野生葫蘆巴堿的新型提取方法
【專(zhuān)利摘要】野生葫蘆巴堿的新型提取方法。本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，采用超高壓提取，具有加熱均勻、過(guò)程易于控制，無(wú)需干燥等預(yù)處理，簡(jiǎn)化了工藝，減少了投資，大大提高了萃取效率；利用大孔樹(shù)脂吸附一柱層析技術(shù)分離純化葫蘆巴堿，對(duì)葫蘆巴堿的吸附選擇性良好，吸附快、解析也快，吸附容量較大，提取方便快捷，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附葫蘆巴堿，得到含量40％以上的葫蘆巴堿半成品和含量90％以上的葫蘆巴堿終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】野生葫蘆巴堿的新型提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物提取領(lǐng)域，涉及一種葫蘆巴堿的純化方法，特別是涉及一種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]胡蘆巴，又名:蕓香草《盛京通志》，香草、苦草、苦朵菜、香苜蓿。一年生草本，高40~50厘米。莖叢生，幾光滑或被稀疏柔毛。3出復(fù)葉，小葉卵狀長(zhǎng)卵圓形或?qū)捙樞危L(zhǎng)1.2~3厘米，寬I~1.5厘米，近先端有鋸齒，兩面均有稀疏柔毛，小葉柄長(zhǎng)I~2毫米，總柄長(zhǎng)6~12毫米；托葉與葉柄連合，狹卵形，先端急尖。花無(wú)梗，I~2朵腋生:萼筒狀，萼齒5，披針形，比花冠短一半，外被長(zhǎng)柔毛；花冠蝶形，初為白色，后漸變淡黃色，基部微帶紫暈，旗瓣長(zhǎng)圓形，先端具缺刻，基部尖楔形，龍骨瓣偏匙形，長(zhǎng)僅旗瓣的I / 3，翼瓣耳形，雄蕊10，2體；子房無(wú)柄，柱頭頂生。莢果細(xì)長(zhǎng)圓筒狀，長(zhǎng)6~11厘米，寬0.5厘米左右，被柔毛，并具網(wǎng)脈，先端有長(zhǎng)尖。種子棕色，長(zhǎng)約4毫米。花期4~6月。果期7~8月。我國(guó)黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、安徽、浙江、湖北、四川、貴州、云南、陜西、甘肅以及新疆等地有栽培。種子含龍膽寧堿、番木瓜堿、膽堿、胡蘆巴堿等生物堿，皂甙元主要是薯蕷皂甙元、雅姆皂甙元和少量芰脫皂甙元、痕量替告皂甙元。尚分離出牡荊素、牡荊素-7-葡萄糖甙、葒草素或異葒草素的阿拉伯糖甙、黃酮的葡萄糖鼠李糖二糖甙，槲皮素、木犀草素等黃酮類(lèi)。種子的一般組成為:水分10.30%、灰分3.15%、脂肪7.61%、總蛋白16.97%、總糖3.68%、纖維素6.4%、半纖維素11.98%。脂肪油中固體脂肪酸92.9%、揮發(fā)性脂肪酸
1.5%、不皂化成分0.9%;卵磷脂6.25%、植物留醇0.5露。脂肪酸中主要是亞油酸和棕櫚酸，并有少量油酸及亞麻酸`。蛋白質(zhì)中核蛋白55%?？偺侵兄饕前肴樘桥涓事毒厶?，還含維生素B1-320微克％
[0003]葫蘆巴堿具有溫腎，祛寒，止痛等功效，已引起國(guó)際社會(huì)的普遍關(guān)注。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)天然植物葫蘆巴中含有大量的葫蘆巴堿，從中提取葫蘆巴堿并且取得了可喜進(jìn)展，原料葫蘆巴來(lái)源較廣。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
:本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對(duì)較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法，其步驟如下:
[0007](I)將干葫蘆巴粉碎，加入乙酸乙酯，浸泡I小時(shí)后放入耐壓袋中，在20°C條件下處理，超高壓壓力在400— 500MPA之間，時(shí)間在3 — 5min，回收乙酸乙酯，在60°C~70°C真空干燥得葫蘆巴堿粗提物；
[0008](2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附；[0009](3)用50%~90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液；
[0010](4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在40%以上；
[0011](5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚中，加適量硅膠攪拌，烘干過(guò)60 — 80目篩，干法上樣，上工業(yè)級(jí)柱200—300目硅膠柱層析；
[0012](6)以丙酮、石油醚在I~7: I條件下進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0013](7)所得濃縮液在60V~80°C下進(jìn)行真空干燥；
[0014](8)將干燥后的產(chǎn)品用75% -90%無(wú)水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過(guò)夜得晶體；分離晶體將剩余物用50% -60%乙醇溶解，再次濃縮，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的葫蘆巴堿，其含量在90%以上。
[0015]所述的步驟⑴中，干葫蘆巴粉碎后過(guò)80~100目篩。
[0016]所述的步驟(2)中，所用的大孔吸附樹(shù)脂為NKA-9、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附。
[0017]本發(fā)明應(yīng)用超高壓技術(shù)和大孔吸附技術(shù)分離純化葫蘆巴堿，對(duì)葫蘆巴堿的提取速度快，節(jié)省時(shí)間，提取率高，利用大孔樹(shù)脂分離純化分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量40%以上的葫蘆巴堿半成品和含量90%以上的葫蘆巴堿終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
[0018]本發(fā)明選用理化性`質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽類(lèi)及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附葫蘆巴堿，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
【具體實(shí)施方式】:
[0019]實(shí)施例1:一種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法其步驟如下:
[0020](I)將1000g干葫蘆巴粉碎后過(guò)80目篩，加入12倍體積的乙酸乙酯，浸泡I小時(shí)后放入耐壓袋中，在20°C條件下處理，超高壓壓力400MPA，時(shí)間3min，回收乙酸乙酯，在60°C真空干燥得葫蘆巴堿粗提物；
[0021](2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為D4006型樹(shù)脂，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附；
[0022](3)用50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用
薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液；
[0023](4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在
41.4% ；
[0024](5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚，加適量硅膠攪拌，烘干過(guò)60目篩，干法上樣，上工業(yè)級(jí)柱200目硅膠柱層析；
