包含針對pcsk9的人抗體的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/KEXIN型9(PCSK9)的抗體的藥物組合物，涉及用于治療蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/KEXIN型9(PCSK9)表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，所述方法通過施用PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，且優(yōu)選地通過額外施用3-羥基-3-甲基-戊二酰-CoA還原酶(HMG-CoA還原酶)抑制劑進(jìn)行。本發(fā)明進(jìn)一步涉及PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。本發(fā)明還涉及包含包裝材料、PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、以及標(biāo)簽或包裝插頁的制品，所述標(biāo)簽或包裝插頁指示哪組患者可以用所述抗體或片段治療，哪組患者不得用所述抗體或片段治療，以及應(yīng)當(dāng)使用哪種劑量方案。本發(fā)明進(jìn)一步涉及測試PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療某些疾病或狀況以及用于治療特定患者亞組的效力的方法。
【專利說明】包含針對PCSK9的人抗體的藥物組合物
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及包含蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (proproteinconvertase subtilisin/kexin type9, PCSK9)特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物組合物，優(yōu)選地，其包含3-羥基-3-甲基-戊二酰-CoA還原酶(HMG-CoA還原酶)的抑制劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的注射溶液、干配制劑和單位劑量形式以及其用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的用途(優(yōu)選與HMG-CoA還原酶抑制劑組合)。
[0002]本發(fā)明還涉及包含包裝材料、PCSK9特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、和標(biāo)簽或包裝插頁的制品，所述標(biāo)簽或包裝插頁指示例如哪組患者可以用所述抗體或片段治療，哪組患者不得用所述抗體或片段治療，以及應(yīng)使用哪種劑量方案。
[0003]發(fā)明背景
[0004]蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (PCSK9)是一種屬于分泌性枯草桿菌酶(subtilase)家族的蛋白酶K亞家族的蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶。編碼的蛋白質(zhì)以可溶性酶原合成，所述可溶性酶原在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)歷自身催化分子內(nèi)加工。證據(jù)表明PCSK9通過促進(jìn)LDL受體(其介導(dǎo)肝中的LDL胞吞，即LDL從循環(huán)中清除的主要路徑)的降解來增加血漿LDL膽固醇。PCSK9蛋白的結(jié)構(gòu)顯示，它具有信號(hào)序列，接著是前域(prodomain)、含有保守的殘基三聯(lián)體(D186、H226和S386)的催化域和C端域。它以可溶性74kDa前體合成，該前體在ER中經(jīng)歷自身催化切割，產(chǎn)生14kDa的前域和60kDa的催化片段。已顯示自身催化活性是分泌所需要的。在切割后，該前域仍與催化域緊密聯(lián)合。
[0005]針對PCSK9 的抗體記載于，例如 TO2008/057457、TO2008/057458、TO2008/057459、W02008/063382.W02008/125623 `和 US2008/0008697。特別適用于實(shí)踐本發(fā)明的抗 PCSK9 抗體披露于US2010/0166768A1中，其內(nèi)容通過提述完整據(jù)此并入。
[0006]本發(fā)明的根本技術(shù)問題
[0007]他汀類(statins)是世界上最廣泛使用的藥物之一。盡管他汀類一般展現(xiàn)出卓越的安全性概況，但期望通過降低已經(jīng)較低的不想要的副作用(如肌病)率來進(jìn)一步優(yōu)化安全性概況。
[0008]盡管降脂劑如他汀類有普遍利用度，但在1999和2006年間在美國治療高膽固醇血癥(hypercholesterolemia)的所有成人患者中的約30%未能實(shí)現(xiàn)其推薦的LDL-C目標(biāo)。對此的原因包括對療法的不良依從性、藥物抗性/不耐受以及不利事件率和增加的劑量之間的正關(guān)系。此外，由于最有效的降脂劑僅能將LDL-C水平降低多至55%，在需要LDL-C實(shí)質(zhì)性降低的患者，如那些患有家族性高膽固醇血癥的患者中的目標(biāo)達(dá)成率(targetattainment rate)經(jīng)常顯著低于可以預(yù)期的。因此，需要更有效的降脂劑和治療方案來改進(jìn)這些患者中的目標(biāo)達(dá)成率。
[0009]相當(dāng)令人驚訝地，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在以特定劑量方案施用和/或?qū)μ囟ɑ颊呓M施用時(shí)，抗PCSK9抗體或其片段的施用提高他汀類的LDL-膽固醇降低活性。
[0010]如此，抗PCSK9抗體或其片段的共施用增強(qiáng)他汀療法的功效并允許降低他汀類的劑量，由此減少不想要的副作用。
[0011]此外，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)抗PCSK9抗體和/或他汀類的特定劑量方案比其它方案更好地適用于降低LDL-膽固醇水平。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)一些患者亞組比其它亞組更加受益于用抗PCSK9抗體或其片段和/或他汀類治療。發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)用抗PCSK9抗體或其片段和/或他汀類治療對一些患者亞組是禁忌的(contraindicated)。
[0012]上文概述并不必然描述了本發(fā)明解決的所有問題。
[0013]發(fā)明概述
[0014]在第I方面，本發(fā)明針對包含與藥學(xué)可接受賦形劑或載體一起的特異性結(jié)合蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(PCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物組合物。
[0015]在第2方面，本發(fā)明關(guān)注如本文中描述的注射溶液，其包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段，并且優(yōu)選每Iml體積包含約40mg至約200mg或約50至約200mg,例如約40mg、約50mg、約75mg、約lOOmg、約150mg或約200mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0016]在第3方面，本發(fā)明關(guān)注如本文中描述的干配制劑，其包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段，并且優(yōu)選每劑包含約40mg至約500mg、50至約500mg、約50至約400、約50至約 300，例如約 40mg、約 50mg、約 75mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約350mg、約 400mg、約 450mg 或約 500mg,并且更優(yōu)選地約 50mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約250mg、約300mg,且甚至更優(yōu)選地約150mg、約200mg或約300mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0017]在第4方面，本發(fā)明關(guān)注抗體或其抗原結(jié)合片段，如在依照第19方面的藥物組合物之一中包含的。
[0018]在第5方面， 本發(fā)明針對包含本發(fā)明的抗體、其抗原結(jié)合片段或藥物組合物的單位劑量形式。
[0019]在第6方面，本發(fā)明關(guān)注包含本發(fā)明的藥物組合物、本發(fā)明的液體配制劑或本發(fā)明的干配制劑、本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、或本發(fā)明的一種或多種單位劑量形式、以及容器或包裝的制品。
[0020]在第7方面，本發(fā)明關(guān)注本發(fā)明的藥物組合物或抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。如果在第七方面的以下實(shí)施方案中，例如提到“用于…的抗體”或“用于…的抗體或其抗原結(jié)合片段”(某種醫(yī)學(xué)方案)，那么該提述還適用于本發(fā)明的藥物組合物的相應(yīng)用途。
[0021]在第8方面，本發(fā)明關(guān)注用于制備本發(fā)明(例如依照第19方面)的藥物組合物的方法，包括將抗體或其抗原結(jié)合片段以及任選地HMG-CoA還原酶抑制劑與一種或多種藥用賦形劑或載體混合。
[0022]在第9方面，本發(fā)明關(guān)注用于制備本發(fā)明的單位劑量形式的方法，包括分配一定量的包含一劑或多劑抗體或其抗原片段以及任選地一劑或多劑HMG-CoA還原酶抑制劑的依照本發(fā)明的液體配制劑或干配制劑、藥物組合物、抗體或其抗原結(jié)合片段，并將它們改編為適合作為用于人和/或動(dòng)物施用的單一劑量的物理離散單元。
[0023]在第10方面，本發(fā)明關(guān)注用于制備或裝配本發(fā)明的制品的方法，包括在容器中包裝依照本發(fā)明的藥物組合物、抗體、液體配制劑、干配制劑或一種或多種單位劑量形式，任選地以及下列一項(xiàng)或多項(xiàng):標(biāo)簽、使用說明書、應(yīng)用裝置。[0024]在第11方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0025]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0026]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0027]在第12方面，本發(fā)明涉及測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥(hyperlipidemia)、血脂障礙(dyslipidemia)、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis)和心血管疾病(cardiovascular disease)，所述方法包括:
[0028]用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定的患者群體，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平；并
[0029]測定所述抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的。
[0030]在第13方面，本發(fā)明涉及測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0031]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后患者群體中的LDL-C水平測定已經(jīng)用于用所述抗體或其抗`原結(jié)合片段治療選定患者群體的抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的。
[0032]在第14方面，本發(fā)明涉及包含特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段(見“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分)和標(biāo)簽的包裝。
[0033]在第15方面，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)血液中LDL水平的方法，包括:
[0034]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0035]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0036]在第16方面，本發(fā)明涉及預(yù)防血液中(持久)升高的LDL水平的效應(yīng)的方法，其包括:
[0037]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0038]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0039]在第17方面，本發(fā)明涉及測定藥用化合物是否可用于緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9活性或表達(dá)具有影響的疾病或狀況的方法，包括:(a)對受試者施用特異性結(jié)合PCSK9的化合物，優(yōu)選為特異性結(jié)合PCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段，并(b)測定血液中多少分?jǐn)?shù)的PCSK9附接于來自(a)的化合物。
[0040]在第18方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0041]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，
[0042]其中所述有此需要的受試者落入下列一組或多組受試者中:(i)具有至少IOOmg/dL的血清LDL膽固醇(LDL-C)水平的受試者；(ii)具有低于40mg/dL的血清HDL-C水平的受試者；(iii)具有至少200mg/dL的血清膽固醇水平的受試者；(iv)具有至少150mg/dL的血清三酰甘油水平的受試者，其中在禁食至少8小時(shí)后測定所述三酰甘油水平；(V)至少35歲齡的受試者；(vi)比75歲年齡小的受試者；(vii)具有25或更大的BMI的受試者；(viii)男性受試者；(ix)女性受試者；(X)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少30mg/dL的受試者；或(xi)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少20%的受試者。
[0043]在第19方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0044]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，
`[0045]其中所述有此需要的受試者不落入下列一組或多組受試者中:(i)吸煙者；
(ii)70歲齡以上的個(gè)體；(iii)患有高血壓的個(gè)體；(iv)懷孕的女性；(V)試圖懷孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；(viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；(ix)飲用過量酒精的個(gè)體；(X)具有腎問題的個(gè)體；(xi)患有甲狀腺機(jī)能減退(hypothyroidism)的個(gè)體；(xii)患有肌病癥的個(gè)體；(xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；(xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；(XV)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素(ciclosporin)或抗組胺劑(antihistamines))、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素(erythromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、酮康唑(ketoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、利福平(rifampicin)、夫西地酸(fusidic acid))、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊(gemfibrozil)、考來替泊(colestipol))、|丐通道阻斷劑(例如維拉帕米(verapamil)、地爾硫卓(diltiazem))、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛(digoxin)、胺碘酮(amiodarone))、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋(nelfinavir))、華法林(warfarin)、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草(St.John’swort);或(xvi)每日飲用超過
0.1L葡萄柚汁的個(gè)體；(xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；(XX)乙肝或丙肝呈陽性的個(gè)體；或(xxi)對單克隆抗體治療劑具有已知敏感性的個(gè)體。
[0046]在第20方面，本發(fā)明涉及測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0047]用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定的患者群體，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平；并
[0048]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平測定所述抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的；
[0049]其中每位患者落入如第13方面所敘述的一組或多組受試者中。
[0050]在第21方面，本發(fā)明涉及測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0051]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平測定在已經(jīng)用于用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定患者群體的抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的；
[0052]其中每位患者落入如第13方面所敘述的一組或多組受試者中。
[0053]在第22方面，本發(fā)明涉及用于測試化合物在降低受試者的膽固醇水平中的功效的方法，包括以下步驟:(a)提供嚙齒類動(dòng)物；(b)對嚙齒類動(dòng)物施用特異性結(jié)合PCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；( c)對所述嚙齒類動(dòng)物施用測試化合物；(d)測定該測試化合物在嚙齒類動(dòng)物中的效應(yīng)，其中與對照動(dòng)物的膽固醇水平相比，在嚙齒類動(dòng)物中膽固醇水平的降低指示該測試化合物在降低受試者的膽固醇水平中是有效的，其中對照動(dòng)物來自與所述嚙齒類動(dòng)物相同的物種，并且其中對照動(dòng)物尚未用該測試化合物攻擊。
[0054]在第23方面，本發(fā)明關(guān)注增強(qiáng)經(jīng)歷他汀療法的受試者中的LDL-C降低活性的方法，所述方法包括對受試者施用特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中以約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，由此增強(qiáng)他汀療法在受試者中的LCL-C降低活性。
[0055]在第24方面，本發(fā)明關(guān)注用于處理受試者中升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的試劑盒，所述試劑盒包含(a)藥學(xué)單位劑量形式，其包含特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；以及藥學(xué)可接受載體，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段以約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量存在；和(b)具有使用說明書的標(biāo)簽或包裝插頁。
[0056]在第25方面，本發(fā)明關(guān)注治療患有以升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平為特征的疾病或病癥的受試者的方法，所述方法包括:
[0057](a)選擇具有大于100mg/dL的血液LDL-C水平的受試者；并
[0058](b)對所述受試者施用包含特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段的組合物；由此降低有此需要的受試者中的膽固醇水平。
[0059]在第26方面，本發(fā)明關(guān)注降低有此需要的受試者中的膽固醇水平的方法，包括:[0060](a)選擇具有大于100mg/dL的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的受試者；并
[0061](b)對所述受試者施用包含特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段的組合物；由此降低有此需要的受試者中的膽固醇水平。
[0062]此發(fā)明概述并不必然描述本發(fā)明的所有特征。通過審閱隨后的詳細(xì)描述，其它實(shí)施方案將變得明顯的。
[0063]附圖簡述
[0064]圖1顯示在用抗PCSK9抗體316P治療后三組患者的LDL-膽固醇(LDL-C)水平相對于基線的百分比降低。這些患者組為:(I)患有家族性高膽固醇血癥(HeFH)的患者；(2)按飲食且按穩(wěn)定的阿托伐他汀(atorvastatin)療法的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者；和(3)僅按飲食的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者。在第1、29和43天皮下施用50mg劑量的抗PCSK9抗體。以實(shí)線顯示來自接受抗體的患者組(50-mg-FH-否；50-mg-FH-是；50_mg-組合)的結(jié)果，而以虛線顯示來自接受安慰劑的患者(PB0-FH-否；PBO-FH-是；ΡΒ0_組合)的結(jié)果。
[0065]圖2顯示在用抗PCSK9抗體316P治療后三組患者的LDL-膽固醇(LDL-C)水平相對于基線的百分比降低。這些患者組為:(I)患有家族性高膽固醇血癥(HeFH)的患者；(2)按飲食且按穩(wěn)定的阿托伐他汀療法的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者；和(3)僅按飲食的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者。在第1、29和43天皮下施用IOOmg劑量的抗PCSK9抗體。以實(shí)線顯示來自接受抗體的患者組(100-mg-FH-否；100-mg-FH-是；100-mg-組合)的結(jié)果，而以虛線顯示來自接受安慰劑的患者(PB0-FH-否；PBO-FH-是；ΡΒ0_組合)的結(jié)果。
[0066]圖3顯示在用抗PCSK9抗體316P治療后三組患者的LDL-膽固醇(LDL-C)水平相對于基線的百分比降低。這些患者組為:(I)患有家族性高膽固醇血癥(HeFH)的患者；
(2)按飲食且按穩(wěn)定的阿托伐他汀療法的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者；和(3)僅按飲食的患有其它形式的原發(fā)性高膽固醇血癥(非FH)的患者。在第
1、29和43天皮下施用150mg劑量的抗PCSK9抗體。以實(shí)線顯示來自接受抗體的患者組(150-mg-FH-否；150-mg-FH-是；150-mg-組合)的結(jié)果，而以虛線顯示來自接受安慰劑的患者(PB0-FH-否；PB0-FH-是；ΡΒ0_組合)的結(jié)果。
[0067]圖4顯示研究2的研究設(shè)計(jì)，用于在篩選前接受與阿托伐他汀不同或不為穩(wěn)定劑量阿托伐他汀IOmg的降脂治療至少6周的患者組或未用藥的患者。
[0068]圖5顯示研究2的研究設(shè)計(jì)，用于在篩選前以穩(wěn)定劑量接受阿托伐他汀IOmg至少6周的患者組。
[0069]圖6顯示在12周里穩(wěn)定阿托伐他汀治療和L0CF(末次觀察結(jié)轉(zhuǎn))時(shí)接受抗體316P的研究I患者的LDL-C均值數(shù)值分布。研究設(shè)計(jì)為評估抗體316P在用穩(wěn)定劑量的阿托伐他汀(10mg、20mg或40mg)治療的、具有升高的LDL_C(≤lOOmg/dL或2.59mmol/L)的高膽固醇血癥患者中的功效和安全性。在 導(dǎo)入期(run-1n period)期間,如果患者未準(zhǔn)備好，那么使其穩(wěn)定于阿托伐他汀治療(10mg、20mg或40mg)。再一周后，經(jīng)由IVRS/IWRS以1:1:1:1:1:1比率將患者中心隨機(jī)化為6個(gè)處理組(安慰劑、316P50mg E2W、316P100mgE2W、316P150mg E2W、316P200mg E4W、316P300mg E4W)之一，并以雙盲方式治療約 12 周。根據(jù)隨機(jī)化前接受的阿托伐他汀劑量將隨機(jī)化分層。在雙盲治療期期間，患者每2周回到地點(diǎn)以接受研究處理(316P或安慰劑)。然后，雙盲治療期接著是8周隨訪期。如可從圖6得到的，除接受安慰劑的患者組外的所有處理組在整個(gè)研究期里具有顯著且持久的LDL-C水平降低。
[0070]發(fā)明詳述
[0071]定義
[0072]在下文詳細(xì)描述本發(fā)明前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于本文中描述的特定方法學(xué)、方案和試劑，因?yàn)檫@些可以變化。還應(yīng)理解本文中使用的術(shù)語僅為了描述具體實(shí)施方案，而并不意圖限制本發(fā)明的范圍，其僅會(huì)由所附權(quán)利要求書限制。除非另外定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中普通技術(shù)人員通常的理解具有相同的含義。
[0073]優(yōu)選地，如“Amultilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC
Recommendations) ” , Leuenberger, H.G.ff, Nagel, B.和 Kolbl, H.編(1995), HelveticaChimica Acta, CH-4010Basel, Switzerland)中描述的那樣定義本文中使用的術(shù)語。
[0074]貫穿本說明書和所附的權(quán)利要求書中，除非上下文另外需要，詞語“包含/包括”應(yīng)理解為暗指包括所述整數(shù)或步驟或整數(shù)或步驟組，但并不排除任何其它整數(shù)或步驟或整數(shù)或步驟組。
[0075]貫穿本說明書的文本引用數(shù)個(gè)文件(例如:專利、專利申請、科學(xué)出版物、制造商說明書、使用說明書、GenBank登錄號(hào)序列提交等)。本文中的內(nèi)容無一解釋為承認(rèn)本發(fā)明沒有資格憑借在先發(fā)明而早于此類公開內(nèi)容。本文中引用的一些文件表征為“通過提述并入”。在這類并入的參考文獻(xiàn)的定義或教導(dǎo)與本說明書中記載的定義或教導(dǎo)之間發(fā)生沖突的事件中，應(yīng)以本說明書的文本優(yōu) 先。
[0076]序列:本文中所提述的所有序列均在所附序列表中公開，序列表及其全部內(nèi)容和公開為本說明書的一部分。
[0077]術(shù)語“約”在與數(shù)字?jǐn)?shù)值聯(lián)合使用時(shí)意為涵蓋具有比指定數(shù)字?jǐn)?shù)值小5%的下限和比指定數(shù)字?jǐn)?shù)值大5%的上限的范圍內(nèi)的數(shù)字?jǐn)?shù)值。
[0078]如本文中使用的，術(shù)語“人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9”或“hPCSK9”指具有SEQ ID NO: 754中所示核酸序列和SEQ ID N0:755的氨基酸序列的hPCSK9或其生物學(xué)活性片段。
[0079]術(shù)語“特異性結(jié)合”、“特異性的結(jié)合”等意指抗體或其抗原結(jié)合片段與抗原形成在生理學(xué)條件下相對穩(wěn)定的復(fù)合物?？梢酝ㄟ^至少約1x10_6M或更小的平衡解離常數(shù)(例如Kd越小指示結(jié)合越緊密)來表征特異性結(jié)合。用于確定兩種分子是否特異性結(jié)合的方法是本領(lǐng)域中公知的，并且包括例如，平衡透析、表面等離振子共振等。然而，特異性結(jié)合hPCSK9的分離的抗體可以展現(xiàn)出與其它抗原，如來自其它物種的PCSK9分子的交叉反應(yīng)性。此外，如本文中使用的，結(jié)合hPCSK9和一種或多種其它抗原的多特異性抗體(例如雙特異物)仍被視為“特異性結(jié)合” hPCSK9的抗體。
[0080]如本文中使用的，術(shù)語“KD”意圖指特定抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(shù)。通常以“mol/L”(縮寫為“M”)測量平衡解離常數(shù)。
[0081]術(shù)語“解離速率(slow off rate) ”、“K解離”或“kd”意指如通過表面等離振子共振例如BIAC0RE?測定的，以IxlO-3S-1或更小，優(yōu)選lxlO、—1或更小的速率常數(shù)從hPCSK9解離的抗體。
[0082]術(shù)語“高親和力”抗體指如通過表面等離振子共振例如BIAC0RE?或溶液親和力ELISA測定的，對hPCSK9具有至少ΙΟ,Μ ;優(yōu)選10_ηΜ ;甚至更優(yōu)選10_12Μ的結(jié)合親和力的那些單抗。
[0083]如本文中使用的，術(shù)語“表面等離振子共振”指允許例如使用BIAC0RE?系統(tǒng)(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.),通過檢測生物傳感器基質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)濃度的變化來分析實(shí)時(shí)生物特異性相互作用的光學(xué)現(xiàn)象。
[0084]“表位”,亦稱為抗原決定簇,是受到免疫系統(tǒng),特別地受到抗體、B細(xì)胞或T細(xì)胞識(shí)別的抗原區(qū)域。如本文中使用的，“表位”是能夠結(jié)合如本文中描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的抗原部分。在此上下文中，術(shù)語“結(jié)合”優(yōu)選指“特異性結(jié)合”，如本文中定義的。表位通常由分子的化學(xué)活性表面聚集如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；蚧酋；M成，并且可以具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征和/或特定的電荷特征。構(gòu)象和非構(gòu)象性表位的區(qū)別之處可以在于，在存在變性溶劑的情況下失去對前者，而非后者的結(jié)合。
[0085]“互補(bǔ)位”是抗體中特異性結(jié)合表位的部分。
[0086]如本文中使用的，術(shù)語“抗體”意圖指由4條多肽鏈，即通過二硫鍵互連的兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈構(gòu)成的免疫球蛋白分子。術(shù)語“抗體”還包括抗體，特別是本文中所述抗體的所有重組形式，例如在原核生物中表達(dá)的抗體、未糖基化的抗體、以及如下文所述的任何抗原結(jié)合抗體片段和衍生物。每條重鏈由重鏈可變區(qū)(“HCVR”或“VH”)和重鏈恒定區(qū)(由域CH1、CH2和CH3構(gòu)成)構(gòu)成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū)(“LCVR或“VL”)和輕鏈恒定區(qū)(CL)構(gòu)成。VH和VL區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分成具有高可變性的區(qū)域，稱作互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其散布有更保守的、稱作框架區(qū)(FR)的區(qū)域。每個(gè)VH和VL由3個(gè)CDR和4個(gè)FR構(gòu)成，從氨基端向羧基端按照如下的次序排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互 作用的結(jié)合域?？贵w的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白對宿主組織或因子，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(Clq)的結(jié)合。
[0087]還可以取代一個(gè)或多個(gè)⑶R殘基或省略一個(gè)或多個(gè)⑶R。已在科學(xué)文獻(xiàn)中描述了如下的抗體，其中可以省去一個(gè)或兩個(gè)⑶R實(shí)現(xiàn)結(jié)合。Padlan等(1995FASEB J.9:133-139)基于公開的晶體結(jié)構(gòu)分析了抗體與其抗原之間的接觸區(qū)，并且得出的結(jié)論是僅約五分之一到三分之一的⑶R殘基實(shí)際上與抗原接觸。Padlan還發(fā)現(xiàn)許多其中的一個(gè)或兩個(gè)⑶R沒有氨基酸與抗原接觸的抗體(亦參見Vajdos等.2002J Mol Biol320:415-428)。
