年齡、體重、性別、飲食和身體狀況。
本發(fā)明也提供了含有抗腫瘤有效量的式(A)化合物及一種或多種可作藥物的載體、賦形劑、稀釋劑或輔助劑的藥物組合物。配制紫杉酚或其衍生物的實(shí)例可從如美國專利4，960，790和4，814，470中查到。例如，可將本發(fā)明化合物配制成片劑、丸劑、粉末混合物、膠囊劑、注射劑、溶液、栓劑、乳液、分散液、食品預(yù)混物及其它合適形式。也可將它們制成無菌固體組合物，如凍干產(chǎn)品，并根據(jù)需要與其它可作藥用的賦形劑結(jié)合。也可在非腸道給藥之前用無菌水、生理鹽水、水和有機(jī)溶劑(如丙二醇、乙醇)的混合物或某些其它無菌注射介質(zhì)重組該固體組合物。
可作藥用的載體的典型例子有甘露醇、脲、葡聚糖、乳糖、馬鈴薯或玉米淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇、乙基纖維素、聚(乙烯吡咯烷酮)、碳酸鈣、油酸乙酯、十四烷酸異丙酯、苯甲酸芐基酯、碳酸鈉、明膠、碳酸鉀、硅酸。藥物制劑也可含有無毒性輔助物質(zhì)，如乳化劑、防腐劑、濕潤劑等，例如脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯單硬脂酸酯、甘油三棕櫚酸酯、二苯基鈉硫代琥珀酸酯。
在以下實(shí)驗(yàn)方法中，在未具體指出時所有溫度應(yīng)被理解為攝氏度(C)。核磁共振(NMR)光譜特征指以四甲基甲硅烷(TMS)作為參比標(biāo)準(zhǔn)用%百分比(ppm)表示的化學(xué)位移(δ)，質(zhì)子NMR光譜數(shù)據(jù)中各個位移的相對面積對應(yīng)于分子中特定官能基的氫原子數(shù)。位移的多重性以寬單峰(bs)、寬雙峰(bd)、寬三峰(bt)、寬四峰(bq)、單峰(s)、多重峰(m)、雙峰(d)、四重峰、三峰、雙雙峰(dd)、雙三重峰(dt)和雙四重峰(dq)。用于吸收NMR光譜的溶劑是丙酮-d6(氘化丙酮)、DMSO-d6(全氘化二甲亞砜)、D2O(重水)、CDCl3(含氘氯仿)和其它常規(guī)氘化溶劑。紅外(IR)光譜僅包括具有官能基鑒定值吸收波數(shù)(cm-1)。
Celite是Johns-Manville產(chǎn)品公司登記用于硅藻上的商標(biāo)。
本文中所使用的縮寫是本領(lǐng)域廣泛使用的，其部分例子有MS(質(zhì)譜);HRMS(高分辨質(zhì)譜);Ac(乙?；?;Ph(苯基);V/V(體積/體積);FAB(快速原子轟擊);NOBA(間-硝基芐基醇);min(分鐘);h或hr(小時);NIS(N-碘琥珀酰亞胺);BOC(叔丁氧羰基);CBZ(芐氧羰基);Bn(芐基);Bz(苯甲?；?;TES(三乙基甲硅烷基);DMSO(二甲亞砜);THF(四氫呋喃);HMDS(六甲基二硅氮烷)。
制備起始物
下面舉例說明用于制備式(A)化合物的幾個具體起始物的制備方法。
制備例1 10-去乙酸基紫杉酚
(a)2′，7-O-雙(2，2，2-三氯乙氧羰基)-10-去乙?；仙挤?br> 于0℃用吡啶(0.028ml，0.346mmol)和三氯乙基氯甲酸酯(0.0724ml，0.260mmol)處理10-去乙?；仙挤?140mg，0.173mmol)的無水二氯甲烷(3.5ml)溶液。維持該溫度1h后，撒掉冷浴，于室溫下過夜攪拌混合物。蒸發(fā)溶劑，殘余物在硅膠上色譜(30-50%乙酸乙酯的己烷溶液)，得到泡沫狀標(biāo)題化合物(92.3mg，46%)。進(jìn)一步洗脫后得到未反應(yīng)的起始物(35mg，25%)和2′，10-O-雙(2，2，2-三氯乙氧羰基)-10-去乙?；仙挤?產(chǎn)率為16%)。
(b)2′，7-O-雙(2，2，2-三氯乙氧羰基)-10-去乙酸基-11，12-二氫紫杉酚-10，12(18)-二烯
于室溫下用1，1，2-三氟-2-氯三胺(0.0384ml，0.238mmol)處理步驟(a)產(chǎn)物(92.3mg，0.079mmol)的無水二氯甲烷(2ml)溶液。過夜攪拌后蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜(25%乙酸乙酯的己烷)純化殘余物，得到白色粉末狀標(biāo)題化合物(42.8mg，47.3%)。
(c)10-去乙酸基-11，12-二氫紫杉酚-10，12(18)-二烯
將步驟(b)產(chǎn)物(39mg，0.034mmol)溶于甲醇(0.5ml)和乙酸(0.5ml)并用酸洗過的鋅粉(66.4mg，1.020mmol)處理。漿液于40℃加熱1h，過濾并蒸發(fā)濾液。用60%乙酸乙酯/己烷色譜殘余物后得到泡沫狀標(biāo)題化合物(22mg，81%)。
(d)10-去乙酸基紫杉酚
在鈀-碳(10%，14.7mg，0.014mmol pd)存在下，在大氣壓下氫化步驟(c)產(chǎn)物(22mg，0.028mmol)的乙酸乙酯(0.7ml)溶液。室溫下5.5h后過濾(用乙酸乙酯浸漬)，蒸發(fā)并層析(60%乙酸乙酯的己烷)，得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物(15.0mg，68%)。
制備例2 7-脫氧-7α-氟紫杉酚
(a)2′-O-芐氧羰基-7-脫氧-7α-氟紫杉酚
將三氟化二乙基氨基硫(DAST，18.7μl，0.141mmol)溶于無水二氯甲烷(0.5ml)，并將該溶液冷卻至0℃。加入2′-O-(芐氧羰基)紫杉酚(71mg，0.072mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，所得溶液于0℃保溫30min，并于室溫保持4h。然后向反應(yīng)混合物中加水(0.15ml)以終止反應(yīng)，濃縮所得混合物，留下的殘余物經(jīng)硅膠柱層析(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)后產(chǎn)生61mg(Y85.7%)標(biāo)題化合物和2′-O-芐氧羰基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙基紫杉酚。
(b)7-脫氧-7α-氟紫杉酚
將步驟(a)所得產(chǎn)物(89mg)溶于乙酸乙酯(3ml)，并在披鈀炭(10%pd，29mg，0.027mmol)存在下，于一個氫氣壓下輕微攪拌混合物。12h后，除去溶劑，殘余物通過硅膠層析純化(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)，得到67.7mg標(biāo)題化合物及8-去甲基-7，8-環(huán)丙基紫杉酚。
以下HPLC法可用于分離7-脫氧-7α-氟紫杉酚和8-脫甲基-7，8-環(huán)丙基紫杉酚。
裝置
泵PE4系列
柱Shandon Hypercarb(石墨化碳)，7u，100×4.6mm，＃59864750(有關(guān)制備性尺寸柱的資料可從Keystone Scientific，Bellefonate，PA得到)
注射器PE1SS-100
探測器HP-1040M
條件
流動相85∶15二氯甲烷∶己烷
以80∶19∶1二氯甲烷∶己烷∶異丙醇不喪失分離
流速2.5ml/min
檢測器254nm
稀釋劑溶于二氯甲烷的樣品
制備例3 7-脫氧-7α-氟漿果赤霉素Ⅲ
向干燥環(huán)境下的無水燒瓶中加入2′-O-(芐氧羰基)紫杉酚(4g，4mmol)和無水甲苯(80ml)。于室溫下攪拌所產(chǎn)生的漿液，同時滴入無水四氫呋喃(16ml)，直至產(chǎn)生無色溶液。在干冰/丙酮浴上冷卻該溶液至-78℃，然后用三氟化二乙基氨基硫(DAST，1.2ml，2.5當(dāng)量)。攪拌反應(yīng)混合物16h，使它逐步升至室溫。過濾所得懸液，液濾(用乙酸乙酯(30ml)稀釋)用碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水依次洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮有機(jī)相，得到粗產(chǎn)物，為白色泡沫狀。通過硅膠柱層析(用10%CH3CN的CH2Cl2洗脫)分批純化粗產(chǎn)物，得到1.45g2′-O-(芐氧羰基)-7-脫氧-7α-氟紫杉酚和2′-O-(芐氧羰基)-8-脫甲基-7，8-環(huán)丙基紫杉酚(經(jīng)1H-NMR測得為82∶18混合物)。
將上述混合物(1.45g)溶于乙酸乙酯(60ml)并用披鈀碳(300mg)處理。于50psi氫氣壓力下振蕩4h后，排空反應(yīng)，通過一短硅膠塞過濾并濃縮，得到所需產(chǎn)物混合物7-脫氧-7α-氟紫杉酚和8-脫基-7，8-環(huán)丙基紫杉酚，為白色泡沫(1.24g，Y99%，經(jīng)1H-NMR測得為90∶10混合物)。將該混合物加至無水二氯甲烷(30ml)中，用氫硼化四丁基銨(745mg，2.9mmol，2eq)處理，并攪拌6h，然后用乙酸(1ml)終止反應(yīng)，用另外30ml二氯甲烷稀釋，并用碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮有機(jī)相。所得取代的塔三烷核心混合物粗品通過硅膠柱層析(用10%CH3CN的CH2Cl2洗脫)部分純化，得到7-脫氧-7α-氟漿果赤霉素Ⅲ和8-脫甲基-7，8-環(huán)丙基漿果赤霉素Ⅲ的90∶10(通過1H-NMR測得)混合物(510mg，60%)，為白色泡沫。經(jīng)熱的異丙醇結(jié)晶后，得到7-脫氧-7α-氟漿果赤霉素Ⅲ(為白色小針狀物，Y410mg);m.p.234-236℃(水解)。
制備例4 10-脫乙酸基-7-脫氧-7α-氟紫杉酚
(a)2′-O-芐氧羰基-10-脫乙酸基紫杉酚
依次用氯甲酸芐酯(0.0146ml，0.102mmol)和二異丙基乙胺(0.0177ml，0.102mmol)處理10-脫乙酸基紫杉酚(27mg，0.034mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液。于0℃攪拌反應(yīng)混合物45min，再于室溫攪拌12h。經(jīng)蒸發(fā)溶劑和硅膠層析(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到25.5mg(Y81%)泡沫狀標(biāo)題化合物。
(b)10-脫乙酸基-7-脫氧-7α-氟紫杉酚
于0℃用DAST(0.0071ml，0.055mmol)處理步驟(a)所得產(chǎn)物(25.5mg，0.028mmol)的二氯甲烷(0.8ml)溶液。0℃進(jìn)行45min后，該反應(yīng)于室溫進(jìn)行5h。蒸發(fā)溶劑及層析后得到粗泡沫狀2′-O-芐氧羰基-7-脫氧-7α-氟紫杉酚。將該化合物溶于乙酸乙酯(1ml)，于披鈀炭(10%，8.9mg)存在下，于室溫及1個氫氣壓下輕微攪拌12h。過濾除去催化劑，并對產(chǎn)物進(jìn)行硅膠層析，得到10mg(Y40%)標(biāo)題化合物的泡沫。
制備例5 10-脫乙?；?7-脫氧-7α-氟紫杉酚
將2′，10-O-雙(2，2，2-三氯乙氧羰基)-10-脫乙?；仙挤?120mg，0.013mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液冷卻至0℃，并用DAST(0.0266ml，0.207mmol)處理。溶液于0℃攪拌30min及于室溫攪拌4h。加水(0.05ml)終止反應(yīng)。濃縮反應(yīng)混合物且殘余物通過硅膠層析(用30%乙酸乙酯的己烷洗脫)純化，得到81mg(Y68%)2′，10-O-雙(2，2，2-三氯乙氧羰基)-7-脫氧-7α-氟紫杉酚的泡沫。將該化合物(63mg，0.054mmol)溶于甲醇(0.5ml)和乙酸(0.5ml)，并于45℃用鋅粉(104mg，1.62mmol)處理90min。過濾混合物并濃縮濾液，殘余物經(jīng)硅膠層析(用40%己烷的60%乙酸乙酯洗脫)后得到38mg(Y86%)標(biāo)題化合物，為白色固體。
制備例6 7-脫氧漿果赤霉素Ⅲ
(a)7-O-[(甲硫基)硫代羰基]漿果赤霉素Ⅲ
將漿果赤霉素Ⅲ(750mg，1.278mmol)溶于無水四氫呋喃(20ml)，并一次性加入咪唑(8.7mg，0.128mmol)。于室溫下加入氫化鈉(50%于礦物油中，77mg，1.597mmol)。當(dāng)氣體揮發(fā)停止時(10min)，一次性加入二硫化碳(4.6ml)。室溫下3h后，用甲基碘(0.238ml，3.835mmol)處理該黃色溶液并攪拌過夜。經(jīng)乙酸乙酯和水處理后得到標(biāo)題化合物，為粗油狀物。
替代方法
將漿果赤霉素Ⅲ(394mg，0.672mmol)溶于四氫呋喃(5ml)和二硫化碳(1ml)，向該溶液中加入氫化鈉(40.3mg，60%，1.009mmol)，并加入催化量咪唑。室溫下攪拌反應(yīng)混合物1.5h，然后加入甲基碘(122.8μl，2.016mmol)。40min后，真空除去溶劑，殘余物進(jìn)行硅膠層析(用20%-50%-60%乙酸乙酯的己烷洗脫)，得到標(biāo)題化合物(260mg，Y57.2%)和7-表漿果赤霉素(98.5mg，25%)。
(b)7-O-[(甲硫基)硫代羰基]-13-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ
將得自步驟(a)的粗油產(chǎn)物溶于無水二甲基甲酰胺(5ml)，并于室溫下用咪唑(870mg，12.78mmol)和三乙基甲硅烷基氯(2.10ml，12.78mmol)處理15h。加水并用乙酸乙酯萃取。用水充分洗滌有機(jī)層，然后干燥。經(jīng)硅膠快速層析(用20%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到標(biāo)題化合物，為透明狀固體(Y209mg，兩步總產(chǎn)率為20%)。
替代方法
將步驟(a)產(chǎn)物(193.4mg，0.286mmol)溶于無水二甲基甲酰胺(2.86ml)。向該溶液中加入咪唑(77.9mg，1.14mmol)后再加入三乙基甲硅烷基氯(192μl，1.14mmol)。于室溫后過夜攪拌反應(yīng)混合物。12h后，用乙酸乙酯(150ml)稀釋反應(yīng)混合物。用水(3×10ml)和鹽水(1×10ml)洗滌有機(jī)層，并真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠層析(用20%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到標(biāo)題產(chǎn)物(163mg，Y72.0%)。
(c)7-脫氧-13-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ
于三丁基氫化錫(0.310ml，1.150mmol)和2，2′-偶氮二異丁腈(AIBN，10mg)存在下，將步驟(b)產(chǎn)物(182mg，0.230mmol)的無水苯(5ml)加熱至80℃。3h后冷卻溶液，真空蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)硅膠層析(用20%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到油狀標(biāo)題化合物。
(d)7-脫氧漿果赤霉素Ⅲ
將步驟(c)產(chǎn)物溶于四氫呋喃(5ml)，并于室溫下用四丁基氟化銨(1M于四氫呋喃，0.50ml，0.50mmol)處理2h。用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，再經(jīng)硅膠層析(用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫)后得到標(biāo)題化合物，為透明狀固體(63mg，兩步總產(chǎn)率58%)。
制備例7 10-脫乙酸基漿果赤霉素Ⅲ
(a)10-脫乙?；?10-O-(五氟苯氧基)硫代羰基-7-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ
將7-O-三乙基甲硅烷基-10-脫乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ(見Greene等人，J.Am.Chem.Soc.，110，P5917，1988)(319mg，0.485mmol)溶于無水四氫呋喃(5ml)，冷卻至-40℃，并用正丁基鋰(1.58M于己烷，0.384ml，0.606mmol)處理。維持該溫度40min后，利用注射器均勻加入氯硫甲酸五氟苯基酯(0.086ml，0.536mmol)。于-20℃攪拌反應(yīng)混合物90min，用飽和氯化銨溶液終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。干燥并濃縮乙酸乙酯層，殘余物經(jīng)硅膠層析純化(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到泡沫狀標(biāo)題化合物(320mg，Y74%)。
(b)10-脫乙酸基-7-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ
將步驟(a)產(chǎn)物(119mg，0.135mmol)溶于無水甲苯(3ml)，并用AIBN(2mg)處理。用無水氮?dú)馐谷芤好摎?，然后加入三丁基氫化錫(0.055ml，0.202mmol)。溶液于90℃加熱1h，蒸發(fā)溶劑并對殘余物進(jìn)行硅膠層析(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)后，得到無色泡沫狀標(biāo)題化合物(87mg，Y99%)。
(c)10-脫乙酸基漿果赤霉素Ⅲ
將步驟(b)的產(chǎn)物(120mg，0.187mmol)溶于乙腈(3.5ml)，并冷卻溶液至-10℃。加入濃HCl(36%，0.060ml)，攪拌溶液30min。用乙酸乙酯(75ml)稀釋混合物，并用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后干燥及濃縮。通過快速硅膠層析(用70%乙酸乙酯的己烷洗脫)純化殘余物后得到泡沫狀10-脫乙酸基漿果赤霉素Ⅲ(75mg，Y76%)。
制備例8 10-脫乙酸基-7-脫氧漿果赤霉素Ⅲ
(a)7-O-[(甲硫基)硫代羰基]-10-脫乙酸基漿果赤霉素Ⅲ
將10-脫乙酸基漿果赤霉素Ⅲ(75mg，0.142mmol)溶于無水四氫呋喃(2ml)和二硫代碳(0.5ml)，然后加入氫化鈉(60%于礦物油中，8.5mg，0.213mmol)，并將混合物于室溫下攪拌2h。加入碘甲烷(0.026ml，0.426mmol)，該反應(yīng)過夜進(jìn)行，除去溶劑并通過硅膠層析(用50-70%乙酸乙酯的己烷洗脫)純化殘余物后，得到泡沫狀標(biāo)題化合物(46.4mg，Y53%)。
(b)10-脫乙酸基-7-脫氧-漿果赤霉素Ⅲ
在AIBN(2mg)和三丁基氫化錫(0.079ml，0.290mmol)存在下及在氬氣環(huán)境下，將步驟(a)產(chǎn)物(30mg，0.058mmol)在苯(1ml)中回流3h。濃縮反應(yīng)混合物，并快速硅膠層析殘余物(用40%乙酸乙酯的己烷洗脫)，接著通過HPLC(高壓液相層析)與其它成分分離后，得到泡沫狀標(biāo)題化合物(16.8mg，Y56%)。
替代方法
