專(zhuān)利名稱(chēng)：一種增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種能夠增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法。
背景技術(shù)：
抗原是一類(lèi)能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。抗原具有兩種特性①免疫原性 (immunogenicity)即抗原能刺激特定的免疫細(xì)胞，使免疫細(xì)胞活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)(抗體和致敏淋巴細(xì)胞)的特性。②免疫反應(yīng)性(immunoreactivity)即抗原與相應(yīng)的免疫效應(yīng)物質(zhì)(抗體和致敏淋巴細(xì)胞)相遇時(shí)，可發(fā)生特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)的特性(又稱(chēng)反應(yīng)原性)。具有這兩種特性的物質(zhì)稱(chēng)為完全抗原(complete antigen), 又稱(chēng)免疫原(imimmogen)，大多數(shù)蛋白質(zhì)類(lèi)抗原屬完全抗原。有些簡(jiǎn)單的有機(jī)分子(分子量小于5. OkD的小分子有機(jī)物)，單獨(dú)存在時(shí)無(wú)免疫原性，當(dāng)與蛋白質(zhì)載體(carrier)結(jié)合后才有免疫原性，但單獨(dú)時(shí)能與相應(yīng)的抗體結(jié)合而具有免疫反應(yīng)性，這些小分子物質(zhì)稱(chēng)半抗原(hapten)或不完全抗原(ineomplete antigen)，如多糖、類(lèi)脂、某些藥物均屬半抗原。應(yīng)一些實(shí)際應(yīng)用的需要，需要增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性，例如2，3Dinor血栓烷B2Q，3-Dinor TxB2)是存在于尿液中的化學(xué)物質(zhì)，其濃度變化具有顯著的臨床意義。 傳統(tǒng)的測(cè)定方法如HPLC法操作繁瑣且干擾因素多。相形之下，基于ELISA的免疫測(cè)定方法就簡(jiǎn)單快捷的多，但是該方法必須實(shí)用高效價(jià)的單克隆或多克隆抗體，這就要求增強(qiáng)2， 3Dinor血栓烷B2的免疫原性。傳統(tǒng)的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法是通過(guò)交叉連接器將其與蛋白載體 (如白蛋白)連接?，F(xiàn)有技術(shù)中，所采用的交叉連接器有EDC、SSMCC等。然而，實(shí)踐中在很多情況下，采用EDC、SSMCC作為交叉連接器，并不能有效增強(qiáng)目的小分子有機(jī)物的免疫原性，這可能是由于在修飾過(guò)程中小分子有機(jī)物的抗原決定簇被破壞或掩蓋。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能有效增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法。為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用如下技術(shù)方案—種增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其采用交叉連接器將所述小分子有機(jī)物與蛋白載體連接，特別是，所述的連接器由線性聚合物在兩端修飾活性基團(tuán)構(gòu)成，所述線性聚合物的摩爾質(zhì)量為500 10000kDa。根據(jù)本發(fā)明，所述線性聚合物優(yōu)選為聚乙二醇、聚丙二醇或者環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷共聚物。優(yōu)選地，所述線性聚合物的摩爾質(zhì)量為500 5000kDa，更優(yōu)選3000 5000kDa。活性基團(tuán)可以是對(duì)于本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員來(lái)說(shuō)已知的各種活性基團(tuán)。活性基團(tuán)包括但不限于琥珀酰亞胺琥珀酸酯(NHS Ester)、亞氨酸酯(imidoesters)、馬來(lái)酰亞胺(maleimides)、芳基疊氮(ary azides)以及酰胼(Hydazides)等。線性聚合物兩端的活性基團(tuán)可相同或者不同。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明方法被用于增強(qiáng)2，3Din0r血栓烷B2的免疫原性，其中，所采用的線性聚合物為摩爾質(zhì)量500 5000KDa的聚乙二醇，所述連接器即由該聚乙二醇在兩端修飾琥珀酰亞胺琥珀酸酯構(gòu)成?？梢岳斫?，用于增強(qiáng)2，3Din0r血栓烷B2 的免疫原性的交叉連接器同樣也可以用于增強(qiáng)IldH血栓烷B2的免疫原性。