專利名稱：一種快速制備羥基酪醇的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學(xué)有效成分提取純化技術(shù)領(lǐng)域，涉及的是一種制備高純度的羥基酪醇的工藝方法。
背景技術(shù)：
輕基酪醇,又名3，4-二輕基苯乙醇,英文為Hydroxytyrosol,是一種天然小分子多酚化合物。它于1950年在狹葉松果菊中醫(yī)松果菊苷的形式被發(fā)現(xiàn)。油橄欖葉中也存在羥基酪醇但含量甚微，約在0.2%-0.7%之間。由于表現(xiàn)出諸多的生物活性如抗氧化、抗炎、抗癌(前列腺癌和乳腺癌等)、保護(hù)心血管疾病、降血糖、修復(fù)軟骨損傷或抑制肥胖等。尤其是其抗氧化性，羥基酪醇被認(rèn)為是最具有清除自由基的天然抗氧化劑之一，其對(duì)細(xì)胞損害的自由基清除率是槲皮素的2倍，表兒茶酸的3倍之多，因其非常有效的生物活性，可以廣泛用于食品、藥品和化妝品領(lǐng)域，并且廣受市場(chǎng)的歡迎。由于天然植物中存在的羥基酪醇含量較低，從大多數(shù)文獻(xiàn)的報(bào)道發(fā)現(xiàn)有關(guān)羥基酪醇的制備主要是通過橄欖苦苷的水解得到。此夕卜，從國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道中發(fā)現(xiàn)，從油橄欖葉或油橄欖葉提取物水解制備羥基酪醇，主要是通過鹽酸和β_葡萄糖苷酶作用制備羥基酪醇，而使用堿液水解尚未報(bào)道。而本專利，正是通過強(qiáng)堿水解橄欖苦苷制備羥基酪醇，再中和，乙酸乙酯萃取，萃取液旋蒸濃縮后加適量的水稀釋，再通過大孔樹脂和葡聚糖凝膠色譜，可得到HPLC純度大于90%的羥基酪醇。由于前面水解的時(shí)間縮短，其效率得到提聞，提聞企業(yè)的生廣效率，減少了其生廣成本。首先，從國(guó)內(nèi)專利看，專利CN101662956A是通過ρΗ=1 3的鹽酸水解，反應(yīng)時(shí)間多則7至8h，且最后的羥基酪醇的收率僅約為80%，前期水解的時(shí)間過長(zhǎng)，不利于企業(yè)的生產(chǎn)周期的縮短。專利CN1665764A也是通過酸加入植物液，使橄欖苦苷轉(zhuǎn)化羥基酪醇，其轉(zhuǎn)化時(shí)間至少2個(gè)月，導(dǎo)致生產(chǎn)周期變長(zhǎng)。專利CN101624607A通過多酚氧化酶將酪醇轉(zhuǎn)化成羥基酪醇，所需轉(zhuǎn)化的時(shí)間超過 lh。專利CN101973853A油橄欖葉水提液加入濃鹽酸pH=l，煮沸時(shí)間也達(dá)3h。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決高純度羥基酪醇的生產(chǎn)工藝時(shí)間長(zhǎng)、效率低的問題，縮短生產(chǎn)周期。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案包括如下:
(I)堿水解:稱取適量的油橄欖葉提取物，加入適量堿濃度，固液比為l:l(Tl:45(w/V),水解溫度為25"120°C,水解時(shí)間為1(T90 mins,進(jìn)行水解反應(yīng),反應(yīng)后冷卻至室溫,再加入適量的酸液中和，所述的堿溶液為NaOH和去離子水的混合液，酸液為HCl或者稀H2S04。(2)離心:將上述(I)的酸堿中和后的收集液在300(T6000r/min，5 20mins，進(jìn)行離心。(3)分離純化:將(2)離心后分離收集液加入萃取劑收集液體積的1/3，萃取3飛次，旋蒸回收乙酸乙酯，再加入適量的去離子水溶解稀釋，先經(jīng)過大孔樹脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液洗脫，旋蒸回收乙醇，收集的含羥基酪醇的水溶液最后再通過葡聚糖凝膠，再用1-8倍柱體積的1%飛0%乙醇-水溶液洗脫，旋蒸回收乙醇，得到含高純度的羥基酪醇的水溶液。(4)干燥:將(3)最后收集到的含高純度的羥基酪醇水溶液，進(jìn)行真空冷凍干燥或者噴霧冷凍干燥，可得到含羥基酪醇90%以上的浸膏。步驟(I)中所述的堿濃度為0.05飛mol/L的NaOH水溶液。步驟(3)中所述的萃取劑為乙醚、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的
任意一種。步驟(3)中所述的收集液在30°C 50°C進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，使用大孔樹脂洗脫液物3飛倍柱體積的，乙醇-水溶液為10%飛5%。葡聚糖凝膠的洗脫液為5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔樹脂的類型是DM-8、DM130、AB_8、HPD450、HPD100, HPD722和X-5中的一種，葡聚糖凝膠的類型是LH-20或Sephadex G_25中的一種。步驟(4)中所述的真空冷凍干燥的時(shí)間為fllh，或噴霧冷凍干燥的時(shí)間為f 2h。干燥的溫度最大不超過25 45°C。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果:1、本發(fā)明采用堿性條件作用先水解，再用酸中和，使pH=7，在強(qiáng)堿作用下，橄欖苦苷快速分解，提高了羥基酪醇得率。同時(shí)縮短產(chǎn)品的生產(chǎn)周期，提高企業(yè)的生產(chǎn)效率。2、對(duì)羥基酪醇的純化采用，大孔樹脂和葡聚糖凝膠雙重樹脂純化，使羥基酪醇的含量進(jìn)一步得到提高。3、本發(fā)明工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品收率高且重現(xiàn)性好，產(chǎn)品品質(zhì)好，易于工業(yè)化生產(chǎn)。



圖1本發(fā)明提供的工藝流程圖
圖2大孔樹脂純化后的羥基酪醇HPLC圖 圖3葡聚糖凝集色譜純化后的羥基酪醇HPLC圖 圖4羥基酪醇的質(zhì)譜圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
稱取50g粗橄欖苦苷的提取物(含橄欖苦苷38.3%)，加入IOOOmL的0.3mol/L NaOH，攪拌下反應(yīng)30mins，再加入鹽酸中和使溶液的pH=7，再加入300mL乙酸乙酯，重復(fù)萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入50mL水稀釋溶解，再通過AB-8大孔樹脂，充分吸附后，再用40%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集3-5BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用60%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集4-6BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空冷凍干燥，獲得固體含量7.36g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達(dá)93.12%。