向7-O-[(甲硫基)硫代羰基]-13-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ(制備例1步驟(b)的產(chǎn)物，416.3mg，0.527mmol)的無水甲苯(10.5ml)溶液中加入催化量AIBN，并用無水N2使所得溶液脫氫5min。加入三丁基氫化錫(708.7μl，2.63mmol)，并將反應(yīng)混合物于100℃加熱2h，然后再加入三丁基氫化錫(425.3μl，1.581mmol)，于100℃加熱5.5h后冷卻至室溫。經(jīng)硅膠層析(用20%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到7-脫氧-10-脫乙酸基-13-O-(三乙基甲硅烷基)漿果赤霉素Ⅲ(320mg，Y97%)。
于室溫下向上一步驟產(chǎn)物(160mg，0.255mmol)的無水四氫呋喃(2ml)溶液中加入四丁基氟化銨(766μl，1M，0.766mmol)，于室溫下攪拌反應(yīng)混合物1h。除去溶劑，對殘余物進(jìn)行硅膠層析(用50-70%乙酸乙酯的己烷洗脫)后，得到所需標(biāo)題產(chǎn)物(115mg，Y87.9%)。
制備例9 (3R，4S)-1-叔丁氧羰基-4-苯基-3-三乙基甲硅烷氧基-2-氮雜環(huán)丁酮
于0℃及氬氣環(huán)境下向(3R，4S)-4-苯基-3-三乙基甲硅烷氧基-2-氮雜環(huán)丁酮(2.200g，7.92mmol)的無水四氫呋喃(25ml)攪拌溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(1.65ml，9.510mmol，1.2equiv)。攪拌5min后，加入二-叔丁基碳酸酯(2.080g，9.510mmol，1.2equiv)和4-二甲氨基吡啶(193.6mg，1.581mmol，0.20equiv)。于0℃攪拌反應(yīng)混合物60min，然后用乙酸乙酯(25ml)稀釋。所得溶液依次用鹽水、10%NaHCO3和10%HCl溶液洗滌，用MgSO4干燥，濃縮后得到粗產(chǎn)物(油)，通過硅膠快速層析(用15%乙酸乙酯的己烷洗脫)進(jìn)一步純化該化合物后得到標(biāo)題化合物(2.4g，Y83%)，為白色固體。
制備例10 (±)-順-3-乙酸基-4-苯基氮雜環(huán)丁-2-酮
(a)向裝有溫度計、磁力攪拌器和滴液漏斗的1L三頸圓底燒瓶中加入氫化苯酰胺(30.00g，100.5mmol)和乙酸乙酯(150ml)。在攪拌及氬氣覆蓋條件下將反應(yīng)混合物冷卻至5℃，并加入三乙胺(16.8ml，121mmol)，然后在90min內(nèi)滴加完乙酸基乙酰氯(12.4ml，116mmol)的乙酸乙酯(300ml)溶液。維持該溫度16h后，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃(1.5h)，并轉(zhuǎn)移至分離漏斗，有機(jī)層依次用NH4Cl飽和水溶液(150ml，100ml)、NaHCO3飽和水溶液(120ml)和鹽水(120ml)洗滌。為了進(jìn)行鑒定，在這一階段通過于MgSO4上干燥有機(jī)相、過夜和真空除去溶劑分離出標(biāo)題化合物，以定量粗品產(chǎn)率得到(±)順-3-乙酸基-1-[(苯基)(亞芐亞氨基)甲基]-4-苯基氮雜環(huán)丁-2-酮，為紅色玻璃。
(b)于氬氣流下將(a)中獲得的化合物的乙酸乙酯(500ml)溶液小心地轉(zhuǎn)移至2.0L帕爾燒瓶中，其中含有10%披鈀活性炭(6.00g)。用氫氣(4atm)處理該混合物20h，然后通過Celite填塞過濾除去催化劑。液餅在乙酸乙酯(200ml)中漿化，攪拌(10min)并過濾，濾餅用乙酸乙酯(100ml)浸漬，并合并濾液。用10%HCl(300ml)洗滌有機(jī)層，兩層均通過多孔玻璃漏斗過濾以除去白色沉淀(二芐基胺·HCl)，將其用乙酸乙酯(100ml)浸漬。分離各相，并用另一份10%HCl(200ml)洗滌有機(jī)相。用乙酸乙酯(200ml)再萃取公開的10%HCl溶液，并用NaHCO3飽和水溶液(300ml)和鹽水(250ml)洗滌合并的有機(jī)層。有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥、過夜及真空濃縮后產(chǎn)生75ml終體積。冷卻該混合物至4℃，并過濾分離沉淀產(chǎn)物。用己烷(200ml)洗滌濾餅后得到16.12g(自氫化苯酰胺的總產(chǎn)率為78.1%)白色針狀標(biāo)題化合物。mp＝150-151℃。
制備例11(±)-順-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(2-呋喃基)-N-叔丁氧羰基氮雜環(huán)丁-2-酮
(a)基本按制備例10(a)所述方法進(jìn)行，所不同的是用糠醛胺[即2-呋喃基-CH-(N＝CH-2-呋喃基)2]代替了氫化苯酰胺，并反應(yīng)規(guī)模為18.6mmol而不是100mmol。即由糠醛胺(5.00g，18.6mmol)、三乙胺(3.11ml，22.3mmol)和乙酸基乙酰氯(2.30ml，21.4mmol)得到6.192g(Y90.4%)(±)-順-3-乙酸基-1-[(2-呋喃基)(2-呋喃亞甲亞氨基)甲基]-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁-2-酮，為淺紅色漿液。
(b)基本按照制備例10(b)所述的方法，所不同的是產(chǎn)物是通過制備性TLC分離，且以糠醛胺起始量計的反應(yīng)規(guī)模為2.7mmol。即將上述(a)得到的粗產(chǎn)物再溶于乙酸乙酯(50ml)，并加至10%披鈀活性炭(150mg)上。通過制備性TLC(2mm硅膠，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫)純化粗固體后得到386mg(自糖醛胺核心的總產(chǎn)率為65.8%)(±)-順-3-(乙酸基)-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁-2-酮的黃色固體。用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶。m.p.＝118-119℃
(c)將上面(b)得到的化合物(3.78g，19.4mmol)的60ml甲醇溶液與K2CO3(20mg，0.14mmol)一起攪拌90min，用Dowex 50W-X8中和溶液并過濾。濃縮濾液，殘余物溶于80ml無水THF，并與咪唑(1.44g，21.2mmol)和TESCl(3.4ml，20.2mmol)一起攪拌30min。用乙酸乙酯稀釋溶液，并用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。經(jīng)硅膠層析殘余物(用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脫)后得到4.47g(Y86%)(±)-順-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(2-呋喃基)-氮雜環(huán)丁-2-酮，為無色油狀物。
(d)于0℃將(c)的產(chǎn)物(2.05g，7.7mmol)的30ml二氯甲烷溶液與二異丙基乙胺(1.5ml，8.6mmol)、碳酸二叔丁酯(2.0g，9.2mmol)和催化量二甲氨基吡啶(DMAP)一起攪拌。用二氯甲烷稀釋溶液，并用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮，再經(jīng)硅膠層析殘余物(用8∶1己烷/乙酸乙酯洗脫)后得到2.0g(Y70%)標(biāo)題化合物，為蠟質(zhì)固體。
利用如得自假單孢屬的PS-30(Amano lnternational Co.)的脂酶，對(b)中得到的外消旋混合物進(jìn)行酶促水解，得到(3R，4R)-3-羥基-4-(2-呋喃基)-氮雜環(huán)丁-二-酮。使用脂酶P17-30和其它酶的酶促方法公開于我們1993年7月14日遞交的共同未決申請U.S.S.N.092，170中，該文獻(xiàn)并入本文以作參考。
按照(c)和(d)所述方法，由(3R，4R)-3-羥基-4-(2-呋喃基)-氮雜環(huán)丁-2-酮得到(3R，4R)-N-(叔丁氧羰基)-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁-2-酮。
制備例12 (±)-順-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(2-噻吩基)-N-叔丁氧羰基氮雜環(huán)丁-2-酮
(a)基本按照制備例10(a)所述的方法，所不同的是用氫化噻吩酰胺[即2-噻吩基-CH-(N＝CH-2-噻吩基)2]代替氫化苯酰胺。即，由氫化噻吩酰胺(30g，94.7mmol)、噻吩乙胺(15.84ml，114mmol)和乙酸基乙酰氯(11.6ml，108mmol)反應(yīng)得到(±)-順-3-乙酸基-1-[(2-噻吩基)(2-三亞乙基四氨基亞甲亞氨基)甲基]-4-(2-噻吩基)氮雜環(huán)丁-2-酮，為粘性油狀物。
(b)于25℃向(a)中所得產(chǎn)物(0.431g，1.03mmol)于二氯甲烷(2.93ml)的攪拌溶液中一次性加入70%乙酸溶液(0.35ml冰醋酸和0.15ml水)?；亓鞣磻?yīng)混合物，并攪拌2.5h。用50ml二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，然后用兩份75ml碳酸氫鈉飽和水溶液和一份50ml飽和鹽水洗滌。真空濃縮有機(jī)萃取物至一棕色油狀物，溶于微量二氯甲烷，并置于4″×0.5″的硅膠柱上。用10-60%EtOAe于己烷中的梯度溶液洗脫后，得到少極性的副產(chǎn)物和(±)-順-3-乙酸基-4-(2-噻吩基)氮雜環(huán)丁-2-酮(0.154g，Y75%)，為白色固體。
(c)將(b)中得到的產(chǎn)物(2.5g，11.8mmol)溶于甲醇(10ml)，并用碳酸氫鈉飽和水溶液(10ml)處理，于室溫下攪拌所得漿液3h。用乙酸乙酯(20ml)稀釋反應(yīng)，并水(15ml)洗、水相用乙酸乙酯反萃取數(shù)次，合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥和濃縮后，產(chǎn)生黃色固體(Y1.7g)。將該粗產(chǎn)物溶于無水四氫呋喃(20ml)，并在冰/水浴上冷卻溶液至5℃。加入咪唑(752mg，1.1eq)，攪拌5min后，滴加三乙基氯代硅烷(1.85ml，1.1eq)。所得懸浮液于該溫度下攪拌3h;過濾除去固體，水洗(2×20ml)有機(jī)相，然后用MgSO4干燥并濃縮，通過硅膠柱層析純化粗產(chǎn)物(用己烷/乙酸乙酯7∶3)后得到(±)-順-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(2-噻吩基)-氮雜環(huán)丁-2-酮(1.5g，Y45%)，為無色固體，m.p.70-71℃。
替代方法
將(b)的產(chǎn)物(2.0g，9.37mmol)的40ml甲醇溶液與K2CO3(60mg，0.43mmol)一起攪拌30min，用Dowex 50W-X8中和溶液并過濾。濃縮濾液并將殘余物溶于50ml無水THF，于0℃與咪唑(0.85g，11.3mmol)和TESCl(1.9ml，12.5mmol)一起攪拌30min。用乙酸乙酯稀釋溶液，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。再經(jīng)硅膠層析殘余物(用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脫)后得到2.13g(Y86%)無色油狀標(biāo)題化合物。
(d)將(c)所得產(chǎn)物(425.7mg，1.48mmol)溶液溶于二氯甲烷(10ml)，并在冰/水浴上冷卻至5℃。依次用催化量DMAP、二異丙基乙胺(TESCl，0.25ml，1.0eq)及二-叔丁基碳酸酯(388.4mg，1.2eq)處理反應(yīng)，于該溫度攪拌2h后，用碳酸氫鈉飽和水溶液終止反應(yīng)，水洗(5ml)有機(jī)相，用MgSO4干燥，通過一短硅膠塞，并濃縮，得到無色油狀所需產(chǎn)物(525.3mg，Y93%)。
可采用制備9、11(d)和12(d)所述方法制備其它可用于制備本發(fā)明化合物的N-取代的氮雜環(huán)丁酮。下表列出了一些這類氮雜環(huán)丁酮的例子。P為羥基保護(hù)基，如三乙基甲硅烷基、三異丙氧甲硅烷基和乙氧乙基。
制備例13 10-脫氧taxotere
于氬氣環(huán)境下將10-脫乙酸基-7-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ(100mg，0.156mmol)置于燒瓶中并溶于無水四氫呋喃(1.5ml)。冷卻至-40℃，滴加正丁基鋰(1.45M于己烷，0.119ml，0.170mmol)，然后在2min內(nèi)加入(3R，4S)-1-叔丁氧羰基-4-苯基-3-三乙基甲硅烷氧基-2-氮雜環(huán)丁酮(94.2mg，0.25mmol)的四氫呋喃(0.5ml)溶液，立即加熱混合物至0℃并攪拌45min，然后用飽和氯化銨(3ml)終止反應(yīng)?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿。稍锊饪s。硅膠層析(用30%乙酸乙酯的己烷洗脫)后得到10-脫氧-2′，7-雙-O-(三乙基甲硅烷基)taxotere泡沫(125mg，Y76%)。將該化合物(100mg，0.098mmol)立即于-5℃溶于乙腈(2ml)，并用鹽酸(0.037ml，36%，12M)處理。于-5℃攪拌2h，用碳酸氫鈉水溶液終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，并干燥。蒸發(fā)溶劑并進(jìn)行硅膠層析(用75%乙酸乙酯的己烷洗脫)后，得到泡沫狀標(biāo)題化合物(80.5mg，Y80%)。
按照制備例13提供的一般方法，利用合適的漿果赤霉素Ⅲ成分和氮雜環(huán)丁酮成分作為起始物，可制備出其它式(Ⅰa)化合物;下表中列出了其它式(Ⅰa)化合物的例子。應(yīng)當(dāng)理解，盡管下面所示的化合物帶有游離羥基，通過適當(dāng)選擇各種羥基保護(hù)基，2′-、7-或10-位的任何保護(hù)基可被選擇性除去而不影響其它保護(hù)基。
制備例14 雙(甲硫甲基)醚
于0℃，將碘化鈉(8.23g，55.23mmol)，加至1，1′-二氯二甲基醚(3.0g，26.3mmol)的丙酮(100ml)溶液中，并于該溫度下攪拌20min。然后將硫代甲醇鈉(1.84g，5.23mmol)分四次加入，所得溶液再攪拌1h。通過Celite填塞過濾異源溶液，濾液真空濃縮，殘余油在乙酸乙酯和碳酸氫鈉飽和水溶液之間分配，除去水層并用乙酸乙酯進(jìn)一步萃取。合并后的有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液和5%硫代硫酸鈉水溶液的1∶1(V/V)混合物處理。有機(jī)相用鹽水洗滌，用NaSO4干燥并真空濃縮。通過快速層析(30∶1，己烷∶乙酸乙酯)純化殘余物后得到1.9g黃色油狀物，經(jīng)用Kugelrhor裝置(120-130℃，20mmHg)蒸餾后得到1.5g無色油狀標(biāo)題化合物
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ4.73(4H，s)，2.15(6H，s).
制備例15 二芐基甲硫基甲基磷酸酯
于室溫下向雙(甲硫基甲基)醚(30mg，2.34mmol)和分子篩(300mg)的THF(100ml)溶液中加入磷酸二芐酯(2.74g，9.85mmol)和N-碘琥珀酰亞胺(608mg，2.71mmol)，攪拌溶液4h。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，并通過Celite過濾。用碳酸氫鈉飽和水溶液和5%硫代硫酸鈉水溶液的1∶1(V∶V)混合物處理濾液。無色有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，NaSO4干燥，并真空濃縮，得到600mg(69%)標(biāo)題化合物
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ7.35(10H，s)，5.29(2H，d，J＝12.2 Hz)，5.08(4H，dd，J＝8.0，1.0 Hz)，4.68(2H，s)，2.10(3H，s).
提供以下實(shí)施例是為了說明本發(fā)明代表性化合物的合成，而不要以為是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明技術(shù)人員利用這些方法，不經(jīng)過過分實(shí)驗(yàn)就可合成屬于本發(fā)明但未具體公開的化合物。
實(shí)施例1 7-O-膦酰氧甲基紫杉酚及其單鈉鹽
(a)制備7-O-甲硫基甲基紫杉酚
于0℃，向劇烈攪拌的紫杉酚(0.85g，1mmol)和二甲硫(0.72ml，8mmol)于無水乙腈(10ml)中的混合物中加入過氧化苯甲酰(0.98g，4mmol)。攪拌于0℃繼續(xù)進(jìn)行2.5h。通過甲苯∶丙酮(2∶1，V/V)溶劑系統(tǒng)(Rftax＝0.38，Rfprod＝0.64)中的硅膠TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，當(dāng)觀察到高極性產(chǎn)物的形成時，通過利用Rotavapor，于30℃蒸發(fā)溶劑終止反應(yīng)。對反應(yīng)混合物進(jìn)行TLO分析發(fā)現(xiàn)存在部分未反應(yīng)的紫杉酚和2′，7-O-雙(甲硫基甲基)紫杉酚。在硅膠60(40-63μm)EM Science(100ml)[柱直徑2in.，利用乙酸乙酯∶己烷(1∶1，V/V)溶劑系統(tǒng)(Rf prod＝0.34)]上通過快速柱層析從反應(yīng)混合物中分離出標(biāo)題化合物。從級分12-18(每一級分約20ml)中回收產(chǎn)物(552mg，Y60%)。
MS(FAB/matrix NOBA，NaI，KI)[M+H]+，m/z 914;+，m/z 936;[M+K]+，m/z 952
Elemental AnalysisC64.28(calc.64.39)，H5.85(calc.6.07)，N1.46(calc.1.53)
UV(MeOH)λmax＝226 nm，E(1%/1cm)＝150，A＝0.2653
IR(KBr)3432，3066，2940，1726，1668，1602，1582，1514，1484，1452，1372，1242，1178，1142，1108，1068，1026，990，916，884，852，802，774，710，608，570，538，482 cm-1.
1H-NMR(CDCl3)δ1.15(3H，s)，1.19(3H，s)，1.73(3H，s)，1.79(H，s)，1.90(3H，d)，2.09(3H，s)，2.16(3H，s)，2.29(2H，d)，2.35(3H，s)，2.77(H，m)，3.70(H，d)，3.83(H，d)，4.17(H，d)，4.26(H，m，overlaps with H，d)，4.63(2H，t)，4.77(H，dd)，4.91(H，d)，5.65(H，d)，5.77(H，dd)，6.16(H，dd)，6.48(H，s)，7.07(H，d)，7.29-7.50(10H，m)，7.57(H，m)，7.73(2H，d)，8.08(2H，d).
