專利名稱：大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷d的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及木通皂苷D的制備方法，具體涉及一種大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法。
背景技術：
木通皂苷D是從天然的中藥續(xù)斷中提取得到的，不同純度的木通皂苷D有抗老年癡呆活性。傳統(tǒng)的木通皂苷D提取方法是藥材粉碎成米粒大小用95%的乙醇水浴回流提取 3次，提取液過濾合并，減壓濃縮回收乙醇至小體積，濃縮液用石油醚萃取脫脂，至石油醚無色，脫脂后的濃縮液調(diào)PH3-4，用氯仿分次萃取，合并萃取液，中和氯仿萃取液至Ph7，減壓回收氯仿近干，得到木通皂苷D粗品，木通皂苷D粗品經(jīng)硅膠柱用不同比例的氯仿甲醇系統(tǒng)洗脫純化，再經(jīng)ODS柱用甲醇水系統(tǒng)洗脫，最終得到純度為90%的木通皂苷D。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，該制備方法采用大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D，制備工藝簡單易行，方便工業(yè)化實施。本發(fā)明的技術解決方案是該制備方法包括以下步驟
(1)藥材提取濃縮取續(xù)斷藥材粗顆粒置于容器中，加入10倍量的質量濃度90%的乙醇，浸泡2小時，水浴回流提取2小時，濾過；藥渣再用10倍量的質量濃度90%的乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過；合并3次濾液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得濃度為0. Ig生藥/ml的濃縮液；
(2)大孔吸附樹脂富集取濃度為0.Ig生藥/ml的濃縮液，用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂富集，由乙醇水溶液洗脫，得0. Ig生藥/ml的富集液；
(3)大孔吸附樹脂精制取濃度0.Ig生藥/ml的富集液，用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂精制，由甲醇或乙醇水溶液洗脫，回收溶劑至近干，經(jīng)減壓干燥，得到木通皂苷D。其中，采用D101、HPD-100, Seplite LX-68、HPD-200A、HPD-722、HPD-721 大孔吸附樹脂富集制備木通皂苷D的富集液，乙醇水溶液的質量濃度為20%-95%，洗脫液的體積為 4-8倍量的柱體積，50%的乙醇水溶液為最佳洗脫液。其中，富集用大孔吸附樹脂的預處理先用4倍量柱體積蒸餾水漂洗，再用質量濃度95%的乙醇浸泡12小時，然后用2倍柱體積質量濃度95%的乙醇淋洗以脫除致孔劑或低聚物，終點以流出的乙醇加水不顯混濁為標準，流速為lBV/h，最后用4倍量柱體積蒸餾水洗至無醇味，流速為2BV/h。其中，采用ODS-AA (50 μ m)、ODS-AQ (50 μ m)、0DS_AA (75 μ m)、0DS_AQ (75 μ m)、 ODS-BP (40-60 μ m)大孔吸附樹脂精制木通皂苷D的富集液，甲醇水溶液的質量濃度為 10%-90%，洗脫液的體積為6-8倍量的柱體積，50%-70%的甲醇水溶液為最佳洗脫液。其中，采用ADS-7大孔吸附樹脂精制木通皂苷D的富集液，由乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的質量濃度為20%-70%，洗脫液的體積為4-8倍量的柱體積，50%-70%的乙醇水溶液為最佳洗脫液。其中，ADS-7大孔吸附樹脂的預處理用2-4倍樹脂體積的質量濃度5%的鹽酸處理，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至中性，流速2BV/h ；再用2-4倍柱體積的含質量3%氫氧化鈉的50%乙醇水溶液洗脫，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至pH試紙檢測為中性，流速2BV/ h ；再用3倍柱體積質量濃度4%氫氧化鈉水溶液洗脫，流速為lBV/h ；6倍柱體積水洗至pH 試紙檢測為中性，流速為2BV/h。其中，ODS大孔吸附樹脂的預處理以質量濃度95%的乙醇浸泡和洗滌，再用水洗至無醇味。本發(fā)明的制備方法在藥材提取、濃縮后，濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂富集，再經(jīng)大孔吸附樹脂精制，得到純度90%以上的木通皂苷D，制備工藝簡單易行，工藝路線短，工業(yè)化生產(chǎn)
效率高。
