專利名稱：甾體皂苷藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甾體皂苷藥物組合物，具體地說，它是以黃山藥、穿龍薯蕷為原料提取的甾體皂苷藥物組合物。
背景技術(shù)：
甾體皂苷(steroidal saponins)是植物中一類重要的生物活性物質(zhì)，甾體皂苷的研究在天然產(chǎn)物化學中一直占有重要的地位。甾體皂苷的苷元是含有27個碳原子的螺甾烷醇或呋甾烷醇，大多數(shù)存在于單葉子植物的百合科，石蒜科和薯蕷科植物中。
黃山藥又名姜黃、姜黃草、老虎姜、猴節(jié)蓮，為薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥Dioscoreapanthaica Prain et Burkill的根莖，分布于西南及湖北、湖南等地；能理氣止痛，解毒消腫，主治胃氣痛，吐瀉腹痛，跌打損傷，瘡瘍腫毒，毒蛇咬傷等癥[國家中醫(yī)藥管理局《中華本草編委會》中華本草(1999年上?？茖W技術(shù)出版社)第8卷，P247]。穿山龍為薯蕷科薯蕷屬植物穿龍薯蕷(Dioscorea nipponica Makino)的根莖，又名穿山骨、穿地龍、狗山藥、山常山、穿山骨、火藤根、姜黃、土山薯、竹根薯、鐵根薯、雄姜、黃鞭、野山藥、地龍骨、金剛骨、串山龍、過山龍，分布于東北、華北、西北及河南、湖北、山東、江蘇、安徽、浙江、江西、四川等地；能祛風除濕，活血通絡(luò)，止咳；主治風濕痹痛，肢體麻木，胸痹心痛，慢性氣管炎，跌打損傷，瘧疾，癰腫等癥[國家中醫(yī)藥管理局《中華本草編委會》中華本草(1999年上?？茖W技術(shù)出版社)第8卷，P 238]。《中華人民共和國藥典》1977年版一部P435-436將穿山龍作為中藥材收入其中。
目前，對黃山藥、穿山龍的研究甚少。李伯剛等人從黃山藥中分離并鑒定得到2種水難溶甾體皂苷薯蕷皂苷(dioscin)和纖細皂苷(gracillin)[李伯剛等，植物學報，1986，28(4)409-411]；董梅等人從黃山藥中分離得到3種甾體皂苷[董梅等，藥學學報2001，36(1)42-45]， 其化學結(jié)構(gòu)分別鑒定為，偽原薯蕷皂苷(甾體皂苷1)，DI-9(甾體皂苷6)；方一葦?shù)热藦拇┥烬堉蟹蛛x得到2種水難溶甾體皂苷薯蕷皂苷(dioscin)和纖細皂苷(gracillin)，兩種均為川龍冠心寧的藥用成分[方一葦?shù)龋帉W學報1982，17(5)388-391]；都述虎等人從穿山龍中分離得到從穿龍薯蕷總皂苷中分得2個甾體皂苷(1個水難溶性皂苷和1個水溶性皂苷)，其化學結(jié)構(gòu)分別鑒定為纖細皂苷等[都述虎等，藥學學報2002，37(4)267-270]。另一項國內(nèi)研究公開了薯蕷總皂苷提取物中含有的8種甾體皂苷的結(jié)構(gòu)式[李伯剛，周正質(zhì).中藥新藥與臨床.1994，13(2)75-76]，治療冠心病的有效成分為該八種甾體皂苷，其中包括薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷、原纖細皂苷、纖細皂苷等。中國專利(申請?zhí)朇N02128119.X)螺甾烷醇類甾體皂苷在制備治療心血管疾病藥物中的應(yīng)用，公開了六種螺甾烷醇類甾體皂苷的新用途。中國專利(申請?zhí)朇N 02112159.1)具有治療心肌缺血，心絞痛和心肌梗死功能的藥物組合物，公開了含有薯蕷皂苷元的藥物組合物的新用途。到目前為止僅從黃山藥、穿山龍中分離鑒定了偽原薯蕷皂苷(I)、薯蕷皂苷(III)。
雖然上述資料公開了黃山藥、穿山龍含有多種對治療心血管疾病有效的甾體皂苷，但僅僅是對兩種植物中的有效成分的化學研究，由于有些成分含量極低，在制藥上并無太大價值。眾所周知，從植物中獲得純的有用價值的化合物極為困難，成本很高，同時也為了避免難以預(yù)料的副作用，一般不使用植物中的有效純化合物，而使用藥用植物提取物直接作為藥用原料，成本低而且應(yīng)用簡便。但植物提取物的一個缺陷是，由于植物采收季節(jié)和產(chǎn)地不同都會造成有效成分含量的波動，同時，如果主要有效成分及其含量不清楚，都會給藥品的質(zhì)量控制造成很大困難，因此，為了保持植物藥的質(zhì)量穩(wěn)定，清楚知道植物中各基本藥效成分及其含量是很重要的，目前由于技術(shù)手段所限和甾體皂苷的種類復雜，至今未見確切的主要有效成分、含量及其純度的報道。
