專利名稱：一種大葉茜草素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大葉茜草素的制備方法，屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種利用 大孔樹脂和硅膠柱層析技術(shù)，從茜草中提取純化大葉茜草素的方法。
背景技術(shù)：
茜草為茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根莖。始載于《神農(nóng)本 草經(jīng)》，具有涼血、祛瘀、止血、通經(jīng)的功效，用于吐血、衄血、崩漏、外傷出血、淤阻經(jīng)閉、關(guān)節(jié) 痹痛、跌撲腫痛。茜草主產(chǎn)于陜西渭南、河南嵩縣、安徽、江蘇、山東等地。目前，已知茜草中 含有多種蒽醌類成分、萘醌類成分、環(huán)六肽成分，其中萘醌類成分為茜草類藥材的特征性成 分。茜草有顯著的止血、抑菌、消炎作用，大葉茜草素是其主要有效成分之一，體外實(shí)驗(yàn)表 明，茜草素對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸埃希氏菌、綠膿桿菌、沙門氏菌和克雷伯氏菌 等均有顯著的抑制作用。劉廣等發(fā)現(xiàn)甲醇溶液中的大葉茜草素在光照下不穩(wěn)定，測(cè)定其含 量應(yīng)避光操作。譚朝陽通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)三七總皂苷、三七素、大葉茜草素是三七、茜草治療宮 環(huán)出血的主要有效部位，三七總皂苷、三七素、大葉茜草素均能使家兔子宮勻漿6-K-PGFla/ TXB2比值明顯降低，而三七、茜草提取后的剩余物無相應(yīng)作用或作用較弱。尤昭玲等的實(shí) 驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SQ重組復(fù)方能改善置Cu-IUD家兔子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞線粒體水腫 及空泡變，改善間質(zhì)細(xì)胞的泡沫樣變，體外實(shí)驗(yàn)表明，其中的有效組分大葉茜草素對(duì)花生四 烯酸、膠原誘導(dǎo)的兔血小板聚集有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)血小板激活因子誘導(dǎo)的血小板聚集 也有抑制作用，在另一組實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中的模型組家兔紅細(xì)胞比容、全血黏度(低切、中 切、高切)、血漿黏度都顯著提高，與空白對(duì)照組差異有顯著性(P < 0. 01)，分別經(jīng)三七總 皂苷、三七素、大葉茜草素及吲哚美辛治療后均可降低以上指標(biāo)，并且三七總皂苷、三七素、 大葉茜草素與陽性對(duì)照組藥物同樣使所測(cè)指標(biāo)達(dá)到正常，均具有治療作用；因此，三七總皂 苷、三七素、大葉茜草素是SQ復(fù)方有效部位，通過調(diào)節(jié)血液流變性，達(dá)到去瘀生新的止血作 用。目前國內(nèi)對(duì)大葉茜草素提取純化工藝研究方面文獻(xiàn)較少，譚朝陽、劉倩、彭亮等均 采用乙醇回流提取，該方法僅得到茜草粗提物，無法得到高含量的大葉茜草素。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種大葉茜草素的制備方法，可得到高含量的大葉茜草 素。該方法對(duì)環(huán)境要求不高，成本低，操作簡(jiǎn)單，易于控制，適合于從茜草中工業(yè)化制備提取 該化合物。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種大葉茜草素的制備方法，包括下列步驟a.將茜草根及根莖粉碎，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，提取兩次，過濾，保留濾液，濃 縮；b.用水懸浮，加入大孔吸附樹脂柱吸附，80-100%甲醇或乙醇洗脫，收集洗脫液，
3減壓濃縮至干；c.上述濃縮物采用硅膠柱層析分離純化，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-甲醇或正己 烷-乙酸乙酯梯度洗脫，收集流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)將相同流分合并；d.將大葉茜草素流分減壓回收試劑，濃縮至干，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶得到大葉 茜草素純品。所述步驟a.中有機(jī)溶劑選自丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲醇中的一種或幾種。所述步驟a.中提取方法可選微波提取、超聲提取、加熱回流提取、滲漉提取或索 氏提取中的一種。所述步驟b.中大孔樹脂可選XSD-I、DlOl、AB_8、HPD100等非極性或弱極性樹脂。所述步驟c.中洗脫劑體積比為49 1-2 1。本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，成本低、選用樹脂吸附，富集量大，除雜效果好，能耗低，避 免高溫發(fā)生結(jié)構(gòu)變化；采用硅膠柱分離效果好。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例1:以陜西產(chǎn)茜草為原料，取10kg，用90%丙酮索氏提取，過濾，取濾液，將藥渣再重 復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入DlOl大孔吸 附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，再 用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-乙酸乙酯為系統(tǒng)溶 劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml為 一個(gè)流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié)晶， 真空干燥得43. 2g大葉茜草素，含量為90. 36%。實(shí)施例2:以陜西產(chǎn)茜草為原料，取10kg，用甲醇索氏提取，過濾，取濾液，將藥渣再重復(fù)上述 操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入大孔吸附樹脂柱吸 附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，再用無水硫 酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-氯仿為系統(tǒng)溶劑進(jìn)行梯度洗 脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml為一個(gè)流分，根 據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié)晶，真空干燥得 57. 2g大葉茜草素，含量為91. 45%。實(shí)施例3:以陜西產(chǎn)茜草為原料，取20kg，用90 %乙醇加熱回流提取，過濾，取濾液，將藥渣 再重復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入HPD100 大孔吸附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以90%甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收 乙醇，再用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-氯仿為系統(tǒng) 溶劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml 為一個(gè)流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié) 晶，真空干燥得76. 3g大葉茜草素，含量為92. 43%。
