專利名稱：脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接elisa檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種ELISA試劑盒，具體地，涉及一種脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
對(duì)于脂環(huán)酸芽孢桿菌的檢測(cè)，通常采用細(xì)菌分離培養(yǎng)和生化鑒定的方法。該方法檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)、成本高，對(duì)操作者的實(shí)驗(yàn)水平有較高的要求，這些都無法滿足日常生產(chǎn)監(jiān)測(cè)的實(shí)際要求。本發(fā)明采用的間接ELISA檢測(cè)方法是免疫熒光方法的改進(jìn)，具有快速定性和定量、靈敏度高、適用范圍廣、結(jié)果判定客觀、成本低和可同時(shí)進(jìn)行數(shù)千份樣品的檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，因此該方法已經(jīng)面世，便被迅速推廣。從而沙門氏菌、腸出血性大腸桿菌0157:H7、志賀氏 菌、金黃色葡萄球菌等食源性微生物的ELISA檢測(cè)方法被廣泛的應(yīng)用在實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)檢驗(yàn)中。目前，國(guó)內(nèi)外還沒有建立針對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)方法，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，該方法具有檢測(cè)耗時(shí)較短和操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，該試劑盒填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)還沒有建立針對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的ELISA檢測(cè)方法的空白，且具有較高的靈敏度和特異性。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案
脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，包括以下試劑
(1)包被液將I.59g Na2CO3和2. 93g NaHCO3加水充分溶解后，將pH調(diào)到9. 6后，加去離子水定容為IL ；
(2)PBS 緩沖液將準(zhǔn)確稱量 8g NaCUO. 2g KCl、1.42g Na2HPO4 和 O. 27g KH2PO4 充分溶液在800mL去離子水中，然后滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)到7. 4，然后加去離子水定容至IL ；
(3)PBST洗滌液向IL PBS緩沖液中加入500 μ L Tween-20 ；
(4)檢測(cè)抗體稀釋液取IOmL37°C過夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液，12000rpm離心3min收集菌體，用PBS洗滌兩次后，加入3mL PBS重懸菌體，超聲破碎30min，超聲5s、間隔5s ;將超聲破碎后的液體在4°C，12000rpm離心30min，收集的上清為大腸桿菌裂解，即檢測(cè)抗體稀釋液；
(5)封閉液1%牛血清白蛋白BSA;
(6)終止液由10.87mL的濃硫酸與89. 13mL的去離子水混合配制成的2M H2SO4 ；
(7)包被抗原菌體蛋白，濃度為20μg/mL ；
(8)檢測(cè)抗體脂環(huán)酸芽孢桿菌的兔抗血清，即脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體，采用檢測(cè)抗體稀釋液稀釋，稀釋度為1:320 ;
(9)酶標(biāo)二抗辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG，采用PBS稀釋，稀釋度為I:10000 ；(10)顯色液TMB顯色液。具體地，步驟(7)所述的包被抗原的制備方法，包括以下步驟
將脂環(huán)酸芽孢桿菌接種到IOmL的K氏培養(yǎng)液中，在220rpm，42°C條件下進(jìn)行活化培養(yǎng)后，12，OOOrpm離心3min收集菌體,用PBS洗漆兩次,加入3mL的PBS重懸菌體,在冰浴條件下超聲破碎30min，其中超聲5s，間隔5s ;將超聲破碎后的液體在4°C，12，OOOrpm離心30min，收集的上清即為包被抗原，并用紫外分光光度計(jì)測(cè)定上清液中總蛋白的濃度。具體地，步驟(8)所述的脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體的制備方法，包括以下步驟