(b)制備7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚
將N-碘琥珀酰亞胺(45mg，0.2mM)和磷酸二芐酯(55mg，0.2mM)的無水四氫呋喃(4ml)溶液加到7-O-甲硫甲基紫杉酚(119mg，0.13mM)和粉化分子篩4
(約120mg)的無水1，2-二氯乙烷(5ml)混合物中。于室溫下攪拌反應(yīng)混合物16h，在甲苯∶丙酮(2∶1，V/V)系統(tǒng)(Rfprod＝0.48)中通過TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。通過Celite 545過濾掉分子篩，并用二氯甲烷(100ml)萃取濾液。用1%硫代硫酸鈉溶液(約100ml)、0.5M碳酸氫鈉(100ml)及鹽水洗滌有機(jī)層。通過Whatman相分離器過濾萃取物，并蒸發(fā)溶劑。在硅膠60快速層析柱上純化(二氯甲烷∶乙酸乙酯，2∶1(V/V))后得到7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(41.5mg)。
(c)制備7-O-膦酰氧甲基紫杉酚及其單鈉鹽
將7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(41.5mg)溶于乙酸乙酯(5ml)，并加入10%披鈀炭(20mg)。于室溫及40 pSI(275KPa)下氫化1h。于氯仿∶甲醇∶水(120∶45∶8，V/V)中通過TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。通過制備性TLC(20×20×0.05Cm硅膠板于分析系統(tǒng)中)純化后得到7-O-膦酰氧甲基紫杉酚(26mg，75%)。
由于在硅膠純化過程中觀察到7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚的分解，已對氫化方法進(jìn)行了改進(jìn)。即，將7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚粗提物不經(jīng)任何純化進(jìn)行氫化。粗提物的氫化于60 PSI(400KPa)進(jìn)行24h。
將7-O-膦酰氧甲基紫杉酚(70mg)溶于5ml丙酮-水(1∶1)溶液中，并用水稀釋至50ml。加入無水碳酸氫鈉(18mg，1.2eq.)，于室溫下利用Rotavapor蒸發(fā)丙酮，并冷卻干燥剩余的水溶液。于水∶乙腈(70∶30，V/V)系統(tǒng)中通過C18逆相柱層析純化7-O-膦酰氧甲基紫杉酚單鈉鹽粗品。在乙腈0.05M乙酸銨緩沖液[45∶55，V/V，PH＝7，Rt＝2.09min]中通過分析性HPLC(15Cm，Jones C18柱，1ml/min，α＝230/270nm)監(jiān)測洗脫液。合并含有所需產(chǎn)物的級分，蒸發(fā)乙腈，并冷凍干燥剩余水溶液，得到7-O-膦酰氧甲基紫杉酚單鈉鹽(112mg)。
MS(FAB)[M+H]+，m/z986;[M+Na]+，m/z 1008
UV(MeOH)λmax＝230nm，E(1%/1cm)＝248
IR(KBr)3430，3066，2948，1724，1652，1602，1580，1518，1486，1452，1372，1316，1246，1178，1154，1108，1070，1000，982，946，856，802，776，710，628，538cm-1.
1H-NMR(acetone-d6/D2O)δ8.05(2H，d)，7.92(2H，d)，7.65(1H，dd)，7.58-7.35(9H，m，overlap)，7.23(1H，dd)，6.38(1H，s)，6.08(1H，t)，5.65(1H，d)，5.60(1H，d)，5.10(1H，br.s)，4.99(1H，d)，4.97(1H，br.s)，4.80(1H，d)，4.28(1H，dd)，4.11(2H，s)，3.79(1H，d)，2.94(1H，m)，2.35(3H，s)，2.35-2.10(1H，m)，2.13(3H，s)，1.95(3H，s)，1.84(1H，m)，1.67(3H，s)，1.13(6H，s，overlap).
實(shí)施例2 制備7-O-膦酰氧甲基紫杉酚的替代方法
(a)制備2′-O-(芐氧羰基)紫杉酚
于室溫下，向紫杉酚(150mg，0.176mmol)、N，N-二異丙基乙胺(93μl，0.534mmol，3eq.)及無水二氯甲烷(4ml)的攪拌溶液中加入氯代苯甲酸芐基酯(75μl，0.525mmol，3eq.)。于室溫攪拌反應(yīng)混合物3h，濃縮至2ml，并在硅膠柱上純化(利用1∶1的乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到白色粉末狀標(biāo)題化合物(150mg，Y86%)。MP140-150℃(分解)。
(b)制備2′-O-(芐氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚
向2′-O-(芐氧羰基)紫杉酚(4.935g;5.0mmol)的無水乙腈(80ml)冷凍溶液(干冰-CCl4;-30℃浴溫)中依次加入二甲硫(3.6ml;40mmol)和過氧化苯甲酰(4.9g;20.247mmol)。于-30℃維持10min后移去冷浴，并將反應(yīng)混合物于室溫下劇烈攪拌2h。然后用乙酸乙酯稀釋混合物至200ml，并用水和鹽水洗滌。MgSO4干燥有機(jī)層，蒸發(fā)溶劑后的殘余物于真空下維持18h，以除去作為反應(yīng)前產(chǎn)物存在的任何二甲亞砜。在硅膠柱上純化殘余物，首先用乙酸乙酯∶己烷(1∶2)作為洗脫劑以除去少極性雜質(zhì)，然后以乙酸乙酯∶己烷(1∶1)作為第二洗脫劑以得到泡沫狀所需標(biāo)題化合物。經(jīng)用無水乙醚研磨和過濾后，得到標(biāo)題化合物的松散固體(5.0g，95%)。MP120-122℃。
MS(FAB)∶[MH]+，m/z1048;[M+Na]+，m/z1070;[M+K]+，m/z108
IR(KBr)3440，3066，1750，1722，1664，1602，1583，1538 cm-1.
NMR(CDCl3)δ1.177(3H，s)1.236(3H，s)1.745(3H，s)2.023(3H，s)2.121(3H，s)2.162(3H，s)2.436(3H，s)3.887(H，d)4.134(H，d)4.197(H，d)4.295(H，m)4.964(H，d)5.161(2H，d)5.450(H，d)5.703(H，d)5.981(H，dd)6.257(H，t)6.541(H，s)6.920(H，d，NH)7.322-8.22(15H，m).
該標(biāo)題化合物也可通過下面的替代方法制備
向2′-O-(芐氧羰基)紫杉酚(2.0g;2.0263mmol)的無水二甲亞砜(10ml)溶液中滴加乙酸酐(10ml)。于室溫及N2環(huán)境下攪拌所得反應(yīng)混合物18h，用乙酸乙酯(100ml)稀釋，并小心地用冷6%碳酸氫鈉溶液(6×30ml)、冷水(6×30ml)和鹽水洗滌。干燥有機(jī)層(MgSO4)并蒸發(fā)溶劑后得到殘余物，通過硅膠柱層析純化，并用二氯甲烷、二氯甲烷-5%乙腈和二氯甲烷-10%乙腈洗脫后得到所需標(biāo)題化合物(1.86g，87.7%)。該化合物與通過上述二甲硫/過氧化苯甲酰法獲得的產(chǎn)物相同。
(c)制備2′-O-(芐氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚
向2′-O-(芐氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚(5.0g;5.5396mmol)的無水1，2-二氯乙烷(120ml)溶液中加入活化的粉狀4
分子篩(5.0)，于室溫下向該混合物中滴加N-碘琥珀酰亞胺(1.61g，7.1632mmol)和磷酸二芐基酯(1.97g;7.1632mmol)的混合物于無水四氫呋喃(90ml)中的溶液。于室溫下劇烈攪拌30min后，在Celite上過濾反應(yīng)混合物，將濾液蒸發(fā)至干，得到紅色殘余物。將其溶于乙酸乙酯(100ml)，用6%冷NaHSO3溶液(2×50ml)、6%冷NaHCO3溶液(2×50ml)和鹽水(1×50ml)洗滌。干燥有機(jī)層(MgSO4)，蒸發(fā)溶劑后得到一固體，再經(jīng)用無水乙醚研磨和過濾后得到象牙色固體狀標(biāo)題化合物(5.9g，97%)。MP124-127℃。
MS(FAB)[MH]+，m/z1278;[M+Na]+，m/z1301;[M+K]+，m/z1316
IR(KBr)3430，3066，3032，1750，1726，1664，1582，1532cm-1
NMR(CDCl3)δ1.160(3H，s)1.703(3H，s)1.985(3H，s)2.164(3H，s)2.420(3H，s)3.854(H，d)4.151(H，d)4.216(H，m)4.298(H，d)4.873(H，d)5.043(6H，m)5.140(2H，d)5.417(H，d)5.670(H，d)5.971(H，dd)6.241(H，t)6.317(H，s)6.912(H，d，NH)7.280-8.115(25H，m).
(d)制備7-O-膦酰氧甲基紫杉酚
向2′-O-(芐氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(6.0g，4.7095mmol)的乙酸乙酯(120ml)溶液中加入10%pd/c(6.0g)，并將混合物于60psi(400KPa)氫化24h。通過Celite過濾反應(yīng)混合物并蒸發(fā)溶劑后，得到4.07g粗殘余物。經(jīng)-短硅膠柱純化(依次用氯仿10%、20%和40%甲醇洗脫)后得到白色固體狀標(biāo)題化合物(3.2g，71%)，MP155-158℃。
該產(chǎn)物與可靠樣品具有同樣的Rf(TLC)和同樣的保留時間(HPLC)。
MS(FAB)[MH]+，m/z964;[M+Na]+，m/z986;[M+K]+，m/z1002;[M+K++Na+-H]+，m/z1024;[M+2K-H]+，m/z1040
UV(MeOH)∶λmax＝230nm，E(1%/1cm)＝252.5
IR(KBr)3432，3066，2992，1722，1648，1602，1580，1522，1488，1452，1372，1316，1246，1178，1154，1110，1070，1000，980，946，854，802，776，710，628，538 cm-1.
1NMR(acetone-d6/D2O)，δ1.08(3H，s)，1.10(3H，s)，1.63(3H，s)，1.88(3H，s)，1.96(H，m)，2.13(3H，s)，2.32(3H，s)，2.89(H，m)，3.76(H，d)，4.19(H，m)，4.89(H，dd)，5.09(H，dd)，5.55-5.60(2H，overlapping d′s)，6.04(H，t)，6.32(H，s)，720(H，t)，7.34-7.67(10H，overlapping m′s)，7.87(2H，dd)，8.02(2H，dd).
實(shí)施例3 2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚
(a)制備2′-O-(乙氧羰基)紫杉酚
向紫杉酚(4.35g，5.1mmol)的無水二氯甲烷(51ml)溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(2.67ml，15.3mmol)以及氯代甲酸乙酯(1.46ml，15.3mmol)，該反應(yīng)混合物于0℃攪拌2h，再于室溫繼續(xù)攪拌1h。用乙酸乙酯(400ml)稀釋反應(yīng)混合物后，用NaHCO3飽和溶液(2×30ml)及鹽水(30ml)洗滌有機(jī)相。所得有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥后產(chǎn)生粗標(biāo)題化合物(93%)，它不經(jīng)進(jìn)一步純化而直接用于下一步驟。
MS(FAB/NOBA，NaI，KI)[M+H]+，m/z926;[M+Na]+，m/z948;[M+K]+，m/z964
HRMS(FAB/NOBA，CsI/Gly external reference)[M+H]+m/z 926.3588 observed，C50H56NO16，calculated value926.3599(deviation△＝1.2 ppm)
1HNMR(CDCl3)δ1.13(3H，s)，1.23(3H，s)，1.30(3H，t)，1.67(3H，s)，1.92(3H，s)，2.21(3H，s)，2.37(H，d)，2.45(3H，s)，2.54(H，m)，3.80(H，d)，4.15-4.32(4H，m′s overlapping)，4.43(H，dd)，4.96(H，d)，5.42(H，d)，5.68(H，d)，5.98(H，dd)，6.28(2H，m′s，overlapping)，7.00(H，d)，7.34-7.59(11H，m′s overlapping)，7.74(2H，d)，8.12(2H，d).
替代方法
將紫杉酚(5.40g，6.324mmol)的無水二氯甲烷(63ml)溶液冷卻至0℃，并用凈N，N-二異丙基乙胺(3.30ml，3equiv)處理，然后在5min內(nèi)滴加凈氯代甲酸乙酯(1.81ml，3equiv)。利用TLC(50%乙酸乙酯的己烷)監(jiān)測反應(yīng)，0℃2h及室溫16h后，反應(yīng)完畢，用乙酸乙酯(300ml)稀釋桔黃色溶液，并用NaHCO3飽和水溶液(3×75ml)和鹽水(75ml)洗滌。干燥(MgSO4)及蒸發(fā)后，得到粗標(biāo)題化合物，它通過沉淀純化加入二氯甲烷(約100ml)，冷卻，加入己烷(約60ml)至混濁點(diǎn)。在水中冷卻數(shù)小時后，過濾收集固體。產(chǎn)率5.17g(88%)。
替代方法
于氬氣環(huán)境下在火焰干燥的單頸3L燒瓶中將紫杉酚(99.0g，115.9mmol)溶于1.350ml無水二氯甲烷。冷卻溶液至-10℃，緩慢加入N，N-二異丙基乙胺(52.4g，405.7mmol)(加入時間約3min)，接著加入ClCO2Et(31.45g，289.8mmol;加入時間約15min)。于-4℃攪拌所得混合物。通過TLC判斷反應(yīng)未完全，加入另一份N，N-二異丙基乙胺(2.62g，20.28mmol)及ClCO2Et(2.20g，20.28mmol)，并于-4℃繼續(xù)攪拌3h。通過TLC來測出起始物。用乙酸乙酯(1.5l)稀釋該冷混合物，并轉(zhuǎn)移至一分離漏斗，依次用5%KHSO4(2×500ml)、水(1×500ml)、5%KHSO4(1×500ml)、水(1×500ml)、飽和NaHCO3(2×500ml)和鹽水(2×500ml)洗滌，再經(jīng)干燥(MgSO4)和真空除去溶劑后，得到147g粗產(chǎn)物。將其溶于熱的二氯甲烷(800ml，浴溫42℃)并在攪拌下滴加己烷(530ml)，同時維持該溫度。于室溫下結(jié)晶混合物3h，然后于冷室(0℃)中過夜。過濾收集重的白色結(jié)晶，并用己烷/CH2Cl21∶1(V/V)(2×200ml)。于吸濾器上干燥1h后，真空過夜干燥(約1.0mmHg)，得到95.7g(89%)標(biāo)題化合物(通過HPLC測得的均-性指數(shù)為98.5%)。
(b)制備2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚
向2′-O-(乙氧羰基)紫杉酚(4.38g，7.7mmol)的無水二甲亞砜(12.5ml)溶液中加入乙酸酐(12.5ml)。于室溫下攪拌反應(yīng)混合物24h，然后用乙酸乙酯(500ml)稀釋，用NaHCO3飽和水溶液(3×40ml)和水(2×40ml)洗滌。所得有機(jī)層于MgSO4上干燥，真空蒸發(fā)溶劑至干燥。通過硅膠層析(40%乙酸乙酯的己烷)純化殘余物后，得到所需標(biāo)題化合物(4.39g，94%)。
MS(FAB/NOBA，NaI，KI)[M+H]+，m/z986;[M+Na]+，m/z 1008;[M+K]+，m/z 1024
HRMS(FAB/NOBA，CsI/Gly external reference)[M+H]+m/z986.3646(calculated value986.3633，deviation △＝1.3ppm)
1HNMR(CDCl3)δ1.18(3H，s)，1.20(3H，s)，1.30(3H，s)，1.75(3H，s)，1.84(H，m)，2.09(3H，s)，2.11(3H，s)，2.16(3H，s)，2.24(H，d)，2.37(H，d)，2.45(3H，s)，2.80(H，m)，3.68(H，d)，4.08-4.33(5H，m，overlapping)，4.65(2H，s)，4.96(H，d)，5.43(H，d)，5.69(H，d)，5.98(H，dd)，6.26(H，t)，6.55(H，s)，7.00(H，d)，7.32-7.61(11H，m，overlapping)，7.73(2H，dd)，8.11(2H，dd).
替代方法
將2′-O-(乙氧羰基)紫杉酚(2.260g，2.4406mmol)溶于無水二甲亞砜(6ml)，并于室溫下一次性加入乙酸酐(6ml)。通過HPLC(C18分析柱;60%乙腈-40%10mM磷酸銨緩沖液，PH6)監(jiān)測反應(yīng)。30h后，用乙酸乙酯(250ml)稀釋溶液，并用NaHCO3水溶液(3次)、水和鹽水洗滌。MgSO4干燥及過濾后，將粗產(chǎn)物在硅膠上層析(40%乙酸乙酯的己烷)，得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物(2.030g，91%)，通過HPLC測得的純度為90%。將部分通過第二柱(5%乙腈的二氯甲烷)純化后得到純度為97%(HPLC)的物質(zhì)。
制備2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚的替代方法
于-40℃將2′-O-(乙氧羰基)紫杉酚(4.170g，4.503mmol)溶于無水乙腈(68ml)，加入二甲硫(3.2ml，44.10mmol)及過氧化苯甲酰(4.400g，18.24mmol)。將該混合物于冰浴上，并于0℃攪拌，通過TLC(40%乙酸乙酯的己烷)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。3h后檢測不到起始物，加入乙酸乙酯(250ml)和碳酸氫鈉飽和水溶液(100ml)。有機(jī)相用碳酸氫鈉、水和鹽水進(jìn)一步洗滌，然后在MgSO4上干燥并過濾。通過硅膠快速層析(4%乙腈的二氯甲烷)純化殘基物后，得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物(2.571g，58%)。通過HPLC測得的純度大于97%。NMR光譜與上面報導(dǎo)的相同。
制備2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚的替代方法
將2′-O-(乙氧羰基)紫杉酚(49.3g，53.2mmol)置于火焰干燥的1L單頸燒瓶中，并于室溫下溶于無水乙腈(500ml)。利用注射器快速加入甲基硫(39.1ml，0.532mol)。于冰/鹽浴上冷卻攪拌的反應(yīng)混合物至-16℃，一次性加入固體過氧化苯甲酰(51.6g，0.213mol)(反應(yīng)完全需要整整4個當(dāng)量)。繼續(xù)攪拌30分鐘，其間溫度升至約-10℃。在此期間反應(yīng)介質(zhì)保持異相(過氧化苯甲酰未全部溶解)。將冷卻浴改為冰/水，溫度升至0℃，且剩余的過氧化苯甲酰在升溫后約5min溶解。于0℃攪拌另2.5h后通過TLC判定反應(yīng)完全。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后溶液體積減至約200ml，將其轉(zhuǎn)移至分離漏斗中，用庚烷(5×500ml)洗滌。用乙酸乙酯(1.5l)稀釋乙腈層，并依次用3∶1的飽和NaHCO3/5%K2CO3(V/V)混合物(2×500ml)、飽和NaHCO3(2×500ml)、半飽和鹽水(1×500ml)和鹽水(1×500ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空除去溶劑后，得到67.0g粗產(chǎn)物。將其溶于丙酮(200ml)、于水浴中加熱至40℃，在攪拌下滴加己烷，直至觀察到混濁(400ml)。結(jié)晶混合物于室溫下放置3h，然后轉(zhuǎn)移至冷室(0℃)放置過夜(16h)。形成厚餅，過濾收集固體，并用己烷/丙酮3∶1(V/V)(2×50ml)。所得白色結(jié)晶在吸濾器上干燥1h，然后真空(～0.5mmHg)過夜，得到47.5g(Y91%)標(biāo)題化合物(通過HPLC測得的均一性指數(shù)＝94.8%)。
(c)制備2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚
于室溫下將N-碘代琥珀酰亞胺(1.953g，8.65mmol)和磷酸二芐基酯(2.41g，8.65mmol)的四氫呋喃溶液加至2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚(5.677g，5.76mmol)和4
分子篩(5.7g)于二氯甲烷(100ml)的混合物中。于室溫下攪拌反應(yīng)混合物40min。之后通過TLC測得反應(yīng)完全。通過Celite過濾反應(yīng)混合物，經(jīng)真空過濾后得到一棕色殘余物，將其用乙酸乙酯(800ml)稀釋，用1%Na2SO4(2×80ml)及5%鹽水(2×50ml)洗滌有機(jī)層。真空濃縮并干燥有機(jī)相。經(jīng)層析所得殘余物(50-60%乙酸乙酯的己烷)后得到所需標(biāo)題化合物。
MS(FAB/NOBA，NaI，KI)[M+Na]+，m/z1238;[M+K]+，m/z1254
HRMS(FAB/NOBA，CsI/Gly external reference)[M+Na]+m/z1216.4291(C65H71NO20P calculated value1216.4307;deviation △＝1.3ppm)
1HNMR(CDCl3)，δ1.18(3H，s)，1.21(3H，s)，1.30(3H，t)，1.67(6H，s)，1.80(H，s)，1.93(H，m)，1.99(3H，d)，2.18(3H，s)，2.23(H，m)，2.38(H，m)，2.45(3H，s)，2.80(H，m)，3.86(H，d)，4.14-4.32(5H，m′s，overlapping)，4.88(H，d)，5.00-5.07(4H，m′s，overlapping)，5.42(H，d)，5.68(H，d)，5.96(H，dd)，6.26(H，t)，6.33(H，s)，6.95(H，d)，7.30-7.61(11H，m′s overlapping)，7.75(2H，dd)，8.12(2H，dd).
