專利名稱：流感抑制組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含肽的對(duì)預(yù)防或抑制由流感病毒引起的細(xì)胞的病毒感染有效的組 合物，以及用其治療或預(yù)防流感感染的方法。
背景技術(shù)：
所有的病毒都必須結(jié)合并侵入到它們的目標(biāo)細(xì)胞以進(jìn)行復(fù)制。對(duì)于有包膜病毒，包括具有I類膜融合蛋白的RNA病毒，該過程包括(a)病毒體結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞，(b)病毒的包 膜與原生質(zhì)膜或內(nèi)在細(xì)胞膜融合，(c)病毒包膜和細(xì)胞膜在融合區(qū)的去穩(wěn)定作用以產(chǎn)生融 合孔，(d)病毒RNA通過孔傳遞，和(e)通過病毒RNA的細(xì)胞功能的修飾。上述步驟(b)和(C)，包括病毒膜和細(xì)胞膜的融合，通過病毒跨膜糖蛋白(融合蛋 白)與目標(biāo)細(xì)胞的表面蛋白和膜的交互作用來介導(dǎo)。這些交互作用引起了融合蛋白的構(gòu)象 變化，這導(dǎo)致了病毒融合肽插入目標(biāo)細(xì)胞膜中。該插入后接著在融合蛋白內(nèi)出現(xiàn)進(jìn)一步的 構(gòu)象變化，這使得病毒胞膜和細(xì)胞膜變得接近，并且導(dǎo)致該兩個(gè)膜雙層的融合。如果融合過程被破壞，病毒不能在其宿主中傳播和繁殖?？梢酝ㄟ^將肽和肽模擬 物同源物定向到融合蛋白序列、識(shí)別融合蛋白的抗體、和對(duì)抗融合蛋白的其他因素來實(shí)現(xiàn) 該融合過程的故意破壞。血球凝集素2(HA2)是流感病毒的包膜蛋白，其是原型RNA病毒的I類融合蛋白， 而流感病毒是一種正粘液病毒。HA2包含氨基端疏水區(qū)域，認(rèn)為是融合肽，它在血球凝集素 前體蛋白分裂過程中被暴露。逆轉(zhuǎn)錄病毒跨膜蛋白包含若干個(gè)除融合蛋白外與HA2已知結(jié) 構(gòu)相同的結(jié)構(gòu)特性，包括延伸的氨基端螺旋(N-螺旋，通常稱為“七肽重復(fù)區(qū)”或“亮氨酸拉 鏈”)，羧基端螺旋(C-螺旋)和鄰近跨膜結(jié)構(gòu)域的芳香族基序。這五個(gè)結(jié)構(gòu)域中至少存在 四個(gè)就能將病毒包膜蛋白限定為I類融合蛋白。

圖1顯示了 I類病毒六個(gè)科的融合蛋白中的五個(gè)之前所述的結(jié)構(gòu)域。融合蛋白起 始于疏水融合肽，終止于錨肽，并且結(jié)合了延伸的氨基端α螺旋(N-螺旋，通常稱為“七肽 重復(fù)區(qū)”或“亮氨酸拉鏈”)，羧基端α螺旋(C-螺旋)，以及有時(shí)鄰近病毒包膜的芳香族基 序。同時(shí)顯示了各病毒科是第六個(gè)結(jié)構(gòu)域，在此認(rèn)為是融合起始區(qū)域(FIR)，這是本發(fā)明人 所發(fā)現(xiàn)的，并且公開于U. S.系列No. 10/578，013中。每年約10至20%的美國民眾遭受季節(jié)性流感。雖然大部分人在一至兩周內(nèi)復(fù)原， 但是年弱的、年老的以及患有慢性病癥的個(gè)人可能發(fā)展成為流感后肺炎和其它致命的并發(fā) 癥。流感的病原體是流感病毒，是一種正粘液病毒，其通過分段病毒基因組的再分布和突變 過程容易發(fā)展成新的毒株。
甲型流感病毒的高毒性毒株可以產(chǎn)生傳染病和流行病。近幾年來，已經(jīng)出現(xiàn)了能夠引起高死亡率的禽類甲型流感病毒亞型H5m的高致病毒株。由于流感病毒對(duì)公共衛(wèi)生 的威脅以及作為生物危害的潛在因素，發(fā)展治療法以控制季節(jié)性流感和增加的大流行感冒 的威脅是高度優(yōu)先考慮的問題。發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于治療和預(yù)防流感感染和/或預(yù)防流感人到人傳播的肽、肽類似 物、肽衍生物和藥物組合物。本發(fā)明的肽包含野生型流感血球凝集素2蛋白或其變體的融 合起始區(qū)(FIR)的流感病毒-細(xì)胞融合抑制部分。通過在野生型血球凝集素2蛋白序列的 氨基酸殘基序列中的選定取代，變體不同于野生型蛋白。在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的分離肽由選定的野生型流感血球凝集素2蛋白或 其變體的一部分的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成。血球凝集素2蛋白的該部分包含蛋白 的融合起始區(qū)(FIR)和FIR的氨基端和羧基端上至多五個(gè)氨基酸殘基。該部分還至少包括 序列YNAELL(SEQ ID NO 1)或其不同于SEQ ID NO 1 —個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的變體，其一 個(gè)或多個(gè)氨基酸取代選自 Y1S、Y1T、Ylff, Y1A、N2Q、A3L、A3I、A3V、E4D、E4K、E4R、E4H、L5I、 L5V、L5A、L6I、L6V 和 L6A。在該第一個(gè)實(shí)施方案中，變體通過上述選定的野生型蛋白的一部分氨基酸序列中 一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代而不同于野生型序列。該取代可以選自其它野生型流感血球凝集 素2蛋白的相應(yīng)氨基酸殘基或野生型殘基的保守取代，優(yōu)選地用于變體維持Wimley-White 界面親水性分布特征，變體在至少一個(gè)野生型血球凝集素2氨基酸序列的相應(yīng)區(qū)域的 Wimley-White界面親水性分布特征的局部最大值和局部最小值的約5個(gè)氨基酸殘基內(nèi)的 分布特征中具有局部最大值和局部最小值。優(yōu)選地，選定的野生型序列的變體與野生型序 列具有至少50%的序列同一性。在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含來自殘基72至131區(qū)域中的蛋白片段的野 生型甲型流感或乙型流感血球凝集素2蛋白的FIR的8至40個(gè)氨基酸殘基部分，或其通過 在野生型序列中一個(gè)或多個(gè)殘基取代而不同于野生型序列的殘基72-131的變體。變體中 的取代選自其它野生型血球凝集素2蛋白相應(yīng)的氨基酸殘基或其保守取代，優(yōu)選選擇用于 保持肽的Wimley-White親水性分布特征的整體形態(tài)，即維持變體的Wimley-White親水性 分布特征，該變體在對(duì)應(yīng)野生型血球凝集素2氨基酸序列的Wimley-White界面親水性分布 特征的局部最大值和局部最小值的約5個(gè)氨基酸殘基的分布特征中具有局部最大值和局 部最小值。優(yōu)選，該實(shí)施方案中的變體通過保守取代不同于野生型序列。在第三個(gè)實(shí)施方案中。本發(fā)明的肽由SEQ ID NO 2 (EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSY NAELLVALENQHTIDLTDS)或其變體的氨基酸序列的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成。SEQ ID NO :2包含野生型甲型流感亞型H3 (SEQ ID NO 19)的血球凝集素2蛋白的氨基酸殘基 72-113。該8至40個(gè)氨基酸殘基包含SEQ ID NO :2或其變體的至少氨基酸殘基23至28。 在該實(shí)施方案中，變體通過選自 E1D、E1N、E1Q、V2G、V2S、V2T、V2I、V2L、V2A、V2M、V2C、E3D、 E3N、E3Q、G4T、G4S、G4K、G4R、G4H、G4Q、G4N、R5K、R5H、R5Q、R5N、I6L、I6V、I6A、I6M、I6C、 Q7N、Q7E、Q7D、Q7G、Q7S、Q7T、D8E、D8N、D8Q、D8M、D8C、L9I、L9V、L9A、L9M、L9C、E10D、E10N、 E10Q、E10I、E10L、E10V、E10A、E10M、E10C、K11R、K11H、K11D、K11E、K11N、K11Q、Y12W、Y12K、 Y12R、Y12H、V13I、V13L、V13A、V13G、V13T、V13S、V13M、V13C、E14D、E14K、E14R、E14H、D15E、D15R、D15N、D15Q、T16G、T16S、T16A、T16Q、T16N、K17F、K17R、K17M、K17C、K17I、K17V、K17L、 K17A、I18L、I18V、I18A、I18T、I18S、I18G、I18Q、I18N、D19E、D19N、D 19Q、L20I、L20V、L20A、 L20C、L20M、W21Y、W21A、S22T、S22G、S22A、S22M、S22C、Y23W、Y23S、Y23T、Y23A、N24Q、N24D、 N24E、A25I、A25V、A25L、A25M、E26D、E26K、E26R、E26H、L27A、L27I、L27V、L27M、L28I、L28V、 L28A、L28M、V29I、V29L、V29A、V29M、A30I、A30L、A30V、A30M、A30C、L311、L31V、L31A、L31M、 L31C、E32D、E32N、E32Q、N33Q、N33Q、Q34E、N33E、Q34E、Q34D、Q34G、Q34S、Q34T、H35K、H35R、 H35N、H35Q、T36S、T36G、I37L、I37V、I37A、I37M、I37C、D38E、D38N、D38Q、L39F、L39I、L39V、 L39M、L39C、L39A、L39E、L39D、L39N、L39Q、T40H、T40R、T40K、T40S、T40G、T40A、T40M、D41E、 D41N、D41Q、S42G、S42T、S42I、S42L、S42V、S42A、S42M 和 S42C 的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代不 同于 SEQID NO :2ο在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽是由序列SEQ ID Ν0:3-13任意至少8個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成的肽，其代表了野生型甲型流感血球凝集素2 (ΗΑ2)或乙型流感血球 凝集素(HB)蛋白的FIR部分。