一種葡萄籽蛋白的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種葡萄籽蛋白的提取方法，以葡萄籽為原料，先提取原花青素，再提取葡萄籽油，最后再提取蛋白質(zhì)，即先用乙醇溶液浸提法從整粒葡萄籽中分離提取葡萄原花青素，再將該批葡萄籽用壓榨法分離提取葡萄籽油，最后將提取了原花青素和葡萄籽油的葡萄籽殘渣用酸堿二次溶解沉淀法分離提取葡萄籽蛋白。同目前的其他提取方法比較，本發(fā)明充分利用了葡萄籽資源，同一批葡萄籽原料可以同時獲得三種產(chǎn)品，葡萄籽資源利用率高，在其提取工藝中，前一物質(zhì)的提取不影響后一物質(zhì)的提取，還有利于后一物質(zhì)的提取，簡化了提取步驟，具有節(jié)約資源、工藝簡便、減少成本、提高效率、增加效益等優(yōu)點；采用酸堿二次溶解沉淀法進行葡萄籽蛋白的提取，提取率可達到90％以上。
【專利說明】一種葡萄籽蛋白的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)天然物質(zhì)提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及一種葡萄籽蛋白的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]葡萄籽是指葡萄漿果內(nèi)含有的種子，在葡萄酒廠釀制葡萄酒后剩余的葡萄殘渣中含有大量葡萄籽。眾多學(xué)者研究報道了葡萄籽中含有葡萄原花青素、葡萄籽油和葡萄籽蛋白等多種生物活性物質(zhì)及其提取分離方法，并有多家工廠進行了葡萄原花青素和葡萄籽油的批量生產(chǎn)。但現(xiàn)有報道和應(yīng)用的提取分離方法都是針對其中某一物質(zhì)的，即都是以葡萄籽為原料，從中提取或是原花青素、或是葡萄籽油、或是蛋白質(zhì)，造成了資源的浪費。
[0003]目前，報道和應(yīng)用的葡萄籽蛋白提取法是建立在葡萄籽蛋白為酸性蛋白的理論基礎(chǔ)上，先采用堿溶或鹽析法進行溶解，再利用等電點原理進行分離提取，提取率一般在70%左右，提取率并不聞。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有從葡萄籽中提取蛋白質(zhì)時存在的資源浪費、提取率不高等上述不足，提供一種葡萄蛋白的提取方法，該方法以葡萄籽為原料，在提取蛋白質(zhì)之前，先提取原花青素和葡萄籽油，充分利用了葡萄籽資源，具有節(jié)約資源、工藝簡便、減少成本、提高效率、增加效益等諸多優(yōu)點。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽為原料，其工藝步驟為:
[0006](I)提取原花青素:
[0007]采用葡萄渣加工處理器將葡萄籽原料進行處理和清洗，再將葡萄籽置于溫度為45-50°C、濃度為30%的乙醇水溶液浸提10-20小時，過濾得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽備用；將原花青素提取物溶液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、柱層析吸附分離及洗脫，收集洗脫后的原花青素提取物進行干燥處理后獲得原花青素產(chǎn)品；
[0008](2)提取葡萄籽油:
[0009]將上述過濾得到的葡萄籽經(jīng)過破碎、軟化、炒坯、壓餅、壓榨工藝處理，得到葡萄籽油和壓榨后的葡萄籽殘渣，壓榨后的葡萄籽殘渣備用，壓榨處理后得到的葡萄籽油經(jīng)過純化精煉處理后獲得葡萄籽油產(chǎn)品；
[0010](3)提取葡萄籽蛋白:
[0011]A、將上述壓榨后的葡萄籽殘渣置于pH值為7.8-8.3、溫度為40_42°C的堿性溶液中浸提12-24小時，料液比為1:10，浸提期間每隔I小時充分攪拌一次；
[0012]B、完成上述浸提過程后，再將該堿性提取液中加入鹽酸溶液并調(diào)節(jié)pH值為3.3-3.6，繼續(xù)在溫度為40-42°C條件下浸泡6_12小時，同樣浸泡期間每隔I小時充分攪拌一次，靜置沉淀后，棄除底層沉淀物，收集上層浸提液備用；
[0013]C、將上述浸提液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.1-4.2，靜置6_12小時，析出沉淀，采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀后，再將該提取液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為6.8-6.9，靜置6-12小時，析出沉淀，同樣采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀，將兩次收集的沉淀合并后，置于溫度為40-50°C的烘干箱中干燥后獲得葡萄籽蛋白產(chǎn)品。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明建立了從同一批葡萄籽原料中，先提取原花青素，再提取葡萄籽油，最后再提取蛋白質(zhì)的工藝技術(shù)方法，即先用乙醇溶液浸提法從整粒葡萄籽中分離提取葡萄原花青素，再將該批葡萄籽用壓榨法分離提取葡萄籽油，最后將提取了原花青素和葡萄籽油的葡萄籽殘渣用酸堿二次溶解沉淀法分離提取葡萄籽蛋白，同目前的其他提取方法比較，本發(fā)明充分利用了葡萄籽資源，同一批葡萄籽原料可以同時獲得三種產(chǎn)品，葡萄籽資源利用率高，且在其提取工藝中，前一物質(zhì)的提取不僅不影響后一物質(zhì)的提取，還有利于后一物質(zhì)的提取，簡化了提取步驟，具有節(jié)約資源、工藝簡便、減少成本、提高效率、增加效益等諸多優(yōu)點。本發(fā)明建立了用酸堿二次溶解沉淀法進行葡萄籽蛋白的提取，提取率可達到90%以上，提聞了匍萄桿蛋白的提取效率。