傳統(tǒng)的制備甾體總皂苷的方法用甲醇或乙醇熱提，所得的醇溶液濃縮，除去甲醇或乙醇，再用氯仿等脫脂，然后用含水的正丁醇提取，所得的正丁醇溶液濃縮即得甾體總皂苷。以上工藝存在如下缺點(1)收率低，成本高，(2)生產(chǎn)周期長，(3)需要大量的有機溶劑，生產(chǎn)上存在易燃易爆有毒的危險，同時帶來嚴重的環(huán)境污染，(4)能耗大，由于正丁醇沸點高，造成濃縮干燥困難，(5)產(chǎn)品色澤差；且不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述缺陷，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種甾體總皂苷組合物，該組合物含有新的化合物，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明的甾體皂苷藥物組合物，含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾體皂苷，通式C螺甾烷醇類甾體皂苷，其重量配比為呋甾烷醇甾體皂苷5-25份、螺甾烷醇類甾體皂苷1-10份， 通式A 通式B 通式C其中，通式A中， H； 或
通式B中 或 通式C中， H、-glc、 或 具體的，通式A中，當 時，為偽原薯蕷皂苷(I)； 時，為偽原纖細薯蕷皂苷(II)；通式B中，當 時，為原薯蕷皂苷(IV)； 時，為原纖細皂苷(V)；通式C中， 時為薯蕷皂苷(III)，本發(fā)明的甾體皂苷藥物組合物含有偽原薯蕷皂苷(I)和/或原薯蕷皂苷(IV)5-22份，偽原纖細皂苷(II)和/或原纖細皂苷(V)1-5份、薯蕷皂苷(III)1-8份。
進一步地，本發(fā)明的甾體皂苷藥物組合物，含有偽原薯蕷皂苷(I)5-20份、偽原纖細皂苷(II)1-3份、薯蕷皂苷(III)1-5份。
更進一步，本發(fā)明的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于含有偽原薯蕷皂苷(I)12-18份、偽原纖細皂苷(II)1份、薯蕷皂苷(III)1.2-2.5份。
上述通式A、B、C的甾體皂苷來源于薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥(Dioscoreapanthaica Prain et Burkill)、穿龍薯蕷(Dioscorea nipponica Makino)甾體總皂苷提取物。
在所述甾體總皂苷提取物中，甾體總皂苷以薯蕷皂苷計，其含量不少于65.0％(w/w)。
在上述甾體總皂苷中，結(jié)構(gòu)式為偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細皂苷(II)及薯蕷皂苷(III)的三種甾體皂苷的含量不少于80％(w/w)。
所述的制劑是丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑。
本發(fā)明還提供了該甾體皂苷藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料，經(jīng)切片或粉碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意比例組成的混合溶液為溶媒提取；b、將a步驟制備的提取液冷卻過濾，濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液，用水洗至流出液至無色，棄去水洗液；如果當提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇時，需先減壓濃縮，然后再冷卻過濾；c、將b步驟的水洗后的吸附樹脂柱用甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇或含水丙酮中的一種或多種洗脫，收集洗脫液，濃縮；d、將c步驟的濃縮液加醇醇沉，過濾，收集濾液；e、取d步驟所述的濾液，濃縮干燥，加入藥物上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的制劑。
所采用的溶劑提取法中，可采用在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取。提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的大孔樹脂吸附法中，樹脂可選用HPD100、HPD300、LD140、D101以及其他類型的大孔吸附樹脂，或以上不同型號的大孔吸附樹脂按一定比例混合，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時可以濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