(1)選取健康的雄性大白兔2只，適應(yīng)一周后，進(jìn)行免疫，其中一只注射制備的包被抗原，另一只注射PBS作為空白對(duì)照。一免2周后進(jìn)行二免，以后每隔一周免疫一次，一共免疫4次；第一次免疫時(shí)將免疫蛋白溶液與弗氏完全佐劑I: I的比例進(jìn)行乳化，其他三次均為弗氏不完全佐劑，免疫方式為皮下多點(diǎn)注射；
(2)對(duì)于后期血清的大量采取選擇心臟采血，整個(gè)采血過程需要無菌操作；將采取的血樣放置于37°C溫箱lh，再放置于4°C中放置5h后1，500rpm離心30min，將上清用移液槍吸到另一個(gè)滅菌的離心管中，分裝后_20°C冰箱中保存?zhèn)溆谩＞唧w地，脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述包被抗原的條件為4°C包被過夜或37°C包被2h。具體地，脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述酶標(biāo)二抗的工作條件為37°C 孵育 60min。具體地，脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)底物時(shí)的反應(yīng)時(shí)間為室溫條件下lOmin。脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒在脂環(huán)酸芽孢桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用。脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用包括以下步驟
(1)從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條，用包被液按1:10稀釋待測(cè)樣本，每孔加入IOOul稀釋好的樣本，用封口膜封住反應(yīng)孔，37°C溫箱孵育2小時(shí)；
(2)取掉封口膜,每孔加滿洗漆液,加入后靜置2分鐘后扣除液體,重復(fù)操作3次,最后一次拍干；
(3)每孔加入100ul封閉液，用封口膜封住反應(yīng)孔，37°C溫箱孵育2小時(shí)；
(4)同步驟“2”；
(5)每孔加入IOOul1:320稀釋的檢測(cè)抗體，37°C溫箱孵育I小時(shí)；
(6)同步驟“2”；
(7)加入工作濃度的酶標(biāo)二抗，每孔100ul，用封口膜封口，37°C溫箱孵育I小時(shí)；
(8)取掉封口膜,每孔加滿洗漆液,加入后靜置2分鐘后扣除液體,重復(fù)操作5次,最后一次拍干；
(9)加入顯色液TMBIOOul/孔，避光37°C孵箱，避光孵育15分鐘；
(10)加入終止液IOOul/孔，混勻后即刻置于酶標(biāo)儀中450nm測(cè)量每孔的OD；
(11)判斷標(biāo)準(zhǔn)樣本OD值大于0.3時(shí)判為陽性，小于0.2時(shí)判為陰性，若處于
O.2^0. 3判為可疑；可疑樣品需要重復(fù)操作進(jìn)行二次鑒定。本發(fā)明具有以下有益效果
目前，國(guó)內(nèi)還沒有建立針對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的ELISA檢測(cè)方法，故在此與傳統(tǒng)檢測(cè)方法比較后發(fā)現(xiàn)，該方法具有檢測(cè)耗時(shí)較短和操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。且相比一般的PCR檢測(cè)方法，該方法具有活菌檢測(cè)的效果。分別以大腸埃希氏菌、沙門氏菌、志賀氏桿菌、金黃色葡萄球菌等菌的超聲破碎的上清液進(jìn)行包被，同時(shí)以包被脂環(huán)酸芽孢桿菌和不包被的為陽性和陰性對(duì)照，進(jìn)行ELISA檢測(cè)。結(jié)果表明建立的ELISA方法具有較高的特異性。


附圖用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中 圖I是本發(fā)明的封閉試劑的選擇的示意 圖2是本發(fā)明酶標(biāo)酶標(biāo)二抗稀釋度的選擇的示意 圖3是本發(fā)明中TMB在不同反應(yīng)時(shí)間的P/N值比較。在圖2中，I代表1:1000稀釋；2代表1:2000稀釋；3代表1:3000稀釋；4代表1:4000稀釋;5代表1:5000稀釋;6代表1:6000稀釋。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。I材料和方法 I. I菌株及血清
脂環(huán)酸芽孢桿菌購自德國(guó)菌種保藏中心(編號(hào)'DSM3299T、;脂環(huán)酸芽孢桿菌的陽性血清和陰性血清為自制血清。1.2主要試劑
辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG購自上海生工生物工程有限公司，96孔可拆卸的酶標(biāo)板購自Nunc公司；BSA購自Sigama公司；其他試劑均為進(jìn)口分裝或國(guó)產(chǎn)分析純。I. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
健康成年的大白兔2只，雄性，購自中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。I. 4 ELISA相關(guān)溶液的配制
(1)包被液將I.59g Na2CO3和2. 93g NaHCO3加水充分溶解后，將pH調(diào)到9. 6后，加去離子水定容為IL ；
(2)PBS 緩沖液將準(zhǔn)確稱量 8g NaCUO. 2g KCl、1.42g Na2HPO4 和 O. 27g KH2PO4 充分溶液在800mL去離子水中，然后滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)到7. 4，然后加去離子水定容至IL ；
(3)PBST洗滌液向IL PBS緩沖液中加入500 μ L Tween-20 ；
(4)檢測(cè)抗體稀釋液取IOmL37°C過夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液，12000rpm離心3min收集菌體，用PBS洗滌兩次后，加入3mL PBS重懸菌體，超聲破碎30min，超聲5s、間隔5s ;將超聲破碎后的液體在4°C，12000rpm離心30min，收集的上清為大腸桿菌裂解，即檢測(cè)抗體稀釋液；
(5)封閉液1%牛血清白蛋白BSA;
(6)終止液由10.87mL的濃硫酸與89. 13mL的去離子水混合配制成的2M H2SO4 ；(7)包被抗原菌體蛋白，濃度為20μg/mL ；
(8)檢測(cè)抗體脂環(huán)酸芽孢桿菌的兔抗血清，即脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體，采用檢測(cè)抗體稀釋液稀釋，稀釋度為1:320 ;
(9)酶標(biāo)二抗辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG，采用PBS稀釋，稀釋度為I:10000 ；
(10)顯色液TMB顯色液。1.5包被抗原的制備
將脂環(huán)酸芽孢桿菌接種到IOmL的K氏培養(yǎng)液中，在220rpm，42°C條件下進(jìn)行活化培養(yǎng)后，12，OOOrpm離心3min收集菌體,用PBS洗漆兩次,加入3mL的PBS重懸菌體,在冰浴條件下超聲破碎30min，其中超聲5s，間隔5s。將超聲破碎后的液體在4°C，12，OOOrpm離心30min，收集的上清即為包被抗原。并用紫外分光光度計(jì)測(cè)定上清液中總蛋白的濃度。 1.6脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體的制備 I. 6. I免疫方案
選取健康的雄性大白兔2只，適應(yīng)一周后，進(jìn)行免疫，其中一只注射制備的包被抗原，另一只注射PBS作為空白對(duì)照。一免2周后進(jìn)行二免，以后每隔一周免疫一次，一共免疫4次。第一次免疫時(shí)將免疫蛋白溶液與弗氏完全佐劑1:1的比例進(jìn)行乳化，其他三次均為弗氏不完全佐劑，免疫方式為皮下多點(diǎn)注射。I. 6. 2血清的采取與分離
對(duì)于后期血清的大量采取選擇心臟采血，整個(gè)采血過程需要無菌操作。將采取的血樣放置于37°C溫箱lh，再放置于4°C中放置5h后1，500rpm離心30min，將上清用移液槍吸到另一個(gè)滅菌的離心管中，分裝后_20°C冰箱中保存?zhèn)溆?。I. 7 ELISA最佳反應(yīng)條件的確立
I.7. I抗原包被濃度及抗血清稀釋度的確定
抗原的最佳包被濃度和血清的最佳稀釋濃度是利用棋盤滴定法來確定。用包被液將定量的抗原稀釋到濃度分別為 80 μ g/mL、40 μ g/mL、20 μ g/mL、10 μ g/mL、5 μ g/mL、2. 5 μ g/mL、I. 25 μ g/mL 和 0. 625 μ g/mL?？寡搴完幮匝宓南♂尣捎脵z測(cè)抗體預(yù)中和液作為血清稀釋液，按照2倍遞次稀釋，血清稀釋分別為10、20、40、80、160、320、640和1280倍。I. 7. 2抗原的最佳包被條件
分別以37 °C 2h和4°C過夜進(jìn)行包被，對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的陽性和陰性血清進(jìn)行ELISA檢測(cè)，通過P/N來確定最佳的包被條件。I. 7. 3封閉液的優(yōu)化