替代方法
向2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚(350mg，0.355mmol)的無水四氫呋喃(8ml)溶液中加入N-碘代琥珀酰亞胺(120mg，0.532mmol)和磷酸二芐基酯(148mg，0.532mmol)的無水四氫呋喃(5ml)溶液。利用HPLC(C18柱;70%乙腈，30%10mM磷酸銨，PH6)。2h后，測得的起始物少于5%，反應(yīng)終止。用乙酸乙酯(75ml)稀釋溶液，用1%二硫化鈉水溶液(2×50ml)和鹽水(50ml)洗滌。于MgSO4上快速干燥并過濾后，蒸發(fā)溶劑。經(jīng)硅膠快速層析(45%乙酸乙酯/己烷)后得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物(281mg，65%)。HPLC分析測得的純度約為95%。
替代方法
將粉碎的4
分子篩置于火焰干燥的1L-頸燒瓶中，然后將其與-真空管(約0.5mmHg)相連。用加熱槍加熱分子篩始10min，同時用手振蕩。真空冷卻后，向瓶中通氣氬氣，并加入2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚(37.5g，38.03mmol)，接著加入磷酸二芐基酯(14.8g，53.24mmol)和THF(400ml)。于室溫下用磁力攪拌器劇烈攪拌非均質(zhì)混合物15min。在另一火焰干燥燒瓶中，于氬氣下將N-碘代琥珀酰亞胺(10.7g，47.54mmol)溶于THF(50ml)(在制備NIS溶液過程中，轉(zhuǎn)移液體，并在反應(yīng)過程中用鋁箔蓋住容器以避光)，然后用注射器將其緩慢(10min)加至反應(yīng)混合物中，用5ml THF洗滌含有NIS的燒瓶，并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)混合物中，室溫下攪拌2h。TLC分析證實(shí)無起始物存在。深紅色溶液經(jīng)CeliteR填塞直接過濾到劇烈攪拌的兩相混合物中，其中含有乙酸乙酯(500ml)、10%硫代硫酸鈉(300ml)和飽和碳酸氫鈉(200ml)。幾分鐘后紅色消失，產(chǎn)生無色溶液，用EtoAc(～100ml)洗滌CeliteR塞，并將兩液體層轉(zhuǎn)移至分離漏斗。用1L EtoAc稀釋有機(jī)層，分離各層，并用飽和NaHCO3和5%K2CO3的混合物(3∶1V/V，2×500ml)、飽和NaHCO3(2×500ml)、半飽和鹽水(1×500ml)和鹽水(1×500ml)洗滌有機(jī)層。萃取物用無水MgSO4干燥并過濾。通過攪拌于室溫下用5.0g中性Norit(活性炭)處理15min。經(jīng)CeliteR過濾及減壓除去溶劑后得到52g粗產(chǎn)物。將其溶于甲苯/二氯甲烷(280ml/25ml)，并滴加己烷(20ml)。室溫放置3h后，結(jié)晶混合物于0℃放置過夜。燒瓶壁上形成淺黃色固體。棄去母液后，用甲苯(50ml)研磨殘余物，過濾，用甲苯洗滌，并抽濾干燥30min，然后轉(zhuǎn)移至裝有DrieriteR的干燥器中，并進(jìn)一步真空(20.5mmHg)干燥4h，得到24.4g(Y53%)標(biāo)題化合物(通過HPLC測得均一性指數(shù)＝95.9%)。母液蒸發(fā)干燥，用甲苯(100ml)研磨，過濾，用甲苯洗滌，并在吸濾器上干燥30min。于上述干燥器上干燥后得到12.5g(Y27%)相同產(chǎn)物，(通過HPLC測得均一性指數(shù)＝97.1%)。
(d)制備2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚;其單鈉鹽，單鉀鹽，三乙胺鹽，精氨酸鹽，賴氨酸鹽，乙醇胺鹽，N-甲基葡聚胺鹽和三乙醇胺鹽
向2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(1.23g，1.01mmol)的無水乙酸乙酯(40ml)溶液中加入10%披鈀炭(428mg，10%，0.404mmol)。在連續(xù)振蕩條件下氫化(60psi＝400KPa)24h，通過Celite過濾固體，然后用乙酸乙酯數(shù)次浸泡Celite。濃縮濾液后得到游離酸形式標(biāo)題化合物(1.01g，通過HPLC判定純度為80%)。下一步通過制備性C-18柱層析除去雜質(zhì)。
MS(FAB/NOBA，NaI，KI)[M+Na]+，m/z1058;[M+K]+，m/z1074;[M+2Na-H]+，m/z1080;[M+Na+K-H]+，m/z1096;[M+2K-H]+，m/z1112
HR-MS(FAB/NOBA，CsI/Gly，external reference)[M+Na]+，m/z1058.3163(C51H58NO20PNa calculated value1058.3188;deviation △＝2.3 ppm)
1H NMR(acetone-d6/D2O)δ1.13(3H，s)，1.21(3H，s)，1.66(3H，s)，1.87(H，m)，1.93(3H，s)，2.14(3H，s)，2.18(H，m)，2.44(3H，s)，2.95(H，m)，3.81(H，d)，4.12(2H，s)，4.15-4.27(3H，m′s overlapping)，4.92-4.99(2H，br.m′s overlapping)，5.15(H，br.s)，5.48(H，d)，5.61(H，d)，5.84(H，dd)，6.07(H，t)，6.36(H，s)，7.25(H，t)，7.28-7.69(10H，m′s overlapping)，7.89(2H，dd)，8.08(2H，dd)，8.86(H，d).
替代方法
在披鈀炭(10%W/W，150mg)存在下于60psi(400KPa)帕氏振蕩器中氫化2′-O-(乙氧羰基)-7-O-(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚(490mg，0.402mmol)的乙酸乙酯(20ml)溶液。通過TLC和HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，當(dāng)檢測不到任何起始物或中間產(chǎn)物(推測為磷酸-芐基酯)時(26h)，通過Celite過濾懸浮液，并蒸發(fā)干燥。HPLC分析測得的純度為88-92%。
替代方法
于0℃攪拌條件下將下面所述的2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙胺鹽(5.4g，4.75mmol)在EtoAc(100ml)和5%NaHSO4(45ml)之間劇烈分配30min。分離出水層，用EtoAc(20ml)萃取。合并后的EtoAc層用半鹽水(25ml)和鹽水(25ml×2)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和過濾后，得到酸(～4.75mmol)的EtoAc(～150ml)溶液。然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上干燥該EtoAc溶液后得到3.75g(Y95%)游離酸形式的標(biāo)題化合物。經(jīng)HPLC分析測得的均一性指數(shù)為96.1%。
單鈉鹽制備如下
利用聲波將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚樣品(1.6g，1.55mmol)溶于乙腈(30ml)。用水(30ml)稀釋該溶液，并加入1.1M NaHCO3溶液(2.11ml，2.32mmol)，振蕩和聲波交替處理后得到一溶液(5-20min)。將該部分乳狀溶液加到C-18柱上，用2柱體積的水洗滌，然后用25%乙腈/水洗脫單鈉鹽。收集合適的級分，蒸發(fā)乙腈并冷凍干燥水相，得到標(biāo)題化合物的單鈉鹽(850mg，約50%)，HPLC純度為97%。
MS(FAB/NOBA，NaI，KI)[M+Na]+，m/z1180
HR-MS(FAB/NOBA，CsI/Gly external reference)+，m/z 1080.2968(C51H57NO20PNa2calculated value1080.3007;deviation D＝3.6 ppm)
Elemental analysisC52.65(calc.56.72)，H5.06(calc.5.23)，N1.20(calc.1.30)，Na2.74(calc.2.12)
IR(KBr)3430，3066，2988，1746，1722，1660，1602，1582，1526，1488，1452，1374，1246，1178，1150，1108，1070，1052，1026，1002，966，912，834，792，776，710，628，538 cm-1.
1H-NMR(DMSO-d6，D2O，acetone-d6)δ1.10(6H，s)，1.23(3H，t)，1.64(3H，s)，1.70(H，m)，1.90(3H，s)，1.99(H，m)，2.14(3H，s)，2.37(3H，s)，2.98(H，m)，3.74(H，d)，4.07(2H，s)，4.13-4.26(3H，m，overlapping)，4.80(H，br.dd)，4.97(H，d)，5.09(H，br.t)，5.44(H，d)，5.55(H，d)，5.99(H，t)，6.34(H，s)，7.22(H，t)，7.43-7.69(10H，m，overlapping)，7.92(2H，dd)，8.06(2H，dd).
鈉鹽也可通過如下方法制備
于室溫攪拌條件下用乙基己醇鈉(87.5mM于EtoAc，1.0ml，0.0875mmol)溶液處理2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚粗品(89%;70mg，0.060mmol)的EtoAc(2ml)。室溫下攪拌1h后，加入己烷(1.2ml)至混濁點(diǎn)，于-20℃保存2h，通過精細(xì)濾紙過濾細(xì)無孔粉末(有一定困難，很慢)，得到45mg(70%)鈉鹽。通過HPLC測得的純度為95.2%，它含有少量乙基己酸(NMR)。
三乙醇胺鹽按下法制備
將得自氫化的粗品(89%，HPLC)2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚(0.69g，0.593mmol，校正雜質(zhì)后)溶于乙酸乙酯(10ml)，并緩慢攪拌，同時滴加三乙醇胺溶液(0.11M于EtoAc，使用5.1ml，0.95eq)。40℃消化所得乳狀溶液2h，然后在精細(xì)濾紙上過濾，用冷EtoAc浸泡。產(chǎn)生499mg(80%)無孔、細(xì)粉、無靜電粉末，于真空過夜干燥。HPLC純度為96.6%(C-18，45%5mM Q12+10mM磷酸銨，PH6，55%乙腈)。NMR光譜(D2O/丙酮/DMSO)顯示出乙酸乙酯軌跡，且無其它凈切割雜質(zhì)，分析為2-3X水合物。
由另一實(shí)驗(yàn)中附帶得到的三乙醇胺鹽通過以下步驟進(jìn)一步純化。將三乙醇胺鹽(約2g)溶于30%乙腈/水。在輕微的氮?dú)鈮毫ο峦ㄟ^C18柱(Bakerbend)洗脫該溶液，該柱具有20%-40%乙腈于水的梯度。收集含有所需三乙醇胺鹽的級分;通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈。冷凍水溶液，過夜凍干后得到1.4g三乙醇胺鹽，純度為97.5%。
于0℃劇烈攪拌條件下，將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙胺鹽(3.0g，2.64nnol)在EtoAc(60ml)和5%NaHSO4(30ml)之間分配15min。分離水層并用EtoAc(10ml)萃取、用鹽水(15ml)洗滌合并的EtoAc后，Na2SO4干燥，過濾，得到酸(～2.64mmol)的EtoAc(～70ml)溶液。于室溫劇烈攪拌下，在5分鐘內(nèi)向該EtoAc溶液中滴加N(CH2CH2OH)3(0.35ml，2.64mmol)。所得懸浮液再攪拌1h后過濾，用EtoAc(15ml×2)洗滌，真空干燥，得到2.8g三乙醇胺鹽(89%)。HPLC分析顯示其均一性指數(shù)為98.7%;m.p.＞157℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C56H73N2O23P·2.0 H2O·0.3
EtoAcC，55.60;H，6.48;N，2.27;KF(H2O)，2.92.
Found55.94;H，6.59;N，2.43;KF(H2O)，3.50.
三乙胺鹽制備如下
于室溫下向2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(10g，8.23mmol)的EtoAc(350ml)溶液中加入10%披鈀碳(2g，20%)。通過抽空氣及通入氬氣使所得懸浮液脫氣。重復(fù)該方法兩次。然后以氫氣代替氬氣進(jìn)行同樣的脫氣步驟。于室溫及氣球氫氣壓力(每平方英寸2-3磅)下劇烈攪拌所得懸浮液16h。抽掉氫氣，按同樣方法用氬氣脫氣三次。所得懸浮液通過Celite填空過濾。在劇烈攪拌下向該均勻?yàn)V液中于5min內(nèi)緩慢加入Et3N(8.23mmol，1.14ml)，所得白色細(xì)懸液再攪拌30min，用孔徑為E600漏斗過濾，真空(1mmHg)干燥濾餅16h后得到8.22g標(biāo)題三乙胺鹽(Y88%)，HPLC分析顯示的均一性指數(shù)為97.4%;m.p.＞178℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C57H73N2O20P·4.5 H2OC，56.19;H，6.79;N，2.30;KF(H2O)，6.65.Found56.33;H，6.87;N，2.32;KF(H2O)，7.96.
制備三乙胺鹽的替代方法
將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(5.67g，4.66mmol)加至250ml燒瓶中，并溶于乙酸乙酯(150ml)。該燒瓶裝有一三相閥，一個與真空相連，一個與氬氣相連。利用該閥，將該燒瓶部分抽真空，然后泵入氬氣。再重復(fù)該方法兩次。向燒瓶中加入披鈀活性碳(10%pd)(0.85g)，用填充氫氣的氣球代替與一三相閥相連的氬氣管。利用該閥，將燒瓶部分抽真空并通入氫氣，再重復(fù)該方法四次。在氫氣球壓力下于室溫過夜攪拌所得混合物。在首次暴露于氫氣后17h，經(jīng)TLC分析顯示起始物消失。用氬氣管取代與三相閥相連的氫氣球。利用該閥，使燒瓶部分抽真空，然后通入氬氣。再重復(fù)該方法兩次。通過Celite真空過濾燒瓶內(nèi)容物，用乙酸乙酯(2×10ml)浸泡Celite。向攪拌濾液中加入NEt3(0.650ml，4.66mmol)。于室溫攪拌所得懸浮2h，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使其體積降至約150ml。過濾固體，用乙酸乙酯(2×10ml)洗滌及真空干燥后，得到4.76g(90%產(chǎn)率)白色粉末狀標(biāo)題三乙胺鹽(通過HPLC分析測得均一性指數(shù)為96.6%)。
制備三乙胺鹽的替代方法
將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(5.17g，4.25mmol)加到250ml燒瓶中并溶于乙酸乙酯(150ml)。該燒瓶裝有一三相閥，一個與室里真空相連，一個與氬氣相連。利用該閥，將燒瓶部分抽真空，然后通入氬氣。重復(fù)該方法兩次。向燒瓶中加入披鈀活性碳(10%pd)(0.86g)。用填充氫氣的氣球取代與三相閥相連的氬氣管，利用該閥，使燒瓶部分抽真空，然后通入氫氣。重復(fù)該方法五次，于室溫氫氣球壓力下攪拌所得混合物過夜。在首次暴露于氫氣16h后，通過TLC分析發(fā)現(xiàn)起始物已消失。用氬氣管取代與三相閥相連的氫氣球，利用該閥，將燒瓶部分抽真空，然后通入氬氣。重復(fù)該方法兩次。在Celite填塞上真空過濾燒瓶內(nèi)容物。用乙酸乙酯(4×10ml)浸泡Celite，向所得濾液中加入NEt3(0.590ml，4.25mmol)。所得懸浮液于室溫攪拌1h，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使體積減至約140ml。過濾固體，用乙酸乙酯(10ml)洗滌，并真空干燥，得到4.46g(Y92%)白色固體狀標(biāo)題三乙胺鹽(通過HPLC分析測得均一性指數(shù)為96.7%)。
賴氨酸鹽制備如下
于0℃將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(15.0g，12.34mmol)分批加到10%披鈀碳(20%負(fù)荷，3g)的EtOH(600ml，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)懸浮液中。通過抽真空及通入氬氣使所得懸液脫氣。重復(fù)該方法兩次。然后用氫氣取代氬氣，在劇烈攪拌下進(jìn)行同樣的脫氣處理。所得混合物于0℃攪拌2h。除去冷卻浴，于室溫下攪拌反應(yīng)溶液4-1/2h。通過三次抽氫氣及通入氬氣使反應(yīng)混合物脫氣。氬氣下通過Celite塞過濾，在劇烈攪拌條件下，在5min內(nèi)向所得濾液中緩慢加入賴氨酸(1.63g，0.49eq)于H2O/EtOH的1∶1混合物(200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)(20ml)的溶液中。向所得白色懸液中加入蒸餾水(110ml)并攪拌30min。溫?zé)嶂良s55℃。所得均勻溶液于50℃油浴中放置，并緩慢冷卻至室溫放置16h，及4℃放置3h。過濾并抽干16h后，得到11.8g(產(chǎn)率約80%)賴氨酸鹽，通過HPLC測得均一性指數(shù)為99.0%;m.p.＞170℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C57H72N3O22P·8.0 H2OC，51.62;H，6.69;N，3.17;KF(H2O)，10.87.Found51.76;H，6.57;N，3.48;KF(H2O)，11.42.
乙醇胺鹽的制備方法如下
于0℃劇烈攪拌下將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙胺鹽(3.0g，2.64mmol)在EtoAc(60ml)和5%NaHSO4(30ml)之間分配15min。分離水層并用EtoAc(15ml)萃取。合并EtoAc層，用鹽水(15ml)洗滌，Na2SO4干燥及過濾后，得到游離酸(約2.64mmol)的EtoAc(～70ml)溶液。于室溫劇烈攪拌條件下，在5min內(nèi)向該EtoAc溶液中滴加H2NCH2CH2OH(0.15ml，2.64mmol)的EtoAc(5ml)溶液。所得懸浮液再攪拌1h，然后過濾，用EtoAc(15ml×2)洗滌，并真空干燥，得到2.6g標(biāo)題乙醇胺鹽(Y89%)。通過HPLC測得均一性指數(shù)為97.8%;m.p.＞130℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C53H65N2O21P·2.5 H2OC，55.73;H，6.18;N，2.45;KF(H2O)，3.94.FoundC，55.76;H，6.39;N，2.45;KF(H2O)，6.00.