實(shí)施例4 以陜西產(chǎn)茜草為原料，取20kg，用60 %乙酸乙酯加熱回流提取，過濾，取濾液，將 藥渣再重復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入 AB-8大孔吸附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以95 %甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓 回收乙醇，再用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-乙酸乙 酯為系統(tǒng)溶劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液， 每500ml為一個(gè)流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙 酮重結(jié)晶，真空干燥得78. 4g大葉茜草素，含量為94.沈％。實(shí)施例5 以陜西產(chǎn)茜草為原料，取30kg，用90 %甲醇微波提取，過濾，取濾液，將藥渣再重 復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入XSD-I大孔 吸附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以85%甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇， 再用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，正己烷-乙酸乙酯為系統(tǒng) 溶劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml 為一個(gè)流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié) 晶，真空干燥得112. 5g大葉茜草素，含量為95. 12%。實(shí)施例6 以陜西產(chǎn)茜草為原料，取30kg，用70%乙醇索氏提取，過濾，取濾液，將藥渣再重 復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入DlOl大孔吸 附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，再 用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-甲醇為系統(tǒng)溶劑進(jìn) 行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml為一個(gè) 流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié)晶，真空 干燥得104. 6g大葉茜草素，含量為93. 37%。實(shí)施例7 以陜西產(chǎn)茜草為原料，取50kg，用95 %甲醇超聲提取，過濾，取濾液，將藥渣再重 復(fù)上述操作提取一次，合并兩次濾液，濃縮得茜草浸膏；將浸膏用水懸浮，加入AB-8大孔吸 附樹脂柱吸附，吸附后先用水洗脫雜質(zhì)，再以90%甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，再 用無水硫酸鈉脫水至接近無水分；采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，石油醚-乙酸乙酯為系統(tǒng)溶 劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液體積配比為49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脫液，每500ml為 一個(gè)流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并相同流分，減壓濃縮大葉茜草素流分，再用丙酮重結(jié)晶， 真空干燥得184. Og大葉茜草素，含量為92. 33%。
權(quán)利要求
1.一種大葉茜草素的制備方法，包括下列步驟a.將茜草根及根莖粉碎，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，提取兩次，過濾，保留濾液，濃縮；b.用水懸浮，加入大孔吸附樹脂柱吸附，80-100%甲醇或乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓 濃縮至干；c.上述濃縮物采用硅膠柱層析分離純化，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-氯仿或正己 烷-乙酸乙酯梯度洗脫，收集流分，根據(jù)TLC跟蹤監(jiān)測(cè)將相同流分合并；d.將大葉茜草素流分減壓回收試劑，濃縮至干，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶得到大葉茜草 素純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述大葉茜草素的制備方法，其特征在于所述步驟a.中所用原藥材 茜草為陜西產(chǎn)茜草。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述大葉茜草素的制備方法，其特征在于所述步驟a.中有機(jī)溶劑選 自丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲醇中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述大葉茜草素的制備方法，其特征在于所述步驟a.中提取方法可 選微波提取、超聲提取、加熱回流提取、滲漉提取或索氏提取中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述大葉茜草素的制備方法，其特征在于所述步驟b.中大孔樹脂可 選XSD-I、DlOl、AB-8、HPD100等非極性或弱極性樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述大葉茜草素的制備方法，其特征在于所述步驟c.中洗脫劑體積 比為 49 1-2 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大葉茜草素的制備方法，該方法是將茜草干燥并粉碎，采用有機(jī)溶劑提取，濃縮，用水懸浮，大孔吸附樹脂與硅膠柱層析連續(xù)分離純化，濃縮洗脫液，二氯甲烷-丙酮結(jié)晶，得到大葉茜草素純品。整個(gè)分離過程對(duì)環(huán)境要求不高，成本低，操作簡(jiǎn)單，易于控制，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D311/92GK102060835SQ201010603999
公開日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司