專利名稱：通過制備液相色譜法分離純化順苯磺酸阿曲庫銨的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學領(lǐng)域，具體涉及一種通過制備液相色譜法分離純化 順苯磺酸阿曲庫銨的方法。
背景技術(shù)：
苯磺酸阿曲庫銨為經(jīng)典的中時效的非去極化肌松藥，在臨床麻醉中應(yīng)用 普遍。順苯磺阿曲庫銨是苯磺酸阿曲庫銨單一異構(gòu)體，具有與苯磺酸阿曲庫
銨相似的肌松效應(yīng)和代謝方式，但其肌松作用強度約為阿曲庫銨的3倍，且 不釋放組胺，心血管反應(yīng)小，是較為理想的中時效非去極化肌松藥。
順苯磺阿曲庫銨的結(jié)構(gòu)式如下
H3CO~^::^/y'''IIICH2C〇0(CH2)5OCOCH2CH2"yv^Jiv^~OCH3
2PhS020'
苯磺酸阿曲庫銨結(jié)構(gòu)較為復雜，分子中含有4個手性中心，其中2個為 手性碳，2個為手性氮，理論上有16個手性異構(gòu)體，因為結(jié)構(gòu)對稱，實際能 產(chǎn)生IO個異構(gòu)體，順苯磺阿曲庫銨為其中的一種單一構(gòu)型的異構(gòu)體一 1R,1'R,2R，2'R異構(gòu)體(也有說lR-cis,l'R-cis異構(gòu)體)。
美國藥典USP31版中對苯磺酸阿曲庫銨的定義中說明苯磺酸阿曲庫銨 含有約55 —60%的cis-cis構(gòu)型;34.5—38.5%的cis-trans和5.0 — 6.5%的 trans-trans。苯磺酸阿曲庫銨的順反結(jié)構(gòu)是指C,位和&位連接的較大基團在 同側(cè)(cis)或在兩側(cè)(trans)，即C,連接的芐基和N2連接丙酸酯部分所處 的相對位置。順苯磺酸阿曲庫銨為cis-cis構(gòu)型中三種中的一種，即 (lR，l'R)-cis-cis異構(gòu)體，約占苯磺酸阿曲庫銨混合物總量的15%?；瘜W文摘(CA)順苯磺酸阿曲庫銨的化學名稱為
(1 R, 1 'R，2R，2'R)-2,2'-(3 ， 11 -Dioxo-4， 10-dioxatridecamethylene)bis( 1 ，2，3,4-tetrahy dro-6,7-dimethoxy-2-methyl-1 -veratrylisoquinolinium)dibenzenesulfonate 。艮卩 (lR，rR,2R，2'R)-2,2'-(3，ll-二氧代-4,10-二氧雜-l，13-亞十三垸基)雙[6,7-二甲 氧基-l-(3,4-二甲氧基芐基)-2-甲基-l，2,3，4-四氫異喹啉]二苯磺酸鹽。
順苯磺阿曲庫銨文獻報道的合成路線是以消旋四氫罌粟堿為起始物，經(jīng) 拆分得到R-四氫罌粟堿，然后與1,5-戊撐二丙稀酸酯反應(yīng)得到 (lR，l，R)-2，2，-(3,ll-二氧代-4，10-二氧雜-l，13-亞十三基)-雙[12,3，4-四氫-6，7-二 甲氧基-l-(3,4-二甲氧基)芐基]異喹啉草酸鹽，最后與苯磺酸甲酯反應(yīng)，產(chǎn)物 經(jīng)柱層析得(lR,l'R，2R，2'R)-苯磺酸阿曲庫銨。該路線合成順苯磺阿曲庫銨的 關(guān)鍵在于R-四氫罌粟堿的光學純度和最后一步(lR,l，R)-2,2'-(3，11-二氧代 -4，10-二氧雜-1，13-亞十三基)-雙[12,3,4-四氫-6,7-二甲氧基-l-(3,4-二甲氧基)芐 基]異喹啉草酸鹽與苯磺酸甲酯反應(yīng)的選擇性。該路線的生產(chǎn)成本高，反應(yīng)收 率低，污染較大。
