專利名稱：授精預(yù)測和促進的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及授精，特別是涉及預(yù)測授精成功的機會的技術(shù)以及提高成功授精的概率的技術(shù)。
背景技術(shù)：
在世界范圍內(nèi)超過12%的生育人群懷孕困難，受到不育影響的大部分女性年齡在15到44歲之間。不育是這個年齡的女性中最常見的醫(yī)學(xué)的失調(diào)。夫婦可以受助于輔助生殖技術(shù)，例如，體外授精(IVF)。IVF是一種卵細(xì)胞在子宮外體外地被精子授精的過程。當(dāng)輔助生殖技術(shù)的其他方法失敗時，IVF是不育癥的主要治療手段。該過程一般涉及激素控制排卵過程、從女性卵巢取出卵子、在流體或培養(yǎng)基中使精子對卵子授精來形成受精卵，受精卵成熟為胚胎。然后將形成的胚胎轉(zhuǎn)移到患者的子宮，以意圖建立成功的妊娠。雖然妊娠率即IVF之后的妊娠成功率在最近幾年提高了很多，臨床的研究報告說在工業(yè)國家中，可能在幾次試驗之后，平均妊娠率達到70%。許多研究致力于再進一步提高這種妊娠率的領(lǐng)域。到目前為止的研究提出，例如，通過改善胚胎植入率和降低流產(chǎn)率，幾種不同的激素物質(zhì)被認(rèn)為提高妊娠率。在美國專利N0.6，649，344中提出了另一種技術(shù)。該專利文獻公開了一種預(yù)測性標(biāo)志物的分析，來表明在哺乳動物中能夠體外成熟(IVM)和隨后IVF的非可受精卵的存在。所述分析是基于測定月經(jīng)周期期間的各個時間血液樣品中抑制素A或雌二醇的存在和相對濃度。仍然需要一種技術(shù)，其容許鑒定具有成功妊娠的良好或不良概率的那些患者，特別是經(jīng)歷IVF的夫婦，以及一種改善成功妊娠的概率的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供能夠鑒定具有成功妊娠的良好或不良概率的受試者的技術(shù)。本發(fā)明的另一個目的是提供可以用于提高女性成功妊娠的概率的技術(shù)。在此公開的實施方式滿足了這些和其他目的。簡要地，本發(fā)明的一個方面涉及預(yù)測IVF的結(jié)局的方法。所述方法包括測定獲自受試者的樣品，例如，體液樣品、組織樣品或卵子樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG (isoformof histidine rich glycoprotein)。然后根據(jù)身體樣品中發(fā)現(xiàn)的亞型富組氨酸糖蛋白HRG的測定，就女性懷孕的概率預(yù)測該受試者的IVF的結(jié)局。本發(fā)明在另一個實施方式中，從樣品中提取受試者的DNA。然后對HRG的外顯子五的至少一部分進行單核苷酸多態(tài)性基因分型。根據(jù)基因分型的結(jié)果預(yù)測IVF的結(jié)局。更詳細(xì)地，如果受試者在HRG基因的外顯子五中SNP多態(tài)性被測定為Ser/Ser純合體，就成功妊娠而言的IVF結(jié)局被預(yù)測為非常低。Pro/Ser雜合體受試者被預(yù)測為具有IVF成功妊娠的低概率，而Pro/Pro純合體受試者被預(yù)測為具有IVF成功妊娠的相對提高的或更高的概率。本發(fā)明的其他方面涉及預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)的方法。所述方法然后涉及測定獲自女性的身體的亞型富組氨酸糖蛋白HRG，或?qū)纳眢w樣品提取的DNA上HRG基因的外顯子五的至少一部分進行SNP基因分型。所述方法然后根據(jù)測定的亞型富組氨酸糖蛋白HRG或根據(jù)SNP基因分型預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)。本發(fā)明的其他方面涉及提高經(jīng)歷IVF的女性的妊娠的成功。方法涉及向包含要體外授精或已經(jīng)體外授精的卵子的流體或培養(yǎng)基施用脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG、或其包含全長HRG蛋白的氨基酸位置204的脯氨酸殘基的氨基酸片段。脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG或其包含全長HRG蛋白的氨基酸位置204的脯氨酸殘基的氨基酸片段在此也被用作生殖力促進藥物，并可以用于陰道組合物中。本發(fā)明的再一方面涉及提高女性，例如經(jīng)歷IVF的女性的妊娠成功的方法。所述方法包括向該女性施用脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG或其包含全長HRG蛋白的氨基酸位置204的脯氨酸殘基的氨基酸片段。附圖簡要說明參考以下的說明和附圖，本發(fā)明和它進一步的目的和優(yōu)點可以被更好的理解，在附圖中:

圖1說明了來自三個不同女性的卵泡液的Western印跡,表明不同的亞型富組氨酸糖蛋白HRG如何在凝膠上遷移。上部的/更大的條帶相應(yīng)于在感興趣的位置中帶有脯氨酸/脯氨酸的亞型(isoform)。下方的/較小的條帶表明在感興趣的位置中帶有絲氨酸/絲氨酸的相應(yīng)于蛋白的亞型。中間加載的樣品來自同一位置帶有絲氨酸/脯氨酸的雜合的女性。帶有脯氨酸/脯氨酸的女性在體外授精之后懷孕，而其他人沒有。圖2是流程圖，說明了根據(jù)一個實施方式預(yù)測體外授精的結(jié)局的方法，包括在蛋白質(zhì)水平上分析HRG。圖3是流程圖，說明了根據(jù)另一個實施方式預(yù)測體外授精的結(jié)局的方法，包括在遺傳學(xué)的水平上分析HRG。圖4說明了胚胎的免疫組織化學(xué)。(A-C)6細(xì)胞胚胎，(D-F)胚囊。利用免疫組織化學(xué)，Dapi (藍(lán)色)表明所有核的位置，HRG位置為紅色。組合的照片重疊了 DAPI和HRG ；因而，在胚囊中觀察到有和沒有HRG的核。在胚囊中，在所有細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中以及在某些細(xì)胞核中見到HRG。在6細(xì)胞胚胎的核中沒有見到HRG。