專利名稱：多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及骨肽的制備。
背景技術(shù)：
多肽活性物質(zhì)是治療骨科疾病的藥物骨肽的有效成分，多肽活性物質(zhì)取之于健康動(dòng)物的四肢骨，其含有10多種與骨代謝有關(guān)的生長(zhǎng)因子骨生長(zhǎng)因子、骨原性生長(zhǎng)因子、軟骨原性生長(zhǎng)因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子白介素-6、Y-干擾素以及有機(jī)鈣、磷、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、氨基酸等。可誘導(dǎo)機(jī)體分泌骨源性細(xì)胞因子，在體內(nèi)起到促進(jìn)骨折愈合、鎮(zhèn)痛、減輕結(jié)締組織炎癥、促使退行變的骨恢復(fù)正常等作用。藥物骨肽在臨床使用中經(jīng)常有不良反應(yīng)，其緣由除了用藥不當(dāng)之外最主要是多肽活性物質(zhì)生產(chǎn)エ藝的簡(jiǎn)單粗放，導(dǎo)致骨肽組分復(fù)雜，注射后和人體產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)所致。
活性骨肽是國(guó)際醫(yī)藥、食品、保健品界最熱門的研究課題，在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。我國(guó)是世界上養(yǎng)豬最多的國(guó)家，骨資源極為豐富，但對(duì)于骨蛋白的營(yíng)養(yǎng)源利用卻很落后，目前開發(fā)豬骨的潛カ很大，前景也很廣闊，豬骨的綜合利用可以變廢為寶，對(duì)降低企業(yè)綜合成本，提高經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義和價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種純度高、提取效率高、成本低的多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，包括以下步驟
①取新鮮的健康動(dòng)物四肢骨，剔除殘肉及結(jié)締組織，用純化水清洗干凈；
②將步驟①得到的四肢骨破碎，按骨與鹽水重量比I: 1-5，加入酸化NaCL溶液，NaCL溶液濃度為O. 1-0.8%，提取溫度為120-125°C，壓カ為O. 1-0. 12MPa，提取2_4h，過(guò)濾，按濾渣與鹽水重量比I : 1-5，加入60°C左右的酸化NaCL溶液攪拌后，按上述溫度和壓カ條件提取4-10h，過(guò)濾，合并兩次濾液，合并兩次提取液，待提取液冷卻至5°C左右，靜置12-48h，除去上層脂肪；
③將步驟②得到的去脂肪后的提取液以及兩次濾液緩慢加入I.5-3倍體積、預(yù)冷至0°C左右的丙酮中，靜置24-36h，過(guò)濾，濾液于20-35°C減壓濃縮并除去丙酮；
④將步驟③得到的濃縮液，添加O.1-3%的H2O2，用酸溶液調(diào)pH至2-3，于5_10°C靜置12h左右,過(guò)濾去除沉淀,或在5-l(TC,4000r/min離心IOmin除去沉淀,濾液用堿溶液調(diào)pH至8-10，再于5-10°C靜置12h左右過(guò)濾去除沉淀，或在5-10°C，離心除去沉淀，濾液用酸溶液調(diào)pH至6. 8-7. 2后，按濾液重量加預(yù)先濕潤(rùn)的O. 1-0. 3%針劑用活性碳，煮沸30min左右，在60°C左右抽濾；
⑤將步驟④得到的濾液進(jìn)行高純度過(guò)濾，濾液冷凍干燥，包括三個(gè)階段-34- -(TC預(yù) 凍2-4h、-20°C左右低溫升華16-24h和30°C左右高溫干燥6_10h，得多肽活性物質(zhì)凍干粉。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是，步驟①中所述的動(dòng)物四肢骨為豬四肢骨以及胎牛四肢骨。本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是，步驟②中所述的酸化NaCL溶液是指在NaCL溶液中加入HCL進(jìn)行酸化，NaCL溶液濃度為O. 1-0. 8%，酸化后的溶液pH值為4. 5 -6. 5。本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是，步驟④中所述的濃縮液添加總體積O. 1-3%的H2O2,所述雙氧水的溶液濃度為25-30%。本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是，步驟④中所述靜置、過(guò)濾去除沉淀是于5-10°C至少靜置IOh或在5-10°C，4000r/min離心除去沉淀。本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是，步驟④中所述酸溶液為為鹽酸溶液、所述的堿溶液為氫氧化鈉溶液。 本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案是,步驟⑤中所述的高純度過(guò)濾是指采用O. 45μηι以下過(guò)濾，再用O. 22 μ m以下微孔濾膜抽濾,或采用5-10KD超濾。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
