專利名稱：：一種植物耐鹽蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種植物耐鹽蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：土壤鹽漬化對(duì)農(nóng)業(yè)的威脅是一個(gè)全球性的問題，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球鹽堿土約有10億公頃，占世界陸地面積近7.6%。我國是一個(gè)發(fā)展中的農(nóng)業(yè)大國，全國鹽堿土約有0.2億多公頃占全國耕地面積的1/3。鹽分脅迫能顯著的抑制植物的生長(zhǎng)，甚至導(dǎo)致植物的死亡。在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中，不同植物形成了不同的機(jī)制來適應(yīng)鹽分的脅迫，同時(shí)其抗鹽能力也各不相同。大多數(shù)農(nóng)作物都對(duì)鹽分非常敏感，而鹽生植物雖然能在高鹽條件下生存，但它們的經(jīng)濟(jì)價(jià)值往往非常有限，提高作物的抗鹽能力已經(jīng)成為我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和科研中的重要內(nèi)容。植物對(duì)鹽分的抗性是一個(gè)多基因控制的復(fù)雜性狀。鹽分對(duì)植物的影響涉及到植物體內(nèi)的各個(gè)方面和代謝過程。包括離子毒害，滲透脅迫和氧化脅迫以及光合作用。因此，對(duì)抗鹽、耐鹽相關(guān)基因及其蛋白的研究具有重要的意義。Apse等(ApseMP，AharonGS，SneddenWA，"a/.，SalttoleranceconferredbyoverexpressionofavacuolarNa+/H+antiporterinArabidopsis.Science，1999，285:1256-1258)對(duì)轉(zhuǎn)AWKO基因的擬南芥植株進(jìn)行了分析，過量表達(dá)Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)基因擬南芥植株在200mmol/LNaCl中能正常生長(zhǎng)發(fā)育。免疫印跡表明，從轉(zhuǎn)化植株葉片提純液泡比從野生型提純具有更多的v4M^/X7的產(chǎn)物，液泡上Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活力增強(qiáng)。Fukuda等(FukudaA,NakamuraA"TaginA.,etal.Function,intracellularlocalizationandtheimportanceinsalttoleranceofavacuolarNa+/H+antiporterfromrice.Plant&CellPhysiology,2004,45:146)將液泡膜逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因CWW^7轉(zhuǎn)入到水稻中過量表達(dá)也可以提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性。將擬南芥的基因轉(zhuǎn)入番茄中，過量表達(dá)液泡Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)基因番茄在200mmol/LNaCl脅迫下能夠正常生長(zhǎng)、開花和結(jié)實(shí)，盡管葉片中Na+濃度高，但番茄果實(shí)中Na+濃度很低(ZhangHX,BlumwardE,Transgenicsalt-toleranttomatoplantsaccumulatesaltinfoliagebutnotinfruit.NatureBiotechnology,2001,19:765~768)。Shi等(ShiH,Byeong-haL,"OverexpressionofaplasmamembraneNa+/H+antiportergeneimprovesalttoleranceinArabidopsisthaliana.NatureBiotechnology,2002,1-5)將擬南芥質(zhì)膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SOW轉(zhuǎn)入到擬南芥中，轉(zhuǎn)基因植株可以在150mMNaCl脅迫下開花結(jié)實(shí)，并且提高了轉(zhuǎn)基因植株在鹽脅迫下的SOS1的轉(zhuǎn)錄水平。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種植物耐鹽蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的植物耐鹽蛋白，名稱為GmNHX2，來源于大豆屬大豆(G/yc/wmax(Linn.)Merr)，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQIDJV2.2的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQIDW.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐鹽功能的蛋白質(zhì)。其中，序列表中的序列2由534個(gè)氨基酸殘基組成。GmNHX2為一類>^+氾+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，主要功能是在脅迫下調(diào)整植物體內(nèi)的離子平衡。