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術解決方案的限制。實施例1 木通皂苷D的富集液的制備
1.富集木通皂苷D富集液的樹脂D101、HPD-100、S印lite LX-68、HPD-200A、HPD_722、 HPD-721 ；
2.層析柱徑高比徑高比為1:4-1:9；
3.吸附材料的吸附量藥材重g樹脂濕重g=l :1 5 ；
4.溫度10-350C ；
5.富集用大孔吸附樹脂的預處理先用4倍量柱體積蒸餾水漂洗，再用質量濃度95% 的乙醇浸泡12小時，然后用2倍柱體積質量濃度95%的乙醇淋洗以脫除致孔劑或低聚物， 終點以流出的乙醇加水不顯混濁為標準，流速為lBV/h，最后用4倍量柱體積蒸餾水洗至無醇味，流速為2BV/h ；
6.藥材提取濃縮分別取續(xù)斷藥材粗顆粒6份，每份為200g，分別置于3000ml的圓底燒瓶中，分別加入10倍量的質量濃度90%的乙醇，浸泡2小時，分別水浴回流提取2小時，分別濾過；藥渣再分別用10倍量的質量濃度90%的乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過；分別合并3次濾液，分別減壓回收乙醇至無醇味，分別配制成生藥藥液為1 :1的水溶液(lg/ ml)；
7.上樣液取藥材提取濃縮液配濃度為0.Ig生藥/ml的上樣液，上樣液的流速為每小時1個柱體積；
8.洗脫液分別依次用水、20%、30%、35%、50%、95%的乙醇水溶液洗脫，洗脫液的體積分別為4-8倍量的柱體積，洗脫液流速為每小時2個柱體積；
9.幾種型號樹脂富集木通皂苷D的結果分別取濃度為0.Ig生藥/ml的上樣液各 2000ml，相當于200g生藥，分別上已經(jīng)處理過的D101、HPD_100、S印lite LX-68、HPD_200A、 HPD-722、HPD-721，樹脂體積為960ml，分別依次用水、20%、30%、35%、50%、95%的乙醇水溶液洗脫，洗脫液的體積為4-8倍量的柱體積；分別合并50%的乙醇洗脫液，分別回收溶劑至小體積，分別以水定容為2000ml，分別稱為富集液1、富集液2、富集液3、富集液4、富集液5、富集液6 ；6種不同樹脂得到的木通皂苷D富集液分別經(jīng)HPLC測定其濃度，并經(jīng)濃度和總體
積計算當中木通皂苷D的含量及其轉移率。 實施例2 木通皂苷D富集液中木通皂苷D的含量測定
1.色譜條件Agilent-1260型高效液相色譜儀，色譜柱為Bostonanalytics, Green ODS-AQ 4. 6 X 150mm 5um，波長為 212nm，進樣量為 20ul，流速為 1. Oml/min，柱溫為 25°C，流動相為乙腈-水(30:70)；
2.對照品木通皂苷D溶液精密稱定木通皂苷D對照品粉末4.97mg，移至5 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，過0.45 ym微孔濾膜，得0.9940 mg/mL的MD對照液；含量測定時，用移液管精密量取MD對照液0.2 mL，流動相(乙腈-水=30:70)溶解并稀釋至1 mL，過0.45 ym微孔濾膜，濃度為0.9940/5 = 0. 1988mg/ml ；
3.木通皂苷D樣品液分別稱取實施例1的富集液1-6號樣品液各1ml，分別以流動相 (乙腈- 水=30:70)定容至IOml ；
4.富集液1-6號樣品液中木通皂苷D含量測定
分別精取上述富集液1-6號樣品待測液，過0.45 ym微孔濾膜，分別精取上述各樣品液和對照品溶液20ul，注入色譜柱，按上述色譜條件測定；
5.測定的結果對照品中木通皂苷D峰面積Swms=694.2 ；測得各樣品中木通皂苷D 峰面積=St^nl =287.5，S#p2 =281.1，S^n3 =285.7，S#P 4 =284.0，S#P 5 =279.4，St^6 =291. 2 ；
計算得到的各木通皂苷D樣品中木通皂苷D的濃度 C樣品廣 C對照品 XS樣品/S5wm=O. 1988X694. 2/287. 5=0. 480mg/ml C樣品2= C對照品 XS樣品2/S對照品=0. 1988X694. 2/281. 1=0. 491mg/ml C樣品3= C對照品 XS樣品 3/S對照品=0. 1988X694. 2/285. 7=0. 483mg/ml C樣品4= C對照品 XS樣品4/S對照品=0. 1988X694. 2/284. 0=0. 486mg/ml C樣品5= C對照品 XS樣品 5/S對照品=0. 1988X694. 2/279. 4=0. 494mg/ml C樣品6= C對照品 XS樣品6/S對照品=0. 1988X694. 2/291. 2=0. 474mg/ml 計算得到富集液1-6樣品中木通皂苷D的含量