①取新鮮的健康豬四肢骨，剔除殘肉及結(jié)締組織，稱重709.7g用純化水清洗干凈；
②將步驟①得到的四肢骨破碎，按骨與鹽水重量比I:2，加入酸化NaCL溶液(HCL進(jìn)行酸化，酸化后的溶液PH值為5)，NaCL溶液濃度為0.8%，提取溫度為120°C，壓カ為O. IMPa,提取2h，過(guò)濾，按濾渣2倍體積加入60°C左右的酸化NaCL溶液攪拌后(HCL進(jìn)行酸化，酸化后的溶液PH值為5)，NaCL溶液濃度為O. 8%，按上述溫度和壓カ條件提取4h，過(guò)濾，合并兩次提取液，待提取液冷卻至5°C以下，靜置12h，除去上層脂肪；
③將步驟②得到的去脂肪后的提取液以及兩次濾液緩慢加入I.5倍體積、預(yù)冷至0°C的丙酮中，靜置24h，過(guò)濾，濾液于20°C左右減壓濃縮并除去丙酮；
④將步驟③得到的濃縮液，添加總體積3%的H2O2，所述雙氧水的溶液濃度為30%，用氯化氫溶液調(diào)pH至3,于5 °C靜置12h左右,過(guò)濾去除沉淀,濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至8-10,再于5°C靜置12h左右過(guò)濾去除沉淀,濾液用氯化氫溶液調(diào)pH至6. 8后,加預(yù)先濕潤(rùn)的O. 1%針劑用活性碳，煮沸30min左右，降溫至60°C抽濾，除去活性碳；
⑤將步驟④得到的濾液，用O.45 μ m過(guò)濾，再用O. 22 μ m微孔濾膜抽濾，濾液冷凍干燥，包括三個(gè)階段置于冷凍干燥機(jī)-34°C預(yù)凍4h、-20°C低溫升華16h和30°C高溫干燥6h，得多肽活性物質(zhì)凍干粉6. 96克。表一
權(quán)利要求
1.一種多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于包括以下步驟 ①取新鮮的健康動(dòng)物四肢骨，剔除殘肉及結(jié)締組織，用純化水清洗干凈； ②將步驟①得到的四肢骨破碎，按骨與鹽水重量比I: 1-5，加入酸化NaCL溶液，提取溫度為120-125°C，壓力為0. 1-0. 12MPa，提取結(jié)束后過(guò)濾，按濾渣與鹽水重量比I :1_5，加入酸化NaCL溶液攪拌后，按上述溫度和壓力條件提取，過(guò)濾，合并兩次提取液，待提取液冷卻至5°C左右，靜置、過(guò)濾除去上層脂肪； ③將步驟②得到的去脂肪后的提取液以及兩次濾液緩慢加入I.5-3倍體積、預(yù)冷至(TC左右的丙酮中，靜置、過(guò)濾，濾液于20-35°C減壓濃縮并除去丙酮； ④將步驟③得到的濃縮液，添加濃縮液體積的0.1-3%的H2O2，用酸溶液調(diào)pH至2-3，于5-10°C進(jìn)行液固分離,濾液用堿溶液調(diào)pH至8-10,再于5-10°C進(jìn)行液固分離,濾液用酸溶液調(diào)PH至6. 8-7. 2后，按濾液重量加0. 1-0. 3%針劑用活性碳，煮沸后抽濾； ⑤將步驟④得到的濾液進(jìn)行高純度過(guò)濾，濾液冷凍干燥，包括三個(gè)階段-34°C預(yù)凍2-4h、_20°C左右低溫升華16-24h和30°C左右高溫干燥6_10h，得多肽活性物質(zhì)凍干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟①中所述的動(dòng)物四肢骨為豬四肢骨以及胎牛四肢骨。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟②中所述的酸化NaCL溶液是指在NaCL溶液中加入HCL進(jìn)行酸化，NaCL溶液濃度為0. 1-0. 8%，酸化后的溶液PH值為4. 5 -6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟④中所述雙氧水的溶液濃度為25-30%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟④中所述液固分離，是于5-10°C至少靜置10h，采用過(guò)濾進(jìn)行液固分離，或在5-10°C，4000r/min離心除去沉淀。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟④中所述酸溶液為鹽酸溶液、所述的堿溶液為氫氧化鈉溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，其特征在于步驟⑤中所述的高純度過(guò)濾是指采用0. 45 ii m以下過(guò)濾,再用0. 22 ii m以下微孔濾膜抽濾,或采用5-10KD超濾。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多肽活性物質(zhì)凍干粉的制備方法，包括以下步驟①動(dòng)物四肢骨加酸化鹽水高溫高壓提取，過(guò)濾，骨渣加酸化鹽水第2次提取，合并濾液，②冷卻去除脂肪，丙酮沉淀，過(guò)濾。③蒸餾去除丙酮，HCL調(diào)pH，煮沸，靜置，過(guò)濾，NaOH調(diào)pH，靜置過(guò)濾，濾液調(diào)pH至中性，過(guò)濾，④加入0.1-0.3%活性碳煮沸，抽濾，超濾，冷凍干燥制成多肽活性物質(zhì)凍干粉。
文檔編號(hào)C07K1/14GK102675413SQ201210166319
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月27日
發(fā)明者荊志宇 申請(qǐng)人:淮安麥德森制藥有限公司