【具體實施方式】
[0015]【具體實施方式】一:一種葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽為原料，其工藝步驟為:
[0016](I)提取原花青素:
[0017]采用葡萄渣加工處理器將葡萄籽原料進行處理和清洗，再將葡萄籽置于溫度為45°C、濃度為30%的乙醇水溶液浸提10小時，過濾得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽備用；將原花青素提取物溶液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、柱層析吸附分離及洗脫，收集洗脫后的原花青素提取物進行干燥處理后獲得原花青素產(chǎn)品；
[0018](2)提取葡萄籽油:
[0019]將上述過濾得到的葡萄籽經(jīng)過破碎、軟化、炒坯、壓餅、壓榨工藝處理，得到葡萄籽油和壓榨后的葡萄籽殘渣，壓榨后的葡萄籽殘渣備用，壓榨處理后得到的葡萄籽油經(jīng)過純化精煉處理后獲得葡萄籽油產(chǎn)品；
[0020](3)提取葡萄籽蛋白:
[0021]A、將上述壓榨后的葡萄籽殘渣經(jīng)105°C恒溫干燥后，用凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量為11.8%，取干燥后的葡萄籽殘渣200g，將其置于pH值為7.8、溫度為40°C、溶液體積為2L的氫氧化鈉溶液中浸提20小時，浸提期間每隔I小時充分攪拌一次；
[0022]B、完成上述浸提過程后，再將該氫氧化鈉提取液中加入鹽酸溶液并調(diào)節(jié)pH值為3.3，繼續(xù)在溫度為40°C條件下浸泡10小時，同樣浸泡期間每隔I小時充分攪拌一次，靜置沉淀后，棄除底層沉淀物，收集上層浸提液備用；
[0023]C、將上述浸提液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.1,靜置10小時,析出沉淀,采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀后，再將該提取液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為6.8，靜置10小時，析出沉淀，同樣采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀，將兩次收集的沉淀合并后，置于溫度為45°C的烘干箱中干燥后獲得葡萄籽蛋白產(chǎn)品。
[0024]【具體實施方式】二:一種葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽為原料，其工藝步驟為:
[0025](I)提取原花青素:
[0026]采用葡萄渣加工處理器將葡萄籽原料進行處理和清洗，再將葡萄籽置于溫度為48°C、濃度為30%的乙醇水溶液浸提15小時，過濾得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽備用；將原花青素提取物溶液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、柱層析吸附分離及洗脫，收集洗脫后的原花青素提取物進行干燥處理后獲得原花青素產(chǎn)品；
[0027](2)提取葡萄籽油:
[0028]將上述過濾得到的葡萄籽經(jīng)過破碎、軟化、炒坯、壓餅、壓榨工藝處理，得到葡萄籽油和壓榨后的葡萄籽殘渣，壓榨后的葡萄籽殘渣備用，壓榨處理后得到的葡萄籽油經(jīng)過純化精煉處理后獲得葡萄籽油產(chǎn)品；
[0029](3)提取葡萄籽蛋白:
[0030]A、將上述壓榨后的葡萄籽殘渣經(jīng)105 °C恒溫干燥后，取干燥后的葡萄籽殘渣500g，將其置于pH值為8.0、溫度為41°C、溶液體積為5L的氫氧化鈉溶液中浸提18小時，浸提期間每隔I小時充分攪拌一次；
[0031]B、完成上述浸提過程后，再將該氫氧化鈉提取液中加入鹽酸溶液并調(diào)節(jié)pH值為3.5，繼續(xù)在溫度為41°C條件下浸泡8小時，同樣浸泡期間每隔I小時充分攪拌一次，靜置沉淀后，棄除底層沉淀物，收集上層浸提液備用；
[0032]C、將上述浸提液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.1,靜置10小時,析出沉淀,采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀后，再將該提取液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為6.8，靜置10小時，析出沉淀，同樣采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀，將兩次收集的沉淀合并后，置于溫度為45°C的烘干箱中干燥后獲得葡萄籽蛋白產(chǎn)品。