本發(fā)明提供的甾體皂苷藥物組合物具有活血化瘀，行氣止痛，擴張冠脈血管，改善心肌缺血。因此，本發(fā)明還提供了甾體皂苷藥物組合物在制備治療和預(yù)防冠心病、心絞痛、心肌缺血、心律失常、高血脂及瘀血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或痛等心血管病癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明中，偽原纖細皂苷(II)是在黃山藥、穿龍薯蕷的根莖提取物中發(fā)現(xiàn)的新化合物，通過藥效學試驗證明，其為治療心血管疾病的藥效成分。并且本發(fā)明人通過對黃山藥、穿龍薯蕷的根莖提取物的進一步研究分析，實驗證明， 呋甾烷醇甾體皂苷偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細皂苷(II)，螺甾烷醇類甾體皂苷薯蕷皂苷(III)三種化合物是黃山藥、穿龍薯蕷的根莖提取物中最主要的藥效成分，它們的配伍使用，在療效和生產(chǎn)成本以及質(zhì)量控制方面達到了最佳的平衡。因此本發(fā)明甾體皂苷藥物組合物用于預(yù)防和治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、心律失常、高血脂及瘀血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或痛等心血管病癥，療效可靠，且由于上述三種化合物之間的配伍比例清楚，并且發(fā)明人還提供了三種化合物的鑒定方法，可以很方便地控制藥品質(zhì)量。本發(fā)明甾體皂苷藥物組合物的優(yōu)點是藥效成分清楚，質(zhì)量穩(wěn)定可控，使用方便，日服用劑量為300-600mg，服用劑量少。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1原薯蕷皂苷標樣、化合物2-8混合經(jīng)HPLC分析的色譜圖；圖2實施例1的組合物經(jīng)HPLC分析的色譜圖；圖3實施例2的組合物經(jīng)HPLC分析的色譜圖；圖4實施例3的組合物經(jīng)HPLC分析的色譜圖。
具體實施例方式
實施例1本發(fā)明藥物組合物的制備中藥穿山龍的干燥根莖100kg，粉碎，用95％乙醇(1200L×3)回流，第一次3小時，第二、三次各2小時，濾過，合并提取液；回收乙醇，加水至2g/ml，冷藏24小時，離心；上清液過HPD300吸附樹脂柱，先用水洗至流出液無色后，用70％乙醇洗脫；接收70％乙醇洗脫部分，回收乙醇并濃縮至濃浸膏，再經(jīng)真空干燥即得穿山龍甾體總皂苷，收率為2.32％。
實施例2本發(fā)明藥物組合物的制備中藥黃山藥的干燥根莖100kg，切片，用12倍(V/W)水煎煮4次，第一次3小時，第二、三、四次各2小時，濾過，合并提取液；放至室溫，離心；上清液過大孔吸附樹脂柱[HPD100/LD140＝7∶3(W/W)]，先用水洗至流出液無色后，再用10％乙醇洗脫，最后用75％乙醇洗脫；接收75％乙醇洗脫部分，回收乙醇至無醇味，再經(jīng)噴霧干燥即得黃山藥甾體總皂苷，收率為1.15％。
實施例3本發(fā)明藥物組合物的制備新鮮穿山龍的干燥根莖400kg，切片，用8倍(V/W)水煎煮3次，第一次3小時，第二、三次各2小時，濾過，合并提取液；放至室溫，離心；上清液過大孔吸附樹脂柱[HPD100/D101＝6∶4(W/W)]，先用水充分正反洗后，再用10％乙醇洗脫，最后用80％乙醇洗脫；接收80％乙醇洗脫部分，回收乙醇至無醇味，再經(jīng)噴霧干燥即得穿山龍甾體總皂苷，收率為0.56％。
實施例4本發(fā)明藥物組合物中化合物的制備及鑒定取實施例1粗提物1278g，分散于11100ml水中，依次用乙酸乙酯(7500ml×4)、正丁醇(7500ml×5)進行萃取，得乙酸乙酯萃取物102g和正丁醇萃取物503g。取正丁醇部分236g進行硅膠柱層析(Φ10.5×52cm，2000g)，氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.1)梯度洗脫，每瓶接收500ml洗脫劑，共收集160份。Fr.16-21析出化合物8(140mg)，F(xiàn)r.41-45析出化合物7(427 mg)，F(xiàn)r.56-65析出化合物6(30g)Fr.94-104析出化合物5(8.62g)，即為本發(fā)明的甾體皂苷(III)。Fr.113-127合并為E(26g)，進行硅膠柱層析(Φ6.5×71cm，800g)，氯仿-甲醇(5∶1)水飽和洗脫，E過柱Fr.14-20合并為B(4g)，過ODS純化得化合物4(1.3g)。Fr.128-143合并為F(63g)，進行硅膠柱層析(Φ7×52cm，850g)，氯仿-甲醇(5∶1)水飽和洗脫，F(xiàn)過柱Fr.36-60合并為A(10g)，ODS純化得化合物3(115mg)，F(xiàn)過柱Fr.61-68合并為B(11g)，ODS純化得化合物9(105mg)，即為本發(fā)明的甾體皂苷(II)。F過柱Fr.69-78合并為C(10g)，ODS純化得化合物2(2.89g)，即為本發(fā)明的甾體皂苷(I)。