在聚乙二醇，聚丙三醇或環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷共聚物的基礎(chǔ)上修飾活性基團(tuán)是本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)手段可以實(shí)現(xiàn)的。在此不進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明所述的小分子有機(jī)物通常為分子量小于等于5000的有機(jī)物。由于采用以上技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明采用具有特定結(jié)構(gòu)的交叉連接器，采取該連接器將小分子有機(jī)物和蛋白載體連接后，小分子有機(jī)物的抗原決定簇不容易被掩蓋，從而其免疫原性顯著增強(qiáng)。此外，本發(fā)明的連接器的制備也非常容易，方法簡(jiǎn)單，成本低。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明不應(yīng)僅限于這些實(shí)施例。一種增強(qiáng)2，3Dinor TxB2免疫原性的方法，具體步驟如下(1)將 5mg 的 2,3Dinor TxB2 (Iml)和 IOmg(Iml)白蛋白加入一 15ml 試管中。(2)加入20mg交叉連接器(Iml)，該連接器由摩爾質(zhì)量4000kDa的PEG兩端修飾了琥珀酰亞胺琥珀酸酯構(gòu)成。(3)在室溫下作用2小時(shí)，使交叉連接器與2，3Dinor TxB2結(jié)合；(4)用PBS緩沖液透析2小時(shí)；(5)調(diào)節(jié)2，3Dinor TxB2與交叉連接器的結(jié)合物的濃度至大約500微克/ml。200 微升分裝于小塑料瓶中。(6)用偶聯(lián)的抗原加入適當(dāng)?shù)淖魟┟庖邉?dòng)物制備得到特異性多克隆抗體。經(jīng)檢測(cè)，所得特異性多克隆抗體的效價(jià)達(dá)到1 1000 ；作為比較，采用EDC作為交叉連接器所制備的多克隆抗體不具備特異性(效價(jià)為0)。上述實(shí)施例只為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其采用交叉連接器將所述小分子有機(jī)物與蛋白載體連接，其特征在于所述的交叉連接器由線性聚合物在兩端修飾活性基團(tuán)構(gòu)成， 所述線性聚合物的摩爾質(zhì)量為500 lOOOOkDa。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述線性聚合物為聚乙二醇、聚丙二醇或者環(huán)氧乙烷-環(huán)氧丙烷共聚物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述線性聚合物的摩爾質(zhì)量為500 5000kDa。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述活性基團(tuán)為選擇下列基團(tuán)中的一種或二種琥珀酰亞胺琥珀酸酯、亞氨酸酯、馬來(lái)酰亞胺、芳基疊氮、酰胼。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述線性聚合物兩端的活性基團(tuán)相同或者不同。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述小分子有機(jī)物為IldH血栓烷B2或2，3Dinor血栓烷B2。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述線性聚合物為摩爾質(zhì)量500 5000KDa的聚乙二醇，所述交叉連接器由所述聚乙二醇在兩端修飾琥珀酰亞胺琥珀酸酯構(gòu)成。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其特征在于所述小分子有機(jī)物的分子量范圍為小于等于5000。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種增強(qiáng)小分子有機(jī)物的免疫原性的方法，其采用交叉連接器將所述小分子有機(jī)物與蛋白載體連接，特別是，所述的交叉連接器由線性聚合物在兩端修飾活性基團(tuán)構(gòu)成，所述線性聚合物的摩爾質(zhì)量為500～10000kDa。本發(fā)明采用具有特定結(jié)構(gòu)的連接器，采取該連接器將小分子有機(jī)物和蛋白載體連接后，小分子有機(jī)物的抗原決定簇不容易被掩蓋，從而其免疫原性顯著增強(qiáng)。此外，本發(fā)明的連接器的制備也非常容易，方法簡(jiǎn)單，成本低。
文檔編號(hào)C07K17/08GK102295704SQ20111013268
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2011年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月23日
發(fā)明者王小良 申請(qǐng)人:蘇州良辰生物醫(yī)藥科技有限公司