以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括制備鵝去氧膽酸、氧化、還原、純化工序。本發(fā)明以豬膽汁作為提取原料，豬膽汁原料廣泛易得，降低了制備成本，收益更高，經(jīng)濟(jì)效益良好；本發(fā)明以鵝去氧膽酸合成熊去氧膽酸時(shí)，以氯化鈣為沉淀劑，避免了常規(guī)鋇鹽沉淀劑造成的環(huán)境污染，同時(shí)也簡(jiǎn)化了去沉淀工序。
【專利說(shuō)明】以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及熊去氧膽酸的制備方法，具體涉及以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0003]膽汁是人體或脊椎動(dòng)物肝細(xì)胞連續(xù)分泌的產(chǎn)物，是一種具有苦味的粘滯性有色堿性液體，其成分除水以外，主要有膽汁酸、膽鹽和膽色素，此外還有少量的膽固醇、脂肪酸、卵磷脂、電解質(zhì)和蛋白質(zhì)等。現(xiàn)今較常見(jiàn)的動(dòng)物膽汁一般為禽類膽汁、豬膽汁、牛膽汁、熊膽汁以及蛇膽汁等等。膽汁酸是膽汁的主要成分，約占膽汁總量的50%~70%，膽汁的生理作用主要就是由膽汁酸來(lái)發(fā)揮，在作為藥物時(shí)，膽汁酸可以用來(lái)解熱、鎮(zhèn)痙鎮(zhèn)咳、調(diào)節(jié)血壓、強(qiáng)心利膽、抑菌抗炎以及調(diào)節(jié)免疫等，且活性較強(qiáng)、副作用又小、價(jià)格低廉，因此受到廣大用藥者的歡迎。
[0004]在各種動(dòng)物膽汁中，豬膽汁是最常見(jiàn)且產(chǎn)量最大的，自古代開(kāi)始就被廣泛應(yīng)用于臨床，如用豬膽汁治療急性黃疸型傳染性肝炎、百日咳、急性腸炎以及胃潰瘍等，均能收到良好的治療效果。豬膽汁中主要含膽汁酸類、膽色素、粘蛋白、脂類及無(wú)機(jī)物等，膽汁酸則主要包含豬去氧膽酸、豬膽酸、鵝去氧膽酸、3 α -羥基-6-氧-5 α -膽烷酸以及膽石酸等。其中豬去氧膽酸約占40%，鵝去氧膽酸約占25%。
[0005]熊去氧膽酸化學(xué)名為3 α，7 β - 二羥基_5 β -膽烷酸，分子式C24H49O4,分子量為392.58，為白色或微黃色粉末，易溶于乙醇、冰乙酸，稍溶于氯仿，幾乎不溶于乙醚和水。熊去氧膽酸是1920年首先從熊膽汁中發(fā)現(xiàn)，1927年Shoda從熊膽汁中分離得到晶體，1937年確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。天然熊去氧膽酸來(lái)源于熊膽汁，隨著臨床應(yīng)用的需求量不斷增加，天然熊去氧膽酸遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求。殺熊取膽被國(guó)家明令禁止，因此，通過(guò)化學(xué)合成方法獲得熊去氧膽酸變得越來(lái)越重要。最初`，人們成功以膽酸、去氧膽酸等為原料，合成了熊去氧膽酸，但此種方法反應(yīng)步驟多，工藝復(fù)雜，產(chǎn)率低，很難進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
[0006]近年來(lái)，以鵝去氧膽酸為原料，進(jìn)行化學(xué)合成熊去氧膽酸工藝過(guò)程大大簡(jiǎn)化。而鵝去氧膽酸是雞、鴨與鵝等家禽膽汁的主要成份，可以直接從鴨、鵝與雞的膽汁中提取得到，生產(chǎn)工藝成熟，價(jià)格低廉。因此，以鵝去氧膽酸為原料生產(chǎn)熊去氧膽酸，特別是從來(lái)源廣泛的豬膽汁中提取鵝去氧膽酸后再化學(xué)合成熊去氧膽酸，可以創(chuàng)造明顯的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，該方法提取工藝簡(jiǎn)單，原料來(lái)源廣泛易得，對(duì)環(huán)境污染小，產(chǎn)品純度高。
[0008]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明釆取的技術(shù)方案如下:
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入50%丙酸或60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入弱氧化劑，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于有機(jī)溶劑中，于75~85°C溫度下與硅化劑反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0009]作為本發(fā)明的改進(jìn)，上述步驟(2)的弱氧化劑為N-溴代丁二酰亞胺，其用量為I ~5wt%。
[0010]作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，上述步驟(4)的有機(jī)溶劑為苯、甲苯、硝基苯、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和四氫呋喃的一種或多種。
[0011]更進(jìn)一步地，上述步驟(4)的酸為5~10%硫酸或5~10%鹽酸。
[0012]上述步驟(4)的硅化劑為二取代或三取代的烷基硅鹵化物、二取代或三取代的硅脲或二烷基硅酰胺，優(yōu)選為二甲基硅酰胺。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
本發(fā)明以豬膽汁作為提取原料，豬膽汁原料廣泛易得，降低了制備成本，收益更高，經(jīng)濟(jì)效益良好；本發(fā)明以鵝去氧膽 酸合成熊去氧膽酸時(shí)，以氯化鈣為沉淀劑，避免了常規(guī)鋇鹽沉淀劑造成的環(huán)境污染，同時(shí)也簡(jiǎn)化了去沉淀工序。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實(shí)施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實(shí)施例僅僅用于幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明的具體限制。
[0016]下列實(shí)施例中，所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員所熟悉的意義相同。
[0017]實(shí)施例1
如圖1所示，以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入50%丙酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于四氫呋喃中，于75~85°C溫度下與二甲基硅酰胺反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8%鹽酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0018]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到18~20克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)98%。
[0019]實(shí)施例2
