專利名稱：一種羥基積雪草甙的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種羥基積雪草甙的制備方法，屬于藥用活性成分的提取技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
積雪草為雙子葉植物傘形科植物積雪草的全草或帶根全草，具有清熱利濕，消腫 解毒之功效；用于治療濕熱黃疸，痢疾風(fēng)疹、喉腫、腫毒和跌打損傷等。積雪草總甙是積雪草 的活性成分，羥基積雪草甙是積雪草總甙的主要成分之一。已有研究發(fā)現(xiàn)，羥基積雪草甙具 有較好的抗抑郁藥用，是較有發(fā)展前途的天然抗抑郁劑。目前已公開的從積雪草中提取分離出羥基積雪草甙的方法不多，具體有1、公開號(hào)為CN1377649的發(fā)明專利中公開了可以制得羥基積雪草甙的方法，具體 是先將積雪草總甙溶于甲醇后，進(jìn)行硅膠正相色譜層析，以氯仿和甲醇的混合液為洗脫溶 劑，收集其中氯仿甲醇=2 1比例部分的洗脫液，減壓回收洗脫液，得到白色晶體狀單 一化合物羥基積雪草甙。這種方法制得的羥基積雪草甙的純度不夠理想，而且洗脫溶劑中 含有氯仿，不夠環(huán)保，危害操作人員的健康。2、公開號(hào)為CN101210039的發(fā)明專利，公開了一種羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品的分 離制備方法，它是以重量含量30 97%的羥基積雪草甙提取物為原料，以制備型高效液相 色譜為分離手段，以甲醇_水溶液為洗脫體系，獲得純度98%以上羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照 品。該方法雖然可獲得高純度的羥基積雪草甙單品，但它是以重量含量30 97%的積雪草 甙提取物為原料進(jìn)行分離提純的，必須先從積雪草中提取出一定含量的積雪草甙提取物； 此外，該方法所用設(shè)備制備型高效液相色譜價(jià)格較高，導(dǎo)致產(chǎn)品的生產(chǎn)成本偏高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種成本低廉、操作簡(jiǎn)單且所得產(chǎn)品純度高的羥 基積雪草甙的制備方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種羥基積雪草甙的制備方法，其步驟如下1)取積雪草，粉碎，用50 80%乙醇的加熱回流提取1 3次，每次30 90min， 合并提取液；2)提取液經(jīng)陶瓷膜過(guò)濾后進(jìn)大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次 用30 40%乙醇和70 80%乙醇洗柱，收集70 80%乙醇洗脫液，濃縮至浸膏；3)浸膏用90 100%乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為70 80%， 然后進(jìn)脫色樹脂柱脫色，收集流出液；4)流出液濃縮至乙醇含量為10 15%，放冷析晶，抽濾，母液進(jìn)大孔樹脂柱層析， 水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用10 20%乙醇和35 45%乙醇洗柱，收集35 45% 乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得羥基積雪草甙。上述制備方法中
步驟1)中，50 80%乙醇的用量為原料重量的6 12倍。步驟2)中，所述陶瓷膜為孔徑為0. 25 1 μ m的氧化鋁陶瓷膜。30 40%乙醇的 用量為樹脂柱床體積的1. 5 2. 5倍，70 80%乙醇的用量為樹脂柱床體積的2 3倍。步驟3)中，90 100%乙醇的用量為浸膏重量的8 12倍。所述脫色樹脂柱可 為大孔型脫色樹脂柱、中性氧化鋁樹脂柱或活性炭柱。步驟4)中，10 20%乙醇的用量為樹脂柱床體積的1. 5 3倍，35 45%乙醇 的用量為樹脂柱床體積的2 3倍。步驟2)和4)中，所述大孔樹脂的型號(hào)可為D101、D130或AB-8。上述方法中所述的濃縮和干燥均可采用與現(xiàn)有制備羥基積雪草甙方法中相同的 操作。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、提取液先用陶瓷膜除雜后再用大孔樹脂柱層析，減少了大孔樹脂的工作負(fù)荷， 也即減少了后續(xù)洗脫用的水、乙醇的用量，降低了生產(chǎn)成本；2、兩次柱層析時(shí)均采用由低到高不同濃度的乙醇進(jìn)行洗脫，可以在洗脫步驟即用 低濃度的乙醇除去更多的不溶于水的醇溶性雜質(zhì)，從而提高產(chǎn)品的純度，另一方面也避免 了只用同一濃度的乙醇洗脫而造成的高成本費(fèi)用；3、采用普通大孔樹脂實(shí)現(xiàn)羥基積雪草甙的分離，與采用制備型高效液相色譜相 比，其成本大幅降低，從而進(jìn)一步降低了產(chǎn)品的生產(chǎn)成本；4、整個(gè)方法簡(jiǎn)單易操作，而且所制得的羥基積雪草甙純度高，可達(dá)95 %以上 (HPLC 測(cè)定)。