柱層析用硅膠(160-200目，200-300目)，TLC用GF254硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品，反向硅膠ODS(Cosmosil 75C18-OPN)為日本Nacalai tesque公司產(chǎn)品，反相高效硅膠板RP-18F254為Merck產(chǎn)品.
經(jīng)MS、1H NMR、13C NMR、DEPT、HMQC、HMBC等現(xiàn)代波譜學方法結(jié)合理化常數(shù)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)如下質(zhì)譜儀為Finnigan LCQDECA；核磁共振儀為Bruker AM-400，TMS為內(nèi)標。
化合物9(偽原纖細皂苷)化合物9的13C NMR數(shù)據(jù)分別與偽原薯蕷皂苷[3]和纖細皂苷[4]比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物9的26-C所接糖信號及苷元部分的化學位移與偽原薯蕷皂苷完全吻合，而剩余糖的信號與纖細皂苷的糖信號完全吻合，因此初步判斷化合物9為原纖細皂苷在C20～C22脫去1分子水的產(chǎn)物(即偽原纖細皂苷(II))。
在HMBC譜中，1-H-glc′(δ4.83)與苷元26-C(δC74.7)相關(guān)；1-H-rha″(δH6.40)，1-H-glc(δH5.10)分別與2-C-glc′(δC76.8)，3-C-glc′(δC89.3)相關(guān)，1-H-glc′(δH4.95)與苷元3-C(δC77.7)相關(guān)，也證實了上述推測的糖的連接位置和順序。
綜上所述，化合物9的結(jié)構(gòu)鑒定為26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β，26-二醇-25(R)-Δ5，20(22)-二烯-呋甾-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，即偽原纖細皂苷(II)。
化合物8(延嶺草次苷)白色針狀結(jié)晶。ESIMS m/z577[M+H]+，415[M-glc+H]+，397[M-glc-H2O+H]+，1151[2M-H]-，575[M-H]-；1H NMR(400MHz，C5D5N)δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝6.8Hz)，0.87(3H，s，CH3-19)，0.80(3H，s，CH3-18)，0.67(3H，d，CH3-27，J＝4.6Hz)顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。13C NMR(100MHz，C5D5N)見表1，苷元部分與薯蕷皂苷元比較C-3由δ71.7→78.6，C-2由δ31.4→30.2，C-4由δ42.3→39.3，說明苷元的C-3位接糖。化合物8的13CNMR數(shù)據(jù)(見Table 3)與文獻[1，2]報道吻合。
化合物7(ProgeninII薯蕷皂苷元-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷)白色針狀結(jié)晶。ESI-MS m/z723[M+H]+，577[M-rha+H]+，415[M-rha-glc+H]+，397[M-rha-glu-H2O+H]+，721[M-H]-，575[M-rha-H]-；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝6.9 Hz)，0.88(3H，s，CH3-19)，0.80(3H，s，CH3-18)，0.66(3H，d，CH3-27，J＝5.2 Hz)顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號，葡萄糖的端基質(zhì)子δ4.94(1H，d，J＝7.7Hz)表明葡萄糖為β構(gòu)型，鼠李糖端基質(zhì)子δ6.54(1H，br，s)表明鼠李糖為α構(gòu)型。化合物7的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 3)與文獻[1，2]報道吻合。