疏水性分析結(jié)果表明，在GmNHX2的N-端是高度疏水性的并預(yù)測(cè)到IO跨膜結(jié)構(gòu)域，具有序列表中序列2的氨基端的第25—432位氨基酸殘基序列；在GmNHX2的C-端有一小段高度親水性的尾巴，具有序列表中序列2的氨基端的第433—534位氨基酸殘基序列，預(yù)測(cè)其位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GmNHX2與番茄的Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具有高度的氨基酸序列相似性，序列一致性為80%，序列相似性為880/。。所述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。為了使(a)中的GmNHX2便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的N端或C端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表l.標(biāo)簽的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述(b)中的GmNHX2可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述(b)中的GmNHX2的編碼基因可通過將序列表中SEQIDJY2:l的DNA序列中缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)的錯(cuò)義突變，和/或在其5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。為了便于蛋白的分泌表達(dá)，還可在所述GmNHX2的氨基末端添加上信號(hào)肽序列。上述植物耐鹽蛋白的編碼基因(GmAWX2)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述植物耐鹽蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一1)自序列表中SEQIDW:l的5，端的第117至1718位核苷酸；2)序列表中SEQIDW:1的核苷酸序列；3)編碼序列表中SEQIDJVf2:2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQIDWs:1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。上述高嚴(yán)謹(jǐn)條件可為在O.lxSSPE(或O.lxSSC)，0.1。/。SDS的溶液中，在65°C下雜交并洗膜。其中，序列表中的SEQIDW:1由2152個(gè)脫氧核苷酸組成，自序列1的5'端的第117至1718位核苷酸為GmAWZ2的編碼序列,序列表中序列1編碼序列表中序列2的氨基酸殘基序列。含有本發(fā)明基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及宿主菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)驗(yàn)表明，該蛋白具有很高的耐鹽性，將該蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)入植物中，可提高植物的耐鹽性。本發(fā)明蛋白和其編碼基因通過調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的Na+離子平衡以提高植物的耐鹽性，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。圖1為過表達(dá)GmNHX2基因的擬南芥轉(zhuǎn)基因植株(轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥)的耐鹽性鑒定(處理的NaCl濃度為200mM)。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中的百分含量，如無特別說明，均為質(zhì)量百分含量。實(shí)施例l、植物耐鹽蛋白及其編碼基因的獲得分析大豆品種綏農(nóng)14的葉片為材料構(gòu)建的cDNA文庫中獲得的ESTs，發(fā)現(xiàn)一個(gè)EST與Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白類基因有很高的同源性。用RT-PCR和3'RACE從鹽處理6h的文豐7號(hào)(統(tǒng)一編號(hào)ZDD02611;中國國家種質(zhì)資源庫)中獲得該基因的全長(zhǎng)cDNA序列，具體方法為用200mMNaCl溶液浸泡萌發(fā)后生長(zhǎng)2周的大豆品種文豐7號(hào)的幼苗的根部6小時(shí)，收獲葉片提取RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，cDNA第一鏈合成按ReverseTranscriptionSystemKit(Promega)試劑盒說明書進(jìn)行，以該cDNA為模板，用引物N21F(5'-CAGTTGTGTTGAGGGACACA-3')和N21R(5'-GCACTCGACAAAAGGTAGCC-3')進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為10xBuffer2.5nl，dNTP2.5mM，N21F5pM，N21R5pM，cDNA20ng,Taq酶1U，加去離子水至25pl。PCR反應(yīng)程序先94。C5min;然后94°C30S，60°C30s，72°Clmin，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)；最后72。C延伸8min。PCR擴(kuò)增得到650bp左右的EST片段。由于獲得的EST片段不含有完整的編碼區(qū)，含有完整的編碼區(qū)的cDNA用3'RACE的方法獲得。