專利名稱：一種肽醛的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬多肽化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種肽醛的制備方法。
背景技術(shù)：
肽醛是指C端為醛基的多肽類似物，主要作為絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶以及金屬蛋白酶等四類蛋白水解酶的抑制劑。對于絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶，肽醛通過與絲氨酸或半胱氨酸殘基活性位點結(jié)合形成半縮醛或半硫縮醛，發(fā)揮蛋白酶抑制作用；對于天冬氨酸和金屬蛋白酶，肽醛與其鍵合形成水合物來達到抑制作用。上述肽醛的蛋白酶抑制作用都是通過與蛋白酶活性位點形成穩(wěn)定的類四面體結(jié)構(gòu)，從而阻止了蛋白底物與酶的結(jié)合。目前肽醛的制備方法主要分為液相法和固相法兩類。(1)液相法。主要有還原法和氧化法制得肽醛。此類方法主要參見以下文獻 J.Med. Chem. 1998，41，4301-4308 ； J. Med. Chem.，1998，41，2786-2805.等。液相法存在的主要問題是中間產(chǎn)物分離麻煩，制備周期長。(2)固相法。相對于液相法，固相法存在制備簡便、周期短的優(yōu)勢，更符合快速制備肽醛的要求。固相法目前主要包括還原法、氧化法和水解法。此類方法主要參見以下文獻=Tetrahedron Lett,1995，36，7871-7874 J.Com.Chem,2000，2，172-181；Tetrahedron. Lett，1997，38，7749-7742 ；Tetrahedron Lett，1997，38，7119-7122。當(dāng)前固相法中存在的主要問題是缺乏合適的連接臂將氨基醛固載化到固相載體上，反應(yīng)條件較苛刻、易消旋， 產(chǎn)率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有肽醛的制備方法所存在的不足，而采用一種新的連接臂，提供一種簡便、高效的肽醛制備方法，解決目前肽醛制備工藝繁瑣、周期長、 產(chǎn)率低的問題。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種肽醛的制備方法，具體包括以下步驟(1)制備保護的氨基醛步驟保護氨基酸與N，0-二甲基羥胺鹽酸鹽在二甲基甲酰胺中溶解，完全溶解后得溶解液A，向溶解液A中加入縮合試劑和二異丙基乙胺進行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物A，反應(yīng)物A加入乙酸乙酯萃取得萃取物A，萃取物A用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到白色固體A ；用四氫呋喃溶解白色固體A得溶解液B，在-20°C -0°C下向溶解液B中加入氫化鋁鋰進行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物B，向反應(yīng)物B中加入鹽酸水溶液猝滅氫化鋁鋰，并用乙酸乙酯萃取后再用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到保護的氨基醛；其中保護氨基酸、縮合試劑、二異丙基乙胺、氫化鋁鋰之間的質(zhì)量比為1 1 2 2; (2)制備氨基醛連接臂步驟
向裝有步驟⑴制備的保護的氨基醛的反應(yīng)器中加入連接臂，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物C，反應(yīng)物C加入乙酸乙酯進行萃取得萃取物B，萃取物B用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到氨基醛連接臂；其中連接臂的加入量為保護的氨基醛的0. 8倍；(3)制備肽醛_樹脂復(fù)合物步驟向裝有樹脂的砂芯反應(yīng)器中加入二氯甲烷，靜置，過濾后，向砂芯反應(yīng)器中加入步驟(2)制備的氨基醛連接臂及二異丙基乙胺進行反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物D，反應(yīng)物 D加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，并過濾掉溶液得到過濾物A，向存有過濾物A的砂芯反應(yīng)器中加入體積比為1 4的哌啶和二甲基甲酰胺混合溶液進行脫保護反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，并過濾掉溶液，然后向砂芯反應(yīng)器中加入C端第二個氨基酸和縮合試劑進行縮合反應(yīng)，縮合反應(yīng)結(jié)束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，過濾掉溶液得到過濾物B，按照多肽從C端到N端的順序，更換氨基酸，重復(fù)脫保護和縮合反應(yīng)，得到保護的肽醛-樹脂復(fù)合物；其中樹脂、氨基醛連接臂、縮合試劑、二異丙基乙胺之間的質(zhì)量比為 1:2-5: 2-5 4-10 ；(4)切割純化得到肽醛精品步驟向裝有步驟(3)制備的肽醛_樹脂復(fù)合物的反應(yīng)器中加入切割試劑進行切割反應(yīng)，切割反應(yīng)結(jié)束后，過濾，收集濾液A，濾液A旋蒸后得到肽醛粗品；采用C18類型的反相色譜柱分離純化肽醛粗品，得到肽醛精品。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(1)中的保護氨基酸為N-(9-芴甲氧羰
?；?_氨基酸。所述N- (9-芴甲氧羰?；?“氨基酸選自N- (9-芴甲氧羰?；?“丙氨酸、N- (9_芴甲氧羰?；?“苯丙氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?-甘氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?-異亮氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?-纈氨酸中的一種。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(1)和(3)中的縮合試劑選自0-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N' , N'-四甲基脲六氟磷酸酯、卡特縮合劑、六氟磷酸苯并三唑-ι-基_氧基三吡咯烷基磷中的一種。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(2)中的連接臂為二乙醇胺。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(3)中，氨基醛連接臂、縮合試劑、二異丙基乙胺之間的質(zhì)量比為1:1:2。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(3)中，所述樹脂選自三苯甲基氯樹脂、 2-氯三苯甲基氯樹脂、4-甲基三苯甲基氯樹脂和4-甲氧基三苯甲基氯樹脂中的一種。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟(4)中，所述切割試劑為乙酸、二氯甲烷混合溶液；其中乙酸占混合溶液的體積比為10% -80%。本發(fā)明的合成路線如下