圖5說明了免疫組織化學(xué)染色，其中在㈧子宮內(nèi)膜，⑶輸卵管，(C)子宮肌層，(D)胎盤中檢測到HRG，而在(E)陰性對照中沒有檢出?？s寫是:ST =基質(zhì)細(xì)胞，LE =腔上皮，MC =肌細(xì)胞，LU =腔，V =血管。褐色反應(yīng)的出現(xiàn)表示陽性染色。發(fā)明詳細(xì)說明本發(fā)明一般地涉及生殖力預(yù)測和生殖力促進。本發(fā)明的一個方面涉及體外授精(IVF)，特別是涉及預(yù)測IVF期間胚胎成功的植入的技術(shù)，以及提高IVF成功妊娠概率的技術(shù)。其他方面涉及預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)，以及提高妊娠成功的技術(shù)。本發(fā)明在此公開的實施方式基于預(yù)示物的發(fā)現(xiàn)，其可以用于預(yù)測生殖力狀態(tài)和預(yù)測IVF的成功。這種預(yù)示物是富組氨酸糖蛋白(HRG)以及編碼HRG的基因。
HRG是豐富的多結(jié)構(gòu)域血漿蛋白質(zhì)，已知結(jié)合廣泛的配體，包括纖維蛋白原、肝素和血小板反應(yīng)蛋白。它涉及血管生成，兼具血管生成和抗血管生成性質(zhì)。它被認(rèn)為通過阻斷血小板反應(yīng)蛋白的抗血管生成作用，和/或通過結(jié)合于血纖蛋白溶酶原或結(jié)合于纖溶酶，幫助促進細(xì)胞遷移和侵入，而為促血管生成。然而，已經(jīng)提出HRG的抗血管生成作用受到靶向粘著斑的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的介導(dǎo)，從而中斷血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞運動。另一種抗血管生成性質(zhì)被認(rèn)為通過阻止成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)結(jié)合細(xì)胞外基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞表面來介導(dǎo)。從而這阻止了血管生成生長因子從細(xì)胞外基質(zhì)釋放，并且還向內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)送抗血管生成信號。HRG還涉及纖維蛋白溶解和凝血、補體激活，以及免疫復(fù)合物清除。HRG在肝實質(zhì)性細(xì)胞中產(chǎn)生，并已經(jīng)顯示了作為游離蛋白質(zhì)在血清中、以及在血小板的顆粒體中傳輸。HRG基因定位于人的染色體3q27上。該基因含有七個外顯子和六個內(nèi)含子。外顯子五含有單核苷酸多態(tài)性(SNP)，在本領(lǐng)域中標(biāo)為C/T rs9898，產(chǎn)生脯氨酸(Pro)和絲氨酸(Ser)多態(tài)性。這個位置上的絲氨酸引入了共有的N-糖基化位點(Asn-X-Ser/Thr)。N-糖基化位點的引入導(dǎo)致向天冬酰胺(Asn)殘基添加額外的糖類基團。作為糖基化的結(jié)果，與Pro亞型(isoform)相比，HRG的Ser亞型(isoform)的分子量稍微更高。這意味著來自受試者的HRG的特定亞型(isoform)可以通過分析HRG的分子量來測定。例如，當(dāng)進行Western印跡分析時,有可能區(qū)分不同的亞型HRG,其分別表現(xiàn)為75kDa(Pro亞型)和77kDa(Ser亞型)條帶。以下的序列(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)說明了 HRG基因的外顯子5的核苷酸序列的一部分和相應(yīng)的氨基酸序列。C/T rs9898多態(tài)性根據(jù)序列是明顯的，產(chǎn)生在相關(guān)位點的脯氨酸(密碼子CCC)或絲氨酸(密碼子TCC)。...GTG CGG AAC TGC [C/T]CC AGA CAC CAT TTC...Val Arg Asn Cys Pro/Ser Arg His His Phe...
在Hermann等人的文獻中，在ECHM研究中富組氨酸糖蛋白Prol86Ser多態(tài)性與心肌梗塞不相關(guān)，Thromb Haemost, 1998, 79 (2) =359-361, HRG的這種多態(tài)性一般表示為Prol86Ser，表示相關(guān)的氨基酸殘基是HRG蛋白質(zhì)的氨基酸編號186。然而，蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫例如uniprot和NCBI，另外地將HRG的氨基酸編號204，S卩，Pro204Ser，作為多態(tài)性的相對位置。這種差異的原因是HRG蛋白包含可從蛋白上裂解的信號肽。具有信號肽的HRG帶有氨基酸編號204作為多態(tài)性的相對位置，而在沒有信號肽的HRG中這個多態(tài)性位置是氨基酸編號186。然而，在所有這些情況中，相關(guān)的Pro/Ser氨基酸和CCC/TCC密碼子分別存在于上文提出的HRG蛋白和HRG基因的上下文或座位內(nèi)。已經(jīng)進行了研究，其驗證了在女性妊娠成功和體外授精成功與亞型HRG和在HRG的上述位置的Pro或Ser的編碼HRG的基因變體之間存在顯著關(guān)聯(lián)。在下文中，Ser亞型表述被用于表示在上述HRG的氨基酸序列的部分中指定位置處氨基酸為絲氨酸的亞型HRG，而Ρι.ο亞型表示這個位置的氨基酸編號為脯氨酸的亞型HRG。參考圖2，因此，一個方面涉及預(yù)測女性的體外授精成功、或預(yù)測就是否成功妊娠而言的女性的體外受精結(jié)局的方法。所述方法任選地包括在步驟SI中從經(jīng)歷IVF的夫婦中的男性和女性的至少一人采集包含HRG蛋白的身體樣品。根據(jù)這個方面，可以使用包含至少可檢測數(shù)量的HRG的任何身體樣品。這意味著可以使用身體組織樣品和體液樣品。一般地，體液樣品是優(yōu)選的，因為與身體組織樣品相比它們一般更容易采集和操作。根據(jù)這個方面可以使用的非限制性的、但優(yōu)選的體液樣品是卵泡液樣品、血漿樣品和血液樣品。根據(jù)該方面，獲自女性和/或男性的身體樣品中存在的亞型HRG在步驟S2中測定。