[0033]【具體實施方式】三:一種葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽為原料，其工藝步驟為:
[0034](I)提取原花青素:
[0035]采用葡萄渣加工處理器將葡萄籽原料進行處理和清洗，再將葡萄籽置于溫度為50°C、濃度為30%的乙醇水溶液浸提20小時，過濾得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽備用；將原花青素提取物溶液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、柱層析吸附分離及洗脫，收集洗脫后的原花青素提取物進行干燥處理后獲得原花青素產(chǎn)品；
[0036](2)提取葡萄籽油:
[0037]將上述過濾得到的葡萄籽經(jīng)過破碎、軟化、炒坯、壓餅、壓榨工藝處理，得到葡萄籽油和壓榨后的葡萄籽殘渣，壓榨后的葡萄籽殘渣備用，壓榨處理后得到的葡萄籽油經(jīng)過純化精煉處理后獲得葡萄籽油產(chǎn)品；
[0038](3)提取葡萄籽蛋白:
[0039]A、將上述壓榨后的葡萄籽殘渣經(jīng)105°C恒溫干燥后，取干燥后的葡萄籽殘渣1kg，將其置于PH值為8.3、溫度為42°C、溶液體積為1L的堿性溶液中浸提24小時，浸提期間每隔I小時充分攪拌一次；
[0040]B、完成上述浸提過程后，再將該堿性提取液中加入鹽酸溶液并調(diào)節(jié)pH值為3.6，繼續(xù)在溫度為42°C條件下浸泡12小時，同樣浸泡期間每隔I小時充分攪拌一次，靜置沉淀后，棄除底層沉淀物，收集上層浸提液備用；
[0041]C、將上述浸提液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.2,靜置12小時,析出沉淀,采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀后，再將該提取液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為6.9，靜置12小時，析出沉淀，同樣采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀，將兩次收集的沉淀合并后，置于溫度為45°C的烘干箱中干燥后獲得葡萄籽蛋白產(chǎn)品。
[0042]以上所舉實施例僅用為方便舉例說明本發(fā)明，在本發(fā)明所述技術(shù)方案范疇，所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員所作各種簡單變形與修飾，均應(yīng)包含在以上申請專利范圍中。
【權(quán)利要求】
1.一種葡萄籽蛋白的提取方法，其特征在于:采用葡萄籽為原料，其工藝步驟為: (1)提取原花青素: 采用葡萄渣加工處理器將葡萄籽原料進行處理和清洗，再將葡萄籽置于溫度為45-50°C、濃度為30%的乙醇水溶液浸提10-20小時，過濾得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽備用；將原花青素提取物溶液經(jīng)蒸發(fā)濃縮、柱層析吸附分離及洗脫，收集洗脫后的原花青素提取物進行干燥處理后獲得原花青素產(chǎn)品； (2)提取葡萄籽油: 將上述過濾得到的葡萄籽經(jīng)過破碎、軟化、炒坯、壓餅、壓榨工藝處理，得到葡萄籽油和壓榨后的葡萄籽殘渣，壓榨后的葡萄籽殘渣備用，壓榨處理后得到的葡萄籽油經(jīng)過純化精煉處理后獲得葡萄籽油產(chǎn)品； (3)提取葡萄籽蛋白: A、將上述壓榨后的葡萄籽殘渣置于pH值為7.8-8.3、溫度為40-42°C的堿性溶液中浸提12-24小時，料液比為1:10，浸提期間每隔I小時充分攪拌一次； B、完成上述浸提過程后，再將該堿性提取液中加入鹽酸溶液并調(diào)節(jié)pH值為3.3-3.6，繼續(xù)在溫度為40-42°C條件下浸泡6-12小時，同樣浸泡期間每隔I小時充分攪拌一次，靜置沉淀后，棄除底層沉淀物，收集上層浸提液備用； C、將上述浸提液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.1-4.2，靜置6-12小時，析出沉淀，采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀后，再將該提取液加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為.6.8-6.9，靜置6-12小時，析出沉淀，同樣采用濾紙抽濾方式進行分離并收集沉淀，將兩次收集的沉淀合并后，置于溫度為40-50°C的烘干箱中干燥后獲得葡萄籽蛋白產(chǎn)品。
【文檔編號】C07D311/62GK104447944SQ201410835411
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月26日
【發(fā)明者】王云, 邱霞, 王可平, 鐘進義 申請人:青島海隆達生物科技有限公司