化合物6(ProgeninIII薯蕷皂苷元-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷)白色粉末。ESI-MS m/z723[M+H]+，577[M-rha+H]+，415[M-rha-glc+H]+，397[M-rha-glc-H2O+H]+；1H NMR(400MHz，C5D5N)δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝7.0Hz)，1.02(3H，s，CH3-19)，0.80(3H，s，CH3-18)，0.66(3H，d，CH3-27，J＝5.0Hz)顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。δ6.36(1H，br，s)表明鼠李糖的構(gòu)型為α型，δ5.04(1H，d，J＝9.0Hz)表明葡萄糖的構(gòu)型為β型?；衔?的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 3)與文獻[1，2]報道吻合。
化合物5(薯蕷皂苷dioscin)白色針狀結(jié)晶。ESI-MSm/z891[M+Na]+，869[M+H]+，577[M-rha-rha+H]+，437[M-rha-rha-glc+Na]+，903[M+Cl]-，867[M-H]-，721[M-rha-H]-；1H NMR(400MHz，C5D5N)δ1.74(3H，d，J＝6.5Hz)，1.60(3H，d，J＝6.2Hz)分別顯示2個鼠李糖的甲基質(zhì)子信號，δ6.37(1H，br，s)，5.83(1H，br，s)顯示兩個鼠李糖的構(gòu)型為α型，δ4.92(1H，d，J＝6.4Hz)顯示葡萄糖的構(gòu)型為β型，δ1.11(3H，d，CH3-21，J＝6.8Hz)，1.02(3H，s，CH3-19)，0.79(3H，s，CH3-18)，0.66(3H，d，CH3-27，J＝4.9Hz)分別顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。化合物5的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4)與文獻[1]報道吻合。
化合物4(26-O-β-D-吡喃葡萄糖-3β，26-二醇-(25R)-呋甾-Δ5，20(22)-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}白色粉末。ESI-MS m/z907[M+Na]+，885[M+H]+，723[M-glc+H]+，577[M-glc-rha+H]+，437[M-glc-rha-glc+Na]+，883[M-H]-；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ1.61(3H，s，CH3-21)，0.99(3H，d，CH3-27，J＝6.4Hz)，0.89(3H，s，CH3-19)，0.70(3H，s，CH3-18)顯示甾體皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號。δ4.95(1H，d，J＝7.5Hz)，4.82(1H，d，J＝6.1Hz)表明化合物4中的葡萄糖為β構(gòu)型，δ5.90(1H，br，s)表明化合物4中含有一個α構(gòu)型的鼠李糖；化合物4的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4)，苷元部分與化合物7比較C-3由δ71.2→78.3說明除了C-26位接糖外，C-3位也接糖，化合物4的13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[4]報道吻合。
化合物3(26-O-β-D-吡喃葡萄糖-3β，26-二醇-(25R)-呋甾-Δ5，20(22)-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷})白色粉末。ESI-MS m/z907[M+Na]+，885[M+H]+，723[M-glc+H]+，577[M-glc-rha+H]+；1H NMR(600MHz，C5D5N)δ1.62(3H，s，CH3-21)，1.02(3H，d，CH3-27，J＝6.5Hz)，0.88(3H，s，CH3-19)，0.70(3H，s，CH3-18)顯示甾體皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號，δ1.77(3H，d，J＝6.0Hz)顯示鼠李糖末端甲基質(zhì)子信號；13C NMR(150MHz，C5D5N)數(shù)據(jù)(見Table 4)，苷元部分同化合物8，化合物3的NMR數(shù)據(jù)與文獻[5]報道吻合。