[0088]可以基于先前的研究(例如⑶RH2中的殘基H60-H65經(jīng)常是不需要的)、從位于Chothia⑶R外部的Kabat⑶R區(qū)、通過分子建模和/或憑借經(jīng)驗(yàn)鑒定不接觸抗原的⑶R殘基。如果省去CDR或其殘基，那么通常將其用在另一種人抗體序列或這類序列的通用序列中占據(jù)相應(yīng)位置的氨基酸取代。也可以憑借經(jīng)驗(yàn)選擇CDR內(nèi)用于取代的位置和取代的氨基酸。經(jīng)驗(yàn)性取代可以是保守或非保守的取代。
[0089]如本文中使用的，術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”(或簡單地“結(jié)合部分”)指抗體中保留特異性結(jié)合hPCSK9的能力的一或多種片段。已顯示可以通過全長抗體的片段實(shí)施抗體的抗原結(jié)合功能。術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”內(nèi)涵蓋的結(jié)合片段的例子包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH域組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab’)2片段，即包含通過鉸鏈區(qū)的二硫化物橋連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由VH和CH域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的 VL 和 VH 域組成的 Fv 片段；(V) dAb 片段(Ward 等,(1989) Nature341:544-546)，其由VH域組成；(vi)分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)，和(vii)任選地可以由合成接頭連接的兩個(gè)或更多個(gè)分離的⑶R的組合。此外，盡管Fv片段的兩個(gè)域VL和VH由分開的基因編碼，但它們可以使用重組方法連接，這通過使它們能夠以單個(gè)蛋白質(zhì)鏈生成的合成接頭實(shí)現(xiàn)，其中VL和VH區(qū)配對形成單價(jià)分子(稱為單鏈Fv(scFv);參見例如Bird等(1988)Science242:423-426 ；和 Huston 等(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883)。還意圖將這類單鏈抗體涵蓋在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”內(nèi)。另一個(gè)例子是結(jié)合域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合的結(jié)合域多肽，(ii)與鉸鏈區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，和(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)。所述結(jié)合域多肽可以是重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)。另外在US2003/0118592和US2003/0133939中披露了結(jié)合域免疫球蛋白融合蛋白。這些抗體片段是使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得的，并且以與完整抗體相同的方式篩選所述片段的效用。“抗原結(jié)合片段”的別的例子是所謂的微抗體(microantibody)，其自單一⑶R衍生。例如,Heap等描述了一種自針對HIV-1的gpl20被膜糖蛋白的抗體重鏈CDR3衍生的17個(gè)氨基酸殘基的微抗體(Heap CJ等.(2005) J.Gen.Virol.86:1791-1800) ?其它例子包括小抗體模擬物，其包含優(yōu)選通過關(guān)聯(lián)的框架區(qū)彼此融合的兩個(gè)或更多個(gè)CDR區(qū)。Qiu等(Qiu X-Q,等(2007)Nature biotechnology25(8):921-929)已描述了這類包含通過關(guān)聯(lián)VH FR2連接的VH CDRl和VL⑶R3的小抗體模擬物。
[0090]如此，如本文中使用的， 術(shù)語“抗體或其抗原結(jié)合片段”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。
[0091 ] 可用于本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合片段可以來自任何動(dòng)物起源，包括禽類和哺乳動(dòng)物。優(yōu)選地，所述抗體或片段來自人、黑猩猩、嚙齒類(例如小鼠、大鼠、豚鼠或家兔)、雞、火雞、豬、綿羊、山羊、駱駝、牛、馬、驢、貓或犬起源。特別優(yōu)選抗體為人或鼠起源的。本發(fā)明的抗體還包括嵌合分子，其中將自一種物種(優(yōu)選人)衍生的抗體恒定區(qū)與自另一物種(例如小鼠)衍生的抗原結(jié)合位點(diǎn)組合。此外，本發(fā)明的抗體包括人源化分子，其中將自非人物種(例如自小鼠)衍生的抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)與具有人起源的恒定區(qū)和框架區(qū)組合。
[0092]如本文中例示的，本發(fā)明的抗體可以直接從表達(dá)抗體的雜交瘤獲得，或者可以克隆并在宿主細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞或淋巴細(xì)胞性細(xì)胞)中重組表達(dá)。宿主細(xì)胞的別的例子為微生物如大腸桿菌(E.coli)和真菌如酵母。或者，可以在轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物或植物中重組生成它們。
[0093]術(shù)語“嵌合抗體”指其中的重鏈和輕鏈的每個(gè)氨基酸序列的一部分與自特定物種衍生或?qū)儆谔囟惖目贵w中的相應(yīng)序列同源，而鏈的剩余區(qū)段與另一物種或類中的相應(yīng)序列同源的那些抗體。通常，輕鏈和重鏈兩者的可變區(qū)模擬自哺乳動(dòng)物的一個(gè)物種衍生的抗體的可變區(qū)，而恒定部分與自另一物種衍生的抗體序列同源。這類嵌合形式的一個(gè)清楚的優(yōu)點(diǎn)是可以使用容易可獲得的來自非人宿主生物體的B細(xì)胞或雜交瘤從目前已知的來源方便地衍生可變區(qū)，其與自例如人細(xì)胞制備物衍生的恒定區(qū)組合?？勺儏^(qū)具有易于制備的優(yōu)點(diǎn)，并且特異性不受來源影響，而人的恒定區(qū)與來自非人來源的恒定區(qū)相比不太可能在注射抗體時(shí)引發(fā)來自人受試者的免疫應(yīng)答。然而，定義不限于該具體例子。[0094]術(shù)語“人源化抗體”指具有基本上自來自非人物種的免疫球蛋白衍生的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子，其中分子的剩余免疫球蛋白結(jié)構(gòu)基于人免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)和/或序列?？乖Y(jié)合位點(diǎn)可以包含融合至恒定域上的完整可變域或僅包含嫁接到可變域中合適的框架區(qū)上的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)?？乖Y(jié)合位點(diǎn)可以是野生型的或者是通過一處或多處氨基酸取代修飾的，例如修飾以更緊密地類似于人免疫球蛋白。一些人源化抗體形式保留所有的CDR序列(例如人源化的小鼠抗體，其含有來自小鼠抗體的所有6個(gè)CDR)。其它形式具有一個(gè)或多個(gè)相對于初始抗體改變過的CDR。
[0095]用于使抗體人源化的不同方法是技術(shù)人員已知的，如由Almagro&Fransson綜述的，其內(nèi)容通過提述完整并入本文(Almagro JC和Fransson J(2008)Frontiers inBiosciencel3:1619-1633)。Almagro&Fransson區(qū)分理性辦法和經(jīng)驗(yàn)辦法。理性辦法的特征在于生成少數(shù)工程化抗體變體并評估其結(jié)合或任何其它感興趣的特性。如果設(shè)計(jì)的變體不產(chǎn)生預(yù)期的結(jié)果，那么啟動(dòng)新一輪的設(shè)計(jì)和結(jié)合評估。理性辦法包括⑶R嫁接、表面重建(Resurfacing)、超人源化(Superhumanization)和人字符串內(nèi)容優(yōu)化(Human StringContent Optimization)。相比之下,經(jīng)驗(yàn)辦法基于生成大的人源化變體庫并使用富集技術(shù)或高通量篩選選出最佳克隆。因而，經(jīng)驗(yàn)辦法依賴于能夠?qū)Υ罅靠贵w變體進(jìn)行搜索的可靠的選擇和/或篩選系統(tǒng)。體外展示技術(shù)，如噬菌體展示和核糖體展示滿足這些要求并且是技術(shù)人員公知的。經(jīng)驗(yàn)辦法包括FR庫、導(dǎo)向選擇(Guided selection)、框架改組(Framework-shuffling)和 Humaneering0
[0096]如本文中使用的，術(shù)語“人抗體”意圖包括具有自人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人單抗可以包含不由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如，通過隨機(jī)或位點(diǎn)特異性的體外誘變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)，例如在⑶R，且尤其在⑶R3中。然而，如本文中使用的，術(shù)語“人抗體”不意圖包括其中已將自另一哺乳動(dòng)物物種(例如小鼠)種系衍生的CDR序列嫁接到人FR序列上的單抗。本發(fā)明的人抗體包括從人免疫球蛋白庫或從針對一或多種人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因且不表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白的動(dòng)物分離的抗體 ，如記載于例如Kucherlapati&Jakobovits的美國專利N0.5，939，598 中的。
[0097]如本文中使用的，術(shù)語“單克隆抗體”指具有單一分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗體展現(xiàn)出對特定表位的單一結(jié)合特異性和親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過雜交瘤生成單克隆抗體，所述雜交瘤包含與永生化細(xì)胞融合的從非人動(dòng)物例如小鼠獲得的B細(xì)胞。
[0098]如本文中使用的，術(shù)語“重組抗體”包括通過重組手段制備、表達(dá)、創(chuàng)造或分離的所有抗體，如(a)從就免疫球蛋白基因而言為轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體的動(dòng)物(例如小鼠)或自其制備的雜交瘤分離的抗體，(b)從經(jīng)轉(zhuǎn)化以表達(dá)該抗體的宿主細(xì)胞，例如從轉(zhuǎn)染瘤分離的抗體，(C)從重組的組合抗體庫分離的抗體，和(d)通過涉及將免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的任何其它手段制備、表達(dá)、創(chuàng)造或分離的抗體。
[0099]如本文中使用的，術(shù)語“轉(zhuǎn)染瘤”包括表達(dá)抗體的重組真核宿主細(xì)胞，如CHO細(xì)胞、NS/0細(xì)胞、HEK293細(xì)胞、HEK293T細(xì)胞、植物細(xì)胞或真菌，包括酵母細(xì)胞。
[0100]如本文中使用的，“異源抗體”就生成這類抗體的轉(zhuǎn)基因生物體而言定義。該術(shù)語指如下的抗體，其具有的氨基酸序列或編碼核酸序列對應(yīng)于不由該轉(zhuǎn)基因生物體組成的生物體中找到的并且一般自該轉(zhuǎn)基因生物外的物種衍生的氨基酸序列或編碼核酸序列。
[0101]如本文中使用的異源雜合(heterohybrid)抗體”指具有不同生物體起源的輕鏈和重鏈的抗體。例如，具有與鼠輕鏈聯(lián)合的人重鏈的抗體是異源雜合抗體。
[0102]如此，適用于本發(fā)明的“抗體及其抗原結(jié)合片段”包括但不限于多克隆、單克隆、單價(jià)、雙特異性、異綴合物、多特異性、重組、異源、異源雜合、嵌合、人源化(特別是嫁接有CDR的)、去免疫的、或人的抗體、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、由Fab表達(dá)庫產(chǎn)生的片段、Fd、Fv、二硫化物連接的Fv(dsFv)、單鏈抗體(例如scFv)、雙抗體或四抗體(Holliger P.等(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90 (14), 6444-6448)、納米抗體(nanobody)(也稱為單域抗體)、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括例如針對本發(fā)明抗體的抗Id抗體)和上述任一種的表位結(jié)合片段。
[0103]本文中描述的抗體優(yōu)選為分離的。如本文中使用的，“分離的抗體”意圖指基本上沒有具有不同抗原特異性的其它單抗的抗體(例如特異性結(jié)合hPCSK9的分離的抗體基本上沒有特異性結(jié)合與hPCSK9不同的抗原的單抗)。然而，特異性結(jié)合hPCSK9的分離的抗體可以對其它抗原，如來自其它物種的PCSK9分子具有交叉反應(yīng)性。
[0104]如本文中使用的，“PCSK9拮抗劑”指抑制PCSK9的至少一種生物學(xué)活性，優(yōu)選PCSK9的蛋白酶活性的化合物。優(yōu)選的PCSK9拮抗劑的特征在于，在以化學(xué)計(jì)量量使用時(shí)，它們結(jié)合血液中存在的10%至100%(優(yōu)選從50%至100%)的PCSK9。本發(fā)明的優(yōu)選的PCSK9拮抗劑為中和性抗體。
[0105]如本文中使用的，“中和性抗體”(或“中和PCSK9活性的抗體”)意圖指其對hPCSK9的結(jié)合導(dǎo)致對PCSK9的至少一種生物學(xué)活性的抑制(優(yōu)選抑制PCSK9的蛋白酶活性)的抗體?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中已知的數(shù)種標(biāo)準(zhǔn)的體外或體內(nèi)測定法中的一或多種，通過測量PCSK9生物學(xué)活性的一種或多種指示物來評估對PCSK9生物學(xué)活性的此抑制。這類測定法記載于例如US2010/0166768A1，其 內(nèi)容通過提述完整據(jù)此并入。
[0106]由于PCSK9通過促進(jìn)LDL受體的降解來增加血漿LDL膽固醇，PCSK9的活性對數(shù)種與升高的血漿LDL膽固醇水平有關(guān)的疾病有影響。因而，PCSK9拮抗劑如中和性抗hPCSK9抗體或其抗原結(jié)合片段可用于降低升高的總膽固醇、非HDL膽固醇、LDL膽固醇、和/或載脂蛋白BlOO (Ap0BlOO)。因此，PCSK9拮抗劑可用于緩解、改善、抑制或預(yù)防數(shù)種這類疾病，包括但不限于高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病。
[0107]在具體的實(shí)施方案中，可以將本文中描述的抗PCSK9抗體或其抗原結(jié)合片段與治療性模塊(“免疫綴合物”)，如細(xì)胞毒素、化療藥物、免疫抑制劑或放射性同位素綴合。
[0108]“保守性氨基酸取代”是其中氨基酸殘基用另一種有具有類似化學(xué)特性(例如電荷或疏水性)的側(cè)鏈(R基團(tuán))的氨基酸殘基取代的取代。一般地，保守性氨基酸取代不會(huì)實(shí)質(zhì)性改變蛋白質(zhì)的功能特性。在兩種或更多種氨基酸序列因保守性取代而彼此不同的情況下，可以向上調(diào)節(jié)相似性百分比或程度以校正取代的保守性質(zhì)。進(jìn)行此調(diào)節(jié)的手段是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。參見例如，Pearson(1994)Methods Mo1.Biol.24:307-331。有具有類似的化學(xué)特性的側(cè)鏈的氨基酸組的例子包括:
[0109]I)脂肪族側(cè)鏈:甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；
[0110]2)脂肪族-羥基側(cè)鏈:絲氨酸和蘇氨酸；
[0111]3)含有酰胺的側(cè)鏈:天冬酰胺和谷氨酰胺；[0112]4)芳香族側(cè)鏈:苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；
[0113]5)堿性側(cè)鏈:賴氨酸、精氨酸和組氨酸；
[0114]6)酸性側(cè)鏈:天冬氨酸和谷氨酸；以及
[0115]7)含硫側(cè)鏈:半胱氨酸和甲硫氨酸。
[0116]優(yōu)選的保守性氨基酸取代組為:纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨酸-天冬氨酸、和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守性替換是在Gonnet等(1992) Science256:1443-45公開的PAM250對數(shù)似然性矩陣中具有正值的任何變化?！爸械缺Ｊ匦浴碧鎿Q是在PAM250對數(shù)似然性矩陣中具有非負(fù)值的任何變化。鑒于已知的遺傳密碼和重組及合成DNA技術(shù)，熟練科學(xué)家可以容易地構(gòu)建編碼保守的氨基酸變體的DNA。[0117]如本文中使用的，“非保守性取代”或“非保守性氨基酸交換”定義為一種氨基酸用上文顯示的7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸組I)至7)的不同組中所列的另一種氨基酸交換。
[0118]當(dāng)指核酸或其片段時(shí)，術(shù)語“實(shí)質(zhì)性同一性”或“實(shí)質(zhì)上相同的”指示當(dāng)在合適的核苷酸插入或缺失情況中與另一核酸(或其互補(bǔ)鏈)最佳比對時(shí)，在至少約90%，且更優(yōu)選地至少約95%、96%、97%、98%或99%的核苷酸堿基中有核苷酸序列同一性，如通過任何公知的序列同一性算法，如FASTA、BLAST或GAP所測量的，如下文論述的。
[0119]當(dāng)應(yīng)用于多肽時(shí)，術(shù)語“實(shí)質(zhì)性相似性”或“基本上相似的”意味著兩條多肽序列當(dāng)如通過程序GAP或BESTFIT使用缺省缺口權(quán)重進(jìn)行最佳比對時(shí)，共享至少90%的序列同一性，甚至更優(yōu)選地至少95%、98%或99%的序列同一性。優(yōu)選地，不相同的殘基位置的差異在于保守性氨基酸取代。
[0120]通常使用序列分析軟件來測量多肽的序列相似性。蛋白質(zhì)分析軟件使用分配給各種取代、缺失和其它修飾(包括保守性氨基酸取代)的相似性量度來匹配相似的序列。例如，GCG軟件含有程序如GAP和BESTFIT，其可以以缺省參數(shù)使用來測定密切相關(guān)的多肽，如來自生物體的不同物種的同源多肽間或野生型蛋白質(zhì)與其突變型蛋白之間的序列同源性或序列同一性。參見，例如GCG版本6.1。還可以以缺省或推薦參數(shù)使用FASTA(GCG版本6.1中的一個(gè)程序)來比較多肽序列。FASTA (例如FASTA2和FASTA3)提供查詢和搜索序列之間的最佳重疊區(qū)的比對和百分比序列同一性(Pearson(2000)，見上)。在將本發(fā)明的序列與含有大量來自不同生物體的序列的數(shù)據(jù)庫比較時(shí)，另一種優(yōu)選的算法是計(jì)算機(jī)程序BLAST，特別是使用不同參數(shù)的BLASTP或TBLASTN。參見，例如Altschul等(1990) J.Mol.Biol.215:403410 和(1997)Nucleic Acids Res.25:3389402，其各自通過提述并入本文。[0121]當(dāng)在本申請中提到序列同一性的百分比時(shí)，若未另外特別指出，這些百分比相對于較長序列的全長計(jì)算。相對于較長序列的全長計(jì)算適用于核酸序列和多肽序列兩者。[0122]如本文中使用的，“治療”或“處理”疾病或病癥意味著實(shí)現(xiàn)下列一項(xiàng)或多項(xiàng):(a)降低病癥的嚴(yán)重程度和/或持續(xù)時(shí)間；(b)限制或預(yù)防所治療病癥的特征性癥狀的形成；(C)抑制所治療病癥的特征性癥狀的惡化；(d)限制或預(yù)防先前患有該病癥的患者中的病癥復(fù)發(fā)；以及(e)限制或預(yù)防先前該病癥癥狀性的患者中的癥狀復(fù)發(fā)。[0123]如本文中使用的，疾病或病癥的“預(yù)防”、“防止”或“防范”意指預(yù)防受試者中發(fā)生病癥。[0124]如本文中使用的，表述“用于施用”和“要施用”具有與“準(zhǔn)備好施用”相同的意義。換言之，陳述某活性化合物“用于施用”應(yīng)理解為已配制好所述活性化合物并將其制成劑量，從而使所述活性化合物處于能夠施加其治療活性的狀態(tài)。 [0125]術(shù)語“治療有效量”或“治療量”意圖指會(huì)對組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人引發(fā)研究者、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)生探尋的生物學(xué)或者醫(yī)學(xué)應(yīng)答的藥物或藥用藥劑量。術(shù)語“預(yù)防有效量”意圖指會(huì)預(yù)防或降低研究者、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)生探求在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人中預(yù)防的生物學(xué)或者醫(yī)學(xué)事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的藥用藥物量。具體地，可以選擇患者接受的劑量，從而實(shí)現(xiàn)期望的LDL(低密度脂蛋白)膽固醇降低量；還可以隨時(shí)間滴定患者接受的劑量以達(dá)到目標(biāo)LDL水平。根據(jù)多種因素來選擇利用如本文中描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的劑量方案，所述因素包括患者的類型、人種、年齡、重量、體重指數(shù)、性別和醫(yī)學(xué)狀況；要治療的狀況的嚴(yán)重程度；選擇施用的化合物的效力；施用路徑；施用目的；以及患者的腎和肝功能。
[0126]如本文中使用的，“患者”意指任何可能受益于用本文中描述的抗體及其抗原結(jié)合片段治療的人或非人的動(dòng)物，如哺乳動(dòng)物、爬行類或禽類。優(yōu)選地，“患者”選自下組:實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物(例如小鼠或大鼠)、家養(yǎng)動(dòng)物(包括例如豚鼠、家兔、雞、火雞、豬、綿羊、山羊、駱駝、牛、馬、驢、貓或犬)、嚙齒類或靈長類，包括黑猩猩、大猩猩、倭黑猩猩(bonobo)和人類。特別優(yōu)選的是，“患者”是人類。
[0127]術(shù)語“受試者”或“個(gè)體”在本文中可互換使用。如本文中使用的，“受試者”指人或非人動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物、禽類、爬行類、魚、兩棲動(dòng)物或無脊椎動(dòng)物)；優(yōu)選是可以受益于本發(fā)明的不同方面之一(例如治療方法或由本方法鑒定的藥物)或可以用作實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物來鑒定或表征藥物或治療方法的個(gè)體。所述個(gè)體可以是例如人、野生動(dòng)物、家養(yǎng)動(dòng)物或?qū)嶒?yàn)室動(dòng)物；例子包括:哺乳動(dòng)物，例如人、非人靈長類(黑猩猩、倭黑猩猩、大猩猩)、犬、貓，嚙齒類(例如小鼠、豚鼠、大鼠、倉鼠或家兔、馬、驢、牛、綿羊、山羊、豬、駱駝；禽類，如鴨、鴿、火雞、鵝或雞；爬行類如海龜(turtle)、龜(tortoise)、蛇、蜥蜴；兩棲動(dòng)物如蛙(例如爪蟾(Xenopus Iaevis));魚如koy或斑馬魚；無脊椎動(dòng)物如螺蟲(例如秀麗隱桿線蟲(c.elegans))或昆蟲(如蒼蜆(fly),例如黑腹果蜆(drosophila melanogaster))。術(shù)語個(gè)體還包括禽類、魚、爬行類或昆蟲的不同形態(tài)學(xué)發(fā)展階段，如卵、蛹、幼體或成蟲。進(jìn)一步優(yōu)選的是，受試者是“患者”。
[0128]如本文中使用的，“單位劑量形式”指適合作為用于人和/或動(dòng)物受試者的單一劑量的物理離散單元，每個(gè)單元含有與需要的藥用稀釋劑、載體或媒介物聯(lián)合的計(jì)算為產(chǎn)生期望的治療效果的預(yù)定量的活性材料(例如約50至約500mg PCSK5抗體和/或例如0.05mg至IOOmg HMG-CoA還原酶抑制劑)。本發(fā)明的新穎單位劑量形式的規(guī)格由下列各項(xiàng)規(guī)定并直接依賴于下列各項(xiàng):(a)活性材料的獨(dú)特特征和要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，和(b)混合這類活性材料以在動(dòng)物或人中的治療使用的本領(lǐng)域中固有的限制，如本說明書中公開的，這些是本發(fā)明的特征。依照本發(fā)明的合適單位劑量形式的例子是管形瓶、片劑、膠囊劑、錠劑(troche)、栓劑、粉末包(powder packet)、速溶片(wafer)、扁囊劑(cachet)、安瓿(ampule)、前述任一項(xiàng)的分開的多重物(segregated multiples)以及如本文中描述的或本領(lǐng)域中一般已知的其它形式。本發(fā)明的制品中可以包含抗體的一種或多種這類單位劑量形式，任選地還包含HMG-CoA還原酶抑制劑的一種或多種單位劑量形式(例如包含HMG-CoA還原酶抑制劑作為活性成分的片劑的泡罩)。[0129]術(shù)語“活性材料”指任何具有治療活性的材料，如一種或多種活性成分。要用作治療劑的活性成分可以通過采用自身在本領(lǐng)域中可用且可以通過確立的規(guī)程制備的藥用材料以這類單位劑量形式容易地制備。
[0130]以下制劑例示了本發(fā)明的單位劑量形式的制劑，且不作為其限制。可以制備體現(xiàn)本發(fā)明的數(shù)種劑量形式。例如，每管形瓶的單位劑量可以含有0.5ml, lml, 2ml, 3ml, 4ml, 5ml, 6ml, 7ml, 8ml, 9ml, 10ml, 15ml 或 20ml PCSK5 抗體或其片段，其范圍為約 40 至約 500mg的PCSK5抗體。若必要的話，可以通過向每個(gè)管形瓶添加無菌稀釋劑將這些制劑調(diào)節(jié)至期望濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，在單位劑量形式中分開地或混合在一起地提供本發(fā)明的配制劑成分，例如以在指示活性劑量的氣密密封容器如管形瓶、安瓿或藥囊(sachette)中的干凍干(Iyophilized)粉末或無水濃縮物提供。在要通過輸注施用組合物的情況下，可以用含有無菌藥用級(jí)水或鹽水的輸注瓶來將其分配。在通過注射施用組合物的情況下，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，從而在施用前可以將成分混合。
[0131]本發(fā)明的配制劑包括可用于制造藥物組合物(例如，適用于對受試者或患者施用的組合物)的整裝藥物組合物，其可以在制備單位劑量形式中使用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是藥物組合物。這類組合物包含預(yù)防或治療有效量的一種或多種預(yù)防劑或治療劑(例如本發(fā)明的抗體或其它預(yù)防劑或治療劑)，以及藥學(xué)可接受載體。優(yōu)選地，將所述藥物組合物配制為適用于對受試者的施用路徑。
[0132]可以將活性材料或成分(例如抗體或其片段和HMG-CoA還原酶抑制劑)配制為各種劑量形式，包括用于口服施用的固體劑量形式，如膠囊齊?、片齊?、丸齊?、粉末和顆粒劑，用于口服施用的液體劑量形式，如藥學(xué)可接受乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑，可注射制劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液，用于直腸或陰道施用的組合物，優(yōu)選栓劑，以及用于局部或透皮施用的劑量形式，如軟膏劑、糊`劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、粉末、溶液、噴霧、吸入劑或貼片。
[0133]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”意指得到美國聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)或EMA(歐洲藥品局，European Medicines Agency)批準(zhǔn),或在美國藥典((美國藥典-33/國定配方集(National Formulary)_28重新發(fā)行，由美國藥典委員會(huì)(UnitedStates Pharmacopeial Convention), Inc., Rockville Md.出版，出版日期:2010年4 月))或其它一般公認(rèn)的藥典中列出用于動(dòng)物，且更特別地用于人。術(shù)語“載體”指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(完全和不完全的))、賦形劑或媒介物。這類藥用載體可以是無菌液體，如水和油，包括那些具有石油、動(dòng)物、植物或合成起源的，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)靜脈內(nèi)施用藥物組合物時(shí)，水是優(yōu)選的載體。還可以將鹽水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液體載體，特別是用于可注射溶液。合適的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米(rice)、面粉、白堊(chalk)、硅膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、干燥的脫脂乳(dried skim milk)、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。對于(別的)賦形劑的使用及其用途，亦參見“Handbook of PharmaceuticalExcipients”，第五版,R.C.Rowe, P.J.Seskey 和 S.C.0wen, PharmaceuticalPress, London, Chicago。若期望的話,所述組合物還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑,或pH緩沖劑。這些組合物可以采用溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉末、持續(xù)釋放配制劑等的形式?？诜渲苿┛梢园瑯?biāo)準(zhǔn)載體，如藥用級(jí)甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉(sodium saccharine)、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥用載體的例子記載于E.ff.Martin的“Remington，s Pharmaceutical Sciences”。這類組合物將含有與合適量載體一起的預(yù)防或治療有效量的抗體(優(yōu)選為純化的形式)，從而提供對患者適當(dāng)施用的形式。配制劑應(yīng)當(dāng)適合施用模式。
[0134]一般地，在單位劑量形式中分開地或混合在一起地提供本發(fā)明的組合物成分，例如以在指示活性劑量的氣密密封容器如安瓿或藥囊中的用于溶解的干配制劑如凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物提供。本發(fā)明組合物的成分還可以以在氣密密封容器如安瓿、藥囊、預(yù)填充的注射器或自動(dòng)注射器、或供可再度使用的注射器或涂藥器(例如筆或自動(dòng)注射器)用的藥筒中混合的液體配制劑(即注射或輸注溶液)提供。在要通過輸注施用組合物的情況下，可以用含有無菌藥用級(jí)水或鹽水的輸注瓶來將其分配。在通過注射施用組合物的情況下，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，從而在施用前可以將成分混合。
[0135]本發(fā)明還提供在指示抗體量的氣密密封容器，如安瓿或藥囊中包裝配制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含抗體的本發(fā)明配制劑以在氣密密封容器中的干配制劑，如無菌凍干粉末、冷凍干燥粉末、噴霧干燥粉末或無水濃縮物供應(yīng)，并且可以用例如水或鹽水重建成適合于對受試者施用的濃度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，以液體配制劑如注射或輸注溶液供應(yīng)抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，在氣密密封容器中以干配制劑或液體配制劑，以至少40mg、至少50mg、更優(yōu)選至少75mg、至少lOOmg、至少150mg、至少200mg、至少250mg、至少300mg、至少350mg、至少400mg、至少450mg或至少500mg的抗體或其抗原結(jié)合片段的單位劑量供應(yīng)包含抗體的本發(fā)明配制劑。包含抗體的本發(fā)明凍干配制劑應(yīng)當(dāng)于介于2和8°C之間在其最初的容器中貯存，并且應(yīng)當(dāng)在重建后12小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選6小時(shí)內(nèi)、5小時(shí)內(nèi)、3小時(shí)內(nèi)或I小時(shí)內(nèi)施用抗體。包含抗體的本發(fā)明配制劑可以配制為中性或鹽形式。藥學(xué)可接受鹽包括那些與陰離子，如自氫氯酸、磷酸、醋酸、草酸、酒石酸等衍生的陰離子形成的鹽，以及那些與陽離子，如自氫氧化鈉、鉀、銨、鈣、鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因(procaine)等衍生的陽離子形成的鹽。
[0136]成年受試者在 他們具有超過HOmmHg的收縮血壓和/或超過90mmHg的舒張血壓時(shí)表征為具有“高血壓”。