作為選擇，或除了測定獲自經(jīng)歷IFV的女性和提供精子的男性的至少一人的身體樣品的亞型HRG之外，所述精子在體外授精至少一個卵子以形成要植入到女性子宮中的至少一個胚胎，可以就亞型HRG而言研究獲自至少一個卵子的樣品。因此，除了從女性采集身體樣品之外或作為補充，可以使用獲自該女性的卵子的樣品，或甚至是獲自產(chǎn)生的胚胎的樣品。如果卵子來自捐贈者而非要植入至少一個受精卵即胚胎的女性，測定來自卵子樣品的亞型HRG是特別適合的。然后在步驟S3中根據(jù)身體樣品和/或卵子/胚胎樣品中測定的亞型HRG，預(yù)測女性的體外授精的估計的成功，或女性的體外授精的結(jié)局。體外授精的成功在此被認(rèn)為是產(chǎn)生妊娠的體外授精。如果樣品至少從女性或卵子采集是優(yōu)選的，但是優(yōu)選的從女性或卵子、以及男性都采集。作為選擇，樣品可以僅從涉及IVF、以及捐獻精子用于體外授精女性的卵子的夫婦的男性采集。如在此處更詳細(xì)地討論的，Ser亞型為純合體的女性具有非常低以及接近零的體外授精成功妊娠概率。具有Ser亞型和Per亞型的女性具有稍微更高的產(chǎn)生授精和妊娠的體外受精成功概率，雖然它們?nèi)匀皇呛艿偷某晒β?。這應(yīng)當(dāng)與Pro亞型為純合體的女性相t匕，與具有Ser亞型的女性相比其具有顯著的更好的體外授精成功概率。預(yù)期的是，就女性懷孕而言的IVF成功還取決于供給精子用于體外授精卵子的男性的亞型HRG。如在此進一步公開的，胚胎也產(chǎn)生HRG并認(rèn)為來自胚胎的HRG對于成功妊娠的概率是重要的。成功妊娠的概率因此取決于胚胎的亞型HRG，其隨后取決于提供卵子的女性和提供精子的男性的遺傳構(gòu)成。在優(yōu)選的實施方式中，(身體)樣品中亞型的測定通過估計(身體)樣品中HRG的分子量來進行。由于Ser亞型的N-糖基化位點的引入，兩種亞型HRG之間存在可檢測的分子量差異。因此，根據(jù)這個實施方式可以使用可應(yīng)用于(體液)樣品并且能夠區(qū)分亞型HRG,即，根據(jù)Western印跡分析測定的75kDa與77kDa的分子量的任何分子量測定技術(shù)。這種簡單的具有成本效益和快速的技術(shù)是Western印跡,其容許在幾小時內(nèi)測定(身體)樣品中的亞型HRG。然而,Western印跡應(yīng)該僅被看作是可以使用的分子量測定技術(shù)的說明性的實例。不一定需要根據(jù)分子量測量來測定和鑒定兩種亞型HRG。在可選擇的方法中，ELISA測試可以用于檢測(身體)樣品中一種或兩種亞型HRG的存在。ELISA測試是基于特異性結(jié)合Ser亞型但不結(jié)合Pro亞型的抗體、特異性結(jié)合Pro亞型但不結(jié)合Ser亞型的抗體，或優(yōu)選的特異性結(jié)合Ser亞型但不結(jié)合Pro亞型的抗體以及特異性結(jié)合Pro亞型但不結(jié)合Ser亞型的抗體。在前兩種情況中，僅需要使用單次ELISA測試。因此，如果ELISA測試證實了 Ser亞型的存在，預(yù)測的IVF成功被設(shè)置為低的，S卩，Ser亞型的純合體或雜合體。如果ELISA測試使用抗體不能測出Ser亞型的存在，女性是Pro/Pro純合體，因而具有相對更高的預(yù)測的IVF成功。如果抗體替換為特異性結(jié)合Pro亞型，ELISA沒有檢測任何HRG的存在，女性被確定為Ser/Ser純合體，因而具有非常低的預(yù)測的IVF成功概率。Pro亞型的檢出意味著該女性可能具有高的成功IVF概率(Ρι /Ρι 純合體)或者低但不是極低的成功IVF概率(pro/Ser雜合體)。雖然優(yōu)選的是進行兩次不同的ELISA測試來驗證女性是Ser/Ser純合體、Pro/Pro純合體還是Pro/Ser雜合體。例如，在ELISA測試中使用的針對兩種不同亞型HRG的單克隆抗體可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的技術(shù)來制造。簡要地，單克隆抗體一般通過將骨髓瘤細(xì)胞與來自用所需抗原進行免疫的小鼠的脾臟細(xì)胞融合來制備。然而，新的進展允許使用兔B-細(xì)胞。作為選擇可以使用本領(lǐng)域已知的生產(chǎn)抗體的其他技術(shù)。實際上，可以用于蛋白質(zhì)診斷以驗證特定亞型HRG存在的任何分析可以根據(jù)本發(fā)明來使用。當(dāng)利用分子量測定方法來測定(身體)樣品中的亞型HRG時，所述方法優(yōu)選地涉及測定亞型HRG的75kDa和77kDa的至少一種的存在。在下文中，75kDa亞型表示通過Western印跡測定具有75kDa分子量的亞型HRG，其相應(yīng)于Pro亞型。相應(yīng)地，77kDa亞型表示通過Western印跡測定具有77kDa分子量的亞型HRG,其相應(yīng)于Ser亞型。然后根據(jù)75kDa亞型的存在、77kDa亞型的存在，或根據(jù)75kDa和77kDa亞型兩者的存在來進行IVF成功的預(yù)測。如果確定了(身體)樣品包含HRG的77kDa亞型，所述預(yù)測涉及預(yù)測IVF低成功。此外，如果(身體)樣品包含75kDa和77kDa亞型兩者，IVF的成功概率被確定為是低的，而如果(身體)樣品僅包含77kDa亞型，概率被預(yù)測為是非常低的。僅具有HRG75kDa亞型的相應(yīng)(身體)樣品的受試者被預(yù)測為具有相對高的IVF成功概率。在此對 于IVF的成功使用的表述“低”、“非常低”和“高”僅僅作為相對術(shù)語來給出，其定義了三種不同類別女性的成功概率如何，即，Ser/Ser純合體、Pro/Ser雜合體和Pro/Pro純合體。已經(jīng)在兩項不同的研究中進行了實驗結(jié)果。在這些研究中，Ser/Ser純合體女性都沒有從IVF懷孕，因而它們被認(rèn)為具有非常低的IVF成功概率。在兩項研究中經(jīng)歷IVF的17%和33%的Pro/Ser雜合體女性懷孕，而57%和70%的Pro/Pro純合體女性懷孕。低成功機會因而意味著從IVF懷孕的概率低于平均值，高成功機會則意味著妊娠的概率高于人類群體的平均值。IVF成功的預(yù)測不一定要在蛋白質(zhì)水平上基于亞型HRG分析來進行。清楚地對比，SNP基因分型可以作為代替用于在DNA基礎(chǔ)上進行分析。