富集樣品液1中木通皂苷D的含量=CtisiXVtisi=O. 480mg/mlX2000ml=9. 60g 富集樣品液2中木通皂苷D的含量=Ctis2Xvtis2=OjgimgAilXZOOOml =9. 82g 富集樣品液3中木通皂苷D的含量=Ctis3XVtis3=O. 483mg/ml X 2000ml =9. 66g 富集樣品液4中木通皂苷D的含量=Ctis4XVtis4=O. 486mg/ml X 2000ml =9. 72g 富集樣品液5中木通皂苷D的含量=Ctis5XVtis5=O. 494mg/ml X 2000ml =9. 88g 富集樣品液6中木通皂苷D的含量=Ctis6XVtis6=O. 474mg/ml X 2000ml =9. 48g 計算得到富集液1-6樣品中木通皂苷D的轉移率已知原藥材當中木通皂苷D的百分含量為5. 15%，提取的轉移率為98%，提取后的藥液中木通皂苷D的含量為5. 05% ；本實驗所用藥材的量均為200g，200g藥材提取液中木通皂苷D的含量應該為10. Ig ； 富集之后不同吸附材料得到的富集液中木通皂苷D的轉移率分別如下 富集樣品液1中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 60g /10. lg=95. 0%
富集樣品液2中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 82g /10. lg=97. 2%
富集樣品液3中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 66g /10. lg=95. 6%
富集樣品液4中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 72g /10. lg=96. 2%
富集樣品液5中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 88g /10. lg=98. 0%
富集樣品液6中木通皂苷D的轉移率=富集樣品液1中木通皂苷D的含量/藥液中木通皂苷 D 的含量=9. 48g /10. lg=93. 9%
結論上述1-6份吸附材料得到的富集液中木通皂苷D的轉移率在93. 9%-98. 0%之間， 可以認為上述各種吸附材料，均適用于富集續(xù)斷提取液中的木通皂苷D。
實施例3 木通皂苷D的精制
1.精制木通皂苷D富集液的大孔吸附樹脂ADS-7、0DS-AA(50 μ m)、0DS_AQ (50 μ m)、 ODS-AA (75 μ m)、ODS-AQ (75 μ m)、ODS-BP (40-60 μ m);
2.層析柱徑高比徑高比為1:4-1:9；
3.大孔吸附樹脂的吸附量續(xù)斷藥材g吸附材料g=l :1 5 ；
4.溫度10-350C ；
5.精制大孔吸附樹脂的預處理
其中，ADS-7大孔吸附樹脂的處理用2-4倍樹脂體積的質量濃度5%的鹽酸處理，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至中性，流速2BV/h ；再用2-4倍柱體積的含質量3%氫氧化鈉的 50%乙醇水溶液洗脫，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至pH試紙檢測為中性，流速2BV/h ；再用3倍柱體積質量濃度4%氫氧化鈉水溶液洗脫，流速為lBV/h ；6倍柱體積水洗至pH試紙檢測為中性，流速為2BV/h，備用；
其中，ODS大孔吸附樹脂的預處理以質量濃度95%的乙醇浸泡和洗滌，再用水洗至無醇味；
6.上樣液分別采用實施例1中的第1號富集液水溶液共6份，待進行精制；上樣液的濃度為0. Ig生藥/ml富集液水溶液，上樣液的流速為每小時2個柱體積；
7.洗脫液洗脫液分別為甲醇水溶液和乙醇水溶液，甲醇水溶液的比例為1:9一9 1 進行梯度洗脫，洗脫液的體積分別為4-8倍量的柱體積；洗脫流速為每小時2個柱體積；
8.幾種吸附樹脂精制木通皂苷D的結果
五種ODS吸附樹脂制備木通皂苷D 分別取5份濃度為0. Ig生藥/ml的富集液水溶液 2000ml，分別上已經(jīng)處理過的 ODS-AA (50 μ m)、0DS-AQ (50 μ m)、ODS-AA (75 μ m)、ODS-AQ (75 μ m),ODS-BP (40-60 μ m)吸附樹脂柱；分別依次用甲醇水溶液洗脫，洗脫液的比例為1 9-9 :1，洗脫液的體積分別為6-8倍量的柱體積；合并洗脫液比例為5 5-7 3的洗脫液， 回收溶劑至近干，經(jīng)65°C減壓干燥，分別得到木通皂苷D，得到的木通皂苷D分別為5. 2g、 5.3g、5.2g、5.2g、5. lg，分別稱為樣品(1)、樣品(2)、樣品(3)、樣品(4)、樣品(5)；