[0137]通過本發(fā)明的治療方法可治療的特定群體包括患有下列一種或多種狀況的受試者:指示進(jìn)行LDL血透(apheresis)的受試者、具有PCSK9激活突變(功能獲得突變，“GOF”)的受試者、總膽固醇水平升高的受試者、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平升高的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥的受試者(如患有原發(fā)性家族性或非家族性高膽固醇血癥的受試者)、患有雜合家族性高膽固醇血癥(heFH)的受試者；患有高膽固醇血癥特別是原發(fā)性高膽固醇血癥、且他汀不耐受或不受他汀控制的受試者；以及有形成高膽固醇血癥的風(fēng)險(xiǎn)、且可以可預(yù)防性處理的受試者。其它適應(yīng)征包括高脂血癥和血脂障礙，尤其是在與繼發(fā)性原因如2型糖尿病、膽汁郁積性肝病(原發(fā)性膽汁性肝硬化)、腎病綜合征、甲狀腺機(jī)能減退、肥胖有關(guān)時(shí)；以及動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，如冠心病(CHD)的預(yù)防和治療。如對上述群體或受試者列出的狀況或病癥是尤其適合用本發(fā)明的抗體治療的狀況或病癥。
[0138]然而，根據(jù)前述疾病和狀況的嚴(yán)重程度，用本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段治療受試者對于某些疾病和狀況可能是禁忌的。
[0139]術(shù)語“不利效應(yīng)”(或副作用)指源自藥物的有害的且不期望的效應(yīng)。當(dāng)判斷不利效應(yīng)繼發(fā)于主要或治療效果時(shí)，其可以稱作“副作用”。一些不利效應(yīng)僅在開始、提高、或中斷治療時(shí)發(fā)生。不利效應(yīng)可能導(dǎo)致疾病的醫(yī)學(xué)并發(fā)癥并且負(fù)面影響其預(yù)后。副作用的例子是過敏反應(yīng)、嘔吐、頭疼或頭暈或本文中描述的任何其它效應(yīng)。
[0140]如本文中使用的，“治療”疾病或病癥意指實(shí)現(xiàn)下列一項(xiàng)或多項(xiàng):(a)降低病癥的嚴(yán)重程度和/或持續(xù)時(shí)間；(b)限制或預(yù)防所治療病癥的特征性癥狀的形成；(C)抑制所治療病癥的特征性癥狀的惡化；(d)限制或預(yù)防先前已經(jīng)患有該病癥的患者中的病癥復(fù)發(fā)；以及(e)限制或預(yù)防先前該病癥癥狀性的患者中的癥狀復(fù)發(fā)。
[0141]如本文中使用的，“預(yù)防”、“防止”或“防范”疾病、狀況或病癥意味著預(yù)防在受試者中發(fā)生病癥、疾病或狀況。
[0142]在本發(fā)明的上下文中，升高的總膽固醇水平理解為總膽固醇水平為200mg/dL或更多，尤其是240mg/dL或更多。國際治療指南推薦將LDL-C降低至〈2.0-2.6mmol/L (〈77-100mg/dL)(在患有確立的心血管疾病(CVD)的患者中)及至〈1.8-2.0mmol/L?70-77mg/dL)(在高風(fēng)險(xiǎn)組中，如那些患有CVD及糖尿病、吸煙、受控較差的高血壓、代謝綜合征或先前的心肌梗死的)。如此，在本發(fā)明的上下文中，升高的LDL-C水平理解為LDL-C水平為77mg/dL或更多(特別是對于具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征的患者:確立的CVD和糖尿病、伴有吸煙、受控較差的高血壓、代謝綜合征或先前的心肌梗死)以及100mg/dL或更多(特別是對于確立的CVD的患者)、130mg/dL或更多、或160mg/dL或190mg/dL或更多。在本發(fā)明的上下文中，較低的高密度脂蛋白水平(HDL水平)理解為優(yōu)選小于約40mg/dL。
[0143]在本發(fā)明的上下文中，升高的總膽固醇水平理解為優(yōu)選是總膽固醇水平為200mg/dL或更多，尤其是240mg/dL或更多。國際治療指南推薦將LDL-C降低至〈2.0-2.6mmol/L (〈77-100mg/dL)(在患有確立的心血管疾病(CVD)的患者中)及至〈1.8-2.0mmol/L?70-77mg/dL)(在高風(fēng)險(xiǎn)組中，如那些患有CVD及糖尿病、吸煙、受控較差的高血壓、代謝綜合征或先前的心肌梗死的)。如此，在本發(fā)明的上下文中，升高的LDL-C水平理解為LDL-C水平為77mg/dL或更多(特別是對于具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征的患者:確立的CVD和[糖尿病、伴有吸煙、受控較差的高血壓、 代謝綜合征或先前的心肌梗死]中的一或多種)以及100mg/dL或更多(特別是對于確立的CVD的患者)、130mg/dL或更多、或160mg/dL或190mg/dL或更多。在本發(fā)明的上下文中，較低的高密度脂蛋白水平(HDL水平)理解為優(yōu)選小于約40mg/dL。
[0144]術(shù)語“不受他汀類控制”或“他汀抗性”，尤其在高脂血癥、高膽固醇血癥等的背景中，在本文中同義使用并且指如高脂血癥等狀況，其中用他汀治療(即對患者定期施用他汀如阿托伐他汀)不顯著降低總膽固醇或LDL-C，或不足以為患者建立正常血脂水平或建立的血脂水平(例如總膽固醇或LDL-C)水平不是形成心血管疾病的重大風(fēng)險(xiǎn)因子。這意味著例如他汀治療一般不足以建立小于130mg/dL的水平，或小于lOOmg/dL(例如約≤77mg/dL至約100mg/dL)的水平，尤其是在患有確立的心血管疾病的患者中，或不足以建立約小于77mg/dL(例如約≤70-77mg/dL)的水平，尤其是在高風(fēng)險(xiǎn)組中，如那些有CVD及糖尿病、吸煙、受控較差的高血壓、代謝綜合征、或先前的心肌梗死的。在本發(fā)明的上下文中，他汀抗性優(yōu)選指阿托伐他汀抗性。
[0145]本發(fā)明的實(shí)施方案
[0146]現(xiàn)在將進(jìn)一步描述本發(fā)明。在以下段落中更具體地限定本發(fā)明的不同方面。除非清楚相反指示，如此限定的每方面可以與任何其它一個(gè)或多個(gè)方面組合。具體地，除非清楚相反指示，任何指示為優(yōu)選或有利的特征可以與任何其它一種或多種指示為優(yōu)選或有利的特征組合。
[0147]在第I方面，本發(fā)明涉及包含與藥學(xué)可接受賦形劑或載體一起的約40至約500mg特異性結(jié)合蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (PCSK9)的抗體的藥物組合物。
[0148]用于實(shí)踐第I方面的合適的抗體或其片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。所述抗體或其片段的優(yōu)選實(shí)施方案例如記載于本發(fā)明的第4、7和11方面。
[0149]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述藥物組合物包含每劑約40至約500mg或約50至約500mg的抗體或抗原結(jié)合片段。
[0150]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述藥物組合物包含約50mg至約500mg、約50mg至約 300mg、約 50mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約450mg或約500mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0151]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物包含約150、200或300mg的抗體或
其抗原結(jié)合片段。
[0152]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物包含與藥學(xué)可接受賦形劑或載體一起的有效劑量的特異性結(jié)合hPCSK9 (人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述劑量對于在施用后至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天或至少28天的時(shí)段里低密度脂蛋白(LDL-C)水平的持續(xù)降低是足夠的。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述劑量對于在至少14天、28天或I個(gè)月`的時(shí)段里L(fēng)DL-C水平的持續(xù)降低是足夠的。
[0153]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物包含有效量的HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0154]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物與有效量的HMG-CoA還原酶抑制劑
一起安排。
[0155]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀，優(yōu)選選自下組:西立伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(Pitavastatin)、羅蘇伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)或普伐他汀(provastatin),并且優(yōu)選為阿托伐他汀。
[0156]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述藥物組合物包含約0.05mg至約lOOmg、約0.5mg至約lOOmg、約5mg至約90mg、約10mg、約20mg、約40mg或約80mg的HMG-CoA還原酶抑制劑，并且優(yōu)選為約10、約20、約40或約80mg。
[0157]在本發(fā)明第一和其它方面的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，他汀是:
[0158]-介于0.05mg和2mg之間，優(yōu)選為0.2mg、0.4mg或0.8mg的量的西立伐他汀；
[0159]-介于2mg和IOOmg之間，優(yōu)選為10mg、20mg、40mg或80mg的量的阿托伐他?。?br> [0160]-介于2mg和IOOmg之間，5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的量的辛伐他??；
[0161]-介于0.2mg和IOOmg之間的量,優(yōu)選每日劑量為lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的匹伐他汀；
[0162]-介于2mg和IOOmg之間的量,優(yōu)選每日劑量為5mg、10mg、20mg或40mg的羅蘇伐他??；[0163]-介于2mg和IOOmg之間的量,優(yōu)選每日劑量為20mg、40mg或80mg的氟伐他??；
[0164]-介于2mg和IOOmg之間的量,優(yōu)選每日劑量為10mg、20mg、40mg或80mg的洛伐他汀；或
[0165]-介于2mg和IOOmg之間的量,優(yōu)選每日劑量為10mg、20mg、40mg或80mg的普伐他汀。
[0166]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物包含有效劑量的HMG-CoA還原酶抑制劑，用于通過每日一次施用降低LDL-D水平。
[0167]在本發(fā)明第I方面的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，他汀是:
[0168]-介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為0.2mg、0.4mg或0.8mg的西立伐他汀；
[0169]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為10mg、20mg、40mg或80mg的阿托伐他??；
[0170]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量，優(yōu)選每日劑量為5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的辛伐他??；
[0171]-介于0.2mg和IOOmg之間的每日劑量，優(yōu)選每H劑量為lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的匹伐他?。?br> [0172]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為5mg、10mg、20mg或40mg的羅蘇伐他??；
[0173]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為20mg、40mg或80mg的氟伐他?。?br> [0174]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為10mg、20mg、40mg或80mg的洛伐他?。换?br> [0175]-介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選每日劑量為10mg、20mg、40mg或80mg的
普伐他汀。
[0176]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段在對受試者如人或非人哺乳動(dòng)物施用時(shí)，具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征:
[0177]a.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)水平相對于給藥前水平降低至少約-25%至約-40%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-25%，更優(yōu)選至少-30%，特別在每兩周施用方案(每隔一周，E2W)中以約40至約60mg,優(yōu)選約45至約55mg且更優(yōu)選約50mg的劑量施用時(shí)；
[0178]b.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-50%至約-65%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約IOOmg E2W的劑量施用時(shí)；
[0179]c.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_60%至至少約_75%[例如至少約-60%、至少約-65%、至少約-70%或至少約-75%]及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-55%，更優(yōu)選至少_60%，特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)，
[0180]d.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約40%至約75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-35%，更優(yōu)選至少-40%，特別是在以約200mg E4W的劑量施用時(shí)；
[0181]e.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約300mg E4W的劑量施用時(shí)；
[0182]f.在對受試者施用后血清HDL膽固醇水平相對于給藥前水平升高至少2%、至少
2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%,特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)；
[0183]g.在對受試者施用后對肌鈣蛋白水平很少或沒有可測量的影響；
[0184]h.在對受試者施用后下列一項(xiàng)或多項(xiàng)升高:總膽固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-l 比率。
[0185]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段在對患有他汀抗性高膽固醇血癥的受試者施用時(shí)能夠克服他汀抗性。
[0186]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ IDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對或與其具有至少98%或99%同一性的基本上相同的序列的重鏈和輕鏈⑶R。
[0187]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ IDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對或與其具有至少98%或99%同一性的基本上相同的序列對。
[0188]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方`案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQIDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0189]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9 (SEQID NO:755)的第238位氨基酸殘基的表位。
[0190]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9 (SEQID NO:755)的第238、153、159和343位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的表位。
[0191]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合不包含hPCSK9 (SEQID NO:755)的第192、194、197和/或237位氨基酸殘基的表位。
[0192]可以依照如本領(lǐng)域中已知的，且具體地如本文中描述的任何藥學(xué)可應(yīng)用配制劑，如用于溶解的干配制劑或液體配制劑配制藥物組合物。合適的抗體配制劑是本領(lǐng)域中已知的，并且包括干配制劑(例如冷凍干燥的、噴霧干燥的或凍干的、無水的濃縮物)以及液體配制劑(例如溶液)。合適的他汀類配制劑也是本領(lǐng)域中公知的并且包括干配制劑以及液體配制劑，例如懸浮液、分散液和溶液(關(guān)于參考文獻(xiàn)，見例如“Statins therapy:a reviewon conventional and novel formulation approaches，，R.Tiwari 和 K.Pathak, Journalof Pharmacy and Pharmacology, 2011,其據(jù)此完整并入)。
[0193]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物以用于溶解的干配制劑包含抗體或其抗原結(jié)合片段，所述干配制劑如凍干粉末、冷凍干燥的或噴霧干燥的粉末、或無水濃縮物。
[0194]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物以液體配制劑包含所述抗體或其抗原結(jié)合片段，所述液體配制劑如注射或輸注溶液。
[0195]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物作為口服或經(jīng)口配制劑例如膠囊劑或片劑，或作為液體配制劑例如懸浮液、分散液或溶液包含HMG-CoA還原酶抑制劑，用于例如經(jīng)口施用、注射或輸注。
[0196]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述藥物組合物用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況或用于降低升高的總膽固醇或升高的LDL-C水平?？贵w或其片段，或HMG-CoA還原酶抑制劑的別的優(yōu)選的用途、劑量方案、施用方案，或要用藥物組合物治療的群體記載于本申請中，例如在第7、第11至13、或第18至19方面。
[0197]在第2方面，本發(fā)明關(guān)注如本文中描述的注射溶液，其包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段，并且優(yōu)選地，每Iml體積包含約40mg至約200mg或約50至約200mg,例如約40mg、約50mg、約75mg、約lOOmg、約150mg或約200mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0198]可注射制劑可以包含用于靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)和肌內(nèi)注射、點(diǎn)滴輸注等的劑量形式。這些可注射制劑可以通過公眾已知的方法制備。例如，可注射制劑可以通過例如將上文所述的抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化于常規(guī)用于注射的無菌水性介質(zhì)或油性介質(zhì)中制備。作為用于注射的水性介質(zhì)，有例如生理鹽水、含有葡萄糖和其它輔助劑的等張溶液等，其可以與合適的增溶劑如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子型表面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HC0-50(氫化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等組合使用。作為油性介質(zhì)，采用例如芝麻油、大豆油等，其可以與增溶劑如苯甲酸芐酯、苯甲醇等組合使用。優(yōu)選地，將如此制備的注射液在合適的安瓿中充滿?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的針和注射器皮下或靜脈內(nèi)投遞本發(fā)明的藥物組合物。另外，關(guān)于皮下投遞，筆型投遞裝置可容易地用于投遞本發(fā)明的藥物組合物。這類筆型投遞裝置可以是可再用的或一次性的?？稍儆玫墓P型投遞裝置一般利用含有藥物組合物的可替換藥筒。一旦已將藥筒內(nèi)所有藥物組合物施用并且藥筒為空的，可以容易地將空藥筒丟棄并用含有藥物組合物的新藥筒替換。然后，可以再度使用該筆型投遞裝置。在一次性的筆型投遞裝置中，沒有可替換的藥筒。取而代之的是，一次性筆型投遞裝置預(yù)先填充有置于裝置內(nèi)儲(chǔ)器中的藥物組合物。一旦儲(chǔ)器中沒有藥物組合物，那么丟棄整個(gè)裝置。
[0199]在第3方面，本 發(fā)明關(guān)注如本文中描述的干配制劑，其包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段，且優(yōu)選地每劑包含約40mg至約500mg、50至約500mg、約50至約400mg、約50至約 300mg 例如約 40mg、約 50mg、約 75mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg 或約 500mg,更優(yōu)選地約 50mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約250mg、約300mg,甚至更優(yōu)選地約150mg、約200mg或約300mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0200]合適的抗體配制劑一般是本領(lǐng)域中已知的并且包含干配制劑(例如冷凍干燥的、噴霧干燥的或凍干的、無水的濃縮物)以及液體配制劑(例如溶液)。合適的他汀類劑型是本領(lǐng)域中公知的并且包含干配制劑以及液體配制劑，例如懸浮液、分散液和溶液(關(guān)于參考文獻(xiàn)，見例如 “Statins therapy:a review on conventional and novel formulationapproaches，，R.Tiwari 和 K.Pathak, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2011,其據(jù)此完整并入)。
[0201]本發(fā)明的配制劑可以包含別的活性成分如本文中描述的HMG-CoA還原酶抑制劑。在本申請其它部分，例如在本發(fā)明的其它方面如第I和第4方面描述了依照本發(fā)明的配制劑的優(yōu)選實(shí)施方案。
[0202]依照第4方面，本發(fā)明關(guān)注特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，如在本發(fā)明的藥物組合物之一中包含的。[0203]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體在對受試者(優(yōu)選人或非人哺乳動(dòng)物)施用后以下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征為特征:
[0204]1.低密度脂蛋白(LDL-C)水平相對于給藥前水平降低至少約_25%至約-40%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平的至少-25%，更優(yōu)選至少-30%,特別是在以約40至約60mg,優(yōu)選以約45至約55mg且更優(yōu)選約50mg的劑量以兩周施用方案(每隔一周，E2W)施用時(shí)，
[0205]2.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-65%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約IOOmg E2W的劑量施用時(shí)，
[0206]2.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_60%至至少約-75%[例如至少約_60%、至少約-65%、至少約-70%或至少約-75%]及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_55%，更優(yōu)選至少-60%，特別是以約150mg E2W的劑量施用時(shí)，
[0207]3.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約40%至約75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-35%，更優(yōu)選至少_40%，特別是以約200mg E4W的劑量施用時(shí)，
[0208]4.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約300mg E4W的劑量施用時(shí)，
[0209]5.血清HDL膽固醇水平相對于給藥前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至 少5%或至少5.5%，特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)，
[0210]6.血清總膽固醇相對于給藥前水平降低至少約25%至約35%及在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低，
[0211]7.血清總膽固醇相對于給藥前水平降低至少約65%至約80%及在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低，
[0212]8.血清三酰甘油水平相對于給藥前水平降低至少約25%至約40%，
[0213]9.對肝功能很少或沒有可測量的影響，如通過ALT和AST測量測定的，
[0214]10.對肌鈣蛋白水平很少或沒有可測量的影響，
[0215]11.下列一項(xiàng)或多項(xiàng)升高:總膽固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1比率。
[0216]優(yōu)選地，若與HMG-CoA還原酶抑制劑治療組合施用，則依照本發(fā)明的抗體展現(xiàn)出上述特性?？梢载灤┍菊f明書找到要與本發(fā)明的抗體及其劑量和施用方案一起使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的優(yōu)選的實(shí)施方案，尤其如在涉及醫(yī)學(xué)用途和治療方法的方面中所描述的。
[0217]依照本發(fā)明抗體及其抗原結(jié)合片段，尤其是依照第4方面的抗體或抗原結(jié)合片段的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一或多項(xiàng)特征:
[0218](i)抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R。
[0219](ii)抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。
[0220](iii)抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0221]依照本發(fā)明抗體及其抗原結(jié)合片段，尤其是依照第4方面的抗體或抗原結(jié)合片段的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一或多項(xiàng)特征: [0222](i)克服哺乳動(dòng)物，尤其是嚙齒類如倉鼠中的他汀抗性
[0223](ii)哺乳動(dòng)物，尤其是嚙齒類如倉鼠中的LDLR表達(dá)升高
[0224](iii)嚙齒類如倉鼠中的血清LDL-C降低
[0225](iv)與HMG-CoA還原酶抑制劑施用一起的LDL-C協(xié)同降低，特別是在嚙齒類如倉鼠中，其中HMG-CoA還原酶抑制劑優(yōu)選是阿托伐他汀。
[0226]本發(fā)明的抗體，尤其是第4方面的抗體的別的合適特征和結(jié)構(gòu)特征以及可用于實(shí)踐本發(fā)明第15方面和其它方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0227]優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體如依照第4方面的抗體配制為如本領(lǐng)域中已知的，且具體地如本文中描述的藥學(xué)可應(yīng)用配制劑，如用于溶解的干配制劑或液體配制劑，例如如在第2或3方面所描述的。
[0228]在第5方面，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的抗體、其抗原結(jié)合片段或藥物組合物的單位劑量形式?？梢詮谋旧暾埖南鄳?yīng)部分，如第I至第4方面或從“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分得到要用于實(shí)踐本發(fā)明第5方面的抗體、藥物組合物或配制劑的合適的實(shí)施方案。
[0229]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述單位劑量形式包含約40mg、約50mg、約75mg、約lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg、或約 500mg 的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0230]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述單位劑量形式在氣密密封容器如管形瓶、安瓿或藥囊中以用于溶解的干配制劑包含抗體或其片段。
[0231]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述單位劑量形式在氣密密封容器如管形瓶、藥囊、預(yù)填充的注射器、預(yù)填充的自動(dòng)注射器或用于可再度使用的注射器或涂藥器的藥筒中以液體配制劑包含抗體或其片段。
[0232]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在所述氣密密封容器上指示活性成分的量。
[0233]如在本發(fā)明的不同方面和實(shí)施方案中，尤其是在第5方面中使用的，術(shù)語“單位劑量形式”指適合作為單一劑量用于人和動(dòng)物受試者的物理離散單元，每個(gè)單元含有與需要的藥用稀釋劑、載體或媒介物一起的計(jì)算為產(chǎn)生期望的治療效果的預(yù)定量的活性材料(例如約40mg或約50mg至約500mg的PCSK5抗體和/或例如0.05mg至IOOmg HMG-CoA還原酶抑制劑)。本發(fā)明的新穎單位劑量形式的規(guī)格由下列各項(xiàng)規(guī)定并直接依賴于下列各項(xiàng):(a)活性材料的獨(dú)特特征和要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，和(b)混合這類活性材料以在動(dòng)物或人中的治療性使用的本領(lǐng)域中固有的限制，如本說明書中公開的，這些是本發(fā)明的特征。依照本發(fā)明的合適單位劑量形式的例子是管形瓶、片劑、膠囊劑、錠劑、栓劑、粉末包、速溶片、扁囊劑、安瓿、前述任一項(xiàng)的分開的多重物以及如本文中描述的或本領(lǐng)域中一般已知的其它形式。
[0234]本發(fā)明的制品中可以包含抗體的一種或多種這類單位劑量形式，任選地還包含HMG-CoA還原酶抑制劑的一種或多種單位劑量形式(例如一板片劑，其包含HMG-CoA還原酶抑制劑作為活性成分)。
[0235]術(shù)語“活性材料”指任何具有治療活性的材料，如一種或多種活性成分。要用作治療劑的活性成分可以通過采用自身在本領(lǐng)域中可用且可以通過確立的規(guī)程制備的藥用材料以這類單位劑量形式容易地制備。本發(fā)明優(yōu)選的活性成分是抗體或其片段或HMG-CoA還原酶抑制劑如他汀。
[0236]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述單位劑量形式包含40-約500mg的本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述單位劑量形式包含約40mg、約50mg、約75mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg、或約500mg,更優(yōu)選地約150mg、約200mg或約300mg的抗體或其抗原結(jié)合片段。其它優(yōu)選的劑量和劑量方案如本申請中別處，如在第1、2或第15至19方面中所描述的。
[0237]依照另一個(gè)優(yōu)選的方面，所述單位劑量形式以用于溶解的干配制劑如凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物包含抗體、其抗原結(jié)合片段或藥物組合物。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述干配制劑包含在氣密密封的容器如管形瓶、安瓿或藥囊中。
[0238]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述單位劑量形式以液體配制劑，例如注射或輸注溶液包含抗體、其抗原結(jié)合片段或藥物組合物。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述液體配制劑包含在氣密密封的容器如管形瓶、藥囊、預(yù)填充的注射器、預(yù)填充的自動(dòng)注射器或用于可再使用的注射器或涂藥器的藥筒中。
[0239]還優(yōu)選在單位劑量形式的氣密密封容器上指示活性成分(例如抗體)的量。