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽由SEQ ID NO :3_13任一的變 體的至少8個(gè)氨基酸連續(xù)殘基組成。在該可選的實(shí)施方案中，變體通過類似于上述第三個(gè) 實(shí)施方案中描述的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，優(yōu)選地保守取代，不同于選定的序列。當(dāng)本發(fā)明的肽，這里指的是流感抑制劑_3(F3)施用到白鼬的鼻腔時(shí)，可以有效地 阻止動(dòng)物中流感的發(fā)展，以及動(dòng)物到動(dòng)物的流感傳播。F3的氨基酸序列與大多數(shù)甲型流感 H3亞型病毒的殘基84-99相同，包括當(dāng)前在人類中傳播的A/H3N2毒株。在體外，在低nM范 圍(< 5nM)內(nèi)用IC5tl的免疫蝕斑分析中，F(xiàn)3還可以有效對(duì)抗重組體H5W流感病毒和乙型 流感的兩個(gè)毒株(B/上海/361/2002和B/上海/10/2003)。已知這些不同甲流和乙流菌株 的多樣性，F(xiàn)3很可能能有效對(duì)抗大部分流感病毒。在其它方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明肽的類似物(例如，環(huán)狀肽，或包含非天然氨 基酸的肽)，肽的衍生物，或者肽或類似物，其中肽或類似物包含結(jié)合肽殘基的非-HA2-衍 生基團(tuán)(例如，脂質(zhì)或非流感HA2肽序列)和對(duì)本發(fā)明的肽、類似物或衍生物特異性的分離 抗體(即，能夠特異性和選擇性地結(jié)合)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是本發(fā)明的肽、類似物、衍生物或抗體在治療或預(yù)防流感感 染的治療方法中的用途。該用途包括本發(fā)明的肽、類似物、衍生物或抗體用于制備治療流感 的藥物的用途。本發(fā)明的肽、類似物、衍生物和抗體可以與藥物學(xué)上可接受的載體結(jié)合包含 于藥物組合物中。附圖簡述圖1顯示了在先鑒定的I型病毒的6個(gè)科的融合蛋白區(qū)域，以及被認(rèn)為是融合起 始區(qū)(FIR)的第六個(gè)結(jié)構(gòu)域。圖 2 顯示了 HA2 變體 Hl (SEQ ID NO :17)、H2 (SEQ ID NO 18)、H3 (SEQ ID N0:19)、 H4(SEQ ID NO :20)、H5(SEQ ID NO :21)、H6(SEQ ID NO :22)、H7(SEQ ID NO :23)、H9(SEQ ID N0:24)、H 10 (SEQ ID NO :25)、H13 (SEQ ID NO :26)、H14 (SEQ ID NO :27)、H15 (SEQ ID NO: 28)和 H16(SEQ ID NO 29)的序列對(duì)比。圖3顯示了乙型流感血球凝集素2，B/Yamagata/16/1988 (SEQ ID NO 30)的氨基
酸殘基序列。圖4顯示了甲型流感和乙型流感血流凝集素2蛋白的殘基72-113，特別是甲型流感亞型 H1(SEQ ID NO :17)、H2(SEQ ID NO :18)、H3 (SEQ ID NO :19)、H4 (SEQ ID NO :20)、 H5 (SEQ ID NO :21)、H6(SEQ ID NO :22)、H7 (SEQ ID NO :23)、H9 (SEQ ID NO :24)、HlO (SEQ ID NO :25)、H13(SEQ ID NO :26)、H14 (SEQ ID NO :27)、H15 (SEQ ID NO :28)、H16 (SEQ ID NO 29)和乙型流感/Yamagata/16/1988血球凝集素2(SEQ ID NO 30)的殘基72-113的比較。圖5顯示了病毒_細(xì)胞融合的可能機(jī)理。圖6顯示了受到甲流病毒A/Cal/07/04攻擊的以及用本發(fā)明的肽或?qū)φ针闹委煹?組白鼬所觀察到的病理反應(yīng)。圖7顯示了來自用本發(fā)明的肽或?qū)φ针奶幚淼囊约笆芗琢鞑《?Cal/07/04感染 的白鼬的樣品的病毒滴定度分析。圖8顯示了甲型流感Hl血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖9顯示了甲型流感H2血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖10顯示了甲型流感H3血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖11顯示了甲型流感H4血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖12顯示了甲型流感H5血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖13顯示了甲型流感H6血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖14顯示了甲型流感H7血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖15顯示了甲型流感H9血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖16顯示了甲型流感HlO血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖17顯示了甲型流感H13血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖18顯示了甲型流感H14血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖19顯示了甲型流感H15血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。圖20顯示了甲型流感H16血球凝集素2的Wimley-White界面親水性圖。優(yōu)選實(shí)施方案的詳述本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防流感感染或預(yù)防流感人到人傳播的肽、肽類似物、 肽衍生物、抗體和藥物組合物。本發(fā)明利用了具有類似于野生型流感血球凝集素2蛋白的 融合起始區(qū)部分的氨基酸序列的肽。本發(fā)明的肽可以抑制流感病毒-細(xì)胞的融合，從而治 療和/或預(yù)防流感感染。本發(fā)明的肽可以包含F(xiàn)IP部分中野生型流感病毒血球凝集素2蛋 白的選定部分。變體通過野生型血球凝集素2蛋白序列的氨基酸殘基序列中的選定取代 不同于野生型蛋白。雖然不希望被理論所束縛，但認(rèn)為本發(fā)明的肽通過干擾病毒融合肽的 FIR結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)細(xì)胞的正常交互作用來預(yù)防和治療流感感染，例如，通過干擾激活或融合 所需的蛋白聚集或構(gòu)象變化。在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的分離肽由選定的野生型流感血球凝集素2蛋白或 其變體的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基，優(yōu)選9至16個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成，所述選定的 野生型流感血球凝集素2蛋白包含蛋白融合起始區(qū)(FIR)和FIR氨基端和羧基端側(cè)上至多 5個(gè)氨基酸殘基。該8至40個(gè)氨基酸殘基至少包括序列YNAELL(SEQ ID NO 1)或其變體， 該變體通過選自 Y1S、Y1T、Ylff, Y1A、N2Q、A3L、A3I、A3V、E4D、E4K、E4R、E4H、L5I、L5V、L5A、 L6I、L6V和L6A的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代而不同于SEQ ID NO :1。SEQ ID NO 1代表所有 表征甲型流感血球凝集素2蛋白的FIR最高保守部分之一(S卩，甲型流感血球凝集素2序列的殘基94至99)。FIR的氨基酸序列包括選定的野生型血球凝集素2蛋白的部分，其開 始于蛋白N-螺旋中約殘基77，終止于選定的野生型血球凝集素2蛋白的殘基110至殘基 119范圍內(nèi)的殘基。