精氨酸鹽的制備方法如下
于0℃將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(30.0g，24.69mmol)分批加到10%披鈀碳(20%負(fù)荷，6g)的EtOH(900ml，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)的懸浮液中。通過抽真空及通入氬氣使所得懸浮液脫氣。重復(fù)該方法2次，然后用氫氣取代氬氣進(jìn)行上述脫氣，同時劇烈攪拌。所得混合物于0℃攪拌2h。除去冷卻浴，于室溫下攪拌反應(yīng)溶液24h。按照上述方法通過抽氫氣及通氬氣使反應(yīng)混合物三次脫氣。氬氣下通過Celite塞過濾，將濾液分為兩等份，向每份中加入EtOH(190ml，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)。在劇烈攪拌下，在5min內(nèi)向其中一份中緩慢加入精氨酸(2.0g，0.94eq)于H2OEtOH(200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)的2∶1混合物(20ml)中的溶液，向所得白色懸浮液中加入蒸餾水(100ml)并攪拌30min，然后溫?zé)嶂良s60℃。熱過濾，并將濾液放置在于50℃油浴中，讓其冷卻至室溫，于室溫放置2h，4℃放置2h。過濾，用3%H2O于EtOH的冷溶液(100ml)洗滌，抽干16h后得到12.95gY～86%)標(biāo)題精氨酸鹽，均一性指數(shù)為96.7%。
于55℃將該物質(zhì)(12.95g)溶于15%H2O于EtOH的混合物(2700ml)中。冷卻溶液，于30℃放置3-1/2h，室溫放置16，及4℃放置3h。過濾所得結(jié)晶，用2%H2O的EtOH冷溶液(50ml×2)洗滌，抽干4h，然后真空(1mmHg)干燥16h，得到10.2g(Y～80%)標(biāo)題精氨酸鹽(均一性指數(shù)98.5);m.p.＞176℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C57H72N5O22P·6.4 H2OC，51.65;H，6.45;N，5.28;KF(H2O)，8.7.FoundC，51.86;H，6.65;N，5.53;KF(H2O)，8.72.
N-甲基葡糖胺鹽的制備方法如下
于0℃將2′-O-(乙氧羰基)-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚(30.0g，24.69mmol)分批加到10%披鈀碳(20%負(fù)荷，6g)的EtOH(900ml，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)懸液中。通過抽空氣及通入氬氣使所得懸浮液脫氣。重復(fù)該方法2次，然后用氫氣代替氬氣進(jìn)行上述脫氣，同時劇烈攪拌。所得混合物于0℃攪拌2h，除去冷卻浴，于室溫繼續(xù)攪拌反應(yīng)溶液24h。通過抽氫氣及通往氬氣使反應(yīng)混合物脫氣三次。于氬氣下通過Celite塞過濾，將濾液分成兩等份，并向每一份中加入EtOH(190ml，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)。在劇烈攪拌情況下，于5分鐘內(nèi)向一份(約630ml)中緩慢加入N-甲基葡糖胺(2.24g，0.94eq)于H2O∶EtOH(200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)的1∶1混合物中的溶液(20ml)。向所得白色懸浮液中加入蒸餾水(100ml)，攪拌懸浮液30min，然后溫?zé)嶂?9℃。將清晰的均質(zhì)溶液放置在50℃油浴中，讓其冷卻至室溫，并于室溫放置2h，于4℃放置1-1/2h。過濾，用3%H2O的EtOH溶液(100ml)洗滌，于室溫吸干16h，得到9.65g(Y∶64%)標(biāo)題N-甲基葡糖胺鹽，其均一性指數(shù)為96.4%。
于52℃將該物質(zhì)(9.65g)溶于15%H2O的EtOH溶液(～450ml)中，冷卻溶液，于28℃放置3-1/2h，室溫放置16h，4℃放置3h。過濾所得結(jié)晶，用冷的2%H2O的EtOH溶液(50ml×2)洗滌，吸干4h，真空(1mmHg)干燥16h，得到7.5g(Y～80%)標(biāo)題N-甲基葡糖胺鹽(通過HPLC測得的均一性指數(shù)為98.6%);m.p.＞154℃(分解)。
Elemental analysis calculated for C58H75N2O25P·5.0 H2OC，52.72;H，6.48;N，2.12;KF(H2O)，6.82.FoundC，53.09;H，6.50;N，2.08;KF(H2O)，7.12.
實(shí)施例4 2′-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚
(a)制備2′-O-(甲硫甲基)-7-O-(三乙基甲硅烷基)紫杉酚
向7-O-(三乙基甲硅烷基)紫杉酚(2.46g，2.5439mmol)于無水乙腈(100ml)中的冷卻(0至-5℃)溶液中加入二甲硫(1.348g;1.59ml;21.6976mmol)，接著再加入過氧化苯甲酰(2.628g;10.8488mmol)。于0℃攪拌該異質(zhì)混合物1h，并于5℃放置18h，觀察了黃色溶液。將其蒸發(fā)干燥并通過硅膠柱純化(用乙酸乙酯∶己烷，1∶4，1∶3和1∶2洗脫)，得到標(biāo)題化合物(1.0g，38%)，它被直接用于下一步驟。
(b)制備2′-O-(甲硫甲基)紫杉酚
向步驟(a)產(chǎn)物(1.0g;0.9737mmol)的無水乙腈(30ml)冷卻(-15℃)溶液中滴加0.5N HCl(3ml)。所得溶液于-15℃攪拌1h，5℃攪拌18h，然后用乙酸乙酯(30ml)稀釋，用6% NaHCO3冷溶液和鹽水洗滌。于MgSO4上干燥后蒸發(fā)至干，再經(jīng)硅膠板純化(二氯甲烷15%乙腈)后得到純標(biāo)題化合物(280mg，31.4%)。
IR(KBr)3446，3064，2940，1726，1666，1582，1516，1486.
NMR(CDCl3)δ1.118(s，3H)，1.229(s，3H)，1.662(s，3H)，1.689(s，3H)，1.871(s，3H)，2.209(s，3H)，2.450(s，3H)，3.800(d，H)，4.119(d，H)，4.305(d，H)，4.413(m，H)，4.563(d，H)，4.703(d，H)，4.940(d，H)，4.958(dd，H)，5.667(d，H)，5.822(dd，H)，6.263(m，2H)，7.019(d，NH)，7.293-8.127(m，15H).
MS[M+H]+，914;[M+Na]+，936;[M+K]+，952
HRMSMH+914.3394(calculated＝914.3422)
(c)制備2′-O-(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚
向步驟(b)產(chǎn)物的無水1，2-二氯乙烷(12ml)溶液中加入粉化的4
分子篩(1.0g)，接著滴加N-碘代琥珀酰亞胺(0.33g;1.4622mmol)和磷酸二芐基酯(0.41g;1.4622mmol)的無水四氫呋喃(8ml)溶液混合物。于室溫下攪拌所得混合物1h，然后通過Celite過濾，濾液蒸發(fā)至干燥，紅色殘余物溶于乙酸乙酯(50ml)，用冷的6%NaHSO3、冷的6%NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥和蒸發(fā)后得到一泡沫。通過硅膠板純化(二氯甲烷20%乙腈)后，得到純產(chǎn)物(0.77g，69%)。
IR(KBr)3854，3744，3362，3066，1960，1722，1602，1580.
NMR(CDCl3)δ1.075(s，3H)，1.167(s，3H)，1.651(s，3H)，1.799(s，3H)，2.209(s，3H)，2.296(s，3H)，2.464(m，H)，3.686(d，H)，4.121(d，H)，4.240(d，H)，4.293(m，H)，4.808-4.957，(m，6H)，5.006(m，H)，5.565-5.649(m，2H)，6.034(t，H)，6.194(3，H)，7.100-8.132，(m，26H).
MS[M+H]+，1144;[M+Na]+，1166;[M+K]+，1182
(d)制備2′-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚
于60psi(400kpa)下將步驟(c)產(chǎn)物(0.9g，0.7874mmol)、10%pd/c(1.0g)及乙酸乙酯(20ml)的混合物氫化24h。通過Celite過濾反應(yīng)混合物，濾液蒸發(fā)干燥。通過硅膠板純化殘余物(二氯甲烷∶40%甲醇)后得到標(biāo)題產(chǎn)物(0.254g，33.4%)MP202-205℃(d)。
IR(KBr)3438，3066，2942，1722，1652，1602cm-1.
NMR(acetone-d6/D2O)δ1.081(s，6H)，1.571(s，3H)，1.847(s，3H)，2.115(s，3H)，2.357(s，3H)，3.707(d，H)，4.08(m，2H)，4.275(m，H)，4.941-5.085(m，4H)，5.231(t，H)，5.430(d，H)，5.544(d，H)，5.970(t，H)，6.376(s，H)，6.961-8.017(m，16H).
MS[M+Na]+，986;[M+K]+，1002;[M+2Na-H]+，1008;[M+Na+K-H]+，1024;[M+2K-H]+，1040
HRMSMNa+，986.2955(Calculated＝986.2976)
實(shí)施例5 2′，7-O-雙(膦酰氧甲基)紫杉酚鈉鹽
(a)制備2′，7-O-雙(甲硫甲基)紫杉酚
于0℃將固體過氧化苯甲酰(1.995g，8mmol)加至紫杉酚(0.853g，1mmol)和二甲硫(1.465g，20mmol)的乙腈(20ml)攪拌溶液中。于0℃劇烈攪拌反應(yīng)混合物3h。通過TLC在己烷∶乙酸乙酯(1∶1，V/V，Rf紫杉酚＝0.24，Rf產(chǎn)物＝0.60)中監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。當(dāng)起始物消失(約3h)后，通過于25℃用真空蒸發(fā)溶劑干燥終止反應(yīng)，用硅膠析(EM Science，40-63μm，100ml干硅膠，柱徑φ＝3/4in.，溶劑系統(tǒng)∶己烷∶乙酸乙酯(3∶2，V/V)，每一級分的體積約25ml)分離干殘余物。從級分15-19回收標(biāo)題化合物。
MS(FAB/matrix NOBA，NaI KI)[M+H]+，m/z 974;[M+Na]+，m/z996;[M+K]+，m/z1012
UV(MeOH)λmax＝204 nm，E(1%/1cm)＝243.45;λmax＝228 nm，E(1%/1cm)＝313.99
IR(KBr)3440，3064，2926，1724，1668，1602，1582，1514，1484，1452，1372，1314，1266，1242，1178，1142，1068，1026，990，916，886，848，800，774，710，646，606，570，540，480 cm-1.
1H-NMR(CDCl3)δ1.17(3H，s)，1.20(3H，s)，1.68(3H，s)，1.74(3H，s)，1.84(H，dd)，2.04(3H，d)，2.09(3H，s)，2.15(3H，s)overlaps with(H，m)，2.37(H，dd)，2.51(3H，s)，2.79(H，ddd)，3.78(H，d)，4.18(H，d)，4.28(H，m)，4.31(H，d)，4.53-4.74(4H，two overlapping AB m)，4.93(H，d)，4.95(H，d)，5.68(H，d)，5.82(H，dd)，6.24(H，dd)，6.54(H，s)，7.05(H，d)，7.28-7.59(10H，overlapping m)，7.57(H，m)，7.76(2H，d)，8.09(2H，d).
(b)制備2′，7-O-雙(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚
于室溫下將N-碘代琥珀酰亞胺(135mg，0.5mmol)和磷酸二芐基酯(167mg，0.5mmol)的無水四氫呋喃(8ml)溶液加到2′，7-O-雙(甲硫甲基)紫杉酚(198mg，0.2mmol)、5
分子篩(約200mg)及二氯甲烷(12ml)的混合物中。攪拌反應(yīng)混合物1.5h，在Celite上過濾掉分子篩，用二氯甲烷(10ml)洗滌，于室溫下利用真空蒸發(fā)溶劑至干燥。將殘余物溶于乙酸乙酯(100ml)，并在分離漏斗中用1%硫代硫酸鈉(50ml)、0.5m NaHCO3(50ml)及水(2×50ml)洗滌。有機(jī)相在MgSO4上干燥，蒸發(fā)至干，并重溶于乙酸乙酯(1ml)。用50ml乙醚∶己烷(1∶1)沉淀產(chǎn)物，并用同一溶劑系統(tǒng)(2×50ml)洗滌兩次，得到粗產(chǎn)物(218mg，74%)。通過將其二氯甲烷(3ml)溶液加至硅膠(φ＝3/4in.×L＝1in.)并用50ml二氯甲烷∶乙酸乙酯(3∶1)溶劑系統(tǒng)洗脫，純化該產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(172.7mg，59.3%)。
MS(FAB，matrix NOBA/NaI，KI)[M+Na]+，m/z1456;[M+K]+，m/z1472
UV(MeCN)λmax＝194 nm，E(1%/1cm)＝1078.36;λmax＝228 nm，E(1%/1cm)＝311.95
IR(KBr)3430，3066，3032，2958，1744，1726，1664，1602，1582，1532，1488，1456，1372，1270，1244，1158，1108，1068，1016，1000，952，886，800，776，738，698，604，498cm-1.
1H-NMR(CDCl3)δ1.12(3H，s)，1.14(3H，s)，1.56(H，m)，1.67(3H，s)，1.84(3H，d)，1.90(H，m)，2.17(3H，s)，2.29(3H，s)，2.73(H，m)，3.73(H，d)，4.08(H，d)，4.15(H，m)，4.20(H，d)，4.77(H，m)，4.79(H，d)，4.91-5.04(10H overlapping m)，5.25(H，dd)，5.38(H，dd)，5.54-5.64(2H，overlapping m)，5.99(H，br.dd)，6.25(H，s)，7.11-7.14(2H，m)，7.24-7.64(28H，overlapping m)，7.94(2H，dd)，8.04(2H，dd)，8.30(H，d).
(c)制備2′，7-O-雙(膦酰氧甲基)紫杉酚鈉鹽
將2′，7-O-雙(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚樣品(112mg，0.078mmol)溶于乙酸乙酯(7ml)，并于室溫、60psi(400kpa)下在10%披鈀木炭(50mg)上氫化2h。在Celite上過濾掉催化劑，用乙酸乙酯(10ml)浸泡Celite，用固體NaHCO3(20mg，3eq.)處理濾液，然后蒸發(fā)溶劑至干燥。殘余物再溶于5ml水∶丙酮(4∶1，V/V)并通過C-18逆相柱層析純化(55-105μC-18，水，50ml干C-18，φ＝3/4in.，于水∶丙酮(4∶1，V/V)。在加入Q12離子對雞尾酒(Regis)的乙腈∶磷酸緩沖液(PH6，50/50，V/V)中的分析值HPLC Jones C-18柱(15cm，1ml/min，λ＝230mn)監(jiān)測洗脫液，Rt＝4.7min。合并含有標(biāo)題化合物的級分，于20℃真空蒸發(fā)丙酮，并冷凍干燥溶液，得到標(biāo)題化合物(44.2mg，58.8%)。
MS(FAB，matrix NOBA/NaI，KI)[M+H]+，m/z1118;[M+Na]+，m/z1140
UV(MeCN)λmax＝192nm，E(1%/1cm)＝129.73;λmax＝230nm，E(1%/1cm)＝26.43
IR(KBr)3430，3066，2956，1724，1658，1604，1582，1520，1486，1452，1374，1316，1256，1152，1110，1070，1026，966，914，802，772，710，538cm-1.
1H-NMR(acetone-d6/D2O)δ0.97(3H，s)，1.02(3H，s)，1.47(H，m)，1.54(3H，s)，1.70(H，m)，1.75(3H，s)，1.85(H，m)，2.11(3H，s)，2.30(3H，s)，2.88(H，m)，3.64(H，d)，4.03(H，m)，4.06(H，d)，4.16(H，d)，4.74(H，m)，4.86(H，m)，5.11(H，br.t)，5.22(H，d)，5.42(H，d)，5.90(H，br.t)，6.21(H，s)，7.06(H，br.t)，7.32-7.69(10H，ovelapping m)，7.80(2H，d)，7.93(2H，d).
實(shí)施例6 7-O-甲硫甲基漿果赤霉素Ⅲ
向2′-O-乙氧羰基-7-O-甲硫甲基紫杉酚(實(shí)施例3(b)化合物，27g，27.4mmol)于100ml THF和500ml甲醇的溶液中加入剛粉碎的K2CO3(2.7g，19mmol)。攪拌溶液30分鐘，并用IR-120(H+)樹脂中和，過濾并濃縮。將粗濾液溶于200ml二氯甲烷，并與氫硼化四丁基銨(10g)。用二氯甲烷稀釋溶液，用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層于MgSO4上干燥并濃縮。經(jīng)硅膠層析殘余物(1∶1己烷/乙酸乙酯)后得到9.4g標(biāo)題化合物(53%)，熔點(diǎn)269℃。
FABMS(NOBA)M+H calcd for C33H43SO11647.Found647.
IR(KBr)3474，1746，1724，1712，1270，1240，1070cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.08(d，J＝7.1 Hz，2H)，7.58(t，J＝7.5Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8 Hz，2H)，6.55(s，1H)，4.94(d，J＝8.1 Hz，1H)，4.83(br q，J＝5.1 Hz，1H)，4.66(ABq，J＝14.7，12.3 Hz，2H)，4.30(m，2H)，4.13(d，J＝8.4 Hz，1H)，3.91(d，J＝6.6 Hz，1H)，2.79(m，1H)，2.27(s，3H)，2.25(m，2H)，2.19(s，3H)，2.16(s，3H)，2.10(s，4H)，1.81(m，1H)，1.72(s，3H)，1.61(m，2H)，1.16(s，3H).1.03(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ202.3，170.8，169.3，167.0，144.2，132.6，132.1，130.1，129.4，128.6，83.9，80.9，78.7，75.7，74.5，73.9，67.9，57.6，47.6，42.7，38.3，26.7，22.6，21.0，20.1，15.2，15.0，10.8.
實(shí)施例7 3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙醇胺鹽
(a)制備3′-N-脫苯甲酰-3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚
向HMDS(0.40ml，1.90mmol)的15ml THF溶液中加入n-BuLi(0.75ml，2.5M于己烷，1.88mmol)，并于-55℃攪拌5min。向該溶液中加入7-MTM漿果赤霉素Ⅲ(實(shí)例6化合物，1.03g，1.59mmol)的10ml THF溶液，攪拌10min，然后加入10ml(3R，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-(2-呋喃基)-3-(三乙基甲硅烷氧基)-2-氮雜環(huán)丁酮(883mg，2.40mmol)溶液，移去冷卻浴，并用0℃浴代替，攪拌反應(yīng)混合物30min，用乙酸乙酯稀釋溶液，并用飽和NH4Cl溶液洗滌，于MgSO4上干燥并濃縮。在硅膠上層析殘余物(2.5∶1己烷/乙酸乙酯)后，得到1.5g偶聯(lián)產(chǎn)物3′-N-脫苯甲酰基-3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-7-O-甲硫甲基-2′-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚(93%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C50H71NSSiO161036.Found1036.