參考圖3，因而另一個方面涉及預(yù)測女性的IVF成功、或預(yù)測女性的IVF結(jié)局的方法，通過在步驟Sll中任選地采集來自經(jīng)歷IVF的女性和/或男性受試者的身體。身體樣品可以是身體組織樣品或體液樣品。實際上，來自包含受試者的DNA的受試者的任何身體樣品可以用于該方法中。身體樣品優(yōu)選地是體液樣品，例如，血漿或血液樣品。作為選擇，或另外地，可以使用獲自體外授精的一個或更多個卵子的樣品。利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)在步驟Sll中從(身體)樣品提取受試者的DNA。從(身體)樣品提取DNA的非限制性實例是使用Qiagen提供的DNA提取試劑盒。然后使用步驟Sll中提取的DNA，在步驟S12中對HRG的外顯子五的至少一部分進行SNP基因分型。對于在HRG基因的外顯子五中存在的C/T rs9898多態(tài)性，SNP基因分型特別驗證HRG的特定核苷酸序列。經(jīng)歷IVF的女性的IVF的成功和IVF的結(jié)局，即，懷孕的概率根據(jù)步驟S13中的SNP基因分型來預(yù)測。與上文連同圖2討論的和在蛋白質(zhì)水平上進行的方法類似地，上文公開的基于核苷酸的分析可以對涉及IVF的女性、男性或女性和男性兩者來進行。此外，或作為選擇，基于核苷酸的分析可以對卵子或授精后產(chǎn)生的胚胎來進行。如本領(lǐng)域公知的，SNP基因分型涉及能夠測定特定座位處單個堿基對突變的技術(shù)。各種技術(shù)可以用于進行SNP基因分型，以測定受試者在HRG的相關(guān)位置上對于脯氨酸或絲氨酸是雜合體還是純合體?？梢允褂玫姆窍拗菩缘募夹g(shù)包括以下的。通過特別工程化的單鏈寡核苷酸探針的方式，在SNP檢測中使用動態(tài)等位基因特異性雜交(DASH)和分子信標(biāo)。如果分子信標(biāo)被設(shè)計以匹配野生型等位基因(...AACTGCCCCAGACAC.)，另一個以匹配等位基因的突變體(...AACTGCTCCAGACAC...)，兩者可以用于鑒定個體的基因型。如果在分析期間僅檢測到第一探針的熒光波長，則受試者對于野生型是純合的。如果僅測出第二探針的波長，受試者對于突變體等位基因是純合的。最后，如果檢測到兩種波長，受試者是Ser/Pro雜合體?？梢允褂玫倪M一步的技術(shù)包括SNP微陣列，其中探針在小的芯片上排列?；诿傅姆椒ㄒ部梢允褂?，包括限制性片斷長度多態(tài)性(RFLP);基于PCR的方法，例如，四引物ARMS-PCT ;基于flap核酸內(nèi)切酶(FEN)的方法；引物延伸；用于SNP基因分型的Taqman分析；寡核苷酸連接酶分析。進一步的技術(shù)包括單鏈的構(gòu)象多態(tài)性；溫度梯度凝膠電泳(TGGE);變性高效液相層析法(DHPLC);高分辨率熔化分析和Applied Biosystems出售的 SNPIexsold。進行SNP基因分型以確定受試者的HRG等位基因。這意味著進行SNP基因分型以驗證受試者是具有核苷酸胞嘧啶(C)以形成編碼脯氨酸的密碼子CCC的等位基因，還是具有核苷酸胸腺嘧啶(T)而不是C以形成編碼絲氨酸而不是脯氨酸的密碼子TCC的等位基因。如上文已經(jīng)徹底討論的，T等位基因純合體的女性具有非常低的成功IVF概率，C/T雜合體女性具有低概率的成功IVF，C/C純合女性具有相對高的成功IVF概率。還可能的是對HRG的外顯子五，或HRG基因中包含相關(guān)等位基因座位的外顯子五的至少一部分進行測序。測定的核苷酸序列用于推斷受試者是T等位基因的純合體、C等位基因的純合體還是雜合體，即，在染色體3中的一個的座位上包含T等位基因和另一個染色體3的座位上的C等位基因。HRG不僅僅是IVF中妊娠結(jié)局的標(biāo)志物或預(yù)示物。在此呈現(xiàn)的實驗數(shù)據(jù)進一步支持了 HRG可以用作標(biāo)志物或預(yù)示物，用于預(yù)測一般女性的生殖力狀態(tài)。在一個方面中，該方法涉及測定獲自女性的身體樣品中亞型HRG。身體樣品可以是任何早先討論的身體樣品。然后根據(jù)測定的亞型HRG預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)。然后可以利用HRG亞型來預(yù)測女性是否具有弓I起提高的流產(chǎn)概率的異常或受損的生殖力狀態(tài)的風(fēng)險。例如，在早期妊娠中，僅存在亞型HRG的77kDa在習(xí)慣性流產(chǎn)的組中是更常見的，也稱為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)或復(fù)發(fā)性妊娠失敗(RPL)。然后根據(jù)如上所述的身體樣品中亞型HRG的75kDa和/或77kDa的存在，進行生殖力狀態(tài)的預(yù)測。特別地，根據(jù)獲自女性的身體樣品中亞型HRG的77kDa的存在，優(yōu)選地根據(jù)亞型HRG的77kDa的存在但亞型HRG的75kDa的缺乏，女性被預(yù)測為具有異常的或受損的生殖力狀態(tài)，例如，具有增加的習(xí)慣性流產(chǎn)風(fēng)險。相應(yīng)地，根據(jù)身體樣品中亞型HRG的77kDa的缺乏但亞型HRG的75kDa的存在，女性被預(yù)測為具有正常的生殖力狀態(tài)。
根據(jù)這個方面的亞型HRG的測定可以按照上文描述的預(yù)測經(jīng)歷IVF的女性妊娠結(jié)局的相同方式來進行。女性的生殖力狀態(tài)的預(yù)測不一定根據(jù)亞型HRG來進行，而是代之以通過提取獲自女性的身體樣品的DNA來進行。對提取的DNA上HRG基因的外顯子五的至少一部分進行如上文討論的SNP基因分型，根據(jù)SNP基因分型預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)。在一個實施方式中，如果外顯子五的至少一部分的核苷酸序列具有C/T rs9898多態(tài)性的T等位基因，特別是對于T等位基因是純合的，女性被預(yù)測具有異常或受損的生殖力狀態(tài)，例如，具有增加的習(xí)慣性流產(chǎn)風(fēng)險。相應(yīng)地，如果外顯子五的至少一部分的核苷酸序列具有c等位基因，優(yōu)選地對于C/T rs9898多態(tài)性的C等位基因是純合的，女性被預(yù)測具有正常的生殖力狀態(tài)。