如在此所述的，流感FIR羧基端終止是緊挨著在殘基104(N-螺旋的羧 基端)之外的第一個(gè)殘基之前的那個(gè)殘基，其起始了增加Wimley-White界面疏水性的區(qū) 域。在另一個(gè)方面，F(xiàn)IR的特征在于表現(xiàn)野生型血球凝集素2蛋白的Wimley-White界面親 水性分布特征峰值的、并且在N-螺旋(殘基77上)開始、在N-螺旋的羧基端后約15個(gè)殘 基之內(nèi)結(jié)束的氨基酸殘基序列。峰值區(qū)域(即，F(xiàn)IR)的羧基端通過親水性分布特征的局部 最小值表征。緊鄰FIR羧基末端上的區(qū)域最小值之后的殘基起始了親水分布特征的另一個(gè)峰值(即，增加的界面疏水性的區(qū)域)。在該第一個(gè)實(shí)施方案中，變體通過上述選定的野生型蛋白的部分的氨基酸序列 中一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代不同于選定的野生型序列。這些取代選自其它野生型流感血 球凝集素2蛋白的相應(yīng)氨基酸或殘基，或相應(yīng)殘基的保守取代，優(yōu)選選擇用于變體保持 Wimley-White界面親水性分布特征，該變體在至少一個(gè)野生型血球凝集素2FIR氨基酸序 列的相應(yīng)區(qū)域的Wimley-White界面親水性分布特征的局部最大值和局部最小值的約5個(gè) 氨基酸殘基的分布特征中具有局部最大值和局部最小值。例如，野生型血球凝集素2可以 來自選自甲型流感血球凝集素 2 (SEQ ID NO 17-29)的 HI、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H9、H10、 H11、H12、H13、H15和H16變體的亞型，或來自乙型流感血球凝集素2蛋白(SEQID NO :30)。 甲型流感血球凝集素 2 ΦΜΗ1、Η2、Η3、Η4、Η5、Η6、Η7、Η9、Η10、Η11、Η12、Η13、Η15* Η16 的 氨基酸序列顯示于圖2中，其中FIR區(qū)域有黑色輪廓框出。乙型流感血球凝集素2 (SEQ ID NO 30)的氨基酸序列在圖3中給出。優(yōu)選地，選定的野生型序列的變體與野生型序列具有 至少50%的序列同一性(例如，至少60%，至少70%或至少80%的序列同一性)。在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含野生型甲型流感或乙型流感血球凝集素2 蛋白或其變體的FIR的殘基72-113的8至40個(gè)，優(yōu)選9至16個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基，其中變 體通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基取代不同于野生型序列的殘基72-113。變體中的取代選自其 它野生型血球凝集素2蛋白的相應(yīng)氨基酸殘基或其保守取代，優(yōu)選地被選擇用于保持野生 型肽的Wimley-White親水性分布特征(profile)的所有形態(tài)，即保持變體的Wimley-White 親水性分布特征，該變體在相應(yīng)野生型血球凝集素2氨基酸序列的Wimley-White親水性分 布特征的局部最大值和局部最小值的約5個(gè)氨基酸殘基之內(nèi)具有局部最大值和局部最小 值。例如，優(yōu)選地，該實(shí)施方案中的變體包含某些野生型氨基酸殘基的保守取代。這里所用的，術(shù)語“保守取代”及其語法上的變形，指的是肽序列的氨基酸殘基的 存在不同于野生型殘基的氨基酸，但是屬于相同類型(即，非極性殘基代替非極性殘基， 芳香族殘基代替芳香族殘基，極性不帶電殘基代替極性不帶電殘基，帶電殘基代替帶電殘 基)。此外，保守取代可以包含具有與其代替的野生型殘基相同信號(hào)和通常相似強(qiáng)度的界面 親水性值的殘基。如在此所用的，術(shù)語“非極性殘基”指的是甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮 氨酸和脯氨酸；術(shù)語“芳香族殘基”指的是苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；術(shù)語“極性不帶電殘 基”指的是絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，甲硫氨酸，天冬氨酸和谷氨酰胺；術(shù)語“帶電殘基”指 的是負(fù)電荷帶電氨基酸天門冬氨酸和谷氨酸，以及正電荷帶電氨基酸賴氨酸，精氨酸和組 氨酸。
圖4比較了各自顯示于圖2中的甲型流感血流凝集素2亞型的殘基72-113和乙型流感血流凝集素2的相應(yīng)區(qū)域(即，SEQ ID NO 30的殘基72-113)。如圖4所示，這兩 個(gè)不同的血球凝集素亞型之間具有顯著序列相似性。各甲型流感血球凝集素2亞型的殘 基72-113區(qū)域與H3亞型(S卩，SEQ ID NO 2)的相應(yīng)區(qū)域具有50%或更多的序列同一性。 SEQID NO :2和各種其它亞型的殘基72-113的序列同一性百分比如下H4和H14與SEQ ID NO 2具有約95. 2%的序列同一性；H7和Hl5與SEQID NO 2具有約59. 5%的序列同一性； HlO和H16與SEQ ID NO 2具有約54. 7%的序列同一性；H5和H6與SEQ ID NO 2具有約 52%的序列同一性；以及H1、H2、H9和H13與SEQ ID NO :2具有約50%的序列同一性。乙 型流感血球凝集素2的殘基72-113與SEQ ID NO :2具有約30. 9%的序列同一性；然而，SEQ ID NO 2和乙型流感蛋白的殘基72-113之間的區(qū)別是占優(yōu)勢(shì)的保守取代。如圖2、圖3和圖4所示，已知野生型血球凝集素2蛋白全部在屬于多于一類氨基 酸的殘基72-113區(qū)域中的位置上具有氨基酸殘基。相應(yīng)地，選定的野生型序列的變體與野 生型序列具有至少50%的序列同一性(例如，至少60%，至少70%或至少80%的序列同一 性)。在第三個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽由SEQ ID NO 2 (EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAE LLVALENQHTIDLTDS)或其變體的氨基酸序列的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基，優(yōu)選9至16個(gè) 連續(xù)的氨基酸殘基組成。SEQ ID NO: 2是野生型甲型流感亞型H3血球凝集素2蛋白，并包 含其氨基酸殘基72至113的部分。在該實(shí)施方案中，肽至少包含SEQ ID NO :2或其變體的 氨基酸殘基23至28，該變體通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代不同于SEQ ID NO :2。該一個(gè)或多 個(gè)變體序列中的氨基酸取代選自表1所示取代的組。優(yōu)選地，變體與SEQ ID N0:2具有至 少50%的序列同一性(例如，至少60%，至少70%或至少80%的序列同一性)。在表1中， 第一欄取代是優(yōu)選的，第二欄取代是更優(yōu)選的，并且相比第一欄中的那些是更保守的，第三 欄的取代是可選的，其包含于本發(fā)明的肽中。表1.SEQ ID NO 2.中的取代
, 在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽是由表2中所示任一序列(SEQ ID NO 3-13)的至少8個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成的肽，其代表野生型甲型流感血球凝集素2(HA2) 或乙型流感血球凝集素(HB)蛋白的FIR部分。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽是由SEQ ID NO :3-13任一個(gè)的變體的至少8個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成的肽。在該可選的實(shí)施方案中，變 體通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代而不同于選定的序列，取代優(yōu)選為保守取代，更優(yōu)選選自表1 中所示各個(gè)肽位置上的相應(yīng)取代殘基。此外，圖2和圖4中所示的序列以粗體字的形式表示了若干殘基，其代表了在比對(duì) 的血球凝集素2氨基酸序列的所示位置上的共有殘基。如在此所用的，應(yīng)用于氨基酸序列 比對(duì)比較中的氨基酸殘基的術(shù)語“共有”指的是在給定位置上大部分比對(duì)序列中出現(xiàn)的氨 基酸。在圖2中，共有殘基是在圖中所示的13個(gè)序列的至少7個(gè)給定位置上出現(xiàn)的那些氨 基酸。在圖4中，共有殘基是在圖中所示的14個(gè)序列的至少8個(gè)給定位置上出現(xiàn)的那些氨 基酸。在圖4中比較的血球凝集素2序列的殘基72至113的區(qū)域中，共有殘基是V73、E74、 R76、177、L80、D86、D90、W92、S93、Y94、N95、A96、E97、L98、L99、V100、LlOU L102、E103、 N104、T107、D109、D112和S 113。