專利名稱：一種提取純化6,8-二異戊烯基金雀異黃素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種提取純化6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的方法。
背景技術(shù)：
6，8- 二異戊烯基金雀異黃素(6，8-Diprenylgenistein)分子式為C25H26O5,分子量為406. 48，CAS登錄號(hào)為:51225-28-6, mp. 140_142°C，為無色針晶，是一種異黃酮類化合物。廣泛分布與豆科植物中，如攀登魚藤iferris scandens Benth.莖、塞內(nèi)加爾河刺桐 Erythrina senegalensis Harms 蓮皮、朿Ij桐 iZrji力^^<3 variegate var. orientalis (L.) Merr. ^MMEuchresta horsfieldii (Leschen.) Benn.根和莖、厚果雞血藤ifo'Weiiia pachycarpa Benth.地上部分和種子以及脹果甘草根中。藥理研究表明，6，8_ 二異戊烯基金雀異黃素具有多種活性，濃度為10 μ M時(shí)，對(duì)牛的晶狀體醛糖還原酶的抑制率為60%，對(duì) cAMP磷酸二酯酶的IC5tl為203 μ Μ,另外，體外6. 25 μ g/mL時(shí)，對(duì)金黃色葡萄球菌和包皮垢分枝桿菌具有抑制作用。對(duì)于6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的研究尚處于起步階段，尚未見其提取工藝方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提取純化6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下方案實(shí)現(xiàn)的
一種提取純化6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的方法，其特征在于包括以下步驟將富含 6，8-二異戊烯基金雀異黃素的藥材曬干、粉碎，用石油醚回流脫脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，過濾，合并濾液，膜濃縮，將濃縮液加入無機(jī)鹽溶液和聚乙二醇， 攪拌使其充分混合萃取，靜置，取上相用超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離，將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分上硅膠常壓柱層析，石油醚-丙酮洗脫，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到6，8- 二異戊烯基金雀異黃素單體成分。所述無機(jī)鹽溶液為硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀中的一種或幾種結(jié)合。所述膜濃縮所用超濾膜截留分子量為2000-6000，納濾膜的截留分子量為 200-300。所述聚乙二醇的相對(duì)分子量是4000或6000，雙水相體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為13- %，無機(jī)鹽的質(zhì)量濃度為10-13%，萃取溫度為22-37°C，所述的靜置時(shí)間為12-18小時(shí)。所述膜分離含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇所用超濾膜的截留分子量為2000-3000。本發(fā)明采用雙水相萃取，選擇性地富集黃酮類成分，工藝流程短、簡單易行，可放大連續(xù)操作；采用膜分離濃縮可顯著降低能耗。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:
將厚果雞血藤地上部分曬干、粉碎成粗粉，稱取5000g先用6倍量(30L)石油醚回流脫脂2次，每次lh，再用8倍量75%乙醇冷浸2次，每次3天，過濾，合并濾液，濾液加入截留分子量4000的中空纖維超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300的中空纖維納濾膜濃縮， 濃縮液依次加入聚乙二醇和硫酸銨，使所形成的雙水相萃取體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為 18%，硫酸銨的質(zhì)量濃度為12%，條件下攪拌萃取lh，靜置1 形成兩相，取上相，采用截留分子量3000的超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離，收集透過液含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分，進(jìn)行常壓硅膠(200-300目)柱層析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脫，TLC檢測合并含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的流分，減壓濃縮干燥，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到1. 36g6, 8- 二異戊烯基金雀異黃素晶體，含量為97. 8%。實(shí)施例2:
將日本山豆根根曬干、粉碎成粗粉，稱取5000g先用4倍量(20L)石油醚回流脫脂2次， 每次2h，再用6倍量85%乙醇冷浸2次，每次1天，過濾，合并濾液，濾液加入截留分子量 2000的中空纖維超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量200的中空纖維納濾膜濃縮，濃縮液依次加入聚乙二醇和磷酸氫二鉀，使所形成的雙水相萃取體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為 13%，磷酸氫二鉀的質(zhì)量濃度為11%，30°C條件下攪拌萃取1.證，靜置1 形成兩相，取上相， 采用截留分子量2000的超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離， 收集透過液含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分，進(jìn)行常壓硅膠(200-300目)柱層析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脫，TLC檢測合并含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的流分，減壓濃縮干燥，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到1. 56g6, 8- 二異戊烯基金雀異黃素晶體，含量為 98. 4%ο實(shí)施例3:
將塞內(nèi)加爾河刺桐莖皮曬干、粉碎成粗粉，稱取5000g先用4倍量(20L)石油醚回流脫脂3次，每次1. 5h，再用9倍量70%乙醇冷浸3次，每次1天，過濾，合并濾液，濾液加入截留分子量6000的中空纖維超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300的中空纖維納濾膜濃縮，濃縮液依次加入聚乙二醇和磷酸二氫鉀，使所形成的雙水相萃取體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為22%，磷酸二氫鉀的質(zhì)量濃度為10%，37°C條件下攪拌萃取lh，靜置1 形成兩相， 取上相，采用截留分子量3000的超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離，收集透過液含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分，進(jìn)行常壓硅膠(200-300目)柱層析，石油醚-丙酮(9 1-64)梯度洗脫，TLC檢測合并含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的流分，減壓濃縮干燥，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到1. 71g6, 8- 二異戊烯基金雀異黃素晶體，含量為98. 1%。實(shí)施例4:
將厚果雞血藤種子曬干、粉碎成粗粉，稱取5000g先用5倍量(25L)石油醚回流脫脂3 次，每次lh，再用10倍量80%乙醇冷浸2次，每次2天，過濾，合并濾液，濾液加入截留分子量 4000的中空纖維超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量200的中空纖維納濾膜濃縮，濃縮液依次加入聚乙二醇和硫酸銨，使所形成的雙水相萃取體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為觀％，
4硫酸銨的質(zhì)量濃度為13%，22°C條件下攪拌萃取1.證，靜置1 形成兩相，取上相，采用截留分子量2000的超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離，收集透過液含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分，進(jìn)行常壓硅膠(200-300目)柱層析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脫，TLC檢測合并含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的流分，減壓濃縮干燥，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到0. 86g6, 8- 二異戊烯基金雀異黃素晶體，含量為96. 6%。
權(quán)利要求
1.一種提取純化6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的方法，其特征在于包括以下步驟將富含6，8- 二異戊烯基金雀異黃素的藥材曬干、粉碎，用石油醚回流脫脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，過濾，合并濾液，膜濃縮，將濃縮液加入無機(jī)鹽溶液和聚乙二醇，攪拌使其充分混合萃取，靜置，取上相用超濾膜將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇分離，將含有6，8- 二異戊烯基金雀異黃素部分上硅膠常壓柱層析，石油醚-丙酮洗脫，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到6，8- 二異戊烯基金雀異黃素單體成分。
2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述無機(jī)鹽溶液為硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀中的一種或幾種結(jié)合。
3.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述膜濃縮所用超濾膜截留分子量為 2000-6000,納濾膜的截留分子量為200-300。
4.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述聚乙二醇的相對(duì)分子量是4000或 6000，雙水相體系中聚乙二醇的質(zhì)量濃度為13- %，無機(jī)鹽的質(zhì)量濃度為10-13%，萃取溫度為22-37°C，所述的靜置時(shí)間為12-18小時(shí)。
5.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述膜分離含有6，8-二異戊烯基金雀異黃素部分和聚乙二醇所用超濾膜的截留分子量為2000-3000。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取純化6,8-二異戊烯基金雀異黃素的方法，方法是將富含6,8-二異戊烯基金雀異黃素的藥材曬干、粉碎，用石油醚回流脫脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，過濾，合并濾液，膜濃縮，將濃縮液加入無機(jī)鹽溶液和聚乙二醇，攪拌使其充分混合萃取，靜置，取上相用超濾膜將目標(biāo)成分和聚乙二醇分離，將目標(biāo)成分上硅膠常壓柱層析，石油醚-丙酮洗脫，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶即得到6,8-二異戊烯基金雀異黃素單體成分。本發(fā)明原料豐富，采用雙水相萃取和膜分離技術(shù)，設(shè)備要求低、能顯著降低能耗。
文檔編號(hào)C07D311/40GK102391235SQ20111030350
公開日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司