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于四氯化碳中，于75~85°C溫度下與二甲基硅酰胺反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8%鹽酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0020]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)95%。
[0021]實(shí)施例3
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入2被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于氯仿中，于75~85°C溫度下與三甲基硅脲反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8%鹽酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0022]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~16克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)92%。
[0023]實(shí)施例4
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(I)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入5被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于硝基苯中，于75~85°C溫度下與三甲基硅脲反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8%鹽酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0024]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)93%。
[0025]實(shí)施例5
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；` (4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于甲苯中，于75~85°C溫度下與三甲基硅脲反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8%硫酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0026]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)91%。
[0027]實(shí)施例6
以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
(1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸；
(2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亞胺，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸；
(3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物；
(4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于苯中，于75~85°C溫度下與二甲基硅酰胺反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與8 %硫酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
[0028]在本實(shí)施例中，20克鵝去氧膽酸經(jīng)過(guò)步驟(2)、(3)、(4)后，可合成得到12~16克(mp.191~193°C)熊去氧膽酸干燥品，再用乙醇結(jié)晶(mp.198~203°C ),純度可達(dá)90%。
[0029] 申請(qǐng)人:聲明，所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上，將上述實(shí)施例某組分的具體含量點(diǎn)值，與
【發(fā)明內(nèi)容】
部分的技術(shù)方案相組合，從而產(chǎn)生的新的數(shù)值范圍，也是本發(fā)明的記載范圍之一，本申請(qǐng)為使說(shuō)明`書(shū)簡(jiǎn)明，不再羅列這些數(shù)值范圍。
【權(quán)利要求】
1.以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)制備鵝去氧膽酸:以豬膽汁為原料，提取膽紅素后的母液制得總膽汁酸，加乙醇溶解后用氫氧化鈉調(diào)PH至7.2~7.5，加入氯化鈣溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鵝去氧膽酸鈣鹽，加入50%丙酸或60%醋酸，40~50°C溫度下加熱使其完全溶解，再加入水中即析出鵝去氧膽酸； (2)氧化:將鵝去氧膽酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入弱氧化劑，使鵝去氧膽酸轉(zhuǎn)化為7-0-石膽酸； (3)還原:以仲丁醇為溶劑，金屬鈉為還原劑，在回流狀態(tài)下，將步驟(2)的7-0-石膽酸還原為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物； (4)純化:將步驟(3)的熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸混合物置于有機(jī)溶劑中，于75~85°C溫度下與硅化劑反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅醚固體沉淀，再將此固體于40~50°C溫度下與酸反應(yīng)，得到熊去氧膽酸純品。
2.如權(quán)利要求1所述的以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)的弱氧化劑為N-溴代丁二酰亞胺,其用量為I~5wt%。
3.如權(quán)利要求1所述的以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(4)的有機(jī)溶劑為苯、甲苯、硝基苯、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和四氫呋喃的一種或多種。
4.如權(quán)利要求1所述的以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(4)的酸為5~10%硫酸或5~10%鹽酸。
5.如權(quán)利要求1所述的以豬膽汁為原料制備熊去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(4)的硅化劑為二取代或三取代的 烷基硅鹵化物、二取代或三取代的硅脲或二烷基硅酰胺。
【文檔編號(hào)】C07J9/00GK103804453SQ201310456980
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】孔艷飛 申請(qǐng)人:淮北市恒通生物科技有限公司