3'RACE的cDNA第一鏈合成的方法為，用200mMNaCl溶液浸泡萌發(fā)后生長(zhǎng)2周的大豆品種文豐7號(hào)的幼苗的根部6小時(shí)，收獲葉片提取RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，3'RACE的cDNA第一鏈合成按ReverseTranscriptionSystemKit(Promega)試劑盒說明書進(jìn)行，但用3CDS:5嗎-ggatcctaatacgactcactagcttmttttttmt(a/g/c)-3'引物替代了試劑盒中的Oligo(dT)16引物。根據(jù)獲得的EST序列設(shè)計(jì)兩條基因特異性引物GSP1:5'-CAGGGCGTGGTTCAATTTTCACG-3'和GSP2:5'-CAGGGCGTGGTTCAATTTTCACG-3';接頭弓l物為3RAC:5'-ggatcctaatacgacteactagc-3'。以3'RACEcDNA為模板，以GSP1和3RAC引物進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)增，再以1^1第一輪PCR產(chǎn)物為模板，以GSP2和3RAC為引物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增。3，RACE的反應(yīng)體系10xLABuffer(Takara)2.5pl，10mMdNTP0.5|al，GSP1或GSP20.5|iiM,3RAC0.5jaM，第一鏈cDNA(20ng)或第一輪PCR產(chǎn)物0.5|al，LATaq1U(Takara)，加水至終體積25jal。PCR反應(yīng)程序94°C預(yù)變性3min;94°C30s，72°C2min30s擴(kuò)增5個(gè)循環(huán)；94°C30s，70。C30s，72。C2min30s擴(kuò)增5個(gè)循環(huán)；94。C30s，68°C30s，72。C2min30S擴(kuò)增27個(gè)循環(huán)。結(jié)果表明上述3'RACEPCR擴(kuò)增得到2047bp的cDNA片段，將RT-PCR和3'RACE得到的片段組裝拼接獲得長(zhǎng)度為2152bp的全長(zhǎng)cDNA命名為GmM/X2。經(jīng)過測(cè)序表明，C7miVEY2長(zhǎng)2152bp，具有序列表中序列1的核苷酸序列，自序列1的5，端的第117至1718位核苷酸為GmiV/a2的編碼序列，編碼一條長(zhǎng)534個(gè)氨基酸的蛋白GmNHX2，該蛋白GmNHX2的序列是序列表中序列2的氨基酸殘基序列。疏水性分析結(jié)果表明，在GmNHX2的N-端是高度疏水性的并預(yù)測(cè)到10跨膜結(jié)構(gòu)域，具有序列表中序列2的氨基端的第25—432位氨基酸殘基序列；在GmNHX2的C-端有一小段高度親水性的尾巴，具有序列表中序列2的氨基端的第433—534位氨基酸殘基序列，預(yù)測(cè)其位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GmNHX2與番琉的Na+ZH+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具有高度的氨基酸序列相似性，序列一致性為80%,序列相似性為88%。實(shí)施例2、植物耐鹽蛋白及其編碼基因的功能驗(yàn)證1、在擬南芥中過表達(dá)載體的構(gòu)建將Gm7WiY2的ORF克隆到pBI121載體并置于35S啟動(dòng)子控制下。具體方法為根據(jù)上述GmA^Z2cDNA序列設(shè)計(jì)引物，序列如下所示BamN2:5，-GCCGGATCCATGGCCTCGGAATTAGAAATTTC-3，(下劃線標(biāo)注的是5ami/I酶識(shí)別位點(diǎn))；SacN2:5'-GCGGAGCTCTCATGATGAATAGTGGTTCTGGC-3'(下劃線標(biāo)注的是SacI酶識(shí)別位點(diǎn))。用200mMNaCl溶液浸泡萌發(fā)后生長(zhǎng)2周的大豆品種文豐7號(hào)的幼苗的根部6小時(shí)，取葉片提取RNA并反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，作為模板，以BamN2和SacN2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增得到1605bp的片段，測(cè)序表明，該片段具有自序列1的5'端的第117至1718位核苷酸序列(GmNHX2的ORF)。將擴(kuò)增得到的片段用5"mEI和&cI雙酶切，將得到的片段插入到pBI121載體的5"mZ/I和SacI酶識(shí)別位點(diǎn)之間，得到重組載體。將該重組載體進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定。將經(jīng)過測(cè)序表明含有GmNHX2的ORF的重組載體命名為pBI121-GmNHX2。2、轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥的獲得用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥，具體方法為將重組載體pBI121-GmNHX2轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株GV3101獲得重組菌，將該重組菌利用PCR方法驗(yàn)證。利用以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蘸花法轉(zhuǎn)化(CloughSJBentAF，F(xiàn)loraldip:asimplifiedmethodforAgrobacteriura-mediatedtransformationofArabidopsisthaliana,ThePlantJournal,1998/16/P735-743.