IR(film)3446(s)，1720，1368，1242，1166，1144，1124，1066cm-1
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.56(m，1H)，7.46(t，J＝7.5 Hz，2H)，7.36(m，1H)，6.56(s，1H)，6.33(m，1H)，6.20(m，2H)，5.67(d，J＝6.9Hz，1H)，5.29(br s，2H)，4.94(d，J＝7.8 Hz，1H)，4.75(s，1H)，4.65(s，2H)，4.28(m，2H)，4.16(d，J＝8.1Hz，1H)，3.89(d，J＝6.9 Hz，1H)，2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.37(m，1H)，2.22(m，1H)，2.16(s，3H)，2.10(s，3H)，2.04(s，3H)，1.84(m，1H)，1.74(s，3H)，1.65(m，1H)，1.33(s，9H)，1.20(s，3H)，1.19(s，3H)，0.81(t，J＝7.8 Hz，9H)，0.47(m，6H).
13C NMR(CDCl3，75.5Hz)δ202.0，171.2，170.3，169.3，167.1，155.3，152.0，141.9，141.0，133.6，132.9，130.2，129.2，128.7，110.7，107.3，84.0，81.1，80.2，78.7，76.1，75.7，74.7，74.1，72.4，71.1，57.4，52.8，47.1，43.3，35.2，33.0，28.1，26.3，22.9，21.2，21.0，15.0，14.5，10.9，6.5，4.3.
向上面得到的2′-三乙基甲硅烷基醚(330mg，0.32mmol)的7ml THF溶液中加入氟化四丁銨(0.35ml，1.0M于THF，0.35mmol)，并攪拌10min。用乙酸乙酯稀釋溶液并用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥、濃縮及硅膠層析殘余物(2∶1己烷/乙酸乙酯)后，得到301mg標(biāo)題化合物(95%)。
FABMS(NOBA)M+H calcd for C45H58NO16S900.Found900.
IR(film)3442，1720，1242，1066，1026 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.07(d，J＝7.3 Hz，2H)，7.57(t，J＝7.3 Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.38(s，1H)，6.53(s，1H)，6.34(d，J＝3.2 Hz，1H)，6.29(d，J＝3.2 Hz，1H)，6.17(t，J＝8.1Hz，1H)，5.65(d，J＝6.9Hz，1H)，5.29(m，2H)，4.92(d，J＝8.0 Hz，1H)，4.70(m，1H)，4.64(d，J＝4.6 Hz，2H)，4.29(m，2H)，4.14(d，J＝8.3 Hz，1H)，3.86(d，J＝6.8 Hz，1H)，3.37(d，J＝5.8 Hz，1H)，2.77(m，1H)，2.38(s，3H)，2.32(m，2H)，2.16(s，3H)，2.10(s，3H)，2.02(s，3H)，1.77(m，3H)，1.73(s，3H)，1.33(s，9H)，1.17(s，3H)，1.12(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ202.0，172.6，170.3，169.2，167.0，155.2，151.3，142.4，140.4，133.7，133.2，130.2，129.1，128.7，110.7，107.4，83.9，81.2，80.5，78.6，76.5，76.1，75.4，74.6，74.0，72.5，71.8，57.4，51.7，47.2，43.2，35.2，32.8，28.1，26.4，22.6，20.9，15.2，14.6，10.9，8.3.
(b)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-甲硫甲基紫杉酚
于0℃向步驟(a)產(chǎn)物(864mg，0.96mmol)的50ml二氯甲烷溶液中加入二異丙基乙胺(2.0ml，11.5mmol)和氯代甲酸乙酯(0.50ml，5.25mmol)并攪拌4h。用二氯甲烷稀釋溶液，并用飽和碳酸氫鹽洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。經(jīng)硅膠層析殘余物(1∶1己烷/乙酸乙酯)后，得到884mg2′碳酸乙酯標(biāo)題化合物(95%)。
FABMS(NOBA)M+H calcd for C48H62NO18S 972.3688.Found972.3654.
IR(film)1752，1720，1370，1244，1196，1176，1064 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.09(d，J＝7.8 Hz，2H)，7.57(t，J＝7.5 Hz，1H)，7.46(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.38(s，1H)，6.55(s，1H)，6.35(m，1H)，6.27(m，1H)，6.22(t，J＝7.8 Hz，1H)，5.67(d，J＝7.2 Hz，1H)，5.51(d，J＝9.9 Hz，1H)，5.34(d，J＝2.4 Hz，1H)，5.25(d，J＝10.2Hz，1H)，4.95(d，J＝8.1 Hz，1H)，4.65(s，2H)，4.30(m，2H)，4.22(m，2H)，3.88(d，J＝7.2 Hz，1H)，2.81(m，1H)，2.41(s，3H)，2.36-2.21(m，2H)，2.16(s，3H)，2.11(s，3H)，2.09(s，3H)，1.83(m，1H)，1.74(s，3H)，1.67(s，1H)，1.59(s，1H)，1.34(s，9H)，1.29(t，J＝7.2 Hz，3H)，1.20(s，3H)，1.18(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ202.1，169.9，169.1，167.6，167.0，154.0，150.1，142.6，141.0，133.6，132.9，130.2，129.2，128.7，110.7，107.5，83.9，81.1，80.7，78.7，76.0，75.7，75.1，74.7，74.2，71.8，65.1，57.4，49.7，47.1，43.2，35.0，33.0，28.1，26.3，22.6，21.1，20.9，15.1，14.5，14.1，10.9.
(c)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚
向步驟(b)產(chǎn)物(230mg，0.236mmol)的10ml無水THF溶液中加入300mg 4
分子篩、磷酸二芐酯(270mg，0.98mmol)和重結(jié)晶的NIS(62mg，0.28mmol)。向該溶液中加入三氟甲磺酸銀(45mg，0.17mmol)并攪拌溶液3h。通過Celite過濾溶液，并用乙酸乙酯稀釋，用10%NaS2O3、飽和碳酸氫鹽和鹽水洗滌，于MgSO4上干燥，并濃縮。硅膠層析殘余物(15%乙腈/氯仿)后得到219mg磷酸二芐酯標(biāo)題化合物(77%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C61H72NPO22Na 1224.Found1224.
IR(film)3422(br)，1750，1722，1370，1244，1160，1036，1016，1000，976，944 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.08(d，J＝6.9 Hz，2H)，7.58(t，J＝7.2 Hz，1H)，7.46(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.39(s，1H)，7.31(m，10)，6.35(m，2H)，6.28(s，1H)，6.21(t，J＝7.8 Hz，1H)，5.64(d，J＝6.9 Hz，1H)，5.50(d，J＝10.5 Hz，1H)，5.39(d，J＝6.6 Hz，1H)，5.32(d，J＝2.4Hz，1H)，5.25(d，J＝9.9 Hz，1H)，5.01(dd，J＝8.1，6.3Hz，5H)，4.86(d，J＝8.4 Hz，1H)，4.29-4.09(m，4H)，3.85(d，J＝6.9 Hz，1H)，2.77(m，1H)，2.40(s，3H)，2.30(m，2H)，2.16(s，3H)，1.99(s，3H)，1.94(m，1H)，1.70(s，3H)，1.67(s，1H)，1.54(s，1H)，1.34(s，9H)，1.28(t，J＝7.2 Hz，3H)，1.20(s，3H)，1.17(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ201.8，169.9，169.2，167.7，167.0，155.1，154.0，150.0，142.74，141.1，133.7，132.9，130.2，129.1，128.7，128.5，128.4，128.0，110.7，107.6，93.8，84.1，81.6，80.8，80.7，78.8，76.3，75.1，74.6，71.8，69.3，69.2，65.1，57.0，49.7，46.7，43.2，35.0，28.1，26.4，22.6，21.2，20.8，14.6，14.1，10.5.
(d)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙醇胺鹽
向步驟(c)產(chǎn)物(311mg，0.25mmol)的25ml乙酸乙酯溶液中加入60mg披鈀碳(10%)，并在H2環(huán)境下攪拌溶液30min。通過Celite濾掉催化劑，并真空濃縮濾液。殘余物溶于3ml乙酸乙酯并加入三乙醇胺(2.3ml，0.1M于乙酸乙酯，0.23mmol)。濃縮溶液，在C18柱上層析殘余物(40%乙腈/水)并凍干后，得到205mg磷酸酯三乙醇胺鹽(67%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C47H60HPO22Na1044.Found1044.
IR(film)3432(br)，1752，1722，1372，1246，1158，1108，1096，1070，1002 cm-1
1H NMR(d6acetone/D2O，300 MHz)δ8.09(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.62(m，2H)，7.52(t，J＝7.5 Hz，2H)，6.48(d，J＝3.3 Hz，1H)，6.42(m，2H)，6.16(t，J＝8.7 Hz，1H)，5.65(d，J＝6.9 Hz，1H)，5.46(d，J＝3.6 Hz，1H)，5.30(d，J＝3.6 Hz，1H)，5.17(br s，1H)，5.01(br d，J＝9.0Hz，1H)，4.19(br s，1H)，4.18(m，5H)，3.95(m，6H)，3.87(d，J＝6.9 Hz，1H)，3.68(s，7H)，3.50(br t，J＝4.8 Hz，6H)，2.95(m，1H)，2.44(s，3H)，2.41(m，2H)，2.16(s，3H)，1.9(s，3H)，1.94(m，1H)，1.68(s，3H)，1.34(s，9H)，1.24(t，J＝6.9 Hz，3H)，1.17(s，6H).
實(shí)施例8 3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙醇胺鹽
(a)制備3′-N-脫苯甲酰基-3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚
于-55℃向HMDS(0.5ml，2.4mmol)的18mlTHF溶液中加入n-BuLi(0.85ml，2.5M于己烷，2.1mmol)。10min后，滴加7-MTM漿果赤霉素Ⅲ(1.15g，1.78mmol)的18ml THF溶液，并冷卻攪拌10min。加入(±)順-1-(叔-丁氧羰基)-4-(2-噻吩基)-3-(三乙基甲硅烷氧基)-2-氮雜環(huán)丁酮(2.80g，7.3mmol)的18ml THF溶液，并在30分鐘內(nèi)使冷卻浴緩慢升溫至0℃。用乙酸乙酯稀釋溶液，并用飽和NH4Cl溶液洗滌，MgSO4干燥，并濃縮。硅膠層析殘余物(5∶1己烷/乙酸乙酯)，得到1.87g回收的內(nèi)酰胺(3∶1己烷/乙酸乙酯)，得到1.44g偶聯(lián)產(chǎn)物3±-N-脫苯甲酰基-3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-7-O-甲硫甲基-2′-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚(78%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C51H71NO15S2SiNa 1052.Found1052.
IR(film)3442(br)，1720，1490，1368，1270，1242，1162，1110，1064，1024，984，754 cm-1
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.09(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.57(t，J＝7.6 Hz，1H)，7.47(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.22(m，1H)，6.95(m，2H)，6.55(s，1H)，6.21(t，J＝9.3 Hz，1H)，5.68(d，J＝6.9 Hz，1H)，5.49(br d，1H)，5.39(br d，J＝9.6 Hz，1H)，4.94(d，J＝7.8 Hz，1H)，4.65(s，2H)，4.57(s，1H)，4.28(m，2H)，4.17(d，J＝8.4 Hz，1H)，3.88(d，J＝6.9 Hz，1H)，2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.37(m，1H)，2.20(m，1H)，2.17(s，3H)，2.10(s，3H)，2.03(s，3H)，1.84(m，1H)，1.74(s，3H)，1.68(s，1H)，1.62(s，1H)，1.31(s，9H)，1.20(s，6H)，0.84(t，J＝7.8 Hz，9H)，0.50(m，6H).
13C NMR(CDCl3，75.5Hz)δ201.9，171.1，170.7，170.1，169.3，167.0，155.1，142.8，140.9，133.6，132.9，130.2，129.2，128.7，126.9，124.6，83.9，81.2，80.1，78.8，77.4，76.0，75.7，75.2，74.8，74.1，71.3，57.4，53.8，47.0，43.3，35.3，33.3，28.1，26.3，23.0，21.3，20.9，14.9，14.4，10.9，6.6，4.5.
向上面獲得的2′-三乙基甲硅烷基醚(1.41g，1.37mmol)的14ml THF溶液中加入氟化四丁銨(1.4ml，1.0M于THF，1.40mmol)。攪拌溶液30min，用乙酸乙酯稀釋，并用鹽水洗滌，于MgSO4上干燥，并濃縮。經(jīng)硅膠層析殘余物(1∶1己烷/乙酸乙酯)后得到1.16g標(biāo)題化合物(92%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C45H57NO15S2Na 938.Found938.
IR(film)3440(br)，1720，1368，1242，1168，1106，1066，710 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.08(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.59(m，1H)，7.47(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.24(m，1H)，7.07(m，1H)，6.99(m，1H)，6.53(s，1H)，6.18(t，J＝8.1Hz，1H)，5.66(d，J＝6.9 Hz，1H)，5.49(d，J＝9.6 Hz，1H)，5.32(d，J＝9.6 Hz，1H)，4.92(d，J＝7.8 Hz，1H)，4.63(m，3H)，4.28(m，2H)，4.15(d，J＝8.4 Hz，1H)，3.86(d，J＝6.9 Hz，1H)，2.80(m，1H)，3.47(d，J＝5.4Hz，1H)，2.78(m，1H)，2.36(s，3H)，2.34(，2H)，2.17(s，3H)，2.10(s，3H)，2.00(s，3H)，1.83(m，1H)，1.74(s，3H)，1.72(s，1H)，1.61(s，1H)，1.33(s，9H)，1.21(s，3H)，1.18(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ201.9，172.3，170.3，169.2，167.0，154.0，141.5，140.2，133.7，133.3，130.2，129.1，128.7，127.0，125.4，125.4，83.9，81.3，80.4，78.6，76.1，75.4，74.5，74.0，73.4，72.5，57.5，52.8，47.2，43.2，35.3，32.9，28.2，26.4，22.6，20.9，15.1，14.7，10.8.
(b)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-甲硫甲基紫杉酚
于0℃向步驟(a)產(chǎn)物(621mg，0.677mmol)的35ml二氯甲烷溶液中加入二異丙基乙胺(1.20ml，6.89mmol)和氯代甲酸乙酯(0.35ml，3.7mmol)并攪拌1h。移去冷卻浴，攪拌溶液2h，用二氯甲烷稀釋，并用飽和碳酸氫鹽洗滌，于MgSO4上干燥，并濃縮。經(jīng)硅膠層析殘余物(1∶1己烷/乙酸乙酯)后得到528mg標(biāo)題化合物(79%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C48H61NO17S2Na 1010.Found1010.
IR(film)3510，3440，1752，1720，1370，1244，1198，1170，1026，988，756 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.09(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.58(m，1H)，7.48(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.26(m，1H)，6.99(，2H)，6.55(s，1H)，6.23(t，J＝9.0 Hz，1H)，5.68(d，J＝6.9 Hz，2H)，5.33(d，J＝9.9 Hz，1H)，5.25(d，J＝2.4Hz，1H)，4.94(d，J＝7.8 Hz，1H)，4.65(s，2H)，4.33-4.08(m，5H)，3.88(d，J＝6.9 Hz，1H)，2.80(m，1H)，2.40(s，3H)，2.40-2.20(m，2H)，2.16(s，3H)，2.11(s，3H)，2.07(s，3H)，1.83(m，1H)，1.74(s，3H)，1.69(s，1H)，1.60(s，1H)，1.33(s，9H)，1.31(t，J＝7.2 Hz，3H)，1.20(s，3H)，1.19(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ202.0，169.7，169.1，167.5，167.1，154.0，140.9，133.6，132.9，130.2，129.2，128.7，127.2，125.4，125.3，83.9，81.2，80.6，78.8，76.9，76.0，75.7，74.7，74.2，72.8，72.0，65.2，57.4，50.9，47.1，43.3，35.1，33.0，28.1，26.4，22.7，21.2，20.9，15.1，14.5，14.1，10.9.
(c)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-二芐基膦酰氧甲基紫杉酚
向步驟(b)產(chǎn)物(516mg，0.522mmol)的15ml無水THF溶液中加入530mg 4
分子篩、磷酸二芐酯(576mg，2.09mmol)和重結(jié)晶NIS(136mg，0.604mmol)。向該溶液中加入三氟甲磺酸銀(50mg，0.194mmol)并攪拌溶液1h。通過Celite過濾溶液，用乙酸乙酯稀釋，用10%NaS2O3、飽和碳酸氫鹽和鹽水洗滌，于MgSO4上干燥并濃縮。通過硅膠層析殘余物(15%乙腈/氯仿)后得到535mg標(biāo)題化合物(84%)。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C61H72NO21PSNa 1240.Found1240.
IR(film)3424(br)，1750，1722，1370，1244，1016，1000，944 cm-1
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.08(d，J＝7.0 Hz，2H)，7.58(m，1H)，7.47(t，J＝7.5 Hz，2H)，7.28(m，11H)，6.99(m，2H)，6.33(s，1H)，6.22(t，J＝7.8 Hz，1H)，5.66(m，2H)，5.39(t，J＝6.6 Hz，1H)，5.34(d，J＝12 Hz，1H)，5.22(d，J＝2.4 Hz，1H)，5.01(dd，J＝8.1，6.0 Hz，5H)，4.86(d，J＝7.8 Hz，1H)，4.29-4.08(m，5H)，3.85(d，J＝6.6 Hz，1H)，2.76(m，1H)，2.39(s，3H)，2.35-2.18(m，2H)，2.16(s，3H)，1.97(s，4H)，1.69(s，4H)，1.33(s，9H)，1.30(t，J＝7.2 Hz，3H)，1.20(s，3H)，1.17(s，3H).
13C NMR(CDCl3，75.5 Hz)δ197.4，165.4，164.9，163.3，162.7，150.6，149.7，136.7，136.0，129.4，128.6，125.9，124.7，124.3，124.2，124.1，123.6，122.9，121.1，121.0，89.4，79.8，77.3，76.5，76.3，74.4，72.0，70.7，70.3，67.7，64.9，64.9，60.9，52.7，46.5，42.3，38.9，30.7，23.8，22.0，18.3，17.0，16.4，10.3，9.8，6.2.
(d)制備3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚三乙醇胺盤
向步驟(c)產(chǎn)物(512mg，0.42mmol)的30ml乙酸乙酯溶液中加入53mg Pd/C(10%)，并在H2環(huán)境下攪拌溶液3h。通過Celite過濾掉催化劑，并真空濃縮濾液。殘余物溶于2ml乙酸乙酯，并加入三乙醇胺(4.0ml，0.1M于乙酸乙酯，0.40mmol)。濃縮溶液，在C18上層析殘余物(40%乙腈/水)并凍干，得到280mg磷酸酯的三乙醇胺鹽(56%)。HPLC分析測得該鹽的純度為96%。
FABMS(NOBA)M+Na calcd for C47H60NO21PS 1060.Found1060.