提取身體樣品的DNA和進行SNP基因分型可以如早先描述的進行。在此呈現(xiàn)的實驗數(shù)據(jù)表明，HRG的Pro亞型的存在看起來對于通過IVF方式成功妊娠是關(guān)鍵的，或至少是非常重要的。因而一個方面涉及提高經(jīng)歷IVF的女性的妊娠成功的方法。所述方法則涉及向含有要體外授精以得到一個或更多個胚胎的卵子的培養(yǎng)基施用HRG的Ρι.ο亞型或其氨基酸片段(肽)。在此進一步描述的氨基酸片段包含全長HRG蛋白中氨基酸編號204的脯氨酸殘基。這意味著通過向培養(yǎng)基添加Pro亞型，在體外授精之前、期間或之后，卵子暴露于HRG的Ρι.ο亞型或含有Pro的氨基酸片段。在優(yōu)選的實施方式中，HRG的Pro亞型或氨基酸片段優(yōu)選地在卵子的體外授精之前和/或期間添加到流體或培養(yǎng)基中。在這個方面的特定實施方式中，提供卵子的女性以及提供精子的男性的至少一人被確認(rèn)為是Pro/Ser雜合體或Ser/Ser純合體。在實施方式的一個方面中，HRG的Pro亞型或?qū)?yīng)于HRG蛋白質(zhì)的包含氨基酸編號204的氨基酸Pro的片段被用作生殖力促進物質(zhì)。所述肽優(yōu)選地包含至少10個氨基酸，優(yōu)選地至少14個氨基酸。優(yōu)選的這樣的肽或含有構(gòu)成HRG的14氨基酸片段的Pro的氨基酸片段的實施方式是 Phe-Ser-Val-Arg-Asn-Cys-Pro—Arg-Hi s-Hi s-Phe-Pro-Arg-Hi s (SEQ ID NO:9) ο在這個肽序列中，相應(yīng)于HRG中氨基酸編號204的脯氨酸的相關(guān)的脯氨酸殘基以粗體表不。在進一步的實施方式中，所述肽優(yōu)選地包含至少15個氨基酸，更優(yōu)選的至少20個氨基酸，例如，至少25個氨基酸，至少30個氨基酸或更優(yōu)選的至少35個氨基酸。所述肽優(yōu)選地具有與HRG蛋白質(zhì)的片段相同的氨基酸序列，并包含位置204的氨基酸Pro。脯氨酸殘基優(yōu)選地在肽的中央。所述肽不一定具有與HRG蛋白的相應(yīng)部分的100%同源性。實施方式還涵蓋了與HRG蛋白具有至少80 %、優(yōu)選地至少85 %、更優(yōu)選的至少90 %或至少95 %同源性的肽。然而，所述肽包含脯氨酸，優(yōu)選地靠近肽序列的中央，雖然一個或幾個其他氨基酸可以不同于HRG蛋白的氨基酸序列。已經(jīng)測試了具有氨基酸序列Arg-Gly-Gly-Glu-Gly-Thr-Gly-Tyr-Phe-Val-Asp-Phe-Ser-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-Arg-His-His-Phe-Pro-Arg-His-Pro-Asn-Val-Phe-Gly-Phe-Cys (SEQ ID NO:7)的肽，可以用作根據(jù)該實施方式的生殖力促進試劑。—個方面涉及包含上文定義的肽的分子，用于制造生殖力促進藥物。所述分子優(yōu)選地是SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:7中限定的肽，或包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在特定的實施方式中，所述分子是脯氨酸亞型HRG，或包含上述信號肽的脯氨酸亞型HRG，或沒有信號肽的脯氨酸亞型HRG。進一步相關(guān)的方面是提高妊娠的成功或促進女性的生殖力的方法，包括向所述女性施用如上所述的分子。所述方法優(yōu)選地包括向所述女性施用SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:7中限定的、或包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的分子。在特定的實施方式中，所述分子是脯氨酸亞型HRG (有或者沒有信號肽)。如果女性正經(jīng)歷IVF，所述分子可以在胚胎植入女性的子宮之前、期間和/或之后向所述女性施用。在特定的實施方式中，至少在受精卵植入女性的子宮之前，分子優(yōu)選地意圖被施用給女性。優(yōu)選地在胚胎植入之前通過將所述分子，例如，HRG的Ρι.ο亞型注射到女性的子宮內(nèi)膜來進行?？蛇x擇的或另外的施用位點可以是通過宮頸到子宮的腔內(nèi)。這個方面還可以與向包含卵子/胚胎的介質(zhì)施用分子，例如，HRG的Pro亞型來組合。在特定的實施方式中，如果女性和貢獻精子來為女性的至少一個卵子體外受精的男性中的至少一人對于絲氨酸亞型HRG是雜合體，或優(yōu)選的是純合體，如上所述的分子例如Pro亞型的施用是特別有效的。所述分析，即，HRG的肽或PiO亞型優(yōu)選地作為陰道組合物提供，其包含HRG的肽或Pro亞型以及適用于陰道內(nèi)施用的至少一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。通常適合用于陰道內(nèi)施用的幾種類型的制劑，包括陰道的片劑、硬膠囊和軟凝膠膠囊、乳膏劑、凝膠、栓劑、陰道栓劑、泡沫、軟膏劑、薄膜、衛(wèi)生棉條、陰道環(huán)、灌洗液和溶液。制劑有益地是陰道膠囊劑、片劑或插入物，陰道凝膠或乳膏劑或陰道溶液的形式。適合的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的實例可以選自Garg et al., Compendiumof Pharmaceutical Excipients for Vaginal Formulations, PharmaceuticalTechnology Drug Delivery 2001, pages 14-24 中列出的賦形劑。還可以或作為選擇可能的是篩選HRG產(chǎn)生的胚胎。胚胎產(chǎn)生的特定亞型則確定了分子例如HRG的Pro亞型是否應(yīng)當(dāng)施用到包含胚胎的流體或培養(yǎng)基中，和/或施用給將植入胚胎的女性。因而，如果胚胎產(chǎn)生了單獨的或與Pro亞型一起的HRG的Ser亞型，分子例如HRG的Pro亞型向培養(yǎng)基和/或向女性的施用應(yīng)當(dāng)啟動。