優(yōu)選，本發(fā)明的肽，包括在此所述的任一實(shí)施方案，在肽 包括的HA2蛋白或其變體的片段內(nèi)包括一個(gè)或多個(gè)這些共有殘基，直至并包括所有這些共 有殘基。表 2 所有表2中的序列除了乙型流感血球凝集素2肽(SEQ ID NO 8)以外都表現(xiàn)與SEQ ID NO :3 具有超過 50% 的同一性，S卩，SEQ ID N0:4、5、9 禾口 13 與 SEQ ID NO :3 具有 62. 5% 的同一性，SEQ ID NO :6、7、9、10、11和12與SEQ ID NO :3具有56. 2%的同一性。乙型流 感血球凝集素2表現(xiàn)出與SEQ ID NO 3約31%的同一性，然后SEQ ID NO 8和SEQID NO 3之間的區(qū)別是占優(yōu)勢(shì)的保守取代。此外，由SEQ ID N0:3-13表示的各個(gè)肽包括一個(gè)或多 個(gè)共有殘基 D86、D90、W92、S93、Y94、N95、A96、E97、L98、L99、V100、LlOl 和 L102。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明肽的類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該類似物包 含至少兩個(gè)含有共用二硫鍵(胱氨酸交聯(lián)鍵)以形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的半胱氨酸殘基。各半胱 氨酸殘基是肽的獨(dú)立殘基，或者是直接或者通過連接的肽序列或殘基連結(jié)到肽氨基端的殘 基，或者是直接或者通過連接的肽序列或殘基連結(jié)到肽的羧端的殘基。認(rèn)為環(huán)狀肽結(jié)構(gòu)可 以提高許多肽的體內(nèi)生物穩(wěn)定性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該類似物包含至少一個(gè)非天然氨基酸殘基(例如，D-氨基 酸殘基，例如N-甲基纈氨酸、羥脯氨酸、氨酷酸的N-甲基化殘基，等等)。已知特定的非天然 氨基酸取代可以在很多肽化合物中給予對(duì)肽酶分裂的抗性(例如，D-氨基酸，前脯氨酸)， 或者增加肽的α螺旋含量(例如，氨基丁酸)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該類似物可以包括用一個(gè)或多個(gè)脯氨酸，甘氨酸或谷氨酸 殘基取代一個(gè)或多個(gè)肽氨基酸殘基的天然氨基酸。如果需要或期望時(shí)，脯氨酸和甘氨酸殘 基可以破壞肽的α螺旋含量，而谷氨酸殘基可以增加肽的α螺旋含量。再一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明肽或類似物的衍生物，其中肽或類似物包括 懸垂基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，懸垂基團(tuán)是脂質(zhì)，如通過酯、酰胺、醚、硫代酯或硫醚鍵結(jié)合 肽的C8至C2tl烷基或烷基羧酸酯基團(tuán)。例如，衍生物可以包括脂肪烷基酯基團(tuán)，例如結(jié)合肽 殘基的肉豆蔻酸酯基團(tuán)。例如，脂質(zhì)取代基可以增加肽的生物穩(wěn)定性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該衍生物包含懸垂于肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基側(cè)鏈上的 氨基、羥基或巰基取代的聚乙二醇(PEG)基團(tuán)。該P(yáng)EG衍生物通?？梢蕴岣叩鞍状x動(dòng)力， 例如，通過抑制器官如肝的攝取，這些器官包含顯著水平的肽酶。在另一個(gè)衍生物的實(shí)施方案中，該肽包括結(jié)合8至40個(gè)氨基酸肽的氨基端、肽的 羧基端或兩端的非HA2多肽序列。該非HA2序列可以是非HA2蛋白(例如，血清白蛋白) 或非HA2蛋白的一部分，或者可以包含，例如，有助于使肽增溶的序列，如ASKSKSK(SEQ ID NO 15)或其變體，優(yōu)選地添加在肽的羧基端。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選衍生物是分離的多肽，其包含由本發(fā)明肽組成的第一個(gè)肽片 段(例如，來自野生型序列或其變體的殘基72至113片段的野生型流感HA2蛋白部分的8 至40個(gè)連續(xù)氨基酸殘基)，以及至少一個(gè)附加肽部分，其包含結(jié)合第一個(gè)肽片段的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端兩端的非HA2肽序列。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了對(duì)本發(fā)明的肽、類似物或衍生物特異的(S卩，能夠 特異性的和選擇性地結(jié)合)分離的抗體。這些抗體可用作試劑來確定來自用本發(fā)明組合物 治療個(gè)體的生物樣品中的本發(fā)明的肽、類似物、或衍生物的存在濃度。此外，靶向含有部分 野生型血球凝集素2亞型的本發(fā)明肽的抗體還可以結(jié)合天然血球凝集素2蛋白。這種結(jié)合 也可以提供一定水平的流感病毒_細(xì)胞融合過程的抑制作用。優(yōu)選地，抗體是單克隆抗體， 其可以是衍生自非人類動(dòng)物例如鼠的抗體的嵌合抗體或人源化抗體。從給定蛋白或肽制備 單克隆抗體的方法在本領(lǐng)域是公知的。制備嵌合抗體和人源化抗體的方法也是本領(lǐng)域技術(shù) 人員公知的。本發(fā)明的另一個(gè)方面是含有本發(fā)明的肽、類似物、衍生物或抗體的藥物組合物，其可以用于治療或預(yù)防流感感染的方法中。在特定的優(yōu)選實(shí)施方案中，該組合物包括在藥物 學(xué)上可接受的介質(zhì)或載體中的本發(fā)明的肽、類似物、衍生物或抗體，這些介質(zhì)或載體適于將 肽、類似物、衍生物或抗體傳送至個(gè)體，例如，傳送至鼻道或肺部氣道。適于將活性成分傳遞 給鼻道或肺部氣道的介質(zhì)和載體在本領(lǐng)域是公知的，包括鹽水溶液，緩沖鹽水，可吸入粉末 等。載體還可以包括其他賦形劑成分，如表面活性劑、防腐劑、分散劑等等。該組合物可以 作為氣溶膠、非霧化液體、軟膏或乳劑(例如，用于鼻部應(yīng)用)等等來傳遞。本發(fā)明的藥物 組合物可以用作治療或預(yù)防流感感染的方法的一部分，該方法通過給患有流感的個(gè)體施用 流感抑制量的本發(fā)明的藥物組合物來治療或預(yù)防流感感染。本發(fā)明的另一個(gè)方面是本發(fā)明的肽、類似物、衍生物、抗體或藥物組合物用于治療 或預(yù)防流感感染的用途。其可以包括本發(fā)明的肽、類似物、衍生物、抗體或藥物組合物用于 制備治療或預(yù)防流感感染的藥物的用途。流感病毒甲型流感病毒具有多樣的亞型。各種病毒亞型包括嵌入病毒的脂物膜包膜的兩個(gè) 糖蛋白模型的一個(gè)特異性組合。該兩個(gè)亞型定義的糖蛋白是血球凝集素2 (HA2)和神經(jīng)氨 糖酸苷酶。存在16個(gè)已知的HA2變體，其分別稱為Hl至H16，存在9個(gè)已知的神經(jīng)氨糖酸 苷酶變體，其分別稱為m至N9。各病毒亞型特異性的特征在于其血球凝集素2和神經(jīng)氨糖 酸苷酶變體編號(hào)。例如，甲型流感亞型H3N2是豬流感，而亞型H5W是禽流感。HA2是包括流感病毒的正粘液病毒科中所有病毒的融合蛋白。各流感病毒的FIR 位于其HA2糖蛋白中。16個(gè)已知HA2變體中13個(gè)的氨基酸序列，HI、H2、H3、H4、H5、H6、 H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15 和 H16，顯示于圖 2 中(分別為 SEQ ID N0:17、18、 19、20、21、22、23、24、25、26、27、28 和 29)。H8、H 11 和 H12 亞型的序列還不清楚。H3 血球 凝集素2的融合起始區(qū)現(xiàn)在已經(jīng)鑒定為H3氨基酸序列(SEQ ID NO 19)的殘基77至119， 如2中所示。在此稱為流感抑制劑3(F3)的分離肽，其具體表現(xiàn)為氨基酸序列 VEDTKIDLWSYNAELL, SEQ ID NO :3(SEQ ID NO 19 的殘基 84-99 ；H3HA2)，發(fā)現(xiàn)具有有效的抗 病毒特性。在隨機(jī)雜混序列SWLVNKIYLTDDEVEL(SEQ ID NO 14)中含有相同16個(gè)氨基酸的 分離肽未表現(xiàn)出可識(shí)別的抗病毒特性。F3的抗病毒特性包括病毒結(jié)合抑制作用，如通過血 細(xì)胞凝集測試所證明的。F3還抑制病毒結(jié)合、融合和感染，如通過噬菌斑測試所證明的。抗流感病毒活性