權(quán)利要求
1.一種肽醛的制備方法，其特征在于，由以下步驟組成(1)制備保護的氨基醛步驟保護氨基酸與N，0-二甲基羥胺鹽酸鹽在二甲基甲酰胺中溶解，完全溶解后得溶解液 A，向溶解液A中加入縮合試劑和二異丙基乙胺進行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物A，反應(yīng)物A 加入乙酸乙酯萃取得萃取物A，萃取物A用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到白色固體A ；用四氫呋喃溶解白色固體A得溶解液B，在-20°C -0°C下向溶解液B中加入氫化鋁鋰進行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物B，向反應(yīng)物B中加入鹽酸水溶液猝滅氫化鋁鋰，并用乙酸乙酯萃取后再用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到保護的氨基醛；其中保護氨基酸、縮合試劑、二異丙基乙胺、氫化鋁鋰之間的物質(zhì)的量比為1 1 2 2;(2)制備氨基醛連接臂步驟向裝有步驟(1)制備的保護的氨基醛的反應(yīng)器中加入連接臂，反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物C， 反應(yīng)物C加入乙酸乙酯進行萃取得萃取物B，萃取物B用無水硫酸鈉干燥，旋蒸后得到氨基醛連接臂；其中連接臂的加入量為保護的氨基醛的0. 8倍；(3)制備肽醛-樹脂復(fù)合物步驟向裝有樹脂的砂芯反應(yīng)器中加入二氯甲烷，靜置，過濾后，向砂芯反應(yīng)器中加入步驟 (2)制備的氨基醛連接臂及二異丙基乙胺進行反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后得反應(yīng)物D，反應(yīng)物D加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，并過濾掉溶液，得到過濾物A，向存有過濾物A的砂芯反應(yīng)器中加入體積比1 4的哌啶和二甲基甲酰胺混合溶液進行脫保護反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，并過濾掉溶液，然后向砂芯反應(yīng)器中加入C端第二個氨基酸和縮合試劑進行縮合反應(yīng)，縮合反應(yīng)結(jié)束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，過濾掉溶液，得到過濾物B，按照多肽從C端到N端的順序，更換氨基酸，重復(fù)脫保護和縮合反應(yīng)，得到保護的肽醛-樹脂復(fù)合物；其中樹脂、氨基醛連接臂、縮合試劑、二異丙基乙胺之間的質(zhì)量比為 1:2-5: 2-5 4-10 ；(4)切割純化得到肽醛精品步驟向裝有步驟(3)制備的肽醛-樹脂復(fù)合物的反應(yīng)器中加入切割試劑進行切割反應(yīng)，切割反應(yīng)結(jié)束后，過濾，收集濾液A，濾液A旋蒸后得到肽醛粗品；采用C18類型的反相色譜柱分離純化肽醛粗品，得到肽醛精品。
2.如權(quán)利要求1所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的保護氨基酸為 N- (9-芴甲氧羰?；?-氨基酸。
3.如權(quán)利要求2所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述N-(9-芴甲氧羰?；?-氨基酸選自N- (9-芴甲氧羰酰基)-丙氨酸、N- (9-芴甲氧羰酰基)-苯丙氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?“甘氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?-異亮氨酸、N- (9-芴甲氧羰?；?-纈氨酸中的一種。
4.如權(quán)利要求2所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述步驟⑴和(3)中的縮合試劑選自0-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'， N'-四甲基脲六氟磷酸酯、卡特縮合劑、六氟磷酸苯并三唑-1-基_氧基三吡咯烷基磷中的一種。
5.如權(quán)利要求1所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的連接臂為二乙醇胺。
6.如權(quán)利要求1所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，氨基醛連接臂、 縮合試劑、二異丙基乙胺之間的質(zhì)量比為1:1:2。
7.如權(quán)利要求1所述的肽醛的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，所述樹脂選自三苯甲基氯樹脂、2-氯三苯甲基氯樹脂、4-甲基三苯甲基氯樹脂和4-甲氧基三苯甲基氯樹脂中的一種。
8.如權(quán)利要求1所述的肽醛的制備方法，其特征在于，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中， 所述步驟(4)中，所述切割試劑為乙酸、二氯甲烷混合溶液；其中乙酸占混合溶液的體積比為 10% -80%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多肽的制備方法，特別涉及肽醛的制備方法。該制備方法包括以下步驟(1)制備保護的氨基醛；(2)制備氨基醛連接臂；(3)制備肽醛樹脂；(4)切割，純化得到肽醛精品。本發(fā)明解決了現(xiàn)有合成方法制備繁瑣、副反應(yīng)多、產(chǎn)率低的問題。
文檔編號C07K1/04GK102329372SQ201110296939
公開日2012年1月25日 申請日期2011年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月27日
發(fā)明者何冰芳, 姚忠, 康武, 張波, 徐紅巖, 智曉霞, 王衛(wèi)國, 韋萍 申請人:南京工業(yè)大學(xué), 吉爾生化(上海)有限公司, 濱海吉爾多肽有限公司