專利名稱：：一種甾體皂苷類化合物及其衍生物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物中的用途的制作方法一種留體皂苷類化合物及其衍生物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物中的用途
技術(shù)領(lǐng)域：
-本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
中的藥用化合物，具體是水楊柳中新發(fā)現(xiàn)的甾體皂苷類化合物水柳皂苷制備用于降低血尿酸及治療嘌呤代謝異常疾病藥物的用途。
背景技術(shù)：
：水楊柳HomonoiaripariaLour.為大戟科水柳屬植物，民間將其根用于治療腫痛，從全株中分離鑒定的一種新的甾體皂苷類水柳皂苷Ripars鄰onin至今尚未見(jiàn)有關(guān)其用途的報(bào)道。嘌呤代謝異常疾病可定義為血漿或血清尿酸鹽濃度大于420umol/L或7.0mg/dl。其原因可以是先天性因素或某種獲得性疾病的結(jié)果，分為原發(fā)性或繼發(fā)性。另一種分類方法按嘌呤代謝異常疾病的來(lái)源劃分尿酸鹽產(chǎn)生增加，尿酸排泄減少和混合性機(jī)制。富含嘌呤的飲食導(dǎo)致血尿酸增多，嘌呤代謝中HGPRT酶缺乏或PRPP合成酶活性過(guò)強(qiáng)都會(huì)導(dǎo)致血尿酸增高。白血病的原始細(xì)胞危象、惡性腫瘤的細(xì)胞毒治療、溶血或橫紋肌溶解癥等導(dǎo)致核酸從細(xì)胞釋放，相繼被核酸酶和磷酸二酯酶水解，形成單磷酸核苷，再依次被降解為核苷、堿基和尿酸鹽可使體內(nèi)尿酸升高。嘌呤代謝異常疾病可由于骨骼肌ATP降解過(guò)多所致。心肌梗死、煙吸入和急性呼吸性衰竭時(shí)可由于ATP分解加速導(dǎo)致嘌呤代謝異常疾病。在大強(qiáng)度體育活動(dòng)或癲癇持續(xù)狀態(tài)后以及在糖原貯積病III型、V型和VII型時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)率低、腎小管分泌減少或腎小管重吸收增強(qiáng)均可引起尿酸排泄的改變。尿酸鹽濾過(guò)減少似乎并不會(huì)導(dǎo)致原發(fā)性嘌呤代謝異常疾病，但是卻與腎功能不全所造成的嘌呤代謝異常疾病有關(guān)。糖尿病酮癥酸中毒、饑餓、酒精中毒、乳酸性酸中毒和水楊酸鹽中毒均可伴有有機(jī)酸，如e羥丁酸、乙酰乙酸、乳酸或水楊酸鹽的堆積，這些有機(jī)酸與尿酸鹽競(jìng)爭(zhēng)從腎小管中分泌可引起嘌呤代謝異常疾病。葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、果糖-l-磷酸醛縮酶缺乏、乙醇通過(guò)上述尿酸鹽產(chǎn)生增加和排泄減少兩種機(jī)制導(dǎo)致嘌呤代謝異常疾病。嘌呤代謝異常疾病還可能由于分泌部位在遠(yuǎn)端的尿酸重吸收增強(qiáng)所致，這一機(jī)制可以解釋在尿崩癥或利尿劑治療時(shí)細(xì)胞外容量耗竭出現(xiàn)的嘌呤代謝異常疾病。持續(xù)的嘌呤代謝異常疾病易于使一些個(gè)體出現(xiàn)臨床癥狀，其中包括痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和腎功能障礙尿酸腎結(jié)石、混合性鈣/尿酸結(jié)石、尿酸鹽腎病和尿酸性腎病。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎在急性發(fā)作時(shí)主要應(yīng)予以抗炎藥物治療，如秋水仙堿、非甾體類抗炎藥或糖皮質(zhì)激素。為預(yù)防痛風(fēng)的再次發(fā)作即痛風(fēng)石的沉積，常需要長(zhǎng)期的降尿酸藥物治療。對(duì)于因腫瘤疾病接受細(xì)胞溶解藥物治療的患者，應(yīng)給予降尿酸鹽藥物治療，以防止出現(xiàn)尿酸性腎病。對(duì)于既有痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎又有含尿酸性或含鈣性結(jié)石的病人，上述兩種情況均可能與高尿酸尿癥同時(shí)出現(xiàn)，則推薦進(jìn)行抗高尿酸尿癥治療。目前上市的降尿酸藥物有別嘌醇、丙磺舒等。丙磺舒為腎小管的阻斷藥，抑制進(jìn)端腎小管對(duì)尿酸鹽的重吸收，使尿酸排泄增加，血漿濃度降低，從而減少尿酸沉積，促進(jìn)尿酸沉積物的再吸收。另一促尿酸排泄藥物是苯溴馬隆，在腎衰患者及接受利尿劑治療者中有效，對(duì)尿酸鹽產(chǎn)生過(guò)多、結(jié)石形成及腎功能不全仍在進(jìn)展期的患者，但有嚴(yán)重的肝毒性。別嘌醇是目前唯一的黃嘌呤氧化酶抑制劑，具有確切的降低血尿酸作用。但別嘌醇的毒性在應(yīng)用噻嗪類藥物并有腎功能不全的患者和對(duì)青霉素及安比西林過(guò)敏的的患者中已被越來(lái)越多的認(rèn)識(shí)到，最嚴(yán)重的副作用包括皮疹，伴逐漸加重危及生命的毒性表皮壞死松解、系統(tǒng)性血管炎、骨髓抑制、肉芽腫肝炎和腎功能不全。