IR(KBr)3422(br)，1750，1720，1372，1246，1162，1096，1068，1000cm-1
1H NMR(d6acetone/D2O，300 MHz)δ8.06(d，J＝7.2 Hz，2H)，7.63(t，J＝7.2 Hz，1H)，7.52(t，J＝7.8 Hz，2H)，7.38(d，J＝4.2 Hz，1H)，7.16(d，J＝3.5 Hz，1H)，7.01(dd，J＝5.1，3.6 Hz，1H)，6.37(s，1H)，6.11(t，J＝8.7Hz，1H)，5.61(d，J＝6.9 Hz，1H)，5.60(s，1H)，5.26(d，J＝4.5 Hz，1H)，5.14(d，J＝6.6 Hz，1H)，5.00(d，J＝8.4 Hz，1H)，4.86(dd，J＝12.0，6.3 Hz，1H)，4.17(m，5H)，4.00(s，7H)，3.92(t，J＝4.8 Hz，6H)，3.84(d，J＝6.9 Hz，1H)，3.48(t，J＝5.4 Hz，6H)，2.94(m，1H)，2.42(s，3H)，2.36(m，1H)，2.27(m，1H)，2.15(s，3H)，1.95(s，4H)，1.66(s，3H)，1.30(s，9H)，1.23(t，J＝7.2 Hz，3H)，1.14(s，6H).
實(shí)施例9 10-脫乙?；?3′-N-脫苯甲酰基-3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚
(a)制備10-脫乙?；?10-O-芐氧羰基-7-O-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素Ⅲ
在氬氣環(huán)境下向含有7-O-三乙基甲硅烷基-10-脫乙酰基漿果赤霉素Ⅲ(2.093g，3.177mmol)的干燥燒瓶中加入無水THF(30ml)，并冷卻至-70℃。向其中滴加1.6M正丁基鋰(2.38ml，3.81mmol)。攪拌15min后，滴加氯代甲酸芐酯(0.91ml，6.35mmol)。攪拌混合物3h，并逐步溫?zé)嶂潦覝?。?5ml飽和NH4Cl終止反應(yīng)，用鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。經(jīng)快速層析(硅膠，30-45%乙酸乙酯/己烷)后，得到2.24g(89%)白色泡沫狀標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.0，2H);7.63-7.58(m，1H)7.47(t，J＝8.0，2H);7.41-7.26(m，5H);6.29(s，1H);5.61(d，J＝7.0，1H);5.20(q，J＝12.2，2H);4.96(d，J＝9.0，1H);4.87-4.84(m，1H);4.48(dd，J＝6.7，J＝10.4，1H);4.30(d，J＝8.5，1H);4.14(d，J＝8.5，1H);3.84(d，J＝7.0，1H);2.58-2.48(m，1H);2.29(m，4H);2.20(s，3H);2.03(d，J＝5.0，1H);1.92-1.83(m，1H);1.68(s，3H);1.17(s，3H);1.04(s，3H);0.91(t，J＝7.5，9H);0.57(q，J＝7.4，6H).
(b)制備10-脫乙酰基-10-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-2′，7-雙-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
向含有步驟(a)產(chǎn)物(3.50g，4.42mmol)的干燥燒瓶中加入少量甲苯。然后真空濃縮溶液。將燒瓶置于氬氣環(huán)境下，并加入100ml THF。冷卻燒瓶至-70℃，并滴加1.0M六甲基二硅疊氮化鋰(6.19ml，6.19mmol)，攪拌20min，滴加(3R，4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-苯基-3-三乙基甲硅烷氧基-2-氮雜環(huán)丁酮(2.58g，7.07mmol)的10ml無水THF溶液。攪拌反應(yīng)混合物3.5h，逐步升至室溫。然后用70ml飽和NH4Cl終止反應(yīng)，用鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。經(jīng)快速層析(硅膠，5-15%乙酸乙酯/己烷)后得到5.12g(98%)白色泡沫狀標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCL3)δ8.11(d，J＝8.0，2H);7.60-7.58(m，1H);7.48(t，J＝8.0，2H);7.24-7.26(m，10H);6.32-6.26(m，2H);5.69(d，J＝7.0，1H);5.47(bd，J＝9.7，1H);5.31-5.10(m，3H);4.94(d，J＝8.5，1H);4.56(s，1H);4.46(dd，J＝6.9，J＝10.6，1H);4.31(d，J＝8.3，1H);4.17(d，J＝8.3，1H);3.81(d，J＝7.0，1H);2.53(s，3H);2.48-2.33(m，1H);2.22-2.17(m，1H);
2.09(s，3H);1.95-1.86(m，1H);1.70(s，3H);1.65(s，1H);1.52(s，1H);1.30(s，9H);1.26-1.19(m，6H);0.94-0.87(m，9H);0.80-0.75(m，9H);0.61-0.53(m，6H);0.48-0.30(m，6H).
(c)制備10-脫乙酰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
將步驟(b)產(chǎn)物(5.12g，4.40mmol)溶于100ml乙酸乙酯，轉(zhuǎn)移至帕爾瓶中，并置于氬氣環(huán)境下。向其中加入10%披鈀碳(2.4g)，并將反應(yīng)混合物置于帕爾氫化裝置(55psi)中氫化8h。通過Celite塞過濾混合物并濃縮。經(jīng)快速層析(硅膠，15-20%乙酸乙酯/己烷)后得到3.24g(79%)白色泡沫狀標(biāo)題化合物，帕爾裝置中所出現(xiàn)的酸性殘余物是步驟(b)產(chǎn)物的2′-三乙基甲硅烷基水解的結(jié)果。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.0，2H);7.63-7.58(m，1H);7.49(d，J＝8.0，2H);7.39-7.26(m，5H);6.27-6.17(m，1H);5.64(d，J＝7.2);5.42(d，J＝9.4，1H);5.28-5.25(m，1H);5.12(s，1H);4.92(d，J＝8.6，1H);4.62(bs，1H);4.38-4.28(m，3H);4.17(d，J＝8.5，1H);3.85(d，J＝6.7，1H);3.36(d，J＝5.3，1H);2.49-2.40(m，1H);2.36(s，3H);
2.25(bd，J＝8.7，2H);1.99-1.91(m，1H);1.85(s，3H);1.74(s，3H);1.69(s，1H)，1.67(s，1H);1.35(s，9H);1.22(s，3H);1.11(s，3H);0.93(t，J＝7.5 9H);0.61-0.49(m，6H).
(d)制備10-脫乙酰-2′-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
向含有步驟(c)產(chǎn)物(3.24g，3.51mmol)的燒瓶中加入30ml無水二氯甲烷，將燒瓶置于氬氣環(huán)境下并冷卻至0℃。向混合物中加入N，N-二異丙基乙胺(1.00ml，7.02mmol)，然后滴加氯代甲酸芐酯(1.00ml，7.02mmol)，15min后，移去冷卻浴，于室溫下攪拌反應(yīng)7h。用30ml飽和NH4Cl終止反應(yīng)，用鹽水洗滌并用MgSO4干燥。經(jīng)快速層析(硅膠，7-20%乙酸乙酯/己烷)后得到3.24g(89%)標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.0，2H);7.62-7.57(m，1H);7.48(t，J＝8.0，2H);7.40-7.26(m，10H);6.33-6.27(m，1H);5.66(d，J＝7.0，1H);5.49-5.42(m，2H);5.31(s，1H);5.22-5.13(m，3H);4.93(d，J＝9.4，1H);4.38(dd，J＝6.5，J＝10.7，1H);4.34-4.28(m，2H);
4.18(d J＝8.3，1H);3.90(d，J＝6.7，1H);2.52-2.30(m，4H);2.24-2.20(m，1H);1.97-1.87(m，3H);1.74(s，3H);1.59(s，3H);1.32(s，9H);1.26，(s，3H);1.11(s，3H);0.96-0.88(m，9H);0.61-0.48(m，6H).
(e)制備10-脫乙酰基-2′-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(二芐基膦酰氧甲基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
將步驟(d)產(chǎn)物溶于13.5ml(54%)DMSO、8.75ml(35%)乙酸酐和2.75ml(11%)冰醋酸中，并置于氬氣環(huán)境下。攪拌反應(yīng)混合物56h，用乙酸乙酯稀釋至體積60ml。用飽和NaHCO3洗滌，直至用PH試紙測得為中性，然后用鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)層并濃縮。用15-20%Eto Ac/己烷快速層析后得到3.12g粗白色泡沫，通過NMR測得其中70%為所需硫代甲基乙縮醛產(chǎn)物(即10-脫乙酰基-2′-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(甲硫甲基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
將上述粗混合物(3.12g)溶于1，2-二氯乙烷(61ml)并置于氬氣環(huán)境下。加入4
粉化分子篩(3.12g)并劇烈攪拌所產(chǎn)生的異質(zhì)混合物，通過套管加入重結(jié)晶N-碘代琥珀酰亞胺(0.830g，3.69mmol)和磷酸二芐酯(1.027g，3.69mmol)的無水THF(46ml)溶液。攪拌所得混合物5h，通過Celite過濾，用乙酸乙酯稀釋至250ml。依次用(2×125ml)冷2%NaHSO3、冷6%NaHCO3(2×125ml)和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。經(jīng)快速層析(硅膠，25-35%乙酸乙酯/己烷)后得到1.52g(40%)標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.08(d，J＝7.0，2H);7.59-7.55(m，1H);7.46(t，J＝7.2，2H);7.38-7.25(m，20H);6.30(t，J＝8.5，1H);5.65(d，J＝6.8，1H);5.49-5.39(m，4H);5.32(s，1H);5.18-4.19(m，4H);4.93(d，J＝9.2，1H);4.44(dd，J＝6.6，J＝10.2，1H);4.31(d，J＝8.4，1H);4.16(d，J＝8.5，1H);3.80(d，J＝6.9，1H);2.69-2.39，(m，4H)，2.33-2.23(m，3H);2.03(s，3H);1.90(t，J＝12.6，1H);1.68-1.63(m，6H);1.28(s，9H);1.16-1.10(m，6H);0.93(t，J＝7.4，9H);0.55(q，J＝7.8，6H).
13C NMR(CDCl3，75.5MHz)δ204.1，169.7，167.9，167.1，151.1，140.7，135.7，133.6，130.2，129.2，128.9，128.8，128.7，128.6，128.5，128.4，128.3，128.2，128.0，127.8，126.4，90.4，84.2，81.1，80.4，79.3，78.8，74.9，72.8，72.0，70.5，69.2，69.1，69.0，58.1，46.8，43.2，37.1，35.0，28.1，26.5，22.8，21.0，14.1，10.0，6.9，5.5.
M.S.(FAB)m/z+1345
(f)制備10-脫乙酰基-2′-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚
將步驟(e)產(chǎn)物(50.8mg，0.038mmol)的無水THF(2.5ml)溶液于氬氣環(huán)境下冷卻至-40℃。向其中滴加氟化四丁銨(0.057ml，0.057mmol)的THF(1.0M)溶液，攪拌反應(yīng)混合物1.5h，同時逐步升至-20℃。用15ml飽和NH4Cl終止反應(yīng)，并用30ml EtOAc稀釋。有機(jī)層用2×15ml NaHCO3和鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥并濃縮、經(jīng)制備性層析(硅膠，50%乙酸乙酯/己烷)得到36mg(77%)標(biāo)題化合物，它為白色粉末。
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.10(d，J＝8.5，2H);7.60-7.55(m，1H);7.49-7.44(m，2H);7.36-7.18(m，20H);6.27-6.22(m，1H);5.78(s，1H);5.67(d，J＝7.0，1H);
5.44-5.34(m，3H);5.27(d，J＝2.2，1H);5.24-5.05(m，4H);5.01-4.91(m，4H);4.39-4.28(m，2H);4.17(d，J＝8.2，1H);3.87(d，J＝7.0，1H);2.58-2.51(m，1H);2.41(s，3H);2.40-2.18(m，2H)，2.00-1.87(m，5H);1.73-1.69(m，4H);1.30(s，9H);1.22-1.15(m，6H).
M.S.(FAB)m/z+1231
(g)制備10-脫乙?；?3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚三乙醇胺鹽
將500ml帕爾瓶中加入10-脫乙酰基-2′-O-芐氧羰基-3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(二芐基膦酰氧甲基)紫杉酚(264.9mg，0.215mmol)和乙酸乙酯(20ml)。用氬氣洗滌燒瓶。并加入10%pd/c(318mg)，所得混合物置于具有55磅/平方英寸(psi)氫氣壓力的帕爾瓶中。通過HPLC(70∶30CH3CN/Q8緩沖液，pH6.0，1.00ml/min，Zorbax C-18柱，25.0Cm，λ＝230nm)監(jiān)測反應(yīng)，直至起始物消失(12.5h)。經(jīng)Celite塞過濾混合物，用乙酸乙酯及少量二氯甲烷洗滌。濃縮所得濾液，并將殘余物溶于二氯甲烷(5ml)。加入己烷，引起白色沉淀形成，從中分離出140.3mg游離酸(通過HPLC測得的純度為80%)，為白色固體。將該物質(zhì)直接用于下一步驟。
向含有上述游離酸(140mg，0.153mmol)的燒瓶中加入二氯甲烷(10ml)。用0.100M三乙醇胺的乙酸乙酯(1.16ml，0.116mmol)溶液處理所得溶液，使溶液變渾濁。加入約2ml己烷。將混合物于-20℃放置過夜。經(jīng)4.0-5.5μm熔結(jié)玻璃漏斗過濾所產(chǎn)生的沉淀。取出固體，于真空下放置4h，得到69.9mg(42%)標(biāo)題三乙醇胺鹽，為灰白粉末，通過HPLC分析測得其純度為95-96%(TR＝2.05min，70∶30CH3CN/Q8緩沖液pH6.0，1.00ml/min，Zorbax C-18 25.0Cm，λ＝230nm)。
1H-NMR(d6-acetone/D2O，300MHz)δ8.03(d，J＝7.4，2H);7.65(t，J＝7.3，1H);7.54(t，J＝7.6，2H);7.42-7.33(m，5H);7.21(t，J＝7.0，1H);6.09(t，J＝9.0，1H);5.81(s，1H);5.59(d，J＝7.0，1H);5.12(bs，2H);4.93(d，J＝8.4，2H)，4.56(d，J＝4.9，1H);4.31-4.26(m，1H);4.11(s，2H);3.41-3.37(m，6H);2.42-2.32(m，5H);2.15(bs，1H);1.97(s，3H);1.77-1.64(m，2H);1.58(s，3H);1.13(s，9H);1.15-1.07(m，6H).
13C NMR(d6-acetone，D2O，75.6MHz)δ171.6，166.9，156.6，141.8，135.1，134.2，131.0，130.7，129.4，129.3，128.4，128.1，88.3，85.4，81.9，79.7，78.6，78.1，76.8，76.0，74.8，71.9，71.2，47.4，44.0，37.1，36.3，28.5，27.0，23.1，22.0，14.7，10.4.
HRMSMNa+，940.3142(Calculated for C44H56NO18PNa＝940.3133)
實(shí)施例10 2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚
(a)制備2′-O-(甲硫甲氧甲基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
于室溫下向7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚(70.0mg，72.2mmol)、雙(甲硫甲基)醚(90mg，72.2mmol)、分子篩(70mg)和N-碘代琥珀酰亞胺(160mg，72.2mmol)的THF(2.0ml)溶液中加入三氟甲磺酸銀(5.0mg，19.5mmol)，并將所得溶液攪拌2h。然后用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，并通過Celite過濾。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和5%硫代硫酸鈉水溶液的1∶1(V∶V)混合物及鹽水洗滌。在NaSO4上干燥有機(jī)相，并真空濃縮。經(jīng)快速層析(3∶1，己烷∶乙酸乙酯)純化殘余油，得到22.0mg(29%)標(biāo)題化合物，為白色固體
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.12-7.20(15H，m)，7.04(1H，d，J＝8.9 Hz)，6.41(1H，s)，6.25(1H，m)，5.81(1H，dd，J＝8.9，2.4Hz)，5.68(1H，d，J＝7.0 Hz)，4.93(1H，d，8.0 Hz)，4.79(2H，m)，4.71(1H，d，2.4 Hz)，4.45(1H，dd，J＝10.5，6.6 Hz)，4.30(1H，d，J＝8.3 Hz)，4.28(1H，d，J＝11.7Hz)，4.17(1H，d，J＝8.3 Hz)，4.04(1H，d，J＝11.7 Hz)，3.80(1H，d，J＝6.9 Hz)，2.48-1.13(25H，m，incl.singlets at 2.51，2.13，2.05，2.01，1.69，1.19，1.16)，0.98-0.85(9H，m)，0.65-0.50(6H，m).
(b)制備2′-O-(二芐基膦酰氧甲氧甲基)-7-三乙基甲硅烷基紫杉酚
于室溫下向步驟(a)產(chǎn)物(15mg，0.0141mmol)和分子篩(15mg)的THF(0.5ml)溶液中加入磷酸二芐酯(20.0mg，0.089mmol)及N-碘代琥珀酰亞胺(4.2mg，0.0187mmol)，攪拌溶液1h。此時通過TLC分析反應(yīng)混合物發(fā)現(xiàn)僅存在起始物。在2h內(nèi)分三次加入三氟甲磺酸銀(5.0mg，0.019mmol)，并攪拌反應(yīng)1h。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，所得溶液經(jīng)Celite塞過濾。濾液用飽和碳酸氫鈉和5%硫代硫酸鈉水溶液的1∶1(V∶V)混合溶液處理。然后用鹽水洗滌有機(jī)萃取物，于NaSO4上干燥，并真空濃縮。經(jīng)快速層析純化殘余油(1∶1，己烷∶乙酸乙酯)，得到5.0mg(33%)標(biāo)題化合物
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ8.08-7.16(25H，m)，7.18(1H，d，J＝8.8 Hz)，6.41(1H，s)，6.21(1H，m)，5.82(1H，dd，J＝9.0，3.1 Hz)，5.66(1H，d，7.0 Hz)，5.01-4.65(10H，m)，4.56(1H，dd，J＝14.7，5.6 Hz)，4.43(1H，dd，J＝10.4，6.7 Hz)，4.29(1H，d，J＝8.3 Hz)，4.16(1H，d，J＝8.3 Hz)，3.78(1H，d，J＝7.0 Hz)，2.60-1.13(22H，m，incl.singlets at 2.49，2.15，1.93，1.66，1.15，1.13，3H each)，0.95-0.84(9H，m)，0.63-0.45(6H，m).
(c)制備2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚
按照實(shí)例9(f)的方法，用氟化四丁銨處理步驟(b)產(chǎn)物以除去7-O-三乙基甲硅烷基保護(hù)基。按前面實(shí)例所述方法對所得化合物進(jìn)行催化氫化后得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11 2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚(替代途徑)
(a)制備2′-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚
于0℃向紫杉酚(20.0g，0.0234mmol)和咪唑(3.5g，0.052mmol)的150ml DMF(二甲基甲酰胺)溶液中加入三乙基甲硅烷基氯(6.0ml，0.053mol)，每次2.0ml，在20min內(nèi)加完。然后于0℃攪拌1h。用乙酸乙酯及飽和氯化銨水溶液稀釋反應(yīng)混合物。除去有機(jī)層，用鹽水洗滌，用NaSO4干燥，并真空濃縮，得到黃色油狀物。經(jīng)快速層析(己烷∶乙酸乙酯，1∶3，1∶1)純化后得到21.07g(Y98%)所需標(biāo)題化合物，為無色白色固體。
1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ8.15(2H，m)，7.70(2H，m)，7.65-7.30(11H，m)7.15(1H，d，J＝8.9 Hz)，6.30(1H，s)，6.25(1H，m)，6.70-6.10(2H，m)，4.94(1H，d，J＝7.9 Hz)，4.67(1H，d，2.0 Hz)，4.40(1H，m)，4.29(1H，d，J＝8.4 Hz)，4.18(1H，d，J＝8.4 Hz)，3.81(1H，d，J＝7.1 Hz)，2.65-1.10(22H，including singlets at 2.55，2.20，1.88，1.69，1.22，1.13，3H each).