ADS-7大孔樹脂柱制備木通皂苷D 取濃度為0. Ig生藥/ml的富集液水溶液2000ml，上已經(jīng)處理過的ADS-7大孔樹脂柱，依次用水-20%乙醇-30%乙醇-35%乙醇-50%乙醇-70% 乙醇水溶液洗脫，洗脫液的體積分別為4-8倍量的柱體積，合并50%和70%乙醇水溶液洗脫液，回收溶劑至近干，經(jīng)65°C減壓干燥，得到木通皂苷D，得到的木通皂苷D為5. 3g，稱為樣品(6)。 實施例4 木通皂苷D精制液中木通皂苷D的含量測定
1.色譜條件同實施例2;
2.對照品木通皂苷D溶液精密稱定木通皂苷D對照品粉末4.97mg，移至5 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，過0.45 ym微孔濾膜，得0.9940 mg/mL的MD對照液；含量測定時，用移液管精密量取MD對照液0.2 mL，流動相(乙腈-水=30:70)溶解并稀釋至1 mL，過0.45 ym微孔濾膜，濃度為0.9940/5 = 0. 1988mg/ml ；
3.木通皂苷D樣品供試液分別稱取實施例3的ODS-AA(50 μ m)、0DS_AQ (50 μ m)、 ODS-AA (75 μ m),ODS-AQ (75 μ m)、0DS_BP (40-60 μ m)、ADS_7 精制得到的木通皂苷 D 樣品各lml，分別用乙腈-水-甲醇=30:70:25定容為25ml，分別標注為樣品(1)、樣品(2)、樣品⑶、樣品(4)、樣品(5)、樣品(6)；
4.木通皂苷D樣品的含量測定分別精取上述木通皂苷D樣品液和對照品溶液各 20ul，注入色譜柱，按上述色譜條件測定；
5.各樣品木通皂苷D稱量結果樣品α)=15· 2mg ；W樣品(2)=14· Omg ；W樣品(3)=14· 9mg ；W樣品 ⑷=15. Img ；W樣品⑴=15. 3mg ；W樣品⑷=15. 2mg ；
6測定的結果對照品中木通皂苷D峰面積Swms=702. 2 ；測得各樣品供試液中木通皂苷D的峰面積:S樣品⑴=1966. 3 ；S樣品⑵=1812. 7 ；S樣品⑶=1931. 4 ；S樣品⑷=1950. 1 ；S樣品⑴ =2005.2 ;S樣品(6) =1957.9 ；
計算得到的各樣品中木通皂苷D的濃度
C樣品(1)=C對照品X §樣品(1)/S對照品=0.1988X1966.3/"02.2==0.5567mg/,mlC樣品(2)=C對照品X S樣品⑵/S對照品=0.1988X1812.7/"02.2==0.5132mg/,mlC樣品(3)=C對照品X S樣品⑶/S對照品=0.1988X1931.4/"02.2==0.5468mg/,mlC樣品(4)=C對照品X S樣品⑷/S對照品=0.1988X1950.1/"02.2==0.5521mg/,mlC樣品(5)=C對照品X S樣品(5)/S對照品=0.1988X2005.2/"02.2==0.5677mg/,mlC樣品(6)=C對照品X S樣品(6)/S對照品=0.1988X1957.9/"02.2==0.5543mg/,ml
計算得到各樣品中木通皂苷D的百分含量
C樣品⑴ XV樣品⑴/W樣品⑴=0· 5567mg/mlX25ml/15. 2mg=91. 6%。C樣品⑵ XV樣品⑵/W樣品⑵=0. 5132mg/mlX25ml/14. 0mg=91. 6%。C樣品⑶ XV樣品⑶/W樣品⑶=0. 5468mg/mlX25ml/14. 9mg=91. 7%。C樣品⑷ XV樣品⑷/W樣品⑷=0. 5521mg/mlX25ml/15. lmg=91. 4%。C樣品⑶ X V樣品⑴/W樣品⑴=0. 5677mg/mlX25ml/15. 3mg=92. 8%。C樣品⑷ XV樣品⑷/W樣品⑷=0. 5543mg/mlX25ml/15. 2mg=91. 2%。結論上述各種用于精制的吸附樹脂得到的樣品純度均大于90%，達到中藥一類新藥的純度要求，符合精制的需要。
權利要求
1.大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于該制備方法包括以下步驟(1)藥材提取濃縮取續(xù)斷藥材粗顆粒置于容器中，加入10倍量的質量濃度90%的乙醇，浸泡2小時，水浴回流提取2小時，濾過；藥渣再用10倍量的質量濃度90%的乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過；合并3次濾液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得濃度為0. Ig生藥/ml的濃縮液；(2)大孔吸附樹脂富集取濃度為0.Ig生藥/ml的濃縮液，用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂富集，由乙醇水溶液洗脫，得0. Ig生藥/ml的富集液；(3)大孔吸附樹脂精制取濃度0.Ig生藥/ml的富集液，用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂精制，由甲醇或乙醇水溶液洗脫，回收溶劑至近干，經(jīng)減壓干燥，得到木通皂苷D。