其他條件一致的情況下，分別用5%胎牛血清、10%胎牛血清、5%脫脂奶粉、10%脫脂奶粉、O. 5%牛血清白蛋白和1%牛血清白蛋白進(jìn)行封閉，以未封閉的作為陰性對(duì)照，根據(jù)P/N值來確定最優(yōu)的封閉液。I. 7. 4酶標(biāo)二抗最優(yōu)工作濃度的確定
將 HRP 標(biāo)記的兔抗豬抗體作 1:1000、1:2000、1 :3000、1:4000、1:5000、1:6000 稀釋后，在其它條件一致的情況下，根據(jù)P/N值確定酶標(biāo)二抗的最優(yōu)工作濃度。I. 7. 5酶標(biāo)二抗作用時(shí)間的確定將酶標(biāo)二抗按照最優(yōu)的稀釋比例稀釋后，分別在37°C條件下孵育15min、30min、45min、60min,根據(jù)P/N值確定最佳作用時(shí)間。1.7.6底物反應(yīng)時(shí)間的確定
室溫條件下分別于底物溶液避光反應(yīng)5min、10min、15min、20min、30min,根據(jù)P/N值來確定最佳的反應(yīng)時(shí)間。I. 8特異性實(shí)驗(yàn)
分別以大腸埃希氏菌、沙門氏菌、志賀氏桿菌、金黃色葡萄球菌等菌的超聲破碎的上清液進(jìn)行包被，每種細(xì)菌裂解液包被I行(12孔)重復(fù)，同時(shí)以包被脂環(huán)酸芽孢桿菌和不包被 的為陽性和陰性對(duì)照，各I行重復(fù)。用優(yōu)化的條件進(jìn)行檢測(cè)是否會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。I. 9判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
在最佳反應(yīng)條件下，以50份增菌培養(yǎng)后經(jīng)PCR檢測(cè)和常規(guī)培養(yǎng)法檢測(cè)脂環(huán)酸芽孢桿菌陰性的蘋果汁包被酶標(biāo)板進(jìn)行ELISA檢測(cè)，讀取OD值。計(jì)算出陰性樣本OD值的平均值X和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，樣本的S/P值彡X+3SD時(shí)，為陽性；S/P值彡X+2SD時(shí)，為陰性；介于二者之間則為可疑。S/P=(樣品OD-標(biāo)準(zhǔn)陰性血清OD)/(標(biāo)準(zhǔn)陽性血清OD-標(biāo)準(zhǔn)陰性血清0D)。I. 10送檢樣品的檢測(cè)與驗(yàn)證
將送檢的50份樣品和3份人工污染脂環(huán)酸芽孢桿菌的果汁樣品，用建立的ELISA檢測(cè)方法、PCR、多重PCR和分離培養(yǎng)法分別進(jìn)行檢測(cè)，并比較其實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果。2試驗(yàn)結(jié)果
2.I抗原包被濃度及抗血清稀釋度的確定
通過方陣滴定法當(dāng)OD值為I. O時(shí)對(duì)應(yīng)的抗原的稀釋度和血清的稀釋度即為最優(yōu)抗原包被濃度和最佳的血清稀釋度。包被抗原的最佳濃度為20μ g/mL，抗血清的稀釋度為1:320 (見表 I)。
權(quán)利要求
1.脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括以下試劑 (1)包被液將I.59g Na2CO3和2. 93g NaHCO3加水充分溶解后，將pH調(diào)到9. 6后，加去離子水定容為IL ； (2)PBS 緩沖液將準(zhǔn)確稱量 8g NaCUO. 2g KCl、1.42g Na2HPO4 和 0. 27g KH2PO4 充分溶液在800mL去離子水中，然后滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)到7. 4，然后加去離子水定容至IL ； (3)PBST洗滌液向IL PBS緩沖液中加入500 u L Tween-20 ； (4)檢測(cè)抗體稀釋液取IOmL37°C過夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液，12000rpm離心3min收集菌體，用PBS洗滌兩次后，加入3mL PBS重懸菌體，超聲破碎30min，超聲5s、間隔5s ;將超聲破碎后的液體在4°C，12000rpm離心30min，收集的上清為大腸桿菌裂解，即檢測(cè)抗體稀釋液； (5)封閉液1%牛血清白蛋白BSA; (6)終止液由10.87mL的濃硫酸與89. 13mL的去離子水混合配制成的2M H2SO4 ； (7)包被抗原菌體蛋白，濃度為20iig/mL ； (8)檢測(cè)抗體脂環(huán)酸芽孢桿菌的兔抗血清，即脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體，采用檢測(cè)抗體稀釋液稀釋，稀釋度為1:320 ; (9)酶標(biāo)二抗辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG，采用PBS稀釋，稀釋度為I:10000 ； (10)顯色液TMB顯色液。
