一種多肽、多肽衍生物、多肽的可藥用鹽及藥物組合物的制作方法
【專利摘要】為克服現(xiàn)有技術中促胰島新生多肽的血漿半衰期較短、活性較低的問題，本發(fā)明提供了一種多肽。同時，本發(fā)明還公開了上述多肽的衍生物、可藥用鹽及藥物組合物。本發(fā)明提供的多肽在血液中的穩(wěn)定性高，半衰期長。
【專利說明】一種多肽、多肽衍生物、多肽的可藥用鹽及藥物組合物
[0001]本申請基于2013年3月15日提交的在先的PCT國際申請(申請?zhí)枮镻CT/CN2013/072771 )，并要求其優(yōu)先權，將該在先申請的全部內容通過引用結合在本申請中。

【技術領域】
[0002]本發(fā)明主要涉及到醫(yī)藥及制藥領域，尤其是一種多肽以及該多肽的衍生物、可藥用鹽及藥物組合物。

【背景技術】
[0003]全世界有3億多人患有糖尿病(DM)并忍受由此帶來的痛苦。主要的糖尿病類型分為一型糖尿病(TlD)和二型糖尿病(T2D)兩種。一型糖尿病是由于機體無法產(chǎn)生胰島素從而病人需要每天給予胰島素進行治療；二型糖尿病的發(fā)病則是由于胰島素抵抗，即機體細胞無法恰當?shù)睦靡葝u素。目前對于二型糖尿病已經(jīng)有多種被證實確切有效的非胰島素治療方式，然而隨著疾病的發(fā)展，有相當大比例的晚期二型糖尿病病人胰島β細胞的功能喪失從而需要給予胰島素治療。
[0004]糖尿病的發(fā)展與胰腺中胰島的大量喪失有關。在被診斷出糖尿病之初，一型糖尿病病人90%以上的胰島、二型糖尿病病人50%左右的胰島已經(jīng)喪失。胰島新生被公認是治療一型和二型糖尿病的最優(yōu)方案，人們?yōu)閷ふ掖碳ひ葝u新生的方法也做出了很多嘗試和努力。
[0005]目前，研究者發(fā)現(xiàn)胰島新生相關蛋白(INGAP)、人促胰島肽(HIP)、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)、胰島內分泌血管活性腸肽(VIP)、表皮生長因子和胃泌素等都具有引發(fā)非內分泌胰腺母細胞分化成功能完善的胰島的功能，且已經(jīng)在多種動物模型中得到證實。在所有的這些化合物中，INGAP蛋白序列中104 - 118區(qū)域15個氨基酸的INGAP多肽(INGAP-PP)可誘發(fā)胰島新生，并且已經(jīng)在逆轉STZ誘發(fā)的小鼠糖尿病、增加一型糖尿病病人C-肽的釋放、改善二型糖尿病病人的血糖控制等多種實驗結果中得到證實。除此之外，另外有報道表明INGAP-PP還具有其他一些生物學效應，比如劑量依賴性的刺激胰島β細胞數(shù)目的增加、增加胰島素的分泌以及β細胞的大小。在人體開展的臨床驗證研究表明，其具有改善血糖平衡的功效，二型糖尿病病人給藥90天HbAlc指標的改善以及一型糖尿病病人C-肽的釋放明顯增加等均進一步證實了上述INGAP-PP的功效。然而，INGAP-PP的血漿半衰期較短并且需要給予較高的劑量等特點使得該多肽的臨床應用受到限制。


【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術問題是針對現(xiàn)有技術中INGAP-PP的血漿半衰期較短的問題，提供一種多肽。
[0007]本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案如下:
[0008]提供一種多肽，具有如下通式:
[0009]R1-1GLHDPSHGTLPAG(X1)n1-R2 ；
[0010]其中，m為O或I 選自-H或-Ac ；R2選自-OH或-NH2 ；
[0011]當R1 為-H、R2 為-OH且m 為 I 不成立時，X1 選自 Serine (S)、Glutamic acid (E)、Cysteine (C)或 Lysine (K)；
[0012]當R1 為-H、R2 為-OH 且m 為 I 成立時，X1 選自 Glutamic acid (E)、Cysteine (C)或 Lysine (K)。
[0013]同時，本發(fā)明還提供了一種多肽，R1-1glhdpshgtlpagsx2-R2；
[0014]其中，X2選自 Lysine (K)或 Cysteine (C)，R1 選自-H 或-Ac，R2 選自-OH 或-NH2。
[0015]同時，本發(fā)明還提供了基于上述多肽的多肽衍生物，該多肽衍生物為上述多肽的修飾產(chǎn)物。
[0016]進一步的，本發(fā)明還公開了上述多肽或多肽衍生物在制備治療糖尿病的藥物中的應用。
[0017]進一步的，本發(fā)明還提供了上述多肽或多肽衍生物的可藥用鹽，所述可藥用鹽為醋酸鹽和鹽酸鹽。
[0018]進一步的，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物由上述多肽或多肽衍生物與藥用載體按配方制造而成。
[0019]進一步的，本發(fā)明還提供了一種促進胰島細胞增殖的方法，包括采用上述多肽或多肽衍生物與胰島細胞接觸。