藥物的分離和純化的方法有多種。最常用的有結(jié)晶法，但由于阿曲庫銨 的多種同分異構(gòu)體在溶劑中隨溫度變化溶解度差異不大，無法通過結(jié)晶法來 達到分離目的。另外，分離純化阿曲庫銨的常規(guī)方法是柱層析法，這種方法 的缺點是多次手動固體處理操作，導致更多操作人員與藥物接觸，并伴隨機 械控制和個人保護設(shè)備的依賴，大量使用有機溶劑也導致更多的蒸發(fā)。這些 操作可能是單調(diào)乏味的。
制備色譜不同于分析色譜。分析色譜一般要求每個峰完全分離，通常在 柱子上負載無限小量的樣品且使用小粒徑(5微米以下)實現(xiàn)峰分離。與制 備色譜中的固定相相比，小粒徑產(chǎn)生更高的壓力。這種更高的壓力要求使用 非常大、強且昂貴的色譜設(shè)備。而制備色譜中的固定相的粒徑通常大于10 微米，從而降低了設(shè)備壓力。制備色譜根據(jù)所需樣品的限制，通常負載最大 量的樣品，從而允許產(chǎn)物以最大濃度離開柱子，最小化了下游設(shè)備的大小， 尤其是蒸發(fā)和濃縮設(shè)備?，F(xiàn)有的應(yīng)用于順苯磺酸阿曲庫銨的分析色譜的參考文獻，均沒有表明在現(xiàn)有已知的條件下可以用于工業(yè)化生產(chǎn)，且這些方法大
都存在收率低、污染大、手動操作等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有方法的基礎(chǔ)上，采用制備色譜在工業(yè)范圍內(nèi)從多 個同分異構(gòu)體中或不純產(chǎn)品中分離和純化順苯磺酸阿曲庫銨。 本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到
一種通過制備液相色譜法分離純化順苯磺酸阿曲庫銨的方法，將苯磺酸 阿曲庫銨用流動相溶解后，負載在制備液相色譜硅膠柱上，在流動相的洗脫 下進行正相或反相液相色譜分離，回收順苯磺酸阿曲庫銨；其中固定相硅膠 為經(jīng)修飾鍵合硅膠，其粒徑為1 200微米，固定相硅膠對阿曲庫銨的負載比 率不大于IOOO，硅膠柱的柱壓為250 400psi。
面積％:從分析色譜計算的純度單位。其為所需成分的面積除以檢測到 的總面積
負載比率固定相的質(zhì)量除以分離過程中負載的苯磺酸阿曲庫銨的量 流動相上樣后泵入柱子的液體，此液體洗脫這些成分 固定相吸附上樣到柱子上的成分的介質(zhì)
產(chǎn)率分離得到的順苯磺酸阿曲庫銨的質(zhì)量除以上樣到柱子上樣品的質(zhì)
百分比除非另有說明，在本說明書和權(quán)利要求書中使用的百分比的量 為重量比
首先按常規(guī)方法制備苯磺酸阿曲庫銨(尤其是1R, 1'R苯磺酸阿曲庫銨)。 合成后，可以先用常規(guī)結(jié)晶方法得到苯磺酸阿曲庫銨(尤其是1R， 1'R苯磺 酸阿曲庫銨)固體。但通過結(jié)晶法得到固體不是不可或缺的，即可以將固體 或未經(jīng)處理的反應(yīng)液直接用流動相溶解，形成色譜法樣品。然后通過色譜柱
純化順苯磺酸阿曲庫銨。將純化的有機液經(jīng)結(jié)晶或冷凍干燥法處理形成順苯 磺酸阿曲庫銨。
所提方法中阿曲庫銨樣品純度不作限制。經(jīng)提純后的順苯磺酸阿曲庫銨純度至少為95%，優(yōu)選為97%以上。所提方法中純度收率至少為70%，優(yōu)選 為約85%且總回收率為約80%。
一般來說，先將苯磺酸阿曲庫銨(或1R， 1'R苯磺酸阿曲庫銨)溶解于 溶劑中，再將溶液負載在硅膠柱上。其中所述的溶劑選自有機醇、卣化烷或 有機腈中的一種或幾種，具體的如甲醇、乙醇、二氯甲垸、三氯甲烷或乙腈 等，其中優(yōu)選使用二氯甲垸。
流動相含有一種或多種溶劑，其中溶劑如上所述為有機醇、鹵化烷或有