化合物2(偽原薯蕷皂苷)白色粉末。ESI-MS m/z1053[M+Na]+，723[M-rha-glc+H]+，577[M-rha-glc-rha+H]+，415[M-rha-glc-rha-glc+H]+，1029[M-H]-，883[M-rha-H]-；1H NMR(400MHz，C5D5N)δ1.61(3H，s，CH3-21)，1.03(3H，s，CH3-19)，0.99(3H，d，CH3-27，J＝6.8Hz)，0.70(3H，s，CH3-18)顯示4個甲基質(zhì)子信號，δ1.74(3H，d，J＝7.2Hz)，1.60(3H，d，J＝7.7Hz)分別顯示2個鼠李糖的甲基質(zhì)子信號，δ6.37(1H，br，s)，5.83(1H，br，s)表明兩個鼠李糖的構(gòu)型是α型，δ4.92(1H，d，J＝6.9Hz)，4.81(1H，d，J＝7.7Hz)表明兩個葡萄糖的構(gòu)型是β型；化合物2的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4)與文獻[5]報道吻合。
表1.化合物2-9的13C NMR數(shù)據(jù)(溶劑C5D5N)

通過上述方法，可分離并鑒定本發(fā)明藥物組合物中各化合物。
實施例5本發(fā)明藥物組合物的質(zhì)量控制將8個已經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定的對照品混合進樣通過HPLC分析，色譜條件色譜柱Alltima C184.6×250mm，5um，梯度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，漂移管溫度100℃，氣體流速2.0L/min。梯度洗脫表如下表2梯度洗脫表

將原薯蕷皂苷標樣、化合物2-8混合經(jīng)HPLC分析，色譜圖如圖1；將實施例1、2、3所得的組合物經(jīng)HPLC分析，色譜圖如圖2、3、4。在圖1中，1號峰為原薯蕷皂苷標樣峰，2、3、4、5、6、7、8號峰分別為化合物2、3、4、5、6、7、8，化合物9的色譜峰在2、3號峰之間。用標樣對照計算化合物I、II、III的％含量，見表3。
表3化合物(I)、(II)、(III)的重量％含量

通過上述質(zhì)量控制，將本發(fā)明藥物組合物中三種化合物用于質(zhì)量控制，可控性強。
實施例6本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備每粒膠囊的組成甾體總皂苷(實施例2制得) 100g淀粉 80g(共制成1000粒)按上述比例取、淀粉，混勻，裝膠囊。每粒裝180mg，用于心腦血管疾病治療，口服，每日三次，每次1～2粒。二月為一療程。
每粒含甾體總皂苷以薯蕷皂苷計，不少于65.0mg。
實施例7片劑的制備片劑組成甾體總皂苷(實施例2制得) 100gHPMCLV10030g乳糖70g硬脂酸鎂1g(共制成1000片)將甾體總皂苷、HPMC、乳糖混勻，以75％乙醇為粘合劑制濕顆粒，過22目篩，50℃干燥3h，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻壓片，每片重0.15g。用于心腦血管疾病治療，口服，每日三次，每次1～2片。二月為一療程。
每片含甾體總皂苷以薯蕷皂苷計，不得少于65.0mg。
實施例8注射液的制備注射液組成甾體總皂苷50g吐溫8010ml氯化鈉9g(共制成1000ml)甾體總皂苷，加10％NaOH調(diào)PH至7.0-7.5，冷藏濾過，加吐溫-80，NaCl，加注射用水至1000ml，0.2μm微孔濾膜濾過，分裝，灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min即得。用于心腦血管疾病治療，皮下注射，每日二次，每次1～2ml。二月為一療程。
每支含甾體總皂苷以薯蕷皂苷計，不得少于65.0mg。
以下通過藥效學試驗證明本發(fā)明藥物組合物的有益效果。
試驗例1偽原纖細皂苷(II)對大鼠急性心肌梗死的影響使用實施例4所得偽原纖細皂苷(II)的進行了以下相關(guān)藥理試驗取Wistar大鼠，180-220g/只，隨機分為3組，即對照組、偽原纖細皂苷高、低劑量組，每組12只。對照組灌胃給予蒸餾水，其余各組按表中高劑量(3mg/kg)、低劑量(1.5mg/kg)分別灌胃給予相應(yīng)藥液(均以蒸餾水配制)。每天給藥1次，連續(xù)給藥一周。末次給藥1h后，氨基甲酸乙酯(Urathan，1g/kg)腹腔麻醉大鼠，仰位固定，沿胸骨中線剪開動物皮膚，在胸骨左緣3-5肋開口，迅速擠出心臟后，立即結(jié)扎左心冠狀動脈前降支根部，將心臟放回胸腔，關(guān)閉胸腔并縫合恢復自主呼吸。結(jié)扎3h后結(jié)束試驗，心臟結(jié)扎線以下橫切5片，硝基四氮唑藍染色，采用多媒體彩色病理圖分析系統(tǒng)(MPIAS-500)，以固定象距測量正常心肌及梗塞心肌面積，觀察心肌梗塞程度，結(jié)果進行統(tǒng)計學處理(t檢驗)，結(jié)果見表4。