實(shí)施例2
稱取30g粗橄欖苦苷的提取物(含橄欖苦苷27.93%)，加入800mL的0.2mol/L NaOH，攪拌下反應(yīng)45mins，再加入鹽酸中和使溶液的pH=7，再加入150mL乙酸乙酯，重復(fù)萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入35mL水稀釋溶解，再通過AB-8大孔樹脂，充分吸附后，再用55%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集2-4BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用50%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集3-4BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空干燥，獲得固體含量
3.87g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達(dá)89.58%。
實(shí)施例3
稱取80g干燥的油橄欖葉(含橄欖苦苷8.21%)，粉碎至40-60目，加入2400mL的.0.3mol/L NaOH,攪拌下反應(yīng)40mins,再加入稀硫酸中和使溶液的pH=7,再加入500mL乙酸乙酯，重復(fù)萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入150mL水稀釋溶解，再通過HPD-450大孔樹月旨，充分吸附后，再用55%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集3-5BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用65%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集3-5BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空冷凍干燥，獲得固體含量5.35g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達(dá)85.12%。
權(quán)利要求
1.一種快速制備羥基酪醇的新方法，其特征在于該方面包括以下步驟: (I)堿水解:稱取適量的油橄欖葉提取物，加入適量堿濃度，固液比為l:l(Tl:45(w/V),水解溫度為25"120°C,水解時(shí)間為1(T90 mins,進(jìn)行水解反應(yīng),反應(yīng)后冷卻至室溫,再加入適量的酸液中和，所述的堿溶液為NaOH的去離子水溶液，酸液為HCl或者稀H2S04。
2.(2)離心:將上述(I)的水解液經(jīng)過酸或堿中和后的溶液進(jìn)行收集，并在3000 6000r/min, 5 20mins的條件下使用離心機(jī)進(jìn)行離心。
3.(3)分離純化:將(2)離心分離后的收集液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入萃取劑，其體積約為收集液的1/3，震蕩搖勻，萃取3飛次，靜置分層，收集下層液體進(jìn)行旋蒸并回收乙酸乙酯，再加入適量的去離子水溶解稀釋，稀釋液先經(jīng)過大孔樹脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集目標(biāo)產(chǎn)物溶液，再對(duì)收集的溶液旋蒸，同時(shí)回收乙醇；收集的溶液最后再通過葡聚糖凝膠，再用1-8倍柱體積的19Γ60%乙醇-水溶液梯度洗脫，其收集液進(jìn)行旋蒸并回收乙醇，最后得到含高純度的羥基酪醇的水溶液。
4.(4)干燥:將(3)最后收集到的含高純度的羥基酪醇水溶液，進(jìn)行真空冷凍干燥或者噴霧冷凍干燥，可得到的羥基酪醇含量達(dá)90%以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備羥基酪醇的方法，其特征在于步驟(I)中所述的堿濃度為0.05 5mol/L的NaOH水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備羥基酪醇的方法，其特征在于步驟(3)中所述的萃取劑為乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的任意一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備羥基酪醇的方法，其特征在于步驟(3)中所述的收集液在30°C 50°C進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，使用大孔樹脂洗脫液物3飛倍柱體積的，乙醇-水溶液為10% 65%。
8.葡聚糖凝膠的洗脫液為5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔樹脂的類型是DM-8、DM130、AB-8、HPD450、HPD100、HPD722和X_5中的任意一種，葡聚糖凝膠的類型是LH-20或Sephadex G-25中的任意一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備羥基酪醇的方法，其特征在于步驟(4)中所述的真空冷凍干燥的時(shí)間為8 llh，或噴霧冷凍干燥的時(shí)間為Γ21ι。
10.干燥的溫度最大不超過25 45°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速制備羥基酪醇的新方法，屬于天然產(chǎn)物有效成分提取分離技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以含橄欖苦苷的油橄欖葉提取物為原料，在堿性條件下快速水解制備羥基酪醇的新方法，該方法包括如下步驟稱取一定量的油橄欖葉提取物與堿溶液混合，在一定的溫度和時(shí)間下反應(yīng)，冷卻至是室溫，再加入少量酸中和至pH=7，離心，收集上清液，加入適量的乙酸乙酯萃取，旋蒸去除乙酸乙酯，獲得的濃縮液再依次通過大孔樹脂和葡聚糖凝膠樹脂，最后通過噴霧冷凍干燥或者真空冷凍干燥獲得高純度的羥基酪醇，其純度最高可達(dá)90%以上。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、效率高、品質(zhì)高，適合產(chǎn)業(yè)化等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07C39/11GK103113195SQ20131007005
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月6日
發(fā)明者黃立新, 謝普軍, 張彩虹, 游鳳, 張耀雷 申請(qǐng)人:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所