機腈；優(yōu)選為二氯甲院甲醇、二氯甲烷乙醇、三氯甲烷甲醇或二氯甲 烷乙腈，其體積比為100: 1 50;進一步優(yōu)選使用二氯甲烷甲醇二100: 1 25，最優(yōu)選使用二氯甲烷甲醇=100: 10 25。流動相需要加入適量的 無機酸或有機酸將pH值調(diào)至1 7，優(yōu)選pH值為約3 4。適合的無機酸包 括硫酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、亞磷酸、硝酸及其混合物。適合的有機酸包 括苯磺酸、檸檬酸、乙酸、蘋果酸、酒石酸、甲酸、草酸、乳酸及其混合物。 優(yōu)選采用有機酸苯磺酸、檸檬酸或其混合酸進行調(diào)節(jié)。
固定相可以選用但不局限于經(jīng)修飾鍵合硅膠，如垸基硅烷、芳基硅烷、 鹵代烷基硅烷、垸基酯硅烷、芳基酯硅烷、烷基胺硅烷、烷基硅烷、腈基硅 烷、苯基化合物硅垸、烷基二醇硅烷、烷基醚硅烷、芳基醚硅垸、鹵化烷基 醚硅烷、垸基酸硅烷、芳基酸硅烷、聚苯烯硅烷、氨基聚已內(nèi)酰胺硅烷及其 混合物等。本發(fā)明優(yōu)選使用球形多孔硅膠，其粒徑為1 200微米，優(yōu)選為 10 40微米，進一步優(yōu)選5 20微米，最優(yōu)選為10微米。
本發(fā)明的方法中在使用流動相之前，使用的負載比率約1至1000克介 質(zhì)/克苯磺酸阿曲庫銨。優(yōu)選負載比例從約1到約200。眾所周知，分析用的 HPLC中負載比率在10000以上。
在操作中，將苯磺酸阿曲庫銨(尤其是1R， 1'R苯磺酸阿曲庫銨)樣品 溶液負載到填充柱后，使用流動相洗滌，洗脫組份依次是四氫異喹啉類雜質(zhì)、 順一順苯磺酸阿曲庫銨、順一反苯磺酸阿曲庫銨、反一反苯磺酸阿曲庫銨、
其它雜質(zhì)。洗脫組份的流出順序可因流動相極性而改變。本發(fā)明的制備液相色譜方法一般在約0—3(TC下進行(即柱溫)，優(yōu)選為 約5 — 1(TC。但使用較低的溫度有利于樣品的穩(wěn)定性。本發(fā)明對于流速并無 特定限制，對于一般的柱子而言，流動相流速一般采用100 400ml/s，但如 果換較大或較小的柱子，或者工業(yè)柱時，或壓力有變化時，流速也會有適當 地調(diào)整。
最終收集到的順苯磺酸阿曲庫銨經(jīng)過鹽水洗滌，有機層減壓濃干后即可 得到順苯磺酸阿曲庫銨晶體；或者在有機層減壓濃干后再加入苯磺酸調(diào)pH 至4.0,冷凍干燥后得到順苯磺酸阿曲庫銨晶體。
本方法得到的順苯磺酸阿曲庫銨純度高，收率高，成本低，使用的有機 溶劑少，污染輕，可操作性強。本方法的處理時間比現(xiàn)有方法縮短了 10倍左 右，同時還可連續(xù)進樣，實現(xiàn)自動化操作等。
具體實施方式
實施例1
儀器設(shè)備Varian SD-1 pr印arative HPLC
色譜柱球形硅膠，16um, 250腿X110mmlD
流動相A 二氯甲烷；B甲醇二100: 10，用苯磺酸調(diào)pH值至3 4
負載比150
柱壓 300psi
柱溫 5 — 10。C
流速 300ml/min
檢測波長280nm
進樣量 10g/injection
將合成得到的苯磺酸阿曲庫銨粗品用流動相溶解后，負載在色譜柱上， 然后用流動相洗脫分離，分段收集得到順阿曲庫銨溶液，用10%鹽水洗滌， 有機層減壓濃干，濃縮液加水溶解，用苯磺酸調(diào)pH二4.0，冷凍干燥，得類 白色或類白色固體一順苯磺酸阿曲庫銨，產(chǎn)品收率為82%，純度97。Z。 實施例2將固定相調(diào)整為K)微米的球形硅膠，流動相調(diào)整為二氯甲烷甲醇二 100: 20，負載比為100，其他同實施例l，最終產(chǎn)品收率為80%，純度大于
96%。
對比例1
將合成得到的苯磺酸阿曲庫銨粗品用流動相溶解后，通過普通硅膠層析
柱(100 200目，無定形)，負載比為25，操作同上，收率為25%，產(chǎn)品 純度95%。
