專利名稱：奈西立肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于多肽藥物制備方法技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及奈西立肽的制備方法。
背景技術(shù)：
奈西立肽(Nesiritide)是人體B型尿鈉排泄肽，奈西立肽與血管平滑肌及內(nèi)皮細(xì)胞的鳥苷酸環(huán)化酶受體結(jié)合，細(xì)胞內(nèi)的cGMP濃度增加，平滑肌細(xì)胞松弛。在靜脈、動脈的擴(kuò)張作用中，cGMP扮演第二信使的角色。奈西立肽能使用內(nèi)皮縮血管肽或a_腎上腺素能的促效劑去氧腎上腺素制造的離體人動脈和靜脈條收縮模型舒張。在臨床試驗中，奈西立肽能使心衰病人的肺毛細(xì)血管楔嵌壓(PCWP)降低，呈劑量依賴性。在動物試驗中，奈西立肽對心臟收縮能力或心臟電生理如房室結(jié)傳導(dǎo)等無影響。給充血性心衰的病人靜脈注射奈西立肽后，在血漿中顯示出二相性的分布。奈西立肽的半衰期t1/2大約為18分鐘，AUC大約為27。平均初始消除相估計大約為2分鐘。在這些病人中， 奈西立肽中心室的平均分布體積(V估計是0. 073L/kg，平均穩(wěn)態(tài)分布體積(Vss)是0. 19L/ kg，平均清除率(CL)大約是9. 2mL/min/kgo在穩(wěn)定狀態(tài)，注射劑量范圍從0. 01 0. 03ug/ kg/min的奈西立肽后，血漿奈西立肽的水平從內(nèi)源性的基礎(chǔ)水平增加大約3 6倍。奈西立肽具有以下的結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.奈西立肽的制備方法，包括固相多肽合成法制備奈西立肽線性肽樹脂、奈西立肽線性肽樹脂酸解得到奈西立肽線性肽粗品；奈西立肽線性肽粗品經(jīng)氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品純化得到奈西立肽純品；其中固相多肽合成法為在Fmoc-His (trt)_載體樹脂上通過固相偶聯(lián)合成法依次接入下列序列中相對應(yīng)的Fmoc-保護(hù)氨基酸，得到奈西立肽線性肽樹脂R1-Ser (tBu) -Pro-Lys (Boc) -Met-Val-Gln (R2) -Gly-Ser (tBu)-Gly-Cys (R3) -Phe-Gly-Arg (pbf) -Lys (Boc) —Met—Asp (OtBu)-Arg (pbf) -Ile-X-Gly-Leu-Gly-Cys (R3) -Lys (Boc) -Val-Leu-Arg (pbf) -Arg (pbf) -Hi s (trt)-樹脂其中，X 為 Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu)，R1 為 Fmoc、Boc 或 H，Ii2 為 Trt 或 H，R3為Trt或Acm，接入X片段時僅用1或2次固相偶聯(lián)合成反應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于接入X片段時所使用的保護(hù)氨基酸為 Fmoc-Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (ΨΜθ，Mepro) -OH、 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH 中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于所述載體樹脂的取代值為 0. 5 1. 5mmol/go
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于所述載體樹脂為 Trityl-Cl類型樹脂或羥基類型樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于=Trityl-Cl類型樹脂為 Trityl-Cl 樹脂、4_Methyltrityl_Cl 樹脂、4-Methoxytrityl-Cl 樹脂或 2-C1 Trity-Cl 樹脂；羥基類型樹脂為Wang樹脂或?qū)αu甲基苯氧甲基聚苯乙烯樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于當(dāng)載體樹脂為三苯甲基氯樹脂時，F(xiàn)moc-His (trt) -OH與載體樹脂的偶聯(lián)方法為=Fmoc-His (trt) -OH的羧基與樹脂中的Cl-代烷在堿作用下發(fā)生酯化反應(yīng)而接入保護(hù)氨基酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于所述的堿選自N.N- 二異丙基乙基胺、三乙胺、吡啶中的至少一種；堿的摩爾用量為保護(hù)氨基酸摩爾數(shù)的1.5 3倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于酯化反應(yīng)時間為1 6小時，優(yōu)選為3小時。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于所述保護(hù)氨基酸種類分別為=R1-Ser (tBu)-OH、Fmoc-Gln (R2)-OH、Fmoc-Cys (R3)-0H、 Fmoc-Arg (pbf)-OH、Fmoc-Asp (TBu)-OH、Fmoc-Gly-0H> Fmoc-Ile-0H> Fmoc-Leu-OH、 Fmoc-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-Met-OH、 Fmoc-Phe-OH、 Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Val> Fmoc-Ser (TBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tB u) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (ΨΜθ, Mepro) -OH ；其中，R1 為 Fmoc> Boc, R2 為 Trt 或 H，R3 為 Trt 或 Acm0
10.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的奈西立肽的制備方法，其特征在于奈西立肽線性肽樹脂經(jīng)酸解同時脫去樹脂及側(cè)鏈保護(hù)基得到奈西立肽線性肽粗品Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Ieu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH酸解劑為三氟醋酸、1，2_乙二硫醇水混合溶劑，混合溶劑的配比為TFA的體積比為 80-95%, EDT的體積比為1 10%，余量為水。
全文摘要
本發(fā)明屬于多肽藥物制備方法技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及奈西立肽的制備方法。本發(fā)明奈西立肽的制備方法，包括固相多肽合成法制備奈西立肽線性肽樹脂、奈西立肽線性肽樹脂酸解得到奈西立肽線性肽粗品；奈西立肽線性肽粗品經(jīng)氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品純化得到奈西立肽純品。其中固相多肽合成法為在Fmoc-His(trt)-載體樹脂上通過固相偶聯(lián)合成法依次接入下列序列中相對應(yīng)的Fmoc-保護(hù)氨基酸，得到奈西立肽線性肽樹脂，接入Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)片段時僅用1或2次固相偶聯(lián)合成反應(yīng)。本發(fā)明方法產(chǎn)品純度大于99.0％，單一雜質(zhì)小于0.5％，顯著提高了產(chǎn)品收率。
文檔編號C07K1/04GK102250235SQ20111017115
公開日2011年11月23日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者文永均, 曾德志, 王曉莉, 謝期林, 郭德文 申請人:成都圣諾科技發(fā)展有限公司