(b)制備2′-O-三乙基甲硅烷基-7-O-芐氧羰基紫杉酚
在10min內(nèi)將丁基鋰(1.6M于己烷，12.9ml，8.06mmol)滴加至冷卻至-50℃的2′-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚(22.3g，24.1mmol)的THF(250ml)溶液中。攪拌所得溶液20min，并將溫度維持在-50℃至-35℃。然后冷卻混合物至-50℃，在5min內(nèi)滴加氯代甲酸芐酯(5.08ml，29.8mmol)。將反應(yīng)混合物于-40℃維持30min，然后在約30min內(nèi)平衡至0℃。用乙酸乙酯及飽和氯化銨水溶液稀釋混合物，用鹽水洗滌有機(jī)層，于NaSO4上干燥并真空濃縮。對粗產(chǎn)物進(jìn)行1H-NMR分析，發(fā)現(xiàn)存在所需的2′-O-三乙基甲硅烷基-7-O-芐氧羰基紫杉酚和2′-O-三乙基甲硅烷基-7-表羥基紫杉酚(3∶1)。該產(chǎn)物混合物不經(jīng)純化直接用于下一步驟，并隨后分離異構(gòu)體，通過快速層析純化主要產(chǎn)物2′-O-三乙基甲硅烷基-7-O-芐氧羰基紫杉酚的分析性樣品;
1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ8.12(2H，m)，7.72(1H，m)，7.65-7.27(1H，d，J＝8.8 Hz)，6.41(1H，m)，6.20(1H，m)，5.72-5.65(2H，m)，5.52(1H，m)，5.24(1H，d，J＝12.3 Hz)，5.16(1H，d，J＝12.3Hz)，4.95(1H，d，J＝8.7 Hz)，4.69(1H，s)，4.35(1H，d，J＝8.3 Hz)，4.25(1H，d，J＝8.3 Hz)，3.94(1H，d，J＝6.8 Hz)，2.70-1.12(22H，including singlets at 2.54，2.14，2.01，1.80，1.20，1.15，3H each)，0.81-0.73(9H，m)，0.55-0.31(6H，m).
(c)制備7-O-芐氧羰基紫杉酚
將鹽酸(6N，1.0ml，6.0mmol)加至冷卻至0℃的步驟(b)產(chǎn)物(24.0g，22.6mmol)的乙腈(250ml)溶液中，10min后TLC分析(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)證實(shí)反應(yīng)完全。用飽和碳酸氫鈉水溶液及乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，除去有機(jī)層，用鹽水洗滌，用NaSO4干燥，并真空濃縮。經(jīng)快速層析(己烷∶乙酸乙酯，1∶3，然后1∶1)純化殘余油狀物，得到11.4g(48%)標(biāo)題化合物和4.8g(70%)7-表羥基紫杉酚。
1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ8.09(2H，m)，7.71(2H，m)，7.65-7.27(16H，m)，7.10(1H，d，8.9 Hz)，6.39(1H，s)，6.16(1H，m)，5.81(1H，d，J＝8.9，2.4Hz)，5.65(1H，d，J＝6.9 Hz)，5.49(1H，dd，J＝10.6，7.2Hz)，5.20(1H，d，J＝11.9Hz)，5.12(1H，d，J＝11.9)，4.91(1H，d，J＝8.4Hz)，4.78(1H，m)，4.30(1H，d，J＝8.4 Hz)，4.15(1H，d，J＝8.4 Hz)，3.91(1H，d，J＝6.8 Hz)，3.69(1H，d，J＝4.9 Hz)，2.65-1.10(22H，including singlets at 2.39，2.18，1.81，1.75，1.21，1.15，3H each).
(d)制備2′-O-(甲硫甲氧甲基)-7-O-芐氧羰基紫杉酚
于室溫下將三氟甲磺酸銀(300mg，1.17mmol)加至7-O-芐氧羰基紫杉酚(5.53g，5.71mmol)、1，1′-二硫甲基二甲基醚(7.8g，57.1mmol)、N-碘代琥珀酰亞胺(6.35g，28.3mmol)及爐干燥的粉化分子篩(5.0g)的THF(110ml)溶液中。20min后通過TLC分析(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)發(fā)現(xiàn)約40%起始物轉(zhuǎn)化為跑得更快的產(chǎn)物。然后加入三氟甲磺酸銀(150mg，0.585mmol)，約30min后通過TLC測得反應(yīng)約65%完全、用乙酸乙酯(100ml)稀釋混合物，用Celite塞過濾并將濾液倒入含有200ml飽和碳酸氫鈉水溶液和50ml5%硫代硫酸鈉水溶液的分離漏斗中。取出有機(jī)層，用鹽水洗滌，于NaSO4上干燥并真空濃縮。通過快速層析(己烷∶乙酸乙酯，梯度洗脫4∶1-3∶2)純化殘余油狀物，得到3.0g(54%)標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。
1H-NMR(300 MHz，CDCL3)δ8.10(2H，m)，7.74(2H，m)，7.66-7.25(18H，m)，7.05(1H，d，J＝8.9 Hz)，6.40(1H，s)，6.26(1H，m)，5.77(1H，dd，J＝8.8，2.5 Hz)，5.71(1H，d，J＝6.9 Hz)，5.51(1H，dd，J＝10.6，7.1 Hz)，5.21(1H，d，J＝11.9 Hz)，5.14(1H，d，J＝11.9 Hz)，4.92(1H，m)，4.79(2H，m)，4.68(1H，d，J＝2.5 Hz)，4.31(1H，d，J＝11.8 Hz)，4.30(1H，d，J＝8.5 Hz)，4.16(1H，d，J＝8.5Hz)，4.10(1H，d，J＝11.8Hz)，3.93(1H，d，J＝6.9Hz)，2.65-1.10(25H including singlets at 2.50，2.15，2.05，1.74，1.72，1.20，1.15，3H each).
(e)制備2′-O-(二芐基膦酰氧甲氧甲基)-7-O-芐氧羰基紫杉酚
于室溫下，向2′-O-(甲硫甲氧甲基)-7-O-芐氧羰基紫杉酚(1.06g，1.07mmol)和爐干粉化分子篩(1.0g)的THF(20ml)溶液中加入磷酸二芐酯(1.49g，5.30mmol)，緊接著加入N-碘代琥珀酰亞胺(2.65g，1.18mmol)。2.5h后通過TLC分析(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完成60%。加入N-碘代琥珀酰亞胺(175mg，0.78mmol)，攪拌30min，再通過TLC分析發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完全。用乙酸乙酯(50ml)稀釋反應(yīng)混合物，并用Celite塞過濾。將濾液倒入含有100ml飽和碳酸氫鈉水溶液和20ml 5%硫代硫酸鈉水溶液的分離漏斗中，取出有機(jī)層，用鹽水洗滌，用NaSO4干燥，并真空濃縮。利用快速層析(己烷∶乙酸乙酯，梯度洗脫，3∶1-1∶1)純化殘余油狀物，得到750mg(62%)所需標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(360 MHz，CDCl3)δ8.10(2H，m)，7.79(2H，m)，7.65-7.24(26H，m)，7.10(1H，m)，6.41(1H，s)，6.20(1H，m)，5.79(1H，dd，J＝8.8，3.6Hz)，5.65(1H，d，J＝7.0 Hz)，5.52(1H，m)，5.20(1H，d，J＝11.8 Hz)，5.11(1H，d，J＝11.8 Hz)，5.04-4.85(6H，m)，4.75-4.60(4H，m)，4.30(1H，d，8.4 Hz)，4.15(1H，d，J＝8.4 Hz)，3.92(1H，d，J＝7.0 Hz)2.65-1.10(22H including singlets at 2.48，2.19，1.95，1.80，1.20，1.10，3H each).
(f)制備2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚三乙醇胺鹽
向放置在帕爾瓶中的2′-O-(二芐基膦酰氧甲氧甲基)-7-O-芐氧羰基紫杉酚(500mg，0.382mmol)的乙酸乙酯(40ml)溶液中加入pd-C(10%)。將該容器固定在帕爾裝置上，將混合物通過50psi氫氣、振蕩混合物6.5h，然后用熔結(jié)玻璃漏斗過濾，向?yàn)V液中加入三乙醇胺(0.1N于乙酸乙酯，4.0ml)，真空濃縮所得溶液。粗產(chǎn)物懸浮于5.0ml乙酸乙酯中，并棄掉溶劑。重復(fù)該法三次，得到標(biāo)題三乙醇胺鹽(300mg)，經(jīng)HPLC分析測得的純度為87%。通過C18層柱(水∶乙腈，3∶1)進(jìn)一步純化該化合物后，得到所需標(biāo)題化合物(120mg，34%)，HPLC測得純度為95%。
1H-NMR(300MHz，CD3COCD3，D2O)δ9.05(1H，d，J＝8.7Hz)，8.15-7.12(21H，m)，6.40(1H，m)，6.05(1H，m)，5.69-5.55(2H，m)，5.01-4.85(6H，m)，4.35(1H，m)，4.14(2H，m)，3.96-3.85(6H，m)，3.25(1H，d，J＝7.1Hz)，3.30-3.15(6H，m)2.50-1.04(22H，including singlets at 2.49，2.15，2.05，1.81，1.60，3H each).
附加實(shí)施例
按照上面提供的一般方法，制備出下列屬于本發(fā)明式(A)范圍內(nèi)的化合物
權(quán)利要求
1、下式化合物或其可作藥用的鹽
中T為在C13碳原子上帶有取代的3-氨基-2-羥基丙酰氧基的塔三烷殘基；m為0或1-6的整數(shù)；n為1，2或3。
2、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所說塔三烷殘基進(jìn)一步的特征在于含有至少一個C11-C12雙鍵、C1羥基、C2芐酰氧基、C4乙酰氧基、C9氧基和C5-C20氧雜環(huán)丁烷。
3、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述塔三烷殘基得自下式殘基
其中R2e′為氫且R2e為氫、羥基、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;或R2e為氫且R2e′為氟;R3e為氫、羥基、-OC(O)Rx、C1-6烷氧基或-OC(O)ORx;R6e或R7e之一為氫，另一個為羥基或-C(O)ORX;或R6e和R7e共同形成氧代基;Rx為非限制性地被1-6個相同或不同鹵原子取代的C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C2-6鏈烯基或下式殘基
其中D為一鍵或C1-6烷基;且Ra、Rb和Rc獨(dú)立為氫、氨基、C1-6烷氨基、二-C1-6烷氨基、鹵素、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
4、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述的取代的3-氨基-2-羥基丙酰氧基得自下式殘基.
其中
R1e為氫或-C(O)Rx、-C(O)ORx;
R4和R5獨(dú)立地為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6鏈炔基或-Z-R6;
Z為一直接鍵、C1-6烷基或C2-6鏈烯基;
R6為芳基、取代芳基、C3-6環(huán)烷基或雜芳基;
P為0或1;且
RX的定義同前。
5、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所說塔三烷殘基進(jìn)一步的特征在于它含有至少一個C11-C12雙鍵、C1羥基、C2芐酰氧基、C4乙酰氧基、C9氧基和C5-C20氧雜環(huán)丁烷;且所說取代的3-氨基-2-羥基丙酰氧基得自下式殘基
其中R1e、R4、R5和P的定義同前。
6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其可作藥用的鹽，該化合物具有下式
其中
R′為羥基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;
R2′為氫，且R2為氫、羥基、-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2為氫;
R3為氫、羥基、乙酰氧基、-OCH2(OCH2)mOP(O)OH2或-OC(O)ORX;
R6和R7之一為氫，另一個為羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;或R6和R7共同形成一氧代基;條件是R1、R2、R3、R6或R7中至少一個為-OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2;
m為0、1或2;
R4、R5、Rx和P的定義同前。
7、根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其可作藥用的鹽，其中R2′為氫，且R2為-OCH2OP(O)(OH)2。
8、根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R′為羥基或-OC(O)ORx;且RX的定義同前。
9、根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中RX為C1-6烷基。
10、根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R3為氫、羥基或乙酸基。
11、根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4(O)p為苯基或叔丁氧基。
12、根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R5為苯基、2-呋喃基或2-噻吩基。
13、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為2′-O-(乙氧羰基)-7-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚。
14、權(quán)利要求13化合物的鈉鹽。
15、權(quán)利要求13化合物的三乙醇胺鹽。
16、權(quán)利要求13化合物的三乙胺鹽。
17、權(quán)利要求13化合物的精氨酸鹽。
18、權(quán)利要求13化合物的賴氨酸鹽。
19、權(quán)利要求13化合物的乙醇胺鹽。
20、權(quán)利要求13化合物的N-甲基葡糖胺鹽。
21、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為7-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚。
22、權(quán)利要求21化合物的鈉鹽。
23、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚。
24、權(quán)利要求23化合物的三乙醇胺鹽。
25、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-膦酰氧甲基紫杉酚。
26、權(quán)利要求25化合物的三乙醇胺鹽。
27、根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其可作藥用的鹽，其中R′為-OCH2OP(O)(OH)2。
28、根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R2′為氫，R2為氫、羥基或-OC(O)ORX，且RX的定義同權(quán)利要求6。
29、根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中R3為氫、羥基或乙酸基。
30、根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中R4(O)p為苯基或叔丁氧基。
31、根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中R5為苯基。
32、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為2′-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚。
33、根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其可作藥用的鹽，其中R′和R2均為-OCH2OP(O)(OH)2。
34、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為2′，7-O-雙(膦酰氧甲基)紫杉酚。
35、權(quán)利要求34化合物的鈉鹽。
36、根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其可作藥用的鹽，其中R′為-OCH2OCH2OP(O)(OH)2。
37、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為2′-O-膦酰氧甲氧甲基紫杉酚。
38、權(quán)利要求37化合物的三乙醇胺鹽。
39、根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其可作藥用的鹽，其中R3為-OCH2OP(O)(OH)2。
40、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可作藥用的鹽，它為10-脫乙?；?3′-N-脫苯甲?；?3′-N-(叔丁氧羰基)-10-O-(膦酰氧甲基)紫杉酚。
41、權(quán)利要求40化合物的三乙醇胺鹽。
42、下式的化合物或其C13金屬醇鹽
其中txn為塔三烷殘基，m和n的定義同前。
43、根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中塔三烷殘基得自下式殘基。
其中R2e、R2e′、R3e、R6e和R7e的定義同前。
44、根據(jù)權(quán)利要求42的化合物或其C13金屬醇鹽，它具有下式
45、下式的化合物
其中T′為其中非反應(yīng)羥基被保護(hù)的T，m和n的定義同前。
46、根據(jù)權(quán)利要求45的化合物，它具有下式
其中R1b為羥基、保護(hù)羥基、-OCH2SCH3、-OC(O)Rx或-OC(O)ORx;R2′為氫，且R2b為氫、羥基、保護(hù)羥基、-OCH2SCH3或-OC(O)ORx;或R2′為氟，且R2b為氫;R3b為氫、羥基、保護(hù)羥基、乙酸基、-OCH2SCH3或-OC(O)ORx;R6b或R7b之一為氫，且另一個為羥基、保護(hù)羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2SCH3;或R6b和R7b共同形成一氧代基;條件是R1b、R2b、R3b、R6b或R7b中至少一個為-OCH2SCH3;P、R4、R5和RX的定義同前。
47、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為7-O-甲硫甲基紫杉酚。
48、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為2′-O-(芐氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
49、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為2′-O-(乙氧羰基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
50、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為2′-O-(甲硫甲基)-7-O-(三乙基甲硅烷基)紫杉酚。
51、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為2′-O-(甲硫甲基)紫杉酚。
52、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為2′，7-O-雙(甲硫甲基)紫杉酚。
53、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
54、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為3′-N-脫苯甲酰基-3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-呋喃基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
55、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
56、根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，它為3′-N-脫苯甲?；?3′-脫苯基-3′-N-(叔丁氧羰基)-3′-(2-噻吩基)-2′-O-乙氧羰基-7-O-甲硫甲基紫杉酚。
57、根據(jù)權(quán)利要求45的化合物，它具有下式
其中R2′、R2b、R3b、R4、R5、R6b、R7b和P的定義同前。
58、根據(jù)權(quán)利要求57的化合物，它為2′-O-(甲硫甲氧基)-7-O-三乙基甲硅烷基紫杉酚。
59、根據(jù)權(quán)利要求57的化合物，它為2′-O-(甲硫甲氧甲基)-7-O-芐氧羰基紫杉酚。
60、下式化合物
其中T′、m和n的定義同前，且Ry為膦?；Ｗo(hù)基。
61、根據(jù)權(quán)利要求60的化合物，它具有下式
其中R1c為羥基、保護(hù)羥基、-OCH2OP(O)(OCH2Ry)2或-OC(O)ORx;R2′為氫，R2c為氫、羥基、保護(hù)羥基、-OCH2OP(O)(OCH2Ry)2或-OC(O)ORx;或R2′為氟，R2c為氫;R3c為氫、羥基、保護(hù)羥基、乙酸基、-OCH2OP(O)(OCH2Ry)2或-OC(O)ORx;R6c或R7c之一為氫，且另一個為羥基、保護(hù)羥基、C1-6烷酰氧基或-OCH2OP(O)(ORy)2;或R6c和R7c共同形成一氧代基;條件是R1b、R2b、R3b、R6C或R7C中至少一個為-OCH2OP(O)(OCH2Ry)2;P、R4、R5、Rx和Ry的定義同前。
62、根據(jù)權(quán)利要求60的化合物，它具有下式
其中R2′、R2c、R3c、R4、R5、R6c、R7c、Ry和P的定義同前。
63、一種藥物組合物，它包括抗腫瘤有效量的權(quán)利要求1化合物及一種可作藥用的鹽。
64、一種抑制哺乳動物宿主腫瘤生長的方法，它包括給該宿主服用腫瘤生長抑制量的權(quán)利要求1化合物。
65、一種抑制哺乳動物腫瘤生長的方法，它包括通過口服途徑給該哺乳動物服用腫瘤生長抑制量的權(quán)利要求1化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的水溶性塔三烷膦酰氧甲基醚衍生物，它們作為抗腫瘤劑的應(yīng)用以及含有該新化合物的藥物組合物。
文檔編號C07D305/14GK1093369SQ93121100
公開日1994年10月12日 申請日期1993年12月24日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月24日
發(fā)明者J·戈里克, D·維亞斯, J·J·賴特, H·翁, J·F·凱多, J·K·索托希爾, 李文森, M·A·卡普蘭, R·K·佩龍 申請人:布里斯托爾-米爾斯·斯奎布公司