上述這些降尿酸藥物都不宜在痛風(fēng)急性發(fā)作時(shí)使用。在服用初期可誘發(fā)痛風(fēng)急性發(fā)作。中藥毛東青、澤蘭、當(dāng)歸、土茯苓、萆蘚、生薏仁、黃柏等能增強(qiáng)血尿酸排泄，中藥肉桂、野菊花、虎杖等有很強(qiáng)的黃嘌呤氧化酶抑制作用，見(jiàn)文獻(xiàn)資料Kong，LD.et.al.J.Ethn叩harmacology.73:199-207,2000的記載。黃酮類化合物，特別是C-5和C-7位有羥基的黃酮能抑制黃嘌呤氧化酶，見(jiàn)文獻(xiàn)資料Pathaketal.^Yto^r鄰/aLXII:371-389,1991的記載。但至今尚未發(fā)現(xiàn)甾體皂苷類化合物具有抑制黃嘌呤氧化酶或治療嘌呤代謝異常疾病的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從水楊柳中得到的具有如下結(jié)構(gòu)通式的甾體皂苷類化合物及其衍生物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中，C^連接脂肪族側(cè)鏈，C6、C7及de具有羥基，具有24，27位雙鍵厶24("'，"與C1()之間形成U亞甲基，C3-0H基與糖基結(jié)合。水楊柳屬原生藥，本發(fā)明以水楊柳全株為原料，經(jīng)溶劑提取及多種層析方法分離得到一種天然化學(xué)成分的甾體皂苷類化合物，經(jīng)采用紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振及單晶X衍射方法確定了該化合物為水柳素水柳皂苷Riparsaponin，具有上述的化學(xué)結(jié)構(gòu)。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)表明，該化合物對(duì)黃嘌呤氧化酶的半數(shù)抑制濃度為IC5G0.018umol/ral或11.2ug/ml，故用其作為制備降低血尿酸的藥物。本發(fā)明采用的原料來(lái)自中國(guó)南部山區(qū)，經(jīng)中科院昆明植物研究所鑒定為HomonoiaripariaLour.。所述甾體皂苷類化合物水柳皂苷的制備方法是將植物全株陰干粉碎，過(guò)篩，分粗細(xì)粉，按細(xì)粉在上進(jìn)行裝填，10倍量30%乙醇滲漉，控制流速300ml/min。滲漉液過(guò)濾，濃縮至P=l.l，200目濾布過(guò)濾，噴霧千燥收粉。干粉用石油醚冋流脫脂后晾干，以正丁醇為溶劑，提取溫度為7(TC，溶劑用量為16倍液固比提取4小時(shí)。得到的正丁醇提取物通過(guò)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯為100:0—10:90梯度洗脫收集特定流份，再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理及硅膠柱多次層析得水柳皂苷Riparsaponin，經(jīng)甲醇重結(jié)晶為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶。理化常數(shù)及光譜數(shù)據(jù)如下水柳皂苷Riparsaponin為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)291-292°C。Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性；經(jīng)水解的薄層檢出木糖。紅外光譜顯示含羥基吸收(3406cm—')和雙鍵吸收(1652cm—')，無(wú)螺甾烷特征吸收。紫外光譜顯示末端吸收(人，，209:1111)，含孤立雙鍵。電子轟擊質(zhì)譜m/z620(基峰)，m/z617(分子離子峰)，m/z712(結(jié)合甘油峰)，m/z487(_"&04糖基)。核磁共振't-剛R，'H-隨R(400MHz，DMSO)波譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表1:表l水柳皂苷(Riparsaponin)13C-醒R，'H-NMR(400MHz,DMSO)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發(fā)明為研究開(kāi)發(fā)新的黃嘌呤氧化酶抑制劑和治療嘌呤代謝異常疾病藥物提供了先導(dǎo)化合物，對(duì)開(kāi)發(fā)利用我國(guó)的民族藥用植物資源具有重要意義。