具體實(shí)施例方式以下各實(shí)施例中，乙醇的濃度均為體積濃度。實(shí)施例11)取積雪草，粉碎，置于提取罐中，加入10倍原料重量的65%乙醇回流提取，溫度 控制在90°C，第一次回流提取90min，濾出藥液，再加入10倍原料重量的65%乙醇，回流提 取30min，合并提取液；2)提取液用孔徑為0. 25 μ m的氧化鋁陶瓷膜過(guò)濾，然后進(jìn)DlOl大孔樹脂柱層析， 水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用2倍樹脂柱床體積的30%乙醇和2. 5倍樹脂柱床體積 的70%乙醇洗柱，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮至浸膏；3)浸膏用于其重量10倍的95%乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為70%，然后進(jìn)活性炭柱脫色，收集流出液；4)流出液減壓濃縮至乙醇含量為10%，4°C放置20h，析出大量晶體后抽濾，母液 進(jìn)AB-8大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用2倍樹脂柱床體積的15%乙 醇和2. 5倍樹脂柱床體積的40 %乙醇洗柱，收集40%乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得羥
基積雪草甙。經(jīng)測(cè)定，所得羥基積雪草甙的純度為98. 2%。實(shí)施例21)取積雪草，粉碎，置于提取罐中，加入12倍原料重量的80%乙醇回流提取90min，溫度控制在95 °C，收集提取液；2)提取液用孔徑為0. 5 μ m的氧化鋁陶瓷膜過(guò)濾，然后進(jìn)AB_8大孔樹脂柱層析，水 洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用1. 5倍樹脂柱床體積的40%乙醇和3倍樹脂柱床體積的 75%乙醇洗柱，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮至浸膏；3)浸膏用于其重量8倍的100%乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為 75%，然后進(jìn)中性氧化鋁樹脂柱脫色，收集流出液；4)流出液減壓濃縮至乙醇含量為15%，6°C放置24h，析出大量晶體后抽濾，母液 進(jìn)AB-8大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用3倍樹脂柱床體積的10%乙 醇和3倍樹脂柱床體積的40 %乙醇洗柱，收集40%乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得羥基
積雪草甙。經(jīng)測(cè)定，所得羥基積雪草甙的純度為96. 7%。實(shí)施例31)取積雪草，粉碎，置于提取罐中，加入10倍原料重量的70%乙醇回流提取，溫度 控制在100°C，第一次回流提取60min，濾出藥液，再加入8倍原料重量的70%乙醇，回流提 取30min，濾出藥液，第三次加入6倍原料重量的70%乙醇，回流提取30min，合并提取液；2)提取液用孔徑為Iym的氧化鋁陶瓷膜過(guò)濾，然后進(jìn)D130大孔樹脂柱層析，水 洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用2. 5倍樹脂柱床體積的30%乙醇和2倍樹脂柱床體積的 70%乙醇洗柱，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮至浸膏；3)浸膏用于其重量12倍的90%乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為 80%，然后進(jìn)大孔脫色樹脂柱脫色，收集流出液；4)流出液減壓濃縮至乙醇含量為12%，3°C放置15h，析出大量晶體后抽濾，母液 進(jìn)DlOl大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用1. 5倍樹脂柱床體積的20% 乙醇和2倍樹脂柱床體積的35%乙醇洗柱，收集35%乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得羥