這些方面中采用的HRG的Pro亞型優(yōu)選地是人HRG的Pro亞型，更優(yōu)選地是重組的人HRG的Pro亞型?？梢赃x擇添加到培養(yǎng)基或施用給女性的分子例如HRG的Ρι.ο亞型的濃度，以處于人類女性人口中正常的HRG的濃度范圍內(nèi)。這種濃度范圍可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)由本領(lǐng)域的技術(shù)人員非發(fā)明性地確定。進一步的方面還涉及分子例如HRG的Ρι.ο亞型作為藥物或藥劑用于治療中。特定的方面涉及分子例如HRG的Ρι.ο亞型，用于提高女性的妊娠的成功，特別是經(jīng)歷體外授精的女性，以及特別是所述女性和/或貢獻精子的男性是HRG的Pro/Ser雜合體或Ser/Ser純合體。進一步特別的方面涉及分子例如HRG的Pro亞型用于制造藥物的用途，所述藥物用于提高這樣的女性的妊娠的成功。實駘為了分析在生育/不育癥中HRG的重要性,來到Akademiska sjukhuset, Uppsala的生殖中心的24名女性被要求參與到研究中。采集和冷凍來自卵巢和血漿的卵泡液。進行Western印跡，我們發(fā)現(xiàn)全長兩種亞型HRG對應(yīng)于分子量75kDa和77kDa。根據(jù)分析的樣品，4名女性看起來是Ser/Ser的純合攜帶者,其凝膠上僅一條分子量77kDa的條帶。6名女性是雜合的攜帶者，其凝膠上有兩個條帶(脯氨酸/絲氨酸)，14名女性僅有較小的蛋白質(zhì)，表明她們對于脯氨酸/脯氨酸是純合的。該研究由Uppsala的醫(yī)學(xué)學(xué)院的地區(qū)倫理委員會批準(zhǔn)，從在研究中包括的每個患者處得到了告知同意。對參與的患者沒有進行補償。所有的研究患者被包括在瑞典Uppsala的Uppsala大學(xué)醫(yī)院的婦幼健康學(xué)院中。良好調(diào)節(jié)的血管生成對于適當(dāng)?shù)呐咛ブ踩?、胚胎發(fā)育和妊娠發(fā)展是重要的。監(jiān)視女性生殖道和早期胚胎中血管生成調(diào)節(jié)物的存在和分布，對于更好地理解生育力、胚胎發(fā)育和妊娠的分子問題是重要的。HRG是涉及血管生成的糖蛋白。早先沒有研究它在女性生殖道或在胚胎中的存在。卵泡液、培養(yǎng)基和胚胎獲自經(jīng)歷IVF的患者。來自內(nèi)生殖器和胎盤的活檢物在手術(shù)時采集。通過免疫組織化學(xué)和Western印跡研究HRG的存在。使用PCR來測定組織中或胚胎的HRG表達。我們在卵泡液、女性生殖道和胎盤以及在胚胎中鑒定出HRG。此外，在胚囊中觀察到HRG表達。因此，HGF的血管生成性質(zhì)看起來影響生育力。卵泡液、培養(yǎng)基和胚胎的采集從經(jīng)歷了用于IVF的控制性超排卵的夫婦中采集卵泡液、培養(yǎng)基和胚胎。在卵細(xì)胞獲取的同一天采集血漿樣品。在卵細(xì)胞獲取時，采集50mL的卵泡液到離心管(Falcon，NJ，USA)中，對每個患者單獨地集中。小心避免血液污染。樣品暫時冷凍在_20°C，每周移到-70°C冷凍器中。用于胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)基(CCM, Vitrolife, Kungsbacka, Sweden)在四個樣品中集中。三個樣品分別含有胚胎培養(yǎng)5天、6天或7天的培養(yǎng)基。這些樣品包括培養(yǎng)基，在其中生長了相同數(shù)量的發(fā)育阻滯的胚胎。第四個樣品是僅從胚囊培養(yǎng)物收集的培養(yǎng)基。在每個樣品中，對來自六對到十對夫婦的胚胎集中培養(yǎng)基。培養(yǎng)基在_20°C冷凍一周。在第2天或第3天對于胚胎移植或低溫保存質(zhì)量不夠的人類著床前胚胎根據(jù)常規(guī)方案培養(yǎng)在培養(yǎng)基(G-l PLUS/G-2 PLUS, Vitrolife AB, Kungsbacka, Sweden)中。從 2細(xì)胞期到孵化的胚囊的各個階段收獲它們，用于免疫組織化學(xué)。輸卵管、子宮內(nèi)膜、胎盤和子宮肌層的活檢物的采集在腹腔鏡滅菌下，從健康的女性志愿者通過刮除術(shù)采集輸卵管和子宮內(nèi)膜活檢物。使用的輸卵管處于月經(jīng)周期的卵泡、排卵后和黃體期。在排卵后六天采集子宮內(nèi)膜樣品。子宮肌層的活檢物和胎盤樣品在正常的健康妊娠進行剖腹產(chǎn)后直接采集。組織樣品在生理鹽溶液(NaCI 9mg/ml)中清洗，固定在4%多聚甲醛中達24小時，保存于70 %乙醇中數(shù)周，直到根據(jù)常規(guī)程序包埋在石蠟中。卵泡液的Western印跡使用4-12%梯度 Bis-Tris NuPAGE(NP0321, Invitrogen, CA, USA))分離樣品，對于還原條件，添加商業(yè)上可獲得的還原劑(NP0004, L1-COR, Invitrogen, CA, USA)。分離的蛋白質(zhì)樣品轉(zhuǎn)移到為低背景熒光優(yōu)化了的Immobilon-FL膜(IPFL00010，MillipOre Corp,USA)上，用封閉緩沖液(927-40000，L1-Cor Biosciences, UK)孵育。用針對HRG的富含His/Pro 結(jié)構(gòu)域的抗 HRG 抗體(HRG-0119, Lena Claesson-ffelsh, Department of MedicalGenetics and Pathology, Uppsala University, Uppsala, Sweden)進行 Western 印跡。免疫反應(yīng)性位點使用Odyssey紅外成像系統(tǒng)(Westburg)通過突光標(biāo)記的抗兔IRDye800抗體(611-732-127/Rockland, USA)檢測。在Western印跡分析中檢測到全長兩種亞型HRG，相應(yīng)于75kDa和77kDa分子量的條帶，參見附圖1。對于來自24名女性的卵泡液樣品，四份具有單一的77kDa條帶(Ser/Ser純合體)，六份具有雙條帶(Pro/Ser雜合體)，14份具有單一的75kDa條帶(Pro/Pro純合體)。因而這個群體的總體Ser等位基因頻率是0.29。經(jīng)歷IVF的24名女性中，九人懷孕。這些孕婦中Ser等位基因頻率顯著更低。僅一名女性是Pro/Ser雜合體,其他八名懷孕女性是Pro/Pro純合體。這意味著僅0.06的Ser等位基因頻率。此外，單個Pro/Ser雜合體女性的妊娠由于胎兒具有致死的畸形而不得不停止。經(jīng)IVF治療沒有懷孕的15名女性的四名是Ser/Ser純合體，六名是Pro/Ser雜合體，僅五名是Pro/Pro純合體。這得到了 0.43的Ser等位基因頻率。懷孕的組和不懷孕的組之間的差異是顯著的。Ser/Ser純合體和Pro/Ser雜合體的組以及Pro/Pro純合體的組之間的差異也是顯著的。下文的表I給出了關(guān)于經(jīng)歷IVF的24名女性的卵泡液的HRG中遺傳變異的Western印跡數(shù)據(jù)。表I