所述的水柳皂苷化合物及其衍生物在制備用于降低血尿酸及治療嘌呤代謝異常疾病藥物方面的應(yīng)用，具有黃嘌呤氧化酶抑制作用，利尿酸排泄作用和消炎作用，可將其制成多種劑型，適用于與尿酸增多相關(guān)疾病，可治療或預(yù)防痛風(fēng)，嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥尿酸性結(jié)石、混合性鈣/尿酸結(jié)石、高尿酸血癥腎病、尿酸性腎病、急性或慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等。所述的化合物和藥物上可接受的鹽類或載體一起作為組合物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物中的應(yīng)用。所述的嘌呤代謝異常疾病包括痛風(fēng)和嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥，所述的嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥指尿酸性結(jié)石、混合性鈣/尿酸結(jié)石、高尿酸血癥腎病和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。所述藥物上可接受的載體選自以下的至少一種賦形劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、包衣劑、乳化劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、吸收劑、溶劑、注射用水和等滲劑。所述組合物制成口服給藥形式或注射給藥形式。圖l本發(fā)明確提出的水柳皂苷(Riparsaponin)單晶X-衍射分析圖。圖2Spinastin對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制率曲線。圖3反映水柳皂苷(Riparsaponin)對(duì)HGPRTmRNA表達(dá)量的影響的衍射分析圖。具體實(shí)施方式-實(shí)施例1水柳皂苷的制備方法以中國(guó)南方生長(zhǎng)的水楊柳全株為原料，將植物全株陰干粉碎，過(guò)篩，分粗細(xì)粉，按細(xì)粉在上進(jìn)行裝填，10倍量30%乙醇滲漉，控制流速300m/min。滲漉液過(guò)濾，濃縮至P:l.1，200目濾布過(guò)濾，噴霧干燥收粉。干粉用石油醚回流脫脂后晾干，以正丁醇為溶劑，提取溫度為70'C，溶劑用量為16倍液固比提取4小時(shí)。得到的正丁醇提取物通過(guò)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯為100:0—10:90梯度洗脫收集特定流份，再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理及硅膠柱多次層析得水柳皂苷Riparsaponin,經(jīng)甲醇重結(jié)晶為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶。實(shí)施例2熒光法評(píng)價(jià)水柳皂苷Riparsaponin體外對(duì)黃嘌呤氧化酶的影響，見(jiàn)圖2。本實(shí)施例采用96孔熒光檢測(cè)板，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組別嘌呤醇、陰性對(duì)照組腿S0、待測(cè)樣品組，反應(yīng)總體系為150ul。待測(cè)樣品組設(shè)六個(gè)濃度，每種濃度五個(gè)平行孔，使終濃度為3ug/ml、6ug/ml、12ug/ml、25ug/tnl、50ug/ml、100ug/ml，lul/孔;陽(yáng)性對(duì)照為6個(gè)濃度的的別嘌呤醇，終濃度為0.3、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6ug/ml，lul/孔;陰性對(duì)照DMSO，lul/孔；使用熒光化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀在激發(fā)波/發(fā)射波為380nm/440nm處測(cè)定各孔熒光值，求得均值，計(jì)算抑制率和IC5o值。從表2中可看出，待測(cè)樣品水柳皂苷Ripars即onin對(duì)黃嘌呤氧化酶活性抑制作用具有濃度效應(yīng)依賴性，樣品濃度在6wg/ml、12iig/ml、25ug/ml、50ug/ml的組秩與陰性對(duì)照組有顯著的差異(p<0.05)，ICso值為11.258ng/ml。表2水柳皂苷(Riparsaponin)對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響(X土Std)項(xiàng)目DMSO扁水柳皂苷(Riparsaponin)(ug/ml)36122550100熒光值(A)8.297.204.813.252.361.871.47±0.89±0.86±0.81*±0,91*±0.13*±0.48*±0.13*抑制率％)0扁13.0941.9260.8271.5277.4282.22ic50值11.26ug/ml(0.018umol/ml)別嘌呤醇的ic50值為1.85ug/ml(0.014umol/ml)注"*"表示與DMSO組相比差異顯著(p<0.05)。