F3對(duì)抗廣泛的HI、H3、H5和乙型流感病毒具有有效的感染抑制活性，這些病毒在 它們各自的HA2蛋白的全部序列和結(jié)構(gòu)中表現(xiàn)出顯著的差異性。F3的廣譜活性可能與，至 少部分與FIR有關(guān)，特別是由所有已知流感病毒A亞型和乙型流感的殘基84-99表示的FIR 部分，該部分是HA2蛋白中最高保守區(qū)之一。雖然不希望被理論所束縛，但認(rèn)為F3和野生 型HA2相應(yīng)區(qū)域(殘基84-99)之間的序列相似性使得肽有效地結(jié)合或另外干擾遍布HA亞 型的FIR相應(yīng)部分。該相互作用能在融合過程中受HA蛋白的常規(guī)操作所干擾(例如，通過 干擾融合過程進(jìn)行必需的蛋白聚集或構(gòu)象變化)。 已經(jīng)通過使用標(biāo)準(zhǔn)FMOC化學(xué)品以克的含量在PEG-PS-PAL樹脂上合成了 F3。使 用HPLC將批量肽產(chǎn)物純化至> 95%，其殘留的物質(zhì)主要是較短的相關(guān)肽。將純化的肽冷 凍干燥以除去溶劑。冷凍干燥的粉末可以進(jìn)一步加工，例如，通過將其溶解在六氟異丙醇 中，并且用超純氮(Praxair UHP,99. 999% )蒸汽的蒸發(fā)溶劑。然后，將所得到的粉末在隨 后時(shí)間內(nèi)通過將粉末溶解在含水緩沖液中來重建，緩沖液例如為IOmM磷酸氫二鉀或磷酸 鹽緩沖鹽水(PBS)。溶液中F3的濃度可以使用公式mg/ml = (A280x mw)/e來確定，其中 e表示在280nm處肽氨基酸序列中兩個(gè)產(chǎn)色氨基酸的分子消光系數(shù)的總和，即5560 (色氨 酸)+1200(酪氨酸)的總和，e = 6760。F3具有有效的和廣基的甲型流感病毒抑制活性，并且在斑點(diǎn)減少測試中表現(xiàn)出皮 摩爾濃度抑制作用。使用維晶纖維素作為外層的AVICEL 免疫蝕斑分析(Matrosovich 等，2006)，通過將單分子層固定，并用流感病毒核蛋白特異性的抗體染色來檢測噬菌斑。在 肽抑制測定中，用約100個(gè)病毒空斑形成單位(pfu)將肽預(yù)培養(yǎng)1小時(shí)，然后用于感染單分 子層。兩種條件用于培養(yǎng)(1)標(biāo)準(zhǔn)條件，其中以預(yù)培養(yǎng)中所用的相同濃度將肽包含于外層 中，或(2)其中肽不包含于外層的條件。利用Madin-Darby Canine Kidney (“MDCK”)細(xì)胞噬菌斑測試來評(píng)估F3對(duì)甲型流 感病毒多種亞型的抑制作用，使用甲型流感病毒的A/WSN/33 (HlNl)和A/Udorn/72 (H3N2) 的亞型來進(jìn)行了該測試。使用F3和隨機(jī)雜混的對(duì)照肽(SEQ ID NO 14)的50 =M到2. 5 =M 的稀釋度來評(píng)估這些肽在病毒感染性上的作用。測試了六個(gè)F3和對(duì)照肽對(duì)抗Hmi病毒亞 型的稀釋度；測試了另外六個(gè)各個(gè)肽對(duì)抗H3N2病毒亞型的稀釋度。在條件(1)下，F(xiàn)3通過若干不同的Hmi和H3N2甲型流感病毒菌株抑制正常大小 噬菌斑的形成，IC5tl在約100-500皮摩爾(PM)范圍內(nèi)。在條件(2)下，對(duì)于F3，用于抑制正 常大小噬菌斑的IC5tl為約10-100納摩爾(nM)范圍。在條件(1)的低nM濃度(< IOnM) 下，或條件(2)的低μΜ( < ΙΟμΜ)下，“迷你噬菌斑”的存在是明顯的。雜混對(duì)照肽在任何條件下都不能抑制甲型流感病毒噬菌斑的形成，這表明肽的氨 基酸序列是重要的，并且非特異性作用不能說明抑制作用。在體外免疫斑測定中，F(xiàn)3對(duì)抗重組體H5W流感病毒和乙型流感的兩個(gè)毒株(B/上 海361/2002和B/上海/10/2003)也是有效的，具有低nM范圍的IC50 ( < 5nM)。已知這些 不同甲型和乙型流感毒株的多樣性，F(xiàn)3有可能能有效對(duì)抗大多數(shù)流感病毒。通過使用U. S.專利中請(qǐng)系列No. 10/578，013中教導(dǎo)的方法，Hl亞型甲型流感病毒 的FIR已經(jīng)鑒定為H1HA2序列的殘基77至110 (SEQ IDNO 17)。具有SEQ ID N0:4氨基酸 序列的分離肽，在此稱為流感抑制劑1 (Fl)，在噬菌斑測定中也具有對(duì)抗Hl和H3甲型流感 病毒的抗病毒活性。Fl的氨基酸序列與HlFIR序列SEQ ID NO 17的殘基84-102相匹配。
已經(jīng)用不同的流感毒株進(jìn)行了研究，以更好地了解本發(fā)明肽的作用機(jī)制，例如，用 以確定病毒復(fù)制循環(huán)中的哪個(gè)步驟被F3、F1以及相關(guān)流感病毒抑制肽抑制。在最佳數(shù)量紅 血細(xì)胞和甲型流感A/PR/8/34 (HlNl)的濃度下，F(xiàn)3和Fl抑制流感病毒誘導(dǎo)的血球凝集的 濃度為約10 μ M。在最佳細(xì)胞和病毒稀釋(二者均為1 8)下，F(xiàn)3抑制流感病毒誘導(dǎo)的血 球凝集的濃度為12. 5-6. 25 μ Μ。使用其它Η3和Hl毒株也獲得了類似的結(jié)果，其他毒株即 HlNl 毒株 A/New Caledonia/20/99 和 A/WSN/33 ；和 H3N2 毒株 A/California/07/2004, A/ New York/55/04和A/Udorn/72。相反，具有SEQ ID NO 14氨基酸序列的對(duì)照肽，F(xiàn)3的雜 混形式，在任何濃度下均沒有抑制血細(xì)胞凝集。更高濃度的病毒可以克制血凝抑制反應(yīng)，這給出了一種推測性的機(jī)理。使用這種 傳統(tǒng)的病毒到細(xì)胞的結(jié)合測定的結(jié)果表明，本發(fā)明的肽直接與病毒體相互作用，從而抑制 了與細(xì)胞的結(jié)合。相反，F(xiàn)UZEON 抗Hiv藥物與短暫的融合中間產(chǎn)物相互作用，而非與 病毒體結(jié)構(gòu)相互作用(Debnath，2006 ;Platt，Durnin和Kabat，2005)。在病毒感染力測定 中，對(duì)天然病毒體結(jié)構(gòu)的直接作用可以說明，至少可以部分說明，F(xiàn)3和Fl (對(duì)于正常大小的 噬菌斑，大約為200pM)相對(duì)于FUZEON 抗HIV藥物(根據(jù)HIV-I株，4至280nM)的效 能非常高。上述迷你噬菌斑可能是病毒體上HA重折疊作用的結(jié)果。已經(jīng)指出HA的重折疊作用是在暴露于已知與HA相互作用的甲型流感病毒的小分 子抑制劑后發(fā)生的(Cianci 等，1999 ；Luo, Colonno 和 Krystal，1996 ；Luo 等，1997)。該輸 入抑制劑和其它物質(zhì)(Hoffman等，1997)在90年代后期得到了相當(dāng)顯著的發(fā)展，這是因?yàn)?它們是以HA作為重要的治療目標(biāo)。然而，這些小分子抑制劑迄今為止沒有發(fā)展成為流感藥 物，這大多是因?yàn)樗鼈兿鄬?duì)低的功效，具有較低到中等μΜ濃度范圍的IC5(I。在病毒進(jìn)入型 抑制劑的新興領(lǐng)域中形成的一致意見是，小分子物質(zhì)可能不能夠有效地干擾在病毒進(jìn)入過 程期間HA和其它病毒融合蛋白經(jīng)受的廣泛的蛋白結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變以及復(fù)雜的分子相互作用。流感病毒病毒體_細(xì)胞融合過程的工作模型可以從數(shù)十年有關(guān)流感病毒和其它 RNA病毒的深入研究中推知。這樣的一個(gè)模型的圖示顯示于圖5中。雖然在某些方面仍然 只是假說，但是該模型可以突出甲型流感病毒糖蛋白的結(jié)構(gòu)/功能基序的重要性，這可以 作為藥物發(fā)展的目標(biāo)。在圖5中，圖A顯示了流感血球凝集素I(HAl)蛋白與細(xì)胞受體的結(jié) 合，受體是由涎類脂物或涎蛋白組成的。圖B顯示了流感病毒體進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)小泡中。稱為 M2病毒離子孔道蛋白的流感病毒蛋白降低了 pH，從而觸發(fā)了 HA2蛋白螺旋結(jié)構(gòu)域的重排。 對(duì)應(yīng)于F3氨基酸序列(SEQ IDNO 3)的HA2蛋白的序列位于亞穩(wěn)“彈簧”序列的旁邊。該 重排使得HA2的融合肽部分干擾了小泡薄膜。圖C和D說明HA2通過“l(fā)eash-in groove" 機(jī)理“很快恢復(fù)”，從而將病毒體和細(xì)胞膜靠近閉合。為了清楚的目的，HAl和涎受體在圖 C-E中沒有顯示。圖C'顯示了一種可選的機(jī)理，其中形成具有干擾雙分子層薄膜能力的途 徑的HA2序列可以促進(jìn)細(xì)胞和病毒體膜的混合。圖片E顯示了 “融合孔”的形成和病毒的 核蛋白部分進(jìn)入到細(xì)胞?；铙w動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通常認(rèn)為白鼬是最好的人流感病毒感 染模型(Govorkova等，2005 ;HampSOn， 2006 ；Maher和DeStefano，2004 ；van Riel等，2007)。的確，流感疫苗效能的歐盟指導(dǎo)明確 需要白鼬模型試驗(yàn)。老鼠以及其它小型哺乳動(dòng)物可以被人甲型流感病毒毒株所感染，但是 在季節(jié)性毒株的情況中，這通常需要對(duì)于新宿主的特殊適應(yīng)。相反，白鼬可以被大多數(shù)人甲型流感病毒的毒株所感染而不需要特殊適應(yīng)。老鼠中適應(yīng)的甲型流感病毒的組織分布和發(fā)病機(jī)理與發(fā)生于人類疾病中的是不同的(Lu等，1999)。白鼬中甲型流感病毒的發(fā)病機(jī)理非 常類似于人類中所觀察到的。當(dāng)對(duì)白鼬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性鼻內(nèi)接種時(shí)，病毒在上呼吸道發(fā)生了局 部復(fù)制。