[0025](6)以丙酮、石油醚在 1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I 條件下進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0026](7)所得濃縮液在60°C下進(jìn)行真空干燥；
[0027](8)將干燥后的產(chǎn)品用8倍體積的75%無(wú)水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過(guò)夜得晶體；分離晶體將剩余物用50%無(wú)水乙醇溶解，再次濃縮，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的葫蘆巴堿3.2g，其含量在91.2%。
[0028]實(shí)施案例2:—種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法其步驟如下:
[0029](I)將1000g干葫蘆巴粉碎后過(guò)90目篩，加入14倍體積的乙酸乙酯，浸泡I小時(shí)后放入耐壓袋中，在20°C條件下處理，超高壓壓力450MPA，時(shí)間4min，回收乙酸乙酯，在60°C真空干燥得葫蘆巴堿粗提物；
[0030](2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為AB-8H型樹(shù)脂，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附；
[0031](3)用50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用
薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液；
[0032](4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在40.3% ；
[0033](5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚，加適量硅膠攪拌，烘干過(guò)60目篩，干法上樣，上工業(yè)級(jí)柱200目硅膠柱層析；
[0034](6)以丙酮、石油`醚在 1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I 條件下進(jìn)行
梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0035](7)所得濃縮液在60°C下進(jìn)行真空干燥；
[0036](8)將干燥后的產(chǎn)品用10倍體積的80 %無(wú)水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過(guò)夜得晶體；分離晶體將剩余物用60%無(wú)水乙醇溶解，再次濃縮，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的葫蘆巴堿4.0g，其含量在92.7%。
[0037]實(shí)施案例3:—種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法其步驟如下:
[0038](I)將1000g干葫蘆巴粉碎后過(guò)100目篩，加入16倍體積的乙酸乙酯，浸泡I小時(shí)后放入耐壓袋中，在20°C條件下處理，超高壓壓力500MPA，時(shí)間5min，回收乙酸乙酯，在60°C真空干燥得葫蘆巴堿粗提物；
[0039](2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為D3520型樹(shù)脂，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附；
[0040](3)用50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用
薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液；
[0041](4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在
42.1% ；
[0042](5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚，加適量硅膠攪拌，烘干過(guò)60目篩，干法上樣，上工業(yè)級(jí)柱200目硅膠柱層析；
[0043](6)以丙酮、石油醚在 1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I 條件下進(jìn)行
梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；[0044](7)所得濃縮液在60°C下進(jìn)行真空干燥；
[0045](8)將干燥后的產(chǎn)品用10倍體積的90 %無(wú)水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過(guò)夜得晶體；分離晶體將剩余物用60%無(wú)水乙醇溶解，再次濃縮，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的葫蘆巴`堿3.6g，其含量為91.9%。
【權(quán)利要求】
1.一種利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法，其步驟如下: (1)將干葫蘆巴粉碎，加入乙酸乙酯，浸泡I小時(shí)后放入耐壓袋中，在20°c條件下處理，超高壓壓力在400-500MPA之間，時(shí)間在3 — 5min，回收乙酸乙酯，在60°C~70°C真空干燥得葫蘆巴堿粗提物； (2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附； (3)用50%~90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液； (4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在40%以 上； (5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚中，加適量硅膠攪拌，烘干過(guò)60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級(jí)柱200-300目硅膠柱層析； (6)以丙酮、石油醚在I~7: I條件下進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑； (7)所得濃縮液在60°C~80°C下進(jìn)行真空干燥； (8)將干燥后的產(chǎn)品用75%-90%無(wú)水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過(guò)夜得晶體；分離晶體將剩余物用50% -60%乙醇溶解，再次濃縮，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的葫蘆巴堿，其含量在90%以上。 所述的步驟(1)中，干葫蘆巴粉碎后過(guò)80~100目篩。 所述的步驟(2)中，所用的大孔吸附樹(shù)脂為NKA-9、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法，其特征是:所述的步驟(1)中，加入乙酸乙酯的體積為物料粉碎體積的12-16倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超高壓技術(shù)和大孔樹(shù)脂吸附及柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法，其特征是:所述步驟(8)中，加入無(wú)水乙醇的體積為干燥后產(chǎn)品的8-10倍。
【文檔編號(hào)】C07D213/803GK103755630SQ201310706466
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
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