2.權(quán)利要求I的步驟(7)所述的包被抗原的制備方法，包括以下步驟 將脂環(huán)酸芽孢桿菌接種到IOmL的K氏培養(yǎng)液中，在220rpm，42°C條件下進(jìn)行活化培養(yǎng)后，12，OOOrpm離心3min收集菌體,用PBS洗漆兩次,加入3mL的PBS重懸菌體,在冰浴條件下超聲破碎30min，其中超聲5s，間隔5s ;將超聲破碎后的液體在4°C，12，OOOrpm離心30min，收集的上清即為包被抗原，并用紫外分光光度計(jì)測(cè)定上清液中總蛋白的濃度。
3.權(quán)利要求I的步驟(8)所述的脂環(huán)酸芽孢桿菌多克隆抗體的制備方法，包括以下步驟 (1)選取健康的雄性大白兔2只，適應(yīng)一周后，進(jìn)行免疫，其中一只注射制備的包被抗原，另一只注射PBS作為空白對(duì)照， 一免2周后進(jìn)行二免，以后每隔一周免疫一次，一共免疫4次；第一次免疫時(shí)將免疫蛋白溶液與弗氏完全佐劑1:1的比例進(jìn)行乳化，其他三次均為弗氏不完全佐劑，免疫方式為皮下多點(diǎn)注射； (2)對(duì)于后期血清的大量采取選擇心臟采血，整個(gè)采血過程需要無菌操作；將采取的血樣放置于37°C溫箱lh，再放置于4°C中放置5h后1，500rpm離心30min，將上清用移液槍吸到另一個(gè)滅菌的離心管中，分裝后_20°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述包被抗原的條件為4°C包被過夜或37°C包被2h。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗的工作條件為37°C孵育60min。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)底物時(shí)的反應(yīng)時(shí)間為室溫條件下lOmin。
7.權(quán)利要求1、4、5、6任意一項(xiàng)所述脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒在脂環(huán)酸芽孢桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟 (1)從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條，用包被液按1:10稀釋待測(cè)樣本，每孔加入IOOul稀釋好的樣本，用封口膜封住反應(yīng)孔，37°C溫箱孵育2小時(shí)； (2)取掉封口膜,每孔加滿洗漆液,加入后靜置2分鐘后扣除液體,重復(fù)操作3次,最后一次拍干； (3)每孔加入100ul封閉液，用封口膜封住反應(yīng)孔，37°C溫箱孵育2小時(shí)； (4)同步驟“2”； (5)每孔加入IOOul1:320稀釋的檢測(cè)抗體，37°C溫箱孵育I小時(shí)； (6)同步驟“2”；(7)加入工作濃度的酶標(biāo)二抗，每孔100ul，用封口膜封口，37°C溫箱孵育I小時(shí)； (8)取掉封口膜,每孔加滿洗漆液,加入后靜置2分鐘后扣除液體,重復(fù)操作5次,最后一次拍干； (9)加入顯色液TMBIOOul/孔，避光37°C孵箱，避光孵育15分鐘； (10)加入終止液IOOul/孔，混勻后即刻置于酶標(biāo)儀中450nm測(cè)量每孔的OD； (11)判斷標(biāo)準(zhǔn)樣本OD值大于0.3時(shí)判為陽性，小于0.2時(shí)判為陰性，若處于-0.2^0. 3判為可疑；可疑樣品需要重復(fù)操作進(jìn)行二次鑒定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，包括(1)-(10)的組分。同時(shí)，本發(fā)明還公開了脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒的使用方法。本發(fā)明提出的脂環(huán)酸芽孢桿菌的間接ELISA檢測(cè)試劑盒填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)沒有建立針對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的ELISA檢測(cè)方法的空白，且具有較高的靈敏度和特異性。
文檔編號(hào)C07K16/06GK102768276SQ201210255219
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月23日
發(fā)明者劉磊, 張亮, 郭玉蓉 申請(qǐng)人:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)