[4])，通過鑒定正確的含有pBI121-GmNHX2的重組農(nóng)桿菌菌株GV3101，將pBI121-GmNHX2轉(zhuǎn)入擬南芥(Columbia生態(tài)型)獲得T。代轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥。將獲得的To代轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥種子種植在含有50mg/L卡那霉素的MS培養(yǎng)基上篩選，獲得陽性植株，將獲得的陽性植株逐代在含有50mg/L卡那霉素的MS培養(yǎng)基上篩選獲得純合體的轉(zhuǎn)基因株系。篩選獲得的純合的株系用RT-PCR驗(yàn)證，驗(yàn)證方法提取12個(gè)正常條件下生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥株系和野生型(Columbia生態(tài)型)的RNA并反轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNA，以該cDNA為模板，用引物N25F:5'-GCAGGTGTTGGAGTTGGATT隱3'，N25R:5'-TGACCAGCTATGTTGCTCCA-3'進(jìn)行PCR擴(kuò)增，轉(zhuǎn)入了pBI121-GmNHX2的陽性轉(zhuǎn)基因擬南芥應(yīng)擴(kuò)增得到410bp的片段。結(jié)果表明獲得12個(gè)RT-PCR鑒定陽性的轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥株系，選擇其中三個(gè)株系(Ll、L4和L6)作為其耐鹽性鑒定的材料。3、轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥的耐鹽性鑒定將野生型擬南芥(Columbia生態(tài)型)和轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥的3個(gè)株系(Ll、L4和L6)的種子均勻的播種于MS培養(yǎng)基上，于4。C放置3天后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室于22°C，16h光照/8h黑暗條件下生長(zhǎng)1周后，移入含有200mMNaCl的MS固體培養(yǎng)基上，繼續(xù)在該溫度和光照條件下進(jìn)行脅迫處理7天。鹽處理7天后保持大于75%的綠色葉片面積的植株計(jì)為存活，存活率為存活的植株數(shù)占處理的總植株數(shù)的百分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，每次每個(gè)株系至少60粒種子。結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明在200mM處理下，野生型和轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥的生長(zhǎng)和根長(zhǎng)都受到抑制，但轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥的生長(zhǎng)表現(xiàn)要明顯好于野生型，轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥能維持綠色的葉片并繼續(xù)生長(zhǎng)，而野生型植株則逐漸白化死亡。過表達(dá)GmNHX2基因的擬南芥植株(轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥)株系L1、L4和L6在200mMNaCl處理下，轉(zhuǎn)基因植株的存活率分別為46.34%、70.59%%、65.06%,而野生型的存活率為24.36%，表明GmNHX2基因在擬南芥中過表達(dá)可以提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性。圖1中，wt表示野生型；Ll、L4和L6表示3個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)pBI121-GmNHX2擬南芥株系。<160〉2<210〉1<211>2152<212>DNA〈213〉大豆屬大豆(G/戸'"e顧x(Linn.)Merr)<400〉1cagttgtgttgagggacacatcattctcttctgattcgcgaagaactcaacgatcccaac60ccaatcgcgiatcggaagcaatcgatcagtcaattgcttccggc肌gg卿acaataatgg120cctcggaattagaaatttctccggcggscgctcgcaaggctcccggcaaggagcagcaag180ccgccggcgtcggaatcctcctgcagatcatgstgttggtcttgtccttcgtcctcggcc240acgtcctccgccgcaagaaggtttacatcattcccgaagccagtgcttctcttctcatag300ggttaattgttggtatactagcaaacatttcagacaccgagactaatatcagggcgtggt360tcaattttcacgaggagtttttcttcctgttcctgctacctcctatcatatttcagtctg420ggttcagtctcgcacctaaaccctttttctcaaattttggagcaeittgtcacatttgcta480tattcggtaccttcattgcttcaattgtaacgggtatcttggtttatcttgg"tggcttgc540tctttctgatgtataggctaccttttgtcgsgtgcctgatgtttggtgctcttatatcag600ctactgatcctgttactgttttgtccatatttcaggaactgggcac卿tgcc站tctat6603tgCCttggtttttggag肌tctgttttga8tgatgcca_tggcaatttctttgtacagga720caatgtcatcagttagagctgatccatctggacaaaatttattcatggtggttgttcgat780ttttggagacttttgtagggtcaatgtctgcaggtgttgg3gttgg3tttatatctgctt840tgctgttt犯gt3tgC鄉(xiāng)3ttggatattg8LC犯CCttC8gaacttggsgagttgtcttt900ttgtccttttcccatatttctcgtacatgcttgctg肌ggccttggtctgtctggtattg960tatcaatcctgttcacaggaatagtcatgaatattccaat11atcacaaa1020gttctcaacgatttgcctctgcttttttcgagttaatatcatctttagctgaaacatttg1080tatttstatacatgggctttgatattgctatgg3gC犯C3t3gCtggtC3catgttggat1140ttatattcttctccattatattcattggMttgcaagggcagcaaatgtcttctcatgtg1200cttatttggtcaatctggtcaggcccactcatcgaaagataccttcaaaacatcagaagg1260cactttggt3teigtggacttcg鄉(xiāng)恥caatggcttttgcgcttgctttgcaatcaattc1320atgatcttccgggC3g3Ct3tctttactgcaactactgca3tagttgttt1380tgacggtattgctgattggtggttcaacaggtagcatgctggaagctctagatgttgtag1440gtggagataatgatagccctttggcttcagttggtaccatcacaaatttcgatggaaaca1500atggtta_ta/ttgctcctcattac33cg犯gaatcatcttctgggaaca肌15606igctaaetag21attccacaagactgctgcatcttttacggcattagataaaaactacctga1620ccccattctttacaagtcaaaatgg卿tgaagatgatgaagccgagccttttacttcca1680ca卿tcggg3tttC3tggCcagaaccactattcatcatgattcgttcca1740tgaatgcttt"tttgtacateiatttccgtcageitagctcgtaggaattggcac肌tacagg1800aatctaatttacctcctacattccaagttgtacgatagagaatctcatgtcaagtctcat1860tagtttggacaacaccatgtctggcagagatagcattccatgcagttgatacatgcctct1920gccatgaagttggaggtttataattggatctcaccataceiatcacacacgtatttttaag1980ttgacatttatacgggttttcttacttagtctagttcaggtgaattctgaaaattctggc2040tcacttcatcattgtgacagtgaaattatacccctcaaiSLSLtgaetttcaatcatggaaaac2100tgtatctcaaaataaatgcatcatggactatggctgagtccttatacaggeg2152〈210〉2<211>534<212>PRT〈213〉大豆屬大豆(G7少c/"em"x(Linn.)Merr)〈400〉2MetAlaSer1GlyLysGluGlulieSerProAlaAspAlaArgLysAlaPro15lieMetGluLeu5GinGinAlaAlaGly20LeuSerPheValAla10GlylieLeuLeuMetLeuVal35ValTyrlielieProGlu50ValGlylieLeuAla65TrpPheAsnLeu40AlaSerAlaSer55AsnlieSerAspThr70GluGluPhePheVal25GlyHisValLeuPheHisGluGluPhePhePhe8590lieliePheGinSerGlyPheSerLeuAla100105AlalieValThrPheAlalieAsnPheGly115SerlieValThrGlylie130Leu135Phe120ValTyrLeuArg45lieGin30ArgGlyLeuLeu60GluThrAsnlie75LeuPheLeuLeuProLysPheGlyGlyGly140ProPhe110PheLysLysLeulieArgAla80ProPro95PheSerlieAlaThr125LeuLeuPheLeuMetTyrArgLeuProPheValGluCysLeuMetPheGlyAla145SerAlaThrAspPhe150ValThrValLeuThrAspAspAlaAlaMet195SerAsn180AlaPro165LeuTyrAlaLeuMet155liePheGinGluSer170PheGlyGluSerVal185ArgThrMetSerLeulie160LeuGly175LeuAsnAspPro210ThrPhe225AlaLeuLeuPhelieSerLeuTyr200PheMetValValVal190ValArgAlaGlyGinAsnGlyValGlySerLeu215SerAlaGlyValSer205ArgPheLeuGluMet230TyrAlaGlyLeuLys245LeuPheValLeuGly235lieVal220ValGlyPheLeuGluSerCys260LeuGlyLeuSerAsp250ProTyrPheSerAlaGluGly275MetLysHisTyrPhe265lieValSerlielieSer240AspAsnLeuGinAsn255MetLeulieVal290ArgPheAlaSerAla305PheValPhelieGly280TyrSerAsnLeuTyr270PheThrGlyThr295PheGluLeulieLeu285GinSerSerGinPhe310MetGlyPheAspSer300SerLeuAlaTrpSerAlaArgArgPro370TyrSer385HisAla355ThrTyr325GlyPheliePheSer315AlaMetGluGinVal340AlaAsnValPhelie330SerlieliePhePhe345CysAlaTyrLeuGluThr320HisSer335GlylieHisArgLysArgGlyLeuArgSer360ProSerLysHislie350AsnLeuValGly390lie375AlaMetAlaPheVal365LysAlaLeuTrpAla395Gin380LeuAlaLeuGinSer400lieHisAspLeuProGluGlyHisGlyGinThrliePheThrAlaThr405410415ThrAlalieValValLeuThrValLeuLeulieGlyGlySerThrGly420425430SerMetLeuGluAlaLeuAspValValGlyGlyAspAsnAspSerPro435440445LeuAlaSerValGlyThrlieThrAsnPheAspGlyAsnAsnGlyTyr450455460lieAlaProHisTyrAsnGluGluSerSerSerGlyAsnLyslieLys465470475480MetLysLeuLysGluPheHisLysThrAlaAlaSerPheThrAlaLeu485490495AspLysAsnTyrLeuThrProPhePheThrSerGinAsnGlyAspGlu500505510AspAspGluAlaGluProPheThrSerThrArgSerGlyPheHisGly515520525GinAsnHisTyrSerSer530權(quán)利要求1、一種植物耐鹽蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQID№.2的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQID№.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐鹽功能的蛋白質(zhì)。2、權(quán)利要求l所述的植物耐鹽蛋白的編碼基因。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述植物耐鹽蛋白的cDNA基因具有下述核苷酸序列之一.-1)自序列表中SEQIDW2:l的5，端的第117至1718位核苷酸；2)序列表中SEQIDJV2:1的核苷酸序列；3)編碼序列表中SEQIDW2:2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQIDW:1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。4、含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐鹽蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體。5、含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐鹽蛋白的編碼基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。6、含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐鹽蛋白的編碼基因的宿主菌。7、權(quán)利要求1所述的植物耐鹽蛋白的編碼基因在提高植物耐鹽性中的應(yīng)用。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物為水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、馬鈴薯、油菜、甘薯、綠豆、紅小豆、橡膠、香蕉、西紅柿、黃瓜、苜?；驍M南芥。全文摘要本發(fā)明公開了一種植物耐鹽蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。該植物耐鹽蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQID№.2的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQID№.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐鹽功能的蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)表明，該蛋白具有很高的耐鹽性，將該蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)入植物中，可提高植物的耐鹽性。文檔編號(hào)C07K14/415GK101386645SQ20081022531公開日2009年3月18日申請(qǐng)日期2008年10月29日優(yōu)先權(quán)日2008年10月29日發(fā)明者關(guān)榮霞,劉章雄,周國安,常汝鎮(zhèn),張麗娟,李向華,李英慧,王克晶,邱麗娟,金龍國申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所