[0240]以下制劑例示了本發(fā)明的單位劑量形式的制劑，且不作為其限制?？梢灾苽潴w現(xiàn)本發(fā)明的數(shù)種劑量形式。例如，每管形瓶的單位劑量可以含有0.5ml, lml, 2ml, 3ml, 4ml, 5ml，6ml, 7ml, 8ml, 9ml, 10ml, 15ml或20ml PCSK5抗體或其片段，其范圍為約40至約500mg或約50mg至約500mg的PCSK5抗體`。若必要的話，可以通過向每個(gè)管形瓶添加無菌稀釋劑將這些制劑調(diào)節(jié)至期望濃度。
[0241]在一個(gè)實(shí)施方案中，在單位劑量形式中分開地或混合在一起地提供本發(fā)明的組合物成分，例如以用于溶解的干配制劑或液體配制劑提供。制備蛋白質(zhì)性生物分子(如抗體或其抗原結(jié)合片段)或小分子化合物(如他汀類)的藥學(xué)可接受配制劑是本領(lǐng)域中一般已知的。另外，對于抗體的一些合適配制劑，參見“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分或本發(fā)明的第2或第3方面，對于小分子HMG-CoA還原酶抑制劑如他汀類，參見例如“Statinstherapy:a review on conventional and novel formulation approaches，，, r.Tiwari 和K.Pathak, Journal of Pharmacy and Pharmacology2011, p.983-998。依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，依照本發(fā)明的活性成分、活性材料或藥物組合物是用于液體溶解的干配制劑，如凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物，優(yōu)選包含在氣密密封容器如管形瓶、安瓿或藥囊中，并且優(yōu)選地其指示活性劑的量。在要通過輸注施用組合物的情況中，可以用含有無菌藥用級(jí)水或鹽水的輸注瓶將其分配。在通過注射施用組合物的情況下，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，從而可以在施用前混合所述成分。
[0242]本發(fā)明的配制劑包括可用于制造藥物組合物(例如，適用于對受試者或患者施用的組合物)的整裝藥物組合物，其可以在制備單位劑量形式中使用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是藥物組合物。這類組合物包含預(yù)防或治療有效量的一種或多種預(yù)防劑或治療劑(例如本發(fā)明的抗體或其它預(yù)防劑或治療劑)，以及藥學(xué)可接受載體。優(yōu)選地，將所述藥物組合物配制為適用于對受試者的施用路徑。
[0243]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”意指得到美國聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)或EMA (歐洲藥品局)批準(zhǔn)，或在美國藥典((美國藥典-33/國定配方集-28重新發(fā)行，由美國藥典委員會(huì)，Inc.,Rockville Md.出版，出版日期:2010年4月))或其它一般公認(rèn)的藥典中列出用于動(dòng)物，且更特別地用于人。
[0244]術(shù)語“載體”指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(完全和不完全的))、賦形劑或媒介物。這類藥用載體可以是無菌液體，如水和油，包括那些具有石油、動(dòng)物、植物或合成起源的，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)靜脈內(nèi)施用藥物組合物時(shí)，水是優(yōu)選的載體。還可以將鹽水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液體載體，特別是用于可注射溶液。合適的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、干燥的脫脂乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。若期望的話，所述組合物還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或PH緩沖劑。這些組合物可以采用溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉末、持續(xù)釋放配制劑等的形式。口服配制劑可以包含標(biāo)準(zhǔn)載體，如藥用級(jí)甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥用載體的例子記載于E.W.Martin的“Remington，s PharmaceuticalSciences”。這類組合物將含有與合適量載體一起的預(yù)防或治療有效量的抗體(優(yōu)選為純化的形式)，從而提供對患者適當(dāng)施用的形式。所述組合物還可以含有一或多種其它活性成分如HMG-CoA還原酶抑制劑。配制劑應(yīng)當(dāng)適合施用模式。
[0245]一般地，在單位劑量形式中分開地或混合在一起地提供本發(fā)明的組合物成分，例如以在指示活性劑量的氣密密封容器如安瓿或藥囊中的用于溶解的干配制劑如凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物提供。本發(fā)明組合物的成分還可以以在氣密密封容器如安瓿、藥囊、預(yù)填充的注射器或自動(dòng)注射器、或供可再度使用的注射器或涂藥器(例如筆或自動(dòng)注射器)用的藥筒中混合的液體配制劑(即注射或輸注溶液)提供。在要通過輸注施用組合物的情況下，可以用含 有無菌藥用級(jí)水或鹽水的輸注瓶來將其分配。在通過注射施用組合物的情況下，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，從而在施用前可以將成分混合。所述組合物還可以包含兩種或更多種各以不同或相同方式配制的活性成分，例如本發(fā)明的抗體以及本發(fā)明的HMG-CoA還原酶抑制劑的組合。
[0246]本發(fā)明還提供在指示抗體量的氣密密封容器，如安瓿或藥囊中包裝配制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含抗體的本發(fā)明配制劑以在氣密密封容器中的干無菌凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物供應(yīng)，并且可以用例如水或鹽水重建成適合于對受試者施用的濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含抗體的本發(fā)明配制劑以在氣密密封容器中的干無菌凍干粉末以至少40mg、至少50mg,更優(yōu)選至少75mg、至少lOOmg、至少150mg、至少200mg、至少250mg、至少300mg、至少350mg、至少400mg、至少450mg或至少500mg抗體或其抗原結(jié)合片段的單位劑量提供。包含抗體的本發(fā)明凍干配制劑應(yīng)當(dāng)于介于2和8°C之間在其最初的容器中貯存，并且應(yīng)當(dāng)在重建后12小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選6小時(shí)內(nèi)、5小時(shí)內(nèi)、3小時(shí)內(nèi)或I小時(shí)內(nèi)施用抗體。包含抗體的本發(fā)明配制劑可以配制為中性或鹽形式。藥學(xué)可接受鹽包括那些與陰離子，如自氫氯酸、磷酸、醋酸、草酸、酒石酸等衍生的陰離子形成的鹽，以及那些與陽離子，如自氫氧化鈉、鉀、銨、鈣、鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等衍生的陽離子形成的鹽。[0247]在第6方面，本發(fā)明關(guān)注包含本發(fā)明的藥物組合物、本發(fā)明的液體配制劑或本發(fā)明的干配制劑、本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、或本發(fā)明的一種或多種單位劑量形式和容器或包裝的制品。
[0248]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含在E2W、E4W或一月一次施用方案情況中對于2周(14天)、4周(28天)或I個(gè)月時(shí)段足夠的的抗體單位劑量形式。
[0249]所述制品可以包含一種或多種含有抗體和HMG CoA抑制劑兩者的單位劑量形式，例如包含包含這兩種活性成分的用于注射或輸注的液體配制劑的單位劑量形式。所述制品還可以包含在兩個(gè)或更多個(gè)分開的單位劑量形式中的抗體(或其抗原結(jié)合片段)和HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0250]依照一個(gè)實(shí)施方案，所述制品包含依照本發(fā)明的抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的一個(gè)或多個(gè)分開的單位劑量形式。
[0251]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，HMG-CoA還原酶抑制劑的每個(gè)單位劑量形式包含約0.05mg至約IOOmg HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0252]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀，優(yōu)選選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀，并且優(yōu)選阿托伐他汀。
[0253]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑例如他汀為用于每日一次施用的有效劑量。
[0254]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式包含約0.5至約lOOmg、約5至約90mg、約10、20、40或80mg的HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0255]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方`案，所述制品包含對于每日施用方案足夠的HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式。
[0256]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，包含抗體的單位劑量形式是藥囊、預(yù)填充的注射器、預(yù)填充的自動(dòng)注射器或用于可再用注射器或涂藥器的藥筒，特別地其包含Iml或2ml注射溶液。
[0257]依照另一個(gè)實(shí)施方案，所述制品包含下列一種或多種組分:
[0258]a.一種或多種包含本發(fā)明抗體的單位劑量形式；
[0259]b.一種或多種包含本發(fā)明的HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式；
[0260]c.使用說明書；
[0261]d.用于應(yīng)用抗體的裝置，如注射器。
[0262]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含對于下列各項(xiàng)足夠的抗體以及優(yōu)選地還有HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式:
[0263](a) 一次單次施用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑，例如包括安瓿、藥囊、管形瓶、藥筒或預(yù)填充的注射器，其包含約50mg、約lOOmg、約150mg、約200mg、約250mg、約300mg、約350mg、約400mg、約450mg或約500mg抗體，且優(yōu)選地約150mg抗體、約200mg抗體或約300mg抗體，以及例如用于口服或經(jīng)口施用的片劑或膠囊劑，其包含HMG、CoA抑制劑，例如包含約10mg、約20mg、約40mg或約80mg的HMG CoA抑制劑如阿托伐他汀。
[0264](b)用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的兩周(即14天)治療，例如包括安瓿、藥囊、管形瓶、藥筒或預(yù)填充的注射器，其包含約50mg、約lOOmg、約150mg、約200mg、約250mg、約300mg、約350mg、約400mg、約450mg或約500mg抗體，且優(yōu)選地約150mg抗體、約200mg抗體或約300mg抗體；以及對于14天治療足夠的包含HMG-CoA還原酶抑制劑的單元(例如片劑或膠囊劑，例如用于口服或經(jīng)口施用)，例如用于HMG-CoA還原酶抑制劑一日一次施用方案的14個(gè)單元或用于一日兩次施用方案的28個(gè)單元等，其中優(yōu)選地，每日HMG CoA抑制劑單元包含約10mg、約20mg、約40mg或約80mg的HMGCoA抑制劑如阿托伐他汀。在要以超過200mg的劑量施用抗體的情況下，共同構(gòu)成總劑量的兩個(gè)抗體單位劑量形式可以是優(yōu)選的(例如兩個(gè)各包含Iml液體配制劑中約150mg抗體的預(yù)填充的注射器，兩次射出中總共施用(例如皮下注射)約300mg抗體)，可以是優(yōu)選的(或用于總共施用約200mg抗體的兩個(gè)各具有約IOOmg的單元,用于總共施用約350抗體的兩個(gè)具有約175mg的單元等)。
[0265](c)用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的4周(即28天)治療，例如:
[0266]1.每兩周用約50至約200mg抗體的抗體E2W施用方案:包含兩個(gè)各具有約50mg、約lOOmg、約150mg或約200mg抗體或其抗原結(jié)合片段的單位劑量形式(例如如上文例示的)以及用于每日一日一次施用方案的28個(gè)單位劑量形式的HMG-CoA還原酶抑制劑(如上文例示的)或以及用于每日一日兩次施用方案的56個(gè)單位劑量形式的HMG-CoA還原酶抑制劑，優(yōu)選28個(gè)約10mg、約20mg、約40mg或約80mg阿托伐他汀的單位劑量形式(例如膠囊劑或片劑)
[0267]2.通過每4周(28天)施用約200mg的抗體或其片段的E4W施用方案:例如包含有約200mg抗體的I個(gè)抗體單位劑量形式(例如如上文例示的)以及28個(gè)或56個(gè),且優(yōu)選28個(gè)HMG-CoA還原酶抑制劑單位劑量形式(如上文例示的)
[0268]3.通過每4周(28天)超過200mg的抗體E4W施用方案:包含兩個(gè)共同構(gòu)成抗體總劑量的單位劑量形式(例如兩個(gè)預(yù)填充的注射器，其各包含Iml各具有150mg抗體的液體抗體配制劑)或包含一個(gè)單位劑量形式，其包含要施用的總抗體量(例如包含約300mg用于溶解的抗體的管形瓶， 或包含在液體配制劑中的約300mg抗體的管形瓶、藥筒或預(yù)填充的注射器(即約2ml液體配制劑，其中Iml液體配制劑包含約150mg抗體))；以及28個(gè)或56個(gè)，且優(yōu)選28個(gè)HMG-CoA還原酶抑制劑單位劑量形式(例如如上文例示的)
[0269](d)用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的一個(gè)月治療:包含與(C)下的例示相同數(shù)目的抗體單位劑量形式，用于每月施用一或兩次，例如對于一月一次施用在該月的每第I天或該月的每第I個(gè)星期一等，或例如對于一月兩次施用方案在該月的每第I天和第14或15天；另外，制品包含31個(gè)HMG-CoA還原酶抑制劑單位劑量形式，優(yōu)選在含有從月份天數(shù)1-31連續(xù)編號(hào)的泡罩中排列的片劑或膠囊劑(其中要放棄超出天數(shù)的多余片劑或膠囊劑)。
[0270]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含(a)包裝材料；(b)特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；和(C)在包裝材料中含有的標(biāo)簽或包裝插頁，其指示可以對接受用所述抗體或抗原結(jié)合片段治療的患者治療選自下組的疾病或狀況:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病。
[0271]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含(a)包裝材料；(b)特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；和(c)在包裝材料中含有的標(biāo)簽或包裝插頁，其指示與應(yīng)用HMGCo A抑制劑如他汀一起用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療患者。
[0272]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含(a)包裝材料；(b)特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；和(C)標(biāo)簽或包裝插頁，其指示用所述抗體或抗原結(jié)合片段以及HMG Co A抑制劑如他汀來治療患者對于屬于下列一組或多組的患者是禁忌的:(i)吸煙者；(ii) 70歲齡以上的個(gè)體；(iii)患有高血壓的個(gè)體；(iv)懷孕的女性；(V)試圖懷孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；(viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；(ix)飲用過量酒精的個(gè)體；(X)具有腎問題的個(gè)體；(xi)患有甲狀腺機(jī)能減退的個(gè)體；(xii)患有肌病癥的個(gè)體；(xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；(xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；(XV)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素或抗組胺劑)、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊、考來替泊)、鈣通道阻斷劑(例如維拉帕米、地爾硫卓)、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋)、華法林、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草；或(xvi)每日飲用超過0.1L葡萄柚汁或每天食用超過半個(gè)葡萄柚的個(gè)體；(xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；(XX)乙肝或丙肝呈陽性的個(gè)體；或(xxi)對單克隆抗體治療劑具有已知敏感性的個(gè)體；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒細(xì)胞濃度的個(gè)體；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板濃度的個(gè)體；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(XXV)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的個(gè)體；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的個(gè)體。
[0273]在第6方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是如在下文“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分規(guī)定的抗體或抗原結(jié)合片段。
[0274]依照本發(fā)明的不同方面和實(shí)施方案，尤其是關(guān)于本發(fā)明的不同制品的標(biāo)簽或包裝插頁可以是適合于在包裝或容器內(nèi)(松散的或附接于制品的另一組分，例如含有抗體和/或HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑 量形式的泡罩或管形瓶)、或包裝或容器外部上排列的任何種類的數(shù)據(jù)載體。優(yōu)選地，所述數(shù)據(jù)載體(即標(biāo)簽或芯片、條形碼或傳單或包含條形碼的標(biāo)簽等)包含信息如:
[0275](i)制品中含有的活性成分，即本發(fā)明的抗體或抗原片段、HMG-CoA還原酶抑制劑、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑的組成、配方、濃度和總量、身份
[0276](ii)制品中含有的單位劑量形式的數(shù)目和組成
[0277](iii)本發(fā)明的抗體或抗原片段、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑的適應(yīng)征、禁忌征
[0278](iv)在用本發(fā)明的抗體或抗原片段、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑治療方面指示或禁忌的受試者/患者或受試者/患者群體
[0279](V)使用、劑量方案和/或施用方案的用法說明書
[0280](vi)質(zhì)量信息，如關(guān)于本發(fā)明的抗體或抗原片段、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑的批/批次號(hào)、制造或裝配位置、或有效期限或最遲銷售日期的信息，
[0281](vii)關(guān)于正確貯存或操作本發(fā)明的制品、應(yīng)用裝置、或抗體或抗原片段、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑的信息，
[0282](iv)關(guān)于本發(fā)明的緩沖劑、稀釋劑、試劑、賦形劑、載體、抗體或抗原片段配制劑、藥物組合物、單位劑量形式或配制劑的組成的信息，
[0283](ix)關(guān)于在應(yīng)用不適當(dāng)?shù)膭┝炕蚴┯梅桨负?或在患者群體的禁忌適應(yīng)征中使用時(shí)可能的后果的警告。
[0284]在第6方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述標(biāo)簽或包裝插頁含有對依照第7、第11-13、第18或19方面的治療方法或醫(yī)學(xué)用途和如本文中描述的第I或第2方面的實(shí)施方案的提述。
[0285]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含(a)包裝材料；(b)特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；和(C)在包裝材料內(nèi)含有的標(biāo)簽或包裝插頁，其指示可以對接受用所述抗體或抗原結(jié)合片段治療的患者治療選自下組的疾病或狀況:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，并進(jìn)一步指示可以治療落入如在第18方面中敘述的一組或多組受試者中的受試者。
[0286]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述制品包含(a)包裝材料；(b)特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；和(C)在包裝材料內(nèi)含有的標(biāo)簽或包裝插頁，其指示可以對接受用所述抗體或抗原結(jié)合片段治療的患者治療選自下組的疾病或狀況:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，并且進(jìn)一步指示用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療患者對于屬于如在第19方面中敘述的一組或多組受試者中的患者是禁忌的。
[0287]在第6方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述標(biāo)簽或包裝插頁含有對依照如本文中描述的(例如依照第7、11-13、18或19方面的)醫(yī)學(xué)用途和治療方法，以及如本文中描述的其實(shí)施方案的提述。
[0288]依照第7方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的藥物組合物、抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。
[0289]依照第7方面的一個(gè)優(yōu)選`的實(shí)施方案，所述疾病或狀況選自下組:升高的總膽固醇水平、升高的低密度脂蛋白(LDL-C)水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、和動(dòng)脈粥樣硬化，特別是原發(fā)性高膽固醇血癥、家族性高膽固醇血癥或不受他汀類控制的高膽膽固
醇血癥。
[0290]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每隔一周(E2W)、每4周(E4W)、或一月一次地對受試者施用所述組合物、抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0291]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，與藥物組合物、抗體或其抗原結(jié)合片段一起共施用HMG-CoA還原酶抑制劑，優(yōu)選依照本發(fā)明不同方面之一，如依照第I或2方面的HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0292]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，一日一次地且優(yōu)選每日施用HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0293]在第2方面，本發(fā)明涉及特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶Aexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況，
[0294]其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以范圍為5mg至500mg的劑量量施用，
[0295]其中抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步用于與范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量的HMG-CoA還原酶抑制劑組合施用。
[0296]在本發(fā)明第7方面或其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用PCSK9拮抗劑緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。
[0297]在本發(fā)明第7方面和其它方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述疾病或狀況選自下組:升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平、高膽固醇血癥(尤其是不受他汀類控制的高膽固醇血癥)、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，尤其是原發(fā)性高膽固醇血癥如原發(fā)性家族性高膽固醇血癥或原發(fā)性非家族性高膽固醇血癥。
[0298]在本發(fā)明第7方面和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于指示進(jìn)行LDL血透的受試者、具有PCSK9激活突變的受試者、患有雜合家族性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥且不受他汀控制的受試者、有形成高膽固醇血癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者、患有高膽固醇血癥的受試者、患有高脂血癥的受試者、患有血脂障礙的受試者、患有動(dòng)脈粥樣硬化的受試者或患有心血管疾病的受試者施用。最優(yōu)選地，所述受試者是人受試者。
[0299]在本發(fā)明第7方面和其它方面的一些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于與HMG-CoA還原酶抑制劑組合施用，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日三次、每日兩次或每日一次施用。在本發(fā)明第2方面和其它方面的一些實(shí)施方案中,所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用。在本發(fā)明第2方面和其它方面的一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每周、每隔I周、每3周或每4周施用。在本發(fā)明第2方面和其它方面的一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要在上午、中午或晚上施用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日一次施用，優(yōu)選為口服，優(yōu)選在晚上施用。
[0300]在本發(fā)明第7方面和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。更優(yōu)選地，他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0301]在本發(fā)明第7方 面和其它方面的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，他汀是:
[0302]-要以介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日劑量施用的西立伐他??；
[0303]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的阿托伐他汀；
[0304]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的
每日劑量施用的辛伐他汀；
[0305]-要以介于0.2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的
每日劑量施用的匹伐他汀；
[0306]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg或40mg的每日劑量施用的羅蘇伐他??；
[0307]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的氟伐他汀；
[0308]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的洛伐他??；或
[0309]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日
劑量施用的普伐他汀。[0310]在本發(fā)明第7方面和其它方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于每隔I周、每4周或一月一次地對受試者施用。就患者依從性而言優(yōu)選每4周施用或一月一次施用。就非常低的血液膽固醇水平變化而言優(yōu)選每隔I周施用。其它適用于施用抗體或其抗原結(jié)合片段的時(shí)間日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0311]在本發(fā)明第7和其它方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以范圍為約40mg至約500mg、或約50mg至約500mg、或約50mg至約400mg、或約50mg至約300mg、或約IOOmg至約300mg、或約IOOmg至約200mg的劑量量施用。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以約50mg、約lOOmg、約150mg、約200mg、約250mg、約300mg、約350或約400mg的劑量量施用。
[0312]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段每隔一周(E2W)、每4周(E4W)或一月一次地受試者施用。
[0313]在本發(fā)明第7方面和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以范圍為每隔一周(E2W)約50mg至約200mg，優(yōu)選地約50mgE2W、約IOOmg E2W、約150mg E2W、約200mg E2W、約250mg E2W或約300mg E2W的劑量量(即劑量方案)施用，其中甚至更優(yōu)選約50mg E2W、約IOOmg E2W、約150mg E2W、約200mg E2W的劑量量。依照本發(fā)明第2方面和其它方面的特別有利的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以約50mg至約200mg、約IOOmg至約180mg、約130mg至約170mg、約140至約160mg或約90、約100、約110、約 120、約 130、約 140、約 145、約 150、約 155、約 160、約 170、約 180、約 190 或約 200mgE2W的劑量量(即劑量方案)施用，其中約145mg至約155mg E2W且尤其是約150mg E2W的劑量方案屬于特別優(yōu)選的實(shí)施方案。
[0314]在本發(fā)明第7方面和其它方面的其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以范圍為每4周(E4W)約IOOmg至約400mg，優(yōu)選地約IOOmg E4W、約150mg E4W、約 200mg E4W、約 250mg E4W、約 300mg E4W、約 350mg E4W 或約 400mg E4W 的劑量量施用，其中約 190 至約 3IOmg E4W、約 200 至約 300mg E4W、約 190 至約 210E4W、約 195 至約 205E4W、約290至約310E4W、約295至約305E4W、約200mg E4W或約300mg E4W的劑量量屬于特別優(yōu)選的實(shí)施方案。在E4W施用方面指示的這些劑量量也適用于一月一次施用。
[0315]第7方面進(jìn)一步涉及特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以約50至500mg的劑量施用。
[0316]可用于實(shí)踐本發(fā)明第16方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。本發(fā)明第7方面的優(yōu)選實(shí)施方案記載于第4方面。