基積雪草甙。經(jīng)測(cè)定，所得羥基積雪草甙的純度為96. 5%。實(shí)施例41)取積雪草，粉碎，置于提取罐中，加入12倍原料重量的50%乙醇回流提取，溫度 控制在95°C，第一次回流提取60min，濾出藥液，再加入10倍原料重量的50%乙醇，回流提 取60min，合并提取液；2)提取液用孔徑為0. 8 μ m的氧化鋁陶瓷膜過(guò)濾，然后進(jìn)DlOl大孔樹脂柱層析， 水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用2倍樹脂柱床體積的35%乙醇和3倍樹脂柱床體積的 80%乙醇洗柱，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮至浸膏；3)浸膏用于其重量9倍的95%乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為 70%，然后進(jìn)活性炭柱脫色，收集流出液；4)流出液減壓濃縮至乙醇含量為10%，常溫下放置65h，析出大量晶體后抽濾， 母液進(jìn)DlOl大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用2. 5倍樹脂柱床體積的 20 %乙醇和3倍樹脂柱床體積的45%乙醇洗柱，收集45 %乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即
得羥基積雪草甙。經(jīng)測(cè)定，所得羥基積雪草甙的純度為98. 7%。
權(quán)利要求
一種羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟如下1)取積雪草，粉碎，用50～80％乙醇加熱回流提取1～3次，每次30～90min，合并提取液；2)提取液經(jīng)陶瓷膜過(guò)濾后進(jìn)大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用30～40％乙醇和70～80％乙醇洗柱，收集70～80％乙醇洗脫液，濃縮至浸膏；3)浸膏用90～100％乙醇醇沉，抽濾，濾液加水使其中的乙醇含量為70～80％，然后進(jìn)脫色樹脂柱脫色，收集流出液；4)流出液濃縮至乙醇含量為10～15％，放冷析晶，抽濾，母液進(jìn)大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用10～20％乙醇和35～45％乙醇洗柱，收集35～45％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得羥基積雪草甙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟1)中，50 80%乙醇的用量為原料重量的6 12倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟2)中，所述陶 瓷膜為孔徑為0. 25 1 μ m的氧化鋁陶瓷膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟2)中，30 40%乙醇的用量為樹脂柱床體積的1. 5 2. 5倍，70 80%乙醇的用量為樹脂柱床體積的 2 3倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟3)中，90 100%乙醇的用量為浸膏重量的8 12倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟3)中，所述脫 色樹脂柱為大孔型脫色樹脂柱、中性氧化鋁樹脂柱或活性炭柱。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟4)中，10 20%乙醇的用量為樹脂柱床體積的1. 5 3倍，35 45%乙醇的用量為樹脂柱床體積的 2 3倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基積雪草甙的制備方法，其特征在于步驟2)和4)中，大 孔樹脂的型號(hào)為D101、D130或AB-8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羥基積雪草甙的制備方法，它以積雪草為原料，用乙醇加熱回流提取，所得提取液經(jīng)陶瓷膜過(guò)濾后進(jìn)大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用30～40％乙醇和70～80％乙醇洗柱，收集70～80％乙醇洗脫液，濃縮至浸膏；浸膏用90～100％乙醇醇沉，抽濾，調(diào)節(jié)濾液中的乙醇含量為70～80％，然后進(jìn)脫色樹脂柱脫色，收集流出液；流出液濃縮至乙醇含量為10～15％，析晶，抽濾，母液進(jìn)大孔樹脂柱層析，水洗樹脂柱至流出液清澈，再依次用10～20％乙醇和35～45％乙醇洗柱，收集35～45％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，所得產(chǎn)品純度高。
文檔編號(hào)C07J63/00GK101948501SQ201010269888
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月1日
發(fā)明者孫步祥, 宋云飛, 張志朋, 梁遠(yuǎn)盛, 湯凌志 申請(qǐng)人:桂林萊茵生物科技股份有限公司