權(quán)利要求
1.一種預(yù)測經(jīng)歷體外授精的女性的妊娠結(jié)局的方法，包括: 測定獲自所述女性和捐獻用于體外授精至少一個卵子以形成要植入所述女性子宮的至少一個胚胎的精子的男性的至少一人的身體樣品中的亞型富組氨酸糖蛋白HRG、或者測定獲自所述至少一個卵子的卵子的樣品中的亞型富組氨酸糖蛋白HRG ;和 基于所測定的亞型富組氨酸糖蛋白HRG預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性的妊娠結(jié)局。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，預(yù)測妊娠結(jié)局包括根據(jù)所述身體樣品或所述獲自所述卵子的樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa的存在、亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的存在、或根據(jù)亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa和亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的同時存在，來預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性的妊娠結(jié)局。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，預(yù)測妊娠結(jié)局包括根據(jù)所述身體樣品或獲自所述卵子的所述樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的存在，來預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性低的妊娠成功。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中，預(yù)測妊娠結(jié)局包括根據(jù)所述身體樣品或獲自所述卵子的所述樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa和亞型富組氨酸糖蛋白HRG77kDa的同時存在，來預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性低的妊娠成功，和根據(jù)所述身體樣品或獲自所述卵子的所述樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的僅77kDa的存在，來預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性非常低的妊娠成功
5.一種預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)的方法，包括: 測定猶自所述女性的身體樣品中亞型S組氣Ife糖蛋白HRG ;和 根據(jù)所述測定的亞型富組氨酸糖蛋白HRG預(yù)測所述女性的生殖力狀態(tài)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，預(yù)測生殖力狀態(tài)包括根據(jù)所述身體樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa的存在、亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的存在、或根據(jù)亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa和亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的同時存在，來預(yù)測所述女性的生殖力狀態(tài)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，預(yù)測所述女性的生殖力狀態(tài)包括根據(jù)所述身體樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的存在，來預(yù)測所述女性具有異常的/受損的生殖力狀態(tài)，以及根據(jù)所述身體樣品中亞型富組氨酸糖蛋白HRG的77kDa的缺乏但亞型富組氨酸糖蛋白HRG的75kDa的存在，來預(yù)測所述女性具有正常的生殖力狀態(tài)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7的任一項所述的方法，其中，測定所述亞型包括評估所述身體樣品中富組氨酸糖蛋白HRG的分子量。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，評估所述分子量包括用Western印跡評估富組氨酸糖蛋白HRG的所述分子量。
10.根據(jù)權(quán)利要求1 9的任一項所述的方法，其中，測定所述亞型包括測定富組氨酸糖蛋白HRG中具有脯氨酸作為氨基酸編號204的亞型富組氨酸糖蛋白、以及HRG中具有絲氨酸作為氨基酸編號204的亞型富組氨酸糖蛋白的至少一種的存在。