[0317]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于以約50，100，150，200，250，300，350，400，450 或 500mg 的劑量，且優(yōu)選以約 150,200 或 300mg 的劑量施用。
[0318]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況選自下組:升高的總膽固醇水平、升高的低密度脂蛋白(LDL-C)水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化，尤其是原發(fā)性高膽固醇血癥、家族性高膽固醇血癥或不受他汀類控制的高膽固
醇血癥。[0319]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征:
[0320]⑴用于將低密度脂蛋白(LDL-C)水平相對于給藥前水平降低至少約-25%至約-40%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-25%，更優(yōu)選至少_30%，其中優(yōu)選以約40至約60mg，約45至約55mg或約50mg的劑量E2W的劑量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段， [0321](ii)用于將低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-50%至約-65%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_40%，更優(yōu)選至少_45%，其中優(yōu)選以約IOOmg E2W的劑量施用所述抗體或其片段，
[0322](iii)用于將低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_60%至至少約_75%[例如至少約-60%、至少約-65%、至少約-70%或至少約_75%]及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_55%，更優(yōu)選至少-60%，其中優(yōu)選以約150mg E2W的劑量施用所述抗體或其片段，
[0323](iv)用于將低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約40%至約75%及在至少28天的時(shí)段內(nèi)持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-35%，更優(yōu)選至少_40%，其中優(yōu)選以約200mg E4W的劑量施用所述抗體或其片段，
[0324](V)用于將低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-75%及在至少28天的時(shí)段內(nèi)持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_40%，更優(yōu)選至少_45%，其中優(yōu)選以約300mg E4W的劑量施用所述抗體或其片段，
[0325](vi)用于將血清HDL膽固醇水平相對于給藥前水平提高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%,
[0326](vii)用于將血清總膽固醇相對于給藥前水平降低至少約25%至約35%及在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低，
[0327](viii)用于將血清總膽固醇相對于給藥前水平降低至少約65%至約80%及在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低，
[0328]12.用于將血清三酯甘油水平相對于給藥前水平降低至少約25%至約40%，
[0329]13.對肝功能(如通過ALT和AST測量測定的)或?qū)♀}蛋白水平具有很少或沒有可測量影響，
[0330]14.用于提高下列一項(xiàng)或多項(xiàng):總膽固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1 比率。
[0331]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于與HMG-CoA還原酶抑制劑一起使用，其中優(yōu)選地以范圍為0.05mg至約IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑并且優(yōu)選為他汀，其中優(yōu)選地他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀。
[0332]依照第7方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，依照下列一劑或多劑或施用方案施用他汀:
[0333](i)每日一次施用他汀，
[0334](ii)以約0.5至約lOOmg、約5至約90mg、約10、20、40或80mg的劑量施用他汀，并且優(yōu)選阿托伐他汀。[0335]在本發(fā)明其它方面，并且優(yōu)選地在第11方面描述了所述抗體、其抗原片段或HMG-CoA還原酶抑制劑的別的劑量和施用方案。
[0336]依照第7方面的又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及特異性hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況，
[0337]其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于對至少落入下列一組受試者中的受試者施用:(i)具有至少100mg/dL,優(yōu)選至少130mg/dL、更優(yōu)選至少160mg/dL、甚至更優(yōu)選至少200mg/dL的血清LDL膽固醇(LDL-C)水平的受試者；(ii)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受試者；(iii)具有至少200mg/dL,優(yōu)選至少240mg/dL的血清膽固醇水平的受試者；(iv)具有至少150mg/dL,例如至少200mg/dL或至少500mg/dL的血清三酰甘油水平的受試者，其中在禁食至少8小時(shí)后測定所述三酰甘油水平；(V)至少35歲齡，例如至少40歲齡、至少45歲齡、至少50歲齡、至少55歲齡、至少60歲齡、至少65歲齡或至少75歲齡的受試者；(vi)比75歲年紀(jì)小，例如比70歲年紀(jì)小、比65歲年紀(jì)小、比60歲年紀(jì)小、比55歲年紀(jì)小、比50歲年紀(jì)小、比45歲年紀(jì)小或比40歲年紀(jì)小的受試者；(vii)具有25或更多(例如26或更多、27或更多、28或更多、29或更多、30或更多、31或更多、32或更多、33或更多、34或更多、35或更多、36或更多、37或更多、38或更多、或39或更多)的BMI的受試者；(viii)男性受試者；(ix)女性受試者；(X)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少30mg/dL、優(yōu)選至少40mg/dL、更優(yōu)選至少50mg/dL、更優(yōu)選至少60mg/dL、更優(yōu)選至少70mg/dL的受試者；或(xi)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少20%、優(yōu)選至少30%、更優(yōu)選至少40%、更優(yōu)選至少50%、更優(yōu)選至少60%的受試者。
[0338]在第7方面的又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kex in型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況，
[0339]其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于對不落入下列一組或多組受試者中的受試者施用:(i)吸煙者；(ii)70歲齡以上的個(gè)體；(iii)患有高血壓的個(gè)體；(iv)懷孕的女性；(V)試圖懷孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；
(viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；(ix)飲用過量酒精的個(gè)體；(X)具有腎問題的個(gè)體；(xi)患有甲狀腺機(jī)能減退的個(gè)體；(xii)患有肌病癥的個(gè)體；(xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；(xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；(xv)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素或抗組胺劑)、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊、考來替泊)、鈣通道阻斷劑(例如維拉帕米、地爾硫卓)、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋)、華法林、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草；或(xvi)每日飲用超過0.1L葡萄柚汁或每天食用超過半個(gè)葡萄柚的個(gè)體；(xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；(XX)乙肝或丙肝呈陽性的個(gè)體；或(xxi)對單克隆抗體治療劑具有已知敏感性的個(gè)體；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒細(xì)胞濃度的個(gè)體；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板濃度的個(gè)體；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(xxv)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的個(gè)體；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的個(gè)體。
[0340]在第7方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用PCSK9拮抗劑緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。
[0341]在第7方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況選自下組:升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，或任何其它在第I或第2方面中描述的疾病和狀況。
[0342]在優(yōu)選的第7方面中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于對下列受試者施用:指示進(jìn)行LDL血透的受試者、具有PCSK9激活突變的受試者、患有雜合家族性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥的受試者(例如患有原發(fā)性家族性或原發(fā)性非家族性高膽固醇血癥的受試者)、患有高膽固醇血癥如原發(fā)性高膽固醇血癥且不受他汀控制的受試者、有形成高膽固醇血癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者、患有高膽固醇血癥的受試者、患有高脂血癥的受試者、患有血脂障礙的受試者、患有動(dòng)脈粥樣硬化的受試者或患有心血管疾病的受試者或任何其它如第I或第2方面中描述的受試者。最優(yōu)選地，所述受試者是人受試者。
[0343]在第7方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于與劑量為0.05mg至IOOmg的HMG-CoA還原酶抑制劑組合施用。在一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日三次、每日兩次或每日一次施用。在一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用。在一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每周、每隔I周、每3周或每4周施用。在一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要在上午、中午或晚上施用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑要每日一次，優(yōu)選口服，優(yōu)選在晚上施用。優(yōu)選地，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。更優(yōu)選地，所述他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀`和普伐他汀。在第16至第18方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段用于與他汀組合施用，其中所述他汀是:
[0344]-要以介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日劑量施用的西立伐他??；
[0345]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的阿托伐他??；
[0346]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的
每日劑量施用的辛伐他汀；
[0347]-要以介于0.2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的
每日劑量施用的匹伐他?。?br> [0348]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg或40mg的每日劑量施用的羅蘇伐他?。?br> [0349]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的氟伐他汀；
[0350]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的洛伐他??；或
[0351]-要以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日
劑量施用的普伐他汀。
[0352]在第8方面中，本發(fā)明涉及用于制備本發(fā)明的藥物組合物，例如依照第I方面的藥物組合物的方法，包括將抗體或其抗原結(jié)合片段以及任選地HMG-CoA還原酶抑制劑與一種或多種藥用賦形劑或載體混合。
[0353]技術(shù)人員知曉如何制備本發(fā)明的組合物。此外，在本說明書中別處給出參考文獻(xiàn)。
[0354]在第9方面，本發(fā)明關(guān)注用于制備本發(fā)明(例如第5方面)的單位劑量形式的方法，其包括分配一定量的包含一劑或多劑抗體或其抗原結(jié)合片段以及任選地一劑或多劑所述HMG-CoA還原酶抑制劑的依照本發(fā)明的液體配制劑或干配制劑、藥物組合物、抗體或其抗原結(jié)合片段，并將它們改編為適合作為人和/或動(dòng)物受試者的單一劑量的物理離散單
J Li ο
[0355]在第10方面，本發(fā)明關(guān)注用于制備或裝配本發(fā)明的制品的方法，包括在容器中包裝本發(fā)明的藥物組合物、抗體、液體配制劑、干配制劑或一種或多種單位劑量形式，任選地以及下列一項(xiàng)或多項(xiàng):標(biāo)簽、使用說明書、應(yīng)用裝置(例如注射器)。
[0356]在第11方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0357]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9) 的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0358]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中優(yōu)選以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0359]在本申請的上下文中，術(shù)語“PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況”理解為包括應(yīng)用PCSK-9抗體引起影響的任何疾病或狀況。
[0360]在本發(fā)明的第11和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用PCSK9拮抗劑緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。
[0361]在本發(fā)明的第11和其它方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述疾病或狀況選自下組:升高的總膽固醇水平、升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平、高膽固醇血癥(特別是不受他汀類控制的高膽固醇血癥)、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、原發(fā)性高膽固醇血癥(如原發(fā)性家族性高膽固醇血癥或原發(fā)性非家族性高膽固醇血癥)、不受他汀類控制(特別是不受阿托伐他汀控制)的高膽固醇血癥(尤其是原發(fā)性高膽固醇血癥)。
[0362]在本發(fā)明的第11和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，有此需要的受試者是指示進(jìn)行LDL血透的受試者、具有PCSK9激活突變的受試者、患有雜合家族性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥且不受他汀控制的受試者、有形成高膽固醇血癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者、患有高膽固醇血癥的受試者、患有高脂血癥的受試者、患有血脂障礙的受試者、患有動(dòng)脈粥樣硬化的受試者或患有心血管疾病的受試者。最優(yōu)選地,有此需要的受試者是人受試者。
[0363]在本發(fā)明的第11和其它方面的一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑每日三次、每日兩次或每日一次施用。在本發(fā)明的第I和其它方面的一些實(shí)施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在本發(fā)明的第I和其它方面的一些實(shí)施方案中，每周、每隔I周、每3周或每4周施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在本發(fā)明的第I和其它方面的一些實(shí)施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每日一次，優(yōu)選口服，優(yōu)選在晚上施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0364]優(yōu)選地，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。更優(yōu)選地，所述他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0365]在本發(fā)明的第I和其它方面的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，他汀為:
[0366]-以介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日劑量施用的西立伐他?。?br> [0367]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的阿托伐他??；
[0368]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的辛伐他??；
[0369]-以介于0.2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每
日劑量施用的匹伐他??；
[0370]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg或40mg的每日劑量施用的羅蘇伐他??；
[0371]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的氟伐他汀；
[0372]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的洛伐他汀；或
[0373]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑
量施用的普伐他汀。
[0374]在本發(fā)明的第11和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，每隔I周、每4周或一月一次對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。就患者依從性而言優(yōu)選每4周施用或一月一次施用(即每日歷月一次，例如該月的每第一天、第二天等，或每個(gè)月的每第一、第二、第三個(gè)周一、周二等，其與每4周施用形成對比)。就非常低的血液膽固醇水平變化而言優(yōu)選每隔I周施用。其它適用于施用抗體或其抗原結(jié)合片段的的時(shí)間日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0375]在本發(fā)明的第11和其它方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，以范圍為例如約40mg至約500mg、約50mg至約500mg、約50mg至300mg、或約IOOmg至200mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，以約50mg、約lOOmg、約150mg、約200mg、約250mg、約300mg、約350mg、約400mg、約450mg或約500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。約50至約200mg,例如約50mg、約lOOmg、約150mg或約200mg的劑量特別適用于每兩周的劑量方案(即每隔一周應(yīng)用)，約150mg至約400mg,例如約150mg、約200mg、約250mg、約300mg、約350mg或約400mg的劑量尤其適用于具有更長時(shí)間間隔的施用方案，例如每3周或每4周或一月一次施用。
[0376]可以用于實(shí)踐本發(fā)明的第I和其它方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分或第4方面及其實(shí)施方案中。
[0377]在第12方面，本發(fā)明涉及測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或依照本發(fā)明第I或第2方面的任何其它狀況或疾病，所述方法包括:
[0378]用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選擇的患者群體，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平；并
[0379]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平來測定所述抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的。
[0380]在第13方面，本發(fā)明涉及一種測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或依照本發(fā)明第I或第2方面的任何其它狀況或疾病，所述方法包括:
[0381]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平測定已經(jīng)用于用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定患者群體的抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的。
[0382]在第12和第13方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述群體中的每位患者在用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療前已通過施用HMG CoA抑制劑如他汀達(dá)至少6周接受降脂治療。
[0383]在第12和第13方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是如在下文“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分規(guī)定的抗體或抗原結(jié)合片段。
[0384]在第12和第13方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用依照第I方面和第I或第2方面的實(shí)施方案的治療方法治療所選患者群體，如本文中描述的。
[0385]在第14方面，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段和標(biāo)簽的包裝。
[0386]依照一個(gè)實(shí)施方案，所述標(biāo)簽是含有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)的數(shù)據(jù)載體:印刷的聲明、芯片或條形碼。
[0387]依照第14方面的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述標(biāo)簽包含或者是數(shù)據(jù)載體(例如印刷的聲明、芯片或條形碼)，其告知患者在一種或多種選自下組的適應(yīng)征中指示與HMG-CoA還原酶抑制劑如他汀一起的抗體治療:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或依照本發(fā)明第I或第2方面的任何其它狀況或疾病?？捎糜趯?shí)踐本發(fā)明第8方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0388]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述標(biāo)簽包含或者是數(shù)據(jù)載體(例如印刷的聲明、芯片或條形碼)，其告知患者與他汀一起的抗體治療對于屬于下列一或多組的患者是禁忌的:(i)吸煙者；(ii) 70歲齡以上的個(gè)體；(iii)患有高血壓的個(gè)體；(iv)懷孕的女性；(V)試圖懷孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；(viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；(ix)飲用過量酒精的個(gè)體；(X)具有腎問題的個(gè)體；(xi)患有甲狀腺機(jī)能減退的個(gè)體；(xii)患有肌病癥的個(gè)體；(xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；(xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；(xv)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素或抗組胺劑)、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊、考來替泊)、鈣通道阻斷劑(例如維拉帕米、地爾硫卓)、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋)、華法林、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草；或(xvi)每日飲用超過0.1L葡萄柚汁或每天食用超過半個(gè)葡萄柚的個(gè)體；(xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；(xx)乙肝或丙肝呈陽性的個(gè)體；或(xxi)對單克隆抗體治療劑具有已知敏感性的個(gè)體；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒細(xì)胞濃度的個(gè)體；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板濃度的個(gè)體；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(xxv)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的個(gè)體；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的個(gè)體?？捎糜趯?shí)踐本發(fā)明第14方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0389]在第15方面，本發(fā)明涉及一種調(diào)節(jié)血液中LDL水平的方法，包括:
[0390]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0391]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還`原酶抑制劑。
[0392]在第16方面，本發(fā)明涉及預(yù)防血液中(持久)升高的LDL水平的效應(yīng)的方法，其包括:
[0393]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段,其中以范圍為5mg至500mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，并
[0394]對所述受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑，其中以范圍為0.05mg至IOOmg的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0395]在第15和第16方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用拮抗劑緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。在第10和第11方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況選自下組:升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或任何其它依照本發(fā)明第11、18或19方面的狀況或疾病。
[0396]在第15和第16方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述有此需要的受試者是指示進(jìn)行LDL血透的受試者、具有PCSK9激活突變的受試者、患有雜合家族性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥且不受他汀控制的受試者、有形成高膽固醇血癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者、患有高膽固醇血癥的受試者、患有高脂血癥的受試者、患有血脂障礙的受試者、患有動(dòng)脈粥樣硬化的受試者或患有心血管疾病的受試者、或任何如本發(fā)明第11、18或19方面描述的受試者。最優(yōu)選地，所述有此需要的受試者是人受試者。
[0397]在第15和第16方面的一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑每日三次、每日兩次或每日一次施用。在一些實(shí)施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，每周、每隔I周、每3周、每4周或每月施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每日一次地施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑，優(yōu)選口服，優(yōu)選在晚上。別的合適的施用方案記載于第I或第2方面。
[0398]在第15和第16方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。更優(yōu)選地，他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0399]在第10和第11方面的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，他汀是:
[0400]-以介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日劑
量施用的西立伐他汀；
[0401]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的阿托伐他?。?br> [0402]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的辛伐他??；
[0403]-以介于0.2mg和IOOmg之 間的每日劑量,優(yōu)選以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每
日劑量施用的匹伐他??；
[0404]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg或40mg的每日劑量施用的羅蘇伐他??；
[0405]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的氟伐他汀；
[0406]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的洛伐他?。换?br> [0407]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑
量施用的普伐他汀。