白鼬呼吸道中唾液酸受體的分布與人類相似(van Riel等，2006 ；Yen等，2007)。以與患有流感的人驚人相似的方式，白鼬表現(xiàn)出活動(dòng)力下降，食欲不振，流鼻涕， 打噴嚏，呼吸困難，腹瀉，結(jié)膜炎，神經(jīng)病癥。白鼬和人類中發(fā)現(xiàn)的主要病理是具有纖毛的呼 吸上皮的脫落以及鼻腔粘膜下層被浸潤的炎癥細(xì)胞所滲透。在白鼬被流感病毒感染后的48 個(gè)小時(shí)中，呼吸上皮幾乎全部被破壞，只剩下了基底膜。白鼬中和人類中流感的主要區(qū)別是疾病顯示出的病癥的時(shí)間長度。白鼬在感染后 1天就表現(xiàn)出了流感癥狀，但是在感染4天后就消除大部分已知癥狀(活動(dòng)力下降，發(fā)熱，食 欲不振，鼻炎，打噴嚏等)。需要注意的是，許多人甲型流感病毒的毒株可以以不同程度感染 白鼬的下呼吸道。在人類中，甲型流感病毒的高病原毒株可以在白鼬中從上呼吸道到大腦 或從下呼吸道到循環(huán)系統(tǒng)以及其它器官中傳播。當(dāng)前甲型流感病毒的H5m毒株可以在白 鼬中形成致命的感染(Govorkova 等，2005 ；Thiry 等，2007 ；Vahlenkamp 和 Harder，2006)。起初活體外研究集中在對(duì)應(yīng)于目前在人體中循環(huán)的亞型(包括A/WSN/33 (HlNl)， A/PR/8/34 (HlNl)和A/Udorn/72 (H3N2))的甲型流感病毒充分表征的實(shí)驗(yàn)室毒株上。肽F3 和Fl在噬菌斑減少測定中在對(duì)抗若干其它甲型流感病毒毒株上表現(xiàn)出相似的效力，所述 毒株包括 Hmi 臨床分離體(A/New Caledonia/20/99)和 H3N2 (A/NY/55/04 ；A/Cal/07/04) 毒株，這些在實(shí)驗(yàn)室中均沒有進(jìn)行過廣泛的評(píng)估。關(guān)于當(dāng)前臨床分離體的研究，對(duì)于例如確 立目前引起人類中流感的病毒的治療效力是很重要的。重要的是，這些毒株還引起了白鼬 中的流感，這引起了鼻內(nèi)接種后鼻腔和肺內(nèi)的高滴定度。對(duì)于所有的研究，病毒分離體使用標(biāo)準(zhǔn)程序在含胚的雞蛋中增殖(得自Charles River Laboratories 或 Louisiana State University PoultrySciences Department)0 在接種后一天從11天大的雞蛋收集尿囊液，使用標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Σ《編爝M(jìn)行對(duì)抗土耳其紅血 細(xì)胞(tRBC) (LampireLaboratories, USA)的血細(xì)胞凝集活性測定。陽性血細(xì)胞凝集(> 256HA單位)病毒庫通過上述病毒噬菌斑測定進(jìn)行滴定，并且在用于攻擊研究之前儲(chǔ)存在 液氮中。在磷酸鹽緩沖液中制備肽，該緩沖液通過使用移液管直接用于麻醉的白鼬的鼻道 (鼻內(nèi)給藥途徑)。攻擊研究1在病毒暴露之前(第一天和第二天)，通過鼻內(nèi)途徑以約0.3mg/Kg的劑量用F3或 肽(SEQ ID NO 14)的雜混對(duì)照形式對(duì)白鼬進(jìn)行預(yù)處理，一天一次或一天兩次。在最后一次 處理后12小時(shí)，用約105pfu的H3N2甲型流感A/Cal/07/04毒株通過鼻內(nèi)接種對(duì)動(dòng)物進(jìn)行 感染，這是感染劑量發(fā)現(xiàn)研究中確定的最小感染劑量的至少100倍。在病毒體暴露后第O 天的12小時(shí)以后，以及第1天和第2天，以0. 3mg/Kg的劑量對(duì)白鼬再次給藥。在第2天， 所有用任意對(duì)照肽處理的白鼬都表現(xiàn)出顯著的呼吸性窘迫(快速淺呼吸)，高燒和打噴嚏。 相反地，用F3處理的動(dòng)物都沒有表現(xiàn)出嚴(yán)重的呼吸性窘迫，雖然有一部分(一天兩次預(yù)處 理劑量組中的2/5，一天一次預(yù)處理劑量組中的1/6)表現(xiàn)出帶有低熱的某些非常輕微的呼 吸癥狀。在第3天，所有用F3處理的白鼬都沒有表現(xiàn)出流感的臨床癥狀，而50%用任意對(duì) 照肽處理的白鼬仍然表現(xiàn)出瞌睡，100%用任意對(duì)照肽處理的白鼬表現(xiàn)出顯著的鼻炎。清楚地，在該最初的攻擊實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)3提供了顯著的并且令人驚訝的有效治療效果。攻擊研究2在第二個(gè)任務(wù)研究中，F(xiàn)3處理組中包括12只白融，對(duì)照肽組中包括12只白鼬。用 約105 pfu的甲型流感A/Cal/07/04感染動(dòng)物；然而，在該研究中，在第0天病毒體暴露后4 小時(shí)后用0. 3mg/Kg F3或?qū)φ针奶幚戆作鴽]有預(yù)先的病毒體暴露處理。在第2天，所有 用任意對(duì)照肽處理的12只白鼬都表現(xiàn)出顯著的呼吸性窘迫，高燒。和打噴嚏。相反地，在 該時(shí)間段，用F3處理的動(dòng)物沒有表現(xiàn)出呼吸性窘迫的任何癥狀或其它流感癥狀。附圖6顯 示了研究期間白鼬中觀察到的病理反應(yīng)，這是在整個(gè)活體研究期間通過監(jiān)視兩個(gè)處理組的 呼吸性窘迫(圖A)，鼻炎(圖B)和活動(dòng)力(圖C)獲得的。如圖6表明的，相對(duì)于對(duì)照組，F(xiàn)3處理的動(dòng)物表現(xiàn)出顯著降低的病理反應(yīng)。僅僅2 只F3處理組的動(dòng)物表現(xiàn)出流感的輕微癥狀，并且這發(fā)生在實(shí)驗(yàn)的第4天，也就是肽處理停 止的兩天以后。除了臨床參數(shù)，在整個(gè)研究階段，以每天的周期對(duì)鼻腔抽吸物以及肺和肺外 組織進(jìn)行采集用于研究病毒價(jià)、宏觀病理學(xué)、和組織病理學(xué)分析。用F3處理的動(dòng)物顯示正 常的肺部掃描。相反地，用對(duì)照肽處理的白鼬表現(xiàn)出炎癥跡象。相比對(duì)照肽處理的動(dòng)物，F(xiàn)3 處理的白鼬的組織表現(xiàn)出顯著降低的病狀，對(duì)照肽處理的白鼬表現(xiàn)出具有流感感染的支氣 管滲出特性的滲透、支氣管炎癥。流感病毒核蛋白基因的定量RT-PCR分析和保守引發(fā)劑提供了處理的并且感染的 白鼬中組織勻漿中病毒染色體RNA水平的可靠分析。鼻腔抽吸物樣品在研究時(shí)期期間從動(dòng) 物中收集。這些樣品的病毒價(jià)顯示在圖7，圖A中。來自本研究第一天的腦、氣管活體、脾 和血的白鼬組織勻漿的分析結(jié)果顯示于圖7的圖B中。圖A中的數(shù)據(jù)表明，白鼬鼻洗劑中 流感病毒的峰值病毒價(jià)減少了大于2. Olog10,以及在肺中減少了大于6. Olog100這些結(jié)果表 明，F(xiàn)3顯著降低了流感病毒在白鼬上呼吸道的復(fù)制。圖B中的數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)3有效地阻止了 病毒傳播到下呼吸道和其它器官。流感FIR的鑒定流感病毒FIR的羧基端可以定義為緊挨著在N-螺旋的羧基端(殘基104)之外 發(fā)現(xiàn)的呈現(xiàn)出正向增加Wilmley-White界面親水性曲線中的界面疏水性的第一個(gè)肽序列 之前的那個(gè)殘基。下面的表3顯示了 Wimley和White 1996所述的蛋白在膜界面上的 Wimley-White界面疏水性。該疏水性和親水性度量是基于一個(gè)肽殘基從一個(gè)疏水膜雙分子 層轉(zhuǎn)移到一個(gè)水相中所需的自由能改變。在該度量中，正自由能(△ G)，千卡每摩爾，表示了 更多的疏水性殘基(即，必須加入能量以將疏水性殘基從疏水性膜轉(zhuǎn)移到水中)。類似地， 負(fù)自由能表示更多的親水性殘基。在Wimley-White界面疏水性圖中，F(xiàn)IR以親水性的峰值區(qū)域表征(即，包括位于 兩個(gè)疏水性局部最小值之間的疏水性局部最大值的相對(duì)較高的疏水性的區(qū)域)。該峰值區(qū) 域起始于HA2的N-螺旋中，并且終止于離N-螺旋約15個(gè)殘基之內(nèi)。表3 =Wimley-White界面疏水性度量 計(jì)算機(jī)程序,例如得自網(wǎng)站blanco. biomol. uci. edu/mpex 的 Membrane Protein ExploreHMPEx)，可以用來計(jì)算蛋白或多肽的界面親水性分布。MPEx程序結(jié)合了 Wimley-White親水性度量，并且構(gòu)成了確定這些肽序列界面疏水度的優(yōu)選方法。MPEx計(jì)算 機(jī)程序用于輔助表征圖2中所示13個(gè)連續(xù)的HA2變體每一個(gè)的FIR羧基末端。MPEx計(jì)算 機(jī)程序圖示了蛋白和相關(guān)肽的Wimley-White界面親水性值，這是通過將固定編號(hào)的連續(xù) 氨基酸殘基(優(yōu)選地約19個(gè)殘基)組成的窗口中所有殘基的全殘基親水性值平均，然后將 平均親水值以窗口中中間殘基親水性數(shù)值的形式在該窗口中繪成圖。然后窗口通過一個(gè)殘 基從氨基末端移到羧基末端方向進(jìn)行變化，該過程進(jìn)行重復(fù)直到各興趣區(qū)中的殘基的親水 性值得到確定。