表4偽原纖細皂苷(II)對心肌缺血致心肌梗塞的影響(x±s)

注與模型組比較，*P＜0.05**P＜0.01表4結(jié)果顯示，與模型組比較，化合物(II)高、低劑量組大鼠梗塞心肌面積、梗塞區(qū)重量、梗塞區(qū)占心室比以及梗塞區(qū)占全心比均明顯降低(分別P＜0.01和P＜0.05)，且呈量效關(guān)系，說明本發(fā)明新化合物偽原纖細皂苷(II)具有明顯減輕心肌梗塞程度，縮小梗塞面積，減輕梗塞區(qū)重量，對心肌缺血有明顯的保護作用。
上述藥效試驗說明，本發(fā)明藥物組合物中的新化合物偽原纖細皂苷(II)不僅僅是新的化合物，且實驗充分證明該新化合物具有藥效，可單獨用于制劑使用，藥效明確。
試驗例2本發(fā)明藥物組合物治療心絞痛，對血脂、血小板聚集功能的影響按《冠心病診斷參考標準》，收治冠心病心絞痛患者313例，其中男性98例，女性215例，年齡33-85a(58-s6a)，平均病程4.6-2.1a。213例中合并高血壓128例，高血脂癥109例。
接受治療者用藥前停用對冠性病有效的藥物3天，進行血、尿常規(guī)，肝、腎功能，血脂分析，靜息心電圖和負荷試驗。療程結(jié)束，全部復查以上各項指標。
313例患者全部服用實施例6制得的本發(fā)明藥物膠囊，200mg，tid，共2月，2月后，其中有190例繼續(xù)服用100mg，tid，共4月。治療期間停用降壓、降脂、擴張冠狀動脈藥物，僅對心絞痛發(fā)作頻繁或嚴重心率失常患者臨時給以硝酸甘油類藥物，并記錄停減量。
療效評定標準按1979年全國中西醫(yī)結(jié)合防治冠心病、心絞痛心律失常研究座談會修訂的《冠心病心絞痛療效評定標準》進行評定。
結(jié)果對心絞痛癥狀療效313例中有心絞痛癥狀者290例，其中2mo療程者117例，總有效率為90.6％；6mo療程者173例，總有效率為91.3％。2種療程比較，經(jīng)Ridit分析，差別無顯著意義(P＞0.05)。說明2種療程對緩解心絞痛癥狀均有確切療效，均能減少患者心絞痛發(fā)作頻率和硝酸甘油類藥物的用量，見表5。
表5對心絞痛療效

對心肌缺血的療效313例中靜息心電圖ST-T段改變者256例，其中2mo療程者105例，6mo療程者151例，總有效率分別為50.4％和54.3％。說明該藥對心肌缺血有明顯的改善作用，見表6。
表6對心絞痛療效

對血脂的作用 治療前有高膽固醇血癥者72例，高甘油三脂血癥例71，治療后高膽固醇患者中有38例恢復正常，高甘油三脂患者中有39例恢復正常。血膽固醇由治療前6.8±1.1mmol/L降至治療后6.3±1.1mmol/L，血甘油三脂由治療前2.4±0.8mmol/L降至治療后1.9±0.7mmol/L，經(jīng)t檢驗，差別有非常顯著意義(P＜0.01)。
對血小板聚集功能的影響 該藥對二磷腺苷(ADP)和腎上腺素誘導的血小板聚集均有明顯影響，ADP使聚集率有治療前68％±15％降至治療后60％±15％，腎上腺素使聚集率由治療前73％±15％降至治療后64％±12％，經(jīng)經(jīng)t檢驗，差別有非常顯著意義(P＜0.01＝。
不良反應(yīng) 本組313例在服藥期間有頭暈2例，胃腹部不適4例，頭痛1例，面部發(fā)熱1例，均不影響治療。治療前后所作血、尿常規(guī)，肝、腎功能結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。
通過上述制備工藝、結(jié)構(gòu)測定、定量控制及藥效學試驗說明，本發(fā)明藥物組合物中有效量的偽原纖細皂苷(II)不僅是新化合物，且為活性成分，通過將組合物中的三種化合物偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細皂苷(II)、薯蕷皂苷(III)配比使用，發(fā)揮藥效的物質(zhì)明確，質(zhì)量可控，且服用劑量小，使用方便。
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權(quán)利要求
1.一種甾體皂苷藥物組合物，其特征在于它含有通式A和/或通式B的呋甾醇烷甾體皂苷，通式C螺甾烷醇類甾體皂苷，其重量配比為呋甾烷醇甾體皂苷5-25份、螺甾烷醇類甾體皂苷1-10份， 通式A 通式B 通式C其中，通式A中， H； 或 通式B中 或 通式C中， H、-glc、 或