[0408]在第15和第16方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，每隔I周、每4周或一月一次地對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。就患者依從性而言優(yōu)選每4周或每月施用。就非常低的血液膽固醇水平變化而言優(yōu)選每隔I周施用。其它適用于施用抗體或其抗原結(jié)合片段的時(shí)間日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0409]在第15和第16方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，以范圍為50mg至300mg，例如IOOmg至200mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，以約50mg、約lOOmg、約150mg、約200mg或約300mg的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。在本說明書中別處，例如在第11方面中描述了別的合適的且優(yōu)選的劑量方案。
[0410]可用于實(shí)踐本發(fā)明第10和11方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0411]在第17方面，本發(fā)明涉及一種測定藥物化合物是否可用于緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9活性或表達(dá)具有影響的疾病或狀況的方法，包括:(a)對受試者施用特異性結(jié)合PCSK9的化合物，優(yōu)選為特異性結(jié)合PCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段，并(b)測定血液中多少分?jǐn)?shù)的PCSK9附接于來自(a)的化合物。
[0412]通常，在以化學(xué)計(jì)量量使用時(shí)特異性結(jié)合血液中存在的10%至100%(優(yōu)選20%至100%，更優(yōu)選30%至100%，更優(yōu)選40%至100%，更優(yōu)選50%至100%)的PCSK9的化合物會(huì)可用于緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9活性或表達(dá)具有影響的疾病或狀況。
[0413]優(yōu)選地，PCSK9活性或表達(dá)具有影響的疾病或狀況選自下組:升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或本文中(如在第11方面)描述的任何其它疾病。
[0414]可用于實(shí)踐本發(fā)明第12方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0415]在第18方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0416]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，
[0417]其中所述有此需要的受試者落入下列一組或多組受試者中:(i)具有至少IOOmg/dL,優(yōu)選至少130mg/dL,更優(yōu)選至少160mg/dL,甚至更優(yōu)選至少200mg/dL的血清LDL膽固醇(LDL-C)水平的受試者；(ii)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受試者；(iii)具有至少200mg/dL,優(yōu)選至少240 mg/dL的血清膽固醇水平的受試者；(iv)具有至少150mg/dL，例如至少200mg/dL或至少500mg/dL的血清三酰甘油水平的受試者，其中在禁食至少8小時(shí)后測定所述三酰甘油水平；(V)至少35歲齡，例如至少40歲齡、至少45歲齡、至少50歲齡、至少55歲齡、至少60歲齡、至少65歲齡或至少75歲齡的受試者；(vi)比75歲年紀(jì)小，例如比70歲年紀(jì)小、比65歲年紀(jì)小、比60歲年紀(jì)小、比55歲年紀(jì)小、比50歲年紀(jì)小、比45歲年紀(jì)小或比40歲年紀(jì)小的受試者；(vii)具有25或更多(例如26或更多、27或更多、28或更多、29或更多、30或更多、31或更多、32或更多、33或更多、34或更多、35或更多、36或更多、37或更多、38或更多、或39或更多)的BMI的受試者；(viii)男性受試者；
(ix)女性受試者；(X)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少30mg/dL,優(yōu)選至少40mg/dL,更優(yōu)選至少50mg/dL,更優(yōu)選至少60mg/dL,更優(yōu)選至少70mg/dL的受試者；或(xi)施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)致血清LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少20%，優(yōu)選至少30%，更優(yōu)選至少40%，更優(yōu)選至少50%，更優(yōu)選至少60%的受試者。
[0418]在第19方面，本發(fā)明涉及用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況的方法，包括:
[0419]對有此需要的受試者施用治療量的特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，
[0420]其中所述有此需要的受試者不落入下列一組或多組受試者中:(i)吸煙者；(ii) 70歲齡以上的個(gè)體；(iii)患有高血壓的個(gè)體；(iv)懷孕的女性；(v)試圖懷孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；(viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；(ix)飲用過量酒精的個(gè)體；(X)具有腎問題的個(gè)體；(xi)患有甲狀腺機(jī)能減退的個(gè)體；(xii)患有肌病癥的個(gè)體；(xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；(xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；(xv)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素或抗組胺劑)、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊、考來替泊)、鈣通道阻斷劑(例如維拉帕米、地爾硫卓)、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋)、華法林、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草；或(xvi)每日飲用超過0.1L葡萄柚汁或每天食用超過半個(gè)葡萄柚的個(gè)體；(xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；(xx)乙肝或丙肝呈陽性的個(gè)體；或(xxi)對單克隆抗體治療劑具有已知敏感性的個(gè)體；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒細(xì)胞濃度的個(gè)體；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板濃度的個(gè)體；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(xxv)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的個(gè)體；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的個(gè)體。
[0421]在第18和第19方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用PCSK9拮抗劑緩解、改善、抑制或預(yù)防PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況。
[0422]在第13和第14方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況選自下組:升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病或本發(fā)明其它方面，如第11方面中描述的任何其它疾病或狀況。
[0423]在第13和第14方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述有此需要的受試者是指示進(jìn)行LDL血透的受試者、具有PCSK9激活突變的受試者、患有雜合家族性高膽固醇血癥的受試者、患有原發(fā)性高膽固醇血癥的受試者(例如患有原發(fā)性家族性或原發(fā)性非家族性高膽固醇血癥的受試者)、患有高膽固醇血癥如原發(fā)性高膽固醇血癥且不受他汀控制的受試者、有形成高膽固醇血癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者、患有`高膽固醇血癥的受試者、患有高脂血癥的受試者、患有血脂障礙的受試者、患有動(dòng)脈粥樣硬化的受試者或患有心血管疾病的受試者、或任何其它在第I或第2方面中描述的受試者。最優(yōu)選地，所述有此需要的受試者是人受試者。別的優(yōu)選的或合適的受試者記載于本發(fā)明的其它方面如第18或19方面。
[0424]可用于實(shí)踐本發(fā)明第13和14方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。
[0425]在第18和第19方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括:以0.05mg至IOOmg的劑量對受試者施用治療量的HMG-CoA還原酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑每日三次、每日兩次或每日一次施用。在一些實(shí)施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，每周、每隔I周、每3周或每4周施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每日一次地施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑，優(yōu)選口服，優(yōu)選在晚上。優(yōu)選地，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。更優(yōu)選地，所述他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。在第13和第14方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法包括對受試者施用治療量的他汀，其中所述他汀是:
[0426]-以介于0.05mg和2mg之間的每日劑量,優(yōu)選以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日劑量施用的西立伐他?。?br> [0427]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的阿托伐他??；
[0428]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的辛伐他?。?br> [0429]-以介于0.2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每
日劑量施用的匹伐他?。?br> [0430]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以5mg、10mg、20mg或40mg的每日劑量施用的羅蘇伐他??；
[0431]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的氟伐他??；
[0432]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑量施用的洛伐他?。换?br> [0433]-以介于2mg和IOOmg之間的每日劑量,優(yōu)選以10mg、20mg、40mg或80mg的每日劑
量施用的普伐他汀。
[0434]本發(fā)明的別的優(yōu)選的實(shí)施方案將如本文中描述的第18和19方面的特征組合。
[0435]在第20方面，本發(fā)明涉及一種測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法:升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病、或第I或第2方面所描述的任何其它疾病或狀況，所述方法包括:
[0436]用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定的患者群體，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平；并
[0437]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平測定所述抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的；
[0438]其中每位患者落入如第13方面所敘述的一組或多組受試者中。
[0439]在第21方面，本發(fā)明涉及一種測試特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段用于治療選自下組的疾病或狀況的功效的方法(或如第I或第2方面所描述的任何其它方法):升高的LDL-C水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0440]通過測定施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段之前和之后所述患者群體中的LDL-C水平測定已經(jīng)用于用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療選定患者群體的抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中所述群體中的每位患者具有超過100mg/dL的LDL膽固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群體中LDL-C水平相對于給藥前水平降低至少25%指示所述抗體或其抗原結(jié)合片段對于治療所述患者群體中的所述疾病或狀況是有效的；[0441]其中每位患者落入如第13方面所敘述的一組或多組受試者中。
[0442]在第20和第21方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述群體中的每位患者在用所述抗體或其抗原結(jié)合片段治療前已經(jīng)通過施用HMG CoA抑制劑如他汀達(dá)至少6周接受降脂治療。
[0443]可用于實(shí)踐本發(fā)明第19和20方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分或本申請中描述本發(fā)明抗體的其它部分，如例如第4方面中。
[0444]在第20和第21方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，用或已經(jīng)用依照如本文中描述的第11、18或19方面的治療方法及其實(shí)施方案的治療方法治療選定的患者群體。 [0445]在第20和第21方面的別的優(yōu)選的實(shí)施方案中，對所述選定的患者群體的亞組測定所述抗體或其抗原結(jié)合片段的功效，其中所述亞組已經(jīng)通過至少一種選自下組的分層因子分層:患有雜合家族性高膽固醇血癥(heFH)的群體；先前的心肌梗死(MI)史；先前的中風(fēng)史；接受高強(qiáng)度他汀療法；和患者的地理區(qū)域(例如北美、西歐、東歐和世界的剩余部分)。
[0446]在倉鼠和其它嚙齒類中，他汀類對從血液清除LDL不是有效的。更具體地，單獨(dú)施用他汀類(例如阿托伐他汀)對倉鼠或其它嚙齒類中LDL受體(LDLR)的表達(dá)無影響，推測起來是由于內(nèi)源PCSK9的活性。本申請中含有的實(shí)驗(yàn)(參見研究4)顯示通過施用抗PCSK9抗體抑制PCSK9使得嚙齒類(例如倉鼠)對他汀治療敏感。因而，本申請?zhí)峁┝擞糜跍y試降低膽固醇水平的他汀類或其它藥物的功效的新動(dòng)物模型。
[0447]如此，在第22方面，本發(fā)明涉及一種用于測試化合物在降低受試者的膽固醇水平中的功效的方法，包括下列步驟:
[0448](a)提供嚙齒類動(dòng)物；
[0449](b)對嚙齒類動(dòng)物施用特異性結(jié)合PCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；
[0450](c)對所述嚙齒類動(dòng)物施用測試化合物；
[0451](d)在嚙齒類動(dòng)物中測定該測試化合物的效果，其中與對照動(dòng)物的膽固醇水平相比嚙齒類動(dòng)物中膽固醇水平的降低指示該測試化合物在降低受試者的膽固醇水平中是有效的，其中對照動(dòng)物來自與所述嚙齒類動(dòng)物相同的物種，并且其中對照動(dòng)物尚未用該測試化合物攻擊。
[0452]在第22方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述嚙齒類動(dòng)物選自下組:倉鼠、小鼠、大鼠、豚鼠和家兔。
[0453]可用于實(shí)踐本發(fā)明第22方面的抗體及其抗原結(jié)合片段記載于本申請其它部分如第4方面或“用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體”部分。優(yōu)選地，以lmg/kg體重、3mg/kg體重或10mg/kg體重的濃度對嚙齒類動(dòng)物施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0454]在第22方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過測量血清中總膽固醇的水平來測定膽固醇水平的降低。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過測量血清中LDL膽固醇(LDL-C)的水平來測定膽固醇水平的降低。
[0455]在第22方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，對照動(dòng)物來自與所述嚙齒類動(dòng)物相同的品系。優(yōu)選地，對所述嚙齒類動(dòng)物和對照動(dòng)物施用相同的抗體或其抗原結(jié)合片段。優(yōu)選地，對所述嚙齒類動(dòng)物和對照動(dòng)物施用相同濃度(以mg/kg體重測量)的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0456]在第22方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述對照動(dòng)物是與所述嚙齒類動(dòng)物不同的動(dòng)物，即不同的個(gè)體。也可以測定兩個(gè)或更多個(gè)對照動(dòng)物中的膽固醇水平并計(jì)算在這兩個(gè)或更多個(gè)對照動(dòng)物中膽固醇水平的均值數(shù)值。類似地，有可能用抗體或其抗原結(jié)合片段攻擊兩個(gè)或更多個(gè)嚙齒類動(dòng)物，以測定在這兩個(gè)或更多個(gè)嚙齒類動(dòng)物中的膽固醇水平并計(jì)算在這兩個(gè)或更多個(gè)嚙齒類動(dòng)物中膽固醇水平的均值數(shù)值。
[0457]在第22方面的一個(gè)備選的實(shí)施方案中，所述對照動(dòng)物與嚙齒類動(dòng)物是同一個(gè)動(dòng)物，但是對其在不同的時(shí)間點(diǎn)檢查。更具體地，可以將施用測試化合物后嚙齒類動(dòng)物中的膽固醇水平與同一動(dòng)物中的給藥前膽固醇水平比較。優(yōu)選地，在上文敘述的步驟(b)和(C)之間測定所述給藥前膽固醇水平。
[0458]依照第23方面，本發(fā)明關(guān)注增強(qiáng)經(jīng)歷他汀療法的受試者中的LDL-C降低活性的方法，所述方法包括對受試者施用特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中在約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段，由此在受試者中增強(qiáng)他汀療法的LCL-C降低活性。
[0459]依照第23方面的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者在施用所述抗體前對他汀療法是有抗性的。
[0460]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者患有選自下組的疾病或狀況:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化。
[0461]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是原發(fā)性高膽固醇血癥或家族性高膽固醇血癥。
[0462]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述抗體或抗原結(jié)合片段以約50mg至約300mg范圍內(nèi)的劑量量施用。
[0463]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段以約150mg的劑量量施
用。
[0464]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每隔一周(E2W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0465]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每4周(E4W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0466]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，相對于給藥前水平，所述治療將血清總膽固醇降低至少約25%至約35%，并在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低。
[0467]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，相對于給藥前水平，所述治療將血清總膽固醇降低至少約65%至約80%，并在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低。
[0468]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，相對于給藥前水平降低，所述治療將血清三酰甘油水平至少約25%至約40%。
[0469]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，相對于給藥前水平，所述治療將血清HDL膽固醇降低不超過5%。
[0470]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述治療對肝功能具有很少或沒有可測量影響，如通過ALT和AST測量測定的。
[0471]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R。
[0472]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。[0473]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ IDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0474]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0475]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的劑量施用的阿托伐他汀。
[0476]在第24方面，本發(fā)明關(guān)注用于治療受試者中升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的試劑盒，所述試劑盒包含(a)藥用單位劑量形式，其包含特異性結(jié)合hPCSK9的抗體或其抗原結(jié)合片段；以及藥學(xué)可接受載體，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段以約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量存在；和(b)有使用說明書的標(biāo)簽或包裝插頁。
[0477]依照第24方面的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述標(biāo)簽指示可以對接受用所述抗體或抗原結(jié)合片段治療的患者治療選自下組的疾病或狀況治療:聞膽固醇血癥、聞脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病。
[0478]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是原發(fā)性高膽固醇血癥或家族性高膽固醇血癥。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是不受他汀類控制的高膽固醇血癥。
[0479]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述抗體或抗原結(jié)合片段以約50mg至約300mg范圍內(nèi)的劑量量存在。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段以約150mg的劑
量量存在。
[0480]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí) 施方案，所述標(biāo)簽或包裝插頁指示每隔一周(E2W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0481]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述標(biāo)簽或包裝插頁指示每4周(E4W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0482]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R。
[0483]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。
[0484]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ IDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0485]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述試劑盒進(jìn)一步包含HMG-CoA還原酶抑制劑。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抑制劑的劑量量范圍為約0.05mg至lOOmg。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0486]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,用法說明書指示他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的劑量施用的阿托伐他汀。
[0487]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，用法說明書指示用抗體或其抗原結(jié)合片段治療對于屬于下列一組或多組的患者是禁忌的:
[0488]⑴吸煙者；[0489](ii)70歲齡以上的個(gè)體；
[0490](iii)患有高血壓的個(gè)體；
[0491](iv)懷孕女性；
[0492](V)試圖懷孕的女性；
[0493](vi)哺乳的女性；
[0494](vii)患有或曾經(jīng)患有影響肝的疾病的個(gè)體；
[0495](viii)在肝功能方面具有任何不明異常血液測試的個(gè)體；
[0496](ix)飲用過量酒精的個(gè)體；
[0497](X)具有腎問題的個(gè)體；
[0498](xi)患有甲狀腺機(jī)能減退的個(gè)體；
[0499](xii)患有肌病癥的個(gè)體；
[0500](xiii)在用降脂藥物治療期間遇到先前的肌肉問題的個(gè)體；
[0501](xiv)其呼吸有嚴(yán)重問題的個(gè)體；
[0502](xv)服用下列一種或多種藥物的個(gè)體:改變免疫系統(tǒng)起作用方式的藥物(例如環(huán)孢素或抗組胺劑)、抗生素或抗真菌藥物(例如紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的藥物(例如吉非貝齊、考來替泊)、鈣通道阻斷劑(例如維拉帕米、地爾硫卓)、調(diào)節(jié)心律的藥物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治療中使用的蛋白酶抑制劑(例如那非那韋)、華法林、口服避孕藥、抗酸藥或圣約翰草；或
[0503](xvi)每日飲用超過0.1L葡萄柚汁的個(gè)體；
[0504](xvii)具有超過40的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；
[0505](xviii)具有小于18的體重指數(shù)(BMI)的個(gè)體；
[0506](xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的個(gè)體；
[0507](xx)乙肝或丙肝陽性的個(gè)體；或
[0508](xxi)對單克隆抗體治療有已知的敏感性的個(gè)體。
[0509]在第25方面，本發(fā)明關(guān)注一種治療患有以升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平為特征的疾病或狀況的受試者的方法，所述方法包括:
[0510] (a)選擇具有大于100mg/dL的血液LDL-C水平的受試者；并
[0511](b)對所述受試者施用包含特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段的組合物；由此降低有此需要的受試者中的膽固醇水平。
[0512]依照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況選自下組:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化。
[0513]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是原發(fā)性高膽固醇血癥或家族性高膽固醇血癥。
[0514]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是不受他汀類控制的高膽固醇血癥。
[0515]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于18kg/m2或大于40kg/m2的體重指數(shù)(BMI)。
[0516]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，先前沒有教導(dǎo)受試者食用膽固醇降低飲食。[0517]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者先前尚未服用除阿托伐他汀外的膽固醇降低藥物。
[0518]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天約IOmg施用阿托伐他汀。
[0519]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，膽固醇降低藥物選自下組:貝特類(fibrates)、膽汁酸樹脂、煙酸(niacin)、腸膽固醇吸收(ICA)阻斷劑和Ω-3脂肪酸。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天大于500mg施用煙酸。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天大于1000mg施用Ω-3脂肪酸。
[0520]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者沒有患有糖尿病。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，糖尿病是I型糖尿病。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，糖尿病是2型糖尿病。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，用胰島素治療2型糖尿病。
[0521]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有大于或等于8.5%的血糖化血紅蛋白濃度。
[0522]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者在乙肝和丙肝表面抗原方面呈陰性的。
[0523]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有大于350mg/dL的血液三酰甘油濃度。
[0524]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有每立方mm血液少于1500個(gè)嗜中性粒細(xì)胞。
[0525]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有每立方mm血液少于100，000個(gè)血小
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[0526]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者為女性。
[0527]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者沒有懷孕。
[0528]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有高于正常下限且低于正常上限的血液促甲狀腺激素濃度。
[0529]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限1.4倍的血清肌酸。
[0530]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者為男性。
[0531]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限1.5倍的血清肌酸。
[0532]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限2倍的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶量。
[0533]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限2倍的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶量。