將實施例2與對比例1的操作及結(jié)果做對比如下
對比例1實施例2
負載比率25100
進樣量(g)1010
收集量(g)2. 54.0
產(chǎn)品純度95%>97%
收率(％)25〉80
處理時間(min)360 48045
連續(xù)進樣否是
自動化操作否是
套用循環(huán)次數(shù)1500
權(quán)利要求
1、一種通過制備液相色譜法分離純化順苯磺酸阿曲庫銨的方法，其特征在于，將苯磺酸阿曲庫銨用流動相溶解后，負載在制備液相色譜柱固定相填料上，在流動相的洗脫下進行正相或反相液相色譜分離，回收順苯磺酸阿曲庫銨；其中固定相填料為硅膠或經(jīng)修飾鍵合硅膠，其粒徑為1～200微米，固定相硅膠對阿曲庫銨的負載比率不大于1000，硅膠柱的柱壓為250～400psi。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的苯磺酸阿曲庫銨為 lR，l'R-苯磺酸阿曲庫銨。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的經(jīng)修飾鍵合硅膠為球形 多孔硅膠，其粒徑為5 20微米。
4、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的經(jīng)修飾鍵合硅膠為烷基 硅垸、芳基硅烷、鹵代烷基硅垸、垸基酯硅垸、芳基酯硅烷、烷基胺硅烷、 垸基硅垸、腈基硅烷、苯基化合物硅烷、烷基二醇硅烷、垸基醚硅烷、芳基 醚硅烷、鹵化烷基醚硅烷、烷基酸硅垸、芳基酸硅烷、聚苯烯硅烷或氨基聚 己內(nèi)酰胺硅烷。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流動相選自有機醇、鹵 化垸或有機腈中的一種或幾種。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流動相的pH值為1 7。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的流動相為二氯甲烷甲醇、二氯甲垸乙醇、三氯甲院甲醇或二氯甲烷乙腈，其體積比為100:1 50;流動相采用有機酸或無機酸調(diào)pH值至3 4。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的流動相為二氯甲烷甲醇二100: 1 25，流動相采用苯磺酸調(diào)至pH值至3 4。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，回收的順苯磺酸阿曲庫銨的純 度在95%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通過制備液相色譜法分離純化順苯磺酸阿曲庫銨的方法，將苯磺酸阿曲庫銨用流動相溶解后，負載在制備液相色譜硅膠柱上，在流動相的洗脫下進行正相或反相液相色譜分離，回收順苯磺酸阿曲庫銨；其中固定相硅膠為經(jīng)修飾鍵合硅膠，其粒徑為1～200微米，固定相硅膠對阿曲庫銨的負載比率不大于1000，硅膠柱的柱壓為250～400psi。本方法得到的順苯磺酸阿曲庫銨純度高，收率高，成本低，使用的有機溶劑少，污染輕，可操作性強。本方法的處理時間比現(xiàn)有方法縮短了10倍左右，同時還可連續(xù)進樣，實現(xiàn)自動化操作等。
文檔編號C07D217/00GK101475530SQ200910028198
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者磊 王, 賀乾輝, 黃樂群 申請人:東英(江蘇)藥業(yè)有限公司