圖2中顯示的所有13個(gè)HA2亞型的Wimley-White界面親水性分布特征通過使用 MPEx程序制得，其使用了 19個(gè)氨基酸殘基的窗口。FIR的氨基末端在蛋白N-螺旋內(nèi)的點(diǎn) 位上找到，其中界面親水性在局部最小值(即，迄今為止驗(yàn)訖的HA2蛋白的殘基77處)之 后穩(wěn)定增加。FIR的羧基末端是遠(yuǎn)離N-螺旋的緊挨第一個(gè)疏水性區(qū)域最小值之前的殘基， 艮口，緊挨遠(yuǎn)離N-螺旋羧基末端的具有陽性增加的界面疏水性的第一肽序列之前的殘基。在 附圖2中所示的各個(gè)甲型流感HA2亞型中，N-螺旋終止于殘基104。Wimley-White親水性 數(shù)值圖不需要在零軸上方交叉以用于確定FIR羧基末端的位置，相對(duì)在前肽殘基，這只是 在親水性數(shù)值上有增加。圖8-20顯示了甲型流感的HA2融合蛋白的13個(gè)連續(xù)變體的MPExWimley-White親 水性分布特征(在這些附圖中，“A”表示肽的FIR，由親水性圖中的峰值表征)。附圖8-20 中各FIR的羧基末端用“B”表示。通過分析，可以確定的是，各病毒HA2亞型的FIR的氨基 末端起始于HA2序列的殘基77。各病毒HA2亞型的FIR的羧基末端在殘基110-119之間不 同。FIR區(qū)域在附圖2中以環(huán)繞殘基77-110或119的黑色邊界突出顯示。具有提高的活性的本發(fā)明的肽可以通過準(zhǔn)備成套的肽得到鑒定，所述成套的肽相 比活性目標(biāo)抑制劑蛋白的FIR部分(例如，SEQ ID NO 2)要么較長(相應(yīng)于HA的側(cè)翼序 列)要么較短。通過在肽的氨基或羧基端將目標(biāo)HA氨基酸序列延伸3-6個(gè)氨基酸的肽進(jìn) 行針對(duì)流感病毒組的系統(tǒng)試驗(yàn)，以確定是否任意序列側(cè)鏈上的氨基酸部分都能促成增加的 感染性抑制。如果長于目標(biāo)序列的以低于目標(biāo)的IC5tl抑制了甲型流感的感染，那么可以對(duì)具有比目標(biāo)少的附加氨基酸的肽進(jìn)行系統(tǒng)試驗(yàn)以確定具有感染抑制活性的最小肽。對(duì)特殊型/或亞型特異性的亞型也可以用來試驗(yàn)對(duì)抗流感病毒相同型或亞型的若干其它毒株，從 而確定抑制活性的寬度。例如，基于SEQ ID NO 5的目標(biāo)肽應(yīng)該以IC5tl < IOOnM抑制多樣 的H5亞型。其它適于試驗(yàn)的肽變體可以通過系統(tǒng)地將目標(biāo)序列中的參加改變成丙氨酸殘基 而確定(這里指的是“丙氨酸掃描”)。丙氨酸修飾的肽和野生型肽的對(duì)照鑒定出對(duì)融合/ 感染抑制作用重要的殘基。如果多于一個(gè)的氨基酸影響抑制作用，可以通過在各顯著性殘 基上的改變來合成其它的肽。推定的本發(fā)明的肽(例如，SEQ ID NO :3_SEQ ID NO 13)定向的功能性區(qū)域是構(gòu) 型中的α-螺旋。改善或破壞螺旋的肽的變體可以改變作為甲型流感病毒融合/感染抑制 劑的活性。相應(yīng)地，活性肽的變體或類似物可以通過將有利于螺旋內(nèi)容物的氨基酸，例如氨 基丁酸(AIB)或谷氨酸取代成其它的氨基酸而制備。同樣，將脯氨酸或甘氨酸加入到肽可 以破壞α-螺旋內(nèi)容物，這將有益地改善或者降低抑制活性。其它通過篩選組合庫鑒定的 具有提高結(jié)合ΗΑ2的類似肽也可以就流感病毒感染性抑制作用進(jìn)行試驗(yàn)。鼻腔或肺中的肽酶可能潛在地限制了體內(nèi)平臺(tái)治療的利用。如果在噬菌斑減少測 定中有活性的肽的變體退化了或者從呼吸組織中快速地被清除掉，那么可以執(zhí)行其它用于 增加肽穩(wěn)定性和保留能力的改良。干燥粉末或配方的改變/添加可以改良肽的穩(wěn)定性。具 有兩個(gè)添加的半胱氨酸以提供二硫化物環(huán)化的肽的環(huán)化肽類似物可以穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu)，并且 使肽更能抵抗分解。兩個(gè)或多個(gè)殘基的脯氨酸取代也可以顯著增加合成肽的穩(wěn)定性。各種 對(duì)蛋白(例如，血清白蛋白)或類脂物(例如，肉豆蔻酸)氨基或羧基末端的修飾或結(jié)合也 可以提高病毒抑制性肽活性的穩(wěn)定性(Qureshi等，1990)，在肽切割位點(diǎn)引入非天然氨基 酸(羥脯氨酸或D-氨基酸)可以起到相同作用。如果抑制性肽在含水溶液中表現(xiàn)出低溶解性，肽變體可以以序列ASKSKSK(SEQ ID NO 15)的變體添加到羧基末端合成以提高肽的溶解性。該肽表現(xiàn)出提高了模型肽的溶解 性，同時(shí)保護(hù)了二級(jí)結(jié)構(gòu)。提高的溶解性還可以降低抑制流感病毒膜介導(dǎo)的融合的所需濃度。保守殘基序列我們已經(jīng)觀察到，高保守序列，YNAELL(SEQ ID NO :1)，位于13個(gè)連續(xù)HA2亞型的 11個(gè)中的FIR內(nèi)，并且表現(xiàn)出在SEQ ID NO :1中單個(gè)氨基酸取代的相應(yīng)序列YNAKLL(SEQ ID NO 16)出現(xiàn)在其它兩個(gè)亞型中。13個(gè)連續(xù)的HA2變體中僅僅一個(gè)其它序列比YNAELL (SEQ ID NO :1)被更加高地保守取代。這個(gè)序列，AIAGFIE(SEQ ID NO :31，全長蛋白的殘基5-11)， 位于融合HA2蛋白的肽，或FP內(nèi)。FP區(qū)域是現(xiàn)有已知5個(gè)一級(jí)病毒融合蛋白區(qū)域的一個(gè)， 并且FP區(qū)域在病毒到細(xì)胞融合過程中起到重要作用也是現(xiàn)有已知的。本發(fā)明所述上下文中(尤其是在下面權(quán)利要求的上下文中)的術(shù)語“一個(gè)”和“一 種”和“該”和類似術(shù)語的使用解釋為覆蓋了單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非這里有另有說明或與上下文 中明顯矛盾的。術(shù)語“包含”，“具有”，“包括”和“含有”解釋為開放式術(shù)語(即，意為“包 括，但是不限于”)，除非另有說明。這里的數(shù)值范圍的描述只是為了用作單獨(dú)涉及各落入該 范圍內(nèi)單獨(dú)數(shù)值的速記方法，除非這里另有說明，并且各單獨(dú)數(shù)值結(jié)合于說明書中，似乎它 們?cè)谶@里是單獨(dú)敘述的。這里所述的所有方法可以以任何合適的順序完成，除非這里另有說明或明顯與上下文內(nèi)容矛盾的。這里提供的任何以及所有實(shí)施例，或示范性語言(例如，“例如”)的使用不是為了限定本發(fā)明的范圍，除非另有說明。說明書中的語言都不應(yīng)該解 釋為表示用于實(shí)踐本發(fā)明的任何作為基礎(chǔ)的未提出權(quán)利要求的要素。在此描述了本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，包括發(fā)明人所知的用于進(jìn)行本發(fā)明的最佳方 式。在閱讀了之前的描述后，那些優(yōu)選實(shí)施方案的改變對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來言是顯而易 見的。發(fā)明人希望本領(lǐng)域技術(shù)人員按照需要使用這些改變，并且發(fā)明人打算除了在此特定 描述明的以外來實(shí)施本發(fā)明。因此，本發(fā)明包括通過適用的法律許可的所附權(quán)利要求中所 述主題的所有改變和等價(jià)物。此外，本發(fā)明包括在其所有可能的改變中的上述元素的任何 組合，除非在此另有說明或另外與上下文明顯矛盾。參考文獻(xiàn)將以下的每篇參考文獻(xiàn)以其整體引入作為參考Chang，D.K.，ff!Hsu，C. 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權(quán)利要求
一種由選定的野生型流感血球凝集素2蛋白的一部分或其變體的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成的分離肽，選定的血球凝集素2蛋白的一部分包含蛋白的融合起始區(qū)(FIR)以及FIR氨基端和羧基端側(cè)上至多5個(gè)氨基酸殘基，并且至少包括序列YNAELL(SEQ ID NO1)或其變體，該變體通過一個(gè)或多個(gè)選自Y1S、Y1T、Y1W、Y1A、N2Q、A3L、A3I、A3V、E4D、E4K、E4R、E4H、L5I、L5V、L5A、L6I、L6V和L6A的氨基酸取代而不同于SEQ ID NO1；FIR的氨基酸序列包含選定的野生型血球凝集素2(HA2)蛋白的一部分，該部分起始于蛋白的N-螺旋中約殘基77，并且終止于選定的野生型血球凝集素2蛋白的殘基110至殘基119范圍中的一個(gè)殘基，F(xiàn)IR的羧基端是緊挨著在野生型序列殘基104之外的開始增加Wimley-White界面疏水性區(qū)域的第一殘基之前的那個(gè)殘基；變體通過選定的野生型蛋白部分的氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代而不同于選定的野生型蛋白；該取代選自其它野生型流感HA2蛋白的相應(yīng)氨基酸殘基，并優(yōu)選選擇使得變體能保持Wimley-White界面親水性分布特征，變體在至少一個(gè)野生型HA2蛋白的相應(yīng)區(qū)域的Wimley-White界面親水性分布特征的局部最大值和局部最小值的約5個(gè)氨基酸殘基之內(nèi)具有局部最大值和局部最小值。