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述甾體皂苷藥物組合物，其特征在于含有下列化合物通式A中，當 時，為偽原薯蕷皂苷(I)； 時，為偽原纖細薯蕷皂苷(II)；通式B中，當 時，為原薯蕷皂苷(IV)； 時，為原纖細皂苷(V)；通式C中， 時為薯蕷皂苷(III)，其中，偽原薯蕷皂苷(I)和/或原薯蕷皂苷(IV)5-22份，偽原纖細皂苷(II)和/或原纖細皂苷(V)1-5份、薯蕷皂苷(III)1-8份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于含有偽原薯蕷皂苷(I)5-20份、偽原纖細皂苷(II)1-3份、薯蕷皂苷(III)1-5份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于含有偽原薯蕷皂苷(I)12-18份、偽原纖細皂苷(II)1份、薯蕷皂苷(III)1.2-2.5份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于所述通式A、B、C的甾體皂苷來源于薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥(Dioscorea panthaica Prain et Burkill)、穿龍薯蕷(Dioscorea nipponica Makino)甾體總皂苷提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于所述甾體總皂苷提取物中，甾體總皂苷以薯蕷皂苷計，其含量不少于65.0％(w/w)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于所述甾體總皂苷中，結(jié)構(gòu)式為偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細皂苷(II)及薯蕷皂苷(III)的三種甾體皂苷的含量不少于80％(w/w)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任一項所述的甾體皂苷藥物組合物，其特征在于所述的制劑是丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑。
9.一種甾體皂苷藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料，經(jīng)切片或粉碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意比例組成的混合溶液為溶媒提?。籦、將a步驟制備的提取液冷卻過濾、濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液，用水洗至流出液至無色，棄去水洗液；c、將b步驟水洗后的吸附樹脂柱用甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇或含水丙酮中的一種或多種洗脫，收集洗脫液，濃縮；d、將c步驟的濃縮液加醇醇沉，過濾，收集濾液；e、取d步驟所述的濾液，濃縮干燥，加入藥物上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征是步驟b中，當提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇時，先減壓濃縮，再冷卻過濾。
11.一種如權(quán)利要求1所述甾體皂苷藥物組合物在制備治療和預(yù)防冠心病、心絞痛、心肌缺血、心律失常、高血脂及瘀血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或痛等心血管病癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甾體皂苷藥物組合物，具體地說，它是以黃山藥、穿龍薯蕷為原料提取的甾體皂苷藥物組合物，它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾體皂苷，通式C螺甾烷醇類甾體皂苷，其重量配比為呋甾烷醇甾體皂苷5－25份、螺甾烷醇類甾體皂苷1－10份。本發(fā)明還提供了該甾體皂苷藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明甾體皂苷藥物組合物中對三種化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定和質(zhì)量控制，質(zhì)量可控，使用方便。
文檔編號A61K9/20GK1754541SQ20041004077
公開日2006年4月5日 申請日期2004年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月30日
發(fā)明者劉忠榮, 祁偉, 付鐵軍, 鄒文俊, 及元喬, 李伯剛, 黃瑜 申請人:成都地奧制藥集團有限公司