2.根據(jù)權利要求1所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 其中，采用 D101、HPD-100、S印lite LX-68、HPD-200A、HPD-722、HPD_721 大孔吸附樹脂富集制備木通皂苷D的富集液，乙醇水溶液的質量濃度為20%-95%，洗脫液的體積為4-8倍量的柱體積。
3.根據(jù)權利要求2所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 富集木通皂苷D的富集液時，采用質量濃度50%的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權利要求2所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 其中，富集用大孔吸附樹脂的預處理先用4倍量柱體積蒸餾水漂洗，再用質量濃度95%的乙醇浸泡12小時，然后用2倍柱體積質量濃度95%的乙醇淋洗以脫除致孔劑或低聚物，終點以流出的乙醇加水不顯混濁為標準，流速為lBV/h，最后用4倍量柱體積蒸餾水洗至無醇味，流速為2BV/h。
5.根據(jù)權利要求1所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 其中，采用 ODS-AA (50 μ m)、ODS-AQ (50 μ m)、ODS-AA (75 μ m)、ODS-AQ (75 μ m)、ODS-BP (40-60 μ m)大孔吸附樹脂精制木通皂苷D的富集液，甲醇水溶液的質量濃度為10%-90%，洗脫液的體積為6-8倍量的柱體積。
6.根據(jù)權利要求5所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 精制木通皂苷D的富集液時，采用質量濃度50%-70%的甲醇水溶液脫液。
7.根據(jù)權利要求1所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 其中，采用ADS-7大孔吸附樹脂精制木通皂苷D的富集液，由乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的質量濃度為20%-70%，洗脫液的體積為4-8倍量的柱體積。
8.根據(jù)權利要求7所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 精制木通皂苷D的富集液時，采用質量濃度50%-70%的乙醇水溶液洗脫。
9.根據(jù)權利要求7所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于 其中，ADS-7大孔吸附樹脂的預處理用2-4倍樹脂體積的質量濃度5%的鹽酸處理，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至中性，流速2BV/h ；再用2-4倍柱體積的含質量3%氫氧化鈉的50% 乙醇水溶液洗脫，流速1 BV/h ；6倍柱體積水洗至pH試紙檢測為中性，流速2BV/h ；再用3 倍柱體積質量濃度4%氫氧化鈉水溶液洗脫，流速為lBV/h ；6倍柱體積水洗至pH試紙檢測為中性，流速為2BV/h。
10.根據(jù)權利要求5所述的大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，其特征在于其中，ODS大 孔吸附樹脂的預處理以質量濃度95%的乙醇浸泡和洗滌，再用水洗至無醇味。
全文摘要
本發(fā)明公開了大孔吸附樹脂富集精制木通皂苷D的制備方法，取續(xù)斷藥材粗顆粒置于容器中，加入10倍量的質量濃度90%的乙醇，浸泡2小時，水浴回流提取2小時，濾過；藥渣再用10倍量的質量濃度90%的乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過；合并3次濾液，減壓濃縮，得濃縮液；取濃縮液用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂富集，由乙醇水溶液洗脫，得富集液；取富集液用已經(jīng)處理過的大孔吸附樹脂精制，由甲醇或乙醇水溶液洗脫，回收溶劑至近干，經(jīng)減壓干燥，得到木通皂苷D。本發(fā)明的制備方法在藥材提取、濃縮后，濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂富集，再經(jīng)大孔吸附樹脂精制，工藝簡單易行，路線短，工業(yè)化生產(chǎn)效率高。
文檔編號C07J63/00GK102180937SQ201110075470
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月28日 優(yōu)先權日2011年3月28日
發(fā)明者紀樂軍 申請人:江蘇神華藥業(yè)有限公司