專利名稱：：黑乳海參中新的抗腫瘤化合物NobilisideD的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種從海洋動物黑乳海參中分離到的新的抗腫瘤化合物NobilisideD。
背景技術(shù)：
：黑乳海參(7T^e"oto"""腦J.),又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm，寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺灣南端。其體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、維生素、皂苷類物質(zhì)，具有補(bǔ)肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關(guān)其所含的皂苷類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是從生長于中國福建海域的黑乳海參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為NobilisideD，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下OHNobilisideD為無色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)212.4-214.4°C(MeOH-H20)，[a]D22.3°(c=0.3，MeOH)，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Molish反應(yīng)均呈陽性。電噴霧-正離子質(zhì)譜信號m/z891[M+Na]+和電噴霧-負(fù)離子質(zhì)譜信號m/z845[M-Na]、紅外光譜max-3418，強(qiáng)寬峰(羥基)，1762(羰基)，1637(雙鍵)，1253，1069。s，磺酸基)。iH-和"C核磁共振數(shù)據(jù)見表l。表1NobilisideD的的^和13C核磁共振數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本發(fā)明還提供了從黑乳海參提取分離NobilisideD的方法，其步驟如下(1)提取將黑乳海參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為8~5:1~4:r混合溶劑和正丁醇甲醇為20:i兩相溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含NobilisideD的流份，再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為50:50為流動相洗脫，得NobilisideD純品。本發(fā)明對黑乳海參皂苷NobilisideD進(jìn)行了體外抗腫瘤試驗(yàn)，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗(yàn)所用細(xì)胞株為國際通用的腫瘤細(xì)胞株，即A-549(肺癌)和IA-9(卵巢癌)腫瘤細(xì)胞株。試驗(yàn)方法為國際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以9(Hil/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10nl/孔。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37°C、5%<:02條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細(xì)胞，4'C放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150jil/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長下測定OD值。試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2NobilisideD對腫瘤細(xì)胞的抑制作用腫瘤細(xì)胞株A-549IA-91.20.6ic50:表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NobilisideD對以上2種腫瘤細(xì)胞株均顯示明顯的抑制作用。5本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述NobilisideD的分離制備。將黑乳海參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為7.6:2.4:i和正丁醇甲醇為20:1的兩相混合溶劑洗脫，收集含NobilisideD的流份。再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為50:50為流動相洗脫，得NobilisideD純品12毫克。權(quán)利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下2.權(quán)利要求i所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下-(1)提取將原料黑乳海參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:i混合溶劑和正丁醇甲醇為20:i兩相溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含權(quán)利要求1所述化合物的流份，再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為50:50為流動相洗脫，得權(quán)利要求i所述化合物純品。3.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為一種從黑乳海參中分離的抗癌化合物NobilisideD，分子式C₄₀H₆₁O₁₇SNa。經(jīng)多種現(xiàn)代光譜分析，特別是應(yīng)用先進(jìn)的二維核磁共振譜和高分辨質(zhì)譜的綜合解析，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型。體外抗腫瘤試驗(yàn)表明，該化合物對A-549肺癌和IA-9卵巢癌2種腫瘤細(xì)胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導(dǎo)化合物，對開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。文檔編號C07J71/00GK101463067SQ20081016337公開日2009年6月24日申請日期2008年12月18日優(yōu)先權(quán)日2008年12月18日發(fā)明者丁萍月,軍巫,張佳佳,朱可奇,王忠華申請人:寧波保稅區(qū)欣諾生物技術(shù)有限公司