[0534]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述抗體或抗原結(jié)合片段以約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量施用。
[0535]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段以約50mg至約300mg范圍內(nèi)的劑量量施用。
[0536]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體每4周以200和300mg之間施用。
[0537]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段以約150mg的劑量量施用。
[0538]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每隔一周(E2W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。[0539]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每4周(E4W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0540]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R。
[0541]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。
[0542]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ IDNO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0543]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，皮下施用所述抗體。
[0544]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在腹部中施用所述抗體。
[0545]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0546]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述HMG-CoA還原酶抑制劑以約0.05mg至IOOmg范圍中的劑量量施用 。
[0547]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。
[0548]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0549]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,他汀是以IOmg或80mg劑量施用的阿托伐他汀。
[0550]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在8周時(shí)段中以每日約IOmg和一日80mg施用阿托伐他汀。
[0551]在第26方面，本發(fā)明關(guān)注降低有此需要的受試者中的膽固醇水平的方法，包括:
[0552](a)選擇具有大于100mg/dL的血液低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的受試者；并
[0553](b)對所述受試者施用包含特異性結(jié)合人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗體或其抗原結(jié)合片段的組合物；由此降低有此需要的受試者中的膽固醇水平。
[0554]依照第26方面的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況選自下組:高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化。
[0555]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是原發(fā)性高膽固醇血癥或家族性高膽固醇血癥。
[0556]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述疾病或狀況是不受他汀類控制的高膽固醇血癥。
[0557]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于18kg/m2或大于40kg/m2的體重指數(shù)(BMI)。
[0558]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，先前沒有教導(dǎo)受試者食用膽固醇降低飲食。
[0559]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者先前尚未服用除阿托伐他汀外的膽固醇降低藥物。
[0560]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天約IOmg施用阿托伐他汀。
[0561]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，膽固醇降低藥物選自下組:貝特類、膽汁酸樹脂、煙酸、腸膽固醇吸收(ICA)阻斷劑和Ω-3脂肪酸。[0562]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天大于500mg施用煙酸。
[0563]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以每天大于1000mg施用Ω -3脂肪酸。
[0564]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者沒有患有糖尿病。
[0565]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述糖尿病是I型糖尿病。
[0566]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述糖尿病是2型糖尿病。
[0567]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，用胰島素治療2型糖尿病。
[0568]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有大于或等于8.5%的血糖化血紅蛋白濃度。
[0569]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者在乙肝和丙肝表面抗原方面呈陰性。
[0570]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有大于350mg/dL的血液三酰甘油濃度。
[0571]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有每立方mm血液少于1500個(gè)嗜中性粒細(xì)胞。
[0572]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有每立方mm血液少于100，000個(gè)血小板。
[0573]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施 方案，所述受試者為女性。
[0574]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者沒有懷孕。
[0575]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有高于正常下限且低于正常上限的血液促甲狀腺激素濃度。
[0576]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限1.4倍的血清肌酸。
[0577]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者為男性。
[0578]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限1.5倍的血清肌酸。
[0579]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限2倍的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶量。
[0580]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述受試者具有小于正常上限2倍的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶量。
[0581]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述抗體或抗原結(jié)合片段以約5mg至約500mg范圍內(nèi)的劑量量施用。
[0582]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,所述抗體或抗原結(jié)合片段以約50mg至約300mg范圍內(nèi)的劑量量施用。
[0583]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體每4周以200和300mg之間施用。
[0584]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段以約150mg的劑量量施用。
[0585]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每隔一周(E2W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0586]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，每4周(E4W)對受試者施用所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0587]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈CDR。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，皮下施用所述抗體。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在腹部中施用所述抗體。
[0588]依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括對受試者施用HMG-CoA還原酶抑制劑。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，以約0.05mg至IOOmg范圍中的劑量量施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述他汀選自下組:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的劑量施用的阿托伐他汀。依照另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案,在8周時(shí)段中以每日約IOmg和一日80mg施用阿托伐他汀。
[0589]可以將本發(fā)明的幾方面彼此組合。例如，可以組合依照第11方面的用于治療疾病或狀況的方法和依照第18方面的用于治療疾病或狀況的方法。由于此組合，本發(fā)明涉及一種用于治療疾病或狀況的方法，其特征在于通過某些劑量方案來治療某些組的受試者。以類似的方式，可以將本文中描述的方面的不同實(shí)施方案彼此組合，例如可以將依照第7方面的涉及某些劑量方案的用于治療疾病或狀況的抗體或抗原結(jié)合片段與依照第7方面的涉及特定患者群體的用于治療疾病或狀況的抗體或抗原結(jié)合片段組合。由于此組合，本發(fā)明涉及抗體或其抗原結(jié)合片段，用于通過某些劑量方案治療某些組的受試者。
[0590]依照另一個(gè)例子，可以組合依照第11方面的用于治療疾病或狀況的方法和依照第19方面的用于治療疾病或狀況的方法。由于此組合，本發(fā)明涉及一種用于治療疾病或狀況的方法，其從通過某種劑量方案的治療排除某些組的受試者。以類似的方式，可以將本文中描述的方面的不同實(shí)施方案彼此組合，例如可以將涉及某些劑量方案的依照第7方面的一個(gè)實(shí)施方案的用于治療疾病或狀況的抗體或抗原結(jié)合片段與涉及從治療排除某些組的受試者的依照第7方面的一個(gè)實(shí)施方案的用于治療疾病或狀況的抗體或抗原結(jié)合片段組合。由于此組合，本發(fā)明 涉及抗體或其抗原結(jié)合片段，用于通過某種劑量方案的治療，其中從治療中排除某些組的受試者。
[0591]熟練技術(shù)人員會(huì)認(rèn)可本發(fā)明不同方面和實(shí)施方案的適當(dāng)組合產(chǎn)生的其它優(yōu)選的實(shí)施方案。
[0592]如本文中描述的本發(fā)明藥學(xué)用途還涉及給定的抗體或其抗原結(jié)合片段、給定的藥物組合物等用于制備供治療一或多種如本文中描述的疾病或狀況的藥物的用途。
[0593]用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體
[0594]以下部分描述了可用于實(shí)踐本發(fā)明所有21個(gè)方面的抗體及其抗原結(jié)合片段的功能和結(jié)構(gòu)特征。如此，表述如“在優(yōu)選的實(shí)施方案中”、“在一些實(shí)施方案中”、“在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中”和類似的表述應(yīng)理解為指本發(fā)明第I方面、本發(fā)明第2方面、本發(fā)明第3方面、本發(fā)明第4方面、本發(fā)明第5方面、本發(fā)明第6方面、本發(fā)明第7方面、本發(fā)明第8方面、本發(fā)明第9方面、本發(fā)明第10方面、本發(fā)明第11方面、本發(fā)明第12方面、本發(fā)明第13方面、本發(fā)明第14方面、本發(fā)明第15方面、本發(fā)明第16方面、本發(fā)明第17方面、本發(fā)明第18方面、本發(fā)明第19方面、本發(fā)明第20方面、本發(fā)明第21方面、本發(fā)明第22方面、本發(fā)明第23方面、本發(fā)明第24方面、本發(fā)明第25方面、本發(fā)明第26方面的實(shí)施方案。[0595]所有適合于實(shí)踐本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段均特異性結(jié)合hPCSK9。在本發(fā)明任何方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是重組人抗體或其片段。在更具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是特異性結(jié)合hPCSK9并中和PCSK9活性的完全人單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0596]可用于本發(fā)明的單抗可以是全長(例如IgGl或IgG4抗體)或可以僅包含抗原結(jié)合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，并且可以修飾為影響功能性，例如消除殘余效應(yīng)器功能(Reddy 等(2000) J.1mmunol.164:1925-1933)。
[0597]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體對受試者(優(yōu)選人或非人哺乳動(dòng)物且更優(yōu)選為人)施用后以下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征為特征:
[0598]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)水平相對于給藥前水平降低至少約_25%至約-40%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-25%，更優(yōu)選至少-30%，特別在每兩周施用方案(每隔一周，E2W)中以約40至約60mg，優(yōu)選約45至約55mg且更優(yōu)選約50mg的劑量施用時(shí)；
[0599]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-65%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約IOOmg E2W的劑量施用時(shí)；
[0600]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-60%至至少約-75%[例如至少約_60%、至少約-65%、至少約-70%或至少約-75%]及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_55%，更優(yōu)選至少_60%，特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)，
[0601 ]-低密度脂蛋白-C (LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約40%至約75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所 述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-35%，更優(yōu)選至少_40%，特別是在以約200mg E4W的劑量施用時(shí)；
[0602]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約_50%至約-75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約300mg E4W的劑量施用時(shí)；
[0603]-血清HDL膽固醇水平相對于給藥前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%，特別是在以約150mgE2W的劑量施用時(shí)；
[0604]-對肌鈣蛋白水平很少或沒有可檢測的影響；
[0605]-下列一項(xiàng)或多項(xiàng)升高:總膽固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1比率。
[0606]優(yōu)選地，如果與HMG-CoA還原酶抑制劑治療組合施用，那么依照本發(fā)明的抗體展現(xiàn)出上述特性?？梢载灤┍菊f明書找到要與本發(fā)明的抗體及其劑量和施用方案一起使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的優(yōu)選實(shí)施方案，特別是如在涉及醫(yī)學(xué)用途和治療方法的方面中所描述的。
[0607]依照本發(fā)明抗體及其抗原結(jié)合片段的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征:
[0608]-所述抗體或抗原結(jié)合片段包含如SEQID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R。[0609]-所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對。
[0610]-所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0611]依照本發(fā)明抗體及其抗原結(jié)合片段的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征:
[0612]-克服哺乳動(dòng)物，尤其是嚙齒類如倉鼠中的他汀抗性
[0613]-哺乳動(dòng)物，尤其是嚙齒類如倉鼠中的LDLR表達(dá)升高
[0614]-降低嚙齒類如倉鼠中的血清LDL-C
[0615]-與HMG-CoA還原酶抑制劑施用一起的LDL-C協(xié)同降低，特別是在嚙齒類如倉鼠中，其中HMG-CoA還原酶抑制劑優(yōu)選是阿托伐他汀。
[0616]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以下列一項(xiàng)或多項(xiàng)為特征:
[0617](i)能夠?qū)⒀蹇偰懝檀枷鄬τ诮o藥前水平降低至少約25%至約35%并在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低，優(yōu)選地血清總膽固醇的降低為至少約30%-40% ；
[0618](ii)能夠?qū)⒀錖DL膽固醇相對于給藥前水平降低至少約65-80%并在至少24天的時(shí)段里持續(xù)降低；
[0619](iii)能夠?qū)⒀迦８视拖鄬τ诮o藥前水平降低至少約25-40% ; [0620](iv)在相對于給藥前水平?jīng)]有降低血清HDL膽固醇或?qū)⒀錒DL膽固醇降低不超過5%的情況下實(shí)現(xiàn)(i)-(iii)中一項(xiàng)或多項(xiàng)；
[0621](V)在根據(jù)ALT和AST測量的測定對肝功能很少或沒有可測量影響的情況下實(shí)現(xiàn)(i)-(iii)中一項(xiàng)或多項(xiàng)。
[0622]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以下列一項(xiàng)或多項(xiàng)為特征:
[0623](i)能夠?qū)⒀錖DL膽固醇相對于給藥前水平降低至少約40-70%并在至少60或90天的時(shí)段里持續(xù)降低；
[0624](ii)能夠?qū)⒀迦８视拖鄬τ诮o藥前水平降低至少約25-40% ;
[0625](iii)相對于給藥前水平，不降低血清HDL膽固醇或?qū)⒀錒DL膽固醇降低不超過5%
[0626]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段的特征在于結(jié)合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第238位氨基酸殘基的表位。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9(SEQ ID NO:755)的第238、153、159和343位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的表位。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段的特征在于結(jié)合不包含SEQ ID NO:755的第192、194、197和/或237位氨基酸殘基的表位。
[0627]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段的特征在于結(jié)合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第366位氨基酸殘基的表位。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9 (SEQ ID NO:755)的第147、366和380位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的表位。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述抗體或抗體的抗原結(jié)合片段的特征在于結(jié)合不包含SEQ ID NO:755的第215或238位氨基酸殘基的表位。
[0628]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的重鏈可變區(qū)(HCVR):SEQ ID NO:2，18，22，26，42，46，50，66，70，74，90，94，98，114，118，122，138，142，146，162，166，170，186，190，194，210，214，218，234，238，242，258，262，266，282，286，290，306，310，314，330，334，338，354，358，362，378，382，386，402，406，410，426，430，434，450，454，458，474，478，482，498，502，506，522，526，530，546，550，554，570，574，578，594，598，602，618，622，626，642，646，650，666，670，674，690，694，698，714，718，722，738 和 742，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，HCVR 包含選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 50，66，70，74，90，94，122，138，142，218，234，238，242，258，262，314，330 和 334。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，HCVR 包含 SEQ IDNO:90 或 218。
[0629]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含選自下組的輕鏈可變區(qū)(LCVR):SEQ ID NO: 10，20，24，34，44，48，58，68，72，82，92，96，106，116，120，130，140，144，154，164，168，178，188，192，202，212，216，226，236，240，250，260，264，274，284，288，298，308，312，322，332，336，346，356，360，370，380，384，394，404，408，418，428，432，442，452，456，466，476，480，490，500，504，514，524，528，538，548，552，562，572，576，586，596，600，610，620，624，634，644，648，658，668，672，682，692，696，706，716，720，730，740 和 744，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，LCVR包含選自下組的氨基酸序列=SEQID NO: 58，68，72，82，92，96，130，140，144，226，236，240，250，260，264，322，332 和 336。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，LCVR 包含 SEQID NO:92 或 226。
[0630]在具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)序列對:SEQ ID NO:2/10，18/20，22/24，26/34，42/44，46/48，50/58，66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，98/106，114/116，118/120，122/130，138/140，142/144，146/154，162/164，166/168，170/178，186/188，190/192，194/202，210/212，214/216，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，266/274，282/284，286/288，290/298，306/308，310/312, 314/322，330/332, 334/336，338/346，354/356，358/360, 362/370, 378/380, 382/384，386/394，402/404，406/408，410/418，426/428，430/432，434/442，450/452，454/456，458/466，474/476，478/480，482/`490，498/500，502/504，506/514，522/524，526/528，530/538，546/548，550/552, 554/562，570/572, 574/576，578/586，594/596，598/600, 602/610, 618/620，622/624，626/634，642/644，646/648，650/658，666/668，670/672，674/682，690/692，694/696，698/706，714/716，718/720，722/730，738/740 和 742/744。在一個(gè)實(shí)施方案中，HCVR 和 LCVR 序列對包含 SEQ ID NO:50/58, 66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，122/130，138/140，142/144，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，314/322，330/332和334/336之一。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90中顯示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO:92中顯示的LCVR氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:218中顯示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO: 226中顯示的LCVR氨基酸序列。
[0631]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的重鏈CDR3 (HCDR3)域:SEQ ID NO: 8，32，56，80，104，128，152，176，200，224，248，272，296，320，344，368，392，416，440，464，488，512，536，560，584，608，632，656，680，704 和 728，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；以及選自下組的輕鏈 CDR3 (LCDR3)域:SEQ ID NO: 16，40，64，88，112，136，160，184，208，232，256，280，304，328，352，376，400，424，448，472，496，520，544，568，592，616，640，664，688，712 和 736，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述 HCDR3/LCDR3 序列對選自下組:SEQ ID NO:56/64, 80/88, 128/136, 224/232，248/256和320/328。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQID NO:80中顯示的HCDR3域和如SEQ ID NO:88中顯示的IXDR3域。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:224中顯示的HCDR3域和如SEQ IDNO:232中顯示的LCDR3域。 [0632]在別的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含選自下組的重鏈CDRl (HCDRl)域:SEQ ID NO: 4，28，52，76，100，124，148，172，196，220，244，268，292，316，340，364，388，412，436，460，484，508，532，556，580，604，628，652，676，700 和 724，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；選自下組的重鏈CDR2 (HCDR2)域:SEQ ID NO: 6，30，54，78，102，126，150，174，198，222，246，270，294，318，342，366，390，414，438，462，486，510，534，558，582，606，630，654，678，702 和 726，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；選自下組的輕鏈CDRl (LCDRl)域:SEQ ID NO: 12，36，60，84，108，132，156，180，204，228，252，276，300，324，348，372，396，420，444，468，492，516，540，564，588，612，636，660，684，708 和 732，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；以及選自下組的輕鏈CDR2(LCDR2)域:SEQ ID NO: 14，38，62，86，110，134，158，182，206，230，254，278，302，326，350，374，398，422，446，470，494，518，542，566，590，614，638，662，686，710 和 734，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈⑶R序列包含選自下組的序列=SEQ ID NO: 52, 54，56，60，62，64 ；76，78，80，84，86，88 ;124，126，128，132，134，136 ;220，222，224，228，230，232 ；244，246，248，252，254，256 ;和 316，318，320，324，326，328。在更具體的實(shí)施方案中，所述CDR 序列包含 SEQ ID NO: 76，78，80，84，86，88 ;或 220，222，224，228，230，232。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:76, 78，80, 84，86和88中顯示的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO: 220，222，224，228，230和232中顯示的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