經(jīng)體外黃嘌呤氧化酶活性試驗(yàn)顯示對(duì)該酶具顯著的抑制作用，其IC5o為11.2ug/ml。6實(shí)施例3評(píng)價(jià)水柳皂苷(Riparsaponin)對(duì)次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)的影響。用HGPRT與0-actin的PCR的產(chǎn)物量的比值來(lái)表示HGPRTmRNA水平，與對(duì)照組相比，待測(cè)樣品組HGPRTmRNA表達(dá)量隨著藥物濃度升高而增高，其中藥物濃度為12ug/ml，25iig/ml，50yg/ml的組秩與空白組比較有顯著性差異(p〈0.05)，見(jiàn)圖3。權(quán)利要求1、一種甾體皂苷類化合物及其衍生物，具有如下結(jié)構(gòu)通式式中，C17連接脂肪族側(cè)鏈，C6、C7及C16具有羥基，具有24，27位雙鍵Δ24(27)，C9與C10之間形成C19亞甲基，C3-OH基與糖基結(jié)合。2、具有如權(quán)利要求1所述結(jié)構(gòu)通式的化合物及其衍生物的制備方法，其特征是以水楊柳植物全株為原料，將該植物全株陰千后粉碎，過(guò)篩，分粗細(xì)粉，按細(xì)粉在上進(jìn)行裝填，10倍量30%乙醇滲漉，控制流速300ml/min，滲漉液過(guò)濾、濃縮至P=l.l，200目濾布過(guò)濾，噴霧干燥收粉；干粉用石油醚回流脫脂后晾干，以正丁醇為溶劑，提取溫度為7(TC，溶劑用量為16倍液固比提取4小時(shí)，得到的正丁醇提取物通過(guò)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯為100:0—10:90梯度洗脫收集流份，再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理及硅膠柱多次層析得到具有上述結(jié)構(gòu)通式的水柳皂苷Riparsaponin，即甾體皂苷類化合物。3、具有如權(quán)利要求1所述結(jié)構(gòu)通式的化合物及其衍生物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物方面的應(yīng)用。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的化合物和藥物上可接受的鹽類或載體一起作為組合物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物中的應(yīng)用。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的嘌呤代謝異常疾病包括痛風(fēng)和嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥，所述的嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥指尿酸性結(jié)石、混合性鈣/尿酸結(jié)石、高尿酸血癥腎病和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述藥物上可接受的載體選自以下的至少一種賦形劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、包衣劑、乳化劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、吸收劑、溶劑、注射用水和等滲劑。7、根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述組合物制成口服給藥形式或注射給藥形式。全文摘要一種甾體皂苷類化合物及其衍生物在制備治療嘌呤代謝異常疾病藥物中的用途，甾體皂苷類化合物及其衍生物具有如上結(jié)構(gòu)通式，該化合物及其衍生物在制備用于降低血尿酸及治療嘌呤代謝異常疾病藥物方面的應(yīng)用，具有黃嘌呤氧化酶抑制作用，利尿酸排泄作用和消炎作用，可將其制成多種劑型，適用于與尿酸增多相關(guān)疾病，可治療或預(yù)防痛風(fēng)，嘌呤代謝異常疾病及其并發(fā)癥尿酸性結(jié)石、混合性鈣/尿酸結(jié)石、高尿酸血癥腎病、尿酸性腎病、急性或慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等。文檔編號(hào)C07J53/00GK101531696SQ200910094378公開(kāi)日2009年9月16日申請(qǐng)日期2009年4月21日優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日發(fā)明者晶趙,趙雪倩申請(qǐng)人:成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院