[0020]進一步的，本發(fā)明還提供了一種產(chǎn)生胰島細胞簇的方法，包括采用上述多肽或多肽衍生物與胰腺導管細胞接觸。
[0021]進一步的，本發(fā)明還提供了一種促進肝細胞再生的方法，包括采用上述多肽或多肽衍生物與肝細胞接觸。
[0022]進一步的，本發(fā)明還提供了一種促進神經(jīng)細胞再生的方法，包括采用上述多肽或多肽衍生物與神經(jīng)細胞接觸。
[0023]將本發(fā)明提供的多肽制備成藥物后，使用時可有效的改善胰島功能，并且該多肽的血漿半衰期長，穩(wěn)定性好，可在血液中長時間發(fā)揮作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1是本發(fā)明實施例2中，肽1、肽12、肽16在細胞培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性對比圖；
[0025]圖2是本發(fā)明實施例2中，肽1、肽12、肽16、肽29和肽31在大鼠血漿中的穩(wěn)定性對比圖；
[0026]圖3是本發(fā)明實施例2中，肽1、肽12、肽16、肽29在小鼠血漿中的穩(wěn)定性對比圖；
[0027]圖4是本發(fā)明實施例2中，肽1、肽12、肽16在人血漿中的穩(wěn)定性對比圖；
[0028]圖5是本發(fā)明實施例2另一組實驗中，肽1、肽29和肽31在人血漿中的穩(wěn)定性對比圖；
[0029]圖6是本發(fā)明實施例3中，肽1、肽12、肽16胰島素分泌量的對比圖；
[0030]圖7A是本發(fā)明實施例5中，經(jīng)過肽1、肽12、肽16、肽29或肽31治療10天后，雌性C57BL/6J小鼠EIC的數(shù)量對比圖；
[0031]圖7B是本發(fā)明實施例5中，經(jīng)過肽1、肽12、肽16、肽29或肽31治療10天后，雌性C57BL/6J小鼠EIC的總面積對比圖；
[0032]圖7C是本發(fā)明實施例5中，經(jīng)過肽1、肽12、肽16、肽29或肽31給藥后與胰腺導管上皮細胞相關聯(lián)的EIC代表性免疫組化圖；
[0033]圖8是本發(fā)明實施例6中，經(jīng)過肽1、肽12或肽31治療10天后，促進胰島新生的效果對比圖。

【具體實施方式】
[0034]為了使本發(fā)明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0035]本發(fā)明所述化合物，包含具有治療各種疾病和病癥，尤其是與糖尿病有關的疾病和病癥的多肽或多肽衍生物。另外本發(fā)明的多肽和多肽衍生物可用于以下用途:治療胰腺功能障礙、代謝性疾病、體外誘導胰島增殖用于移植、提高體內移植胰島的存活率、神經(jīng)保護或促進神經(jīng)再生、促進肝再生及抗炎等。
[0036]如本文所公開的，本發(fā)明提供了具有與原INGAP-PP和HIP肽相比活性和穩(wěn)定性相當或有所提高的一系列多肽(見表2和表3)。改善了成藥性的多肽使得它們更適合于臨床開發(fā)。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明中所提到的多肽或多肽衍生物的藥學組成成分及使用方法制備的藥物，用于治療代謝性疾病，包含但不限于一型糖尿病(TlD)和二型糖尿病(T2D)。本發(fā)明還提供本發(fā)明的組合物的合適的配方，包括緩釋制劑。
[0037]如前所述，來源于倉鼠的胰島新生相關蛋白(INGAP)已經(jīng)被證實具有促進胰島新生的作用(見美國專利第5834590號)。這里提到的INGAP-PP是INGAP蛋白的15個氨基酸多肽片段， 已經(jīng)被證實具有逆轉小鼠糖尿病模型的作用(Rosenberget al.，Ann.Surg.240:875-884(2004) ;US publicat1n2006/0009516;see alsoUS pub Iicat1n2008/0171704;Kapur et al.，IsIets4:1-9 (2012) ;Chang etal.,Mo 1.Cell.Endocrinol.335:104-109 (2011) ; Borel Ii et al., RegulatoryPeptides 13 1:97-102 (2005) ;Dungan et al., Diabetes/Metabolism Res.Rev.25:558-565(2009);Zha et al., J.Endocrinol.1nvest.35:634-639(2012);ffang etal., J.Cell.Phys1l.224:501-508(2010);Petropavlovskaia et al.,J.Endocrinol.191:65-81(2006);Taylor-Fishwick et al., Pancreas39:64-70(2010);Rosenberg,Diabetologia39:256-262 (1996);Madrid et al., Regulatory Peptidesl57:25-31 (2009);andTaylor-Fishwick et al.，J.Endocrinol.190:729-737 (2006))。 一個被稱作人促胰島肽(HIP)的多肽也同樣被證實其功效(Levetan et al.，Endocrin.Pract.14:1075-1083(2008) ;US publicat1n2011/0280833)。本發(fā)明提供的 INGAP-PP 和HIP多肽，包括表2和表3中的多肽，不是INGAP-PP或HIP母肽，而是表現(xiàn)出較INGAP-PP或HIP母肽非顯而易見的性能提高的多肽。