11.一種預(yù)測經(jīng)歷體外授精的女性的妊娠結(jié)局的方法，包括: 提取獲自所述女性和捐獻用于體外授精至少一個卵子以形成要植入所述女性子宮的至少一個胚胎的精子的男性的至少一人的身體樣品中的DNA、或者提取獲自所述至少一個卵子的卵子的樣品中的DNA ； 對所述提取的DNA進行富組氨酸糖蛋白HRG的外顯子五的至少一部分的單核苷酸多態(tài)性SNP基因分型；和 根據(jù)所述SNP基因分型預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性的妊娠結(jié)局。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，預(yù)測妊娠結(jié)局包括如果所述外顯子五的至少一部分的核苷酸序列具有C/T rs9898多態(tài)性的T等位基因，預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性低的妊娠成功。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，預(yù)測妊娠結(jié)局包括如果所述女性和所述男性的至少一人被測定為對于所述C/T rs9898多態(tài)性的所述T等位基因是雜合的，預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性低的妊娠成功，以及如果所述女性和所述男性的至少一人被測定為對于所述C/T rs9898多態(tài)性的所述T等位基因是純合的，預(yù)測經(jīng)歷所述體外授精的所述女性非常低的妊娠成功。
14.一種預(yù)測女性的生殖力狀態(tài)的方法，包括: 提取獲自所述女性的身體樣品的DNA ； 對所提取的DNA進行富組氨酸蛋白質(zhì)HRG的外顯子五的至少一部分的單核苷酸多態(tài)性SNP基因分型；和 根據(jù)所述SNP基因分型預(yù)測所述女性的生殖力狀態(tài)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，預(yù)測生殖力狀態(tài)包括如果所述外顯子五的至少一部分的核苷酸序列具有C/T rs9898多態(tài)性的T等位基因，預(yù)測所述女性異常的/受損的生殖力狀態(tài)。
16.根據(jù)權(quán)利要求11 15的任一項所述的方法，其中，進行所述SNP基因分型包括測定包含C/T rs9898多態(tài)性的所述HRG基因的外顯子五的至少一部分的核苷酸序列。
17.根據(jù)權(quán)利要求1 16的任一項所述的方法，其中，所述身體樣品是體液樣品。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述體液樣品是卵泡液樣品、血漿樣品或血液樣品。
19.一種提高經(jīng)歷體外授精的女性的妊娠成功的方法，包括在至少一個卵子在體外被來自男性的精子授精以形成要植入到所述女性子宮的至少一個胚胎之前、期間或之后，向包含來自所述女性的至少一個卵子的培養(yǎng)基施用包含SEQ ID NO:9所定義的氨基酸序列的分子。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，施用所述分子包括向所述培養(yǎng)基施用包含SEQID NO:7所定義的氨基酸序列的分子，優(yōu)選地脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20所述的方法，其中，所述女性和所述男性的至少一人對于絲氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG是雜合體或純合體。
22.一種包含SEQ ID NO:9所定義的氨基酸序列的分子，用于制造生育力促進藥物。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的分子，其中，所述分子包含SEQID NO:7所定義的氨基酸序列，優(yōu)選地脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG。
24.一種陰道組合物，包括包含SEQ ID NO:9所定義的氨基酸序列的分子和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的陰道組合物，其中，所述分子包含SEQID NO:7所定義的氨基酸序列的分子，優(yōu)選地脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG。
26.一種提高女性的妊娠成功的方法，包括向所述女性施用包含SEQ ID N0:9所定義的氨基酸序列的分子。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中，施用所述分子包括向所述女性施用包含SEQID NO:7所定義的氨基酸序列的分子，優(yōu)選地脯氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27所述的方法，其中，所述女性經(jīng)歷體外授精，以及施用所述分子包括在胚胎向所述女性的子宮植入之前、期間和/或之后施用所述分子。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述女性和男性的至少一人對于絲氨酸亞型富組氨酸糖蛋白HRG是雜合體或純合體，所述男性提供精子以體外授精所述女性的至少一個卵子以形成所述胚胎。
30.根據(jù)權(quán)利 要求26 29的任一項所述的方法，其中，施用所述分子包括向所述女性的子宮內(nèi)膜中注射所述分子。
31.根據(jù)權(quán)利要求26 29的任一項所述的方法，其中，施用所述分子包括向所述女性的子宮的腔中注射所述分子。
全文摘要
本發(fā)明根據(jù)富組氨酸糖蛋白(HRG)基因的核苷酸分析或HRG的蛋白質(zhì)分析，來預(yù)測就成功妊娠的概率而言女性的體外授精(IVF)的結(jié)局或女性的生殖力狀態(tài)。脯氨酸亞型HRG或其氨基酸片段可以進一步用于提高女性的妊娠成功。
文檔編號C07K14/47GK103189748SQ201180017744
公開日2013年7月3日 申請日期2011年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月1日
發(fā)明者卡琳·科勒赫德, 海倫娜·阿克魯?shù)?申請人:卡羅林斯卡學(xué)院創(chuàng)新有限公司