[0633]在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的重鏈和輕鏈序列對內(nèi)含有的重鏈和輕鏈CDR域:SEQ ID NO:2/10, 18/20, 22/24，26/34，42/44，46/48，50/58，66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，98/106，114/116，118/120，122/130，138/140，142/144，146/154，162/164，166/168，170/178，186/188，190/192，194/202，210/212，214/216，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，266/274，282/284，286/288，290/298，306/308,310/312, 314/322，330/332, 334/336，338/346，354/356，358/360,362/370，378/380，382/384，386/394，402/404，406/408，410/418，426/428，430/432，434/442，450/452，454/456，458/466，474/476，478/480，482/490，498/500，502/504，506/514，522/524，526/528，530/538，546/548，550/552，554/562，570/572，574/576，578/586，594/596，598/600，602/610，618/620，622/624，626/634，642/644，646/648，650/658，666/668，670/672，674/682，690/692，694/696，698/706，714/716，718/720，722/730，738/740 和 742/744。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R序列包含于選自下列氨基酸序列對的HCVR和LCVR內(nèi):SEQ ID NO:50/58, 66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，122/130，138/140，142/144，218/226，234/236，238/240，242/250, 258/260, 262/264，314/322，330/332 和 334/336。在更具體的實(shí)施方案中，CDR 序列包含在選自SEQ ID N0:90/92或218/226的HCVR/LCVR序列內(nèi)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID N0:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈CDR。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ IDNO: 218/226中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈CDR。
[0634]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQ ID NO:90或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
[0635]在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含SEQ Id N092或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)。
[0636]在具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO:90中顯示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO: 92中顯示的LCVR氨基酸序列。
[0637]在具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQ ID NO:80或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重鏈⑶R3 (HCDR3)域；和/或SEQ ID NO: 88或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的輕鏈CDR3 (LCDR3)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述HCDR3/LCDR3序列對是SEQ ID N0:80/88。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ IDNO:80中顯示的HCDR3域和如SEQ ID NO:88中顯示的LCDR3域。
[0638]在別的具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含SEQ ID NO:76或具有至少90%、至少95%、至 少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重鏈CDRl (HCDRl)域；和/或SEQ ID NO: 78或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重鏈⑶R2(HCDR2)域；和/或SEQ ID N0:84或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的輕鏈⑶Rl (IXDRl)域；和/或SEQ ID NO: 86或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的輕鏈CDR2(LCDR2)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈CDR序列包含選自下組的序列:SEQ ID NO:76，78，80，84，86，88。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含如SEQ ID NO: 76，78，80，84，86和88中顯示的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
[0639]在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQ ID NO:90/92的重鏈和輕鏈序列對內(nèi)含有的重鏈和輕鏈CDR域。
[0640]一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案關(guān)注包含HCVR/LCVR序列SEQ ID NO:90/92和/或CDR序列SEQ ID N0:76，78，80和/或CDR序列SEQ ID NO: 84，86，88的抗體。另一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案關(guān)注包含HCVR/LCVR序列SEQ ID NO: 90/92和CDR序列SEQ ID NO:76, 78, 80以及 CDR 序列 SEQ ID NO:84，86，88 的抗體(“316P”)。
[0641]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由選自下組的核酸序列編碼的HCVR:SEQ ID NO:1, 17，21，25，41，45，49，65，69，73，89，93，97，113，117，121，137，141，145，161，165，169，185，189，193，209，213，217，233，237，241，257，261，265，281，285，289，305，309，313，329，333，337，353，357，361，377，381，385，401, 405, 409, 425，429，433，449, 453，457，473，477，481，497，501，505，521，525，529，545，549，553，569，573，577，593，597，601，617，621，625，641，645，649，665，669，673，689，693，697，713，717，721，737 和 741，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，HCVR 由選自下組的核酸序列編碼:SEQ ID NO: 49，65，69，73，89，93，121，137，141, 217，233，237，241，257，261，313，329和333。在更具體的實(shí)施方案中，HCVR由選自下組的核酸序列編碼:SEQ ID NO:89和217。
[0642]在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段進(jìn)一步包含由選自下組的核酸序列編碼的LCVR:SEQ ID NO:9, 19，23，33，43，47, 57，67，71，81，91，95，105，115，119，129，139，143，153，163，167，177，187，191，201，211，215，225，235，239，249，259，263，273，283，287，297，307，311，321，331，335，345，355，359，369，379，383，393，403, 407, 417，427，431，441, 451，455，465，475，479，489，499，503，513，523，527，537，547，551，561，571，575，585，595，599，609，619，623，633，643，647，657，667，671，681，691，695，705，715，719，729，739 和 743，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，LCVR 由選自下組的核酸序列編碼:SEQ ID NO: 57，67，71，81，91，95，129，139，143, 225，235，239，249，259，263，321，331和335。在更具體的實(shí)施方案中，LCVR由選自下組的核酸序列編碼:SEQ ID NO:91和225。
[0643]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由選自下組的核苷酸序列編碼的 HCDR3 域:SEQ ID NO:7，31，55，79，103，127，151，175，199，223，247，271，295，319，343，367，391，415，439，463，487，511，535，559，583，607，631，655，679，703 和 727，或具有至少90%,至少95%,至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；以及由選自下組的核苷酸序列編碼的 LCDR3 域:SEQ ID NO: 15，39，63，87，111，135，159，183，207，231，255，279，303，327，351，375，399，423，447，471，495，519，543，567，591，615，639，663，687，711 和735，或具有至少90%、至少95%、 至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，HCDR3 和 LCDR3 包含分別由 SEQ ID NO: 55/63，79/87，127/135, 223/231, 247/255和319/327的核酸序列編碼的序列對。在更具體的實(shí)施方案中，HCDR3和IXDR3包含由SEQ ID NO:79/87和223/231的核酸序列編碼的序列對。
[0644]在別的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含由選自下組的核苷酸序列編碼的HCDRl 域:SEQ ID NO: 3，27，51，75，99，123，147，171，195，219，243，267，291，315，339，363，387，411，435，459，483，507，531，555，579，603，627，651，675，699 和 723，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；由選自下組的核苷酸序列編碼的 HCDR2 域:SEQ ID NO:5，29，53，77，101，125，149，173，197，221，245，269，293，317，341，365，389，413，437，461，485，509, 533，557，581，605, 629，653，677，701 和725，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；由選自下組的核苷酸序列編碼的LCDRl域:SEQ ID NO: 11, 35，59，83，107，131，155，179，203，227，251，275，299，323，347，371，395，419，443，467，491，515，539，563，587，611，635，659，683，707和731，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列;以及由選自下組的核苷酸序列編碼的LCDR2域:SEQ ID NO: 13，37，61，85，109，133，157，181，205，229，253，277，301，325，349，373，397，421，445，469，493，517，541，565，589，613，637，661，685，709和733，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈CDR序列由下列核酸序列編碼:SEQ ID NO:51,53, 55, 59,61,63 ;75，77，79，83，85，87 ;123，125，127，131，133，135 ；219，221，223，227，229，231 ;243，245，247，251，253，255;和 315，317，319，323，325，327。在更具體的實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈CDR序列由SEQ ID NO:75，77，79，83，85，87和219，221，223，227，229，231 的核酸序列編碼。
[0645]在別的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含HCDR3和IXDR3，其中HCDR3包含式 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xic1-Xi1-Xi2-Xi3-Xi4-X15-X16-X17-X18-X19-XW 的氨基酸序列(SEQ ID NO: 747)，其中 X1 是 Ala，X2 是 Arg 或 Lys，X3 是 Asp，X4 是 Ser 或 lie，X5 是 Asn 或Val，X6 是 Leu 或 Trp，X7 是 Gly 或 Met, X8 是 Asn 或 Val，X9 是 Phe 或 Tyr，X10 是 Asp, X11 是Leu或Met，X12是Asp或缺乏，X13是Tyr或缺乏，X14是Tyr或缺乏，X15是Tyr或缺乏，X16是Tyr或缺乏，X17是Gly或缺乏，X18是Met或缺乏，X19是Asp或缺乏，且X2ci是Val或缺乏；并且 LCDR3 包含式 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 的氨基酸序列(SEQ ID NO: 750)，其中 X1 是 Gln或 Met, X2 是 Gin, X3 是 Tyr 或 Thr, X4 是 Tyr 或 Leu, X5 是 Thr 或 Gin, X6 是 Thr, X7 是 Pro,X8 是 Tyr 或 Leu,且 X9 是 Thr0
[0646]在別的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 的 HCDRl 序列(SEQ ID NO:745)，其中 X1 是 Gly，X2 是 Phe，X3 是Thr, X4 是 Phe, X5 是 Ser 或 Asn, X6 是 Ser 或 Asn, X7 是 Tyr 或 His,且 X8 是 Ala 或 Trp ;式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8)的 HCDR2 序列(SEQ IDN0:746，其中 X1 是 lie，X2 是 Ser 或 Asn，X3是 Gly 或 Gin, X4 是 Asp 或 Ser，X5 是 Gly, X6 是 Ser 或 Gly7X7 是 Thr 或 Glu,且 X8 是 Thr 或Lys ;式 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xic1-X11-X12 的 LCDRl 序列(SEQ ID NO: 748)，其中 X1 是Gin, X2 是 Ser, X3 是 Val 或 Leu, X4 是 Leu, X5 是 His 或 Tyr, X6 是 Arg 或 Ser, X7 是 Ser 或Asn, X8 是 Asn 或 Gly, X9 是 Asn, X10 是 Arg 或 Asn, X11 是 Asn 或 Tyr,且 X12 是 Phe 或缺乏；以及式 X1-X2-X3 的 LCDR2 序列(SEQ ID NO: 749)，其中 X1 是 Trp 或 Leu，X2 是 Ala 或 Gly，且X3 是 Ser。`
[0647]在別的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是人抗PCSK9抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含由自VinD1^P Jh種系序列衍生的核苷酸序列區(qū)段編碼的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和由自Vk和Jk種系序列衍生的核苷酸序列區(qū)段編碼的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其中所述種系序列為(&)￥11基因區(qū)段3-23為基因區(qū)段7-27、上基因區(qū)段2^基因區(qū)段4-1和1基因區(qū)段2 ;或(13)￥11基因區(qū)段3-7、011基因區(qū)段2-8、1基因區(qū)段6、￥1?基因區(qū)段2-28和Jk基因區(qū)段4。
[0648]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ IDNO: 76，78，80，84，86 和 88 中顯示的或如 SEQ ID NO: 220，222，224，228，230 和 232 中顯示的重鏈和輕鏈⑶R氨基酸序列的抗體結(jié)合hPCSK9上的同一表位。
[0649]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含如SEQ IDNO: 76，78，80，84，86 和 88 中顯示的或如 SEQ ID NO: 220，222，224，228，230 和 232 中顯示的重鏈和輕鏈⑶R氨基酸序列的抗體競爭對hPCSK9的結(jié)合。
[0650]本發(fā)明涵蓋具有經(jīng)修飾的糖基化模式的抗PCSK9抗體。在一些應(yīng)用中，除去不想要的糖基化位點(diǎn)的修飾可以是有用的，或例如除去巖藻糖模塊以提高抗體依賴性細(xì)胞性細(xì)胞毒性(ADCC)功能(參見Shield等(2002) JBC277:26733)。在其它應(yīng)用中，可以進(jìn)行半乳糖苷化修飾以修飾補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。
[0651]涉及用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選抗體的一些優(yōu)選序列:
[0652]SEQ ID NO:76:Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Ala
[0653]SEQ ID NO:78:lie Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr
[0654]SEQ ID NO:80:Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu
[0655]SEQ ID NO:84:Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Arg Asn Phe
[0656]SEQ ID NO:86:Trp Ala Ser
[0657]SEQ ID NO:88:Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
[0658]SEQ ID NO:90:
[0659]
【權(quán)利要求】
1.藥物組合物，其包含與藥學(xué)可接受賦形劑或載體一起的每劑約40至約500mg的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合hPCSK9(人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/KEXIN型9)。
2.依照權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含約50mg至約500mg、約50mg至約300mg、約50mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg 或約500mg的所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
3.依照權(quán)利要求1或2的藥物組合物,其包含約150mg、約200mg或約300mg的所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
4.依照權(quán)利要求1-3中一項(xiàng)的藥物組合物，其包含與藥學(xué)可接受賦形劑或載體一起的有效劑量的特異性結(jié)合hPCSK9 (人蛋白質(zhì)原轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/KEXIN型9)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述劑量對于在施用后至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23或至少28天的時(shí)段里低密度脂蛋白(LDL-C)水平的持續(xù)降低是足夠的。
5.依照權(quán)利要求1-4中一項(xiàng)的藥物組合物,其中所述劑量對于在至少14天、28天或I個(gè)月的時(shí)段里L(fēng)DL-C水平的持續(xù)降低是足夠的。
6.依照權(quán)利要求1-5中一項(xiàng)的藥物組合物，其進(jìn)一步包含有效量的HMG-CoA還原酶抑制劑。
7.依照權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀(statin)，優(yōu)選地其選自下組:西立伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐 他汀(Pitavastatin)、羅蘇伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)或普伐他汀(provastatin),并且優(yōu)選為阿托伐他汀。
8.依照權(quán)利要求6或7的藥物組合物，其包含約0.05mg至約lOOmg、約0.5mg至約lOOmg、約5mg至約90mg、約10mg、約20mg、約40mg或約80mg的HMG-CoA還原酶抑制劑，并且優(yōu)選約10、約20、約40或約80mg。
9.依照權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的藥物組合物，其包含有效劑量的HMG-CoA還原酶抑制劑以通過每日一次施用降低LDL-C水平。
10.依照權(quán)利要求1至9中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有下列一項(xiàng)或多項(xiàng)特征: a.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)水平相對于給藥前水平降低至少約-25%至約-40%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-25%，更優(yōu)選至少-30%，特別在每兩周施用方案(每隔一周，E2W)中以約40至約60mg，優(yōu)選約45至約55mg且更優(yōu)選約50mg的劑量施用時(shí)； b.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-50%至約-65%及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約IOOmg E2W的劑量施用時(shí)； c.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-60%至至少約-75%[例如至少約-60%、至少約-65%、至少約-70%或至少約_75%]及在至少14天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少_55%，更優(yōu)選至少-60%，特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)， d.低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約40%至約75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-35%，更優(yōu)選至少_40%，特別是在以約200mg E4W的劑量施用時(shí)； e.在對受試者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相對于給藥前水平降低至少約-50%至約-75%及在至少28天的時(shí)段里持續(xù)降低，其中所述持續(xù)降低優(yōu)選為相對于給藥前水平至少-40%，更優(yōu)選至少_45%，特別是在以約300mg E4W的劑量施用時(shí)； f.在對受試者施用后血清HDL膽固醇水平相對于給藥前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%，特別是在以約150mg E2W的劑量施用時(shí)； g.在對受試者施用后對肌鈣蛋白水平很少或沒有可測量的影響； h.在對受試者施用后下列一項(xiàng)或多項(xiàng)升高:總膽固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-l 比率。
11.依照權(quán)利要求1-9中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段在對患有他汀抗性高膽固醇血癥的受試者施用時(shí)能夠克服他汀抗性。
12.依照權(quán)利要求1-10中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈⑶R或與其具有至少98%或99%同一性的基本相同的序列。
13.依照權(quán)利要 求1-11中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQ ID NO:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對或與其具有至少98%或99%同一性的基本相同的序列對。
14.依照權(quán)利要求1-10中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段與包含SEQ ID N0:90/92中顯示的HCVR/LCVR氨基酸序列對的抗體或抗原結(jié)合片段競爭對hPCSK9的結(jié)合。
15.依照權(quán)利要求1-13中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9(SEQ ID NO:755)的第238位氨基酸殘基的表位。
16.依照權(quán)利要求1-14中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合包含hPCSK9(SEQ ID NO:755)的第238、153、159和343位氨基酸殘基中一個(gè)或多個(gè)的表位。
17.依照權(quán)利要求1-15中一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合不包含hPCSK9(SEQ ID NO:755)的第192、194、197和/或237位氨基酸殘基的表位。
18.依照權(quán)利要求1-16中一項(xiàng)的藥物組合物，其包含作為用于溶解的干配制劑的所述抗體或其抗原結(jié)合片段，所述干配制劑如凍干粉末、冷凍干燥粉末或無水濃縮物。
19.依照權(quán)利要求1-17中一項(xiàng)的藥物組合物，其包含作為液體配制劑，例如注射或輸注溶液的所述抗體或其片段。
20.依照權(quán)利要求4-18中一項(xiàng)的藥物組合物，其包含作為經(jīng)口配制劑，例如膠囊劑或片劑或作為液體配制劑，例如懸浮液、分散液或溶液的HMG-CoA還原酶抑制劑，用于例如經(jīng)口施用、注射或輸注。
21.依照權(quán)利要求19的注射溶液,優(yōu)選地每Iml體積包含約40mg至約200mg或約40至約200mg,例如約40mg、約50mg、約75mg、約lOOmg、約150mg或約200mg的所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
22.依照權(quán)利要求17的干配制劑，優(yōu)選地每劑包含約40mg至約500mg、約50至約500mg、約 50 至約 400mg、約 50 至約 300mg,例如約 40mg、約 50mg、約 75mg、約 lOOmg、約150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg 或約 500mg,且優(yōu)選地約50mg、約 lOOmg、約 150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg,甚至更優(yōu)選地約 150mg、約 200mg 或約300mg的所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
23.依照權(quán)利要求1-17中一項(xiàng)的藥物組合物之一中包含的抗體或其抗原結(jié)合片段。
24.單位劑量形式，其包含依照權(quán)利要求1-20中一項(xiàng)的藥物組合物、依照權(quán)利要求21的注射溶液、依照權(quán)利要求22的干配制劑或依照權(quán)利要求23的抗體。
25.依照權(quán)利要求24的單位劑量形式,其包含約40mg、約50mg、約75mg、約lOOmg、約150mg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg、約 400mg、約 450mg 或約 500mg 的所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
26.依照權(quán)利要求24或25的單位劑量形式，其在氣密密封容器中包含作為用于溶解的干配制劑的所述抗體或其片段，所述密封容器如管形瓶、安瓿或藥囊。
27.依照權(quán)利要求24或25的單位劑量形式，其在氣密密封容器中包含作為液體配制劑的所述抗體或其片段，所述密封容器如管形瓶、藥囊、預(yù)填充的注射器、預(yù)填充的自動(dòng)注射器或供可再用注射器或涂藥器用的藥筒。
28.依照權(quán)利要求26或27的單位劑量形式，其中在所述氣密密封容器上指示活性成分的數(shù)量。
29.制品，其包含依照權(quán)利要求1-20中一項(xiàng)的藥物組合物、依照權(quán)利要求21的液體配制劑或依照權(quán)利要求22的干配制劑、`依照權(quán)利要求23的抗體或其抗原結(jié)合片段或一個(gè)或多個(gè)依照權(quán)利要求24-28中一項(xiàng)的單位劑量形式，以及容器。
30.依照權(quán)利要求29的制品，其包含依照權(quán)利要求23的抗體和依照權(quán)利要求5-9或20中一項(xiàng)的HMG-CoA還原酶抑制劑的分開的單位劑量形式。
31.依照權(quán)利要求30的制品，其包含下列一種或多種組分: a.一個(gè)或多個(gè)包含依照權(quán)利要求23的抗體的單位劑量形式； b.一個(gè)或多個(gè)包含依照權(quán)利要求6-9或20中一項(xiàng)的HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式； c.使用說明書； c.用于應(yīng)用所述抗體的裝置，如注射器。
32.依照權(quán)利要求31的制品，其包含對于抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的一次單次施用、對于用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的兩周(即14天)治療、對于用抗體和HMG-CoA還原酶抑制劑的四周(即28天)治療或?qū)τ谟每贵w和HMG-CoA還原酶抑制劑的一個(gè)月治療足夠的抗體以及優(yōu)選地還有HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式。
33.依照權(quán)利要求32的制品，其包含對于每兩周施用方案或每四周施用方案或每月施用方案足夠的抗體的單位劑量形式。
34.依照權(quán)利要求32或33的制品，其包含對于每日施用方案足夠的HMG-CoA還原酶抑制劑的單位劑量形式。
35.依照權(quán)利要求1至20中一項(xiàng)的藥物組合物或依照權(quán)利要求21的抗體或其抗原結(jié)合片段，其用于治療PCSK9表達(dá)或活性引起影響的疾病或狀況，優(yōu)選地用于降低升高的LDL-C (低密度脂蛋白C)水平。
36.依照權(quán)利要求35的藥物組合物或抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述疾病或狀況選自下組:升高的總膽固醇水平、升高的低密度脂蛋白(LDL-C)水平、高膽固醇血癥、高脂血癥、血脂障礙和動(dòng)脈粥樣硬化，特別是原發(fā)性高膽固醇血癥、家族性高膽固醇血癥或不受他汀類控制的高膽固醇血癥。
37.依照權(quán)利要求35或36的藥物組合物或抗體或其抗原結(jié)合片段，其中每隔一周(E2W)、每四周(E4W)或每月一次對受試者施用所述組合物、所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
38.依照權(quán)利要求35-37中一項(xiàng)的藥物組合物或抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含HMG-CoA還原酶抑制劑，優(yōu)選為依照權(quán)利要求7-9或20中一項(xiàng)的HMG-CoA還原酶抑制劑的共施用。
39.依照權(quán)利要求38的藥物組合物或抗體，其中一日一次地，優(yōu)選每日施用所述HMG-CoA還原酶抑制劑。
40.用于制備依照權(quán)利要求1-20中一項(xiàng)的藥物組合物的方法，其包括將所述抗體或其抗原結(jié)合片段以及任選地所述HMG-CoA還原酶抑制劑與一種或多種藥用賦形劑或載體混
41.用于制備依照權(quán)利要求24至28中一項(xiàng)的單位劑量形式的方法，其包括分配一定量的包含一劑或多劑所述抗體以及任選地一劑或多劑所述HMG-CoA還原酶抑制劑的依照權(quán)利要求22的液體配制劑或依照權(quán)利要求23的干配制劑、依照權(quán)利要求1-20中一項(xiàng)的藥物組合物、依照權(quán)利要求21的抗體，并將它們加工為適合作為人和/或動(dòng)物受試者的單一劑量的物理離散單元。
42.用于制備依照權(quán)利要求29-34中一項(xiàng)的制品的方法，其包括在容器中包裝依照權(quán)利要求1-20中一項(xiàng)的藥物組合物、依照權(quán)利要求21的抗體、依照權(quán)利要求22的液體配制劑、依照權(quán)利要求23的干配制劑或一個(gè)或多個(gè)依照權(quán)利要求24至28中一項(xiàng)的單位劑量形式。
【文檔編號(hào)】C07K16/40GK103476797SQ201280015571
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年1月28日
【發(fā)明者】C.哈諾廷, L.貝薩克, U.喬哈里 申請人:賽諾菲