[0038]如本文所用，術語“肽”是指兩個或兩個以上的氨基酸的聚合物?？杀恍揎棾善漕愃莆?，衍生物，功能模擬物，偽肽等諸如此類包含至少兩個氨基酸的聚合物。術語“肽”的含義是被本專業(yè)領域的技術人員所熟知的。通常情況下，肽是由兩個或多個氨基酸由酰胺鍵鏈接，酰胺鍵則由一個氨基酸的氨基與相鄰氨基酸的羧基構成。本文所述的多肽可包含天然存在的氨基酸或者非天然存在的氨基酸。
[0039]如本文所用的術語“衍生物”是指母體分子如多肽的一種變型。例如多肽的衍生物，可以包括相對于多肽而言一個或多個氨基酸被取代的一種變型。還可以包括對于多肽的修飾，包含但不限于非天然存在的氨基酸、D型氨基酸、氨基和/或羧基末端(N-或C-末端)修飾的氨基酸，特別是對于在N-末端的氨基和/或C-末端的羧基的修飾、脂肪酸修飾、肽模擬物和偽肽等本文所公開的諸如此類的修飾物。下面有對于改造修飾示例更詳細地描述。
[0040]如本文所用術語“胰腺功能障礙”是指與正常或健康個體胰腺相比功能下降的一種疾病或病癥。胰腺功能受損的典型不例包含但不限于，一型糖尿病、二型糖尿病、成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)、空腹血糖受損、糖耐量異常、胰島素不足、空腹胰島素血癥、胰島素抵抗或空腹胰島素水平受損或者以上幾種情況的組合。下面有對這些疾病和病癥情況更詳細地討論。
[0041]如本文所述，本發(fā)明提供了 INGAP-PP和HIP。表1顯示了 INGAP-PP和HIP肽，以及多種被用作本文所述實驗陰性對照的雜肽的序列，這些雜肽在比較INGAP-PP，HIP與本發(fā)明的衍生物的活性研究實驗時作為陰性對照。
[0042]表1.1NGAP-PP和HIP肽以及對照雜肽
[0043]

【權利要求】
1.一種多肽，其特征在于，具有如下通式:
R1-1GLHDPSHGTLPAG(X1)n1-R2 ； 其中，m為O或I J1選自-H或-Ac ;R2選自-OH或-NH2 ； 當 R1 為-H、R2 為-OH且m 為 I 不成立時，X1 選自 Serine (S)、Glutamic acid (E)、Cysteine (C)或 Lysine (K)； 當 R1 為-H、R2 為-OH 且 m 為 I 成立時，X1 選自 Glutamic acid(E)、Cysteine(C)或Lysine (K)。
2.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列: H-1GLHDPSHGTLPAGE-OH (序列編號:27)或 H-1GLHDPSHGTLPAGK-OH (序列編號:23)。
3.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列: Ac-1GLHDPSHGTLPAGS-NH2 (序列編號:29)、 h-1glhdpshgtlpags-nh2 (序列編號:41)、
Ac-1GLHDPSHGTLPAGS-OH(序列編號:12)中的一種或多種。
4.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列: H-1GLHDPSHGTLPAGC-OH(序列編號:46)、 Ac-1GLHDPSHGTLPAGC-OH(序列編號:47)、 H-1GLHDPSHGTLPAGC-NH2 (序列編號:48)、 Ac-1GLHDPSHGTLPAGC-NH2 (序列編號:49)中的一種或多種。
5.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列: H-1GLHDPSHGTLPAG-OH(序列編號:73)、 H-1GLHDPSHGTLPAG-NH2 (序列編號:28)、 Ac-1GLHDPSHGTLPAG-NH2 (序列編號:30)中的一種或多種。
6.一種多肽，其特征在于，具有如下通式:
R1-1glhdpshgtlpagsx2-R2 ； 其中，X2 選自 Lysine (K)或 Cysteine (C)，R1 選自-H 或-Ac, R2 選自-OH 或-NH20
7.根據(jù)權利要求6所述的多肽，其特征在于，具有如下序列: H-1GLHDPSHGTLPAGSK-OH(序列編號:9)、 H-1GLHDPSHGTLPAGSC-OH(序列編號:42)、 Ac-1GLHDPSHGTLPAGSC-OH(序列編號:43)、 H-1GLHDPSHGTLPAGSC-NH2 (序列編號:44)、 Ac-1GLHDPSHGTLPAGSC-NH2 (序列編號:45)中的一種或多種。