2.權(quán)利要求1的方法，其中野生型流感血球凝集素2蛋白選自甲型流感HA2亞型HI、 H2、H3、H4、H5、H6、H7、H9、H10、H13、H14、H15 和 H16。
3.權(quán)利要求1的方法，其中野生型流感血球凝集素2蛋白是乙型流感HA2蛋白。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的分離肽，其中血球凝集素2蛋白的部分由選定的野生型HA2 蛋白的殘基72-113組成。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的分離肽，其中肽由SEQID NO 2 (EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSYN AELLVALENQHTIDLTDS)或其變體的8_40個(gè)連續(xù)氨基酸殘基組成，變體通過一個(gè)或多個(gè)氨基 酸取代不同于SEQ ID NO 2 ；其中肽至少包含SEQ ID NO :2或其變體的氨基酸殘基23至28;并且其中一個(gè)或多個(gè) 氨基酸殘基取代選自E1D、E1N、E1Q、V2G、V2S、V2T、V2I、V2L、V2A、V2M、V2C、E3D、E3N、E3Q、 G4T、G4S、G4K、G4R、G4H、G4Q、G4N、R5K、R5H、R5Q、R5N、I6L、I6V、I6A、I6M、I6C、Q7N、Q7E、 Q7D、Q7G、Q7S、Q7T、D8E、D8N、D8Q、D8M、D8C、L9I、L9V、L9A、L9M、L9C、E10D、E10N、E10Q、E10I、 E10L、E10V、E10A、E10M、E10C、K11R、K11H、K11D、K11E、K11N、K11Q、Y12W、Y12K、Y12R、Y12H、 V13I、V13L、V13A、V13G、V13T、V13S、V13M、V13C、E14D、E14K、E14R、E14H、D15E、D15R、D15N、 D15Q、T16G、T16S、T16A、T16Q、T16N、K17F、K17R、K17M、K17C、K17I、K17V、K17L、K17A、I18L、 I18V、I18A、I18T、I18S、I18G、I18Q、I18N、D19E、D19N、D19Q、L20I、L20V、L20A、L20C、L20M、 W21Y、W21A、S22T、S22G、S22A、S22M、S22C、Y23W、Y23S、Y23T、Y23A、N24Q、N24D、N24E、A25I、 A25V、A25L、A25M、E26D、E26K、E26R、E26H、L27A、L27I、L27V、L27M、L28I、L28V、L28A、L28M、 V29I、V29L、V29A、V29M、A30I、A30L、A30V、A30M、A30C、L31I、L31V、L31A、L31M、L31C、E32D、 E32N、E32Q、N33Q、N33Q、Q34E、N33E、Q34E、Q34D、Q34G、Q34S、Q34T、H35K、H35R、H35N、H35Q、 T36S、T36G、I37L、I37V、I37A、I37M、I37C、D38E、D38N、D38Q、L39F、L39I、L39V、L39M、L39C、 L39A、L39E、L39D、L39N、L39Q、T40H、T40R、T40K、T40S、T40G、T40A、T40M、D41E、D41N、D41Q、 S42G、S42T、S42I、S42L、S42V、S42A、S42M 和 S42C。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離肽，其中變體與SEQID NO :2具有至少50%的序列同一性。
7.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離肽，其中變體與SEQID NO :2具有至少60%的序列同一性。
8.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離肽，其中變體與SEQID NO :2具有至少70%的序列同一性。
9.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離肽，其中變體與SEQID NO :2具有至少80%的序列同一性。
10.權(quán)利要求5-9任一項(xiàng)的分離肽，其中SEQID NO :2的變體包括取代E26K
11.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離肽，其中肽包含選自SEQID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12 禾口 SEQ ID NO : 13 的氨基酸序列。
12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的肽的類似物，其中該類似物包括至少一種以下修飾(a)環(huán)狀肽結(jié)構(gòu)，包括至少兩個(gè)形成二硫鍵的半胱氨酸殘基，每個(gè)半胱氨酸殘基獨(dú)立 地是肽的殘基，結(jié)合肽氨基端的殘基，或結(jié)合肽羧基端的殘基；(b)肽的肽酶切割位點(diǎn)上的非天然氨基酸殘基的取代；(c)一個(gè)或多個(gè)脯氨酸殘基代替肽序列中的殘基；或(d)一個(gè)或多個(gè)甘氨酸殘基代替肽序列中的殘基。
13.權(quán)利要求12的類似物，其中非天然氨基酸殘基是D-氨基酸。
14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的肽或類似物的衍生物，其中肽或類似物包括結(jié)合肽的非 HA2衍生基團(tuán)。
15.權(quán)利要求14的衍生物，其中非HA2衍生基團(tuán)包含至少一種以下基團(tuán)(a)結(jié)合肽殘基的脂質(zhì)；(b)結(jié)合肽殘基的聚乙二醇基團(tuán)；或(c)結(jié)合肽的氨基端，羧基端或兩端的非HA2肽序列。
16.對(duì)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)的肽、類似物或衍生物具有選擇性的分離抗體。
17.一種藥物組合物，所述藥物組合物在藥物學(xué)上可接受的載體中含有權(quán)利要求1-16 任一項(xiàng)的肽、類似物、衍生物或抗體。
18.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的肽、類似物、衍生物、抗體或組合物用于治療流感感染的用途。
19.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的肽、類似物、衍生物、抗體或組合物用于預(yù)防流感感染的用途。
20.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的肽、類似物、衍生物、抗體或組合物用于制備治療流感的藥 物的用途。
21.一種治療流感感染的方法，所述方法包括給患有流感的個(gè)體施用流感抑制量的權(quán) 利要求17的藥物組合物。
22.權(quán)利要求21的方法，其中個(gè)體患有甲型流感亞型H1、H3或H5感染。
23.權(quán)利要求21的方法，其中個(gè)體患有乙型流感感染。
24.一種預(yù)防流感感染從流感感染個(gè)體傳播至非流感感染個(gè)體的方法，所述方法包括 給患有流感的個(gè)體施用流感抑制量的權(quán)利要求17的藥物組合物。
25.權(quán)利要求24的方法，其中流感感染個(gè)體患有甲型流感亞型H1、H3或H5感染。
26.權(quán)利要求24的方法，其中流感感染個(gè)體患有乙型流感感染。
27.一種預(yù)防個(gè)體流感感染的方法，所述方法包括給個(gè)體施用流感抑制量的權(quán)利要求 17的藥物組合物。
28.權(quán)利要求27的方法，其中流感感染是甲型流感亞型HI、H3或H5感染。
29.權(quán)利要求27的方法，其中流感感染是乙型流感感染。
30.權(quán)利要求21-29任一項(xiàng)的方法，其中給藥包括藥物組合物的鼻內(nèi)給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防流感感染或預(yù)防流感感染的人到人傳播的肽、肽類似物、肽衍生物和藥物組合物。本發(fā)明的肽包含野生型流感血球凝集素2蛋白或其變體的融合起始區(qū)的流感病毒-細(xì)胞融合抑制部分(FIR)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽由野生型流感血球凝集素2蛋白或其變體的一部分的8至40個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成，該蛋白部分包含蛋白的FIR以及FIR氨基端和羧基端側(cè)上的至多5個(gè)氨基酸殘基。
文檔編號(hào)C07K2/00GK101848719SQ200880021890
公開日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2008年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月25日
發(fā)明者R·B·威爾遜, R·F·加里 申請(qǐng)人:圖蘭恩教育基金管理人;自體免疫科技有限責(zé)任公司