8.一種多肽衍生物，其特征在于，所述多肽衍生物為權利要求1-7中任意一項所述的多肽的修飾產(chǎn)物。
9.根據(jù)權利要求8所述的多肽衍生物，其特征在于，所述修飾包括烷基化、酰基化、氨基甲酰化、碘化。
10.根據(jù)權利要求8所述的多肽衍生物，其特征在于，所述修飾包括N-末端乙?；?、C-末端酰胺化、D型氨基酸非天然氨基酸替換所述多肽中的天然氨基酸、脂肪酸修飾中的一種或多種。
11.根據(jù)權利要求10所述的多肽衍生物，其特征在于，所述非天然氨基酸選自2-氨基脂肪酸、3-氨基脂肪酸、β-丙氨酸、β_氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、哌啶羧酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2，4- 二氨基丁酸、鎖鏈素、2，2’ - 二氨基庚二酸、2，3- 二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羥賴氨酸、異羥賴氨酸、3-羥脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異鎖鏈素、異-異亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、6-Ν-甲基賴氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸或鳥氨酸。
12.根據(jù)權利要求10所述的多肽衍生物，其特征在于，所述脂肪酸修飾包括C2、C4、C6、C8、C1、C12、C14、C16、C18、C20或更長碳鏈的脂肪族基團?；?br> 13.如權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物在制備治療糖尿病的藥物中的應用。
14.一種多肽的可藥用鹽，其特征在于，所述多肽選自權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物，所述的可藥用鹽為醋酸鹽和鹽酸鹽。
15.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物由多肽與藥用載體按配方制造而成； 所述多肽選自權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物。
16.根據(jù)權利要求15所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥用載體包括水、緩沖鹽溶液、生理鹽水、林格氏液、乙二醇、甘油、油脂或可注射的有機酯中的一種或多種。
17.根據(jù)權利要求15或16所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥用載體包括碳水化合物、抗氧劑、螯合劑、二價金屬離子、酶抑制劑、低分子量蛋白或穩(wěn)定劑中的一種或多種。
18.根據(jù)權利要求17所述的藥物組合物，其特征在于，所述碳水化合物包括葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、纖維素；所述抗氧劑包括抗壞血酸或谷胱甘肽；所述螯合劑包括乙二胺四乙酸；所述二價金屬離子包括鈣離子或鎂離子。
19.根據(jù)權利要求15所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括增稠劑、稀釋劑、緩沖液、防腐劑、表面活性劑、增加所述多肽分子選擇可能的物質、抗菌劑、抗炎劑、麻醉劑中的一種或多種。
20.一種促進胰島細胞增殖的方法，其特征在于，包括采用權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物與胰島細胞接觸。
21.—種產(chǎn)生胰島細胞簇的方法，其特征在于，包括采用權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物與胰腺導管細胞接觸。
22.一種促進肝細胞再生的方法，其特征在于，包括采用權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物與肝細胞接觸。
23.一種促進神經(jīng)細胞再生的方法，其特征在于，包括采用權利要求1-7中任意一項所述的多肽或者選自權利要求8-12中任意一項所述的多肽衍生物與神經(jīng)細胞接觸。
【文檔編號】C07K14/47GK104045698SQ201410096363
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權日:2013年3月15日
【發(fā)明者】劉利平, 白茹 申請人:深圳君圣泰生物技術有限公司